JP7183254B2 - パチョロールおよびエレモールをならびに好ましくはポゴストールも産生するテルペンシンターゼ - Google Patents

Description

本発明は、パチョロールシンターゼ、該パチョロールシンターゼをコードする核酸、該核酸を含む発現ベクター、該発現ベクターを含む宿主細胞、パチョロールおよびエレモールを、ならびに好ましくはポゴストールも調製する方法、ならびにパチョロールシンターゼを調製する方法に関する。

多くの生物は、多様なテルペン類およびテルペノイド類を産生する能力を有する。テルペン類は、実際にはおよび概念的には２－メチルブタン残渣から形成され、通常はイソプレンの単位と呼ばれ、分子式Ｃ_５Ｈ_８を有する。イソプレン単位を自然界の一般的な基礎単位とみなすことができる。基本的なテルペン類の分子式は、その分子式（Ｃ_５Ｈ_８）_ｎの倍数であり、ここで、ｎは結合されたイソプレン単位の数である。これはイソプレン則と呼ばれ、その結果、テルペン類はまた、イソプレノイド類とも表される。イソプレン単位は、互いに「頭部から尾部に」結合されて、直鎖を形成し、または、環を形成するように配置されてもよい。その生合成で、テルペン類は、汎用の５つの炭素前駆体のイソペンテニル二リン酸（ＩＰＰ）およびその異性体のジメチルアリルジリン酸（ＤＭＡＰＰ）から形成される。したがって、テルペン炭素骨格は、一般に、５つの炭素原子の複数倍を含む。５、１０、１５、２０、３０および４０個の炭素のテルペン類が一般的であり、それらは、それぞれヘミ－、モノ－、セスキ－、ジ－、トリ－およびテトラ－テルペン類と呼ばれている。「頭部から尾部への」結合以外に、トリ－およびテトラ－結合はまた、１つの「尾部から尾部への」結合をそれらの中央に含む。テルペン類は、例えば、アルコール類およびそれらのグリコキシド類、エーテル類、アルデヒド類、ケトン類、カルボン酸類およびエステル類などのさらなる官能基を含んでもよい。これらの官能化されたテルペン類は、本明細書において、テルペノイド類と呼ばれる。テルペン類と同じように、テルペン類は、一般に、５つの炭素原子の複数倍を有する炭素骨格を有する。テルペノイドにおける総炭素数は５の倍数である必要はなく、例えば、官能基は、任意の数の炭素原子を有するアルキル基を含むエステル基であってもよいことに留意する必要がある。

上記の定義以外に、用語「テルペン」、「テルペノイド」および「イソプレノイド」は、自由にかつ特許文献でも互換的に頻繁に使用されていることに留意することが重要である。

パチョロールは、パチョリ（ポゴステモンカブリン）、シソ科（Ｌａｍｉａｃａｓｅ）の草本植物などの特定の植物で作られる、自然に発生するセスキテルペンアルコールである。パチョロールはパチョリ油の主成分である。パチョリ油は、ポゴステモンの乾燥した葉の水蒸気蒸留によって得られる重要な香料成分である。パチョリ油は、高級な香水、スキンクリームのような化粧品、リップスティック、パウダー、シャンプー、シェービングクリーム、ヘアオイルおよび石鹸香料に使用される重要な香気成分である。パチョリ油は、温かい、草本、樟脳および樹木と表現されてきた特徴的な匂いのプロファイルを有する。パチョロールは、パチョリ油の主成分であるだけでなく、重要な匂い成分でもある（Ｎａｆ ｅｔ ａｌ．Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ ６４，ｎｏ．５（Ｊｕｌｙ ２２，１９８１）：１３８７－９７）。しかしながら、パチョリ油は追加の成分を含んでもよく、その内の非パチョレンおよびポゴストールはパチョリの匂いプロファイルに対する重要な寄与として表現されてきた（Ｌｅｆｆｉｎｇｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｄａｙ（２００６）：２４：３６－３８）。

ポゴステモンカブリンからの単一パチョロールシンターゼが、大多数のパチョリ油の成分を製造する役割を担っていることがわかった（Ｄｅｇｕｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ（２００６）：４５４：１２３－３６）。エナンチオピュアなパチョロールへの化学的経路が使用可能である（Ｎａｆ ｅｔ ａｌ．Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ ６４，ｎｏ．５’Ｊｕｌｙ ２２，１９８１）：１３８７－９７、およびＳｒｉｋｒｉｓｈｎａ ｅｔ ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ（２００５）：１６：３９９２－９７）が、コストパフォーマンスの高いパチョロールの製造は可能でない。したがって、パチョロールは、主に、パチョリの草木の乾燥した葉の水蒸気蒸留から得られる。パチョリ油の供給は主にインドネシアから来ている。この供給は、価格、品質および利用可能性において変動が激しい。この変動は、複数の要因に起因し、それらには天候変動、売買投機、農法、生産コストの変動、生産地域の変更、および植物の病気がある（Ｔｅｋｒｉｗａｌ Ｓ（２００９）Ｎａｔｕｒａｌｓ ｉｎ Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ（ｗｗｗ．ｓｃｒｉｂｄ．ｃｏｍ／ｄｏｃｕｍｅｎｔ／２５１９０３０１８／Ｎａｔｕｒａｌｓ－ｉｎ－Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ－ＩＦＥＡＴ－Ｓｈａｎｇｈａｉ－Ｂｙ－Ｓａｎｄｅｅｐ－Ｔｅｋｒｉｗａｌ））。

パチョロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子の組み込みによって一般に改変される微生物を利用して、パチョロールを微生物学的に調製することが提案されてきた。パチョロールシンターゼは、ＦＰＰからのパチョロールの調製のために使用され得、その変換は、孤立反応（インビトロ）として、または砂糖からのパチョロールの製造に最終的に繋がるより長い代謝経路の一部（インビボ）として、実行され得る。

ＵＳ２００９／０２０５０６０は、ポゴステモンカブリンからのパチョロールシンターゼを使用してパチョロールを製造する方法について記載している。米国特許第ＵＳ８，９９３，２８４号、ＷＯ２０１１／１４１８５５は、パチョロールおよび７－エピ－アルファ－セリネンを同時に製造するバレリアナヤタマンシからのテルペンシンターゼについて記載している。

Ｆｉｒｍｅｎｉｃｈは、そのＣＬＥＡＲＷＯＯＤ（登録商標）のパチョリ油代替物を２０１４年に発表し、そのパチョリ油代替物は、砂糖からの発酵的製造由来であり、「天然油脂に見出された土、皮およびゴムの香りのないパチョリの軟らかく、清潔なバージョン」として（Ｌｅｆｆｉｎｇｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｌｅｆｆｉｎｇｗｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ（２０１５）７：１－１１）記載されている。

パチョロールを形成するとして知られているテルペンシンターゼのみが、ポゴステモン属およびバレリアナ属において現在までに特定されてきている。しかしながら、パチョロール型セスキテルペンの一部を産生する他の植物については、記載されている（Ｃｈｏｕｄｈｕｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｄｉａ Ｊ．Ｅｓｓｅｎｔ．Ｒｅｓ．（１９９６）：８，６３３）が、対応するシンターゼ酵素については不明である。

現在知られているパチョロールシンターゼは、工業的パチョロール製造プロセスに適用されるときに、特に望ましくない明白な短所を有し、パチョロールは、例えば、単離されたパチョロールシンターゼまたは（透過化された）全細胞を使用する孤立反応（インビトロ）で、または、例えば、より長い代謝経路の一部である発酵プロセスで、ＦＰＰから調製される。したがって、パチョロールの調製で使用してもよい代替のパチョロールシンターゼに対する要請が存在している。特に、少なくとも選択された宿主細胞において、改善された発現を呈する代替のパチョロールシンターゼ、パチョロールシンターゼが産生された細胞において、例えば中性もしくはアルカリ性のｐＨでのおよび／または細胞内での少なくとも特定の条件下で、高い酵素活性を有する代替のパチョロールシンターゼ、および／または、パチョロールシンターゼが産生された細胞において、例えば略中性もしくはアルカリ性のｐＨでのおよび／または細胞内での少なくとも特定の条件下で、パチョロールではなくパチョロール様テルペンへのＦＰＰの変換を触媒することに対して、ポゴステモンカブリンからのパチョロールシンターゼと比べて改善された特異性を有することが特に高い特異的な代替のパチョロールシンターゼに対する要請が存在する。

これまで不明であった特定のポリペプチドが、パチョロールシンターゼ活性を有することと、このポリペプチドが、既知のパチョロールシンターゼに対する代替としての役割を果たす可能性のある触媒として使用され得ることとがわかった。このパチョロールシンターゼがセスキテルペンアルコールのポゴストールおよびエレモールも産生することもわかった。エレモールも合成するパチョロール合成酵素はこれまで不明であり、パチョロールおよびエレモールの併用合成について、この新規のパチョロールシンターゼは、工業的パチョロール製造プロセスのために特に有利である。エレモールは、甘い木の香りを有するとして表現されており、エレモールが豊富な精油留分（例えば、エレミ油およびシトロネラ油からの）は、固定剤、ブレンダまたは改質剤として香料に使用される（Ａｎｓａｒｉ＆Ｃｕｒｔｉｓ，Ｊ．Ｓｏｃ．Ｃｏｓｍｅｔ Ｃｈｅｍ（１９７４）：２５，２０３－２３１）。

したがって、本発明は、配列番号４に示すアミノ酸配列を含むパチョロールシンターゼ、またはその機能的相同体に関し、該機能的相同体は、配列番号４との少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むパチョロールシンターゼである。該相同体は、特に、配列番号４との少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むパチョロールシンターゼである。

本発明は、本発明にしたがったパチョロールシンターゼをコードする核酸配列を含む、または該コード配列に相補的な核酸配列を含む核酸にさらに関する。特に、核酸は、配列番号３または配列番号５に示されている核酸配列、および本発明にしたがったパチョロールシンターゼをコードする他の核酸配列を含む核酸から選択されてもよく、該他の配列は、配列番号３または配列番号５に示されている核酸配列との少なくとも７５％、特に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する核酸配列、またはそれぞれそれらに相補的な核酸を含む。本発明にしたがったパチョロールシンターゼをコードする該他の核酸配列は、本明細書では、後に機能的アナログを意味してもよい。

本発明にしたがったパチョロールシンターゼまたは核酸は、天然化合物、またはその自然の源（例えば、スパイクナード（Ｎａｒｄｏｓｔａｃｈｙｓ ｊａｔａｍａｎｓｉ））から単離された化合物の断片であってもよく、化学合成または酵素合成された化合物、または化合物の断片、または組換え細胞で産生される化合物または化合物の断片であってもよく、その組換え細胞にそれは存在してもよく、またはその組換え細胞からそれは単離されたものであってもよい。

本発明は、本発明にしたがった核酸を含む発現ベクターにさらに関する。

本発明は、本発明にしたがった、核酸好ましくは宿主細胞に対して異種の核酸を含む発現ベクターを含む、生物または多細胞生物の一部であってもよい、宿主細胞にさらに関する。宿主細胞は、好ましくは、細菌細胞、真菌細胞（酵母を含む）および植物細胞の群から選択される。

本発明は、本発明にしたがったパチョロールシンターゼの存在下でＦＰＰをパチョロールおよびエレモール、ならびに好ましくはポゴストールにも変換することを含む、パチョロールおよびエレモール、ならびに好ましくはポゴストールも調製する方法にさらに関する。ＦＰＰの４つの異なる幾何異性体、すなわち、２Ｅ，６Ｅ－ＦＰＰ、２Ｚ，６Ｅ－ＦＰＰ、２Ｅ，６Ｚ－ＦＰＰ、および２Ｚ，６Ｚ－ＦＰＰが存在し得る。良好な結果が、２Ｅ，６Ｅ－ＦＰＰを用いて得られたが、原理的には、いずれのＦＰＰの他の異性体も、本発明にしたがった酵素に好適な基質であってもよい。

本発明は、パチョロールシンターゼの産生に寄与する条件下で本発明にしたがった宿主細胞を培養することと、任意に、宿主細胞からパチョロールシンターゼを回収することと、を含む、本発明にしたがったパチョロールシンターゼを産生する方法にさらに関する。

本発明にしたがったパチョロールシンターゼは、驚くべきことに、パチョロールおよびエレモールを産生することがわかった。本発明以前には、パチョロールおよびエレモールの両方を産生するのに利用可能なテルペンシンターゼは存在しなかった。さらに、本発明にしたがったパチョロールシンターゼはポゴストールを産生する。したがって、本発明にしたがったパチョロールシンターゼは、例えば、ポゴステモンカブリンからのパチョロールシンターゼに比べて、特に、パチョロールおよびエレモール、ならびに好ましくはポゴストールも、遺伝子組換え宿主細胞における細胞内で合成されて、それぞれ本発明にしたがったパチョロールシンターゼおよびポゴステモンカブリンパチョロールシンターゼを産生するインビトロアッセイでまたは方法において中性ｐＨまたは中性ｐＨ付近で、良好なプロダクトスペクトルを有する。したがって、好ましくは、本発明にしたがったパチョロールシンターゼは、１：５～１：９、好ましくは１：６～１：８、より好ましくは約１：６．５～１：７．５、最も好ましくは約１：６．９のパチョロールに対するエレモールの比を好ましくは有するパチョロールおよびエレモールを産生する。

好ましくは、本発明にしたがったパチョロールシンターゼはまた、１：４～１：７、好ましくは１：４．５～１：６５、より好ましくは１：５～１．６、最も好ましくは約１：５．６のパチョロールに対するポゴストールの比を好ましくは有するポゴストールを産生する。より好ましくは、ポゴストールに対するエレモールの比は、１：０．７～１：２．２５、好ましくは１：０．９～１：１．７５、より好ましくは１：１．１～１：１．５、最も好ましくは約１：１．３である。

本発明によると、パチョロールシンターゼに異なる生物での歩留まりよい発現をさせることが可能であることがわかった。例えば、パチョロールシンターゼは、大腸菌、ロドバクターセファロイデスおよび植物のニコチアナベンタミアーナで良好に発現されることがわかった。

したがって、有利な実施形態では、本発明は、パチョロールシンターゼの触媒作用に対して改善される特異性および、パチョロールおよびエレモールについての改善された産生速度を有するパチョロールシンターゼ、ならびに好ましくは、パチョロールおよびエレモールを調製する方法で使用されるときのポゴストールも、ならびに好ましくは、特にポゴステモンカブリンからのパチョロールシンターゼまたは本明細書で引用されている先行技術にしたがった別のパチョロールシンターゼに対比されるポゴストールも、提供する。

好ましい実施形態では、本発明にしたがったパチョロールおよびエレモールが、ならびに好ましくはポゴストールも提供され、パチョロールおよびエレモールが、ならびに好ましくはポゴストールも、本発明にしたがって、該パチョロールシンターゼを発現する、宿主細胞、植物もしくは植物培養物、またはキノコもしくはキノコ培養物で調製される。好ましくは、パチョロールおよびエレモールを、ならびに好ましくは本発明にしたがったパチョロールも調製する方法は、該宿主細胞、植物もしくは植物培養物、またはキノコもしくはキノコ培養物からパチョロール、ポゴストールおよび／またはエレモールを単離することをさらに含む。好ましくは、本発明にしたがったパチョロールを調製する方法は、１：４～１：７、好ましくは１：４．５～１：６．５、より好ましくは１：５～１：６、最も好ましくは約１：５．６のパチョロールに対するポゴストールの比を、１：５～１：９、好ましくは１：６～１：８、より好ましくは１：６．５～１：７．５、最も好ましくは約１：６．９のパチョロールに対するエレモールの比、および／または１：０．７～１：２．２５、好ましくは１：０．９～１：１．７５、より好ましくは１：１．１～１：１．５、最も好ましくは約１：１．３のポゴストールに対するエレモールの比をもたらす。

理論に束縛されることなく、中性または弱アルカリ性ｐＨでのパチョロール合成の触媒作用に対する高い特異性は、特に、各種宿主は７．０～８．５のｐＨなどの細胞内の中性または弱アクアルカリ性のｐＨを有すると考えられるために、パチョロールが細胞内で調製される方法について望ましいと考えられる（細菌の細胞内のｐＨについては、例えば、Ｂｏｏｔｈ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９８５）４９：３５９－３７８を参照されたい）。例えば、大腸菌細胞が５．５～８．０のｐＨ範囲に曝されたとき、細胞内のｐＨは７．１～７．９になった（Ｏｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．（２００２）６８：４１４５－４１４７）。これは、細胞内においても、本発明にしたがったパチョロールシンターゼのパチョロールの合成に対する改善された特異性を説明し得る。

本明細書で使用される用語「または」は、特に指定がない限り、「および／または」とする。

本明細書で使用される用語「ａ（不定冠詞）」または「ａｎ（不定冠詞）」は、特に指定がない限り、「少なくとも１つ」とする。

単数形で名詞（例えば、化合物、添加剤など）を指し示すとき、複数形が含まれるように意味するものとする。

本明細書で互換的に使用されている用語ファルネシル二リン酸およびファルネシルピロリン酸（両者ともにＦＰＰと略される）は、化合物３，７，１１－トリメチル－２，６，１０－ドデカトリエン－１－イルピロリン酸塩を意味し、その化合物のすべての既知の異性体を含む。

本明細書で使用されている組換え細胞、ベクター、核酸などに関連する用語「組換え（の）」は、その細胞、ベクター、核酸などで天然に存在しない、および／または、その同じ場所に天然に存在しない核酸を含む細胞、ベクター、核酸などを指す。一般に、該核酸は、組換えＤＮＡ技術を使用してその株（細胞）に導入されてきた。

核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）またはタンパク質に関して使用されるときの用語「異種」は、その中に存在する生物、細胞、ゲノムまたはＤＮＡもしくはＲＮＡ配列の一部として天然に存在しない、またはそれが自然界で認められるものとは異なる細胞、ゲノムにおける場所またはＤＮＡもしくはＲＮＡ配列で見出される核酸またはタンパク質を指す。異種核酸またはタンパク質は、それらが導入される細胞に対して内因性でないが、別の細胞から得られ、または合成的にもしくは組換え的に産生される。一般に、常にとは限らないが、そのような核酸は、ＤＮＡが発現される細胞によって正常に産生されないタンパク質をコードする。

特定の宿主細胞に対して内生的であるが、例えば、ＤＮＡシャフリングを介してその自然の形態から改質された遺伝子も、「異種」と呼ばれている。用語「異種」はまた、自然に存在するＤＮＡ配列の自然に存在しない複数のコピーを含む。したがって、用語「異種」は、細胞に対して外来または異種である、細胞に対して相同的であるが、ＤＮＡ断片が通常認められない宿主細胞核酸内の位置にあるおよび／または数であるＤＮＡ断片をいう。外因性ＤＮＡ断片が発現されて、外因性ポリペプチドを生じる。「相同的」ＤＮＡ断片は、それが導入される宿主細胞に自然に関連付けられるＤＮＡ断片である。

それが発現される細胞に対して異種または外来として当業者が認識するいずれの核酸またはタンパク質も、本明細書では、用語異種核酸またはタンパク質に包含される。

タンパク質またはポリペプチドに関して本明細書で使用されている用語「変異した」または「変異」は、野生型のまたは天然に存在するタンパク質またはポリペプチド配列における少なくとも１つのアミノ酸が、異なるアミノ酸に置換され、または除去され、またはそれらのアミノ酸をコードする核酸の突然変異誘発を介して断片に挿入されることを意味する。突然変異誘発は、当該技術分野では周知の方法であり、例えば、ＰＣＲによる、またはＳａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｄ．Ｗ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．３ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，（２００１）に記載されているオリゴヌクレオチド媒介突然変異誘発を介する部位特異的突然変異誘発を含む。遺伝子に関連して本明細書で使用される用語「変異する」または「変異」は、その遺伝子のヌクレオチド配列または遺伝子の調節配列における少なくとも１つのヌクレオチドが、異なるヌクレオチドに置換され、または突然変異誘発を介して配列から除去されもしくは配列に挿入されることを意味する。

用語「オープンリーディングフレーム」および「ＯＲＦ」は、コード配列の翻訳開始コドンと終止コドンとの間でコードされるアミノ酸配列を指す。用語「開始コドン」および「終止コドン」は、タンパク質合成（ｍＲＮＡ翻訳）のそれぞれの開始および連鎖終止を特定するコード配列における３つの隣接するヌクレオチドの単位（「コドン」）を指す。

用語「遺伝子」は、生体機能に関連する核酸のいずれかの断片を指すのに広く使用されている。したがって、遺伝子は、コード配列および／またはそれらの発現に必要な調節配列を含む。例えば、遺伝子は、ｍＲＮＡもしくは機能的ＲＮＡを発現し、または特定のタンパク質をコードし、および調節配列を含む核酸断片を指す。遺伝子はまた、例えば、他のタンパク質についての確認配列を形成する非発現ＤＮＡ断片を含む。遺伝子は、対象のソースからのクローニング、または既知のまたは予測される配列情報からの合成を含む様々なソースから得られ、所望のパラメータを有するように設計された配列を含んでもよい。

用語「キメラ遺伝子」は、１）自然界で共に認識されない調節配列およびコード配列を含むＤＮＡ配列、または２）天然では隣接されないタンパク質の一部をコードする配列、または３）天然では隣接されないプロモーターの一部を含む任意の遺伝子を指す。したがって、キメラ遺伝子は、異なるソース由来の調節配列およびコード配列を含み、同じソース由来であるが、自然界で認識されるものとは異なる様式で配列された調節配列およびコード配列を含んでもよい。

本明細書で使用されるトランスジェニック細胞または生物についての用語「トランスジェニック」は、組換えＤＮＡ技術を使用して、その生物または細胞に天然に存在しない、および核酸がその生物または細胞に導入された（すなわち、細胞が単離された生物もしくは細胞自体に、または生物の祖先もしくは生物の先祖の生物に導入された）核酸を含む生物または細胞（その細胞は、それが単離されなかった生物または多細胞生物の細胞であってもよい）を指す。

「導入遺伝子」は、形質転換によりゲノムに導入され、好ましくは安定して維持される遺伝子を指す。導入遺伝子は、例えば、転換される特定の植物の遺伝子に対して異種または同種である遺伝子を含んでもよい。さらに、導入遺伝子は、非天然の生物に導入される天然遺伝子またはキメラ遺伝子を含んでもよい。用語「内在性遺伝子」は、生物のゲノムの天然位置におけるネイティブ遺伝子を指す。「外来」遺伝子は、宿主生物においては通常見られないが、遺伝子導入によって導入される遺伝子を指す。

本明細書で使用されている「形質転換」および「形質転換する」は、挿入、例えば、直接的な取り込み、伝達、接合、ｆ－交配またはエレクトロポレーションのために使用される方法に拘わらず、異種ヌクレオチド配列の宿主細胞への導入を指す。外来性のポリヌクレオチドは、非統合ベクター、例えば、プラスミドとして維持されてもよく、または、宿主細胞ゲノムに統合されてもよい。

「コード配列」は、特定のアミノ酸配列についてコードし、かつ非コード配列を除去するＤＮＡまたはＲＮＡ配列を指す。それは、すなわち、ｃＤＮＡなどでイントロンが欠如した「無中断コード配列」を構成してもよく、または、それは、適切なスプライス接合により結合された１つ以上のイントロンを含んでもよい。「イントロン」は、一次転写物に含まれるが、細胞内でＲＮＡの切断および再連結を介して除去されて、タンパク質に翻訳され得る成熟ｍＲＮＡを生成するＲＮＡの配列である。

「調節配列」は、コード配列の上流（５’非コード配列）、中流または下流（３’非コード配列）に位置し、関連コード配列の転写、ＲＮＡ処理および安定性、または翻訳に影響するヌクレオチド配列を指す。調節配列は、エンハンサー、プロモーター、翻訳リーダー配列、イントロン、およびポリアデニレーションシグナル配列を含む。それらは、天然および合成配列、ならびに合成および天然配列の組み合わせであってもよい配列を含む。上記のように、用語「適切な調節配列」はプロモーターに限定されない。

調節配列の例として、プロモーター（転写プロモーター、構成型プロモーター、誘導性プロモーター）、オペレーター、またはエンハンサー、ｍＲＮＡリボゾーム結合部位、転写および翻訳開始および終止を制御する適切な配列が挙げられる。核酸配列は、調節配列が本発明のｃＤＮＡ配列に機能的に関連するときに、「操作可能に結合される」。

結合配列の各々は、異種および同種調節配列から独立して選択される。

「プロモーター」は、ＲＮＡポリメラーゼについての認識および適切な転写に必要な他の因子を提供することにより該コード配列の発現を制御する、そのコード配列に対して通常上流（５’）のヌクレオチド配列を指す。「プロモーター」は、調節エレメントが発現の制御のために加えられる、ＴＡＴＡボックスおよび転写開始の部位を特定する役割を果たす他の配列からなる短ＤＮＡ配列である最小プロモーターを含む。「プロモーター」はまた、コード配列または機能的ＲＮＡの発現を制御することができる最小プロモーターと調節エレメントとを含むヌクレオチド配列を指す。この型のプロモーター配列は、近位の上流エレメントおよびより遠位の上流エレメントからなり、後者のエレメントはしばしば、エンハンサーと呼ばれる。したがって、「エンハンサー」は、プロモーター活性を刺激することができ、プロモーターの先天的エレメントまたはプロモーターのレベルもしくは組織特異性を高めるために挿入される異種エレメントであってもよいＤＮＡ配列である。それは、両方の配向（通常または逆）に操作することができ、プロモーターから上流または下流に移動されるときにさえ、機能することができる。両方のエンハンサーおよび他の上流プロモーターエレメントは、それらの効果を媒介する配列特異ＤＮＡ結合タンパク質と結合する。プロモーターは、ネイティブ遺伝子からそれら全体に誘導され、または、自然界に存在する異なるプロモーターから誘導される異なるエレメントからなってもよく、または合成ＤＮＡ断片から構成されてもよい。プロモーターはまた、生理的または発生条件に応じて転写開始の効果を制御するタンパク質因子の結合に含まれるＤＮＡ配列を含んでもよい。

本明細書で使用されている用語「核酸」は、一本鎖または二本鎖の形態のデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドポリマー、すなわち、ポリヌクレオチドへの言及を含み、別段の限定がない限り、天然に存在するヌクレオチド（例えば、ペプチド核酸）と同様にそれらが一本鎖核酸にハイブリダイズする点で、天然のヌクレオチドの必須の性質を有する既知の類似体を包含する。ポリヌクレオチドは、ネイティブまたは異種構造もしくは調節遺伝子の全長またはサブ配列であり得る。別段の定めがない限り、その用語は、特定の配列およびその相補的配列への言及を含む。したがって、安全性または他の理由のために改変された主鎖を有するＤＮＡまたはＲＮＡは、その用語が本明細書で意図されているように、「ポリヌクレオチド」である。さらに、イノシンなどの異常な塩基またはトリチル化された塩基などの修飾塩基を含むＤＮＡまたはＲＮＡは、まさに２つの例を命名して、その用語が本明細書で使用されているように、「ポリヌクレオチド」である。当業者に周知の多くの有用な目的に役立つ、様々な修飾がＤＮＡおよびＲＮＡに対してなされてきたことが理解されるであろう。本明細書で使用されている用語「ポリヌクレオチド」は、そのような化学的に、酵素的にまたは代謝的に修飾されたポリヌクレオチドの形態、ならびに、特に、簡単なおよび複雑な細胞を含むウイルスおよび細胞のＤＮＡおよびＲＮＡ特性の化学的形態を包含する。

遺伝子コードを参照して、ポリペプチドもコードする本明細書におけるすべての核酸配列は、核酸のすべての可能な暗黙の変化を表現している。用語「保存的に修飾された変異体」は、両方のアミノ酸および核酸配列に適用される。特定の核酸配列に関して、用語「保存的に修飾された変異体」は、遺伝子コードの縮退のためにアミノ酸配列の同一のまたは保存的に修飾された変異体をコードするそれらの核酸を指す。用語遺伝子コードの「縮退」は、数多くの機能的に同一の核酸がいずれかの所与のタンパク質をコードすることを指す。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧおよびＧＣＵのすべてがアミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンにより特定化されたすべての位置で、コドンは、コードされたポリペプチドを変異することなく、表現された対応するコドンのいずれかに変異され得る。そのような核酸変異は「暗黙の変異」であり、保存的に修飾された変異体の１つの種を示す。用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、本明細書では互換的に使用されていて、アミノ酸残渣のポリマーを指す。それらの用語は、１つ以上のアミノ酸残渣が対応する天然に存在するアミノ酸の人工的化学類縁体であるアミノ酸ポリマー、および天然に存在するアミノ酸ポリマーに適用される。そのような天然に存在するアミノ酸の類縁体の必須の性質は、タンパク質に組み込まれるときに、そのタンパク質は、同じタンパク質に対して引き出される抗体と特異的に反応するが、天然に存在するアミノ酸から全部が構成されることである。用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」はまた、糖化、脂質取り付け、硫酸化、グルタミン酸残渣のガンマカルボキシル化、水酸化およびＡＤＰリボシル化を含む修飾を含むが、それらに限定されるものではない。

本明細書のコンテキスト内で、オリゴマー（オリゴヌクレオチド、オリゴペプチドなど）はポリマーの群の種とみなされる。オリゴマーは比較的少ない数の単量体単位、一般に、２～１００個、特に、６～１００個を有する。

本明細書で使用されている「発現かセット」は、終止シグナルに操作可能に結合されたヌクレオチド配列に操作可能に結合されたプロモーターを含む、適切な宿主細胞における特定のヌクレオチド配列の発現を指示することができるＤＮＡ配列を意味する。それは、典型的には、ヌクレオチド配列の適切な翻訳のために必要な配列も含む。コード領域は、通常、対象のタンパク質についてコードするが、センス方向またはアンチセンス方向に対象の機能的ＲＮＡ、例えば、アンチセンスＲＮＡまたは非翻訳ＲＮＡについてもコードしてもよい。対象のヌクレオチド配列を含む発現カセットは、その成分の少なくとも１つがその他の成分の少なくとも１つに対して異種であることを意味するキメラであってもよい。発現カセットはまた、天然に存在するが、異種発現に有用である組換え形態で得られたものであってもよい。発現カセットにおけるヌクレオチド配列の発現は、構成型プロモーター、または宿主細胞が一部の特定の外部刺激に曝されたときにのみ転写を開始する誘導性プロモーターの制御下にあってもよい。多細胞生物の場合、プロモーターはまた、特定の組織もしくは器官または発生の段階に対して特異的であり得る。

本明細書で使用されている用語「ベクター」は、標的細胞の形質転換を指示するように設計された遺伝物質からなる構造体を指す。ベクターは、位置的にかつ配列的に配向され、すなわち、核酸カセットにおける核酸が転写され、かつ、必要に応じて、形質転換細胞に翻訳され得るような他の必要なエレメントと操作可能に結合された複数の遺伝子エレメントを含む。

特に、ベクターは、ウイルスベクター、（バクテリオ）ファージ、コスミドまたはプラスミドの群から選択されてもよい。ベクターはまた、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、バクテリア人工染色体（ＢＡＣ）またはアグロバクテリウムバイナリーベクターであってもよい。ベクターは、自己伝達性もしくは可動性であってもよくまたはそうでなくてもよい、および細胞ゲノムへの統合により原核または真核宿主に形質転換し、または染色体外に存在する（例えば、複製の起点を有する自律複製プラスミド）ことができる２本鎖もしくは１本鎖直鎖状または環状形態にあってもよい。具体的には、放線菌および関連種、細菌および真核生物（例えば、高等植物、哺乳動物、酵母または真菌細胞）から選択されてもよい、２つの異なる宿主生物の複製が天然でまたは設計により可能であるＤＮＡビヒクルを意味するシャトルベクターが含まれる。好ましくは、ベクターにおける核酸は、適切なプロモーター、または、微生物、例えば、細菌、または植物細胞などの宿主細胞における転写のための調節エレメントの制御下にあり、かつそれに操作可能に結合される。ベクターは、複数の宿主において機能する二機能性発現ベクターであってもよい。ゲノムＤＮＡの場合、これは、それ自身のプロモーターまたは他の調節エレメントを含んでもよく、ｃＤＮＡの場合、これは、適切なプロモーター、または宿主細胞における発現のための他の調節エレメントの制御下にあってもよい。

本発明にしたがったポリ核酸を含むベクターは、それ自体が当該技術分野で周知の方法に基づいて調製され得る。例えば、転写または翻訳調節核酸などの適切な調節エレメントに操作可能に結合される本発明にしたがったポリペプチドをコードするｃＤＮＡ配列がつくられ得る。

本明細書で使用されている用語「ベクター」は、標準的なクローニングワークのベクター（「クローニングベクター」）、ならびに（常染色体）発現ベクターおよび宿主細胞の染色体への統合のために使用されるクローニングベクターのようなより特殊なタイプのベクターへの言及を含む。

「クローニングベクター」は、典型的には、外来ＤＮＡ配列がベクターの重要な生物学的機能の損失なしに判定可能な様式で挿入することができる１つまたは複数の制限エンドヌクレアーゼ認識部位と、クローニングベクターにより形質転換される細胞の識別および選択での使用に適するマーカー遺伝子とを含む。

用語「発現ベクター」は、その転写を提供する追加的核酸断片（すなわち、操作可能に結合される）の制御下で対象のポリペプチドをコードする断片を含む直鎖状または環状のＤＮＡ分子を指す。そのような付加的断片は、プロモーターおよびターミネーター配列を含んでもよく、１つ以上の複製の起点、１つ以上の選択可能マーカー、エンハンサー、ポリアデニレーションシグナルなどを任意に含んでもよい。発現ベクターは、一般に、プラスミドまたはウイルスＤＮＡに由来し、または両者のエレメントを含んでもよい。特に、発現ベクターは、５’から３’への方向に、かつ操作可能に結合されて、（ａ）宿主生物によって認識される転写および翻訳開始領域と、（ｂ）対象のポリペプチドについてのコード配列と、（ｃ）宿主生物によって認識される転写および翻訳終止領域と、を含む、ヌクレオチド配列を含む。「プラスミド」は、微生物のゲノムに統合されず、自然界で通常環状である染色体外ＤＮＡを自律複製することを指す。

「統合ベクター」は、微生物のゲノムに組み込まれ得、対象のポリペプチドをコードする遺伝子の安定した遺伝を提供する直鎖状または環状のＤＮＡ配列を指す。統合ベクターは、一般に、その転写を提供する追加の核酸断片（すなわち、操作可能に結合された）の制御下で対象のポリペプチドをコードする遺伝子配列を含む１つ以上の断片を含む。そのような追加の断片は、プロモーターおよびターミネーター断片と、通常、相同組換えの処理によって標的細胞のゲノムへの対象の遺伝子の組み込みを推し進める１つ以上の断片とを含んでもよい。典型的には、統合ベクトルは、標的細胞に導入することができるが、その生物では日機能的であるレプリコンを有するものである。対象の遺伝子を含む断片の統合は、適切なマーカーがその断片内に含まれている場合に、選択されてもよい。

本明細書で使用される場合、用語「操作可能に連結される」または「作動的に連結される」は、そのように記載された成分がそれらの意図された様式でそれらを機能させる関係にある並置を指す。別の制御配列におよび／またはコード配列に「操作可能に連結される」制御配列は、コード配列の転写および／または発現が制御配列に対応した条件下で実現されるように、結紮される。一般に、連結されている核酸配列は隣接していて、２つのタンパク質コード領域を連結する必要がある場合には、隣接しかつ同じリーディングフレーム内にある。

用語「パチョロールシンターゼ」は、本明細書では、パチョロール、特にまた、ファルネシル二リン酸からのエレモールまたはポゴストールのようなパチョロール様テルペンの形成で触媒活性を有するポリペプチド、およびそのようなポリペプチドを含む他の部位について使用されている。そのような他の部位の例としては、１つ以上の他のポリペプチドを有する該ポリペプチドの錯体、ペプチドまたはタンパク質タグ配列に融合されたパチョロールシンターゼポリペプチドを含む融合タンパク質、該ポリペプチドの他の錯体（例えば、金属タンパク質錯体）、該ポリペプチドおよび別の有機部位を含む高分子化合物、支持材料に結合された該ポリペプチドなどが挙げられる。パチョロールシンターゼは、自然環境中で、すなわち、それを産生する細胞によりそれが分泌される培地で提供され得る。それはまた、ポリペプチドを産生した源から離れて供給され得、担体への付着によって操作され、標識部位で標識化されるなどされ得る。

本明細書で使用される場合、配列の用語「機能的相同体」、または短くは「相同体」は、１つ以上のアミノ酸が置換、欠落、付加および／または挿入され、ならびに、「機能的相同体」が酵素、すなわち、ファルネシル二リン酸からパチョロールの形成で触媒活性を有する配列番号４を有する配列の相同体について使用される場合に、ポリペプチドは基質変換について同じ酵素機能性を（質的に）有することを条件として、該特定の配列を含むポリペプチドを指す。実施例では、ポリペプチドまたはポリペプチドを含む部位がパチョロールシンターゼであるかどうかを確認するのに適切な試験（「パチョロールシンターゼ活性試験」）が記載されている。さらに、当業者は、本発明によって包含される等価のヌクレオチド配列はまた、特許請求の範囲におけるヌクレオチド配列に、低位の、中位のおよび／またはストリンジェントな条件下で、ハイブリダイズするそれらの能力により規定され得ることを認識する。

本発明にしたがった配列番号４に対する好ましい相同体は、１：４～１：７、好ましくは１：４．５～１：６５、より好ましくは１：５～１：６、最も好ましくは約１：５．６のパチョロールに対するポゴストールのモル比、１：５～１：９、好ましくは１：６～１：８、より好ましくは１：６．５～１：７．５、最も好ましくは約１：６．９のパチョロールに対するエレモールのモル比、および／または１：０．７～１：２．２５、好ましくは１：０．９～１：１．７５、より好ましくは１：１．１～１：１．５、最も好ましくは約１：１．３のポゴストールに対するポゴストールのモル比として発現される、パチョロール形成の触媒に対する特異性を有する。

配列同一性または類似性は、本明細書では、それらの配列を比較することによって決定される２つ以上のポリペプチド配列または２つ以上の核酸配列間の関係として定義されている。通常、配列同一性または類似性は、配列の全長に亘って比較されるが、しかしながら、互いに位置が合っている配列の一部のみについて比較されてもよい。当該技術分野において、「同一性」または「類似性」はまた、場合によって、そのような配列間の一致度によって決定されるポリペプチド配列または核酸配列間の配列関連性の度合いを意味する。本明細書で使用されている配列同一性は、例えば、欧州バイオインフォマティクス研究所のサーバ（ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｅｍｂｏｓｓ／ａｌｉｇｎ／）において、ＥＭＢＯＳＳ Ｐａｉｒｗｉｓｅ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ａｌｇｏｒｉｔｍ”Ｎｅｅｄｌｅ”により決定される値である。アミノ酸配列のアライメントについてのデフォルトのパラメータは、Ｍａｔｒｉｘ＝Ｂｌｏｓｕｍ６２；Ｏｐｅｎ Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝１０．０；Ｇａｐ Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ Ｐｅｎａｌｔｙ＝０．５である。核酸配列のアライメントについてのデフォルトのパラメータは、Ｍａｔｒｉｘ＝ＤＮＡｆｕｌｌ；Ｏｐｅｎ Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝１０．０；Ｇａｐ Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ Ｐｅｎａｌｔｙ＝０．５である。

現在の配列番号４にしたがったパチョロールシンターゼまたは配列番号３もしくは配列番号５にしたがった核酸と該パチョロールシンターゼの機能的相同体との間の不一致は、特に、例えば、分子進化または合理的設計などの当業者に知られている生物学的技術によって、または、当該技術分野で知られている変異原性技術を使用することによって、パチョロールシンターゼまたはポリ核酸（例えば、改善された発現）の特性を改善するように実行される修飾の結果であってもよい。パチョロールシンターゼのアミノ酸配列またはコード核酸配列は、１つ以上の天然に存在する変異の結果として、配列番号４および配列番号３または配列番号５に比較して改変されてもよい。そのような天然の修飾／変異の例は、糖化における差（より広くは「翻訳後修飾」と定義されている）、選択的スプライシングのための差、および一核酸多型（ＳＮＰ）である。核酸は、それが少なくとも１つのアミノ酸によって配列番号４のポリペプチドとは異なるポリペプチドをコードするように修飾されてもよく、ゆえに、それは、ポリペプチドが配列番号４のパチョロールシンターゼ活性と同じものを実質的に有する、配列番号４に比べて１つ以上のアミノ酸置換、欠落および／または挿入を含むポリペプチドをコードする。さらに、例えば、ＷＯ２００８／０００６３２に記載されている方法に基づく、またはＤＮＡ２．０、Ｇｅｎｅａｒｔ、およびＧｅｎＳｃｒｉｐｔのような商業的ＤＮＡ合成企業により提供されている、コドン最適化またはコドン対最適化が使用されてもよい。一コドン最適化配列の例は配列番号５である。

本発明のポリペプチドには本来関連しない適切なシグナルペプチドをコードする１つ以上の配列は（発現）ベクターに組み込まれ得る。例えば、シグナルペプチドリーダーについてのＤＮＡ配列は、本発明のポリペプチドがシグナルペプチドを含む融合タンパク質として最初に翻訳されるように、本発明の核酸配列をインフレーム融合され得る。シグナルペプチドの性質に応じて、発現されるポリペプチドは別々に標的化されるであろう。意図された宿主細胞において機能的な分泌シグナルペプチドは、例えば、発現されるポリペプチドの細胞外分泌を向上させる。他のシグナルペプチドは、発現されるポリペプチドを、葉緑体、ミトコンドリアおよびペルオキシソームのような特定のオルガネラに方向付ける。シグナルペプチドは、意図されたオルガネラへの輸送時のポリペプチドから、または細胞から開裂され得る。配列番号４にしたがったポリペプチドまたはその相同体のアミノまたはカルボキシル末端で付加ペプチド配列の融合を提供することが可能である。

上記のように、本発明はさらに、本発明にしたがったベクターを含む宿主細胞に関する。「宿主細胞」は、ベクターを含み、かつベクターの複製および／または発現を支持する細胞を意味する。

本発明の核酸は、本発明の宿主細胞に対して異種である。宿主細胞は、原核細胞、真核細胞または古細菌のメンバーからの細胞であってもよい。宿主細胞は、任意の生物、特に、任意の非ヒト生物由来であってもよい。特に、宿主細胞は、細菌細胞、真菌細胞、古細菌、原生生物、植物細胞（藻を含む）、動物由来の細胞（特に、該動物から単離された）から選択されてもよい。宿主細胞は、ヒト以外の多細胞生物、または酵素が天然由来である生物の一部（配列番号４のパチョロールシンターゼの場合のナルドスタキス属のジャタマンシィなど）を構成してもよい。特定の実施形態では、本発明の宿主細胞は、多細胞生物由来であるが、それから単離される細胞の培養物におけるものである。

一般に、普遍イソプレノイド構成単位であるＣ５プレニルジホスファターゼイソペンテニル二リン酸（ＩＰＰ）およびジメチルアリル二リン酸（ＤＭＡＰＰ）の産生を可能にするメバロン酸経路または別の代謝経路（デオキシキシルロース－５－リン酸（ＤＸＰ）経路など）の反応ステップを触媒するための酵素を発現するための遺伝子を含む単離される細胞である。いままで知られているように、特定の細胞がノックアウトされていない場合、すべての既知の生物はそのような経路を含む。一般に、真核生物は、メバロン酸経路を介してＩＰＰを自然に調製することができる。次いで、このＩＰＰは、酵素のイソペンテニル二リン酸異性化酵素（Ｉｄｉ）の作用によってＤＭＡＰＰに異性化される。５：１の比でＩＰＰおよびＤＭＡＰＰを付与しているＤＸＰ経路は、原核生物に共通であるが、複数の原核生物は、メバロン酸経路を介してＩＰＰを自然に調製することができる。これらの経路について、当該技術分野で周知であり、例えば、Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２００７）７３：９８０－９９０にＷｉｔｈｅｒｓおよびＫｅａｓｌｉｎｇにより記載されている。これらの経路の遺伝子は各々、独立して細胞に対して相同的または異種的であってもよい。

さらに、宿主細胞は、内因的にまたは異種源から、より長いプレニル二リン酸塩を産生するＣ５プレニル二リン酸塩の頭－尾縮合を触媒するプレニルトランスフェラーゼ活性によって酵素を発現するための１つ以上の遺伝子を含むであろう。例えば、普遍的なセスキテルペン前駆体のファルネシルピロリン酸（ＦＰＰ）は、ＤＭＡＰＰ１モルに対するＩＰＰ２モルの連続的な頭－尾付加を介するこれらの酵素の作用により形成される。

実施形態では、宿主細胞は細菌である。細菌はグラム陽性またはグラム陰性であってもよい。グラム陽性細菌は、バシラス属、ラクトバシラス属、およびコリネバクテリウム属から、特に、枯草菌、ラクトバチルスカゼイ、およびコリネバクテリウムグルタミクムの種から選択されてもよい。

好ましい実施形態では、細菌は、グラム陰性細菌から、特には、ロドバクター、パラコッカスおよびエシェリキアの群から、より特には、ロドバクターカプスラータ、ロドバクタースフェロイデス、パラコッカスカロチニファシエンス、パラコッカスゼアキサンチンファシエンスおよび大腸菌の群から選択される。ロドバクタースフェロイデスは、ＩＰＰおよびＤＭＡＰＰの細胞内産生を可能にするＤＸＰ経路における様々な反応ステップを触媒する酵素を発現するために必要なすべての遺伝子を天然に含む生物の例であり、特に好ましい。

好ましい実施形態では、宿主細胞は、真菌細胞であり、特には、アスペルギルス、ブラケスレア、ペニシリウム、ファフィア（キサントフィロミセス）、ピキア、サッカロマイセスおよびヤロウイアの群から選択される真菌細胞であり、より特には、偽巣性コウジ菌、クロコウジカビ、ニホンコウジカビ、ブラケスラトリスポラ、ペニシリウムクリソゲナム、ファフィアロドジマ（キサントフィロミセスデンドロロウス）、ピキアパストリスおよびヤロウイアリポリティカの群から選択される。

植物細胞、および昆虫細胞、またはマウス、ラットもしくはヒトからの細胞などの動物細胞などのより高等な真核生物由来の細胞において本発明の核酸を発現することも可能である。該細胞は、細胞または組織培養物において維持され、パチョロールシンターゼのインビトロ産生のために使用され得る。

本発明にしたがった宿主細胞を含む多細胞生物は、特に、多細胞植物およびキノコの群（担子菌類）から選択されてもよい。

したがって、特定の実施形態では、本発明は、本発明にしたがったトランスジェニック植物またはトランスジェニック植物細胞を含む植物細胞もしくは組織培養物、該植物または植物宿主細胞の培養物に関する。トランスジェニック植物細胞のトランスジェニック植物または培養物は、特に、タバコ、ナス、キクニガナ、レタス、ミント、クソニンジン、塊茎形成植物（キクイモ、キャッサバおよびビート）、油脂作物（アブラナ、アブラヤシ（油ヤシの木）、ヒマワリ、ダイズおよびラッカセイ）、液体培養植物（アオウキクサ、タバコＢＹ２細胞およびヒメツリガネゴケ）、樹木（マツおよびポプラ）のいずれかのそれぞれの細胞培養物または組織培養物から選択されてもよい。特定の実施形態では、組織培養物は毛状根培養物である。

さらなる特定の実施形態では、本発明は、トランスジェニックキノコ細胞を含むトランスジェニックキノコまたは培養物に関する。トランスジェニック宿主細胞を含むトランスジェニックキノコまたは培養物は、特には、スエヒロタケ、ツクリタケおよびヒラタケの群から、より特には、スエヒロタケ、一般的なキノコ（ツクリタケ）、ヒラタケのいずれかの細胞を含むそれぞれの培養物から選択されてもよい。

本発明にしたがった宿主細胞は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｄ．Ｗ．”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”３ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，（２００１）；およびＦ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ，ｅｄｓ．，「Ｃｕｒｒｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７），およびこの資料に対する後の追補資料で記載されている、一般的に当業者に知られている標準的な遺伝子および分子生物学の技術に基づいて産生されてもよい。

担子菌類を形質転換する方法が、例えば、Ａｌｖｅｓ ｅｔ ａｌ．（Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．（２００４）７０：６３７９－６３８４），Ｇｏｄｉｏ ｅｔ ａｌ．（Ｃｕｒｒ Ｇｅｎｅｔ．（２００４）４６：２８７－２９４），Ｓｃｈｕｕｒｓ ｅｔ ａｌ．（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９７）１４７：５８９－５９６およびＷＯ０６／０９６０５０により公知である。担子菌類において適切なパチョロールシンターゼ遺伝子の発現を実現するように、その完全なオープンリーディングフレームは、典型的には、担子菌類の形質転換に適切な発現ベクターにクローン化されている。発現ベクターは、好ましくはまた、転写開始および終止を調節する核酸配列を含む。形質転換の選択を可能にするように少なくとも１つの選択可能なマーカー遺伝子を組み込むのも好ましい。パチョロールシンターゼの発現は、担子菌プロモーター、例えば、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターを使用して達成され得る。強い構成的プロモーターの例はグリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ｇｐｄＡ）プロモーターである。このプロモーターは、組換えＤＮＡ材料が担子菌宿主で発現されるときの構成型発現が好ましい。他の例は、担子菌のホスホグリセリン酸キナーゼ（ｐｇｋ）プロモーター、ピルビン酸キナーゼ（ｐｋｉ）プロモーター、ＴＰＩ、トリオースリン酸イソメラーゼ（ｔｐｉ）プロモーター、ＡＰＣシンターゼサブニットｇ（ｏｌｉＣ）プロモーター、ｓｃ３プロモーターおよびアセトアミド（ａｍｄＳ）プロモーターである（ＷＯ９６／４１８８２）。

必要に応じて、パチョロールシンターゼ遺伝子の一次ヌクレオチド配列は担子菌宿主のコドン使用適合させることができる。

さらに、発現は、（一核性）菌糸体にまたは（二核性）子実体に特に方向付けられ得る。後者の場合、ヒラタケのＦｂｈ１プロモーターは特に有用である（Ｐｅｎａｓ，Ｍ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｙｃｏｌｏｇｉａ（２００４）９６：７５－８２）。

植物形質転換の構築物のための方法論について当該技術分野で説明されている。選択される遺伝子の１つまたは２つ以上の付加複写の挿入によって過剰発現が達成され得る。それは、過剰発現を示すヌクレオチド配列の１つまたは２つ以上の付加複写により元々形質転換された植物またはそれらの子孫については不明である。

適切な植物組織において十分なレベルのトランスジェニック発現を得ることは、遺伝子組換え作物の産生における重要な側面である。植物宿主における異種ＤＮＡ配列の発現は、植物宿主内で機能的である操作可能に連結されているプロモーターの存在に依存する。プロモーター配列の選択は、いつおよび生物の中のどこで、異種ＤＮＡ配列が発現されるかを決定するであろう。双子葉植物からの多くのプロモーターは単子葉植物で操作可能であり、その逆も操作可能であると示されてきたが、理想的には、双子葉植物プロモーターは、双子葉植物での発現のために選択され、単子葉植物プロモーターは、単子葉植物での発現のために選択される。しかしながら、選択されるプロモーターの由来には制限がなく、それらは、所望の細胞または組織でのヌクレオチド配列の発現を推し進めることにおいて操作可能であれば十分である。場合によっては、複数の組織における発現は好ましいものであり、３５Ｓプロモーター系列などの構成型プロモーターはこの点で使用されてもよい。しかしながら、本発明の実施形態のいくつかでは、トランスジェニック植物での発現は葉特異的であり、特に、遺伝子の発現は葉の色素体で生じる。ギンドロ（ＰａＩｓｐＳ）（Ｓａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ（２００５）５７９：２５１４－２５１８）からのイソプレンシンターゼ遺伝子のプロモーターは色素体特異的発現を推し進める。したがって、このプロモーターは、本発明の発現ベクターでの使用のためのかなり適切なプロモーターである。

他の適切な葉特異的プロモーターは、ｒｂｃＳ（ルビスコ）プロモーター（（例えば、コーヒー由来、ＷＯ０２／０９２８２２参照）、アブラナ属由来（ＵＳ７，１１５，７３３参照）、大豆由来（Ｄｈａｎｋｅｒ，Ｏ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２００２）２０：１１４０－１１４５）参照）、ｃｙ－ＦＢＰａｓｅプロモーター（ＵＳ６，２２９，０６７参照）、アブラヤシ由来の集光性クロロフィルａ／ｂ結合タンパク質のプロモーター配列（ＵＳ２００６／０２８８４０９参照）、シロイヌナズナ由来のＳＴＰ３プロモーター（Ｂｕｔｔｎｅｒ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ ｃｅｌｌ＆Ｅｎｖｉｒｏｎ．（２００１）２３：１７５－１８４参照）、豆ＰＡＬ２遺伝子のプロモーター（Ｓａｂｌｏｗｓｋｉ，Ｒ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９５）９２：６９０１－６９０５参照）、ジャガイモＳＴ－ＬＳ１プロモーターのエンハンサー配列（Ｓｔｏｃｋｈａｕｓ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８５）８４：７９４３－７９４７参照）、コムギＣＡＢ１プロモーター（Ｇｏｔｏｒ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，ＰｌａｎｔＪ．（１９９３）３：５０９－５１８参照）、ジャガイモＡＤＰ－グルコース－ホスホリラーゼ遺伝子由来のストーマ特異的プロモーター（ＵＳ５，５３８，８７９参照）、イネのＰ（Ｄ５４０）遺伝子由来のＬＰＳＥ１エレメント（ＣＮ２００７／１００５１４４３参照）、およびストーマ特異的プロモーター、シロイヌナズナ由来のｐＧＣ１（Ａｔ１ｇ２２６９０）（Ｙａｎｇ．Ｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ（２００８）４：６参照）である。

植物種は、例えば、当該技術分野でよく知られている手順にしたがって、植物細胞プロトプラストのＤＮＡ媒介形質転換および形質転換プロトプラストからの植物のその後の再生により形質転換されてもよい。

植物細胞を形質転換する方法のさらなる例として、マイクロインジェクション（Ｃｒｏｓｓｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．（１９８６）２０２：１７９－１８５）、エレクトロポレーション（Ｒｉｇｇｓ，Ｃ．Ｄ．ａｎｄ Ｂａｔｅｓ，Ｇ．Ｗ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８６），８３：５６０２－５６０６）、アグロバクテリウム媒介形質転換（Ｈｉｎｃｈｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．（１９８８）６：９１５－９２２）、直接遺伝子導入（Ｐａｓｚｋｏｗｓｋｉ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯＪ．（１９８４）３：２７１７－２７２２）、ならびにＡｇｒａｃｅｔｕｓ，Ｉｎｃ．，（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）製およびＢｉｏＲａｄ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）製の装置を使用する弾道粒子加速（例えば、Ｓａｎｆｏｒｄ等による米国特許第ＵＳ４，９４５，０５０号および欧州特許出願第ＥＰ０３３２５８１号参照）が挙げられる。

トウモロコシに対してプロトプラスト形質転換方法を使用することも可能である（欧州特許出願第ＥＵ０２９２４３５号、米国特許第ＵＳ５，３５０，６８９号）。

アグロバクテリウム属のＴｉおよびＲｉプラスミドのバイナリタイプベクターを使用することは特に好ましい。Ｔｉ由来ベクターは、ダイズ、ワタ、アブラナ、タバコ、およびイネなどの単子葉植物および双子葉植物を含む広範な高等植物を形質転換する（Ｐａｃｃｉｏｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／ｔｅｃｈｎｏｌ．（１９８５）３：２４１、Ｂｙｒｎｅ Ｍ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ Ｏｒｇａｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ（１９８７）８：３－１５、Ｓｕｋｈａｐｉｎｄａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９８７）８：２０９－２１７、Ｈｉｅｉ，Ｙ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ＰｌａｎｔＪ．（１９９４）６：２７１－２８２）。植物細胞を形質転換するためのＴ－ＤＮＡの使用が広範な研究に受け入れられていて、詳しく記載されている（例えば、ＥＰ－Ａ１２０５１６）。植物への導入のために、本発明のキメラ遺伝子は、例に記載されているように、バイナリベクターに挿入され得る。

外来ＤＮＡ構築物の直接取り込み（ＥＰ－Ａ２９５９５９参照）、エレクトロポレーション技術（Ｆｒｏｍｍ，Ｍ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８６），３１９：７９１－７９３）または核酸構築物がコーティングされた金属粒子による高速弾道衝撃（例えば、ＵＳ４，９４５，０５０）などの他の形質転換方法を当業者は使用可能である。一旦形質転換されると、細胞は当業者により再生され得る。特に関連するものは、外来遺伝子を商業的に重要な作物、例えば、ナタネ（Ｄｅ Ｂｌｏｃｋ， Ｍ． ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９８９）９１：６９４－７０１）、ヒマワリ（Ｅｖｅｒｅｔｔ，Ｎ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９８７）５：１２０１－１２０４）、ダイズ（ＥＰ－Ａ３０１７４９）、イネ（Ｙ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ＰｌａｎｔＪ．（１９９４）６：２７１－２８２）およびトウモロコシ（Ｆｒｏｍｍ ｅｔ ａｌ．，１９９０ Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：８３３－８３９）に形質転換する方法である。

当業者は、方法の選択が、植物のタイプ、すなわち、単子葉植物または双子葉植物に依存し得ることを理解するであろう。

別の実施形態では、本明細書に記載されているベクターは色素体ゲノムに直接形質転換されてもよい。色素体形質転換技術について、例えば、ＵＳ５，４５１，５１３、ＵＳ５，５４５，８１７、ＵＳ５，５４５，８１８およびＷＯ９５／１６７８３に広範囲に亘って記載されている。葉緑体形質転換についての基本的技術は、例えば、遺伝子銃またはプロトプラスト形質転換（例えば、塩化物またはＰＥＧ媒介形質転換）を使用して、適切な標的組織に対象の遺伝子と共に選択マーカーに隣接するクローン化色素体ＤＮＡの領域を導入することを含む。

本発明にしたがったベクターを含むアグロバクテリウムツメファシエンス細胞は、ベクターがＴｉプラスミドを含み、形質転換される植物をつくる方法に有用である。植物細胞は、上記のアグロバクテリウムツメファシエンスに感染されて、形質転換された植物細胞を産生し、次いで、植物が、形質転換された植物細胞から再生される。本発明を実行するのに有用な多くのアグロバクテリウムベクター系が知られている。これらは、典型的には、少なくとも１つのＴ－ＤＮＡ境界配列を担持し、ｐＢＩＮ１９（Ｂｅｖａｎ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（１９８４）１２：８７１１－８７２０）などのベクターを含む。

直接遺伝子導入またはアグロバクテリウム媒介導入は、通常、抗生物質（例えば、カナマイシン、ハイグロマイシンまたはメトトレキサート）または除草剤（例えば、ホスフィノトリシン）への耐性を提供してもよい選択マーカーを用いて行われるが、必ずしもそうではない。植物形質転換についての選択マーカーの選択は、しかしながら、本発明にはクリティカルでない。

植物組織を培養する一般的な方法が、例えば、Ｍａｋｉ，Ｋ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９９３）１５：４７３－４９７により、およびＰｈｉｌｌｉｐｓ，Ｒ．Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ：Ｓｐｒａｇｕｅ ＧＦ，Ｄｕｄｌｅｙ ＪＷ，ｅｄｓ．Ｃｏｒｎ ａｎｄ ｃｏｒｎ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ３ｒｄ ｅｄｎ．Ｍａｄｉｓｏｎ（１９８８）３４５－３８７により提供されている。

形質転換後、トランスジェニック植物細胞は、続いてカルスに成長されるトランスジェニック細胞の選択のために適切な選択培地に配置される。芽がカルスから成長され、小植物が、発根培地で成長することによって芽から発生される。使用される特定のマーカーは、導入されたＤＮＡがない細胞に比べて、形質転換細胞の選択を可能にするであろう。

トランスジェニック細胞および植物における導入遺伝子の存在を確認するために、種々のアッセイが実行されてもよい。そのようなアッセイとして、例えば、サザンブロッティングおよびノーザンブロッティングなどの当業者によく知られている分子生物学的アッセイ、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションおよびＰＣＲまたはＲＴ－ＰＣＲなどの核酸ベースの増幅方法、ならびに、例えば、免疫学的手法（ＥＬＩＳＡおよびウエスタンブロット）によってまたは酵素機能によってタンパク質生成物の存在を検出することなどの「生化学」アッセイが挙げられる。酵素活性パチョロールシンターゼの存在は、植物の揮発性産生物（パチョロール）の化学分析により確立されてもよい。

本発明にしたがったパチョロールシンターゼは、パチョロールが、例えば、食物産生物におけるそれ自体フレーバーまたはアロマとして、または、例えば、家庭用産生物におけるフラグランスとして、または、他のイソプレノイド、例えば、サンタロールの生成のための中間産生物として使用されてもよい、パチョロールの工業産生のために使用されてもよい。

本発明にしたがったパチョロールを産生する方法は、パチョロールシンターゼの存在下でパチョロールを調製することを含む。原理的に、そのような方法は、対象の化合物の存在下で酵素を使用するための任意の技術に基づき得る。

その方法は、ＦＰＰまたはその前駆体のいずれか（例えば、ファルネソール、ＩＰＰ、イソペンテニルリン酸、３－メチルブタ－３－エン－１－オールおよびメバロン酸さえも）がパチョロールシンターゼを含む細胞に対する基質として供給される方法であってもよい。代替として、その方法はまた、適切な炭素源からＦＰＰを形成する、したがって、パチョロールへの完全な発酵経路を確立することができる酵素系を含む生きている生物が使用される方法であってもよい。適切な原料（例えば、炭水化物、アミノ酸源、脂肪酸源）由来の化合物を合成する生物の培養物が使用されるプロセスについて、本明細書では、広範な意味で、用語「発酵（的）」が使用されていることに留意する必要がある。したがって、本明細書で意味する発酵プロセスは、嫌気性条件に限定されず、嫌気性条件下でのプロセスまで拡張される。適切な原料は、（微）生物の特異的な種について一般に知られている。

また、細胞から単離されるパチョロールシンターゼが使用されてもよく、細胞は、例えば、任意に一部のルーチン試験と組み合わせて、条件が本明細書で参照されている先行技術および本開示に基づいてもよい、適切な条件（ｐＨ、溶剤、温度）下で基質（ＦＰＰ）およびパチョロールシンターゼが接触する反応系でそれが産生されたものである。パチョロールシンターゼは、ＦＰＰがまた存在する水性培地で可溶化されてもよく、または、パチョロールは、当該技術分野で知られているような支持体上に固定されて、次いで、ＦＰＰを含む液体と接触されてもよい。酵素は、ＦＰＰからパチョロールへの触媒作用に対する活性および／または選択制を有するため、本発明はまた、酸性条件下だけでなく、ｐＨが略中性またはアルカリ性である場合にも、そのようなインビトロの方法についても有利である。適切な条件は、例えば、本明細書で参照されている文献でいう既知のパチョロールシンターゼに対する既知の方法、本明細書で開示されている情報、共通の一般的知識および任意の一部のルーティンの実験に基づいてもよい。

本発明の特に有利な方法で、パチョロールは、すなわち、培地でパチョロールシンターゼを発現する細胞を培養することにより、発酵的に調製される。パチョロールシンターゼにより触媒される実際の反応は、細胞内で、または、パチョロールシンターゼが排出される場合には、培地における細胞外で起こってもよい。

本発明にしたがったパチョロールを調製する方法で使用される細胞は、特に、本発明にしたがった宿主細胞であってもよい。所望により、これらの宿主細胞が操作されて、パチョロールシンターゼに多い量のＦＰＰを供給してもよい。これは、例えば、異なる方法でそれ自身認識され得る、ＦＰＰに対する炭素のフラックスを向上させることにより行わせ得る。内因性ＤＸＰ経路を有する宿主細胞（大腸菌、ロドバクタースフェロイデスのような）において、これらの経路の酵素の発現の緩和は、イソプレノイド形成に対する明確なプラスの効果を有し得る。１－デオキシ－ｄ－キシルロース－５－リン酸シンターゼ（ＤＸＰシンターゼ）をコードするｄｘｓの過剰発現と、ＤＸＰ経路の第１の酵素と、したがって、代謝工学のための主な目的の１つとが、幾つかのイソプレノイドの増加した生合成をもたらした（例えば、Ｍａｔｔｈｅｗｓ ａｎｄ Ｗｕｒｔｚｅｌ，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２０００）５３：３９６－４００、Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００１）９：２２３７－２２４２、Ｈａｒｋｅｒ ａｎｄ Ｂｒａｍｌｅｙ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ（１９９９）４４８：１１５－１１９、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔａｂ．Ｅｎｇ．（２０００）２：３２８－３３８、およびＹｕａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔａｂ．Ｅｎｇ．（２００６）８：７９－９０）。また、ＤＸＰイソメロレダクターゼについてコードするｄｘｒの発現（１－デオキシ－Ｄ－キシルロース－５－リン酸レダクトイソメラーゼとしても知られている）、およびＤＸＰ経路で第２のかつコミットされたステップを触媒する酵素は、増加したイソプレノイド産生に繋がり得（Ａｌｂｒｅｃｈｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．（１９９９）２１：７９１－７９５）、その効果は、同時にｄｘｓを共過剰発現することによりさらに増加され得る（Ｋｉｍ＆Ｋｅａｓｌｉｎｇ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ（２００１）７２：４０８－４１５）。イソプレノイド生合成に対するプラスの効果が、イソペンテニル二リン酸異性化酵素（ＩＰＰ異性化酵素、Ｉｄｉ）の過剰発現、ジメチルアリル二リン酸に対するＩＰＰの相互変換を触媒する酵素、ＤＭＡＰＰ（例えば、Ｋａｊｉｗａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．（１９９７）３２４：４２１－４２６）、Ｍｉｓａｗａ ａｎｄ Ｓｈｉｍａｄａ，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．（１９９８）５９：１６９－１８１、およびＹｕａｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔａｂ．Ｅｎｇ．（２００６）８：７９－９０）および酵素、ＭＥＰサイトジイルトランスフェラーゼ（４－ジホスホシチジル－２－Ｃ－メチルーＤ－エリトリトールシンターゼ（ＩｓｐＤ）としても知られている）および大腸菌における１つのオペロンｉｓｐＤＦとして転写される、２Ｃ－メチル－Ｄ－エリトリトール２，４－シクロ二リン酸シンターゼ（ＩｓｐＦ）（Ｙｕａｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔａｂ．Ｅｎｇ．（２００６）８：７９－９０）によりさらに得られた。

イソプレノイドの高レベルの産生のための内因性ＤＸＰ経路を用いる人工的に作り出される菌株に対する代替のおよびより効果的なアプローチは、異種メバロン酸経路の導入である。合成アモルファ－４，１１－ジエンシンターゼ遺伝子を用いる出芽酵母メバロン酸経路の大腸菌における共発現は、組換え大腸菌株がＬＢ＋グリセロール培地で培養されたときに、１１０ｍｇ／Ｌ以上の力価のセスキテルペンアモルファジエンの形成をもたらした（Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２００３）２１：７９６－８０２）。この大腸菌株は続いて、酵母酵素３－ヒドロキシ－３－メチル－グルタリル－共酵素Ａ（ＨＭＧ－ＣｏＡ）還元酵素のＣ末端触媒ドメインをコードする遺伝子ｔＨＭＧ１の過剰複写の導入により改善された。その形成を、したがって、この酵素の活性を増加させることによって、毒性メバロン酸経路中間ＨＭＧ－ＣｏＡの細胞内レベルが低減され、それにより、発育抑制を克服し、かつメバロン酸の増加した産生に繋がった（Ｐｉｔｅｒａ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔａｂ．Ｅｎｇ．（２００７）９：１９３－２０７）。異種メバロン酸経路を介するフラックスのさらなる改善が、ワイルドタイプｌａｃプロモーターの２倍強いｌａｃＵＶ５プロモーターとの置き換えと組み合わせたこの経路の第１の３つの遺伝子のコドン最適化により得られた（Ａｎｔｈｏｎｙ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔ．Ｅｎｇ．（２００９）１１：１３－１９）。アモルファジエンの産生は、ＨＭＧ－ＣｏＡシンターゼおよびＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼについての酵母遺伝子をグラム陽性細菌黄色ブドウ球菌からの相当する遺伝子と置き換えることによってさらに増加され得る。最適化された発酵プロトコルと組み合わせて、この新規の人工的に作り出される大腸菌株の培養は、２７．４ｇ／Ｌのアモルファジエン力価をもたらした（Ｔｓｕｒｕｔａ ｅｔ ａｌ．ＰｌｏＳ ＯＮＥ（２００９）４（２）：ｅ４４８９．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０００４４８９）。同様に、アグロバクテリウムツメファシエンスデカプレニル二リン酸塩シンターゼ（ｄｄｓＡ）遺伝子を用いる人工的に作り出される大腸菌株は、細胞の乾燥重量２４００μｇ／ｇ以上のコエンザイムＱ_１０（ＣｏＱ_１０）を産生する（Ｚａｈｉｒｉ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔ．Ｅｎｇ．（２００６）８：４０６－４１６）。増加したＣｏＱ_１０の産生はまた、そのネイティブな形態（ＷＯ２００５／００５６５０）および変異形態（ＷＯ２００６／０１８２１１）のパラコッカスゼアキサンチニファシエンスからのメバロン酸経路を用いるロドバクタースフェロイデス株を人工的に作り出すことによって得られた。

また、内因性ＭＥＶ経路を有する宿主細胞（出芽酵母のような）は、イソプレノイドハイパー産生株を得る複数の人工的に作り出す研究の主題となってきた。レモンのパチョロールシンターゼをコードする遺伝子と組み合わせる異種大腸菌由来ＤＸＰ経路の出芽酵母への導入は、パチョロールシンターゼのみを発現する株と比較して約１０倍以上のパチョロールを蓄積する株をもたらした（ＷＯ２００７／０９３９６２）。産業的に重要な酵母キャンディダユティリスおよび出芽酵母における最大の改善は、同種ＭＥＶ経路の人工的作り出しを中心としてきた。特に、その全長または短縮されたバージョンで、主な調製酵素であると考えられている酵素ＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼの過剰発現は、イソプレノイドの産生を増加させるための効率的な方法であるように見える。このＮ末端短縮ＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼの過剰発現の刺激的効果は、例えば、Ｃ．ユティリスにおけるリコペン産生（Ｓｈｉｍａｄａ ｅｔ ａｌ．Ａｐｐｌ．Ｅｎｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．（１９９８）６４：２６７６－２６８０）およびＳ．セレビシエにおけるエピ－セドロール産生（Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．（２００３）５：１６２９－１６３２）の場合に観察された。最後の場合で、このセスキテルペンの産生は、ステロール生合成に対する代謝フラックスの増加を導出するｕｐｃ２－１、対立遺伝子の導入によりさらに向上され得る。ＭＥＶ経路を介してそのフラックスを増加させる別の方法は、ＦＰＰおよび他のイソプレノイド前駆体によるフィードバック阻害に感受性が小さいメバロン酸キナーゼ変異体の使用である。例えば、ＷＯ２００６／０６３７５２は、パラコッカスゼアキサンチニファシエンスＲ１１４、すなわち、内因性ＭＥＶ経路を有する細菌が、Ｓ．セレビジエメバロン酸キナーゼ変異体Ｎ６６Ｋ／Ｉ１５２ＭおよびＰ．ゼアキサンチニファシエンスＡＴＣＣ２１５８８由来ｄｄｓＡ遺伝子の導入後に、ワイルドタイプＳ．セレビジエメバロン酸キナーゼを発現する対応するＰ．ゼアキサンチニファシエンス株より多いコエンザイムＱ_１０を著しく産生することを示している。Ｐ．ゼアキサンチニファシエンスＲ１１４を用いるＣｏＱ_１０産生に関する同様のプラスの結果も、Ｐ．ゼアキサンチニファシエンスメバロン酸キナーゼのフィードバック耐性変異体Ｋ９３Ｅを用いて得られた（ＷＯ２００４／１１１２１４）。

ＦＰＰの増加量に対する第２のアプローチは、ＦＰＰに関する酵素の副作用の低減または排除に基づいている。酵母中で、遺伝子ＥＲＧ９は、２つのファルネシル二リン酸部位の濃縮を触媒して、スクワレンを形成する酵素のファルネシル二リン酸ファルネシル転移酵素（スクワレンシンターゼ）をコードする。これは、ステロール生合成でのＦＰＰ後の第１のステップであり、したがって、ステロール経路へのイソプレン単位のフラックスを調節するため、ＥＲＧ９は、増加するセスキテルペンおよびカロテノイドの産生のためのイースト代謝エンジニアリングにおける頻繁の目標である。酵母Ｃ．単位でのｔＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼの過剰発現と組み合わせるＥＲＧ９の破壊は、増加したリコペンの産生に繋がった（Ｓｈｉｍａｄａ ｅｔ ａｌ．Ａｐｐｌ．Ｅｎｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．（１９９８）６４：２６７６－２６８０）。メチオニン抑制プロモーターを使用するｔＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼの過剰発現とＥＲＧ９の下方制御の類似する組み合わせは、アモルファジエンシンターゼ遺伝子のみを発現する酵母株に比べて、約１０倍の酵母においてセスキテルペンアモルファジエンの産生を増加させた（Ｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ（２００６）４４０：９４０－９４３、Ｌｅｎｉｈａｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．（２００８）２４：１０２６－１０３２）。エルゴステロールは酵母成長のために不可欠であり、酵母細胞は、好気性増殖中に外部から供給されるエルゴステロールを資化できないため、ＥＲＧ９の下方制御／ノックアウトは、培地からのエルゴステロールの効率的な好気性取り込みを酵母株にもたせた突然変異と頻繁に組み合わされる。例としてはｓｕｅ対立遺伝子（Ｔａｋａｈｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．（２００７）９７：１７０－１８１）およびｕｐｃ２－１対立遺伝子がある（Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．（２００３）５：１６２９－１６３２）。Ｔａｋａｈａｓｈｉ等（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．（２００７）９７：１７０－１８１）はまた、酵母においてホスファターゼ遺伝子ｄｐｐ１をノックアウトすることによって内因性ホスファターゼ活性を制限する効果について研究した。このノックアウトは、より少ないファルネソール蓄積によって反映されるＦＰＰの脱リン酸化を明らかに制限したが、それは、適用される増殖条件下でｅｒｇ９／ｓｕｅ突然変異の産生以上にはセスキテルペン産生を改善しなかった。

パチョロールを発酵調製する反応条件は、使用される宿主細胞の種（例えば、ロドバクターカプスラータ、ロドバクタースフェロイデス、パラコッカスゼアキサンチニファシエンス、大腸菌、アスペルギルスニデュランス、ニホンコウジカビ、出芽酵母、ペニシリウムクリソゲナム、ファフィアロドジマおよびピキアパストリス）についての既知の条件、本明細書に記載されている情報、共通の一般的知識および任意の一部のルーティン実験に応じて選択されてもよい。

原理的に、本発明にしたがった方法で使用される反応媒体（培地）のｐＨは、パチョロールシンターゼが活性であり、かつｐＨ条件下で求められる特異性を表す限り、広い範囲内で選択されてもよい。方法が細胞の使用を含む場合、パチョロールシンターゼを発現するために、細胞がその意図された１つ以上の機能を実行できるように、ｐＨが選択される。ｐＨが、特に、４つのｐＨ単位であって、中性ｐＨ以下、２つのｐＨ単位および中性ｐＨ以上、すなわち、２５℃の完全水系の場合のｐＨ３～ｐＨ９内で選択されてもよい。良好な結果が、例えば、範囲６．８～７．５のｐＨを有する水系反応媒体において達成された。

系は、水のみが溶媒であるまたは水が主たる溶媒（全液体に基づいて、＞５０ｗｔ％、特に、＞９０ｗｔ％）である場合に、水系であるとみなされ、例えば、少量のアルコールまたは別の溶剤（全液体に基づいて、＜５０ｗｔ％、特に、＜９０ｗｔ％）が、存在している微生物が活性を維持する濃度で溶解していてもよい（例えば、全発酵アプローチの場合の炭素源として）。

特に、酵母および／または菌が使用される場合、酸性条件が好適であってもよく、特に、ｐＨが、２５℃の完全水系に基づいて、ｐＨ３～ｐＨ８の範囲内にあってもよい。所望により、ｐＨは、酸および／または塩基を使用して調節されても、または酸および塩基の適切な組み合わせでバッファリングされてもよい。

嫌気性条件は、なんら酸素のない、まあは酸素が培養細胞、特に、微生物により実質的に消費されない条件として、本明細書で定義され、通常は５ｍｍｏｌ／ｌ．ｈ以下の酸素消費、好ましくは２．５ｍｍｏｌ／ｌ．ｈ以下の酸素消費、より好ましくは１ｍｍｏｌ／ｌ．ｈ以下に対応している。水系条件は、非制限的増殖のための酸素の十分なレベルが、少なくとも１０ｍｍｏｌ／ｌ．ｈ、より好ましくは２０ｍｍｏｌ／ｌ．ｈ以上、さらに好ましくは５０ｍｍｏｌ／ｌ．ｈ以上、および最も好ましくは１００ｍｍｏｌ／ｌ．ｈの速度を支持することができる媒体に溶解されている、条件である。

酸素制限条件は、酸素消費がガスから液体への酸素移動によって制限される条件として定義されている。酸素制限条件の下限は、嫌気性条件の上限、すなわち、通常は、少なくとも１ｍｍｏｌ／ｌ．ｈ、および特に少なくとも２．５ｍｍｏｌ／ｌ．ｈ、または少なくとも５ｍｍｏｌ／ｌ．ｈにより決定される。酸素制限条件の上限は、水性条件の下限、すなわち、１００ｍｍｏｌ／ｌ．ｈ以下、５０ｍｍｏｌ／ｌ．ｈ以下、２０ｍｍｏｌ／ｌ．ｈ以下、または１０ｍｍｏｌ／ｌ．ｈ以下より決定される。

条件が水性、嫌気性または酸素制限的であるかどうかは、方法が実行される条件、特に、入ってくるガス流の量および組成、使用される装置の実際の混合／物質移動、使用される微生物の種類および微生物の密度に依存する。

原理的には、用いる温度は、パチョロールシンターゼ（細胞内）が実質的に活性を示す限り、クリティカルでない。一般に、温度は、少なくとも０℃、特には少なくとも１５℃、より特には少なくとも２０℃であってもよい。好ましい最大温度は、パチョロールシンターゼを発現する細胞が使用される方法の場合には、パチョロールシンターゼおよび細胞に依存する。温度は、７０℃以下、好ましくは５０℃以下、より好ましくは４０℃以下、特に３５℃以下である。

発酵プロセスの場合、インキュベーション条件は、細胞が十分な活性および／または増殖を示す限り、広い制限の範囲内で選択され得る。これは、水性、酸素制限および嫌気性条件を含む。

特に、それによりパチョロールが形成される触媒反応が、宿主細胞の外部で実行される場合、有機溶剤を含む反応媒体は、使用されるパチョロールシンターゼがそのような媒体において十分な活性及び特異性を保持する場合、高い濃度（全液体に基づいて、例えば、５０重量％以上、または９０重量％以上）で使用されてもよい。

所望により、本発明にしたがった方法で産生されるパチョロール、ポゴストール、およびエレモールは、反応媒体から回収されてもよい。適切な方法は、反応媒体とは非混和性である抽出液による液液抽出である。

特に、炭化水素液体などの液体有機溶剤による抽出が適切である（水系反応媒体からの抽出には）。最初の結果から、本方法はまた、パチョロール（またはさらなる産生物）の回収のために細胞を溶解する必要なく、その増殖のために使用される本発明にしたがった細胞を含む反応媒体から、パチョロールおよびエレモールを、ならびに好ましくはポゴストールも抽出するものであることは明らかである。特に、有機溶媒は、液体アルカン、長鎖アルコール（少なくとも１２個の炭素原子を有するアルコール）、および長鎖脂肪酸の液体エステル（少なくとも１２個の炭素原子を有する酸）から選択されてもよい。適切な液体アルカンは、特に、ヘキサン、オクタン、デカン、ドデカン、イソドデカンおよびヘキサデカンなどのＣ６－Ｃ１６アルカンを含む。適切な長鎖脂肪族アルコールは、特に、オレイルアルコールおよびパルミトレイルアルコールのようなＣ１２－Ｃ１８脂肪族アルコールを含む。適切な長鎖脂肪酸のエステルは、特に、ミリスチン酸イソプロピルおよびオレイン酸エチルのようなＣ１２－Ｃ１８脂肪酸のエステルを含む。

有利な実施形態では、パチョロールおよびエレモール、ならびに好ましくはポゴストールも、第１の液相（反応相）であって、前記第１の液相は、その細胞でパチョロール（または、さらなる産生物）が産生される本発明にしたがった細胞を含む、第１の液相と、第２の液相（接触されるときに、第１の相との完全相分離を維持する有機相）であって、形成される産生物がより高い親和性を有する抽出相である、第２の液相とを含むリアクタで産生される。本方法は、ｉｎ ｓｉｔｕ産生物回収を可能にする点で有利である。また、それは、第２の相の存在によって、反応相における第２の相、パチョロールおよびエレモール、ならびに好ましくはポゴストールの濃度がプロセスを通して比較的低く維持されてもよいために、細胞に対するパチョロールおよびエレモール、ならびに好ましくはポゴストールの潜在的な毒性の影響を防止または少なくとも低減することに寄与する。最終的に、抽出相が、パチョロール、ポゴストール、およびエレモールを反応相から抽出することに寄与する強い表れがある。

本発明の好ましい方法では、抽出相は、反応相の上部に層を形成し、または反応相と混合されて、抽出相内での反応相の分散または反応相内での抽出相の分散を形成する。したがって、抽出相は、反応相から産生物を抽出するだけでなく、パチョロールが（水系）反応相で産生され、または（水系）反応相に抽出される場合に生じてもよいオフガスを介してリアクタからの形成された産生物の損失を低減または完全に防止する。パチョロールは水に溶解し難く、したがって、水から容易に揮発する。有機相（相または分散としての）に溶解されたパチョロールは少なくとも実質的に揮発が防止されると考えられる。

抽出相として使用するのに適切な液体は、反応相より低い密度を、良好な生体適合性（生きている細胞の生存性との無妨害性）、低い揮発性、および水系反応相との略絶対的な非混和性と結合させる。本出願のための適切な液体の例には、デカン、ドデカン、イソドデカン、テトラデカン、およびヘキサデカンのような液体アルカン、またはオレイルアルコールおよびパルミトレイルアルコールのような長鎖脂肪族アルコール、またはパルミチン酸イソプロピルおよびオレイン酸エチルのような長鎖脂肪酸のエステルがある（例えば、Ａｓａｄｏｌｌａｈｉ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．（２００８）９９：６６６－６７７）、Ｎｅｗｍａｎ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．（２００６）９５：６８４－６９１）およびＷＯ２００９／０４２０７０参照）。

本発明にしたがって産生されるパチョロールは、したがって、例えば、フレーバーもしくはフレグランスとして、もしくはは防虫材として使用されてもよく、または、別の化合物、特に別のフレーバーもしくはフレグランスのための開始材料として使用されてもよい。

さらに、本開示は、パチョロール、ポゴストール、およびエレモールを調製する方法であって、酵素の存在下でポリプレニル二リン酸基材をパチョロール、ポゴストール、およびエレモールに変換することを含み、酵素は、タグペプチドを含む第１の断片および本発明のパチョロールシンターゼを含む第２の断片を含む、方法に関する。前記だい１の断片および前記第２の断片を含む酵素は、本明細書では、「タグ付け酵素」と呼ばれてもよい。

パチョロール、ポゴストールおよびエレモール調製について、本明細書に記載されている方法、アミノ酸配列、核酸配列または宿主細胞を使用し得る。例えば、サンタロールが、それ自体知られているように、パチョロールの酸素処理／酸化により調製され得る。

タグペプチドは、好ましくは、窒素利用タンパク質（ＮｕｓＡ）、チオレドキシン（Ｔｒｘ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、グルタチオンＳ－転移酵素（ＧＳＴ）、低分子ユビキチン様修飾因子（ＳＵＭＯ）またはカルシウム結合タンパク質（Ｆｈ８）およびそれらの機能的相同体の群から選択される。本明細書で使用される場合、タグペプチドの機能的相同体は、非タグ付け酵素に比べて、タグ付け酵素の溶解性に対する少なくとも略同じ効果を有するタグペプチドである。典型的には、１つ以上のアミノ酸が、それが相同体であるペプチドに挿入され、それと置換され、それから欠失される点で、相同体は異なる。相同体は、特に、別の親水性アミノ酸についての親水性アミノ酸、または別のものについての親水性アミノ酸１つ以上の置換を含んでもよい。相同体は、特に、ＮｕｓＡ、Ｔｒｘ、ＭＢＰ、ＧＳＴ、ＳＵＭＯまたはＦｈ８の配列との少なくとも４０％、より特には少なくとも５０％、好ましくは少なくとも５５％、より好ましくは少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する。

大腸菌由来マルトース結合タンパク質またはその機能的相同体が特に適切である。

本発明にしたがったタグ付け酵素の使用は、それが、増加した産生、特に、パチョロール、ポゴストール、およびエレモールなどのテルペノイドまたはテルペンの増加した細胞産生に寄与してもよい点で、特に有利である。

タグ付けの改善される溶解性（タグのない酵素に比べて）について、酵素の第１の断片は、好ましくは、第２の断片のＮ末端にそのＣ末端において結合される。代替として、タグ付け酵素の第１の断片は、その第２の断片のＣ末端にＮ末端において結合される。

さらに、本開示は、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、ポリペプチドが、タグペプチド、特に、ＭＢＰ、ＮｕｓＡ、Ｔｒｘ、ＧＳＴ、ＳＵＭＯ、Ｆｈ８タグまたはそれらのいずれかの機能的相同体、およびパチョロールシンターゼを含む第２の断片を含む、核酸に関する。第２の断片は、例えば、配列番号３で示されるアミノ酸配列、またはその機能的相同体を含んでもよい。

さらに、本開示は、前記タグ付けパチョロールシンターゼをコードする前記核酸を含む宿主細胞に関する。タグ付け酵素をコードする本発明にしたがった特異的核酸は、配列番号１０、配列１４、配列番号１８、配列番号２２、配列番号２６、および配列番号３０で示される。宿主細胞は、特に、それらの配列またはその機能的相同体のいずれかを含む遺伝子を含んでもよい。

さらに、本開示は、タグペプチドを含む第１の断片と、ポリプレニル二リン酸をテルペン、特に、パチョロールシンターゼに変換する酵素活性を有するポリペプチドを含む第２の断片と、を含む、酵素であって、タグペプチドは、好ましくは、ＭＢＰ、ＮｕｓＡ、ＴｒｘまたはＳＥＴの群から選択される、酵素に関する。本発明にしたがったタグ付け酵素を含む特異的酵素は、配列番号１１、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２３、配列番号２７および配列番号３１で示される。

本発明は、ここで、以下の実施例によって示される。

ＮｊＰＡＴ遺伝子がＭＢＰタグに融合され、かつプロモーターＳＰｐｐａにより調整されるプラスミドｐ－ｍ－ＳＰｐｐａ－ＭＢＰ－ＮｊＰＡＴ－ｍｐｍｉｉ ａｌｔの特徴を示す遺伝子マップ。 ＮｊＰＡＴ遺伝子がＦｈ８タグに融合され、かつプロモーターＳＰｐｐａにより調整されるプラスミドｐ－ｍ－ＳＰｐｐａ－Ｆｈ８－ＮｊＰＡＴ－ｍｐｍｉｉ ａｌｔの特徴を示す遺伝子マップ。 ＮｊＰＡＴ遺伝子がＳＵＭＯタグに融合され、かつプロモーターＳＰｐｐａにより調整されるプラスミドｐ－ｍ－ＳＰｐｐａ－ＳＵＭＯ－ＮｊＰＡＴ－ｍｐｍｉｉ ａｌｔの特徴を示す遺伝子マップ。 ＮｊＰＡＴ遺伝子がＮｕｓＡタグに融合され、かつプロモーターＳＰｐｐａにより調整されるプラスミドｐ－ｍ－ＳＰｐｐａ－ＮｕｓＡ－ＮｊＰＡＴ－ｍｐｍｉｉ ａｌｔの特徴を示す遺伝子マップ。 ＮｊＰＡＴ遺伝子がＲｓＴＲＸタグに融合され、かつプロモーターＳＰｐｐａにより調整されるプラスミドｐ－ｍ－ＳＰｐｐａ－ＲｓＴＲＸ－ＮｊＰＡＴ－ｍｐｍｉｉ ａｌｔの特徴を示す遺伝子マップ。 ＮｊＰＡＴ遺伝子がＧＳＴタグに融合され、かつプロモーターＳＰｐｐａにより調整されるプラスミドｐ－ｍ－ＳＰｐｐａ－ＧＳＴ－ＮｊＰＡＴ－ｍｐｍｉｉ ａｌｔの特徴を示す遺伝子マップ。 ＮｊＰＡＴテルペンアルコール抽出のＧＣ－ＦＩＤクロマトグラム。Ａ：エレモールに、Ｂ：ポゴストール、Ｃ：パチョロール ＮｊＰＡＴ抽出のＧＣ－ＱＴＯＦクロマトグラム。Ａ：グアイア－１１－ジエン、Ｂ：β－パチョレン、Ｃ：ビシクロゲルマクレン、Ｄ：セイケレン、Ｅ：α－パチョレン、Ｆ：δ－パチョレン、Ｇ：δ－グアイエン、Ｈ：γ－パチョレン、Ｉ：エレモール、Ｊ：ポゴストール、Ｋ：イソロンギホロールアセテート、Ｌ：ビリジフロロール／イエドール、Ｍ：パチョロール。

実施例１：
ナルドスタキスジャタマンシのＧＣ－ＭＳ分析
約２０ｃｍの高さのナルドスタキスジャタマンシ植物を、Ｐｏｙｎｔｚｆｉｅｌｄ Ｈｅｒｂ Ｎｕｒｓｅｒｙ，Ｂｌａｃｋ Ｉｓｌｅ，Ｂｙ Ｄｉｎｇｗａｌｌ ＩＶ７ ８ＬＸ，Ｒｏｓｓ＆Ｃｒｏｍａｒｔｙ，Ｓｃｏｔｌａｎｄで購入した。その植物は、葉および根の材料が切り取られた。予め冷却されたガラス管に入れられた植物材料の重みは０．５ｇであり、２ｍＬのジクロロメタンが加えられた。１分間吊り下げて回転され、超音波バス内で５分間、１５００ｇ、室温で超音波処理された。上澄みを集めて、１ｇの硫酸ナトリウムのカラム上にろ過された。約２マイクロリットルが、Ｃａｎｋａｒ ｅｔ ａｌ．（２０１５）により詳細に記載されているガスクロマトグラフを使用して、ＧＣ／ＭＳにより分析された。パチョロールが、保持時間およびマススペクトルについての、パチョリ油５（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）のそれらに対する比較によって同定された。

結果：
Ｎ．ジャタマンシの根は、パチョロール（Ｒｔ１６．４ｍｉｎ）およびアルファパチョレン（Ｒｔ１３．９ｍｉｎ）に対応する化合物を含むことが示された。したがって、この組織を、ＲＮＡの抽出のためにさらに採取した。

実施例２：
ＲＮＡ抽出および分析
Ｎ．ジャタマンシの根の材料のＲＮＡが以下のように単離された。約１５ｍＬの２０抽出バッファ（ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミドを２％、ポリビニルピロリドンＫ－３０を２％、トリス塩酸（ｐＨ８．０）を１００ｍＭ、ＥＤＴＡを２５ｍＭ、ＮａＣｌを２．０Ｍ、スペルミジンを０．５ｇ／Ｌおよびβ－メルカプトエタノールを２％）が６５℃に温められ、その後、３ｇの地組織が加えられて混合された。混合物は、２回、等しい容積のクロロホルム：イソアミルアルコール（１：２４）を用いて２回抽出され、１０ＭのＬｉＣｌの四分の一の容積が上澄みおよび混合物に加えられた。ＲＮＡは４℃で一晩中沈殿され、２０分間１００００ｇの遠心分離によって採取された。パレットが、５００マイクロリットルのＳＳＴＥ［１．０ＭのＮａＣｌ、０．５％のＳＤＳ、１０ｍＭのトリスＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ ８．０）］に溶解されて、等しい容積のクロロホルム：イソアミルアルコールを用いて１回抽出された。エタノールの２つの容積が上澄みに加えられて、－２０℃で少なくとも２時間培養され、１３０００ｇで遠心分離されて、上澄みが除去された。ペレットは、空気乾燥され、水中に再懸濁された。全ＲＮＡ（６０Ｖｇ）がＶｅｒｔｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＡＧ（フライジング郡、ドイツ）に発送された。ＰｏｌｙＡ＋ＲＮＡが単離されて、ランダムにプライマー処理されたｃＤＮＡが、ランダム化されたＮ６アダプタープラーマーおよびＭ－ＭＬＶ Ｈ－逆転写酵素を使用して合成された。ｃＤＮＡはせん断されて、細分化され、サイズが５００ｂｐの５つの断片がさらなる分析のために使用された。ｃＤＮＡキャリーは、Ｉｌｌｕｍｉｎａにより特定化されたアダプター配列ＡおおびＢをそれらの５’および３’末端に取り付けられた。

材料は、続いて、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ装置において分析された。１１，０６４，０５９，１５１対の塩基対の全配列長さを用いて、全部で２８，３３１，９１０個の配列がＭｉＳｅｑによって読み出された。Ｔｒｉｍｍｏｍａｔｉｃ－０．３２が、Ｉｌｌｕｍｉｎａ配列アダプターからの配列をトリミングするように使用され、Ｓｅｑｐｒｅｐが対の末端配列を重ね合わせるために使用され、ｂｏｗｔｉｅ２（バージョン２．２．１）はｐｈｉＸ汚染を除去するために使用される（ｐｈｉＸ ＤＮＡは、通常は＜１％存在しているスパイクイン制御として使用される）。対の末端読み出しおよび単一の読み出しが、Ｔｒｉｎｉｔｙアセンブリ（ｔｒｉｎｉｔｙｒｎａｓｅｑ－２．０．２）で使用された。１６０８７１個のコンティグの全数がＴｒｉｎｉｔｙによりアセンブルされた。セスキテルペンシンターゼを識別するために、Ｎ．ジャタマンシコンティグが、ｃＤＮＡ配列のデータベースをつくるために使用された。このデータベースにおいて、ＴＢＬＡＳＴＮプログラムは、ポゴステモンキャブリン由来パチョロールシンターゼ、バレリアナ由来パチョロールシンターゼを含むセスキテルペンシンターゼのタンパク質配列との同一性を示すタンパク質をコードするｃＤＮＡを識別するために展開された。Ｎ．ジャタマンシの全７７個のコンティグにおいて、セスキテルペンシンターゼに対して有意な相同性を有するｃＮＤＡデータベースが識別された。これらの７７個のコンティグは、ＵｎｉＰｒｏｔに存在するテルペンシンターゼ配列に対するそれらの相同性にしたがって、ＵｎｉＰｒｏｔデータベース（２０１５年８月２８日にダウンロードされた）に存在するタンパク質配列に対してそれらをアライメントするＢＬＡＳＴＸプログラムを使用してそれらを分析することにより、さらに特徴付けられ、それらの２４個は、推定セスキテルペンシンターゼ配列として識別され、他の１１個は、推定モノテルペンシンターゼとして識別された。コンティグは、ＢＬＡＳＴＸ分析により提供されるアライメントに基づいて、全長のテルペンシンターゼタンパク質をコードするオープンリーディングフレームについてスリーニングされた。ＲＮＡ配列をコードする２つの全長推定セスキテルペンシンターゼが識別され、それらの１つはコンティグ２７６９２であった。

実施例３：ナルドスタキスジャタマンシパチョロールシンターゼのクローニング（ＮｊＰＡＴ）
全長オープンリーディングフレームはＮ．ジャタマンシのｃＤＮＡにより増幅された。表１に示すフォワードプライマーおよびリバースプライマーが、プラスミドｐＣＤＦ－ＤＵＥＴ－１（Ｎｏｖａｇｅｎ ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）においてＨｉｓ－６タグのＣ末端に対して読み出しフレームが溶融されたように、全オープンリーディングフレームを増幅するように、設計および使用された。５つの異なるテルペンシンターゼＯＲＦの全部がクローニングされた。プライマー２７６９２－Ｆｗ（配列番号１）および２７６９２－Ｒｅ（配列番号２）を使用して、２つの異なる密接に関わるｃＤＮＡがクローニングされた。これら（ｐＴＳ１１－１）の１つは、上記のコンティグ２７６９２によりコードされるタンパク質に対して、７０個のアミノ酸を欠落しているタンパク質をコードした。他のクローン（ｐＴＳ１１－２）は、配列番号４のタンパク質をコードしたｃＤＮＡ配列（配列番号３）を含んでいた。

クローニングされた変異体は、ＴＳ挿入物を配列決定することにより分析された。異なる変異体が、ヒートショック形質転換によって、ケミカルコンピテント大腸菌ＢＬ２１－ＲＩＬ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）に導入され、１％のグルコース、５０μｇ／ｍｌのスペクチノマイシンおよび５０μｌ／ｍｌのクロラムフェニコールを用いてＬＢ－ａｇａｒ上で選択された。形質転換体が、１％のグルコース、５０μｇ／ｍｌのスペクチノマイシンおよび５０μｌ／ｍｌのクロラムフェニコールを有する５ｍｌＬＢ液体媒体に移され、３７℃および２５０ｒｐｍで一晩中増増殖された。

それらの培養物の２００マイクロリットルが、１００ｍＬの三角フラスコ内の適切な抗生物質を有する２０ｍＬの５ＬＢ媒体に移されて、Ａ６００が０．４～０．６になるまで、３７℃、２５０ｒｐｍで培養された。続いて、１ｍＭのＩＰＴＧが加えられ、培養物は、１８℃および２５０ｒｐｍで一晩銃培養された。次の日、細胞は、遠心分離（１０分、８０００ｘｇ）により採取され、媒体は除去され、細胞は、１ｍＬの再懸濁バッファ（５０ｍＭのトリスＨＣｌ、ｐＨ＝７．５、１．４ｍＭのβ－メルカプトエタノール、４℃）中に再懸濁された。細胞は、速度６．５のファストプレップ内で０．２ｇのジルコニウムサンドを用いて１０秒間を２回揺り動かすことにより破壊された。不溶性粒子は、続いて、遠心分離（１０分、１３，０００ｘｇ、４℃）により除去された。可溶性タンパク質は、酵素アッセイのために即座に使用された。

実施例４：インビトロ酵素アッセイ
酵素アッセイのために、ガラス管において混合物は、ＭＯＰＳＯバッファ（１５ｍＭのＭＯＰＳＯ（３－［Ｎ－モルホリノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸）ｐＨ＝７．０、１２．５％のグリセロール、１ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１％のｔｗｅｅｎ２０、１ｍＭのジチオトレイトール）、１００マイクロリットルの純化酵素溶液、および５μＬのファルネシル二リン酸またはゲラニル二リン酸（乾式蒸発されて、５０％エタノール中に溶解された１０ｍＭのＳｉｇｍａ ＦＰＰ）および２０μＬのオルトバナジン酸ナトリウム２５０ｍＭからなる。この混合物は、３０℃で２時間穏やかな攪拌により培養された。続いて、水相が２ｍＬの酢酸エチルにより抽出された。酢酸エチル相は、収集され、１２００ｘｇで遠心分離され、硫酸ナトリウム上で乾燥され、ＧＣ－ＭＳにより分析された。

ＧＣ－ＭＳ分析が、７９８０Ａ ＧＣシステム、５９７Ｃ ｉｎｅｒｔ ＭＳＤ検出装置（７０ｅＶ）、７６８３自動サンプラーおよびインジェクタ、ならびにＧｕａｒｄｉａｎプレカラム（５ｍ）を備えた３０ｍの長さｘ０．２５ｍｍの内径および０．２５μｍの固定相のＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｚｅｂｒｏｎ ＺＢ－５ｍｓカラムを含むＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのシステムで実行された。このシステムにおいて、試料の１マイクロリットルが注入された。注入チャンバは２５０℃であり、注入はスプリットレスであり、ＺＢ５カラムは４５℃に２分間維持され、その後、１分当たり１０℃の勾配が開始された（３００℃まで）。全イオンカウントのクロマトグラムでピークが検出された。化合物が、ライブラリ（ＮＩＳＴ８およびインハウス）に対するマススペクトルの比較と組み合わせて、それらの保持指数によりおよびそれらのマススペクトルにより同定された。

クローンＴＳ１１－２が、このインビトロアッセイにおいてパチョロールを産生し、したがって、パチョロールシンターゼをコードすることが認識され、ＮｊＰＡＴと命名された。緊密に関連するＴＳ１１－１は、インビトロアッセイにおいていずれのセスキテルペンも産生しなかった。

実施例５：溶解度タグを有するロドバクタースフェロイデスにおける発現のためのＮｊＰＡＴのクローニング。
プロモーターＳＰｐｐａの規則に基づいて異なる溶解度タグと組み合わされたＮｊＰＡＴ遺伝子の発現について、構築物ＳＰｐｐａ－ＭＢＰ、ＳＰｐｐａ－Ｆｈ８、ＳＰｐｐａ－ＳＵＭＯ、ＳＰｐｐａ－ＮｕｓＡ、ＳＰｐｐａ－ＲｓＴＲＸおよびＳＰｐｐａ－ＧＳＴ、ならびにＮｊＰＡＴ遺伝子は、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ ＵＳＡ Ｉｎｃ．，（ピスカタウェイ、ニュージャージー州、米国）により合成されたものである。両方のＮｊＰＡＴ遺伝子（配列番号５）および溶解度タグについてコードするすべての配列は、Ｒ．スフェロイデスにおける発現について最適化されるコドンであった。

プラスミドｐ－ｍ－ＳＰｐｐａ－ＭＢＰ－ＮｊＰＡＴ－ｍｐｍｉｉ ａｌｔ（図１）が、標準的なＩｎｆｕｓｉｏｎ（登録商標）プロトコルにしたがって得られた。簡単には、構築物ＳＰｐｐａ－ＭＢＰは、プライマーＰｐｐａ－Ｆｗ（配列番号６）およびＭＢＰ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖ（配列番号７）を使用して増幅された。ＮｊＰＡＴは、プライマーＭＢＰ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｆｗ（配列番号８）、ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖ（配列番号９）により増幅された。ベクターｐ－ｍ－ｍｐｍｉｉ ａｌｔは、制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＢａｍＨＩにより消化された。増幅産物および消化されたベクターは、次いで、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ製のＩｎＦｕｓｉｏｎ（登録商標）酵素混合物を使用してアセンブルされた。反応混合物は大腸菌Ｓ１７－１セルに移された。構築物ＳＰｐｐａ－ＭＢＰ－ＮｊＰＡＴのヌクレオチド配列は配列番号１０で与えられ、タンパク質配列は配列番号１１で表される。

プラスミドｐ－ｍ－ＳＰｐｐａ－Ｆｈ８－ＮｊＰＡＴ－ｍｐｍｉｉ ａｌｔ（図２）は、プラスミドｐ－ｍ－ＳＰｐｐａ－ＭＢＰ－ＮｊＰＡＴ－ｍｐｍｉｉ ａｌｔと類似する様式で得られ、構築物ＳＰｐｐａ－Ｆｈ８は、プライマーＰｐｐａ－Ｆｗ（配列番号６）およびＦｈ８＿ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖ（配列番号１２）を使用して増幅され、およびＮｊＰＡＴ遺伝子はプライマーＦｈ８＿ＮｊＰＡＴ＿Ｆｗ（配列番号１３）ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖ（配列番号９）により増幅された。さらなるクローニングプロセスは、プラスミドｐ－ｍ－ＳＰｐｐａ－ＭＢＰ－ＮｊＰＡＴ－ｍｐｍｉｉ ａｌｔと同じである。構築物ＳＰｐｐａ－Ｆｈ８－ＮｊＰＡＴのヌクレオチド配列は配列番号１４で与えられ、タンパク質配列は配列番号１５で表される。

同じクローニング手順が他の構築物についても続けられた。

構築物ＳＰｐｐａ－ＳＵＭＯは、プライマーＰｐｐａ－Ｆｗ（配列番号６）およびＳＵＭＯ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖ（配列番号１６）を使用して増幅され、ＮｊＰＡＴ遺伝子は、プライマーＳＵＭＯ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｆｗ（配列番号１７）ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖ（配列番号９）を用いて増幅された。構築物ＳＰｐｐａ－ＳＵＭＯ－ＮｊＰＡＴのヌクレオチド配列は配列番号１８で与えられ、タンパク質配列は配列番号１９で表される。最終のプラスミドｐ－ｍ－ＳＰｐｐａ－ＳＵＭＯ－ＮｊＰＡＴ－ｍｐｍｉｉ ａｌｔのマップは図３に示されている。

構築物ＳＰｐｐａ－ＮｕｓＡは、プライマーＰｐｐａ－Ｆｗ（配列番号６）およびＮｕｓＡ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖ（配列番号２０）を使用して増幅され、ＮｊＰＡＴ遺伝子は、プライマーＮｕｓＡ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｆｗ（配列番号２１）ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖ（配列番号９）を用いて増幅された。構築物ＳＰｐｐａ－ＮｕｓＡ－ＮｊＰＡＴのヌクレオチド配列は配列番号２２で与えられ、タンパク質配列は配列番号２３で表される。最終のプラスミドｐ－ｍ－ＳＰｐｐａ－ＮｕｓＡ－ＮｊＰＡＴ－ｍｐｍｉｉ ａｌｔのマップは図４に示されている。

構築物ＳＰｐｐａ－ＲｓＴＲＸは、プライマーＰｐｐａ－Ｆｗ（配列番号６）およびＲｓＴＲＸ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖ（配列番号２４）を使用して増幅され、ＮｊＰＡＴ遺伝子は、プライマーＲｓＴＲＸ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｆｗ（配列番号２５）ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖ（配列番号９）を用いて増幅された。構築物ＳＰｐｐａ－ＲｓＴＲＸ－ＮｊＰＡＴのヌクレオチド配列は配列番号２６で与えられ、タンパク質配列は配列番号２７で表される。最終のプラスミドｐ－ｍ－ＳＰｐｐａ－ＲｓＴＲＸ－ＮｊＰＡＴ－ｍｐｍｉｉ ａｌｔのマップは図５に示されている。

構築物ＳＰｐｐａ－ＧＳＴは、プライマーＰｐｐａ－Ｆｗ（配列番号６）およびＧＳＴ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖ（配列番号２８）を使用して増幅され、ＮｊＰＡＴ遺伝子は、プライマーＧＳＴ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｆｗ（配列番号２９）ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖ（配列番号９）を用いて増幅された。構築物ＳＰｐｐａ－ＧＳＴ－ＮｊＰＡＴのヌクレオチド配列は配列番号３０で与えられ、タンパク質配列は配列番号３１で表される。最終のプラスミドｐ－ｍ－ＳＰｐｐａ－ＧＳＴ－ＮｊＰＡＴ－ｍｐｍｉｉ ａｌｔのマップは図６に示されている。

結合によるＳ１７－１からＲ．スフェロイデスＲｓ２６５－９ｃへの移行が、標準的な手順（米国特許第ＵＳ９２６０７０９Ｂ２号）を使用して実行された。

実施例６：増殖条件振とうフラスコ実験。
種培養が、１００ｍｇ／Ｌのネオマイシンをおよびグリセロールストックのループを有する２０ｍｌのＲＳ１０２培地を用いるバッフルのない１００ｍｌの振とうフラスコ内で実行された。フラスコは、１１０ｒｐｍで５０ｍｍの軌道で振とうインキュベータ内で３０℃において７２時間培養された。

７２時間の最後に、培養物のＯＤ６００が、大きいフラスコに移行される培養物の正確な容積を計算するように評価された。

振とうフラスコ実験が、２つのボトムバッフルを用いて３００ｍｌの振とうフラスコ内で実行された。２０ｍｌのＲＳ１０２および１００ｍｇ／Ｌの最終的な濃度までネオマイシンが、２ｍｌの無菌のｎ－ドデカンと共に加えられた。接種材の容積が調節されて、２０ｍｌの培地においてＯＤ６００の最終の値０．０５を得た。

フラスコは、１１０ｒｐｍで５０ｍｍの軌道で、振とうインキュベータ内で３０℃に７２時間維持された。

実施例７：有機相でのイソプレノイド含有量の分析のための試料調整。
培養物が、４５００ｘｇで２０分遠心分離される、予め重量測定された５０ｍｌのＰＰ管内での接種７２時間後に収集された。ｎ－ドデカン層は、後のＧＣ分析のためにマイクロ遠心チューブに移行された。

ラウリン酸エチルの１０マイクロリットルが、８００μｌの単離されたドデカン溶液が加えられ、重量測定される１０ｍｌのガラスバイアル内に加えられた。続いて、８ｍｌのアセトンが、バイアルに加えられて、より正確なＧＣ分析のためにドデカンの濃度を希釈した。約１．５ｍｌのテルペン含有ドデカンを含むアセトン溶液がクロマトグラフィーバイアルに移行された。

実施例８：ガスクロマトグラフィー炎イオン化検出装置（ＧＣ－ＦＩＤ）
ガスクロマトグラフィーは、Ｒｅｓｔｅｋ ＲＴＸ－５Ｓｉｌ ＭＳキャピラリカラム（３０ｍｘ０．２５ｍｍ、０．５μｍ）を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ ＧＣ２０１０ Ｐｌｕｓにおいて実行された。インジェクタおよびＦＩＤ検出装置の温度は、それぞれ２８０℃および３００℃に設定された。カラムを通るガス流は４０ｍＬ／ｍｉｎに設定された。オーブンの初期温度は、１６０℃であり、２℃／ｍｉｎで１８０℃まで上げられ、５０℃／ｍｉｎで３００℃までさらに上げられ、３分間その温度に保持された。注入された試料の容積は１：５０の分割比において１μＬであり、窒素補給流量は３０ｍｌ／ｍｉｎであった。

実施例９：ＮｊＰＡＴにより産生されたテルペンのガスクロマトグラフィー定量タイムオブフライト（ＧＣ－ＱＴＯＦ）分析
Ｒ．スフェロイデス培養物からのドデカン抽出の原液は、ヘキサン内に１ｍｇ／ｍｌで調製され、次いで、メタノール内に２０μｇ／ｍｌに希釈された。

希釈物の２μｌがＴｅｎａｘ管に移され、２００ｍｌ／ｍｉｎのヘリウム流で２時間ドライパージされて、溶剤を除去した。Ｔａｎａｘ管は、２４０℃で５分間Ｍａｒｋｅｓ社製のサーマルデソーバを使用して、マルチベッドパッキンを備えたコールドトラップ（０℃）に脱着された。トラップされた材料は、ヘリウムの９ｍｌ／ｍｉｎの分流および１．２ｍｌ／ｍｉｎのカラム流で、４０℃／ｓｅｃで２６０℃まで加熱することにより注入された。注入された材料は、Ａｇｉｌｅｎｔ ７８９０Ｂ ＧＣにおいてＤＢ５ ＭＳカラム（Ａｇｉｌｅｎｔ、３０Ｍ、０．２５ｍｍ ｉｄ、１μｍ ｄｆ）上で分析された。

温度プログラムは以下のようであった。２分で４０℃に、次いで、１０℃／ｍｉｎの傾きで２８０℃に上げた。化合物は、５０～３５０ａｍｕのマスレンジでＡｇｉｌｅｎｔ ７２００ ＱＴＯＦ ＭＳを使用して検出された。

データ分析のために、Ｍａｓｓｈｕｎｔｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ、ｖｅｒｓｉｏｎ Ｂ．０７００）が使用された。ＮＩＳＴライブラリ（ＮＩＳＴバージョン２．２ ２０１４）と比較してデコンボリューションされたスペクトル

実施例１０：Ｒ．スフェロイデス株によるテルペン産生の分析
プラスミドｐ－ｍ－ＳＰｐｐａ－ＭＢＰ－ＮｊＰＡＴ－ｍｐｍｉｉ ａｌｔを宿すロドバクター株は、テルペン種、中でもパチョロール、ポゴストールおよび驚くべきことにエレモールの、最も高い産生を示した（図７）。パチョロールとエレモールとの間の比は６．９：１であり、パチョロールとポゴストールとの間の比は５．６：１であり、そして最後に、ポゴストールとエレモールとの間の比は１．３：１であった。Ｆｈ８タグのＮｊＰＡＴへの融合は、ファルネソール（ＦＰＰの脱リン酸化からもたらされる産生物）のみを産生し得る酵素を完全に非活性化した。溶解度タグＳＵＭＯを有するＮｊＰＡＴを発現する株を用いて得られる力価は、ＭＢＰ株を用いて得られるものの７４％であり、それは、ＮｕｓＡ－ＮｊＰＡＴ株からもたらされる７３％の力価にかなり類似するものである。より低い力価は、ＮｊＰＡＴがＧＳＴまたはＲｓＴＲＸと組み合わされるときに得られた（ＭＢＰ－ＮｊＰＡＴに比べてそれぞれ４３％および７％）。
本発明は、例えば以下の実施形態を包含する：
［実施形態１］配列番号４で示されるアミノ酸配列を含むパチョロールシンターゼ、またはその機能的相同体であって、前記相同体は、配列番号４と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むパチョロールシンターゼである、パチョロールシンターゼ、またはその機能的相同体。
［実施形態２］配列番号４との少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有する、実施形態１に記載のパチョロールシンターゼ。
［実施形態３］実施形態１または２に記載のパチョロールシンターゼをコードする核酸配列、またはその相補的配列を含む、核酸。
［実施形態４］前記核酸は、配列番号３もしくは配列番号５で示される核酸配列、または配列番号３もしくは配列番号５で示される配列と少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する核酸配列、またはそれらの配列のいずれかの相補的配列を含む、実施形態３に記載の核酸。
［実施形態５］実施形態３または４に記載の核酸を含む発現ベクター。
［実施形態６］それ自体が生物または多細胞生物の一部であってもよい宿主細胞であって、実施形態３または４に記載の異種核酸配列を含む発現ベクターを含む、宿主細胞。
［実施形態７］前記宿主細胞は、グラム陰性細菌の群、特に、ロドバクター、パラコッカスおよびエシェリキアの群から選択される細菌細胞である、実施形態６に記載の宿主細胞。
［実施形態８］前記宿主細胞は、アスペルギルス、ブラケスレア、ペニシリウム、ファフィア（キサントフィロマイセス）、ピキア、サッカロマイセス、およびヤロウイアの群から選択される真菌細胞である、実施形態６に記載の宿主細胞。
［実施形態９］トランスジェニック植物細胞を含むトランスジェニック植物または培養物であって、前記植物または培養物は、実施形態６に記載の宿主細胞を含み、前記宿主細胞は、タバコ属、ナス属、キクニガナ属、アキノノゲシ属、ハッカ属、クソニンジン属、塊茎形成植物、油料作物、液体培養植物、タバコＢＹ２細胞、ヒメツリガネゴケおよび樹木から選択されるトランスジェニック植物のものである、トランスジェニック植物または培養物。
［実施形態１０］トランスジェニックキノコ細胞を含むトランスジェニックキノコまたは培養物であって、前記キノコまたは培養物は実施形態６に記載の宿主細胞を含み、前記宿主細胞は、スエヒロタケ、アガリクスおよびヒラタケから選択される、トランスジェニックキノコまたは培養物。
［実施形態１１］パチョロールおよびエレモール、ならびに好ましくはポゴストールも調製する方法であって、実施形態１または２に記載のパチョロールシンターゼの存在下でファルネシル二リン酸をパチョロールおよびエレモール、ならびに好ましくはポゴストールにも変換することを含む、方法。
［実施形態１２］前記パチョロールおよびエレモール、ならびに好ましくはポゴストールも、前記パチョロールシンターゼを発現する、実施形態６、７もしくは８に記載の宿主細胞、実施形態９に記載の植物もしくは植物培養物、または実施形態１０に記載のキノコもしくはキノコ培養物において調製され、実施形態１１に記載のパチョロールおよびエレモール、ならびに好ましくはポゴストールも調製する方法。
［実施形態１３］前記パチョロールおよび／またはポゴストールおよび／またはエレモールを単離することをさらに含む、実施形態１１または１２に記載の方法。
［実施形態１４］ポゴストールのパチョロールに対する比が１：５より高い、実施形態１１～１３のいずれかに記載の方法。
［実施形態１５］エレモールのパチョロールに対する比が１：１０より高い、実施形態１１～１４のいずれかに記載の方法。
［実施形態１６］エレモールのポゴストールに対する比が１：３以上であり、１：２以上である、実施形態１１～１５のいずれかに記載の方法。

配列
配列番号１
２７６９２－ｆｗヌクレオチド配列
ａｔａｔｇａｇｃｔｃａＡＴＧＴＣＡＡＴＴＡＴＴＡＴＴＧＣＡＡＣＡＡＡＣＡＧＴＡＣＴＧＡＧＣＡＴＣＣ
配列番号２
２７６９２－ｒｅヌクレオチド配列
ａｔａｔｇｃｇｇｃｃｇｃＴＴＡＴＡＴＧＧＡＴＡＣＧＧＧＡＴＣＴＡＣＧＡＡＣＡＡＣＧＡＴＡＴＧＡＴＧＴＧ
配列番号３
ＮｊＰＡＴヌクレオチド配列
ＡＴＧＴＣＡＡＴＴＡＴＴＡＴＴＧＣＡＡＣＡＡＡＣＡＧＴＡＣＴＧＡＧＣＡＴＣＣＡＡＴＴＴＴＴＣＧＴＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＡＴＴＴＴＣＣＡＣＣＡＡＧＴＴＴＡＴＧＧＧＧＣＡＡＴＣＴＴＴＴＣＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＣＣＡＴＧＧＡＴＡＡＴＣＡＧＧＣＴＡＧＧＧＡＡＡＴＡＴＡＴＧＣＴＡＡＡＧＡＡＣＡＴＧＡＡＧＧＴＴＴＡＡＡＡＧＡＡＡＡＡＧＴＧＡＧＡＡＴＧＡＴＧＴＴＴＴＴＡＧＡＴＡＣＡＡＣＡＡＡＴＴＡＣＡＡＡＡＴＴＴＣＡＧＡＧＡＡＡＡＴＣＡＡＴＴＴＣＡＴＡＡＡＣＡＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＡＴＴＡＧＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＣＡＴＴＴＴＧＡＧＡＡＡＧＡＧＡＴＴＧＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＴＣＡＴＣＡＡＡＴＧＴＴＴＧＡＴＧＣＴＣＡＴＴＣＴＡＡＡＣＡＣＣＴＡＧＡＴＧＡＴＡＴＴＣＡＡＧＡＡＴＴＴＧＡＴＴＴＧＴＴＣＡＣＴＴＴＧＧＧＡＡＴＴＴＡＣＴＴＣＡＧＧＡＴＴＣＴＡＡＧＧＣＡＡＣＡＴＧＧＴＴＡＴＡＡＡＡＴＣＴＣＴＴＧＴＧＡＴＧＴＴＴＴＣＡＡＴＡＡＧＴＴＧＡＡＡＧＡＴＡＧＣＡＡＴＧＧＣＧＡＡＴＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＡＣＴＴＡＡＡＧＡＴＧＡＴＧＴＧＡＡＴＧＧＴＡＴＧＣＴＡＡＧＴＴＴＣＴＡＴＧＡＡＧＣＡＡＣＡＣＡＴＧＴＡＡＧＡＡＣＡＣＡＴＧＧＡＧＡＡＡＡＴＡＴＴＴＴＡＧＡＴＧＡＡＧＣＴＣＴＣＡＴＴＴＡＴＡＣＡＡＡＡＧＣＴＣＡＡＣＴＴＧＡＡＴＣＣＡＴＧＧＣＣＧＣＴＧＣＡＡＧＴＴＴＡＡＧＣＣＣＡＴＴＴＣＴＣＧＣＧＡＡＣＣＡＡＧＴＴＡＡＧＣＡＴＧＣＴＴＴＧＡＴＧＣＡＡＧＣＴＣＴＣＣＡＣＡＡＡＧＧＧＡＴＣＣＣＡＡＧＡＡＴＣＧＡＡＧＣＡＣＧＴＡＡＣＴＡＴＡＴＣＴＣＴＧＴＴＴＡＣＧＡＡＧＡＡＧＡＴＣＣＴＡＡＣＡＡＡＡＡＴＧＡＴＴＴＧＴＴＡＴＴＧＡＧＧＴＴＣＴＣＡＡＡＧＡＴＡＧＡＴＴＴＣＡＡＴＣＴＡＧＴＡＣＡＡＡＴＧＡＴＴＣＡＣＡＡＧＣＡＡＧＡＡＴＴＧＴＧＣＧＡＴＡＣＣＴＴＴＡＧｇＴＧＧＴＧＧＡＡＡＧＡＴＴＴＧＧＡＧＴＴＣＧＡＡＴＣＧＡＡＡＣＴＡＴＣＴＴＴＴＧＣＡａＧＧＡＡＴＡＧＡＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＣＣＴＡＣＴＴＡＴＧＧＡＣＴＣＴＴＡＧＣＧＣＧＴＡＣＴＡＣＧＡＡＣＣＡＡＡＡＴＡＣＴＣＴＴＣＣＧＣＴＣＧＧＡＴＴＡＴＡＴＴＡＧＴＣＡＡＡＣＴＡＡＴＧＧＴＴＡＴＡＡＴＡＴＣＴＧＴＴＡＣＧＧＡＴＧＡＣＡＣＡＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＡＴＧＧＴＡＣＡＴＴＡＧＡＴＧＡＡＣＴＴＣＡＡＣＴＴＴＴＴＡＣＡＧＡＴＧＣＡＡＴＡＣＡＡＡＧＧＴＴＧＧＡＴＡＴＧＡＧＴＴＣＴＡＴＣＡＡＴＣＡＡＣＴＴＣＣＡＧＡＴＴＡＣＡＴＧＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＡＴＡＡＡＧＣＴＣＴＣＣＴＡＧＡＴＣＴＴＴＴＴＧＡＣＧＡＡＡＴＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＴＴＡＴＣＧＡＡＧＣＡＴＧＡＡＡＣＴＧＡＴＣＡＴＴＣＴＴＡＣＣＧＣＧＴＴＧＣＴＴＡＴＧＣＧＡＡＡＴＡＴＧＴＧＴＡＴＡＡＡＧＡＧＡＴＣＧＴＴＡＧＧＴＧＣＴＡＣＧＡＴＡＴＧＧＡＧＴＡＣＡＡＡＴＧＧＴＴＣＡＡＣＡＡＡＡＡＴＴＡＣＧＴＧＣＣＧＧＣＡＴＴＴＧＡＡＧＡＡＴＡＴＡＴＧＣＡＧＡＡＡＧＣＧＴＴＡＧＴＣＡＣＡＴＣＡＧＧＴＡＡＣＣＧＴＴＴＧＣＴＣＡＴＡＡＣＧＴＴＴＴＣＣＴＴＴＣＴＧＧＧＡＡＴＧＧＡＣＧＡＡＧＴＣＧＣＡＡＣＴＡＴＴＣＡＡＧＣＧＴＴＣＧＡＧＴＧＧＧＴＡＡＡＡＡＧＴＡＡＴＧＣＣＡＡＡＡＴＧＡＴＡＧＴＣＴＣＴＴＣＣＡＡＴＡＡＡＧＴＡＴＴＡＣＧＡＣＴＴＡＴＴＧＡＴＧＡＣＡＴＡＡＴＧＡＧＴＣＡＣＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＧＧＡＣＡＴＧＴＴＧＣＡＡＣＡＧＧＧＡＴＴＧＡＡＴＧＣＴＴＴＧＴＡＡＡＡＧＡＡＣＡＴＧＧＡＣＴＡＡＣＴＡＧＧＧＡＡＧＡＧＧＴＴＡＴＣＧＴＴＧＡＡＴＴＴＣＡＴＡＡＧＡＧＧＡＴＴＧＡＴＧＡＴＧＣＴＴＧＧＡＡＧＧＡＴＡＴＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＴＴＴＡＴＡＡＣＧＣＣＡＡＡＴＡＡＴＴＴＡＣＣＧＡＴＴＧＡＧＡＴＡＣＴＴＡＣＧＣＧＴＧＴＴＣＴＡＡＡＣＣＴＴＡＣＡＡＧＡＡＴＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＴＴＴＡＣＡＡＧＴＡＴＧＡＴＧＡＣＧＧＧＴＡＴＡＣＴＣＡＴＣＣＧＧＡＧＡＡＡＧＣＧＴＴＧＡＡＡＧＡＴＣＡＣＡＴＣＡＴＡＴＣＧＴＴＧＴＴＣＧＴＡＧＡＴＣＣＣＧＴＡＴＣＣＡＴＡＴＡＡ
配列番号４
ＮｊＰＡＴアミノ酸配列
ＭＳＩＩＩＡＴＮＳＴＥＨＰＩＦＲＰＬＡＮＦＰＰＳＬＷＧＮＬＦＴＳＦＳＭＤＮＱＡＲＥＩＹＡＫＥＨＥＧＬＫＥＫＶＲＭＭＦＬＤＴＴＮＹＫＩＳＥＫＩＮＦＩＮＴＶＥＲＬＧＶＳＹＨＦＥＫＥＩＥＥＬＬＨＱＭＦＤＡＨＳＫＨＬＤＤＩＱＥＦＤＬＦＴＬＧＩＹＦＲＩＬＲＱＨＧＹＫＩＳＣＤＶＦＮＫＬＫＤＳＮＧＥＦＫＤＥＬＫＤＤＶＮＧＭＬＳＦＹＥＡＴＨＶＲＴＨＧＥＮＩＬＤＥＡＬＩＹＴＫＡＱＬＥＳＭＡＡＡＳＬＳＰＦＬＡＮＱＶＫＨＡＬＭＱＡＬＨＫＧＩＰＲＩＥＡＲＮＹＩＳＶＹＥＥＤＰＮＫＮＤＬＬＬＲＦＳＫＩＤＦＮＬＶＱＭＩＨＫＱＥＬＣＤＴＦＲＷＷＫＤＬＥＦＥＳＫＬＳＦＡＲＮＲＶＶＥＡＹＬＷＴＬＳＡＹＹＥＰＫＹＳＳＡＲＩＩＬＶＫＬＭＶＩＩＳＶＴＤＤＴＹＤＡＹＧＴＬＤＥＬＱＬＦＴＤＡＩＱＲＬＤＭＳＳＩＮＱＬＰＤＹＭＫＴＩＹＫＡＬＬＤＬＦＤＥＩＥＤＲＬＳＫＨＥＴＤＨＳＹＲＶＡＹＡＫＹＶＹＫＥＩＶＲＣＹＤＭＥＹＫＷＦＮＫＮＹＶＰＡＦＥＥＹＭＱＫＡＬＶＴＳＧＮＲＬＬＩＴＦＳＦＬＧＭＤＥＶＡＴＩＱＡＦＥＷＶＫＳＮＡＫＭＩＶＳＳＮＫＶＬＲＬＩＤＤＩＭＳＨＥＥＥＤＥＲＧＨＶＡＴＧＩＥＣＦＶＫＥＨＧＬＴＲＥＥＶＩＶＥＦＨＫＲＩＤＤＡＷＫＤＩＮＥＥＦＩＴＰＮＮＬＰＩＥＩＬＴＲＶＬＮＬＴＲＩＧＤＶＶＹＫＹＤＤＧＹＴＨＰＥＫＡＬＫＤＨＩＩＳＬＦＶＤＰＶＳＩ
配列番号５
ＮｊＰＡＴコドン最適化ヌクレオチド配列
ＡＴＧＴＣＧＡＴＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＡＣＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＣＡＴＣＣＣＡＴＣＴＴＣＣＧＣＣＣＧＣＴＣＧＣＣＡＡＣＴＴＣＣＣＧＣＣＧＴＣＧＣＴＣＴＧＧＧＧＣＡＡＣＣＴＧＴＴＣＡＣＣＴＣＧＴＴＣＡＧＣＡＴＧＧＡＣＡＡＣＣＡＧＧＣＧＣＧＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＧＣＣＡＡＧＧＡＧＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＴＣＡＡＧＧＡＧＡＡＧＧＴＣＣＧＧＡＴＧＡＴＧＴＴＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＣＧＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＴＣＴＣＧＧＡＧＡＡＧＡＴＣＡＡＣＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＧＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡＧＣＴＡＴＣＡＣＴＴＣＧＡＧＡＡＧＧＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＧＡＴＧＴＴＣＧＡＣＧＣＣＣＡＣＴＣＧＡＡＧＣＡＴＣＴＧＧＡＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＧＡＧＴＴＣＧＡＣＣＴＣＴＴＣＡＣＧＣＴＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＴＴＣＣＧＣＡＴＣＣＴＧＣＧＧＣＡＧＣＡＴＧＧＣＴＡＴＡＡＧＡＴＣＴＣＧＴＧＣＧＡＣＧＴＣＴＴＣＡＡＣＡＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＧＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＧＣＴＧＴＣＧＴＴＣＴＡＴＧＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡＴＧＴＧＣＧＣＡＣＣＣＡＴＧＧＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＣＴＣＧＡＣＧＡＧＧＣＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＣＧＡＡＧＧＣＣＣＡＧＣＴＧＧＡＧＴＣＧＡＴＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＴＣＡＧＣＣＣＧＴＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＡＣＧＣＧＣＴＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＴＡＡＧＧＧＣＡＴＣＣＣＧＣＧＣＡＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＡＡＣＴＡＣＡＴＣＴＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＧＡＡＣＡＡＧＡＡＣＧＡＣＣＴＧＣＴＣＣＴＧＣＧＣＴＴＣＡＧＣＡＡＧＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＴＧＡＴＣＣＡＣＡＡＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＴＧＣＧＡＣＡＣＣＴＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＴＣＧＡＧＴＣＧＡＡＧＣＴＧＴＣＧＴＴＣＧＣＣＣＧＣＡＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＣＴＣＴＧＧＡＣＧＣＴＧＴＣＧＧＣＧＴＡＣＴＡＴＧＡＧＣＣＧＡＡＧＴＡＴＴＣＧＡＧＣＧＣＣＣＧＣＡＴＣＡＴＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＡＴＧＧＴＣＡＴＣＡＴＣＴＣＧＧＴＧＡＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＧＴＡＣＧＡＣＧＣＣＴＡＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＡＣＧＡＧＣＴＣＣＡＧＣＴＧＴＴＣＡＣＧＧＡＣＧＣＧＡＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＣＧＡＣＡＴＧＴＣＧＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＡＧＣＴＧＣＣＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＡＴＡＡＧＧＣＧＣＴＣＣＴＧＧＡＣＣＴＣＴＴＣＧＡＣＧＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＧＣＣＴＧＴＣＧＡＡＧＣＡＣＧＡＧＡＣＧＧＡＣＣＡＴＡＧＣＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＣＧＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＴＣＴＡＴＡＡＧＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＧＣＴＧＣＴＡＣＧＡＣＡＴＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＧＴＴＣＡＡＣＡＡＧＡＡＣＴＡＣＧＴＣＣＣＣＧＣＣＴＴＣＧＡＧＧＡＧＴＡＴＡＴＧＣＡＧＡＡＧＧＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＴＣＧＧＧＣＡＡＣＣＧＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＡＣＧＴＴＣＡＧＣＴＴＣＣＴＧＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＡＧＧＴＣＧＣＧＡＣＣＡＴＣＣＡＧＧＣＣＴＴＣＧＡＧＴＧＧＧＴＧＡＡＧＴＣＧＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＴＧＡＴＣＧＴＧＴＣＧＴＣＧＡＡＣＡＡＧＧＴＧＣＴＣＣＧＣＣＴＧＡＴＣＧＡＣＧＡＣＡＴＣＡＴＧＴＣＧＣＡＣＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＡＴＧＴＧＧＣＣＡＣＧＧＧＣＡＴＣＧＡＧＴＧＣＴＴＣＧＴＧＡＡＧＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＴＧＡＣＣＣＧＣＧＡＧＧＡＡＧＴＧＡＴＣＧＴＣＧＡＧＴＴＣＣＡＴＡＡＧＣＧＧＡＴＣＧＡＣＧＡＣＧＣＧＴＧＧＡＡＧＧＡＣＡＴＣＡＡＣＧＡＧＧＡＧＴＴＣＡＴＣＡＣＣＣＣＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＣＣＧＡＴＣＧＡＧＡＴＣＣＴＧＡＣＣＣＧＣＧＴＧＣＴＣＡＡＣＣＴＧＡＣＣＣＧＧＡＴＣＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＣＴＡＣＡＡＧＴＡＴＧＡＣＧＡＣＧＧＣＴＡＣＡＣＧＣＡＣＣＣＣＧＡＧＡＡＧＧＣＣＣＴＣＡＡＧＧＡＣＣＡＴＡＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＴＴＣＧＴＧＧＡＣＣＣＣＧＴＣＡＧＣＡＴＣＴＧＡ
配列番号６
Ｐｐｐａ＿Ｆｗヌクレオチド配列
ａｃｔｇｇｃｃｔｃａｇａａｔｔｃＡＡＡｔｔｔａｔｔｔｇｃｔｔｔｇｔｇａｇｃｇｇａｔａａｃ
配列番号７
ＭＢＰ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖヌクレオチド配列
ＧＧＣＧＡＴＧＡＴＧＡＴＣＧＡＣＡＴＧＡＴＣＴＴＧ
配列番号８
ＭＢＰ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｆｗヌクレオチド配列
ＣＡＡＧＡＴＣＡＴＧＴＣＧＡＴＣＡＴＣＡＴＣＧＣ
配列番号９
ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖヌクレオチド配列
ｔｔｔａｔｇａｔｔｔｇｇａｔｃＣＴＣＡＧＡＴＧＣＴＧＡＣＧＧＧＧＴ
配列番号１０
ＳＰｐｐａ－ＭＢＰ－ＮｊＰＡＴヌクレオチド配列
ＡＡＡＴＴＴＡＴＴＴＧＣＴＴＴＧＴＧＡＧＣＧＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＡＴＴＡＧＡＴＴＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＧＣＡＧＧＡＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＡＧＡＴＧＡＣＡＧＧＡＧＧＧＡＣＡＴＡＴＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＡＧＧＣＡＡＧＣＴＣＧＴＧＡＴＣＴＧＧＡＴＣＡＡＣＧＧＣＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＡＣＡＡＣＧＧＣＣＴＧＧＣＣＧＡＧＧＴＧＧＧＣＡＡＧＡＡＧＴＴＣＧＡＧＡＡＧＧＡＣＡＣＣＧＧＣＡＴＣＡＡＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＧＡＧＣＡＣＣＣＧＧＡＣＡＡＧＣＴＣＧＡＧＧＡＧＡＡＧＴＴＣＣＣＧＣＡＧＧＴＧＧＣＧＧＣＣＡＣＧＧＧＣＧＡＣＧＧＣＣＣＧＧＡＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＴＧＧＧＣＣＣＡＴＧＡＣＣＧＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＴＡＣＧＣＣＣＡＧＴＣＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＧＣＣＧＡＧＡＴＣＡＣＣＣＣＧＧＡＣＡＡＧＧＣＧＴＴＣＣＡＧＧＡＣＡＡＧＣＴＣＴＡＴＣＣＣＴＴＣＡＣＧＴＧＧＧＡＣＧＣＣＧＴＧＣＧＣＴＡＣＡＡＣＧＧＣＡＡＧＣＴＧＡＴＣＧＣＧＴＡＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＣＴＧＴＣＧＣＴＣＡＴＣＴＡＴＡＡＣＡＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＣＣＣＧＡＡＣＣＣＧＣＣＣＡＡＧＡＣＣＴＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＣＣＣＣＧＣＣＣＴＣＧＡＣＡＡＧＧＡＧＣＴＧＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＴＣＧＧＣＧＣＴＣＡＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＣＣＧＴＡＣＴＴＣＡＣＣＴＧＧＣＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＧＧＣＣＧＡＣＧＧＣＧＧＣＴＡＣＧＣＧＴＴＣＡＡＧＴＡＴＧＡＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＴＡＴＧＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＧＴＧＧＧＣＧＴＧＧＡＣＡＡＣＧＣＧＧＧＣＧＣＣＡＡＧＧＣＣＧＧＣＣＴＧＡＣＣＴＴＣＣＴＣＧＴＧＧＡＣＣＴＧＡＴＣＡＡＧＡＡＣＡＡＧＣＡＣＡＴＧＡＡＣＧＣＣＧＡＣＡＣＧＧＡＣＴＡＣＴＣＧＡＴＣＧＣＧＧＡＧＧＣＣＧＣＧＴＴＣＡＡＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＣＧＡＴＣＡＡＣＧＧＣＣＣＧＴＧＧＧＣＧＴＧＧＴＣＧＡＡＣＡＴＣＧＡＣＡＣＣＴＣＧＡＡＧＧＴＧＡＡＣＴＡＴＧＧＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＣＴＣＧＡＡＧＣＣＣＴＴＣＧＴＧＧＧＣＧＴＧＣＴＧＴＣＧＧＣＧＧＧＣＡＴＣＡＡＣＧＣＣＧＣＧＴＣＧＣＣＧＡＡＣＡＡＧＧＡＧＣＴＣＧＣＧＡＡＧＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＡＧＡＡＣＴＡＣＣＴＧＣＴＣＡＣＣＧＡＣＧＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＧＣＣＧＴＧＡＡＣＡＡＧＧＡＣＡＡＧＣＣＣＣＴＧＧＧＣＧＣＣＧＴＧＧＣＣＣＴＧＡＡＧＴＣＧＴＡＴＧＡＧＧＡＡＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＣＣＣＧＣＧＣＡＴＣＧＣＧＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＧＡＡＣＧＣＧＣＡＧＡＡＧＧＧＣＧＡＧＡＴＣＡＴＧＣＣＧＡＡＣＡＴＣＣＣＣＣＡＧＡＴＧＴＣＧＧＣＣＴＴＣＴＧＧＴＡＴＧＣＧＧＴＧＣＧＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＡＴＣＡＡＣＧＣＧＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＣＣＡＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＣＡＡＧＧＡＣＧＣＣＣＡＧＡＣＣＧＧＣＧＡＣＧＡＣＧＡＣＧＡＣＡＡＧＡＴＣＡＴＧＴＣＧＡＴＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＡＣＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＣＡＴＣＣＣＡＴＣＴＴＣＣＧＣＣＣＧＣＴＣＧＣＣＡＡＣＴＴＣＣＣＧＣＣＧＴＣＧＣＴＣＴＧＧＧＧＣＡＡＣＣＴＧＴＴＣＡＣＣＴＣＧＴＴＣＡＧＣＡＴＧＧＡＣＡＡＣＣＡＧＧＣＧＣＧＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＧＣＣＡＡＧＧＡＧＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＴＣＡＡＧＧＡＧＡＡＧＧＴＣＣＧＧＡＴＧＡＴＧＴＴＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＣＧＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＴＣＴＣＧＧＡＧＡＡＧＡＴＣＡＡＣＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＧＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡＧＣＴＡＴＣＡＣＴＴＣＧＡＧＡＡＧＧＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＧＡＴＧＴＴＣＧＡＣＧＣＣＣＡＣＴＣＧＡＡＧＣＡＴＣＴＧＧＡＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＧＡＧＴＴＣＧＡＣＣＴＣＴＴＣＡＣＧＣＴＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＴＴＣＣＧＣＡＴＣＣＴＧＣＧＧＣＡＧＣＡＴＧＧＣＴＡＴＡＡＧＡＴＣＴＣＧＴＧＣＧＡＣＧＴＣＴＴＣＡＡＣＡＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＧＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＧＣＴＧＴＣＧＴＴＣＴＡＴＧＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡＴＧＴＧＣＧＣＡＣＣＣＡＴＧＧＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＣＴＣＧＡＣＧＡＧＧＣＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＣＧＡＡＧＧＣＣＣＡＧＣＴＧＧＡＧＴＣＧＡＴＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＴＣＡＧＣＣＣＧＴＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＡＣＧＣＧＣＴＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＴＡＡＧＧＧＣＡＴＣＣＣＧＣＧＣＡＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＡＡＣＴＡＣＡＴＣＴＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＧＡＡＣＡＡＧＡＡＣＧＡＣＣＴＧＣＴＣＣＴＧＣＧＣＴＴＣＡＧＣＡＡＧＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＴＧＡＴＣＣＡＣＡＡＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＴＧＣＧＡＣＡＣＣＴＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＴＣＧＡＧＴＣＧＡＡＧＣＴＧＴＣＧＴＴＣＧＣＣＣＧＣＡＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＣＴＣＴＧＧＡＣＧＣＴＧＴＣＧＧＣＧＴＡＣＴＡＴＧＡＧＣＣＧＡＡＧＴＡＴＴＣＧＡＧＣＧＣＣＣＧＣＡＴＣＡＴＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＡＴＧＧＴＣＡＴＣＡＴＣＴＣＧＧＴＧＡＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＧＴＡＣＧＡＣＧＣＣＴＡＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＡＣＧＡＧＣＴＣＣＡＧＣＴＧＴＴＣＡＣＧＧＡＣＧＣＧＡＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＣＧＡＣＡＴＧＴＣＧＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＡＧＣＴＧＣＣＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＡＴＡＡＧＧＣＧＣＴＣＣＴＧＧＡＣＣＴＣＴＴＣＧＡＣＧＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＧＣＣＴＧＴＣＧＡＡＧＣＡＣＧＡＧＡＣＧＧＡＣＣＡＴＡＧＣＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＣＧＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＴＣＴＡＴＡＡＧＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＧＣＴＧＣＴＡＣＧＡＣＡＴＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＧＴＴＣＡＡＣＡＡＧＡＡＣＴＡＣＧＴＣＣＣＣＧＣＣＴＴＣＧＡＧＧＡＧＴＡＴＡＴＧＣＡＧＡＡＧＧＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＴＣＧＧＧＣＡＡＣＣＧＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＡＣＧＴＴＣＡＧＣＴＴＣＣＴＧＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＡＧＧＴＣＧＣＧＡＣＣＡＴＣＣＡＧＧＣＣＴＴＣＧＡＧＴＧＧＧＴＧＡＡＧＴＣＧＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＴＧＡＴＣＧＴＧＴＣＧＴＣＧＡＡＣＡＡＧＧＴＧＣＴＣＣＧＣＣＴＧＡＴＣＧＡＣＧＡＣＡＴＣＡＴＧＴＣＧＣＡＣＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＡＴＧＴＧＧＣＣＡＣＧＧＧＣＡＴＣＧＡＧＴＧＣＴＴＣＧＴＧＡＡＧＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＴＧＡＣＣＣＧＣＧＡＧＧＡＡＧＴＧＡＴＣＧＴＣＧＡＧＴＴＣＣＡＴＡＡＧＣＧＧＡＴＣＧＡＣＧＡＣＧＣＧＴＧＧＡＡＧＧＡＣＡＴＣＡＡＣＧＡＧＧＡＧＴＴＣＡＴＣＡＣＣＣＣＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＣＣＧＡＴＣＧＡＧＡＴＣＣＴＧＡＣＣＣＧＣＧＴＧＣＴＣＡＡＣＣＴＧＡＣＣＣＧＧＡＴＣＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＣＴＡＣＡＡＧＴＡＴＧＡＣＧＡＣＧＧＣＴＡＣＡＣＧＣＡＣＣＣＣＧＡＧＡＡＧＧＣＣＣＴＣＡＡＧＧＡＣＣＡＴＡＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＴＴＣＧＴＧＧＡＣＣＣＣＧＴＣＡＧＣＡＴＣＴＧＡ
イタリック体の配列はＳＰｐｐａプロモーターであり、アンダーライン付きシーケンスはコボン最適化ＭＢＰであり、通常フォントの配列はコボン最適化ＮｊＰＡＴである。
配列番号１１
ＭＢＰ－ＮｊＰＡＴアミノ酸配列
ＭＫＩＥＥＧＫＬＶＩＷＩＮＧＤＫＧＹＮＧＬＡＥＶＧＫＫＦＥＫＤＴＧＩＫＶＴＶＥＨＰＤＫＬＥＥＫＦＰＱＶＡＡＴＧＤＧＰＤＩＩＦＷＡＨＤＲＦＧＧＹＡＱＳＧＬＬＡＥＩＴＰＤＫＡＦＱＤＫＬＹＰＦＴＷＤＡＶＲＹＮＧＫＬＩＡＹＰＩＡＶＥＡＬＳＬＩＹＮＫＤＬＬＰＮＰＰＫＴＷＥＥＩＰＡＬＤＫＥＬＫＡＫＧＫＳＡＬＭＦＮＬＱＥＰＹＦＴＷＰＬＩＡＡＤＧＧＹＡＦＫＹＥＮＧＫＹＤＩＫＤＶＧＶＤＮＡＧＡＫＡＧＬＴＦＬＶＤＬＩＫＮＫＨＭＮＡＤＴＤＹＳＩＡＥＡＡＦＮＫＧＥＴＡＭＴＩＮＧＰＷＡＷＳＮＩＤＴＳＫＶＮＹＧＶＴＶＬＰＴＦＫＧＱＰＳＫＰＦＶＧＶＬＳＡＧＩＮＡＡＳＰＮＫＥＬＡＫＥＦＬＥＮＹＬＬＴＤＥＧＬＥＡＶＮＫＤＫＰＬＧＡＶＡＬＫＳＹＥＥＥＬＶＫＤＰＲＩＡＡＴＭＥＮＡＱＫＧＥＩＭＰＮＩＰＱＭＳＡＦＷＹＡＶＲＴＡＶＩＮＡＡＳＧＲＱＴＶＤＥＡＬＫＤＡＱＴＧＤＤＤＤＫＩＭＳＩＩＩＡＴＮＳＴＥＨＰＩＦＲＰＬＡＮＦＰＰＳＬＷＧＮＬＦＴＳＦＳＭＤＮＱＡＲＥＩＹＡＫＥＨＥＧＬＫＥＫＶＲＭＭＦＬＤＴＴＮＹＫＩＳＥＫＩＮＦＩＮＴＶＥＲＬＧＶＳＹＨＦＥＫＥＩＥＥＬＬＨＱＭＦＤＡＨＳＫＨＬＤＤＩＱＥＦＤＬＦＴＬＧＩＹＦＲＩＬＲＱＨＧＹＫＩＳＣＤＶＦＮＫＬＫＤＳＮＧＥＦＫＤＥＬＫＤＤＶＮＧＭＬＳＦＹＥＡＴＨＶＲＴＨＧＥＮＩＬＤＥＡＬＩＹＴＫＡＱＬＥＳＭＡＡＡＳＬＳＰＦＬＡＮＱＶＫＨＡＬＭＱＡＬＨＫＧＩＰＲＩＥＡＲＮＹＩＳＶＹＥＥＤＰＮＫＮＤＬＬＬＲＦＳＫＩＤＦＮＬＶＱＭＩＨＫＱＥＬＣＤＴＦＲＷＷＫＤＬＥＦＥＳＫＬＳＦＡＲＮＲＶＶＥＡＹＬＷＴＬＳＡＹＹＥＰＫＹＳＳＡＲＩＩＬＶＫＬＭＶＩＩＳＶＴＤＤＴＹＤＡＹＧＴＬＤＥＬＱＬＦＴＤＡＩＱＲＬＤＭＳＳＩＮＱＬＰＤＹＭＫＴＩＹＫＡＬＬＤＬＦＤＥＩＥＤＲＬＳＫＨＥＴＤＨＳＹＲＶＡＹＡＫＹＶＹＫＥＩＶＲＣＹＤＭＥＹＫＷＦＮＫＮＹＶＰＡＦＥＥＹＭＱＫＡＬＶＴＳＧＮＲＬＬＩＴＦＳＦＬＧＭＤＥＶＡＴＩＱＡＦＥＷＶＫＳＮＡＫＭＩＶＳＳＮＫＶＬＲＬＩＤＤＩＭＳＨＥＥＥＤＥＲＧＨＶＡＴＧＩＥＣＦＶＫＥＨＧＬＴＲＥＥＶＩＶＥＦＨＫＲＩＤＤＡＷＫＤＩＮＥＥＦＩＴＰＮＮＬＰＩＥＩＬＴＲＶＬＮＬＴＲＩＧＤＶＶＹＫＹＤＤＧＹＴＨＰＥＫＡＬＫＤＨＩＩＳＬＦＶＤＰＶＳＩ
アンダーライン付き配列はＭＢＰタグである。
配列番号１２
Ｆｈ８＿ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖヌクレオチド配列
ＧＡＴＣＧＡＣＡＴＣＧＡＣＧＡＧＡＧＧＡＴＣＧＡＧ
配列番号１３
Ｆｈ８＿ＮｊＰＡＴ＿Ｆｗヌクレオチド配列
ＣＴＣＧＴＣＧＡＴＧＴＣＧＡＴＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣ
配列番号１４
ＳＰｐｐａ－Ｆｈ８－ＮｊＰＡＴヌクレオチド配列
ＡＡＡＴＴＴＡＴＴＴＧＣＴＴＴＧＴＧＡＧＣＧＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＡＴＴＡＧＡＴＴＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＧＣＡＧＧＡＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＡＧＡＴＧＡＣＡＧＧＡＧＧＧＡＣＡＴＡＴＧＣＣＣＴＣＧＧＴＧＣＡＡＧＡＧＧＴＧＧＡＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＣＡＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＣＧＧＡＡＣＧＧＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＡＡＧＧＣＧＴＴＣＧＣＣＧＡＣＧＡＣＴＣＧＡＡＧＴＧＣＣＣＧＣＴＧＧＡＣＴＣＧＡＡＣＡＡＧＡＴＣＡＡＧＧＣＧＴＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＣＡＴＧＡＣＡＡＧＡＡＣＡＡＧＧＡＣＧＧＣＡＡＧＣＴＧＧＡＣＣＴＣＡＡＧＧＡＧＣＴＧＧＴＣＴＣＧＡＴＣＣＴＣＴＣＧＴＣＧＡＴＧＴＣＧＡＴＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＡＣＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＣＡＴＣＣＣＡＴＣＴＴＣＣＧＣＣＣＧＣＴＣＧＣＣＡＡＣＴＴＣＣＣＧＣＣＧＴＣＧＣＴＣＴＧＧＧＧＣＡＡＣＣＴＧＴＴＣＡＣＣＴＣＧＴＴＣＡＧＣＡＴＧＧＡＣＡＡＣＣＡＧＧＣＧＣＧＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＧＣＣＡＡＧＧＡＧＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＴＣＡＡＧＧＡＧＡＡＧＧＴＣＣＧＧＡＴＧＡＴＧＴＴＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＣＧＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＴＣＴＣＧＧＡＧＡＡＧＡＴＣＡＡＣＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＧＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡＧＣＴＡＴＣＡＣＴＴＣＧＡＧＡＡＧＧＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＧＡＴＧＴＴＣＧＡＣＧＣＣＣＡＣＴＣＧＡＡＧＣＡＴＣＴＧＧＡＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＧＡＧＴＴＣＧＡＣＣＴＣＴＴＣＡＣＧＣＴＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＴＴＣＣＧＣＡＴＣＣＴＧＣＧＧＣＡＧＣＡＴＧＧＣＴＡＴＡＡＧＡＴＣＴＣＧＴＧＣＧＡＣＧＴＣＴＴＣＡＡＣＡＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＧＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＧＣＴＧＴＣＧＴＴＣＴＡＴＧＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡＴＧＴＧＣＧＣＡＣＣＣＡＴＧＧＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＣＴＣＧＡＣＧＡＧＧＣＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＣＧＡＡＧＧＣＣＣＡＧＣＴＧＧＡＧＴＣＧＡＴＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＴＣＡＧＣＣＣＧＴＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＡＣＧＣＧＣＴＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＴＡＡＧＧＧＣＡＴＣＣＣＧＣＧＣＡＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＡＡＣＴＡＣＡＴＣＴＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＧＡＡＣＡＡＧＡＡＣＧＡＣＣＴＧＣＴＣＣＴＧＣＧＣＴＴＣＡＧＣＡＡＧＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＴＧＡＴＣＣＡＣＡＡＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＴＧＣＧＡＣＡＣＣＴＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＴＣＧＡＧＴＣＧＡＡＧＣＴＧＴＣＧＴＴＣＧＣＣＣＧＣＡＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＣＴＣＴＧＧＡＣＧＣＴＧＴＣＧＧＣＧＴＡＣＴＡＴＧＡＧＣＣＧＡＡＧＴＡＴＴＣＧＡＧＣＧＣＣＣＧＣＡＴＣＡＴＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＡＴＧＧＴＣＡＴＣＡＴＣＴＣＧＧＴＧＡＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＧＴＡＣＧＡＣＧＣＣＴＡＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＡＣＧＡＧＣＴＣＣＡＧＣＴＧＴＴＣＡＣＧＧＡＣＧＣＧＡＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＣＧＡＣＡＴＧＴＣＧＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＡＧＣＴＧＣＣＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＡＴＡＡＧＧＣＧＣＴＣＣＴＧＧＡＣＣＴＣＴＴＣＧＡＣＧＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＧＣＣＴＧＴＣＧＡＡＧＣＡＣＧＡＧＡＣＧＧＡＣＣＡＴＡＧＣＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＣＧＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＴＣＴＡＴＡＡＧＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＧＣＴＧＣＴＡＣＧＡＣＡＴＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＧＴＴＣＡＡＣＡＡＧＡＡＣＴＡＣＧＴＣＣＣＣＧＣＣＴＴＣＧＡＧＧＡＧＴＡＴＡＴＧＣＡＧＡＡＧＧＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＴＣＧＧＧＣＡＡＣＣＧＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＡＣＧＴＴＣＡＧＣＴＴＣＣＴＧＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＡＧＧＴＣＧＣＧＡＣＣＡＴＣＣＡＧＧＣＣＴＴＣＧＡＧＴＧＧＧＴＧＡＡＧＴＣＧＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＴＧＡＴＣＧＴＧＴＣＧＴＣＧＡＡＣＡＡＧＧＴＧＣＴＣＣＧＣＣＴＧＡＴＣＧＡＣＧＡＣＡＴＣＡＴＧＴＣＧＣＡＣＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＡＴＧＴＧＧＣＣＡＣＧＧＧＣＡＴＣＧＡＧＴＧＣＴＴＣＧＴＧＡＡＧＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＴＧＡＣＣＣＧＣＧＡＧＧＡＡＧＴＧＡＴＣＧＴＣＧＡＧＴＴＣＣＡＴＡＡＧＣＧＧＡＴＣＧＡＣＧＡＣＧＣＧＴＧＧＡＡＧＧＡＣＡＴＣＡＡＣＧＡＧＧＡＧＴＴＣＡＴＣＡＣＣＣＣＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＣＣＧＡＴＣＧＡＧＡＴＣＣＴＧＡＣＣＣＧＣＧＴＧＣＴＣＡＡＣＣＴＧＡＣＣＣＧＧＡＴＣＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＣＴＡＣＡＡＧＴＡＴＧＡＣＧＡＣＧＧＣＴＡＣＡＣＧＣＡＣＣＣＣＧＡＧＡＡＧＧＣＣＣＴＣＡＡＧＧＡＣＣＡＴＡＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＴＴＣＧＴＧＧＡＣＣＣＣＧＴＣＡＧＣＡＴＣＴＧＡ
イタリック体の配列はＳＰｐｐａプロモーターであり、アンダーライン付きシーケンスはコボン最適化ｆｈ８であり、通常フォントの配列はコボン最適化ＮｊＰＡＴである。
配列番号１５
Ｆｈ８－ＮｊＰＡＴアミノ酸配列
ＭＰＳＶＱＥＶＥＫＬＬＨＶＬＤＲＮＧＤＧＫＶＳＡＥＥＬＫＡＦＡＤＤＳＫＣＰＬＤＳＮＫＩＫＡＦＩＫＥＨＤＫＮＫＤＧＫＬＤＬＫＥＬＶＳＩＬＳＳＭＳＩＩＩＡＴＮＳＴＥＨＰＩＦＲＰＬＡＮＦＰＰＳＬＷＧＮＬＦＴＳＦＳＭＤＮＱＡＲＥＩＹＡＫＥＨＥＧＬＫＥＫＶＲＭＭＦＬＤＴＴＮＹＫＩＳＥＫＩＮＦＩＮＴＶＥＲＬＧＶＳＹＨＦＥＫＥＩＥＥＬＬＨＱＭＦＤＡＨＳＫＨＬＤＤＩＱＥＦＤＬＦＴＬＧＩＹＦＲＩＬＲＱＨＧＹＫＩＳＣＤＶＦＮＫＬＫＤＳＮＧＥＦＫＤＥＬＫＤＤＶＮＧＭＬＳＦＹＥＡＴＨＶＲＴＨＧＥＮＩＬＤＥＡＬＩＹＴＫＡＱＬＥＳＭＡＡＡＳＬＳＰＦＬＡＮＱＶＫＨＡＬＭＱＡＬＨＫＧＩＰＲＩＥＡＲＮＹＩＳＶＹＥＥＤＰＮＫＮＤＬＬＬＲＦＳＫＩＤＦＮＬＶＱＭＩＨＫＱＥＬＣＤＴＦＲＷＷＫＤＬＥＦＥＳＫＬＳＦＡＲＮＲＶＶＥＡＹＬＷＴＬＳＡＹＹＥＰＫＹＳＳＡＲＩＩＬＶＫＬＭＶＩＩＳＶＴＤＤＴＹＤＡＹＧＴＬＤＥＬＱＬＦＴＤＡＩＱＲＬＤＭＳＳＩＮＱＬＰＤＹＭＫＴＩＹＫＡＬＬＤＬＦＤＥＩＥＤＲＬＳＫＨＥＴＤＨＳＹＲＶＡＹＡＫＹＶＹＫＥＩＶＲＣＹＤＭＥＹＫＷＦＮＫＮＹＶＰＡＦＥＥＹＭＱＫＡＬＶＴＳＧＮＲＬＬＩＴＦＳＦＬＧＭＤＥＶＡＴＩＱＡＦＥＷＶＫＳＮＡＫＭＩＶＳＳＮＫＶＬＲＬＩＤＤＩＭＳＨＥＥＥＤＥＲＧＨＶＡＴＧＩＥＣＦＶＫＥＨＧＬＴＲＥＥＶＩＶＥＦＨＫＲＩＤＤＡＷＫＤＩＮＥＥＦＩＴＰＮＮＬＰＩＥＩＬＴＲＶＬＮＬＴＲＩＧＤＶＶＹＫＹＤＤＧＹＴＨＰＥＫＡＬＫＤＨＩＩＳＬＦＶＤＰＶＳＩ
アンダーライン付き配列はＦｈ８Ａタグである。
配列番号１６
ＳＵＭＯ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖヌクレオチド配列
ＧＡＴＣＧＡＣＡＴＧＣＣＧＡＴＣＴＧＣＴＣＧＣＧ
配列番号１７
ＳＵＭＯ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｆｗヌクレオチド配列
ＧＡＴＣＧＧＣＡＴＧＴＣＧＡＴＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣ
配列番号１８
ＳＰｐｐａ－ＳＵＭＯ－ＮｊＰＡＴヌクレオチド配列
ＡＡＡＴＴＴＡＴＴＴＧＣＴＴＴＧＴＧＡＧＣＧＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＡＴＴＡＧＡＴＴＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＧＣＡＧＧＡＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＡＧＡＴＧＡＣＡＧＧＡＧＧＧＡＣＡＴＡＴＧＴＣＧＧＡＣＡＧＣＧＡＧＧＴＧＡＡＣＣＡＧＧＡＡＧＣＣＡＡＧＣＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＣＧＧＡＧＡＣＣＣＡＣＡＴＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＧＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＣＧＧＡＧＡＴＣＴＴＣＴＴＣＡＡＧＡＴＣＡＡＧＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＣＣＴＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＡＴＧＧＡＧＧＣＣＴＴＣＧＣＣＡＡＧＣＧＣＣＡＧＧＧＣＡＡＧＧＡＧＡＴＧＧＡＣＴＣＧＣＴＧＣＧＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＧＡＣＧＧＣＡＴＣＣＧＣＡＴＣＣＡＧＧＣＧＧＡＣＣＡＧＡＣＧＣＣＧＧＡＧＧＡＣＣＴＣＧＡＣＡＴＧＧＡＧＧＡＣＡＡＣＧＡＣＡＴＣＡＴＣＧＡＧＧＣＧＣＡＴＣＧＣＧＡＧＣＡＧＡＴＣＧＧＣＡＴＧＴＣＧＡＴＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＡＣＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＣＡＴＣＣＣＡＴＣＴＴＣＣＧＣＣＣＧＣＴＣＧＣＣＡＡＣＴＴＣＣＣＧＣＣＧＴＣＧＣＴＣＴＧＧＧＧＣＡＡＣＣＴＧＴＴＣＡＣＣＴＣＧＴＴＣＡＧＣＡＴＧＧＡＣＡＡＣＣＡＧＧＣＧＣＧＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＧＣＣＡＡＧＧＡＧＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＴＣＡＡＧＧＡＧＡＡＧＧＴＣＣＧＧＡＴＧＡＴＧＴＴＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＣＧＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＴＣＴＣＧＧＡＧＡＡＧＡＴＣＡＡＣＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＧＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡＧＣＴＡＴＣＡＣＴＴＣＧＡＧＡＡＧＧＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＧＡＴＧＴＴＣＧＡＣＧＣＣＣＡＣＴＣＧＡＡＧＣＡＴＣＴＧＧＡＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＧＡＧＴＴＣＧＡＣＣＴＣＴＴＣＡＣＧＣＴＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＴＴＣＣＧＣＡＴＣＣＴＧＣＧＧＣＡＧＣＡＴＧＧＣＴＡＴＡＡＧＡＴＣＴＣＧＴＧＣＧＡＣＧＴＣＴＴＣＡＡＣＡＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＧＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＧＣＴＧＴＣＧＴＴＣＴＡＴＧＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡＴＧＴＧＣＧＣＡＣＣＣＡＴＧＧＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＣＴＣＧＡＣＧＡＧＧＣＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＣＧＡＡＧＧＣＣＣＡＧＣＴＧＧＡＧＴＣＧＡＴＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＴＣＡＧＣＣＣＧＴＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＡＣＧＣＧＣＴＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＴＡＡＧＧＧＣＡＴＣＣＣＧＣＧＣＡＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＡＡＣＴＡＣＡＴＣＴＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＧＡＡＣＡＡＧＡＡＣＧＡＣＣＴＧＣＴＣＣＴＧＣＧＣＴＴＣＡＧＣＡＡＧＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＴＧＡＴＣＣＡＣＡＡＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＴＧＣＧＡＣＡＣＣＴＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＴＣＧＡＧＴＣＧＡＡＧＣＴＧＴＣＧＴＴＣＧＣＣＣＧＣＡＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＣＴＣＴＧＧＡＣＧＣＴＧＴＣＧＧＣＧＴＡＣＴＡＴＧＡＧＣＣＧＡＡＧＴＡＴＴＣＧＡＧＣＧＣＣＣＧＣＡＴＣＡＴＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＡＴＧＧＴＣＡＴＣＡＴＣＴＣＧＧＴＧＡＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＧＴＡＣＧＡＣＧＣＣＴＡＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＡＣＧＡＧＣＴＣＣＡＧＣＴＧＴＴＣＡＣＧＧＡＣＧＣＧＡＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＣＧＡＣＡＴＧＴＣＧＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＡＧＣＴＧＣＣＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＡＴＡＡＧＧＣＧＣＴＣＣＴＧＧＡＣＣＴＣＴＴＣＧＡＣＧＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＧＣＣＴＧＴＣＧＡＡＧＣＡＣＧＡＧＡＣＧＧＡＣＣＡＴＡＧＣＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＣＧＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＴＣＴＡＴＡＡＧＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＧＣＴＧＣＴＡＣＧＡＣＡＴＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＧＴＴＣＡＡＣＡＡＧＡＡＣＴＡＣＧＴＣＣＣＣＧＣＣＴＴＣＧＡＧＧＡＧＴＡＴＡＴＧＣＡＧＡＡＧＧＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＴＣＧＧＧＣＡＡＣＣＧＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＡＣＧＴＴＣＡＧＣＴＴＣＣＴＧＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＡＧＧＴＣＧＣＧＡＣＣＡＴＣＣＡＧＧＣＣＴＴＣＧＡＧＴＧＧＧＴＧＡＡＧＴＣＧＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＴＧＡＴＣＧＴＧＴＣＧＴＣＧＡＡＣＡＡＧＧＴＧＣＴＣＣＧＣＣＴＧＡＴＣＧＡＣＧＡＣＡＴＣＡＴＧＴＣＧＣＡＣＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＡＴＧＴＧＧＣＣＡＣＧＧＧＣＡＴＣＧＡＧＴＧＣＴＴＣＧＴＧＡＡＧＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＴＧＡＣＣＣＧＣＧＡＧＧＡＡＧＴＧＡＴＣＧＴＣＧＡＧＴＴＣＣＡＴＡＡＧＣＧＧＡＴＣＧＡＣＧＡＣＧＣＧＴＧＧＡＡＧＧＡＣＡＴＣＡＡＣＧＡＧＧＡＧＴＴＣＡＴＣＡＣＣＣＣＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＣＣＧＡＴＣＧＡＧＡＴＣＣＴＧＡＣＣＣＧＣＧＴＧＣＴＣＡＡＣＣＴＧＡＣＣＣＧＧＡＴＣＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＣＴＡＣＡＡＧＴＡＴＧＡＣＧＡＣＧＧＣＴＡＣＡＣＧＣＡＣＣＣＣＧＡＧＡＡＧＧＣＣＣＴＣＡＡＧＧＡＣＣＡＴＡＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＴＴＣＧＴＧＧＡＣＣＣＣＧＴＣＡＧＣＡＴＣＴＧＡ
イタリック体の配列はＳＰｐｐａプロモーターであり、アンダーライン付きシーケンスはコボン最適化ＳＵＭＯであり、通常フォントの配列はコボン最適化ＮｊＰＡＴである。
配列番号１９
ＳＵＭＯ－ＮｊＰＡＴアミノ酸配列
ＭＳＤＳＥＶＮＱＥＡＫＰＥＶＫＰＥＶＫＰＥＴＨＩＮＬＫＶＳＤＧＳＳＥＩＦＦＫＩＫＫＴＴＰＬＲＲＬＭＥＡＦＡＫＲＱＧＫＥＭＤＳＬＲＦＬＹＤＧＩＲＩＱＡＤＱＴＰＥＤＬＤＭＥＤＮＤＩＩＥＡＨＲＥＱＩＧＭＳＩＩＩＡＴＮＳＴＥＨＰＩＦＲＰＬＡＮＦＰＰＳＬＷＧＮＬＦＴＳＦＳＭＤＮＱＡＲＥＩＹＡＫＥＨＥＧＬＫＥＫＶＲＭＭＦＬＤＴＴＮＹＫＩＳＥＫＩＮＦＩＮＴＶＥＲＬＧＶＳＹＨＦＥＫＥＩＥＥＬＬＨＱＭＦＤＡＨＳＫＨＬＤＤＩＱＥＦＤＬＦＴＬＧＩＹＦＲＩＬＲＱＨＧＹＫＩＳＣＤＶＦＮＫＬＫＤＳＮＧＥＦＫＤＥＬＫＤＤＶＮＧＭＬＳＦＹＥＡＴＨＶＲＴＨＧＥＮＩＬＤＥＡＬＩＹＴＫＡＱＬＥＳＭＡＡＡＳＬＳＰＦＬＡＮＱＶＫＨＡＬＭＱＡＬＨＫＧＩＰＲＩＥＡＲＮＹＩＳＶＹＥＥＤＰＮＫＮＤＬＬＬＲＦＳＫＩＤＦＮＬＶＱＭＩＨＫＱＥＬＣＤＴＦＲＷＷＫＤＬＥＦＥＳＫＬＳＦＡＲＮＲＶＶＥＡＹＬＷＴＬＳＡＹＹＥＰＫＹＳＳＡＲＩＩＬＶＫＬＭＶＩＩＳＶＴＤＤＴＹＤＡＹＧＴＬＤＥＬＱＬＦＴＤＡＩＱＲＬＤＭＳＳＩＮＱＬＰＤＹＭＫＴＩＹＫＡＬＬＤＬＦＤＥＩＥＤＲＬＳＫＨＥＴＤＨＳＹＲＶＡＹＡＫＹＶＹＫＥＩＶＲＣＹＤＭＥＹＫＷＦＮＫＮＹＶＰＡＦＥＥＹＭＱＫＡＬＶＴＳＧＮＲＬＬＩＴＦＳＦＬＧＭＤＥＶＡＴＩＱＡＦＥＷＶＫＳＮＡＫＭＩＶＳＳＮＫＶＬＲＬＩＤＤＩＭＳＨＥＥＥＤＥＲＧＨＶＡＴＧＩＥＣＦＶＫＥＨＧＬＴＲＥＥＶＩＶＥＦＨＫＲＩＤＤＡＷＫＤＩＮＥＥＦＩＴＰＮＮＬＰＩＥＩＬＴＲＶＬＮＬＴＲＩＧＤＶＶＹＫＹＤＤＧＹＴＨＰＥＫＡＬＫＤＨＩＩＳＬＦＶＤＰＶＳＩ
アンダーライン付き配列はＳＵＭＯタグである。
配列番号２０
ＮｕｓＡ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖヌクレオチド配列
ＴＧＡＴＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＴＣＧＴＣＧＣＣＧＡＡＣ
配列番号２１
ＮｕｓＡ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｆｗヌクレオチド配列
ＣＧＡＧＧＣＧＡＴＧＴＣＧＡＴＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣ
配列番号２２
ＳＰｐｐａ－ＮｕｓＡ－ＮｊＰＡＴヌクレオチド配列
ＡＡＡＴＴＴＡＴＴＴＧＣＴＴＴＧＴＧＡＧＣＧＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＡＴＴＡＧＡＴＴＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＧＣＡＧＧＡＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＡＧＡＴＧＡＣＡＧＧＡＧＧＧＡＣＡＴ
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イタリック体の配列はＳＰｐｐａプロモーターであり、アンダーライン付きシーケンスはコボン最適化ＮｕｓＡであり、通常フォントの配列はコボン最適化ＮｊＰＡＴである。
配列番号２３
ＮｕｓＡ－ＮｊＰＡＴＴアミノ酸配列
ＭＮＫＥＩＬＡＶＶＥＡＶＳＮＥＫＡＬＰＲＥＫＩＦＥＡＬＥＳＡＬＡＴＡＴＫＫＫＹＥＱＥＩＤＶＲＶＱＩＤＲＫＳＧＤＦＤＴＦＲＲＷＬＶＶＤＥＶＴＱＰＴＫＥＩＴＬＥＡＡＲＹＥＤＥＳＬＮＬＧＤＹＶＥＤＱＩＥＳＶＴＦＤＲＩＴＴＱＴＡＫＱＶＩＶＱＫＶＲＥＡＥＲＡＭＶＶＤＱＦＲＥＨＥＧＥＩＩＴＧＶＶＫＫＶＮＲＤＮＩＳＬＤＬＧＮＮＡＥＡＶＩＬＲＥＤＭＬＰＲＥＮＦＲＰＧＤＲＶＲＧＶＬＹＳＶＲＰＥＡＲＧＡＱＬＦＶＴＲＳＫＰＥＭＬＩＥＬＦＲＩＥＶＰＥＩＧＥＥＶＩＥＩＫＡＡＡＲＤＰＧＳＲＡＫＩＡＶＫＴＮＤＫＲＩＤＰＶＧＡＣＶＧＭＲＧＡＲＶＱＡＶＳＴＥＬＧＧＥＲＩＤＩＶＬＷＤＤＮＰＡＱＦＶＩＮＡＭＡＰＡＤＶＡＳＩＶＶＤＥＤＫＨＴＭＤＩＡＶＥＡＧＮＬＡＱＡＩＧＲＮＧＱＮＶＲＬＡＳＱＬＳＧＷＥＬＮＶＭＴＶＤＤＬＱＡＫＨＱＡＥＡＨＡＡＩＤＴＦＴＫＹＬＤＩＤＥＤＦＡＴＶＬＶＥＥＧＦＳＴＬＥＥＬＡＹＶＰＭＫＥＬＬＥＩＥＧＬＤＥＰＴＶＥＡＬＲＥＲＡＫＮＡＬＡＴＩＡＱＡＱＥＥＳＬＧＤＮＫＰＡＤＤＬＬＮＬＥＧＶＤＲＤＬＡＦＫＬＡＡＲＧＶＣＴＬＥＤＬＡＥＱＧＩＤＤＬＡＤＩＥＧＬＴＤＥＫＡＧＡＬＩＭＡＡＲＮＩＣＷＦＧＤＥＡＭＳＩＩＩＡＴＮＳＴＥＨＰＩＦＲＰＬＡＮＦＰＰＳＬＷＧＮＬＦＴＳＦＳＭＤＮＱＡＲＥＩＹＡＫＥＨＥＧＬＫＥＫＶＲＭＭＦＬＤＴＴＮＹＫＩＳＥＫＩＮＦＩＮＴＶＥＲＬＧＶＳＹＨＦＥＫＥＩＥＥＬＬＨＱＭＦＤＡＨＳＫＨＬＤＤＩＱＥＦＤＬＦＴＬＧＩＹＦＲＩＬＲＱＨＧＹＫＩＳＣＤＶＦＮＫＬＫＤＳＮＧＥＦＫＤＥＬＫＤＤＶＮＧＭＬＳＦＹＥＡＴＨＶＲＴＨＧＥＮＩＬＤＥＡＬＩＹＴＫＡＱＬＥＳＭＡＡＡＳＬＳＰＦＬＡＮＱＶＫＨＡＬＭＱＡＬＨＫＧＩＰＲＩＥＡＲＮＹＩＳＶＹＥＥＤＰＮＫＮＤＬＬＬＲＦＳＫＩＤＦＮＬＶＱＭＩＨＫＱＥＬＣＤＴＦＲＷＷＫＤＬＥＦＥＳＫＬＳＦＡＲＮＲＶＶＥＡＹＬＷＴＬＳＡＹＹＥＰＫＹＳＳＡＲＩＩＬＶＫＬＭＶＩＩＳＶＴＤＤＴＹＤＡＹＧＴＬＤＥＬＱＬＦＴＤＡＩＱＲＬＤＭＳＳＩＮＱＬＰＤＹＭＫＴＩＹＫＡＬＬＤＬＦＤＥＩＥＤＲＬＳＫＨＥＴＤＨＳＹＲＶＡＹＡＫＹＶＹＫＥＩＶＲＣＹＤＭＥＹＫＷＦＮＫＮＹＶＰＡＦＥＥＹＭＱＫＡＬＶＴＳＧＮＲＬＬＩＴＦＳＦＬＧＭＤＥＶＡＴＩＱＡＦＥＷＶＫＳＮＡＫＭＩＶＳＳＮＫＶＬＲＬＩＤＤＩＭＳＨＥＥＥＤＥＲＧＨＶＡＴＧＩＥＣＦＶＫＥＨＧＬＴＲＥＥＶＩＶＥＦＨＫＲＩＤＤＡＷＫＤＩＮＥＥＦＩＴＰＮＮＬＰＩＥＩＬＴＲＶＬＮＬＴＲＩＧＤＶＶＹＫＹＤＤＧＹＴＨＰＥＫＡＬＫＤＨＩＩＳＬＦＶＤＰＶＳＩ
アンダーライン付き配列はＮｕｓＡタグである。
配列番号２４
ＲｓＴＲＸ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖヌクレオチド配列
ＴＧＡＴＣＧＡＣＡＴＧＡＧＣＧＣＣＧＡＧＧＣＧＡＴＣ
配列番号２５
ＲｓＴＲＸ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｆｗヌクレオチド配列
ｇｇｃｇｃｔｃＡＴＧＴＣＧＡＴＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣ
配列番号２６
ＳＰｐｐａ－ＲｓＴＲＸ－ＮｊＰＡＴヌクレオチド配列
ＡＡＡＴＴＴＡＴＴＴＧＣＴＴＴＧＴＧＡＧＣＧＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＡＴＴＡＧＡＴＴＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＧＣＡＧＧＡＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＡＧＡＴＧＡＣＡＧＧＡＧＧＧＡＣＡＴＡＴＧＴＣＣＡＣＣＧＴＴＣＣＣＧＴＧＡＣＧＧＡＣＧＣＣＡＣＣＴＴＣＧＡＣＡＣＣＧＡＧＧＴＧＣＧＣＡＡＧＴＣＣＧＡＣＧＴＧＣＣＣＧＴＣＧＴＣＧＴＣＧＡＴＴＴＣＴＧＧＧＣＣＧＡＡＴＧＧＴＧＣＧＧＣＣＣＣＴＧＣＣＧＧＣＡＧＡＴＣＧＧＣＣＣＧＧＣＧＣＴＣＧＡＧＧＡＧＣＴＣＴＣＧＡＡＧＧＡＡＴＡＴＧＣＣＧＧＣＡＡＧＧＴＧＡＡＧＡＴＣＧＴＧＡＡＧＧＴＣＡＡＴＧＴＣＧＡＣＧＡＧＡＡＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＣＧＧＣＧＡＴＧＣＴＧＧＧＣＧＴＴＣＧＣＧＧＣＡＴＣＣＣＧＧＣＧＣＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＡＡＧＡＡＣＧＧＴＣＡＧＧＴＣＧＴＧＴＣＧＡＡＣＡＡＧＧＴＣＧＧＣＧＣＴＧＣＧＣＣＧＡＡＧＧＣＣＧＣＧＣＴＧＧＣＣＡＣＣＴＧＧＡＴＣＧＣＣＴＣＧＧＣＧＣＴＣＡＴＧＴＣＧＡＴＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＡＣＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＣＡＴＣＣＣＡＴＣＴＴＣＣＧＣＣＣＧＣＴＣＧＣＣＡＡＣＴＴＣＣＣＧＣＣＧＴＣＧＣＴＣＴＧＧＧＧＣＡＡＣＣＴＧＴＴＣＡＣＣＴＣＧＴＴＣＡＧＣＡＴＧＧＡＣＡＡＣＣＡＧＧＣＧＣＧＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＧＣＣＡＡＧＧＡＧＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＴＣＡＡＧＧＡＧＡＡＧＧＴＣＣＧＧＡＴＧＡＴＧＴＴＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＣＧＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＴＣＴＣＧＧＡＧＡＡＧＡＴＣＡＡＣＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＧＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡＧＣＴＡＴＣＡＣＴＴＣＧＡＧＡＡＧＧＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＧＡＴＧＴＴＣＧＡＣＧＣＣＣＡＣＴＣＧＡＡＧＣＡＴＣＴＧＧＡＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＧＡＧＴＴＣＧＡＣＣＴＣＴＴＣＡＣＧＣＴＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＴＴＣＣＧＣＡＴＣＣＴＧＣＧＧＣＡＧＣＡＴＧＧＣＴＡＴＡＡＧＡＴＣＴＣＧＴＧＣＧＡＣＧＴＣＴＴＣＡＡＣＡＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＧＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＧＣＴＧＴＣＧＴＴＣＴＡＴＧＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡＴＧＴＧＣＧＣＡＣＣＣＡＴＧＧＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＣＴＣＧＡＣＧＡＧＧＣＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＣＧＡＡＧＧＣＣＣＡＧＣＴＧＧＡＧＴＣＧＡＴＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＴＣＡＧＣＣＣＧＴＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＡＣＧＣＧＣＴＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＴＡＡＧＧＧＣＡＴＣＣＣＧＣＧＣＡＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＡＡＣＴＡＣＡＴＣＴＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＧＡＡＣＡＡＧＡＡＣＧＡＣＣＴＧＣＴＣＣＴＧＣＧＣＴＴＣＡＧＣＡＡＧＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＴＧＡＴＣＣＡＣＡＡＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＴＧＣＧＡＣＡＣＣＴＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＴＣＧＡＧＴＣＧＡＡＧＣＴＧＴＣＧＴＴＣＧＣＣＣＧＣＡＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＣＴＣＴＧＧＡＣＧＣＴＧＴＣＧＧＣＧＴＡＣＴＡＴＧＡＧＣＣＧＡＡＧＴＡＴＴＣＧＡＧＣＧＣＣＣＧＣＡＴＣＡＴＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＡＴＧＧＴＣＡＴＣＡＴＣＴＣＧＧＴＧＡＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＧＴＡＣＧＡＣＧＣＣＴＡＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＡＣＧＡＧＣＴＣＣＡＧＣＴＧＴＴＣＡＣＧＧＡＣＧＣＧＡＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＣＧＡＣＡＴＧＴＣＧＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＡＧＣＴＧＣＣＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＡＴＡＡＧＧＣＧＣＴＣＣＴＧＧＡＣＣＴＣＴＴＣＧＡＣＧＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＧＣＣＴＧＴＣＧＡＡＧＣＡＣＧＡＧＡＣＧＧＡＣＣＡＴＡＧＣＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＣＧＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＴＣＴＡＴＡＡＧＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＧＣＴＧＣＴＡＣＧＡＣＡＴＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＧＴＴＣＡＡＣＡＡＧＡＡＣＴＡＣＧＴＣＣＣＣＧＣＣＴＴＣＧＡＧＧＡＧＴＡＴＡＴＧＣＡＧＡＡＧＧＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＴＣＧＧＧＣＡＡＣＣＧＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＡＣＧＴＴＣＡＧＣＴＴＣＣＴＧＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＡＧＧＴＣＧＣＧＡＣＣＡＴＣＣＡＧＧＣＣＴＴＣＧＡＧＴＧＧＧＴＧＡＡＧＴＣＧＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＴＧＡＴＣＧＴＧＴＣＧＴＣＧＡＡＣＡＡＧＧＴＧＣＴＣＣＧＣＣＴＧＡＴＣＧＡＣＧＡＣＡＴＣＡＴＧＴＣＧＣＡＣＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＡＴＧＴＧＧＣＣＡＣＧＧＧＣＡＴＣＧＡＧＴＧＣＴＴＣＧＴＧＡＡＧＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＴＧＡＣＣＣＧＣＧＡＧＧＡＡＧＴＧＡＴＣＧＴＣＧＡＧＴＴＣＣＡＴＡＡＧＣＧＧＡＴＣＧＡＣＧＡＣＧＣＧＴＧＧＡＡＧＧＡＣＡＴＣＡＡＣＧＡＧＧＡＧＴＴＣＡＴＣＡＣＣＣＣＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＣＣＧＡＴＣＧＡＧＡＴＣＣＴＧＡＣＣＣＧＣＧＴＧＣＴＣＡＡＣＣＴＧＡＣＣＣＧＧＡＴＣＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＣＴＡＣＡＡＧＴＡＴＧＡＣＧＡＣＧＧＣＴＡＣＡＣＧＣＡＣＣＣＣＧＡＧＡＡＧＧＣＣＣＴＣＡＡＧＧＡＣＣＡＴＡＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＴＴＣＧＴＧＧＡＣＣＣＣＧＴＣＡＧＣＡＴＣＴＧＡ
イタリック体の配列はＳＰｐｐａプロモーターであり、アンダーライン付きシーケンスはコボン最適化ＮｊＰＡＴであり、通常フォントの配列はコボン最適化ＮｊＰＡＴである。
配列番号２７
ＲｓＴＲＸ－ＮｊＰＡＴアミノ酸配列
ＭＳＴＶＰＶＴＤＡＴＦＤＴＥＶＲＫＳＤＶＰＶＶＶＤＦＷＡＥＷＣＧＰＣＲＱＩＧＰＡＬＥＥＬＳＫＥＹＡＧＫＶＫＩＶＫＶＮＶＤＥＮＰＥＳＰＡＭＬＧＶＲＧＩＰＡＬＦＬＦＫＮＧＱＶＶＳＮＫＶＧＡＡＰＫＡＡＬＡＴＷＩＡＳＡＬＭＳＩＩＩＡＴＮＳＴＥＨＰＩＦＲＰＬＡＮＦＰＰＳＬＷＧＮＬＦＴＳＦＳＭＤＮＱＡＲＥＩＹＡＫＥＨＥＧＬＫＥＫＶＲＭＭＦＬＤＴＴＮＹＫＩＳＥＫＩＮＦＩＮＴＶＥＲＬＧＶＳＹＨＦＥＫＥＩＥＥＬＬＨＱＭＦＤＡＨＳＫＨＬＤＤＩＱＥＦＤＬＦＴＬＧＩＹＦＲＩＬＲＱＨＧＹＫＩＳＣＤＶＦＮＫＬＫＤＳＮＧＥＦＫＤＥＬＫＤＤＶＮＧＭＬＳＦＹＥＡＴＨＶＲＴＨＧＥＮＩＬＤＥＡＬＩＹＴＫＡＱＬＥＳＭＡＡＡＳＬＳＰＦＬＡＮＱＶＫＨＡＬＭＱＡＬＨＫＧＩＰＲＩＥＡＲＮＹＩＳＶＹＥＥＤＰＮＫＮＤＬＬＬＲＦＳＫＩＤＦＮＬＶＱＭＩＨＫＱＥＬＣＤＴＦＲＷＷＫＤＬＥＦＥＳＫＬＳＦＡＲＮＲＶＶＥＡＹＬＷＴＬＳＡＹＹＥＰＫＹＳＳＡＲＩＩＬＶＫＬＭＶＩＩＳＶＴＤＤＴＹＤＡＹＧＴＬＤＥＬＱＬＦＴＤＡＩＱＲＬＤＭＳＳＩＮＱＬＰＤＹＭＫＴＩＹＫＡＬＬＤＬＦＤＥＩＥＤＲＬＳＫＨＥＴＤＨＳＹＲＶＡＹＡＫＹＶＹＫＥＩＶＲＣＹＤＭＥＹＫＷＦＮＫＮＹＶＰＡＦＥＥＹＭＱＫＡＬＶＴＳＧＮＲＬＬＩＴＦＳＦＬＧＭＤＥＶＡＴＩＱＡＦＥＷＶＫＳＮＡＫＭＩＶＳＳＮＫＶＬＲＬＩＤＤＩＭＳＨＥＥＥＤＥＲＧＨＶＡＴＧＩＥＣＦＶＫＥＨＧＬＴＲＥＥＶＩＶＥＦＨＫＲＩＤＤＡＷＫＤＩＮＥＥＦＩＴＰＮＮＬＰＩＥＩＬＴＲＶＬＮＬＴＲＩＧＤＶＶＹＫＹＤＤＧＹＴＨＰＥＫＡＬＫＤＨＩＩＳＬＦＶＤＰＶＳＩ
ヌクレオチド配列はＲｓＴＲＸタグである。
配列番号２８
ＧＳＴ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｒｖヌクレオチド配列
ＡＴＣＧＡＣＡＴＣＴＴＧＧＧＣＧＧＡＴＧＧ
配列番号２９
ＧＳＴ＿ＮｊＰＡＴ＿Ｆｗヌクレオチド配列
ＧＣＣＣＡＡＧＡＴＧＴＣＧＡＴＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣ
配列番号３０
ＳＰｐｐａ－ＧＳＴ－ＮｊＰＡＴヌクレオチド配列
ＡＡＡＴＴＴＡＴＴＴＧＣＴＴＴＧＴＧＡＧＣＧＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＡＴＴＡＧＡＴＴＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＧＣＡＧＧＡＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＡＧＡＴＧＡＣＡＧＧＡＧＧＧＡＣＡＴＡＴＧＴＣＧＣＣＧＡＴＣＣＴＧＧＧＣＴＡＴＴＧＧＡＡＧＡＴＣＡＡＧＧＧＣＣＴＣＧＴＧＣＡＧＣＣＣＡＣＣＣＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＧＧＡＧＴＡＣＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＴＡＴＧＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＡＣＧＡＧＣＧＣＧＡＣＧＡＧＧＧＣＧＡＣＡＡＧＴＧＧＣＧＣＡＡＣＡＡＧＡＡＧＴＴＣＧＡＧＣＴＣＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＴＣＣＣＧＡＡＣＣＴＧＣＣＣＴＡＣＴＡＴＡＴＣＧＡＣＧＧＣＧＡＣＧＴＧＡＡＧＣＴＣＡＣＧＣＡＧＴＣＧＡＴＧＧＣＣＡＴＣＡＴＣＣＧＣＴＡＣＡＴＣＧＣＧＧＡＣＡＡＧＣＡＴＡＡＣＡＴＧＣＴＧＧＧＣＧＧＣＴＧＣＣＣＣＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＣＧＧＡＧＡＴＣＴＣＧＡＴＧＣＴＧＧＡＧＧＧＣＧＣＧＧＴＧＣＴＣＧＡＣＡＴＣＣＧＣＴＡＴＧＧＣＧＴＧＴＣＧＣＧＣＡＴＣＧＣＣＴＡＣＴＣＧＡＡＧＧＡＣＴＴＣＧＡＧＡＣＣＣＴＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＴＴＣＣＴＣＴＣＧＡＡＧＣＴＧＣＣＧＧＡＧＡＴＧＣＴＣＡＡＧＡＴＧＴＴＣＧＡＧＧＡＣＣＧＣＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＡＧＡＣＣＴＡＴＣＴＣＡＡＣＧＧＣＧＡＣＣＡＣＧＴＧＡＣＧＣＡＴＣＣＣＧＡＣＴＴＣＡＴＧＣＴＣＴＡＴＧＡＣＧＣＧＣＴＧＧＡＣＧＴＧＧＴＧＣＴＣＴＡＣＡＴＧＧＡＣＣＣＧＡＴＧＴＧＣＣＴＧＧＡＣＧＣＣＴＴＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＧＴＧＴＧＣＴＴＣＡＡＧＡＡＧＣＧＣＡＴＣＧＡＧＧＣＧＡＴＣＣＣＧＣＡＧＡＴＣＧＡＣＡＡＧＴＡＴＣＴＧＡＡＧＴＣＧＴＣＧＡＡＧＴＡＣＡＴＣＧＣＣＴＧＧＣＣＣＣＴＣＣＡＧＧＧＣＴＧＧＣＡＧＧＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＡＣＣＡＴＣＣＧＣＣＣＡＡＧＡＴＧＴＣＧＡＴＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＡＣＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＣＡＴＣＣＣＡＴＣＴＴＣＣＧＣＣＣＧＣＴＣＧＣＣＡＡＣＴＴＣＣＣＧＣＣＧＴＣＧＣＴＣＴＧＧＧＧＣＡＡＣＣＴＧＴＴＣＡＣＣＴＣＧＴＴＣＡＧＣＡＴＧＧＡＣＡＡＣＣＡＧＧＣＧＣＧＣＧＡＧＡＴＣＴＡＣＧＣＣＡＡＧＧＡＧＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＴＣＡＡＧＧＡＧＡＡＧＧＴＣＣＧＧＡＴＧＡＴＧＴＴＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＣＧＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＴＣＴＣＧＧＡＧＡＡＧＡＴＣＡＡＣＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＧＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡＧＣＴＡＴＣＡＣＴＴＣＧＡＧＡＡＧＧＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＡＧＡＴＧＴＴＣＧＡＣＧＣＣＣＡＣＴＣＧＡＡＧＣＡＴＣＴＧＧＡＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＧＡＧＴＴＣＧＡＣＣＴＣＴＴＣＡＣＧＣＴＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＴＴＣＣＧＣＡＴＣＣＴＧＣＧＧＣＡＧＣＡＴＧＧＣＴＡＴＡＡＧＡＴＣＴＣＧＴＧＣＧＡＣＧＴＣＴＴＣＡＡＣＡＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＧＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＴＣＡＡＣＧＧＣＡＴＧＣＴＧＴＣＧＴＴＣＴＡＴＧＡＧＧＣＣＡＣＣＣＡＴＧＴＧＣＧＣＡＣＣＣＡＴＧＧＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＣＴＣＧＡＣＧＡＧＧＣＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＣＧＡＡＧＧＣＣＣＡＧＣＴＧＧＡＧＴＣＧＡＴＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＴＣＡＧＣＣＣＧＴＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＡＣＧＣＧＣＴＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＴＡＡＧＧＧＣＡＴＣＣＣＧＣＧＣＡＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＡＡＣＴＡＣＡＴＣＴＣＧＧＴＣＴＡＴＧＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＧＡＡＣＡＡＧＡＡＣＧＡＣＣＴＧＣＴＣＣＴＧＣＧＣＴＴＣＡＧＣＡＡＧＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＴＧＡＴＣＣＡＣＡＡＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＴＧＣＧＡＣＡＣＣＴＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＴＣＧＡＧＴＣＧＡＡＧＣＴＧＴＣＧＴＴＣＧＣＣＣＧＣＡＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＣＴＣＴＧＧＡＣＧＣＴＧＴＣＧＧＣＧＴＡＣＴＡＴＧＡＧＣＣＧＡＡＧＴＡＴＴＣＧＡＧＣＧＣＣＣＧＣＡＴＣＡＴＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＡＴＧＧＴＣＡＴＣＡＴＣＴＣＧＧＴＧＡＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＧＴＡＣＧＡＣＧＣＣＴＡＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＡＣＧＡＧＣＴＣＣＡＧＣＴＧＴＴＣＡＣＧＧＡＣＧＣＧＡＴＣＣＡＧＣＧＣＣＴＣＧＡＣＡＴＧＴＣＧＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＡＧＣＴＧＣＣＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＡＴＡＡＧＧＣＧＣＴＣＣＴＧＧＡＣＣＴＣＴＴＣＧＡＣＧＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＧＣＣＴＧＴＣＧＡＡＧＣＡＣＧＡＧＡＣＧＧＡＣＣＡＴＡＧＣＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＣＧＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＴＣＴＡＴＡＡＧＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＧＣＴＧＣＴＡＣＧＡＣＡＴＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＧＴＴＣＡＡＣＡＡＧＡＡＣＴＡＣＧＴＣＣＣＣＧＣＣＴＴＣＧＡＧＧＡＧＴＡＴＡＴＧＣＡＧＡＡＧＧＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＴＣＧＧＧＣＡＡＣＣＧＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＡＣＧＴＴＣＡＧＣＴＴＣＣＴＧＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＡＧＧＴＣＧＣＧＡＣＣＡＴＣＣＡＧＧＣＣＴＴＣＧＡＧＴＧＧＧＴＧＡＡＧＴＣＧＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＴＧＡＴＣＧＴＧＴＣＧＴＣＧＡＡＣＡＡＧＧＴＧＣＴＣＣＧＣＣＴＧＡＴＣＧＡＣＧＡＣＡＴＣＡＴＧＴＣＧＣＡＣＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＣＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＡＴＧＴＧＧＣＣＡＣＧＧＧＣＡＴＣＧＡＧＴＧＣＴＴＣＧＴＧＡＡＧＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＴＧＡＣＣＣＧＣＧＡＧＧＡＡＧＴＧＡＴＣＧＴＣＧＡＧＴＴＣＣＡＴＡＡＧＣＧＧＡＴＣＧＡＣＧＡＣＧＣＧＴＧＧＡＡＧＧＡＣＡＴＣＡＡＣＧＡＧＧＡＧＴＴＣＡＴＣＡＣＣＣＣＧＡＡＣＡＡＣＣＴＧＣＣＧＡＴＣＧＡＧＡＴＣＣＴＧＡＣＣＣＧＣＧＴＧＣＴＣＡＡＣＣＴＧＡＣＣＣＧＧＡＴＣＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＣＴＡＣＡＡＧＴＡＴＧＡＣＧＡＣＧＧＣＴＡＣＡＣＧＣＡＣＣＣＣＧＡＧＡＡＧＧＣＣＣＴＣＡＡＧＧＡＣＣＡＴＡＴＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＴＴＣＧＴＧＧＡＣＣＣＣＧＴＣＡＧＣＡＴＣＴＧＡ
イタリック体の配列はＳＰｐｐａプロモーターであり、アンダーライン付きシーケンスはコボン最適化ＧＳＴであり、通常フォントの配列はコボン最適化ＮｊＰＡＴである。
配列番号３１
ＧＳＴ－ＮｊＰＡＴアミノ酸配列
ＭＳＰＩＬＧＹＷＫＩＫＧＬＶＱＰＴＲＬＬＬＥＹＬＥＥＫＹＥＥＨＬＹＥＲＤＥＧＤＫＷＲＮＫＫＦＥＬＧＬＥＦＰＮＬＰＹＹＩＤＧＤＶＫＬＴＱＳＭＡＩＩＲＹＩＡＤＫＨＮＭＬＧＧＣＰＫＥＲＡＥＩＳＭＬＥＧＡＶＬＤＩＲＹＧＶＳＲＩＡＹＳＫＤＦＥＴＬＫＶＤＦＬＳＫＬＰＥＭＬＫＭＦＥＤＲＬＣＨＫＴＹＬＮＧＤＨＶＴＨＰＤＦＭＬＹＤＡＬＤＶＶＬＹＭＤＰＭＣＬＤＡＦＰＫＬＶＣＦＫＫＲＩＥＡＩＰＱＩＤＫＹＬＫＳＳＫＹＩＡＷＰＬＱＧＷＱＡＴＦＧＧＧＤＨＰＰＫＭＳＩＩＩＡＴＮＳＴＥＨＰＩＦＲＰＬＡＮＦＰＰＳＬＷＧＮＬＦＴＳＦＳＭＤＮＱＡＲＥＩＹＡＫＥＨＥＧＬＫＥＫＶＲＭＭＦＬＤＴＴＮＹＫＩＳＥＫＩＮＦＩＮＴＶＥＲＬＧＶＳＹＨＦＥＫＥＩＥＥＬＬＨＱＭＦＤＡＨＳＫＨＬＤＤＩＱＥＦＤＬＦＴＬＧＩＹＦＲＩＬＲＱＨＧＹＫＩＳＣＤＶＦＮＫＬＫＤＳＮＧＥＦＫＤＥＬＫＤＤＶＮＧＭＬＳＦＹＥＡＴＨＶＲＴＨＧＥＮＩＬＤＥＡＬＩＹＴＫＡＱＬＥＳＭＡＡＡＳＬＳＰＦＬＡＮＱＶＫＨＡＬＭＱＡＬＨＫＧＩＰＲＩＥＡＲＮＹＩＳＶＹＥＥＤＰＮＫＮＤＬＬＬＲＦＳＫＩＤＦＮＬＶＱＭＩＨＫＱＥＬＣＤＴＦＲＷＷＫＤＬＥＦＥＳＫＬＳＦＡＲＮＲＶＶＥＡＹＬＷＴＬＳＡＹＹＥＰＫＹＳＳＡＲＩＩＬＶＫＬＭＶＩＩＳＶＴＤＤＴＹＤＡＹＧＴＬＤＥＬＱＬＦＴＤＡＩＱＲＬＤＭＳＳＩＮＱＬＰＤＹＭＫＴＩＹＫＡＬＬＤＬＦＤＥＩＥＤＲＬＳＫＨＥＴＤＨＳＹＲＶＡＹＡＫＹＶＹＫＥＩＶＲＣＹＤＭＥＹＫＷＦＮＫＮＹＶＰＡＦＥＥＹＭＱＫＡＬＶＴＳＧＮＲＬＬＩＴＦＳＦＬＧＭＤＥＶＡＴＩＱＡＦＥＷＶＫＳＮＡＫＭＩＶＳＳＮＫＶＬＲＬＩＤＤＩＭＳＨＥＥＥＤＥＲＧＨＶＡＴＧＩＥＣＦＶＫＥＨＧＬＴＲＥＥＶＩＶＥＦＨＫＲＩＤＤＡＷＫＤＩＮＥＥＦＩＴＰＮＮＬＰＩＥＩＬＴＲＶＬＮＬＴＲＩＧＤＶＶＹＫＹＤＤＧＹＴＨＰＥＫＡＬＫＤＨＩＩＳＬＦＶＤＰＶＳＩ
アンダーライン付き配列はＧＳＴタグである。

Claims (20)

1. 配列番号４で示されるアミノ酸配列を含むパチョロールシンターゼ、またはその機能的相同体であって、前記相同体は、ファルネシル二リン酸からのパチョロールの形成で触媒活性を有し、配列番号４と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むパチョロールシンターゼであり、パチョロールシンターゼは、パチョロールの形成で触媒活性を有するポリペプチドである、パチョロールシンターゼ、またはその機能的相同体。
2. 請求項１に記載のパチョロールシンターゼ、またはその機能的相同体をコードする核酸配列、またはその相補的配列を含む、核酸。
3. 前記核酸は、配列番号３もしくは配列番号５で示される核酸配列、または配列番号３もしくは配列番号５で示される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する核酸配列、またはそれらの配列のいずれかの相補的配列を含む、請求項２に記載の核酸。
4. 請求項２または３に記載の核酸を含む発現ベクター。
5. それ自体が非ヒト生物である宿主細胞であって、請求項２または３に記載の核酸の配列を含む発現ベクターを含む、宿主細胞。
6. 非ヒト多細胞生物の一部である宿主細胞であって、請求項２または３に記載の核酸の配列を含む発現ベクターを含む、宿主細胞。
7. 前記宿主細胞は、グラム陰性細菌の群から選択される細菌細胞である、請求項５に記載の宿主細胞。
8. 前記宿主細胞は、ロドバクター、パラコッカスおよびエシェリキアの群から選択される細菌細胞である、請求項７に記載の宿主細胞。
9. 前記宿主細胞は、アスペルギルス、ブラケスレア、ペニシリウム、ファフィア（キサントフィロマイセス）、ピキア、サッカロマイセス、およびヤロウイアの群から選択される真菌細胞である、請求項５又は６に記載の宿主細胞。
10. トランスジェニック植物細胞を含むトランスジェニック植物または培養物であって、前記植物または培養物は、請求項６に記載の宿主細胞を含み、前記宿主細胞は、タバコ属、ナス属、キクニガナ属、アキノノゲシ属、ハッカ属、クソニンジン属、塊茎形成植物、油料作物、液体培養植物、タバコＢＹ２細胞、ヒメツリガネゴケおよび樹木から選択されるトランスジェニック植物のものである、トランスジェニック植物または培養物。
11. トランスジェニックキノコ細胞を含むトランスジェニックキノコまたは培養物であって、前記キノコまたは培養物は請求項６に記載の宿主細胞を含み、前記宿主細胞は、スエヒロタケ、アガリクスおよびヒラタケから選択される、トランスジェニックキノコまたは培養物。
12. パチョロールおよびエレモールを調製する方法であって、パチョロールシンターゼの存在下でファルネシル二リン酸をパチョロールおよびエレモールに変換することを含み、パチョロールシンターゼは、配列番号４で示されるアミノ酸配列を含むパチョロールシンターゼ、またはその機能的相同体であって、前記相同体は、ファルネシル二リン酸からのパチョロールの形成で触媒活性を有し、配列番号４と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むパチョロールシンターゼであり、パチョロールシンターゼは、パチョロールの形成で触媒活性を有するポリペプチドである、方法。
13. ポゴストールも調製される、請求項１２に記載の方法。
14. 前記パチョロールおよびエレモールは、前記パチョロールシンターゼを発現する宿主細胞において調製され、前記宿主細胞は前記パチョロールシンターゼをコードする核酸配列を含む発現ベクターを含む、請求項１２または１３に記載の方法。
15. 前記核酸は、配列番号３もしくは配列番号５で示される核酸配列、または配列番号３もしくは配列番号５で示される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する核酸配列、またはそれらの配列のいずれかの相補的配列を含む、請求項１４に記載の方法。
16. 前記パチョロールおよび／またはポゴストールおよび／またはエレモールを単離することをさらに含む、請求項１２～１５のいずれか一項に記載の方法。
17. ポゴストールのパチョロールに対するモル比が１：５より高い、請求項１３～１６のいずれか一項に記載の方法。
18. エレモールのパチョロールに対するモル比が１：１０より高い、請求項１２～１７のいずれか一項に記載の方法。
19. エレモールのポゴストールに対するモル比が１：２以上である、請求項１３～１８のいずれか一項に記載の方法。
20. エレモールのポゴストールに対するモル比が１：３以上である、請求項１９に記載の方法。

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