JP2013074829A - テルピネオール合成酵素をコードするポリヌクレオチドおよびその用途 - Google Patents
テルピネオール合成酵素をコードするポリヌクレオチドおよびその用途 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】テルピネオール合成活性を有するタンパク質をコードする、特定の塩基配列からなるポリヌクレオチド。これらのポリヌクレオチドを植物体に導入することによって、前記植物体に芳香性を付与したり、または、前記植物体の芳香性を改変する方法。
【選択図】なし
Description
(a)配列番号1、3、5、7、9または11の塩基配列からなるポリヌクレオチド
(b)前記(a)のいずれかの塩基配列において、1もしくは数個の塩基が欠失、置換および/または付加された塩基配列からなり、テルピネオール合成活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
(c)前記(a)のいずれかの塩基配列に対して、90%以上の同一性を有する塩基配列からなり、テルピネオール合成活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
(d)前記(a)のいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチドに対して、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドに相補的な塩基配列からなり、テルピネオール合成活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
(e)配列番号2、4、6、8、10または12のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするポリヌクレオチド
(f)前記(e)のいずれかのアミノ酸配列において、1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換および/または付加されたアミノ酸配列からなり、テルピネオール合成活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
(g)前記(e)のいずれかのアミノ酸配列に対して、90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、テルピネオール合成活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
(A)配列番号2、4、6、8、10または12のアミノ酸配列からなるタンパク質
(B)前記(A)のアミノ酸配列において、1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換および/または付加されたアミノ酸配列からなり、テルピネオール合成活性を有するタンパク質
(C)前記(A)のアミノ酸配列に対して、90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、テルピネオール合成活性を有するタンパク質
本発明のポリヌクレオチドは、前述のように、前記(a)〜(g)からなる群から選択された少なくとも一つのポリヌクレオチドであることを特徴とする。
FAfn01遺伝子(s+:シグナルペプチドのコード配列を含む)
1785bp(配列番号1)
ATGGCGTGTCTTCCATTCCACTACACGACTTACAGTCGATCACCTGCCGGAATATTGTTCCGATCGTCTCTGCCTTCTTCTCACTGTAGAGCACGCAGAAGCAGAAGCAATGAAAGTGCAAACCGCATTCGGTGTTGCAACAACACTCAAATTTCTCAGCCTTTACGGCGGACGGCGAACTATCCACCGACCATCTGGGAAAACAGCTATATTCAAGAACTCAATACTGATTATATGGAAGATGAGGAAACCATTGAAATCGGGAAGCTGAAGGAGTACGTCATGACAAGACTAATTATTAGTAACTCGGATCAAATTGAGCTCATTGATACTCTGCAACAGCTTGGGGTGGCATACCATTTTCAGGAGGAAATACAAAATATATTAGCCACCATATTTTGTTCAATAAAGAAAATAATTCCCACTATACATAATGATATTTATGCTACAGCCCTGCTCTTTAGGCTCCTTAGAGAGAAGGGTTTTCATGTCTCCACAAATATTTTCAACAACTTCAAAGAAGAGGGAGGAACTTTCAAGGCTTGCCTAAAGAATGATATTAAAGGCATGTTAAGCTTGTATGAAGCATCCTTCCTTGCTGTGGAAGGAGAGAATGAATTGGATGAAGCTAGACTCTTTGCAACCGAATGTCTGAAACATACGATGGAGAACTCGTTGTCGTTAGAGCCATCAATGAAAGAACGCATAGTTCATGCCTTGGAGCTTCCACTACATTGGAGGATGTCAAGACTACATAGCAGGTGGTTCATAGATCAATACGAGAAGGATGAAAAGATGAATCCCACATTGTTGAGATTGGCTAAGTTGGACTTCAATTTTGTGCAAACCATTTACAAAAGAGAGCTCAAGGAATTATCAAGGTGGTGGAGCAATCTGGATCTTCTTGGAGACAAACTAGGGTTTGCTAGAGACAGGTTGGTCGAGAATTACTTGTGGACAGTTGGTTCAGCCTTCGAGCCAAAGTTCTGGCAAAGTAGAGAAGCATTGACGAAGGCCAATTGTCTAATAACAACAATAGATGACATTTATGACGTCTATGGCACCTTGGATGAACTGGTGCTATTCACTGATGTCGTCGATAGGTGGGATGTCAATGCAATCGAACAACTTCCAGATTACATGAAGACTTGCCTTTTGGCACTCTTCAACACCACTAACGATACTGCCTATAAAATTTTGAACTTGAAGGGTGTAATCATAATTCCGCAGCTAAAGAAAGTGTGGGCAGATTTGTGTAAAGCATATTTGGTAGAGGCCAAGTGGTATCACAGTGGATATATGCCAACTCTGGAGGAATATCTAGACAATGGATGGATATCAATATCAGGGCATGTGGCATTAGCTCATGCTTTTTGTACAAGTGAAGACATAACATATAGAGCACTACAATGCTACAACCAGCTCTCTCCCAATTTACTCTTCCATTCTTCTGTGATTGTTCGGCTCGTCGACGATTTGGCAACATCAACTGCGGAGCTTGAGAGAGGTGATGTTCCAAAAGCAATCCAATGCTACATGAAACAGAATAGAGTTTCAGAGGAAGTAGCTCGAGAGAAAATTAAAGAGATGATTGTCTCCACTTGGGAAAAGTTGAATGGTGATCTCATTGCTACTTCCTCTGTTGTAGAATCGTTCCAATCAGTAGCACTGAATTTTCCTAGAATGGCACAATGCATATACCAGTATGGAGATGGATATGGGGATCCAACACAAAAAACTAAGGATCAAATCGTCTCTCTTCTTATACAACCTGTTTCCCTCTAA
FAfn01タンパク質(s+:シグナルペプチドを含む)
594aa(配列番号2)
MACLPFHYTTYSRSPAGILFRSSLPSSHCRARRSRSNESANRIRCCNNTQISQPLRRTANYPPTIWENSYIQELNTDYMEDEETIEIGKLKEYVMTRLIISNSDQIELIDTLQQLGVAYHFQEEIQNILATIFCSIKKIIPTIHNDIYATALLFRLLREKGFHVSTNIFNNFKEEGGTFKACLKNDIKGMLSLYEASFLAVEGENELDEARLFATECLKHTMENSLSLEPSMKERIVHALELPLHWRMSRLHSRWFIDQYEKDEKMNPTLLRLAKLDFNFVQTIYKRELKELSRWWSNLDLLGDKLGFARDRLVENYLWTVGSAFEPKFWQSREALTKANCLITTIDDIYDVYGTLDELVLFTDVVDRWDVNAIEQLPDYMKTCLLALFNTTNDTAYKILNLKGVIIIPQLKKVWADLCKAYLVEAKWYHSGYMPTLEEYLDNGWISISGHVALAHAFCTSEDITYRALQCYNQLSPNLLFHSSVIVRLVDDLATSTAELERGDVPKAIQCYMKQNRVSEEVAREKIKEMIVSTWEKLNGDLIATSSVVESFQSVALNFPRMAQCIYQYGDGYGDPTQKTKDQIVSLLIQPVSL
FAfn01遺伝子(s−:シグナルペプチドのコード配列を含まない)
1551bp(配列番号3)
ATGGAAGATGAGGAAACCATTGAAATCGGGAAGCTGAAGGAGTACGTCATGACAAGACTAATTATTAGTAACTCGGATCAAATTGAGCTCATTGATACTCTGCAACAGCTTGGGGTGGCATACCATTTTCAGGAGGAAATACAAAATATATTAGCCACCATATTTTGTTCAATAAAGAAAATAATTCCCACTATACATAATGATATTTATGCTACAGCCCTGCTCTTTAGGCTCCTTAGAGAGAAGGGTTTTCATGTCTCCACAAATATTTTCAACAACTTCAAAGAAGAGGGAGGAACTTTCAAGGCTTGCCTAAAGAATGATATTAAAGGCATGTTAAGCTTGTATGAAGCATCCTTCCTTGCTGTGGAAGGAGAGAATGAATTGGATGAAGCTAGACTCTTTGCAACCGAATGTCTGAAACATACGATGGAGAACTCGTTGTCGTTAGAGCCATCAATGAAAGAACGCATAGTTCATGCCTTGGAGCTTCCACTACATTGGAGGATGTCAAGACTACATAGCAGGTGGTTCATAGATCAATACGAGAAGGATGAAAAGATGAATCCCACATTGTTGAGATTGGCTAAGTTGGACTTCAATTTTGTGCAAACCATTTACAAAAGAGAGCTCAAGGAATTATCAAGGTGGTGGAGCAATCTGGATCTTCTTGGAGACAAACTAGGGTTTGCTAGAGACAGGTTGGTCGAGAATTACTTGTGGACAGTTGGTTCAGCCTTCGAGCCAAAGTTCTGGCAAAGTAGAGAAGCATTGACGAAGGCCAATTGTCTAATAACAACAATAGATGACATTTATGACGTCTATGGCACCTTGGATGAACTGGTGCTATTCACTGATGTCGTCGATAGGTGGGATGTCAATGCAATCGAACAACTTCCAGATTACATGAAGACTTGCCTTTTGGCACTCTTCAACACCACTAACGATACTGCCTATAAAATTTTGAACTTGAAGGGTGTAATCATAATTCCGCAGCTAAAGAAAGTGTGGGCAGATTTGTGTAAAGCATATTTGGTAGAGGCCAAGTGGTATCACAGTGGATATATGCCAACTCTGGAGGAATATCTAGACAATGGATGGATATCAATATCAGGGCATGTGGCATTAGCTCATGCTTTTTGTACAAGTGAAGACATAACATATAGAGCACTACAATGCTACAACCAGCTCTCTCCCAATTTACTCTTCCATTCTTCTGTGATTGTTCGGCTCGTCGACGATTTGGCAACATCAACTGCGGAGCTTGAGAGAGGTGATGTTCCAAAAGCAATCCAATGCTACATGAAACAGAATAGAGTTTCAGAGGAAGTAGCTCGAGAGAAAATTAAAGAGATGATTGTCTCCACTTGGGAAAAGTTGAATGGTGATCTCATTGCTACTTCCTCTGTTGTAGAATCGTTCCAATCAGTAGCACTGAATTTTCCTAGAATGGCACAATGCATATACCAGTATGGAGATGGATATGGGGATCCAACACAAAAAACTAAGGATCAAATCGTCTCTCTTCTTATACAACCTGTTTCCCTCTAA
FAfn01タンパク質(s−:シグナルペプチドを含まない)
516aa(配列番号4)
MEDEETIEIGKLKEYVMTRLIISNSDQIELIDTLQQLGVAYHFQEEIQNILATIFCSIKKIIPTIHNDIYATALLFRLLREKGFHVSTNIFNNFKEEGGTFKACLKNDIKGMLSLYEASFLAVEGENELDEARLFATECLKHTMENSLSLEPSMKERIVHALELPLHWRMSRLHSRWFIDQYEKDEKMNPTLLRLAKLDFNFVQTIYKRELKELSRWWSNLDLLGDKLGFARDRLVENYLWTVGSAFEPKFWQSREALTKANCLITTIDDIYDVYGTLDELVLFTDVVDRWDVNAIEQLPDYMKTCLLALFNTTNDTAYKILNLKGVIIIPQLKKVWADLCKAYLVEAKWYHSGYMPTLEEYLDNGWISISGHVALAHAFCTSEDITYRALQCYNQLSPNLLFHSSVIVRLVDDLATSTAELERGDVPKAIQCYMKQNRVSEEVAREKIKEMIVSTWEKLNGDLIATSSVVESFQSVALNFPRMAQCIYQYGDGYGDPTQKTKDQIVSLLIQPVSL
FAfn16遺伝子(s+:シグナルペプチドのコード配列を含む)
1788bp(配列番号5)
ATGGCGTGTCTTCCATTCCACTACACGACTTACAGTCGATCACCTGCCGGAATATTGTTCCGATCGTCTCTGCCTTCTTCTCACTGTAGAGCACGCAGAAGCAGAAGCAATGAAAGTGCAAACCGCATTCGGTGTTGCAACAACACTCAAATTTCTCAGCCTTTACGGCGGACGGCGAACTATCCACCGACCATCTGGGAAAACAGCTATATTCAAGAACTCAATACTGATTATATGCAGGAAGATGAGGAAACCATTGAAATCGGGAAGCTGAAGGAGTACGTCATGACAAGACTAATTATTAGTAACTCGGATCAAATTGAGCTCATTGATACTCTGCAACAGCTTGGGGTGGCATACCATTTTCAAGAGGAAATACAAAATATATTAGCCACCATATTTTGTTCAATAAAGAAAATAATTCCCACTATACATAATGATATTTATGCTACAGCCCTGCTCTTTAGGCTCCTTAGAGAGAAGGGTTTTCATGTCTCCACAAATATTTTCAACAACTTCAAAGAAGAGGGAGGAACTTTCAAGGCTTGCCTAAAGAATGATATTAAAGGCATGTTAAGCTTGTATGAAGCATCCTTCCTTGCTGTGGAAGGAGAGAATGAATTGGATGAAGCTAGACTCTTTGCAACCGAATGTCTGAAACATACGATGGAGAACTCGTTGTCGTTAGAGCCATCAATGAAAGAACGCATAGTTCATGCCTTGGAGCTTCCACTACATTGGAGGATGTCAAGACTACATAGCAGGTGGTTCATAGATCAATACGAGAAGGATGAAAAGATGAATCCCACATTGTTGAGATTGGCTAAGTTGGACTTCAATTTTGTGCAAACCATTTACAAAAGAGAGCTCAAGGAATTATCAAGGTGGTGGAGCAATCTGGATCTTCTTGGAGACAAACTAGGGTTTGCTAGAGACAGGTTGGTCGAGAATTACTTGTGGACAGTTGGTTCAGCCTTCGAGCCAAAGTTCTGGCAAAGTAGAGAAGCATTGACGAAGGCCAATTGTCTAATAACAACAATAGATGACATTTATGACGTCTATGGCACCTTGGATGAACTGGTGCTATTCACTGATGTCGTCGATAGGTGGGATGTCAATGCAATCGAACAACTTCCAGATTACATGAAGACTTGCCTTTTGGCACTCTTCAACACCACTAACGATACTGCCTATAAAATTTTGAACTTGAAGGGTGTAATCATAATTCCGCAGCTAAAGAAAGTGTGGGCAGATTTGTGTAAAGCATATTTGGTAGAGGCCAAGTGGTATCACAGTGGATATATGCCAACTCTGGAGGAATATCTAGACAATGGATGGATATCAATATCAGGGCATGTGGCATTAGCTCATGCTTTTTGTACAAGTGAAGACATAACATATAGAGCACTACAATGCTACAACCAGCTCTCTCCCAATTTACTCTTCCATTCTTCTGTGATTGTTCGGCTCGTCGACGATTTGGCAACATCAACTGCGGAGCTTGAGAGAGGTGATGTTCCAAAAGCAATCCAATGCTACATGAAACAGAATAGAGTTTCAGAGGAAGTAGCTCGAGAGAAAATTAAAGAGATGATTGTCTCCACTTGGGAAAAGTTGAATGGTGATCTCATTGCTACTTCCTCTGTTGTAGAATCGTTCCAATCAGTAGCACTGAATTTTCCTAGAATGGCACAATGCATATACCAGTATGGAGATGGATATGGGGATCCAACACAAAAAACTAAGGATCAAATCGTCTCTCTTCTTATACAACCTGTTTCCCTCTAA
FAfn16タンパク質(s+:シグナルペプチドを含む)
595aa(配列番号6)
MACLPFHYTTYSRSPAGILFRSSLPSSHCRARRSRSNESANRIRCCNNTQISQPLRRTANYPPTIWENSYIQELNTDYMQEDEETIEIGKLKEYVMTRLIISNSDQIELIDTLQQLGVAYHFQEEIQNILATIFCSIKKIIPTIHNDIYATALLFRLLREKGFHVSTNIFNNFKEEGGTFKACLKNDIKGMLSLYEASFLAVEGENELDEARLFATECLKHTMENSLSLEPSMKERIVHALELPLHWRMSRLHSRWFIDQYEKDEKMNPTLLRLAKLDFNFVQTIYKRELKELSRWWSNLDLLGDKLGFARDRLVENYLWTVGSAFEPKFWQSREALTKANCLITTIDDIYDVYGTLDELVLFTDVVDRWDVNAIEQLPDYMKTCLLALFNTTNDTAYKILNLKGVIIIPQLKKVWADLCKAYLVEAKWYHSGYMPTLEEYLDNGWISISGHVALAHAFCTSEDITYRALQCYNQLSPNLLFHSSVIVRLVDDLATSTAELERGDVPKAIQCYMKQNRVSEEVAREKIKEMIVSTWEKLNGDLIATSSVVESFQSVALNFPRMAQCIYQYGDGYGDPTQKTKDQIVSLLIQPVSL
FAfn16遺伝子(s−:シグナルペプチドのコード配列を含まない)
1554bp(配列番号7)
ATGCAGGAAGATGAGGAAACCATTGAAATCGGGAAGCTGAAGGAGTACGTCATGACAAGACTAATTATTAGTAACTCGGATCAAATTGAGCTCATTGATACTCTGCAACAGCTTGGGGTGGCATACCATTTTCAAGAGGAAATACAAAATATATTAGCCACCATATTTTGTTCAATAAAGAAAATAATTCCCACTATACATAATGATATTTATGCTACAGCCCTGCTCTTTAGGCTCCTTAGAGAGAAGGGTTTTCATGTCTCCACAAATATTTTCAACAACTTCAAAGAAGAGGGAGGAACTTTCAAGGCTTGCCTAAAGAATGATATTAAAGGCATGTTAAGCTTGTATGAAGCATCCTTCCTTGCTGTGGAAGGAGAGAATGAATTGGATGAAGCTAGACTCTTTGCAACCGAATGTCTGAAACATACGATGGAGAACTCGTTGTCGTTAGAGCCATCAATGAAAGAACGCATAGTTCATGCCTTGGAGCTTCCACTACATTGGAGGATGTCAAGACTACATAGCAGGTGGTTCATAGATCAATACGAGAAGGATGAAAAGATGAATCCCACATTGTTGAGATTGGCTAAGTTGGACTTCAATTTTGTGCAAACCATTTACAAAAGAGAGCTCAAGGAATTATCAAGGTGGTGGAGCAATCTGGATCTTCTTGGAGACAAACTAGGGTTTGCTAGAGACAGGTTGGTCGAGAATTACTTGTGGACAGTTGGTTCAGCCTTCGAGCCAAAGTTCTGGCAAAGTAGAGAAGCATTGACGAAGGCCAATTGTCTAATAACAACAATAGATGACATTTATGACGTCTATGGCACCTTGGATGAACTGGTGCTATTCACTGATGTCGTCGATAGGTGGGATGTCAATGCAATCGAACAACTTCCAGATTACATGAAGACTTGCCTTTTGGCACTCTTCAACACCACTAACGATACTGCCTATAAAATTTTGAACTTGAAGGGTGTAATCATAATTCCGCAGCTAAAGAAAGTGTGGGCAGATTTGTGTAAAGCATATTTGGTAGAGGCCAAGTGGTATCACAGTGGATATATGCCAACTCTGGAGGAATATCTAGACAATGGATGGATATCAATATCAGGGCATGTGGCATTAGCTCATGCTTTTTGTACAAGTGAAGACATAACATATAGAGCACTACAATGCTACAACCAGCTCTCTCCCAATTTACTCTTCCATTCTTCTGTGATTGTTCGGCTCGTCGACGATTTGGCAACATCAACTGCGGAGCTTGAGAGAGGTGATGTTCCAAAAGCAATCCAATGCTACATGAAACAGAATAGAGTTTCAGAGGAAGTAGCTCGAGAGAAAATTAAAGAGATGATTGTCTCCACTTGGGAAAAGTTGAATGGTGATCTCATTGCTACTTCCTCTGTTGTAGAATCGTTCCAATCAGTAGCACTGAATTTTCCTAGAATGGCACAATGCATATACCAGTATGGAGATGGATATGGGGATCCAACACAAAAAACTAAGGATCAAATCGTCTCTCTTCTTATACAACCTGTTTCCCTCTAA
FAfn16タンパク質(s−:シグナルペプチドを含まない)
517aa(配列番号8)
MQEDEETIEIGKLKEYVMTRLIISNSDQIELIDTLQQLGVAYHFQEEIQNILATIFCSIKKIIPTIHNDIYATALLFRLLREKGFHVSTNIFNNFKEEGGTFKACLKNDIKGMLSLYEASFLAVEGENELDEARLFATECLKHTMENSLSLEPSMKERIVHALELPLHWRMSRLHSRWFIDQYEKDEKMNPTLLRLAKLDFNFVQTIYKRELKELSRWWSNLDLLGDKLGFARDRLVENYLWTVGSAFEPKFWQSREALTKANCLITTIDDIYDVYGTLDELVLFTDVVDRWDVNAIEQLPDYMKTCLLALFNTTNDTAYKILNLKGVIIIPQLKKVWADLCKAYLVEAKWYHSGYMPTLEEYLDNGWISISGHVALAHAFCTSEDITYRALQCYNQLSPNLLFHSSVIVRLVDDLATSTAELERGDVPKAIQCYMKQNRVSEEVAREKIKEMIVSTWEKLNGDLIATSSVVESFQSVALNFPRMAQCIYQYGDGYGDPTQKTKDQIVSLLIQPVSL
FAfn27遺伝子(s+:シグナルペプチドのコード配列を含む)
1788bp(配列番号9)
ATGGCGTGTCTTCCATTCCACTACACGACTTACAGTCGATCACCTGCCGGAATATTGTTCCGATCGTCTCTGCCTTCTTCTCACTGTAGAGCACGCAGAAGCAGAAGCAATGAAAGTGCAAACCGCATTCGGTGTTGCAACAACACTCAAATTTCTCAGCCTTTACGGCGGACGGCGAACTATCCACCGACCATCTGGGAAAACAGCTATATTCAAGAACTCAATACTGATTATATGCAGGAAGATGAGGAAACCATTGAAATCGGGAAGCTGAAGGAGTACGTCATGACAAGACTAATTATTAGTAACTCGGATCAAATTGAGCTCATTGATACTCTGCAACAGCTTGGGGTGGCATACCATTTTCAGGAGGAAATACAAAATATATTAGCCACCATATTTTGTTCAATAAAGAAAATAATTCCCACTATACATAATGATATTTATGCTACAGCCCTGCTCTTTAGGCTCCTTAGAGAGAAGGGTTTTCATGTCTCCACAAATATTTTCAACAACTTCAAAGAAGAGGGAGGAACTTTCAAGGCTTGCCTAAAGAATGATATTAAAGGCATGTTAAGCTTGTATGAAGCATCCTTCCTTGCTGTGGAAGGAGAGAATGAATTGGATGAAGCTAGACTCTTTGCAACCGAATGTCTGAAACATACGATGGAGAACTCGTTGTCGTTAGAGCCATCAATGAAAGAACGCATAGTTCATGCCTTGGAGCTTCCACTACATTGGAGGATGTCAAGACTACATAGCAGGTGGTTCATAGATCAATACGAGAAGGATGAAAAGATGAATCCCACATTGTTGAGATTGGCTAAGTTGGACTTCAATTTTGTGCAAACCATTTACAAAAGAGAGCTCAAGGAATTATCAAGGTGGTGGAGCAATCTGGATCTTCTTGGAGACAAACTAGGGTTTGCTAGAGGCAGGTTGGTCGAGAATTACTTGTGGACAGTTGGTTCAGCCTTCGAGCCAAAGTTCTGGCAAAGTAGAGAAGCATTGACGAAGGCCAATTGTCTAATAACAACAATAGATGACATTTATGACGTCTATGGCACCTTGGATGAACTGGTGCTATTCACTGATGTCGTCGATAGGTGGGATGTCAATGCAATCGAACAACTTCCAGATTACATGAAGACTTGCCTTTTGGCACTCTTCAACACCACTAACGATACTGCCTATAAAATTTTGAACTTGAAGGGTGTAATCATAATTCCGCAGCTAAAGAAAGTGTGGGCAGATTTGTGTAAAGCATATTTGGTAGAGGCCAAGTGGTATCACAGTGGATATATGCCAACTCTGGAGGAATATCTAGACAATGGATGGATATCAATATCAGGGCATGTGGCATTAGCTCATGCTTTTTGTACAAGTGAAGACATAACATATAGAGCACTACAATGCTACAACCAGCTCTCTCCCAATTTACTCTTCCATTCTTCTGTGATTGTTCGGCTCGTCGACGATTTGGCAACATCAACTGCGGAGCTTGAGAGAGGTGATGTTCCAAAAGCAATCCAATGCTACATGAAACAGAATAGAGTTTCAGAGGAAGTAGCTCGAGAGAAAATTAAAGAGATGATTGTCTCCACTTGGGAAAAGTTGAATGGTGATCTCATTGCTACTTCCTCTGTTGTAGAATCGTTCCAATCAGTAGCACTGAATTTTCCTAGAATGGCACAATGCATATACCAGTATGGAGATGGATATGGGGATCCAACACAAAAAACTAAGGATCAAATCGTCTCTCTTCTTATACAACCTGTTTCCCTCTAA
FAfn27タンパク質(s+:シグナルペプチドを含む)
595aa(配列番号10)
MACLPFHYTTYSRSPAGILFRSSLPSSHCRARRSRSNESANRIRCCNNTQISQPLRRTANYPPTIWENSYIQELNTDYMQEDEETIEIGKLKEYVMTRLIISNSDQIELIDTLQQLGVAYHFQEEIQNILATIFCSIKKIIPTIHNDIYATALLFRLLREKGFHVSTNIFNNFKEEGGTFKACLKNDIKGMLSLYEASFLAVEGENELDEARLFATECLKHTMENSLSLEPSMKERIVHALELPLHWRMSRLHSRWFIDQYEKDEKMNPTLLRLAKLDFNFVQTIYKRELKELSRWWSNLDLLGDKLGFARGRLVENYLWTVGSAFEPKFWQSREALTKANCLITTIDDIYDVYGTLDELVLFTDVVDRWDVNAIEQLPDYMKTCLLALFNTTNDTAYKILNLKGVIIIPQLKKVWADLCKAYLVEAKWYHSGYMPTLEEYLDNGWISISGHVALAHAFCTSEDITYRALQCYNQLSPNLLFHSSVIVRLVDDLATSTAELERGDVPKAIQCYMKQNRVSEEVAREKIKEMIVSTWEKLNGDLIATSSVVESFQSVALNFPRMAQCIYQYGDGYGDPTQKTKDQIVSLLIQPVSL
FAfn27遺伝子(s−:シグナルペプチドのコード配列を含まない)
1554bp(配列番号11)
ATGCAGGAAGATGAGGAAACCATTGAAATCGGGAAGCTGAAGGAGTACGTCATGACAAGACTAATTATTAGTAACTCGGATCAAATTGAGCTCATTGATACTCTGCAACAGCTTGGGGTGGCATACCATTTTCAGGAGGAAATACAAAATATATTAGCCACCATATTTTGTTCAATAAAGAAAATAATTCCCACTATACATAATGATATTTATGCTACAGCCCTGCTCTTTAGGCTCCTTAGAGAGAAGGGTTTTCATGTCTCCACAAATATTTTCAACAACTTCAAAGAAGAGGGAGGAACTTTCAAGGCTTGCCTAAAGAATGATATTAAAGGCATGTTAAGCTTGTATGAAGCATCCTTCCTTGCTGTGGAAGGAGAGAATGAATTGGATGAAGCTAGACTCTTTGCAACCGAATGTCTGAAACATACGATGGAGAACTCGTTGTCGTTAGAGCCATCAATGAAAGAACGCATAGTTCATGCCTTGGAGCTTCCACTACATTGGAGGATGTCAAGACTACATAGCAGGTGGTTCATAGATCAATACGAGAAGGATGAAAAGATGAATCCCACATTGTTGAGATTGGCTAAGTTGGACTTCAATTTTGTGCAAACCATTTACAAAAGAGAGCTCAAGGAATTATCAAGGTGGTGGAGCAATCTGGATCTTCTTGGAGACAAACTAGGGTTTGCTAGAGGCAGGTTGGTCGAGAATTACTTGTGGACAGTTGGTTCAGCCTTCGAGCCAAAGTTCTGGCAAAGTAGAGAAGCATTGACGAAGGCCAATTGTCTAATAACAACAATAGATGACATTTATGACGTCTATGGCACCTTGGATGAACTGGTGCTATTCACTGATGTCGTCGATAGGTGGGATGTCAATGCAATCGAACAACTTCCAGATTACATGAAGACTTGCCTTTTGGCACTCTTCAACACCACTAACGATACTGCCTATAAAATTTTGAACTTGAAGGGTGTAATCATAATTCCGCAGCTAAAGAAAGTGTGGGCAGATTTGTGTAAAGCATATTTGGTAGAGGCCAAGTGGTATCACAGTGGATATATGCCAACTCTGGAGGAATATCTAGACAATGGATGGATATCAATATCAGGGCATGTGGCATTAGCTCATGCTTTTTGTACAAGTGAAGACATAACATATAGAGCACTACAATGCTACAACCAGCTCTCTCCCAATTTACTCTTCCATTCTTCTGTGATTGTTCGGCTCGTCGACGATTTGGCAACATCAACTGCGGAGCTTGAGAGAGGTGATGTTCCAAAAGCAATCCAATGCTACATGAAACAGAATAGAGTTTCAGAGGAAGTAGCTCGAGAGAAAATTAAAGAGATGATTGTCTCCACTTGGGAAAAGTTGAATGGTGATCTCATTGCTACTTCCTCTGTTGTAGAATCGTTCCAATCAGTAGCACTGAATTTTCCTAGAATGGCACAATGCATATACCAGTATGGAGATGGATATGGGGATCCAACACAAAAAACTAAGGATCAAATCGTCTCTCTTCTTATACAACCTGTTTCCCTCTAA
FAfn27タンパク質(s−:シグナルペプチドを含まない)
517aa(配列番号12)
MQEDEETIEIGKLKEYVMTRLIISNSDQIELIDTLQQLGVAYHFQEEIQNILATIFCSIKKIIPTIHNDIYATALLFRLLREKGFHVSTNIFNNFKEEGGTFKACLKNDIKGMLSLYEASFLAVEGENELDEARLFATECLKHTMENSLSLEPSMKERIVHALELPLHWRMSRLHSRWFIDQYEKDEKMNPTLLRLAKLDFNFVQTIYKRELKELSRWWSNLDLLGDKLGFARGRLVENYLWTVGSAFEPKFWQSREALTKANCLITTIDDIYDVYGTLDELVLFTDVVDRWDVNAIEQLPDYMKTCLLALFNTTNDTAYKILNLKGVIIIPQLKKVWADLCKAYLVEAKWYHSGYMPTLEEYLDNGWISISGHVALAHAFCTSEDITYRALQCYNQLSPNLLFHSSVIVRLVDDLATSTAELERGDVPKAIQCYMKQNRVSEEVAREKIKEMIVSTWEKLNGDLIATSSVVESFQSVALNFPRMAQCIYQYGDGYGDPTQKTKDQIVSLLIQPVSL
本発明の発現ベクターは、前述のように、前記本発明のポリヌクレオチドを含むことを特徴とする。本発明の発現ベクターによれば、例えば、前記本発明のポリヌクレオチドを容易に前記宿主へ導入でき、また、前記宿主における前記本発明のポリヌクレオチドの発現を、容易に制御できる。
本発明の形質転換体は、前記本発明のポリヌクレオチドが導入された非ヒト宿主であることを特徴とする。また、本発明の形質転換体は、前記ポリヌクレオチドを有する前記本発明の発現ベクターが導入された非ヒト宿主でもよい。以下、「本発明のポリヌクレオチドの導入」は、特に示さない限り、「本発明の発現ベクターの導入」の意味も含む。
本発明の非ヒト宿主の芳香性の改変方法は、前述のように、前記非ヒト宿主に、前記本発明のポリヌクレオチドを導入する工程を含むことを特徴とする。また、本発明の非ヒト宿主の芳香性の改変方法は、前記非ヒト宿主に、前記ポリヌクレオチドを含む前記本発明の発現ベクターを導入する工程を含むことを特徴としてもよい。
本発明のタンパク質は、前述のように、下記(A)〜(C)からなる群から選択された少なくとも一つのタンパク質であることを特徴とする。
(A)配列番号2、4、6、8、10または12のアミノ酸配列からなるタンパク質
(B)前記(A)のアミノ酸配列において、1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換および/または付加されたアミノ酸配列からなり、テルピネオール合成活性を有するタンパク質
(C)前記(A)のアミノ酸配列に対して、90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、テルピネオール合成活性を有するタンパク質
本発明のタンパク質の製造方法は、テルピネオール合成活性を有するタンパク質の製造方法であり、前記本発明のポリヌクレオチドを発現させることにより、前記ポリヌクレオチドがコードするテルピネオール合成活性を有するタンパク質を合成するタンパク質合成工程を含むことを特徴とする。
本発明のテルピネオールの製造方法は、前記本発明のTESタンパク質を使用し、前記TESタンパク質のテルピネオール合成活性により、テルピネオールを合成するテルピネオール合成工程を含むことを特徴とする。
単子葉植物フリージア花弁から、TES遺伝子のcDNAのクローニングを行った。
前記3種類のフリージア由来TES遺伝子のcDNAを、それぞれ大腸菌に導入し、組換えTESタンパク質を発現させた。そして、基質としてゲラニルピロリン酸(GPP)を用いて、テルピネオール合成活性を確認した。
シグナルペプチドのコード配列を含む配列番号1の塩基配列からなるFAfn01 cDNA(s+)を発現するための発現用ベクターpSPB5065を、下記の方法により構築した。前記発現ベクターは、In−Fusion Advantage PCR Cloning Kit(Clontech社)を用いて構築し、組換えTESタンパク質の発現は、pET発現システム(Novagen社)を用いて行った。
(FAfn01用プライマー)
InF−pET−FAfn01−F(配列番号13)
5’-CGCGGCAGCCATATGGAAGATGAGGAAACCAT-3’
InF−pET−FAfn01−R(配列番号14)
5’-AGCCGGATCCTCGAGTTAGAGGGAAACAGGTTGTA-3’
(PCR反応液)
pSPB5047 100pg
1x Prime STAR Max(Takara社)
プライマー 各0.2pmol/μl
総体積 20μl
(FAfn16用およびFAfn27用プライマー)
InF−pET−FAfn16/27−F(配列番号15)
5’-CGCGGCAGCCATATGCAGGAAGATGAGGAAA-3’
InF−pET−FAfn16/27−R(配列番号16)
5’-AGCCGGATCCTCGAGTTAGAGGGAAACAGGTTGTA-3’
前記(1)で得られた各形質転換株を用いて、下記の方法により、各組換えTESタンパク質の発現を、それぞれ誘導した。組換えTESタンパク質の発現誘導は、Overnight Express Autoinduction System 1(Novagen社)を用いて行った。
前記粗酵素液に、試薬[10μmol/L GPP、1mmol/L MgCl2、0.5mmol/L MnCl2、0.1mmol/L NaWO4、0.05mmol/L NaF]を添加し、全量3mlの反応液を調製した。そして、この反応液を、30℃で3時間反応させた。なお、反応中、容器内の上部にヘッドスペース成分の捕集剤として、MonoTrap DCC18(ジーエルサイエンス社)を1枚吊るしておいた。前記ヘッドスペース中に揮発した生成成分を、前記捕集剤で採集した。
キャピラリーカラム:HP INNOWax
(60m×0.25mm×0.25μm、Agilent社)
キャリアガス:He
温度条件:40℃で10分間保持後、5℃/minで240℃まで昇温し、最後に240℃で30分間保持
注入口温度:250℃
トランスファーライン温度:230℃
試料:スプリットレスモードで1μl注入
Claims (21)
- 下記(a)〜(g)からなる群から選択された少なくとも一つのポリヌクレオチド。
(a)配列番号1、3、5、7、9または11の塩基配列からなるポリヌクレオチド
(b)前記(a)のいずれかの塩基配列において、1もしくは数個の塩基が欠失、置換および/または付加された塩基配列からなり、テルピネオール合成活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
(c)前記(a)のいずれかの塩基配列に対して、90%以上の同一性を有する塩基配列からなり、テルピネオール合成活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
(d)前記(a)のいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチドに対して、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドに相補的な塩基配列からなり、テルピネオール合成活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
(e)配列番号2、4、6、8、10または12のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするポリヌクレオチド
(f)前記(e)のいずれかのアミノ酸配列において、1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換および/または付加されたアミノ酸配列からなり、テルピネオール合成活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
(g)前記(e)のいずれかのアミノ酸配列に対して、90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、テルピネオール合成活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド - 前記テルピネオール合成活性が、α−テルピネオール合成活性である、請求項1記載のポリヌクレオチド。
- 請求項1または2記載のポリヌクレオチドからなることを特徴とするテルピネオール合成酵素遺伝子。
- 請求項1または2記載のポリヌクレオチドを含むことを特徴とする発現ベクター。
- 請求項1または2記載のポリヌクレオチドまたは請求項4記載の発現ベクターが導入された非ヒト宿主であることを特徴する形質転換体。
- 前記非ヒト宿主が、植物体またはその部分である、請求項5記載の形質転換体。
- 前記植物が、カーネーションまたはトレニアである、請求項6記載の形質転換体。
- 請求項5から7のいずれか一項に記載の形質転換体と同一の性質を有することを特徴とする、前記形質転換体の子孫、栄養繁殖体、器官、組織または細胞。
- 請求項5から8のいずれか一項に記載の形質転換体、もしくは、形質転換体の子孫、栄養繁殖体、器官、組織または細胞の加工品。
- 非ヒト宿主に、請求項1もしくは2記載のポリヌクレオチド、または請求項4記載の発現ベクターを導入する工程を含むことを特徴とする非ヒト宿主の芳香性の改変方法。
- 前記非ヒト宿主が、植物体またはその部分である、請求項10記載の芳香性の改変方法。
- 前記植物が、カーネーションまたはトレニアである、請求項11記載の芳香性の改変方法。
- 請求項10から12のいずれか一項に記載の芳香性の改変方法により、非ヒト宿主の芳香性を改変する工程を含むことを特徴とする、芳香性改変非ヒト宿主の製造方法。
- 請求項5から7のいずれか一項に記載の形質転換体を、栄養繁殖する工程を含むことを特徴とする芳香性改変非ヒト宿主の製造方法。
- 下記(A)〜(C)からなる群から選択された少なくとも一つのタンパク質。
(A)配列番号2、4、6、8、10または12のアミノ酸配列からなるタンパク質
(B)前記(A)のアミノ酸配列において、1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換および/または付加されたアミノ酸配列からなり、テルピネオール合成活性を有するタンパク質
(C)前記(A)のアミノ酸配列に対して、90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、テルピネオール合成活性を有するタンパク質 - 前記テルピネオール合成活性が、α−テルピネオール合成活性である、請求項15記載のタンパク質。
- 請求項1または2記載のポリヌクレオチドを発現させることにより、前記ポリヌクレオチドがコードするテルピネオール合成活性を有するタンパク質を合成するタンパク質合成工程を含むことを特徴とする、テルピネオール合成活性を有するタンパク質の製造方法。
- 請求項15または16記載のタンパク質を使用し、前記タンパク質のテルピネオール合成活性により、テルピネオールを合成するテルピネオール合成工程を含むことを特徴とするテルピネオールの製造方法。
- 前記テルピネオールが、α−テルピネオールである、請求項18記載の製造方法。
- さらに、請求項17記載のタンパク質の製造方法により、前記タンパク質を合成するタンパク質合成工程を含み、
前記テルピネオール合成工程において、前記合成したタンパク質を使用する、請求項18または19記載の製造方法。 - 前記タンパク質合成工程が、前記ポリヌクレオチドが導入された非ヒト宿主を使用し、前記非ヒト宿主の培養により、前記非ヒト宿主において前記ポリヌクレオチドを発現させ、前記ポリヌクレオチドがコードするテルピネオール合成活性を有するタンパク質を合成する工程であり、
前記テルピネオール合成工程が、前記非ヒト宿主において、前記タンパク質のテルピネオール合成活性により、テルピネオールを合成する工程である、請求項20記載の製造方法。
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