JP7179354B2 - 皮膚処置のためのイオン種に基づく局所処方物 - Google Patents
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Description
本出願は、2016年8月29日に出願された米国出願番号第62/380,761号に基づく利益および優先権を主張しており、ここで、この米国出願の全体が参考として本明細書によって援用されることが容認される。
本発明は、国立衛生研究所によって授与された助成金番号5R21CA19133-02の下で政府の支援を受けてなされた。政府は本発明において一定の権利を有する。
2016年8月15日に作成され、サイズが3,132バイトでファイル名が「UCSB_2017_042_ST25.txt」のテキストファイルとして提出した配列表は、連邦規則集第37巻§1.52(e)(5)に従って、本明細書中で参照により援用される。
本発明の分野は、経皮薬物送達処方物、皮膚疾患の処置などのための局所投与処方物、ならびにこれらの処方物の作製方法および使用方法である。
皮膚疾患は、全世界の人口の70%以上が罹患している最も一般的なヒトの疾病の1つである(Hayら,Journal of Investigative Dermatology,134:1527-1534(2014))。皮膚疾患の症状は、単なる審美上の症状(例えば、セルライト、皺、および褐色斑点)から、衰弱、さらには致命的症状(例えば、激痛、皮膚バリアの破壊、脱水症、および全身性感染)にまで及ぶ(Zakrewskyら,Journal of Controlled Release,218:445-456(2015))。皮膚疾患は罹患率が高く且つ症状が人目につくことに加えて、皮膚疾患が重度であれば罹患率および死亡率が高くなるということが重なると、著しい身体的、感情的および経済的な負担となる(Hayら,Journal of Investigative Dermatology,134:1527-1534(2014);Bickersら,Journal of the American Academy of Dermatology,55:490-500(2006))。皮膚疾患は、世界的な非致死性疾病負荷の4番目の主因であると推定され、その負荷は慢性閉塞性肺疾患、真性糖尿病、変形性関節症、および薬物乱用より大きい(Hayら,Journal of Investigative Dermatology,134:1527-1534(2014)。しかし、皮膚疾患の有効な処置方法に対する取り組みは依然として不十分なままである(Hayら,Journal of Investigative Dermatology,134:1527-1534(2014);Bickersら,Journal of the American Academy of Dermatology,55:490-500(2006);Freeman E.E.,Journal of Investigative Dermatology,134:2663-2665(2014))。
治療剤、予防剤、または診断剤の経皮輸送の改善のための組成物を本明細書中に開示する。組成物は、高分子性アニオンとアルキル鎖を有するカチオンとの複合体を含む。組成物は、典型的には、電荷が中性であり、室温および標準圧力で液体の形態である。いくつかの態様では、高分子性アニオンとアルキル鎖カチオンとの比は、1:1から逸脱し得る。この態様では、ナトリウムまたはクロリドなどのさらなる小さな対イオンは、電荷が中性の組成物を提供するのに十分な量で存在し得る。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される:
(項目1)
高分子アニオン、および
カチオン;
を含む複合体を含む高分子の経皮送達のための組成物であって、
前記複合体が皮膚に対して非刺激性であり、
前記組成物が皮膚への局所適用に適した形態である、組成物。
(項目2)
前記組成物が室温および標準圧力で液体である、項目1に記載の組成物。
(項目3)
前記高分子アニオンおよび前記カチオンが、0.5:1、1:1、または2:1の電荷比で存在する、項目1または項目2に記載の組成物。
(項目4)
前記高分子アニオンが、核酸、ペプチド、タンパク質、およびポリサッカリドからなる群から選択される高分子である、項目1~3のいずれか1項に記載の組成物。
(項目5)
前記高分子アニオンが核酸である、項目1~4のいずれか1項に記載の組成物。
(項目6)
前記高分子アニオンが、マイクロRNA(miRNA)、低分子ヘアピン型RNA(shRNA)、および低分子干渉RNA(siRNA)からなる群から選択されるRNA干渉分子であり、好ましくは、前記高分子アニオンがsiRNAである、項目1~5のいずれか1項に記載の組成物。
(項目7)
前記高分子アニオンが二本鎖siRNAであり、ここで、各鎖が20~25ヌクレオチドの範囲の長さを有する、項目1~6のいずれか1項に記載の組成物。
(項目8)
前記高分子アニオンが二本鎖siRNAであり、ここで、各鎖が23ヌクレオチドの長さを有する、項目1~7のいずれか1項に記載の組成物。
(項目9)
前記高分子アニオンが二本鎖siRNAであり、ここで、各鎖が21ヌクレオチドの長さを有する、項目1~7のいずれか1項に記載の組成物。
(項目10)
前記高分子アニオンがポリサッカリドである、項目1~4のいずれか1項に記載の組成物。
(項目11)
前記ポリサッカリドが、ヒアルロン酸、カルボキシメチルセルロース、アラビアゴム、蜂蜜、ヒドロキシプロピルデンプンホスファート、ムコ多糖、コンドロイチン、ペクチン、糖テンシド、海藻ポリサッカリド、トラガカント(tragant)、キサンタンガム、ならびにその誘導体およびその組み合わせからなる群から選択され、好ましくは、前記ポリサッカリドがヒアルロン酸である、項目10に記載の組成物。
(項目12)
前記カチオンが、3個の炭素原子から20個の炭素原子までの範囲の長さを有するアルキル鎖を含む、項目1~11のいずれか1項に記載の組成物。
(項目13)
前記カチオンが6個の炭素原子から16個の炭素原子までの範囲の長さを有するアルキル鎖を含む、項目1~12のいずれか1項に記載の組成物。
(項目14)
前記カチオンが、式II:
の構造を有し、
式中、nは3~19の範囲(両端の値を含む)の整数である、項目1~13のいずれか1項に記載の組成物。
(項目15)
前記カチオン性界面活性剤がベンジルジメチルドデシルアンモニウムではない、項目14に記載の組成物。
(項目16)
前記カチオンが、ベンジルジメチルオクチルアンモニウム、ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウム、およびベンジルジメチルステアリルアンモニウムからなる群から選択されるカチオン性界面活性剤である、項目14に記載の組成物。
(項目17)
前記複合体のオクタノール/水分配係数(P o/w )によって決定される前記複合体の疎水性が、前記高分子アニオンがナトリウムカチオンと複合体化した場合の前記高分子アニオンの疎水性と比較して、少なくとも1ログ単位(LogP o/w )増加する、項目1~16のいずれか1項に記載の組成物。
(項目18)
前記複合体の疎水性が、前記高分子アニオンがナトリウムカチオンと複合体化した場合の前記高分子アニオンの疎水性と比較した場合、1~5ログ単位(LogP o/w )増加する、項目17に記載の組成物。
(項目19)
前記カチオンが、多孔度を増大させるかまたは角質層を除去するためのさらなる処置がない場合に角質層を横切るのに十分に前記高分子アニオンの疎水性を増大させる、項目1~18のいずれか1項に記載の組成物。
(項目20)
前記高分子アニオンおよび前記カチオンのいずれか単独または両方が皮膚を刺激する、項目1~19のいずれか1項に記載の組成物。
(項目21)
ナトリウムカチオンと複合体化した高分子アニオンのin vitroでの細胞傷害性と比較して実質的に同一である、in vitroでの細胞に対する細胞傷害性を有する、項目1~20のいずれか1項に記載の組成物。
(項目22)
前記複合体の電荷が中性である、項目1~21のいずれか1項に記載の組成物。
(項目23)
前記カチオンが、式I、
の構造を有し、
式中、
Qは窒素(N)またはリン(P)であり、
R1、R2、R3、およびR4は、独立して、存在しないか、水素、置換アルキル、非置換アルキル、置換アルケニル、非置換アルケニル、置換アルキニル、非置換アルキニル、置換アルコキシ、非置換アルコキシ、置換アミノ、非置換アミノ、置換アルキルアミノ、非置換アルキルアミノ、置換アルキルチオ、または非置換アルキルチオ、置換アリール、非置換アリール、置換ヘテロアリール、非置換ヘテロアリール、置換C3~C30シクロアルキル、非置換C3~C30シクロアルキル、置換ヘテロシクリル、非置換ヘテロシクリルであり、R1、R2、R3、およびR4の任意の対を独立して組み合わせて5員環および/または6員環を形成し、ここで、R1、R2、R3、およびR4の任意の対の組み合わせから形成された前記5員環および/または6員環は、任意選択的に、さらなるヘテロ原子を含む、項目1~13のいずれか1項に記載の組成物。
(項目24)
前記カチオンが、セチルトリメチルアンモニウム、デシルトリメチルアンモニウム、ベンジルジメチルドデシルアンモニウム、ミリスチルトリメチルアンモニウム、またはドデシルピリジニウムではない、項目23に記載の組成物。
(項目25)
R1、R2、R3、およびR4のうちの少なくとも1つが、独立して、置換アルキルであり、ここで、前記置換アルキルが、置換アラルキルまたは非置換アラルキルである、項目23に記載の組成物。
(項目26)
R1、R2、R3、およびR4のうちの少なくとも1つが、独立して、置換アルキルであり、ここで、前記置換アルキルが、置換アラルキルまたは非置換アラルキルであり、
但し、前記カチオンがベンジルジメチルドデシルアンモニウムではないことを条件とする、項目23に記載の組成物。
(項目27)
R1が、独立して、置換アルキルであり、ここで、前記置換アルキルが、置換アラルキルまたは非置換アラルキルであり、R2、R3、およびR4が、独立して、置換アルキルまたは非置換アルキルであり、
但し、R2、R3、およびR4が置換アルキルである場合、前記置換アルキルは、置換アラルキルまたは非置換アラルキルではないことを条件とする、項目23に記載の組成物。
(項目28)
R1が、独立して、置換アルキルであり、ここで、前記置換アルキルが、置換アラルキルまたは非置換アラルキルであり、
ここで、R2、R3、およびR4が、独立して、置換アルキルまたは非置換アルキルであり、
但し、R2、R3、およびR4が置換アルキルである場合、前記置換アルキルは、置換アラルキルまたは非置換アラルキルではないことを条件とし、
但し、前記カチオン性界面活性剤はベンジルジメチルドデシルアンモニウムではないことを条件とする、項目23に記載の組成物。
(項目29)
1つまたは複数の皮膚状態の処置を必要とする被験体において1つまたは複数の皮膚状態を処置する方法であって、前記被験体の皮膚に有効量の項目1~28のいずれか1項に記載の組成物を局所投与する工程を含む、方法。
(項目30)
前記組成物の局所投与工程の前、後、または同時に、
前記皮膚が、皮膚の多孔度を増加させるか、角質層の全部または一部を除去するか、角質層を介して前記複合体を押すか、そうでなければ、皮膚の1つまたは複数の層を介した前記組成物または複合体の輸送を補助するためのさらなる処置に供されない、項目29に記載の方法。
I.定義
用語「アルキル鎖」は、直鎖、分枝鎖、および環式の炭化水素基をいう。別段の指定がない限り、アルキル基には、1つまたは複数の二重結合または三重結合を含む炭化水素基が含まれる。少なくとも1つの環系を含むアルキル基は、シクロアルキル基である。少なくとも1つの二重結合を含むアルキル基はアルケニル基であり、少なくとも1つの三重結合を含むアルキル基はアルキニル基である。
本明細書中に記載の組成物は、高分子性アニオンおよびアルキル鎖を有するカチオンの複合体を含む。組成物は、ヒトまたは他の哺乳動物などの被験体への局所投与に適している。組成物は、典型的には、電荷が中性である。
イオン液体(IL)は、ほとんどの従来の塩が固体である温度またはそれに近傍の温度で液体である結晶性もしくは無定形の塩、双性イオン、またはそれらの混合物である。例えば、イオン液体は、200℃未満、または100℃未満、または80℃未満の温度で液体状態にある。いくつかのイオン液体は、室温付近の融解温度(例えば、10℃と40℃との間または15℃と35℃との間)を有する。
複合体中の高分子アニオンは、典型的には、500Daを超える、任意選択的に750Daを超える、800Daを超える、900Daを超える、1kDaを超える、または5kDaを超える分子量を有する。任意選択的に、高分子アニオンは、10kDaを超える、15kDaを超える、20kDaを超える、30kDaを超える、40kDaを超える分子量を有する。高分子アニオンのサイズは、一般に、500kDa未満、400kDa未満、300kDa未満、100kDa未満、任意選択的に50kDa未満である。例えば、高分子アニオンは、典型的には、500Da~50kDa、500Da~100kDa、500Da~300kDa、500Da~400kDa、500Da~500kDa、750Da~50kDa、750Da~100kDa、750Da~300kDa、750Da~400kDa、750Da~500kDa、800Da~50kDa、800Da~100kDa、800Da~300kDa、800Da~400kDa、800Da~500kDa、900Da~50kDa、900Da~100kDa、900Da~300kDa、900Da~400kDa、900Da~500kDa、1kDa~50kDa、1kDa~100kDa、1kDa~300kDa、1kDa~400kDa、1kDa~500kDa、5kDa~50kDa、5kDa~100kDa、5kDa~300kDa、5kDa~400kDa、5kDa~500kDa、10kDa~50kDa、10kDa~100kDa、10kDa~300kDa、10kDa~400kDa、10kDa~500kDa、15kDa~50kDa、15kDa~100kDa、15kDa~300kDa、15kDa~400kDa、または15kDa~500kDaの範囲内の分子量を有する。
治療的用途、診断的用途、予防的用途、栄養補助的用途、または薬物送達用途のための任意の核酸を、IL組成物中で使用することができる。適切な核酸には、相補DNA(cDNA)、DNAアプタマー、DNAザイム、RNAアプタマー、外部ガイド配列、RNA干渉分子(低分子干渉RNA、アンチセンスRNA、低分子ヘアピン型RNA、ミクロRNA(miRNA)など)、モルホリノ、伝令RNA(mRNA)、長鎖非コードRNA(lncRNA)、長鎖遺伝子間非コードRNA(lincRNA)、ならびにリボザイム、および三重鎖形成分子が含まれる。核酸は、核酸が細胞内に到達した時点で遺伝子の機能を調整することができる。
適切なウイルスベクターには、組み換えのレトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、およびバキュロウイルスが含まれる。これらの発現ベクターは、当該分野で周知である(Boeckle and Wagner,The AAPS Journal,8(4):E731-E742(2006);Hu,Acta Pharmacologica Sinica,26(4):405-416(2005))。細菌発現ベクター(プラスミド、コスミド、ファージミド、およびこれらの等価物が含まれる)は当該分野で公知であり、T.A.Brown.Chapter 2-Vectors for Gene Cloning:Plasmids and Bacteriophages.Gene Cloning and DNA Analysis:An Introduction(6th ed.).(2010)Wiley-Blackwell.ISBN 978-1405181730で詳細に考察されている。
一定の態様では、高分子アニオンは、ペプチドまたはタンパク質である。適切なペプチドまたはタンパク質には、健康な皮膚細胞または罹患した皮膚細胞に導入することが必要であるか望ましい任意のペプチドまたはタンパク質が含まれる。例えば、皮膚細胞に対して抗老化応答、抗炎症性応答、抗原性応答、抗増殖性応答、または抗アポトーシス性応答を付与するペプチドは、高分子性アニオンとして適切であり得る。
一定の態様では、高分子アニオンはポリサッカリドであり得る。ポリサッカリドは、ポリサッカリドが正味の負電荷を有することを条件として、中性、正電荷、または負電荷のモノサッカリド単位を含むことができる。1つまたは複数のモノサッカリド単位は、直鎖状または環状であり得る。環状単位は、α-アノマーまたはβ-アノマーと、L-異性体またはD-異性体との任意の組み合わせであり得る。ポリサッカリドは、天然由来のものまたは合成由来のものであり得る。
複合体中のアルキル鎖を有する適切なカチオンは、カチオン性界面活性剤を含む。カチオン性界面活性剤は、以下の一般式:
を有し、
式中、
Qは窒素(N)またはリン(P)であり、
R1、R2、R3、およびR4は、独立して、存在しないか、水素、置換アルキル、非置換アルキル、置換アルケニル、非置換アルケニル、置換アルキニル、非置換アルキニル、置換アルコキシ、非置換アルコキシ、置換アミノ、非置換アミノ、置換アルキルアミノ、非置換アルキルアミノ、置換アルキルチオ、または非置換アルキルチオ、置換アリール、非置換アリール、置換ヘテロアリール、非置換ヘテロアリール、置換C3~C30シクロアルキル、非置換C3~C30シクロアルキル、置換ヘテロシクリル、非置換ヘテロシクリルであり、R1、R2、R3、およびR4の任意の対を独立して組み合わせて5員環および/または6員環を形成し、ここで、R1、R2、R3、およびR4の任意の対の組み合わせから形成された前述の5員環および/または6員環は、任意選択的に、さらなるヘテロ原子を含む。
(式中、nは、3と19との間の任意の整数(3または19が含まれる)である)を有する。式IIの範囲内のカチオン性界面活性剤の例を、表4および5に示す。
上記の複合体に加えて、組成物は、in vivoで治療効果、診断効果、予防効果、または栄養学的効果を提供する1つまたは複数のさらなる化学分子または生体分子を任意選択的にさらに含む。分子(本明細書中で、「薬物」ともいう)は、処置または予防される疾患または障害に基づいて選択される。薬物は、タンパク質またはペプチドなどの小分子または高分子であり得る。
抗生物質(例えば、ネオマイシン、ストレプトマイシン、クロラムフェニコール、セファロスポリン、アンピシリン、ペニシリン、テトラサイクリン、およびシプロフロキサシン);
抗糖尿病薬(例えば、ビグアニドおよびスルホニル尿素誘導体);
抗真菌剤(例えば、グリセオフルビン、ケトコナゾール、イトラコナゾール(itraconizole)、アンホテリシンB、ナイスタチン、およびカンジシジン);
血圧降下剤(例えば、プロプラノロール、プロパフェノン、オクスプレノロール(oxyprenolol)、ニフェジピン、レセルピン、トリメタファン、フェノキシベンズアミン、パルギリン塩酸塩、デセルピジン、ジアゾキシド、モノ硫酸グアネチジン、ミノキシジル、レシンナミン、ニトロプルシッドナトリウム、インドジャボク、アルセロキシロン、およびフェントラミン);
抗炎症剤(例えば、(非ステロイド性)インドメタシン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、ナプロキセン、イブプロフェン、ラミフェナゾン、ピロキシカム、(ステロイド性)コルチゾン、デキサメタゾン、フルアザコート、セレコキシブ、ロフェコキシブ、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、およびプレドニゾン);
抗新生物薬(例えば、シクロホスファミド、アクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、メトトレキサート、フルオロウラシル、カルボプラチン、カルムスチン(BCNU)、メチル-CCNU、シスプラチン、エトポシド、カンプトセシンおよびその誘導体、フェネステリン、パクリタキセルおよびその誘導体、ドセタキセルおよびその誘導体、ビンブラスチン、ビンクリスチン、タモキシフェン、およびピポスルファン);
免疫抑制剤(例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、ミゾリビン、およびFK506(タクロリムス));
抗片頭痛剤(例えば、エルゴタミン、プロプラノロール、ムチン酸イソメテプテン、およびジクロラルフェナゾン);
抗狭心症剤(例えば、β-アドレナリン遮断薬;カルシウムチャネル遮断薬(ニフェジピンおよびジルチアゼムなど);および硝酸塩(ニトログリセリン、二硝酸イソソルビド、四硝酸ペンタエリスリトール、および四硝酸エリスリチルなど));
抗関節炎剤(例えば、フェニルブタゾン、スリンダク、ペニシラミン、サルサラート、ピロキシカム、アザチオプリン、インドメタシン、メクロフェナマート、金チオリンゴ酸ナトリウム、ケトプロフェン、オーラノフィン、オーロチオグルコース、およびトルメチンナトリウム);
抗痛風剤(例えば、コルヒチンおよびアロプリノール);
抗凝固薬(例えば、ヘパリン、ヘパリンナトリウム、およびワルファリンナトリウム);
血栓溶解剤(例えば、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、およびアルテプラーゼ);
抗線維素溶解剤(例えば、アミノカプロン酸);
血液動態剤(例えば、ペントキシフィリン);
抗血小板薬(例えば、アスピリン);
抗ヒスタミン薬/止痒薬(例えば、ヒドロキシジン、ジフェンヒドラミン、クロルフェニラミン、マレイン酸ブロムフェニラミン、シプロヘプタジン塩酸塩、テルフェナジン、フマル酸クレマスチン、トリプロリジン、カルビノキサミン、ジフェニルピラリン、フェニンダミン、アザタジン、トリペレンナミン、マレイン酸デクスクロルフェニラミン、メトジラジン、および);
カルシウム調節に有用な薬剤(例えば、カルシトニンおよび副甲状腺ホルモン);
抗菌剤(例えば、硫酸アミカシン、アズトレオナム、クロラムフェニコール、パルミチン酸クロラムフェニコール、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、パルミチン酸クリンダマイシン、リン酸クリンダマイシン、メトロニダゾール、メトロニダゾール塩酸塩、硫酸ゲンタマイシン、塩酸リンコマイシン、硫酸トブラマイシン、バンコマイシン塩酸塩、硫酸ポリミキシンB、コリスチメタートナトリウム、および硫酸コリスチン);
抗ウイルス剤(例えば、インターフェロンα、β、またはγ、ジドブジン、塩酸アマンタジン、リバビリン、およびアシクロビル);
抗菌薬(例えば、セファロスポリン(セファゾリンナトリウム、セフラジン、セファクロール、セファピリンナトリウム、セフチゾキシムナトリウム、セフォペラゾンナトリウム、セフォテタン二ナトリウム、セフロキシムeアゾチル、セフォタキシムナトリウム、セファドロキシル一水和物、セファレキシン、セファロチンナトリウム、塩酸セファレキシン一水和物、セファマンドールナファート、セフォキシチンナトリウム、セフォニシドナトリウム、セフォラニド、セフトリアキソンナトリウム、セフタジジム、セファドロキシル、セフラジン、およびセフロキシムナトリウムなど);ペニシリン(アンピシリン、アモキシシリン、ペニシリンGベンザチン、シクラシリン、アンピシリンナトリウム、ペニシリンGカリウム、ペニシリンVカリウム、ピペラシリンナトリウム、オキサシリンナトリウム、塩酸バカンピシリン、クロキサシリンナトリウム、チカルシリン二ナトリウム、アズロシリンナトリウム、カルベニシリンインダニルナトリウム、ペニシリンGプロカイン、メチシリンナトリウム、およびナフシリンナトリウムなど);エリスロマイシン(エチルコハク酸エリスロマイシン、エリスロマイシン、エリスロマイシンエストラート、ラクトビオン酸エリスロマイシン、ステアリン酸エリスロマイシン、およびエチルコハク酸エリスロマイシンなど);ならびにテトラサイクリン(塩酸テトラサイクリン、ドキシサイクリンヒクラート、ミノサイクリン塩酸塩、アジスロマイシン、クラリスロマイシンなど));
抗感染薬(例えば、GM-CSF);
ステロイド性の化合物、ホルモン、およびホルモンアナログ(例えば、インクレチンおよびインクレチン模倣物(GLP-1およびエクセナチドなど)、アンドロゲン(ダナゾール、シピオン酸テストステロン、フルオキシメステロン、エチルテストステロン、エナント酸テストステロン、メチルテストステロン、およびフルオキシメステロンなど);エストロゲン(エストラジオール、エストロピパート、および結合型エストロゲンなど);プロゲスチン(メトキシプロゲステロン酢酸エステルおよび酢酸ノルエチンドロンなど);コルチコステロイド(トリアムシノロン、ベタメタゾン、ベタメタゾンリン酸エステルナトリウム、デキサメタゾン、デキサメタゾンリン酸エステルナトリウム、酢酸デキサメタゾン、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン酢酸エステル懸濁剤、トリアムシノロンアセトニド、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロンリン酸エステルナトリウム、メチルプレドニゾロンコハク酸エステルナトリウム、ヒドロコルチゾンコハク酸エステルナトリウム、トリアムシノロンヘキサアセトニド、ヒドロコルチゾン、シピオン酸ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、酢酸フルドロコルチゾン、酢酸パラメタゾン、テブト酸プレドニゾロン、および酢酸プレドニゾロンなど);ならびに甲状腺ホルモン(レボチロキシンナトリウムなど));
血糖降下剤(例えば、ヒトインスリン、精製ウシインスリン、精製ブタインスリン、組み換えインスリン、インスリンアナログ、グリブリド、クロルプロパミド、グリピジド、トルブタミド、およびトラザミド);
脂質低下剤(例えば、クロフィブラート、デキストロサイロキシンナトリウム、プロブコール、プラバスタチン(pravastitin)、アトルバスタチン、ロバスタチン、およびナイアシン);
赤血球生成刺激に有用な薬剤(例えば、エリスロポエチン);
油溶性ビタミン(例えば、ビタミンA、D、E、およびKなど);
ならびに他の薬剤(ミトタン、ハロニトロソ尿素、アントラサイクリン(anthrocycline)、およびエリプチシンなど)。
上記のアニオンおよびカチオンを組み合わせてILを形成することができる。例えば、核酸、ベクター、アニオン性のペプチドまたはタンパク質、アニオン性ポリサッカリド、およびその組み合わせを、式Iのカチオンと組み合わせることができる。例示的な複合体には、以下が含まれる。
いくつかの形態では、ILは、上記のように式Iのカチオン界面活性剤と複合体化したsiRNAを含み、式Iにおいて、(i)カチオン性界面活性剤がセチルトリメチルアンモニウム、デシルトリメチルアンモニウム、ベンジルジメチルドデシルアンモニウム、ミリスチルトリメチルアンモニウム、またはドデシルピリジニウムではないことを例外とし;(ii)R1、R2、R3、およびR4のうちの少なくとも1つが、独立して、置換アルキルであり、ここで、置換アルキルは、置換アラルキルまたは非置換アラルキルであり;(iii)R1、R2、R3、およびR4のうちの少なくとも1つが、独立して、置換アルキルであり、ここで、置換アルキルは、置換アラルキルまたは非置換アラルキルであり、ここで、カチオン性界面活性剤がベンジルジメチルドデシルアンモニウムではなく;(iv)R1が、独立して、置換アルキルであり、ここで、置換アルキルは、置換アラルキルまたは非置換アラルキルであり、R2、R3、およびR4が、独立して、置換アルキルまたは非置換アルキルであり、但し、R2、R3、およびR4が置換アルキルである場合、置換アルキルは、置換アラルキルまたは非置換アラルキルではないことを条件とし;または(iv)R1が、独立して、置換アルキルであり、ここで、置換アルキルは、置換アラルキルまたは非置換アラルキルであり、R2、R3、およびR4が、独立して、置換アルキルまたは非置換アルキルであり、但し、R2、R3、およびR4が置換アルキルである場合、置換アルキルは、置換アラルキルまたは非置換アラルキルではないことを条件とし、ここで、カチオン性界面活性剤がベンジルジメチルドデシルアンモニウムではない。
(式中、nは、3と19との間の任意の整数(3または19が含まれる)である)のカチオン性界面活性剤と複合体化したsiRNAを含み、但し、カチオン性界面活性剤がベンジルジメチルドデシルアンモニウムではないことを例外とし、ここで、siRNAは、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、およびその組み合わせから選択される。
いくつかの形態では、ILは、式Iのカチオン界面活性剤と複合体化したアニオン性ポリサッカリドを含む。
(式中、nは、3と19との間の任意の整数(3または19が含まれる)である)のカチオン性界面活性剤と複合体化したヒアルロン酸、アルギナート、アルギン酸、グリコサミノグリカン、およびその組み合わせ、好ましくはヒアルロン酸を含み、但し、カチオン性界面活性剤がベンジルジメチルドデシルアンモニウムではないことを例外とする。
カチオンおよび高分子性アニオンは、典型的には電荷的中性であり、皮膚バリアを横切って皮膚細胞に侵入するのに十分に疎水性である複合体を形成する。さらに、組成物は、一般に、皮膚に対して刺激性がない。
典型的には、組成物は電荷が中性である。
形成された複合体の疎水性を、Log10値で示されるオクタノール/水分配係数(Po/w)によって特徴づけることができる(表2)。典型的には、種々のアルキル鎖長を有するカチオンと高分子性アニオンとの複合体の疎水性は、高分子性アニオンのオクタノール/水分配係数(Po/w)によって決定したところ、高分子アニオンがナトリウムイオンと複合体化した場合の高分子アニオンの疎水性と比較した場合に少なくとも1Log(10)単位(LogPo/w)高い。
本明細書中に記載の組成物は、典型的には、皮膚を刺激しない。IL中の各成分(すなわち、アニオン性成分およびカチオン性成分)は、それ自体で皮膚を刺激し得る。しかし、組成物中に含まれる複合体中で使用したイオン成分の組み合わせは、皮膚表面に適用された場合に非刺激性であるか、実質的に非刺激性である(すなわち、皮膚反応はせいぜい最小限である)。
典型的には、組成物は、その多孔度を増大させるため、またはSCおよび/もしくは皮膚の1つまたは複数のさらなる層を介して組成物を押すための皮膚へのさらなる処置を必要としない、1つまたは複数の皮膚バリア層(SCなど)および/または1つまたは複数の皮膚細胞層(表皮および真皮など)を介して輸送するのに十分な疎水性がある。
表皮は、以下の5つの副層に分類される:角質層、淡明層、顆粒層、有棘層、および胚芽層(「基底層」とも呼ばれる)。表皮は血管を欠き、真皮からの拡散によって栄養を得ている。
真皮は、上皮組織からなる表皮の下の皮膚層である。真皮は、構造的に以下の2つの領域に分類される:表皮に隣接する、乳頭領域と呼ばれる表面領域、および網状領域として公知の深部のより厚い領域。
組成物を作製する方法は当該分野で公知であり、Nishimuraら,Biomaterials,26:5558-5563(2005)に記載されている。
組成物は、角質層を介して、好ましくは1つまたは複数の表皮層まで、または表皮層を介して、複合体を輸送するのに有効な量で被験体(ヒトまたは他の哺乳動物)の皮膚に局所的に適用される。有効量の複合体を真皮に輸送することができる。任意選択的に、複合体は、1つまたは複数の真皮層を越えて細胞に送達される。複合体は、単独で、または1つまたは複数のさらなる治療剤、診断剤、予防剤、または栄養補給剤と組み合わせて、皮膚の種々の層を介して輸送することができる。
組成物は、角質層、表皮、および/または真皮内などの特定の部位に、または皮膚の全ての層を介し且つ越えて薬物を送達するように選択することができる。
本明細書中に記載のIL組成物を、任意選択的に治療薬、診断薬、予防薬、および/または栄養補助薬と共に、高分子性アニオンの経皮送達のために使用することができる。
有効量は、処置すべき病状および高分子性アニオン、ならびに任意選択的に皮膚に送達すべきさらなる薬物によって変動する。有効量は、組成物の1回または1回を超える局所適用で到達することができる。例えば、10ng、20ng、50ng、100ng、1μg、10μg、20μg、50μg、100μg、または10mgの1つまたは複数の薬剤(高分子性アニオン、任意選択的に、さらなる薬物と共に)を含む各適用物を皮膚部位に適用し、有効用量の10ng、20ng、50ng、100ng、1μg、10μg、20μg、50μg、100μg、1mg、10mg、20mg、50mg、または100mgの薬剤をそれぞれ送達させることができる。
IL組成物は、有効量の高分子性アニオンおよび/または薬物を皮膚に送達する投薬単位および投薬形態であり得る。
材料と方法
イオン液体(IL)部分をローブしたsiRNAを、以前に記載のように酸-塩基中和によって合成した(Nishimuraら,Biomaterials,26:5558-5563(2005))。ベンジルジメチルアルキルアンモニウムクロリド塩を、Sigma Aldrich(St.Louis,MO)から購入した。FAM-GAPDHsiRNA(siRNA1、5’-FAM-GACGUAAACGGCCACAAG UUC-3’(配列番号1))、FAM-GAPDHsiRNA(siRNA2、5’-FAM-GUGUGAACCACGAGAAAUAUU-3’(配列番号2))、FAM-エラスターゼsiRNA(siRNA3、5’-FAM-UCACUUACAGGAUCUAUAAUU-3’(配列番号3))、およびFAM-コントロールsiRNA(siRNA4、5’-FAM-UAAGGCUAUGAAGAGAUACUU-3’(配列番号4))を、Dharmacon,Thermo Fisher Scientific(Waltham,MA)から購入した。
別段の記述がある場合を除き、報告したデータは平均±SDである。適切な場合には、統計的有意性を、マイクロソフトエクセルにおける一元配置ANOVAおよび事後検定または両側で対応のないスチューデントt検定によって確認した。有意水準をp<0.05に設定した。
カチオン性部分をローブしたsiRNAを、カチオン/アニオン交換およびその後の酸-塩基中和からなる簡単で調整可能な二段階プロセスを使用してイオン液体を形成するために合成した(スキーム1~3)。
材料と方法
皮膚輸送の測定
ブタ全層皮膚((Lampire Biological Laboratories,Pipersville,PA)を本研究で使用した。全ての皮膚試料を-80℃で保存した。使用直前に皮膚を解凍し、毛を刈り込んだ。皮膚片をPBS(pH7.4)で洗浄し、皮膚伝導率を測定して試料が無傷であることを確認した。皮膚透過を、フランツ拡散セル(FDC)で、以前に記載のように(Chenら,Journal of Controlled Release,179:33-41(2014);Karandeら,Nature Biotechnology,22:192-197(2004))、評価した。簡潔に述べれば、受容体区画をpH7.4のPBSで満たした。各試験処方物を三連で評価した。SCを上に向けて皮膚をマウントし、試験処方物を適用する前にドナー区画を大気に30分間開放して乾燥状態にした。皮膚の下側(真皮)と受容体溶液との間の全ての気泡を注意深く除去した。150μLの50μM FAM-siRNAまたはローブドFAM-siRNAを、皮膚表面に適用した。FDCを、穏やかに撹拌しながら37℃で24時間インキュベートした。24時間後、PBS(pH7.4)で5回洗浄することによって、処方物を皮膚から除去した。粘着テープ(Scotch(登録商標)透明テープ,3M Corporate,St.Paul,MN)で剥ぎ取ることによってSCを表皮から単離した。テープによる剥ぎ取りを連続して10回行った。剥ぎ取ったテープを、以下に示すようにガラスバイアル中に回収した:SC1=1回目の剥ぎ取りおよびSC2~10=2回目~10回目の剥ぎ取り。10回の剥ぎ取りでSC全体が除去されたと見なした。テープでの剥ぎ取り後、外科用滅菌メスを使用して真皮から表皮を単離した。表皮および真皮を小片に切断し、個別のガラスバイアルに移した。最後に、受容器溶液からの3mLをガラスバイアルに移した。蛍光siRNAの抽出のために、3mLのメタノールおよびPBS(pH7.4)(1:1、v/v)混合物を各バイアルに添加し、室温で一晩振盪した。その後、溶液を10分間遠心分離して皮膚組織をペレット化した。上清を取り出し、必要に応じて希釈し、蛍光プローブの濃度を上記のように蛍光分光法により決定した。
FAM-siRNAおよびローブドFAM-siRNAの皮膚内への輸送を視覚化するために、処方物を上記のようにFDC中の皮膚に適用した。24時間のインキュベーション後、Leica Cryostat CM1850(Leica,Buffalo Grove,IL)を使用して、適用領域に対応する薄片(20μm)を調製した。薄片を、Olympus Fluoview 1000共焦点レーザー走査型顕微鏡(Olympus,Center Valley,PA)を用いて画像化した。実験条件間の比較のために、すべての機器設定をサンプル間で一定に保った。
皮膚透過を、フランツ拡散セル(FDC)を使用して、以前に記載のように(Chenら,Journal of Controlled Release,179:33-41(2014);Karandeら,Nature Biotechnology,22:192-197(2004))、評価した。重要なことに、siRNA1の皮膚輸送は、IL部分のローブによって有意に増強された(図2Aおよび2B)。適用用量の生存表皮内への送達パーセント(%)は、裸のsiRNA1においてたった2.06±0.15であったのと比較して、BDOA-siRNA1、BDTA-siRNA1、およびBDSA-siRNA1において9.85±2.64、9.60±2.85、および7.33±0.24であった。同様に、適用用量の真皮のより深い組織層内への送達%は、裸のsiRNA1においてたった2.26±1.16であったのと比較して、BDOA-siRNA1およびBDSA-siRNA1において12.94±2.56および8.89±0.77であった。興味深いことに、適用用量の真皮内への送達%は、siRNA1にBDTAをローブした場合、実質的に阻害された(0.49±0.18)。使用したsiRNA配列と無関係に、類似の結果が認められた(図2B)。
材料と方法
細胞培養
細胞を96ウェルマイクロプレート(Corning Inc.,Corning,NY)中に播種し、付着させ、増殖させた。細胞の密集度が約80%に到達した時点で、培地を除去し、FAM-siRNA、ローブドFAM-siRNA、またはベンジルジメチルアルキルアンモニウムクロリド塩を含む培地を添加した。培地のみをコントロールとして使用した。細胞を試験溶液と37℃および5%CO2で4時間インキュベートした。インキュベーション後、試験溶液を除去し、細胞をHBSSで洗浄し、新鮮な培地を各ウェルに添加した。細胞を一晩増殖させた後、MTT細胞増殖アッセイ(ATCC,Manassas,VA)を用いて生存率について評価した。生存率を、SAFIRE,XFLUOR4,V4.50マイクロプレートリーダー(Tecan Group Ltd,Morrisville,NY)を使用して、製造者の推奨プロトコールに従って決定した。
ローブドsiRNAが細胞膜を通過する能力を、共焦点レーザー走査型顕微鏡法(CLSM)によってin vitroで評価した。ヒト成体上皮角化細胞(HEKa細胞)は、生存表皮の初代細胞型であり、したがって、これを全てのin vitro研究のために使用した。HEKa細胞を100nMのローブドsiRNA1と4時間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、Hoechst33342で核染色し、画像化してsiRNA1内在化を視覚化した。ローブドsiRNA1の内在化を裸のsiRNA1の内在化と比較した。重要なことに、細胞内在化は、裸のsiRNA1と比較して、IL部分のローブによって増強された。他方では、細胞内在化の程度は使用されるIL部分に依存するようである。例えば、BDTAは最も内在化を増強した一方で、BDOAは最低の増強を示した。
材料と方法
細胞をポリ-D-リジンコーティングしたガラス底培養皿(MatTek Corporation,Ashland,MA)に播種し、接着させ、増殖させた。細胞の密集度が約80%に到達した時点で、培地を除去し、FAM-siRNAまたはローブドFAM-siRNAを含む培地を添加した。細胞を、試験処方物と標準的培養条件下で4時間インキュベートした。試験溶液とのインキュベーション後、細胞を5μg/mL Hoechst 33342(Life Technologies,Grand Island,NY)を用いて室温で5分間染色し、次いで、ハンクス平衡塩類溶液(HBSS、Lonza Group Ltd.,Basel,Switzerland)でそれぞれ5分間ずつ3回洗浄した。細胞を、Olympus Fluoview 1000共焦点レーザー走査型顕微鏡(Olympus,Center Valley,PA)を用いて画像化した。実験条件間の任意の比較のために全ての機器設定を一定に保ち、30倍のシリコン浸漬対物レンズを使用して細胞の全厚を取得した。
BDOA-siRNAは、生存皮膚深層(表皮および真皮)への優れた輸送、裸のsiRNAと比較して細胞内在化を改善する能力、ならびにBDTA-siRNAおよびBDSA-siRNAと比較して優れた生体適合性を示した(図2A~3C)。細胞培養物中のsiRNAは典型的には応答を誘発するためにインキュベーション時間を長くする必要があるので、72時間のインキュベーション後にBDOA-siRNAの細胞内在化および生体適合性も確認した。予想通り、HEKa細胞内の細胞内在化は、裸のsiRNA1と比較して、BDOA-siRNA1への72時間の曝露後に有意に増強された。さらに、培地のみでインキュベートした細胞と比較して、300nMまでのBDOA-siRNAでの細胞傷害性は無視できるほどであった(図4)。
材料と方法
細胞を96ウェルマイクロプレート(Corning Inc.,Corning,NY)中に播種し、付着させ、増殖させた。細胞の密集度が約80%に到達した時点で、培地を除去し、FAM-siRNAまたはローブドFAM-siRNAを含む培地を添加した。培地のみをコントロールとして使用した。細胞を試験溶液と37℃および5%CO2で72時間インキュベートした。インキュベーション後、総タンパク質およびGAPDH発現を定量した。総タンパク質を、ビシンコニン酸タンパク質アッセイキット(Thermo Scientific,Rockford,IL)を用いて評価し、GAPDHレベルを、KDalert GAPDHアッセイキット(Life Technologies,Grand Island,NY)を製造者の推奨するプロトコールに従って使用し、且つSAFIRE,XFLUOR4,V4.50マイクロプレートリーダー(Tecan Group Ltd,Morrisville,NY)を使用して測定した。
BDOA-siRNAが治療応答を誘発する能力を、in vitroで最初に確認した。GAPDHを、モデルノックダウン標的として使用した。BDOA-siRNA1をHEKa細胞と種々の濃度でインキュベートし、GAPDHノックダウンを以前に記載のように評価した(Chenら,Journal of Controlled Release,179:33-41(2014))。コントロールとして、裸のsiRNA1およびBDOA-siRNA4(非サイレンシングコントロールsiRNA)も研究した。さらなるコントロールとして、RNAiMax-siRNA1およびRNAiMax-siRNA4も、製造者の推奨する濃度(10nM)で使用した。予想どおり、裸のsiRNA1および非サイレンシングsiRNA4処方物は、72時間のインキュベーション後にHEKa細胞内でのGAPDH発現を減少させなかった(図5)。さらに、100nMおよび200nMのBDOA-siRNA1は、無処置コントロールと比較して、GAPDH発現の有意差は認められなかった。しかし、300nM BDOA-siRNA1とのインキュベーションは、GAPDHを有意にノックダウンした(無処置コントロールと比較して58.7±2.0%のGAPDH発現)(図5)。同様に、10nM RNAiMax-siRNA1とのインキュベーションは、GAPDHを有意にノックダウンした(無処置コントロールと比較して36.9±3.2%のGAPDH発現)。
材料と方法
MatTek Epiderm(商標)ヒト皮膚等価組織を以前に記載のように使用して(Afaqら,Exp Dermatol,18:553-561(2009))、ローブドsiRNAを使用した早発性の皺形成の処置を評価した。簡潔に述べれば、6ウェル培養プレート(Corning Inc.,Corning,NY)中で、Epiderm(商標)組織を2.5mL培地にて37℃および5%CO2で24時間順化させた。24時間のインキュベーション後、培地を交換し、100μLのddH2O(コントロール)または50μM未変性エラスターゼsiRNA(siRNA3)、50μM BDOA-コントール非サイレンシングsiRNA(siRNA4)、25μM BDOA-siRNA3、または50μM BDOA-siRNA3を、皮膚組織の頂端側に適用した。24時間のインキュベーション後、試験処方物を除去し、波長302nmの6ワットUVランプおよび白色光管(Cole Parmer,Vernon,IL)を使用して、皮膚を200mJ/cm2のUVB照射に曝露した。照射を、Solarmeterモデル6.2UVメーター(Solar Light Company Inc.,Glenside,PA)を用いて測定した。曝露後、新たに調製した処方物を皮膚組織に再適用し、さらに96時間インキュベートした。実験の終わりに、2mLの培地を回収し、ヒトエラスチンELISAキットおよびヒトMMP-12 ELISAキット(Biomatik USA LLC.,Wilmington,DE)を、それぞれ製造元の推奨するプロトコールに従って使用して、エラスチンおよびエラスターゼの含有量について分析した。試験処方物の生体適合性を、MatTekの推奨プロトコールに従ってMTTアッセイを使用して確認した。
BDOA-siRNAの臨床的な可能性を、ヒトの皮膚等価組織における皮膚老化モデルに対して評価した(Afaqら,Exp Dermatol,18:553-561(2009))。エラスターゼ上方制御は、紫外線照射誘発性の皺形成の重要因子として提唱されている(Tsujiら,Photochemistry and Photobiology,74:283-290(2001))。したがって、局所適用したRNAiでのエラスターゼのノックダウンを、皮膚皺の処置および防止のための選択肢として提案する。UVB照射およびBDOA-siRNAの適用後、組織生存率の低下は認められなかった(図6)。この結果により、以下が確認される:1)紅斑下線量の照射、および2)BDOA-siRNAの生体適合性。さらに、UVB照射により、UVB照射に曝露しない組織と比較して、エラスターゼが有意に上方制御され(図7A)、エラスチンが有意に低下し(図7B)、疾患モデルにおける有効性が確認された。裸のsiRNA3またはBDOA-siRNA4の局所適用ではエラスターゼの上方制御およびその結果としてのエラスチン分解から防御することができなかった。対照的に、50μMおよび25μMの両方でのBDOA-siRNA3の適用により、UVB照射後の皮膚の状態を不変に維持することができ、したがって、ローブドsiRNAの臨床的な可能性が確認された(図7Aおよび7B)。
材料と方法
カチオン対合HAを、実施例1に記載の方法にしたがって調製した。
異なるカチオン対合HA種およびそのオクタノール-水分配係数を、表4に示す。疎水性カチオンのヒアルロン酸との対合により、疎水性カチオンのオクタノール-水分配係数が劇的に増強される。このオクタノール-水分配係数の増強は、疎水性カチオンの皮膚透過を増大させると期待される。ヒアルロン酸の疎水性カチオンとの対合により、疎水性カチオンのオクタノール-水分配係数が1,000,000倍まで改善され、これは、siRNAで認められる係数に類似する。かかる分配係数の劇的な増強は、疎水性カチオンの皮膚透過を増大させると期待される。
材料と方法
コリンおよびゲラン酸深共晶液を、WO2015/066647に記載のように調製し、蛍光標識したアルブミン(ウシ血清アルブミンまたはオボアルブミン)をこれに添加した。アルブミン負荷コリン-ゲラン酸処方物をブタ皮膚上に24時間置き、皮膚を切断してアルブミンの透過を評価した。PBSを使用してコントロール実験を行った。
アルブミンがコリンおよびゲラン酸から送達された場合に、アルブミンの有意且つ深部への透過が認められた。コリンおよびゲラン酸の処方物の利点は、他のタンパク質(インスリン、抗体、および治療ペプチドが含まれる)に及ぶことが期待される。コリンおよびゲラン酸の利点は、他のイオン液体に及ぶことも期待される。
Claims (16)
- 前記組成物が室温および標準圧力で液体である、請求項1に記載の組成物。
- 前記高分子アニオンおよび前記カチオンが、0.5:1、1:1、または2:1の電荷比で存在する、請求項1または請求項2に記載の組成物。
- 前記高分子が、siRNAである、請求項1~3のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記高分子が、マイクロRNA(miRNA)、低分子ヘアピン型RNA(shRNA)、および低分子干渉RNA(siRNA)からなる群から選択されるRNA干渉分子である、請求項1~3のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記高分子が二本鎖siRNAであり、ここで、各鎖が20~25ヌクレオチドの範囲の長さを有する、請求項1~3のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記高分子が二本鎖siRNAであり、ここで、各鎖が23ヌクレオチドの長さを有する、請求項1~3のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記高分子が二本鎖siRNAであり、ここで、各鎖が21ヌクレオチドの長さを有する、請求項1~3のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記カチオンがベンジルジメチルドデシルアンモニウムではない、請求項1に記載の組成物。
- 前記カチオンが、ベンジルジメチルオクチルアンモニウム、ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウム、およびベンジルジメチルステアリルアンモニウムからなる群から選択される、請求項1に記載の組成物。
- 前記複合体のオクタノール/水分配係数(Po/w)によって決定される前記複合体の疎水性が、前記高分子アニオンがナトリウムカチオンと複合体化した場合の前記高分子アニオンの疎水性と比較して、少なくとも1ログ単位(LogPo/w)増加する、請求項1~10のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記複合体の疎水性が、前記高分子アニオンがナトリウムカチオンと複合体化した場合の前記高分子アニオンの疎水性と比較した場合、1~5ログ単位(LogPo/w)増加する、請求項11に記載の組成物。
- 前記カチオンが、多孔度を増大させるかまたは角質層を除去するためのさらなる処置がない場合に角質層を横切るのに十分に前記高分子アニオンの疎水性を増大させる、請求項1~12のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記高分子アニオンおよび前記カチオンのいずれか単独または両方が皮膚を刺激する、請求項1~13のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記複合体の電荷が中性である、請求項1~14のいずれか1項に記載の組成物。
- 1つまたは複数の皮膚状態を処置するための医薬調製物であって、請求項1~15のいずれか1項に記載の組成物を含む、医薬調製物。
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