JP7157801B2 - クロマトグラフィーカラムから圧力および空気を除去する方法およびシステム - Google Patents
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Description
本出願は2017年9月21日に出願された米国特許仮出願第62/561,575号の優先権を主張し、その全開示内容は参照によって本明細書に組み込まれる。
本発明は、クロマトグラフィーカラム内に閉じ込められた圧力および空気を除去する能力を提供しながら、カラムのための無菌の接続を行う方法およびシステムに関する。
カラムチューブは、中空の円筒状部材であり、流体(たとえば、液体)が第1の端(たとえば、上端)から第2の端(たとえば、下端)まで流れることを可能にする典型的には円断面の円筒である。チューブの内径は、チューブに流体を運び入れまたチューブから流体を排出するための流れ分配器から流体を受け入れられるような大きさにされまたそのように構成される。様々なクロマトグラフィーカラムの性能仕様に基いて、チューブは、様々な異なるサイズおよび構成で作られることができ、たとえばバイオ医薬品の用途に使用されるクロマトグラフィーカラムその他のカラムであるOPUS(商標)ライン(Repligen社、米国、マサチューセッツ州、Waltham)が挙げられる。
ガス除去およびクロマトグラフィーカラムのプライミングのための、本明細書に記載された配管と弁とのセットは、滅菌目的のためにガンマ線照射されることができる、OPUS(商標)カラムまたはプレパック形式の任意のクロマトグラフィーカラムに取り付けられることができる。一般に、8kGy以上の放射線量が有効である。いくつかの実施では、25~45kGyの線量範囲が使用されることができる。上記されたように、カラムはそのような照射量に耐えることができる材料から作られる。さらに、カラムに接続される配管と弁とのセットもまた、ガンマ線に対して安定な材料から作られる。
追加の弁が様々な配管要素を接続し、コントローラー55は流体をこれらの全ての要素に向けることができる。
以下の実施例は、本明細書に記載されたシステムおよび方法を例示するが、これらを限定するものではない。
ガンマ線照射工程の間に、ガスおよび圧力上昇が、閉じられたカラム内に生じ、これはカラムの有用性に悪影響を及ぼすことがある。配管と弁とのセットによって、これらのガスと圧力は本明細書に記載されたようにカラムから除去されることができる。この実験の目標は、配管と弁とのセット30についての空気除去効率を実証することである。2つのプレパックされたOPUS(商標)カラム(Repligen社製)が使用された。各プレパックカラムは、10cmの内径および20cmの床高さの寸法を有し、GE Healthcare社製Capto(商標)S、アガロースに基いたカチオン交換樹脂が充填されていた。この実験の場合、配管セットはプライミングされておらず(空気で充満)、ガンマ線処理の影響を具現化する最悪のシナリオを実証するためのものであった。
工程1:弁1、2、8および3は開、弁4、5、6および7は閉;
工程2:弁1、4、5および3は開、弁2、6、7および8は閉;
工程3:上向き流操作シーケンス(たとえば、順方向のポンプ)- 弁1、2、7、6、5および3は開、弁4および8は閉;および
工程4:下向き流操作シーケンス-弁1、4、6、7、8および3は開、弁2および5は閉。
以下の実験が、図1Aに示された滅菌されたまたは無菌のクロマトグラフィーカラムシステムを評価するために実施されて、この実施形態が配管セット30を完全にプライミングし、ガンマ線照射後にその中に閉じ込められた空気を除去することができることが確認された。さらに、その試験は、上向き流および下向き流のプライミングのための弁の組み合わせの設定を確認し、かつ配管と弁とのセット30の追加がカラムの性能に影響を及ぼさないことを確認するために行なわれた。
ガンマ線滅菌後、閉じ込められた空気が、それぞれの配管セット組立体内の以下の場所に観察された。
気泡が以下の場所に観察された:
弁1と4との間
弁7と8との間
弁6の下。
配管セットは、100mMのNaClを用いて100cm/時の流量でプライミングされた。
プライミングシーケンス:
工程1:弁1、2、8および3は開、弁4、5、6および7は閉;
工程2:弁1、4、5および3は開、弁2、6、7および8は閉;
工程3:下向き流シーケンス-弁1、4、6、7、8および3は開、弁2および5は閉。
図10Aは、Capto(商標)Sカラム#1(10×20cm)の充填後の最初の試験の結果を示す。
図10Bは、Capto(商標)Sカラム#1のガンマ線照射前の再試験の結果を示す。
図10Cは、Capto(商標)Sカラム#1(10×20cm)のガンマ線照射前の配管セットを用いた試験の結果を示す。
図10Dは、Capto(商標)Sカラム#2(10×20cm)の充填後の最初の試験の結果を示す。
図10Eは、Capto(商標)Sカラム#2のガンマ線照射前の再試験の結果を示す。
図10Fは、Capto(商標)Sカラム#2(10×20cm)のガンマ線照射前の配管セットを用いた試験の結果を示す。
図10Gは、Capto(商標)Sカラム#2の、配管セットのみをプライミングした(カラムには上向き流を通さない)試験の結果を示す(ガンマ線照射後の試験)。
図10Hは、Capto(商標)Sカラム#2の、1CVの上向き流をカラムに通した後の結果を示す(ガンマ線照射後の試験)。
図10Iは、Capto(商標)Sカラム#1の、配管セットのみをプライミングした(カラムには上向き流を通さない)試験の結果を示す(ガンマ線照射後の試験)。
図10Jは、Capto(商標)Sカラム#1の、1CVの上向き流をカラムに通した後の結果を示す(ガンマ線照射後の試験)。
ガンマ線照射工程の間に、ガスおよび圧力上昇が、閉じられたカラムと配管のセットとの組立体の内部に生じる。これは、カラムの有用性に悪影響を与える場合がある。実施例2に記載されたように、本明細書に記載された配管と弁とのセットを使用すると、カラムからこれらのガスおよび余剰な圧力を除去することができる。
ガンマ線照射後、2つのカラムの圧力センサーが読み取られ、配管を備えたカラムの圧力上昇が観察された(表2)。
本発明の多くの実施形態が記載されてきた。しかし、様々な修正が本発明の趣旨および範囲から逸脱することなくなされてもよいことは理解されるだろう。従って、他の実施形態は、以下に添付された特許請求の範囲の範囲内にある。
Claims (29)
- 閉じ込められたガス、圧力、またはガスおよび圧力の両方をプレパックされたクロマトグラフィーカラムから除去する方法であって、前記プレパックされたクロマトグラフィーカラムは、カラムチューブ入口およびカラムチューブ出口を有するカラムチューブならびに充填媒体で満たされたチャンバーを形成するように前記カラムチューブ内に配置された第1および第2の流れ分配器を含んでおり、前記方法が、
(a)
(i)配管と弁とのセットであって、配管、配管入口、配管出口、前記配管入口と前記カラムチューブ入口との間の流路に沿った第1の弁、および前記カラムチューブ出口と前記配管出口との間の流路に沿った第2の弁を含んでおり、前記配管と弁とのセットが第1の流路および第2の流路を画定するように構成された、配管と弁とのセットを前記カラムチューブ入口および前記カラムチューブ出口に取り付け、そして次に接続された前記プレパックされたクロマトグラフィーカラムおよび前記配管と弁とのセットを滅菌する工程;または
(ii)前記プレパックされたクロマトグラフィーカラムおよび前記配管と弁とのセットを個別に滅菌し、そして次に前記配管と弁とのセットの滅菌された配管を滅菌された前記カラムチューブ入口および滅菌された前記カラムチューブ出口に、前記カラムおよび前記配管と弁とのセットの両方の無菌状態を維持する様式で取り付ける工程;
(b)前記配管と弁とのセットを滅菌されたまたは無菌の流体源におよび流体出口に取り付ける工程;および
(c)滅菌されたまたは無菌の液体を前記第1の流路に沿って、前記滅菌されたまたは無菌の流体源から前記配管と弁とのセットに沿って前記カラムチューブ出口内へとポンプで送り込み、そして前記カラムチューブ入口から送り出す工程であって、これによって、前記プレパックされたクロマトグラフィーカラムおよび前記配管と弁のセットの無菌状態を損なわないで、前記第1の流路に沿って前記チャンバーおよび前記配管と弁のセットから、閉じ込められたガス、圧力、またはガスと圧力との両方を除去する工程
を含む、方法。 - 前記配管と弁とのセットの配管を前記カラムチューブ入口および前記カラムチューブ出口に取り付ける工程、そして次に、取り付けられた前記プレパックされたクロマトグラフィーカラムおよび前記配管と弁とのセットを滅菌する工程を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記プレパックされたクロマトグラフィーカラムおよび前記配管と弁のセットを個別に滅菌する工程、そして次に、前記配管と弁のセットの前記滅菌された配管を前記滅菌されたカラムチューブ入口および前記滅菌されたカラムチューブ出口に取り付ける工程を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記配管と弁のセットの前記滅菌された配管を前記滅菌されたカラムチューブ入口および前記滅菌されたカラムチューブ出口に滅菌された様式で取り付ける工程が、滅菌されたまたは無菌のコネクターまたは溶接可能な配管を使用する工程を含む、請求項3に記載の方法。
- 滅菌する工程がガンマ線による照射を含む、請求項1~4のいずれか1項に記載の方法。
- 滅菌する工程が少なくとも8 kGyのガンマ線量を当てる工程を含む、請求項5に記載の方法。
- 配管を前記カラムチューブ入口および前記カラムチューブ出口に取り付ける工程が、前記配管の端部を前記カラムチューブ入口に固定されたコネクターにおよび前記カラムチューブ出口に固定されたコネクターに接続する工程を含む、請求項1~6のいずれか1項に記載の方法。
- 前記コネクターが、前記カラムチューブ入口および前記カラムチューブ出口にねじ込まれ、クランプ留めされまたは溶接される、請求項7に記載の方法。
- 前記第1の弁および前記第2の弁の少なくとも1つを第1の弁体位置から第2の弁体位置に動かして、前記滅菌されたまたは無菌の液体を前記第2の流路に沿って移動させる工程をさらに含む、請求項1~8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記第1の弁および前記第2の弁の少なくとも1つを第1の弁体位置から第2の弁体位置に動かして、滅菌されたまたは無菌の液体を前記滅菌されたまたは無菌の液体源から前記カラムチューブ出口に入れ、前記プレパックされたカラムチューブを通して前記カラム入口から外へとポンプで送る工程をさらに含む、請求項1~8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記チャンバーの容積の0.1倍以上に相当する体積の滅菌されたまたは無菌の液体をポンプで送る工程をさらに含む、請求項10に記載の方法。
- 前記配管を、滅菌されたまたは無菌のフィルターに取り付けて、滅菌されたまたは無菌の液体を前記滅菌されたまたは無菌のフィルターを通してポンプで送る工程をさらに含む、請求項1~11のいずれか1項に記載の方法。
- 前記滅菌されたまたは無菌のフィルターを通してポンプで送られた前記滅菌されたまたは無菌の液体を収集し、前記滅菌されたまたは無菌の液体の1つ以上の特性を試験する工程をさらに含む、請求項12に記載の方法。
- 前記配管と弁とのセットからベントフィルターを用いて圧力を放出する工程を含む、請求項1~13のいずれか1項に記載の方法。
- 前記配管と弁とのセットから膨張袋まで配管を取り付ける工程をさらに含む、請求項1~14のいずれか1項に記載の方法。
- 前記カラムチューブが一回の使用のためにプレパックされ、使い捨てである、請求項1~15のいずれか1項に記載の方法。
- 前記プレパックされたクロマトグラフィーカラムおよび配管と弁とのセットがクロマトグラフィーシステムに接続される、請求項1~16のいずれか1項に記載の方法。
- 生体分子の無菌精製のためのシステムであって、前記システムが
カラムチューブ入口およびカラムチューブ出口ならびに充填媒体で満たされたチャンバーを形成するようにカラムチューブ内に配置された第1および第2の流れ分配器を有する前記カラムチューブを含んでいる、滅菌されプレパックされたクロマトグラフィーカラム;
前記カラムチューブ入口および前記カラムチューブ出口に取り付けられ滅菌された配管と弁とのセットであって、前記滅菌された配管と弁とのセットが、配管、配管入口、配管出口、前記配管入口と前記カラムチューブ入口との間の流路に沿った第1の弁、および前記カラムチューブ出口と前記配管出口との間の流路に沿った第2の弁を含んでおり、前記配管と弁とのセットが、前記カラムチューブ入口および前記カラムチューブ出口に流体連結された少なくとも2つの異なる流路を画定するように構成されている、滅菌された配管と弁とのセット;および
滅菌されたまたは無菌の流体源から前記滅菌された配管と弁とのセットに沿って滅菌されたまたは無菌の液体を輸送するように構成されたポンプ;
を含んでおり、
前記滅菌されたチューブと弁とのブロックが閉鎖系の流体流路を有しており、前記配管出口が、前記滅菌されプレパックされたクロマトグラフィーカラムおよび前記滅菌されたチューブと弁とのブロックの無菌状態を損なわないでガスを除去するように構成され、
前記少なくとも2つの異なる流路のうちの第1の流路が、前記配管入口から、前記カラムチューブ出口へ、前記カラムチューブ入口へ、そして前記配管出口へと流れる流路であり、
前記少なくとも2つの異なる流路のうちの第2の流路が、前記配管入口から、前記カラムチューブ入口へ、前記カラムチューブ出口へ、そして前記配管出口へと流れる流路である、
システム。 - 前記滅菌されたカラムが樹脂でプレパックされ、前記カラム、樹脂および配管が10-3またはより良い滅菌保証水準(SAL)を有する、請求項18に記載のシステム。
- 前記ポンプおよび前記第1の弁および前記第2の弁の弁体位置を調節するように構成され配置された調節器をさらに含んでいる、請求項18または19に記載のシステム。
- 前記調節器が、プロセッサーおよび前記第1の弁および前記第2の弁の開閉を前記プロセッサーによって実行するための指示を格納するメモリーを含んでいる、請求項20に記載のシステム。
- 滅菌されたまたは無菌の接続を形成し、かつ前記第1および前記第2の流れ分配器の間に形成された前記チャンバーの中を流体が流れることを可能にするように構成された前記カラム入口および出口におけるコネクターをさらに含んでいる、請求項18~21のいずれか1項に記載のシステム。
- 前記コネクターが、前記配管と弁とのセットと、前記滅菌されたまたは無菌の接続を形成するように予め組み込まれている、請求項22に記載のシステム。
- 前記配管と弁とのセットに流体連結された第2のポンプをさらに含んでいる、請求項18~23のいずれか1項に記載のシステム。
- 前記配管と弁とのセットの中に配置されて、前記プレパックされたクロマトグラフィーカラムおよび前記配管と弁とのセットからガス、圧力またはガスと圧力とを放出することを可能にするベントフィルターをさらに含んでいる、請求項18~24のいずれか1項に記載のシステム。
- 前記ベントフィルターが、疎水性ベントフィルターおよび逆止弁を含んでいる、請求項25に記載のシステム。
- 前記クロマトグラフィーカラムチューブが、ステンレス鋼、ガラス、ポリプロピレン(PP)、ポリエチレン(PE)、ポリアミド、アセタール、ガラス充填またはカーボン充填プラスチックまたはエラストマー成分の1つ以上から形成されている、請求項18~26のいずれか1項に記載のシステム。
- 前記クロマトグラフィー充填媒体が、ガラス、プラスチック、セルロース、アガロース、セラミックまたはポリマーの1つであって、粗い粒子、繊維、膜またはビーズの形態をしたものである、請求項18~27のいずれか1項に記載のシステム。
- 前記クロマトグラフィーカラムチューブが、一度の使用のためにプレパックされ、使い捨てのものである、請求項18~28のいずれか1項に記載のシステム。
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