JP7138989B1 - メソテリンに特異的に結合する抗メソテリンキメラ抗原受容体 - Google Patents
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Abstract
Description
標的抗原であるメソテリン(MSLN:mesothelin)に結合する抗体を選別するために、KBIOヒト合成scFvファージディスプレイライブラリーKscFv-Iを利用し、五松(Osong)尖端医療産業振興財団新薬開発支援センターで構築したファージパニングプロトコルにより、MSLN(Acro Biosystems)に対するファージパニングを4回目まで行った。ファージディスプレイ抗体ライブラリーパニング過程を図1に模式化して示した。
実施例2:ファージELISA(phage-specific ELISA)を介する陽性クローンの選別
実施例4:メソテリン過発現細胞株を利用した結合能確認
実施例5:抗MSLN抗体断片の生産及び精製
実施例7:抗MSLNキメラ抗原受容体構築
7-1:抗MSLN-CARレンチウイルスベクタークローニング
7-3:レンチウイルス力価測定(titration)
実施例8:抗MSLN-CARが導入された細胞の作製
8-1:レンチウイルス形質導入(transduction)
8-2:抗MSLN-CARの発現確認
実施例9:抗MSLN-CAR-T細胞の細胞死滅効果の確認
実施例10:腫瘍動物モデル基盤抗MSLN-CAR-T細胞の癌細胞死滅効果の確認
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目1)
次の重鎖CDRを含む重鎖可変領域、及び軽鎖CDRを含む軽鎖可変領域を含む、抗メソテリン抗体、またはその抗原結合断片:
配列番号1からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、配列番号2からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、配列番号3からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、及び配列番号4からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、配列番号5からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、配列番号6からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、または
配列番号13からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、配列番号14からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、配列番号15からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、及び配列番号16からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、配列番号17からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、配列番号18からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3。
(項目2)
配列番号19または23からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、項目1に記載の抗メソテリン抗体、またはその抗原結合断片。
(項目3)
配列番号20または24からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、項目1に記載の抗メソテリン抗体、またはその抗原結合断片。
(項目4)
配列番号19からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号20からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、項目1に記載の抗メソテリン抗体、またはその抗原結合断片。
(項目5)
配列番号23からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号24からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むことである、項目1に記載の抗メソテリン抗体、またはその抗原結合断片。
(項目6)
項目1ないし5のうちいずれか1項に記載の抗体、またはその抗原結合断片をコーディングする、分離された核酸。
(項目7)
項目6の分離された核酸を含む、ベクター。
(項目8)
項目7に記載のベクターで形質転換された、宿主細胞。
(項目9)
項目8に記載の宿主細胞を培養し、抗体を発現させる段階を含む、抗メソテリン抗体を製造する方法。
(項目10)
抗原結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内信号伝逹ドメインを含むキメラ抗原受容体であり、
前記抗原結合ドメインは、次の重鎖CDRを含む重鎖可変領域、及び軽鎖CDRを含む軽鎖可変領域を含む抗メソテリン抗体、またはその抗原結合断片である、キメラ抗原受容体:
配列番号1からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、配列番号2からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、配列番号3からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、及び配列番号4からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、配列番号5からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、配列番号6からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3;または
配列番号13からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、配列番号14からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、配列番号15からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、及び配列番号16からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、配列番号17からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、配列番号18からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3。
(項目11)
前記抗原結合ドメインは、配列番号19からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号20からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗メソテリン抗体、またはその抗原結合断片である、項目10に記載のキメラ抗原受容体。
(項目12)
前記抗原結合ドメインは、配列番号23からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号24からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗メソテリン抗体、またはその抗原結合断片である、項目10に記載のキメラ抗原受容体。
(項目13)
前記抗原結合断片は、scFv(single chain variable fragment)である、項目
10に記載のキメラ抗原受容体。
(項目14)
項目10に記載のキメラ抗原受容体をコーディングする、ポリヌクレオチド。
(項目15)
前記ポリヌクレオチドは、配列番号26または27からなる塩基配列を含む、項目14に記載のポリヌクレオチド。
(項目16)
項目14に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
(項目17)
項目16に記載のベクターで形質転換された、細胞。
(項目18)
前記細胞は、T細胞、NK細胞、NKT細胞またはガンマデルタT細胞(γδTセル)である、項目17に記載の細胞。
(項目19)
項目18に記載の細胞を含む、癌の予防用または治療用の薬学的組成物。
Claims (19)
- 次の重鎖CDRを含む重鎖可変領域、及び軽鎖CDRを含む軽鎖可変領域を含む、抗メソテリン抗体、またはその抗原結合断片:
配列番号1からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、配列番号2からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、配列番号3からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、及び配列番号4からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、配列番号5からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、配列番号6からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、または
配列番号13からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、配列番号14からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、配列番号15からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、及び配列番号16からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、配列番号17からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、配列番号18からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3。 - 配列番号19または23からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項1に記載の抗メソテリン抗体、またはその抗原結合断片。
- 配列番号20または24からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項1に記載の抗メソテリン抗体、またはその抗原結合断片。
- 配列番号19からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号20からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項1に記載の抗メソテリン抗体、またはその抗原結合断片。
- 配列番号23からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号24からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項1に記載の抗メソテリン抗体、またはその抗原結合断片。
- 請求項1ないし5のうちいずれか1項に記載の抗体、またはその抗原結合断片をコーディングする、分離された核酸。
- 請求項6の分離された核酸を含む、ベクター。
- 請求項7に記載のベクターで形質転換された、分離された宿主細胞。
- 請求項8に記載の宿主細胞を培養し、抗体を発現させる段階を含む、抗メソテリン抗体を製造する方法。
- 抗原結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内信号伝逹ドメインを含むキメラ抗原受容体であり、
前記抗原結合ドメインは、次の重鎖CDRを含む重鎖可変領域、及び軽鎖CDRを含む軽鎖可変領域を含む抗メソテリン抗体、またはその抗原結合断片である、キメラ抗原受容体:
配列番号1からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、配列番号2からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、配列番号3からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、及び配列番号4からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、配列番号5からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、配列番号6からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3;または
配列番号13からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、配列番号14からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、配列番号15からなるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、及び配列番号16からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、配列番号17からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、配列番号18からなるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3。 - 前記抗原結合ドメインは、配列番号19からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号20からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗メソテリン抗体、またはその抗原結合断片である、請求項10に記載のキメラ抗原受容体。
- 前記抗原結合ドメインは、配列番号23からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号24からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗メソテリン抗体、またはその抗原結合断片である、請求項10に記載のキメラ抗原受容体。
- 前記抗原結合断片は、scFv(single chain variable fragment)である、請求項10に記載のキメラ抗原受容体。
- 請求項10に記載のキメラ抗原受容体をコーディングする、ポリヌクレオチド。
- 前記ポリヌクレオチドは、配列番号26または27からなる塩基配列を含む、請求項14に記載のポリヌクレオチド。
- 請求項14に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
- 請求項16に記載のベクターで形質転換された、分離された細胞。
- 前記分離された細胞は、T細胞、NK細胞、NKT細胞またはガンマデルタT細胞(γδTセル)である、請求項17に記載の分離された細胞。
- 請求項18に記載の分離された細胞を含む、癌の予防用または治療用の薬学的組成物。
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