JP7138234B2 - 組み換え単純ヘルペスウイルス及びその製造方法 - Google Patents
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Description
前記「UL領域」は、約108kbの大きさを有することができる。HSV-1のUL領域は、UL1遺伝子ないしUL56遺伝子のヌクレオチド配列を含むものでもある。本発明の一様相による組み換えHSV-1は、UL領域を含み、前記UL領域は、UL1ないしUL38、及びUL40ないしUL56のうち1以上の遺伝子のヌクレオチド配列を含むものでもある。
図1Aは、野生型HSV-1のゲノム模式図である。HSV-1ゲノムは、大きく見て、UL領域とUS領域とに分けられる。UL領域は、1つの複製原点と、TR(terminal repeat)とIR(internal repeat)とによって構成されたa及びbが5’に存在し、逆方向のa及びbが3’に存在する。US領域は、2つの複製原点と、逆方向のc配列とが5’に存在し、裏側に正方向のcが反復され、3’終端には、a配列がさらに一度反復される。
ICP6遺伝子とIR遺伝子とが同時に消失された前記実施例1のΔICP6ΔIR HSV-1に、外来遺伝子であるrpsL-neo遺伝子1319bpを挿入してウイルスを作製し、外来遺伝子挿入いかんを検証した。
前記実施例2で作製されたΔICP6-ΔIR-rpsL-neoにおいて、外来遺伝子rpsL-neoを除去し、ΔICP6ΔIRウイルスを作製した。
6-ウェルプレートに、A549(human lung cancer、ATCCR CRM-CCL-185TM)、U251N(human glioma、ATCCR)及びVERO(monkey normal kidney、ATCCR CCL-81TM)細胞を、3.5X105セル/ウェルに分注し、HswC(iXcells、10HU-188)細胞は、3X105セル/ウェルに分注し、24時間後、野生型HSV-1、ICP6のみ欠損されたΔICP6、IRのみ欠損されたΔIR、及びICP6とIRとがいずれも欠損されたΔICP6ΔIRウイルス、それぞれを0.1 MOIで感染(infection)させた。
以下、本発明の実施形態を示す。
(1)単純ヘルペスウイルス1型(HSV-1)のゲノム領域のうち、ICP6(infected-cell protein 6)が欠失され、UL(unique long)領域とUS(unique short)領域との間のIR(internal repeat)領域が欠失されたHSV-1ゲノムを有する、組み換えHSV-1。
(2)前記組み換えHSV-1は、TRL(terminal repeat of long region)領域;UL1ないしUL38、及びUL40ないしUL56のうち1以上の遺伝子のヌクレオチド配列を含むUL領域;US1ないしUS12のうち1以上の遺伝子のヌクレオチド配列を含むUS領域;並びにTRS(terminal repeat of short region)領域からなる群から選択されるHSV-1の1以上のゲノム領域を含む、(1)に記載の組み換えHSV-1。
(3)前記ICP6は、UL39遺伝子である、(1)に記載の組み換えHSV-1。
(4)前記組み換えHSV-1のゲノムは、HSV-1のICP6遺伝子のヌクレオチド配列のうち、配列番号1のヌクレオチド配列が欠失されたものである、(1)に記載の組み換えHSV-1。
(5)前記IR領域は、IRL(internal repeat of long region)領域及びIRS(internal repeat of short region)領域を含むものである、(1)に記載の組み換えHSV-1。
(6)前記組み換えHSV-1のゲノムは、HSV-1のIR領域のヌクレオチド配列のうち、配列番号2のヌクレオチド配列が欠失されたものである、(1)に記載の組み換えHSV-1。
(7)UL56遺伝子の一部ヌクレオチド配列が追加して欠失されたものである、(1)に記載の組み換えHSV-1。
(8)前記欠失されたUL56遺伝子の一部ヌクレオチド配列は、配列番号3のヌクレオチド配列である、(7)に記載の組み換えHSV-1。
(9)前記組み換えHSV-1のゲノムは、配列番号4のヌクレオチド配列を含む、(1)に記載の組み換えHSV-1。
(10)前記組み換えHSV-1は、癌細胞または腫瘍細胞の特異性を示すものである、(1)に記載の組み換えHSV-1。
(11)(1)ないし(10)のうちいずれか1に記載の組み換えHSV-1のゲノムヌクレオチド配列を含む、組み換えHSV-1ベクター。
(12)外来遺伝子のヌクレオチド配列を追加して含むものである、(11)に記載の組み換えHSV-1ベクター。
(13)ICP6及びIR領域が欠失されたHSV-1のゲノムヌクレオチド配列を含む組み換えHSV-1ベクターを製造する段階と、
前記ベクターを細胞に形質感染させ、組み換えHSV-1を得る段階と、を含む、組み換えHSV-1を製造する方法。
(14)前記組み換えHSV-1ベクターは、TRL領域;UL1ないしUL38、及びUL40ないしUL56のうち1以上の遺伝子のヌクレオチド配列を含むUL領域;US1ないしUS12のうち1以上の遺伝子のヌクレオチド配列を含むUS領域;並びにTRS領域からなる群から選択されるHSV-1の1以上のゲノム領域のヌクレオチド配列を含むものである、(13)に記載の方法。
(15)(1)に記載の組み換えHSV-1、または(11)に記載の組み換えHSV-1ベクターを含む癌予防用または治療用の薬学的組成物。
(16)(1)に記載の組み換えHSV-1、または(11)に記載の組み換えHSV-1ベクターの有効量を、それを必要とする個体に投与する段階を含む、癌を予防したり治療したりする方法。
(17)癌の予防用薬剤または治療用薬剤の製造のための(1)に記載の組み換えHSV-1、または(11)に記載の組み換えHSV-1ベクターの用途。
Claims (14)
- 単純ヘルペスウイルス1型(HSV-1)のゲノム領域のうち、ICP6(infected-cell protein 6)が欠失され、UL(unique long)領域とUS(unique short)領域との間のIR(internal repeat)領域が欠失されたHSV-1ゲノムを有し、
UL56遺伝子の一部ヌクレオチド配列が追加して欠失されたものである、
組み換えHSV-1。 - 前記組み換えHSV-1は、TRL(terminal repeat of long region)領域;UL1ないしUL38、及びUL40ないしUL56のうち1以上の遺伝子のヌクレオチド配列を含むUL領域;US1ないしUS12のうち1以上の遺伝子のヌクレオチド配列を含むUS領域;並びにTRS(terminal repeat of short region)領域からなる群から選択されるHSV-1の1以上のゲノム領域を含む、請求項1に記載の組み換えHSV-1。
- 前記ICP6は、UL39遺伝子である、請求項1に記載の組み換えHSV-1。
- 前記組み換えHSV-1のゲノムは、HSV-1のICP6遺伝子のヌクレオチド配列のうち、配列番号1のヌクレオチド配列が欠失されたものである、請求項1に記載の組み換えHSV-1。
- 前記IR領域は、IRL(internal repeat of long region)領域及びIRS(internal repeat of short region)領域を含むものである、請求項1に記載の組み換えHSV-1。
- 前記組み換えHSV-1のゲノムは、HSV-1のIR領域のヌクレオチド配列のうち、配列番号2のヌクレオチド配列が欠失されたものである、請求項1に記載の組み換えHSV-1。
- 前記欠失されたUL56遺伝子の一部ヌクレオチド配列は、配列番号3のヌクレオチド配列である、請求項1に記載の組み換えHSV-1。
- 前記組み換えHSV-1のゲノムは、配列番号4のヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の組み換えHSV-1。
- 前記組み換えHSV-1は、癌細胞または腫瘍細胞の特異性を示すものである、請求項1に記載の組み換えHSV-1。
- 請求項1ないし9のうちいずれか1項に記載の組み換えHSV-1のゲノムヌクレオチド配列を含む、組み換えHSV-1ベクター。
- 外来遺伝子のヌクレオチド配列を追加して含むものである、請求項10に記載の組み換えHSV-1ベクター。
- ICP6、IRおよびUL56遺伝子の一部ヌクレオチド配列の領域が欠失されたHSV-1のゲノムヌクレオチド配列を含む組み換えHSV-1ベクターを製造する段階と、
前記ベクターを細胞に形質感染させ、組み換えHSV-1を得る段階と、
を含む、組み換えHSV-1を製造する方法。 - 前記組み換えHSV-1ベクターは、TRL領域;UL1ないしUL38、及びUL40ないしUL56のうち1以上の遺伝子のヌクレオチド配列を含むUL領域;US1ないしUS12のうち1以上の遺伝子のヌクレオチド配列を含むUS領域;並びにTRS領域からなる群から選択されるHSV-1の1以上のゲノム領域のヌクレオチド配列を含むものである、請求項12に記載の方法。
- 請求項1に記載の組み換えHSV-1、または請求項10に記載の組み換えHSV-1ベクターを含む癌予防用または治療用の薬学的組成物。
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