JP7038424B2 - 生活習慣病の改善又は予防用食品組成物 - Google Patents
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Description
項2.前記生活習慣病が、糖尿病、インスリン抵抗性、脂質異常症、肥満、脂肪肝、ロコモティブシンドローム、サルコペニア、及びカヘキシアからなる群から選択される少なくとも1種である、項1に記載の食品組成物。
項3.フルボ酸を有効成分とする肝機能改善用食品組成物。
項4.フルボ酸を有効成分とする抗疲労用食品組成物。
項5.フルボ酸を有効成分とする筋肉増強用食品組成物。
項6.フルボ酸を有効成分とするミトコンドリア活性化剤。
項7.フルボ酸を有効成分とするミトコンドリア活性化用組成物。
項8.フルボ酸の有効量を哺乳動物に投与する工程を含む、生活習慣病の改善又は予防方法、肝機能改善方法、疲労改善方法、筋肉増強方法、又はミトコンドリア活性化方法。
項9.生活習慣病の改善又は予防用食品組成物、肝機能改善用食品組成物、抗疲労用食品組成物、筋肉増強用食品組成物、又はミトコンドリア活性化剤の製造におけるフルボ酸の使用。
項10.生活習慣病の改善又は予防剤、肝機能改善剤、抗疲労剤、筋肉増強剤、又はミトコンドリア活性化剤としてのフルボ酸の使用。
項11.前記生活習慣病が、糖尿病、インスリン抵抗性、脂質異常症、肥満、脂肪肝、ロコモティブシンドローム、サルコペニア、及びカヘキシアからなる群から選択される少なくとも1種である、項8に記載の方法、項9に記載の使用、又は項10に記載の使用。
特に記載が無い限りC57BL/6N雄マウスを以下の実験で使用した。8週齢のC57BL/6N雄マウスは清水実験材料株式会社(Kyoto, Japan)より購入した。
C2C12細胞を常法に従って、分化させた。グルコースを含まない培地に置き換え、GLUT阻害剤存在下又は非存在下30分処置後、0.1%ヒューミクル又はインスリンにより刺激した。グルコース取り込みは、Glucose Uptake-Glo (商標) Assay (Promega, Madison, WI)を用いて、ルミネセンス活性を測定した。
C2C12細胞を常法に従って、分化させた。0.1%ヒューミクルにより刺激し、MHC (Myosin heavy chain)抗体(mouse monoclonal MF20 antibody (Developmental Hybridoma Bank, Iowa City, IA))による染色を行った。
マウス横紋筋由来細胞C2C12を96ウェルプレートに1.25×104 cells/wellの細胞数で播種し、ヒューミクルを終濃度0.1%とし、経時的に細胞内ATP含量を測定した。図4に示した時間で細胞を可溶化し、ENLITEN (商標) ATP Assay System (Promega, Madison, WI)を用いて20/20n Luminometer (Turner BioSystems, Sunnyvale, CA)により測定した。また、ヒューミクルの6時間後の濃度依存的ATP消費亢進作用についても測定した。
C2C12細胞を48ウェルプレートに1×105 cells/wellの細胞数で播種し、ヒューミクルを終濃度0.1%とし、24時間後のミトコンドリア膜電位について、JC-1色素を用いて観察した。
直径20 cmの円筒内のマウスをカメラで行動スキャンした(Smart3.0システム, Bioresearch Center, Aichi, Japan)。PBS 200μL (Vehicle), ヒューミクル100 mg/200μLをddY、及び副腎を摘出したADX ddYに経口摂取させ、90分間の行動を観察した。最も行動量の差が見られた30~60分の時間区分で自発運動量を比べた。
マウスに、Normal diet: ND、High fat diet: HFD及びHFDと2%ヒューミクルの混合飼料を投与し、体重を経時的に測定した。
マウスに糖負荷試験(OGTT: oral glucose tolerance test)を行った結果を図12に示す。上述と同様、6週間それぞれの餌を給餌し、300 mg/mlグルコースを100μl経口投与することにより行い、継時的に上述の血糖値測定を行った。その結果、最高血糖値は、0.1%ヒューミクルにより低下し、また糖負荷60分以降において、血糖値の低下は0.1%ヒューミクルにより改善された。また、II型糖尿病モデルであるKK-Ayマウスにおいても同様の実験を行って、ヒューミクルを経口投与することで、体重減少及び平常時血糖値が低下することを確認した。
マウスへの高脂肪食6週間投与時における、マウスの肝機能及び脂質代謝にかかわる血液検査結果を表1に示す。血液は心採血により行い、遠心分離によって血清を得た。
1 mL PBS中のマウス筋組織ホモジネートを遠心した(4℃、15,000 rpm, 5 min)。5μLの上清について、ADP/ATP Assay kit (Sigma-Aldrich, MO, USA)を用いて20/20n Luminometerによりルミネセンスを測定した。また、96ウェルプレートの1ウェル当たり150μLのworking reagentに15μLの上清を添加した。37℃で15分間インキュベート後、Protein Assay Bicichoninate Kit (Nacalai Tesque, Kyoto, Japan)を用いてModel 680 Microplate Reader (Bio-Rad Laboratories)により570 nmの吸光度を測定した。
試験例3と同様の方法によりフルボ酸の濃度依存的ATP消費亢進作用について測定した。結果を図14に示す。図14から、フルボ酸純品(日本腐植物質学会より提供された)の効果は、概ねヒューミクル(フルボ酸+ミネラル)の効果を再現することが分かる。
(試料調製)
試料の作製方法:試料を攪拌し分析に供した。250 mL広口瓶に少量のヒューミクルパウダー(以下、試料)と少量の精製水を加え、よくかき混ぜ溶解させた。更に試料と精製水を少量ずつ加え、よくかき混ぜ溶解させた。これを繰り返し60%(60 g/100 mL)溶液とした後、回転子を入れ、マグネティックスターラーで、20℃で24時間撹拌した。24時間撹拌後の溶液を遠沈管に移し入れ、遠心分離(2500rpm×10分:2回)をし、得られた上澄み液を分取し、これを試験溶液として分析に供した。
光学的特性に関わる注釈:分析方法に記載したとおり、蛍光特性の標準物質として段戸フルボ酸(日本腐植物質学会頒布)を用いた時の定量値であった。したがって、異なる産地のフルボ酸を標準として用いた場合は、分子構造の違いに由来する光学的特性(蛍光特性)の違いによって、定量値が異なることがある。
2群間の統計的差異は、スチューデントのt検定を用いて解析した。P値が0.05未満の場合に有意差ありと判断した。
Claims (6)
- フルボ酸及び多種類のミネラルを含む組成物を含む生活習慣病の改善又は予防用食品組成物(ただし、シラジット及び海洋性腐植土の水性溶媒抽出物を含むものを除く)。
- 前記生活習慣病が、糖尿病、インスリン抵抗性、脂質異常症、肥満、脂肪肝、ロコモティブシンドローム、サルコペニア、及びカヘキシアからなる群から選択される少なくとも1種である、請求項1に記載の食品組成物。
- フルボ酸及びミネラルを含む組成物を含む肝機能改善用食品組成物。
- フルボ酸及びミネラルを含む組成物を含む抗疲労用食品組成物(ただし、シラジットを含むものを除く)。
- フルボ酸及びミネラルを含む組成物を含む筋肉増強用食品組成物(ただし、シラジットを含むものを除く)。
- フルボ酸及びミネラルを含む組成物を含むミトコンドリア活性化剤。
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