JP7034950B2 - 抗hla-g特異的抗体 - Google Patents
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Description
癌において、1つの主要な免疫逃避機構は、T細胞シグナル伝達を損なう細胞表面上の阻害分子の発現である。これらの阻害分子の多くは、免疫チェックポイント(ICP)とみなされ、自己免疫寛容(self-tolerance)を維持し、末梢組織内の生理学的免疫応答の持続時間および強度を調節して副次的な組織損傷を回避することが最初に示された多数の阻害経路を意味する。
本発明者らは、今般、HLA-Gタンパク質のα3ドメインから免疫原性ペプチドを設計することにより、特異的抗HLA-G抗体を産生する困難性を回避することに成功した。
該核酸またはベクターを含む宿主細胞がさらに記載される。
HLA-G治療用および診断用抗体は、B細胞の成熟および抗体分泌に対するHLA-G免疫寛容機能のために不十分である。本発明者らは、抗HLA-G特異的抗体を誘導することができたHLA-G-α3ドメインに由来するペプチドを用いることにより、この阻害を回避することに成功した。
抗体は、それが他の物質と結合するよりも、より高い親和性、結合活性で、より容易に、および/またはより長い持続時間で結合する場合、標的抗原に“特異的に結合する(specifically binds)”。“特異的結合(Specific binding)”または“優先的結合(preferential binding)”は、排他的結合を(それを含み得るが)必ずしも必要としない。一般的には、必ずしもそうではないが、結合への言及は優先的結合を意味する。結合の親和性は、結合速度定数および解離速度定数またはKD(平衡解離)によって定義される。一般的に、抗体に関して用いられるとき、特異的結合とは、10-8M未満、例えば10-9M未満または10-10M未満の親和性(KD)値でその標的(複数可)に特異的に結合する(“認識する”)抗体を意味する。10-9MのKD値が10-8MのKD値より高い結合親和性を示すため、より低いKD値は、より高い結合親和性(すなわち、より強い結合)を表す。
本発明者らは、古典的MHCクラスI分子に対して交差反応性のない、HLA-Gに特異的な抗HLA-G抗体を開発するための免疫原性ペプチドを設計した。
HLA-Gアミノ酸配列は、図1Aに示すように、他のMHCクラスI分子(HLA-E、A2、B7、B44およびCW3)とは異なる。HLA-Gの配列と比べてMHCクラスI配列のアミノ酸における変異を灰色で強調し、異なるドメイン内に多くのホットスポットが示されている。特に、HLA-Gの高度に特異的な配列が、位置194-197のα3ドメイン内で同定された。HLA-G α3ドメインのこの部分は、HLA-Gとその受容体との間の相互作用に必須のアミノ酸を包含する(図1A)。
a.CTHHPVFDYEATLRC(配列番号52)、
b.CKTHVTHHPVFDYEATLRC(配列番号53)、
ここで、ジスルフィド結合はN末端およびC末端のシステイン残基を連結する。
THHPVFDYEATLR(配列番号54);
THHPVFDYEATLRC(配列番号55);
VTHHPVFDYEATLRC(配列番号56);
VTHHPVFDYEATLR(配列番号57);
CTHHPVFDYEATLR(配列番号58);
KTHVTHHPVFDYEATLR(配列番号59);
KTHVTHHPVFDYEATLRC(配列番号60)および
CKTHVTHHPVFDYEATLR(配列番号61)。
該ペプチドをコードする核酸も提供される。
特定の態様により、転写および発現の調節配列を加えることができる。
本発明は、上記に定義の免疫原性ペプチドに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片に関する。
(a)配列番号8の重鎖相補性決定領域1(HC CDR1)、および/または配列番号10の重鎖相補性決定領域2(HC CDR2)、および/または配列番号12の重鎖相補性決定領域3(HC CDR3)を含む、重鎖可変領域(VH);および/または
(b)配列番号2の軽鎖相補性決定領域1(LC CDR1)、および/または配列KVSの軽鎖相補性決定領域2(LC CDR2)、および/または配列番号5の軽鎖相補性決定領域3(LC CDR3)を含む、軽鎖可変領域(VL)
を含む、抗HLA-G抗体が提供される。
(a)配列番号8の重鎖相補性決定領域1(HC CDR1)、配列番号10の重鎖相補性決定領域2(HC CDR2)、および配列番号12の重鎖相補性決定領域3(HC CDR3)を含む、重鎖可変領域(VH);および/または
(b)配列番号2の軽鎖相補性決定領域1(LC CDR1)、配列KVSの軽鎖相補性決定領域2(LC CDR2)および配列番号5の軽鎖相補性決定領域3(LC CDR3)を含む、軽鎖可変領域(VL)
を含む。
(a)配列番号64を含むか、または配列番号64と80%を超える、好ましくは90%を超える、さらに好ましくは95%を超える同一性を示す相同配列を含む、重鎖可変領域(VH);および/または
(b)配列番号63を含むか、または配列番号63と80%を超える、好ましくは90%を超える、さらに好ましくは95%を超える同一性を示す相同配列を含む、軽鎖可変領域(VL)
を含み得る。
別の態様において、該相同配列は、ヒト化配列である。
(a)配列番号23の重鎖相補性決定領域1(HC CDR1)、および/または配列番号25の重鎖相補性決定領域2(HC CDR2)、および/または配列番号27の重鎖相補性決定領域3(HC CDR3)を含む、重鎖可変領域(VH);および/または
(b)配列番号15の軽鎖相補性決定領域1(LC CDR1)、および/または配列KVSの軽鎖相補性決定領域2(LC CDR2)、および/または配列番号18の軽鎖相補性決定領域3(LC CDR3)を含む、軽鎖可変領域(VL)
を含む抗体を提供する。
(a)配列番号23の重鎖相補性決定領域1(HC CDR1)、配列番号25の重鎖相補性決定領域2(HC CDR2)、および配列番号27の重鎖相補性決定領域3(HC CDR3)を含む、重鎖可変領域(VH);および/または
(b)配列番号15の軽鎖相補性決定領域1(LC CDR1)、の配列KVS軽鎖相補性決定領域2(LC CDR2)、および配列番号18の軽鎖相補性決定領域3(LC CDR3)を含む、軽鎖可変領域(VL)
を含む。
(a)配列番号67を含むか、または配列番号67と80%を超える、好ましくは90%を超える、さらに好ましくは95%を超える同一性を示す相同配列を含む、重鎖可変領域(VH);および/または
(b)配列番号65を含むか、または配列番号65と80%を超える、好ましくは90%を超える、さらに好ましくは95%を超える同一性を示す相同配列を含む、軽鎖可変領域(VL)
を含み得る。
別の態様において、該相同配列は、ヒト化配列である。
(a)配列番号23の重鎖相補性決定領域1(HC CDR1)、および/または配列番号25の重鎖相補性決定領域2(HC CDR2)、および/または配列番号27の重鎖相補性決定領域3(HC CDR3)を含む、重鎖可変領域(VH);および/または
(b)配列番号15の軽鎖相補性決定領域1(LC CDR1)、および/または配列KVSの軽鎖相補性決定領域2(LC CDR2)、および/または配列番号20の軽鎖相補性決定領域3(LC CDR3)を含む、軽鎖可変領域(VL)
を含む抗体を提供する。
(a)配列番号23の重鎖相補性決定領域1(HC CDR1)、配列番号25の重鎖相補性決定領域2(HC CDR2)、および配列番号27の重鎖相補性決定領域3(HC CDR3)を含む、重鎖可変領域(VH);および/または
(b)配列番号15の軽鎖相補性決定領域1(LC CDR1)、配列KVSの軽鎖相補性決定領域2(LC CDR2)および配列番号20の軽鎖相補性決定領域3(LC CDR3)を含む、軽鎖可変領域(VL)
を含む。
(a)配列番号67を含むか、または配列番号67と80%を超える、好ましくは90%を超える、さらに好ましくは95%を超える同一性を示す相同配列を含む、重鎖可変領域(VH);および/または
(b)配列番号66を含むか、または配列番号66と80%を超える、好ましくは90%を超える、さらに好ましくは95%を超える同一性を示す相同配列を含む、軽鎖可変領域(VL)
を含み得る。
別の態様において、該相同配列は、ヒト化配列である。
抗体15E7のVL κ鎖:
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CDR3: FQGSHLPPT (配列番号5)
FR4: FGGTTLEIK (配列番号6)
抗体15E7のVH鎖:
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FR4: WGQGTTLTVSS (配列番号13)
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FR1: DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSS (配列番号14)
CDR1: QSLVHSNGNTY (配列番号15)
FR2: LHWYLQKPGQSPKLLIY (配列番号16)
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CDR3: SQSTHFPPT (配列番号18)
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FR1: DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSS (配列番号14)
CDR1:QSLVHSNGNTY (配列番号15)
FR2:LHWYLQKPGQSPKLLIY (配列番号16)
CDR2: KVS
FR3: NRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFC (配列番号17)
CDR3: SQSTHVPPT (配列番号20)
FR4: FGAGTKLELK (配列番号21)
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CDR3: AREGVTMITTGLDY (配列番号27)
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抗体N27F12のVL κ鎖:
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FR4: FGAGTKLELK (配列番号21)
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CDR2: VRLKSDNYAT (配列番号76)
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FR4: WGQGTTLTVSS (配列番号13)
抗体N38F4のVL κ鎖:
FR1: DVVMTQIPLSLPVSLGDQASISCRSS (配列番号79)
CDR1: QSLVNSNGNTL (配列番号80)
FR2: LHWYLQKPGQSPKLLIY (配列番号16)
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抗体N38F4のVH鎖:
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scFv 3157-C57-R6B-C10のVH鎖:
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FR3: HYNGKFKNKATLTVDTSTSTAYIQLSSLTSEDSAVYYC (配列番号100)
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FR3: HYNQEFKGKATMTVDKSSSTAYMHLGSLTSEDSAVYYC (配列番号102)
CDR3: AREGLAGVFYFDY (配列番号12)
FR4: WGQGTTLTVSS (配列番号13)
本発明の一側面において、上記の免疫原性ペプチドは、HLA-Gタンパク質のα3ドメインに特異的な抗体を産生するための免疫原として有用であり得る。
a.非ヒト動物への、上記の免疫原性ペプチドの投与、
b.該動物から得られた血清または血漿サンプルからの誘発された抗体の回収、およびHLA-Gタンパク質のα3ドメインに対する特異性の検査、
c.要すれば、回収された抗体のクローニング、ならびに
d.要すれば、該回収された抗体からの抗原結合断片の調製
を含む方法に関する。
本発明はまた、本明細書に記載の本発明の抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸分子に関する。
所望の結合特性を有する抗体は、ファージディスプレイライブラリーおよびスクリーニングを用いて産生させることもできる。
抗HLA-G抗体またはその抗原結合断片、かかる抗体またはフラグメントをコードする核酸、あるいはそれらを発現するベクターは、癌または癌性疾患ならびに関連または併発疾患または状態などの病状の処置に、これらの病理がHLA-Gに関与する腫瘍の免疫回避機構と関連しているとき、有用である。より一般的には、抗HLA-G抗体またはその抗原結合断片は、宿主におけるHLA-Gタンパク質の不適切な発現を含む病状の治療に有用である。
本発明に従って処置され得るウイルス感染の限定されない例は、HIV感染、狂犬病ウイルス感染またはB型肝炎もしくはC型肝炎ウイルス感染、ならびにHCMV(ヒトサイトメガロウイルス)、HSV-1(ヘルペス単純ウイルス)またはIAV(A型インフルエンザウイルス)による感染である。
本発明はまた、HLA-Gタンパク質をインビトロで検出する、あるいは健康状態もしくは病状をモニタリングまたは診断するのに適する手段、ならびに健康状態もしくは病状をモニタリングまたは診断するための手段であって、そのような状態もしくは病状になりやすい患者に行う手段を提供する。
a.免疫複合体の形成を可能にする条件下で、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片をサンプルと接触させること、および
b.該抗体またはその抗原結合断片とHLA-Gタンパク質との間で形成される免疫複合体をインビトロで検出すること
を含む。
a.本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片、
b.(a)の抗体またはその抗原結合断片とアッセイするためのサンプルとの免疫複合体(複数可)の形成に適する試薬(複数可);
c.場合により、工程(b)の免疫複合体(複数可)の形成を検出するのに適する試薬(複数可)
を含む。
APC:抗原提示細胞
ATCC:アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション
β2M:ベータ-2-ミクログロブリン
BSA:ウシ血清アルブミン
CDR:相補性決定領域
CFA:完全フロイントアジュバント
CTL:細胞傷害性Tリンパ球
CTLA-4:細胞傷害性Tリンパ球関連抗原4
DC:樹状細胞
DIC:ジイソプロピルカルボジイミド
DNA:デオキシリボ核酸
DMEM:ダルベッコの修飾イーグル培地
ELISA:酵素結合免疫吸着検定法
EC:有効濃度
FACS:蛍光活性化セルソーター
FCS:ウシ胎仔血清
FITC:フルオレセインイソチオシアネート
FR:フレームワーク領域
h:時間
HAT:ヒポキサンチン-アミノプテリン-チミジン
HES:ヒドロキシエチルデンプン
HLA:ヒト白血球抗原
HPLC:高速液体クロマトグラフィー
HRP:西洋わさびペルオキシダーゼ
ICP:免疫チェックポイント
ID:識別子(IDentity)
IFA:不完全フロイントアジュバント
IgG:免疫グロブリンG
ILT-2:免疫グロブリン様転写産物2
ILT-4:免疫グロブリン様転写産物4
IMDM:イスコフ改変ダルベッコ培地
IP:腹腔内
IPTG:イソプロピル β-D-1-チオガラクトピラノシド
IV:静脈内
IVF:体外受精
KDa:キロダルトン
KIR2DL4:キラー細胞免疫グロブリン様受容体2Igドメインおよび長い細胞質テイル4
KLH:キーホールリンペットヘモシアニン
LILRB1:白血球免疫グロブリン様受容体B1
LILRB2:白血球免疫グロブリン様受容体B2
M:モル
MEM:最小必須培地
MHC:主要組織適合遺伝子複合体
mL:ミリリットル
NK:ナチュラルキラー細胞
nM:ナノモル
OD:光学密度
ON:一晩
PAGE:ポリアクリルアミドゲル電気泳動
PBS:リン酸緩衝生理食塩水
PC-1:拘束性(Constrained)ペプチド-1
PCR:ポリメラーゼ連鎖反応
PD―1:プログラムされた細胞死タンパク質1
PD-L1:プログラムされた細胞死リガンド1
PE:フィコエリスリン
PIR-B:抑制型(Paired)免疫グロブリン様受容体B
PS:ペニシリン/ストレプトマイシン
RNA:リボ核酸
RPM:毎分回転数
RT:室温
SB:スーパーブロス
scFv:一本鎖可変フラグメント
SDS:ドデシル硫酸ナトリウム
Sec:秒
SEQ:配列
sHLA-G:可溶性HLA-G
TBS:トリス緩衝生理食塩水
TMB:テトラメチルベンジジン
UV:紫外線
V:容量
VH:可変重鎖
VL:可変軽鎖
μL:マイクロリットル
材料および方法
ペプチド合成
モノクローナル抗体を作製するために用いたPC-1ペプチド[VTHHPVFDYEATLRC(配列番号56)]を、MultiSynTechのSyro上でDICをアクティベーターとして用いてFmoc標準化学によって合成し、次いで逆相HPLC(RP-HPLC)により精製した。
PC1ペプチドを、以下のように側鎖C末端システインを介してKLHにカップリングさせた:5mgのペプチドを結合に用いた。PBSに溶解したKLHタンパク質(77600、ThermoFisher、Paris、France)を、sulfo-MBSリンカー(22312、ThermoFisher、Paris、France)を用いて活性化した。遊離リンカーを透析により除いた。PBSに溶解したペプチドを活性化KLHと共にインキュベートした。遊離ペプチドを透析により除去した。PC-1-KLH複合体をPBS 1X(pH7.2)に溶解させ、-20℃で貯蔵した。
Janvier laboratories(Le Genest-St-Isle、France)から購入し、Pasteur Institute animal facility(Paris、France)で飼育した、2種のマウス系統(C57BL/6JおよびBALB/cJ)を免疫化に用いた。マウスは、最初の免疫原注射のとき7週齢であった。マウスを、完全フロイントアジュバント(CFA F5881; Sigma、Lyon、France)(v/v)と混合したKLHに結合させたPC-1ペプチド50μgのエマルジョンを用いて腹腔内(IP)免疫し、次いで、10日後に、不完全フロイントアジュバント(IFA;F5506; Sigma、Lyon、France)と混合したPC-1-KLH50μgをIP注射し、その後、最初の注射の20日後、30日後および185日後に、PC-1-KLH/IFA25μgを3回注射した。
マウスに、安楽死処置の3日前に免疫原を静脈内(IV)に追加免疫した。脾臓を取り出し、脾細胞を、抗体産生ハイブリドーマを得るために、不死化ミエローマ細胞株sp2/0-Ag14とのその後の融合のために精製した。融合は、ポリエチレングリコールベースの標準プロトコールを用いて行った(Koehler, G., C. Milstein. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature, 1975. 256(5517): p.495-7)。その後、得られたハイブリドーマを、L-グルタミン(4mM)、熱不活性化FCS(20%)、HAT(ヒポキサンチン-アミノプテリン-チミジン、1X)、HES(ヒドロキシエチルデンプン130、2%)およびペニシリン/ストレプトマイシン(1%)を添加した選択DMEM培地中で培養した。ハイブリドーマを、コロニー形成および抗体産生のために選択培地中で7~14日間増殖させた。直鎖状および環状PC-1ペプチドを特異的に認識する抗体の産生を、それぞれELISAおよびフローサイトメトリー分析により評価した。陽性ハイブリドーマをクローニングし、目的のモノクローナル抗体を分泌する単一細胞由来のクローンを同定するために増殖させた。
抗HLA-G 一本鎖抗体遺伝子ライブラリーの構築
各動物の脾臓から、業者指示書に従ってTri Reagent キット(Molecular Research Center Inc., Cincinnati、USA)を用いてRNAを単離するために、最後のブースト免疫後にサンプル採取した。RT-PCRによりRNAを逆転写し、得られたcDNAを、マウスVH、VLκおよびVLλをコードするDNAの増幅を目的とするプライマーを用いてPCRにより増幅させた。PCR産物を、初めに、業者指示書に従ってpGEM(登録商標)-T easy ベクター(Promega、Madison、Wisconsin)中にクローニングして、重鎖(VH)または軽(VLκ+VLλ)鎖のいずれかをコードする2つの抗体遺伝子サブライブラリーを得た。
ファージ/scFvライブラリーのスクリーニングを、ストレプトアビジンELISA高容量プレート(15501、Piece)上にコーティングした1μg/mLのビオチニル化-PC1ペプチドを用いて行った。ストリンジェンシーを増強させながら5回のパンニング(パンニングの各ラウンド毎に2、4、8および15回の洗浄)を適用した。未結合HLA-G PC1ペプチド(TBS-Tween 20 0.1%中、10μg/mL)を、ファージ/scFv溶出の競合体(competitor)として用いた。選択されたファージの回収および増幅のために、指数関数的に増殖する大腸菌培養物を、各回のパンニング後に溶出したファージ懸濁液に感染させた。
タンパク質発現のために、同定された陽性結合体から単離されたファージミドDNAを、非サプレッサー大腸菌株HB2151に形質転換させた。選択されたプレートから無作為に選択された単一コロニーを、カルベニシリンおよびグルコース(1%)を添加したSB培地(Super Broth)5mL中に接種した。培養物を、37℃にて一晩、撹拌しながらインキュベートし、その後、より大量のSB培養物に移した(500μLの培養物を500mLの新鮮なSB培地に移した)。培養物のOD600が1に達したときに、1mMのIPTG(イソプロピル β-D-1-チオガラクトピラノシド)を添加して標的タンパク質の発現を誘導した。細胞を16℃にて一晩(ON)増殖させて、その後遠心分離により回収した。scFvを抽出し、業者指示書に従ってニッケルカラム(Ni-NTA スピンカラム、Qiagen、Valencia、CA)を用いて精製した。
細胞株
K562細胞は、ATCC(American Type Culture Collection CCL-243)から購入したヒト白血病細胞である。K562-G1およびK562-PVは、HLA-G1をコード化するベクターまたは対応する空(mock)ベクターをそれぞれ用いるK562野生型細胞のヌクレオフェクションによって得られた。これらの細胞株を、10%熱不活性化FCSおよび1%ペニシリン/ストレプトマイシンを添加したIMDM培地中で培養した。
バイオプレックスビーズ(MC10028-01およびMC10062-01)を、Bio-Rad(Marnes-la-Coquette、France)から購入し、PE結合マウスIgG1(クローンP.3.6.8.2.1.12-4714)をeBiosciences(Paris; France)から購入し、およびFITC結合ラットIgG2aをBD Biosciences(クローン:R35-95 553929、Le Pont de Claix; France)から購入した。
HLA-G6遺伝子のα1α3ドメインおよびHLA-G5遺伝子のα1α2α3ドメインのコード配列を、pAcGP67バキュロウイルストランスファーベクターにクローニングした。異なる挿入物を含むpAcGP67バキュロウイルスベクターの遺伝子構築物およびプラスミド増幅物を、Genecust(Luxembourg)により作製した。プラスミドを、パスツール研究所(Institut Pasteur)のProteople施設(Paris、France)においてDH5細菌宿主中で増幅させた。トランスファーベクターおよびAcMNPV直鎖状DNA(BDのBaculoGold(商標))をヨトウガ(Spodoptera frugiperda)(Sf9)細胞に同時トランスフェクトして、相同部位間の組み換えを可能にし、該トランスファーベクターからAcMNPV DNAに挿入物を移した。各タンパク質をコードする組換えウイルスを作製し、Sf9細胞を感染させて、その後組換えタンパク質を産生するために用いた。
Bioplexビーズを、Bio-Rad(Marnes-la-Coquette; France)から提供されるキットを供給者指示書に従って用いて、標準的なアミノカップリング法によって、組換えHLA-G5、HLA-G6タンパク質で、または合成環状cPC-1ペプチド(CTHHPVFDYEATLRC、配列番号52)でコーティングした。特異性の(陰性)対照として、カップリングしていないビーズまたは変異ペプチドCTHHPVADAEATLRC(配列番号62)でコーティングしたビーズをそれぞれ用いた。
免疫化マウスの血清中またはクローン化ハイブリドーマ細胞培養上清中の特異的抗HLA-G抗体の検出を、フローサイトメトリーにより評価した。フローサイトメトリーを、最初に、HLA-G5、HLA-G6およびcPC-1ペプチドでコーティングされたビーズを用いて行った。
96ウェルマイクロプレートを、PBS中1μg/mL(100μL/ウェル)のPC-1ペプチドでコーティングし、RTにて一晩インキュベートし、その後150μL/ウェルのPBS-乾燥スキムミルクで、RTにて1時間ブロッキングした。PBS tween 0.05%で1回洗浄後、血清またはモノクローナル抗体の希釈液を、RTにて2時間添加した(50μL/ウェル)。プレートを3回洗浄し、ペルオキシダーゼ(HRP)結合ヤギ抗マウスIgGを、PBS-tween 0.05%、1% BSA(50μL/ウェル)中1/10000で、RTにて1時間添加した。3回洗浄後、プレートをTMB基質(KPL、Gaithersburg、USA)で染色し、OD450で読み取った。
アイソタイプ特定
15E7アイソタイプを、Clonotyping Southern キット(Clinisciences、Nanterre、France)を業者指示書に従って用いて、ELISAアッセイによって決定した。簡単に説明すると、プレートを、4℃にて一晩、捕捉抗体(各アイソタイプに特異的)でコーティングし、その後PBS 0.05% Tweenで2回洗浄した。次いで、プレートをRTまで温め、15E7モノクローナル抗体を含むハイブリドーマ上清を、RTにて1時間、添加した。キットに含まれるHRP結合抗アイソタイプ二次抗体を、1/2000で用いた。プレートをTMB基質(Eurobio/KPL、Gaithersburg、USA)で染色し、OD450で読み取った。
15E7ハイブリドーマを、マウスにおいて腹水としてインビボで増殖させた。所望のモノクローナル抗体を産生するのに十分増殖させた後、該モノクローナル抗体を含む腹水を精製した。精製は、標準的なプロテインA-セファロースカラムを用いてクロマトグラフィーにより達成した。15E7を含む溶出画分を集め、透析し、必要に応じて濃縮した。UVスキャンを用いてOD280で濃度を決定し、2mg/mLに調整した。
結合親和性および結合速度を、BLITZ技術により決定した。15E7モノクローナル抗体を、標準的なアミンカップリング法を用いて第1級アミンを介してバイオセンサーチップAR2G(Pall ForteBio)に共有結合させた。結合を、15E7に結合したチップを種々の濃度のBSAに結合したPC-1ペプチドと共にインキュベートすることにより測定した。抗原-抗体結合速度を120秒間追跡し、解離速度を100秒間追跡した。結合曲線および解離曲線は1:1に適合する。
免疫原の設計
本発明者らは、“拘束ペプチド(Peptide Constrained):PC-1”(図1A;太字および下線で示す)と称されるHLA-Gのα3アミノ酸領域189-203に対応する高度にHLA-G特異的なペプチドを設計し、マウスを免疫化するためにそれを用いた。
PC-1配列:VTHHPVFDYEATLRC(配列番号56)
PC-1免疫原は、β2M結合とは無関係に、HLA-G α3含有イソ型に特異的な治療に適する抗HLA-Gモノクローナル抗体を作製することが期待される。
KLHに結合したPC-1ペプチドを用いた免疫化プロトコールは、材料および方法のセクションに記載されている。C57BL/6マウスおよびBALB/cマウスをペプチド免疫化に用いた。
モノクローナル抗体15E7の軽鎖および重鎖可変領域ならびにR4C-C3 scFvをコードするcDNA配列を、標準的なPCRおよびDNA配列決定法を用いて得た。
15E7の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を図2Aに示す。
15E7の重鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を図3Aに示す。
scFv R4C-C3の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を図4Aに示す。
R4C-C3重鎖ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を図5Aに示す。scFv R4C-C3のVLおよびVH配列を分析し、軽鎖および重鎖のCDR領域を図4Aおよび5Aに示すように描写した。
タンパク質分析
15E7モノクローナル抗体をSDS-PAGEゲル電気泳動により分析した(図6A)。重鎖の分子量は、約50kDaであり、軽鎖の分子量は約25kDaである。各2個のコピーを有するため、15E7の分子量は150kDaと推定され、モノクローナル抗体15E7がマウスIgG 2aクラスに属することが確認される。
15E7のアイソタイプをELISAにより評価した。15E7アイソタイプはIgG2aであると判定された。
15E7の親和性を、材料および方法セクションに記載のBLITZ技術により評価した。代表的なデータを図6Bに示す。5~600nMの範囲のBSAに結合したPC-1を種々の濃度で、バイオセンサーチップに結合した15E7と共にインキュベートした。各濃度について、結合速度(ka)および解離速度(kd)を測定し、親和性定数KD(ka/kd)を計算するために用いた。親和性定数は1.57nMと評価された。
HLA-G5およびG6タンパク質ならびにcPC-1ペプチドとの15E7の反応性を決定するために、フローサイトメトリーに基づく滴定を実施した。
これらの結果は、15E7 Mabが免疫原性cPC-1ペプチドおよびβ2M不存在下で細胞表面HLA-G上に発現されるエピトープを認識することを確認する。
上記のように、抗HLA-Gモノクローナル抗体の開発における主な懸案の1つは、古典的MHCクラスI(MHC-I)分子に対して交差反応性のないHLA-Gに対する高度に特異的な抗体を得ることであった。HLA-Gに対する15E7の特異性およびその古典的MHC-I分子との交差反応性の不存在を、HLA-Gを発現しない異なるヒトMHC-I陽性細胞株を用いたフローサイトメトリーによって評価した。
本発明は、HLA-Gペプチド免疫化アプローチに基づいて抗HLA-G抗体を産生する方法を示す。免疫化に用いたペプチド(PC-1)は、古典的MHCクラスI分子と比較してHLA-Gに高度に特異的に設計され、全長HLA-Gとその受容体LILRB1およびLILRB2との相互作用に関与するアミノ酸を含む。
上記の抗HLA-G抗体は、HLA-Gのいくつかのイソ型を認識することができる。これらの抗体は、内因性細胞表面β2Mを含まないHLA-G1に結合する。それらは、古典的MHCクラスI分子と交差反応しないため、これらのHLA-G特異的抗体は、診断および治療目的のために用いられ得る。
Agaugue S, Carosella ED, Rouas-Freiss N. Role of HLA-G in tumor escape through expansion of myeloid-derived suppressor cells and cytokinic balance in favor of Th2 - versus Th1/Th17. Blood 2011; 117: 7021-31.
Altschul SF, Gish W, Miller W, Myers EW, Lipman DJ. Basic local alignment search tool. J Mol Biol 1990; 215:403-10.
Altschul SF, Madden TL, Schaeffer AA, Zhang J, Zhang Z, Miller W, Lipman DJ. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. Nucleic Acids Res 1997; 25:3389-402.
Blaschitz A, Hutter H, Leitner V, Pilz S, Wintersteiger R, Dohr G, Sedlmayr P. Reaction patterns of monoclonal antibodies to HLA-G in human tissues and on cell lines: a comparative study. Hum Immunol 2000; 61: 1074-85.
Carosella ED, et al., HLA-G: from biology to clinical benefits. Trends Immunol 2008; 29:125-32.
Carosella ED, et al., Beyond the increasing complexity of the immunomodulatory HLA-G molecule. Blood 2008; 111:4862-70.
Carosella ED, et al., HLA-G: An Immune Checkpoint Molecule. Adv Immunol 2015; 127:33-144.
Clements CS, Kjer-Nielsen L, Kostenko L, Hoare HL, Dunstone MA, Moses E, Freed K, Brooks AG, Rossjohn J, McCluskey J. Crystal structure of HLA-G: a nonclassical MHC class I molecule expressed at the fetal-maternal interface. Proc Natl Acad Sci USA 2005; 102: 3360-5.
Desai SA, et al., Structural relatedness of distinct determinants recognized by monoclonal antibody TP25.99 on beta 2-microglobulin-associated and beta 2-microglobulin-free HLA class I heavy chains. J Immunol 2000; 165:3275-83.
Ellis SA, Palmer MS, McMichael AJ. Human trophoblast and the choriocarcinoma cell line BeWo express a truncated HLA Class I molecule. J Immunol 1990; 144: 731-5.
Favier, B., HoWangYin KY, Wu J, Caumartin J, Daouya M, Horuzsko A, Carosella ED, LeMaoult J. Tolerogenic function of dimeric forms of HLA-G recombinant proteins: a comparative study in vivo. PLoS One 2011; 6: e21011.
Geraghty DE, Koller BH, Orr HR A human major histocompatibility complex class I gene that encodes a protein with a shortened cytoplasmic segment. Proc Natl Acad Sci USA 1987. 84: 9145-9.
HoWangYin KY, Loustau M, Wu J, Alegre E, Daouya M, Caumartin J, Sousa S, Horuzsko A, Carosella ED, LeMaoult J. Multimeric structures of HLA-G isoforms function through differential binding to LILRB receptors. Cell Mol Life Sci 2012; 69:4041-9
Karlin S, Altschul SF. Methods for assessing the statistical significance of molecular sequence features by using general scoring schemes. Proc Natl Acad Sci USA 1990; 87:2264-8.
Karlin S, Altschul SF. Applications and statistics for multiple high-scoring segments in molecular sequences. Proc Natl Acad Sci USA 1993; 90:5873-7.
Lazar GA, Dang W, Karki S, Vafa O, Peng JS, Hyun L, Chan C, Chung HS, Eivazi A, Yoder SC, Vielmetter J, Carmichael DF, Hayes RJ, Dahiyat BI. Engineered antibody Fc variants with enhanced effector function. Proc Natl Acad Sci U S A. 2006; 103: 4005-4010.
Liang S, Baibakov B, Horuzsko A. HLA-G inhibits the functions of murine dendritic cells via the PIR-B immune inhibitory receptor. Eur J Immunol 2002; 32: 2418-26.
Menier C, et al., Characterization of monoclonal antibodies recognizing HLA-G or HLA-E: new tools to analyze the expression of nonclassical HLA class I molecules. Hum Immunol 2003; 64:315-26.
Moore GL, Chen H, Karki S, Lazar GA. Engineered Fc variant antibodies with enhanced ability to recruit complement and mediate effector functions. MAbs. 2010 Mar-Apr;2(2):181-9.
Moy FJ, et al., Analysis by NMR spectroscopy of the structural homology between the linear and the cyclic peptide recognized by anti-human leukocyte antigen class I monoclonal antibody TP25.99*. J Biol Chem 2000; 275:24679-85.
Naji A, et al., Binding of HLA-G to ITIM-bearing Ig-like transcript 2 receptor suppresses B cell responses. J Immunol 2014; 192:1536-46.
Polakova K, Karpatova M, Russ G. Dissociation of beta 2-microglobulin is responsible for selective reduction of HLA class I antigenicity following acid treatment of cells. Mol Immunol 1993; 30:1223-30.
Qiu J, et al., Soluble HLA-G expression and renal graft acceptance. Am J Transplant 2006; 6:2152-6.
Storkus WJ, Zej HJ, Salter RD, Lotze MT. Identification of T-cell epitopes: rapid isolation of class I-presented peptides from viable cells by mild acid elution. J Immunother Emphasis Tumor Immunol 1993; 14: 94-103.
Tanabe M, Sekimata M, Ferrone S, Takiguchi M. Structural and functional analysis of monomorphic determinants recognized by monoclonal antibodies reacting with the HLA class I alpha 3 domain. J Immunol 1992; 148:3202-9.
Tripathi P, Agrawal S. The role of human leukocyte antigen E and G in HIV infection. AIDS 2007; 21:1395-404
Yan WH, HLA-G expression in cancers: potential role in diagnosis, prognosis and therapy. Endocr Metab Immune Disord Drug Targets 2011; 11:76-89
Claims (17)
- 抗ヒト白血球抗原G(HLA-G)抗体またはその抗原結合断片であって、該抗体または抗原結合断片は、
(a)配列番号8の重鎖相補性決定領域1(HC CDR1)、配列番号10の重鎖相補性決定領域2(HC CDR2)および配列番号12の重鎖相補性決定領域3(HC CDR3)を含む、重鎖可変領域(VH);および
(b)配列番号2の軽鎖相補性決定領域1(LC CDR1)、配列KVSの軽鎖相補性決定領域2(LC CDR2)および配列番号5の軽鎖相補性決定領域3(LC CDR3)を含む、軽鎖可変領域(VL)
を含む、抗体または抗原結合断片。 - VHが配列番号64を含み、VLが配列番号63を含む、請求項1に記載の抗体または抗原結合断片。
- 抗体が、2つの重鎖および2つの軽鎖を含む完全長免疫グロブリンGである、請求項1または2に記載の抗体または抗原結合断片。
- ヒト化またはキメラである、請求項1に記載の抗体または抗原結合断片。
- VH、VL、または、VHおよびVLの両方が、ヒト免疫グロブリンフレームワーク領域配列を含む、請求項1または4に記載の抗体または抗原結合断片。
- 抗体が免疫グロブリン定常領域を含む、請求項1から5のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
- 抗原結合断片が、Fv、dsFv、scFv、Fab、Fab’、またはF(ab’) 2 である、請求項1に記載の抗原結合断片。
- 抗体がモノクローナル抗体である、請求項1から7のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
- 細胞傷害性薬物と結合された、請求項1から8のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片を含む複合体。
- 請求項1から8のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片または請求項9に記載の複合体、および薬学的担体を含む、医薬組成物。
- 請求項1から8のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片の、VH、VL、または、VHおよびVLの両方をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
- 請求項11に記載の核酸を含む、ベクター、好ましくは発現ベクター。
- 請求項11に記載の核酸または請求項12に記載のベクターを含む、宿主細胞。
- 請求項13に記載の宿主細胞を、抗体またはその抗原結合断片の発現を可能にする条件下で培養することを含む、抗HLA-Gモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を産生する方法。
- 癌の処置における使用のための、請求項1から8のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片、請求項9に記載の複合体または請求項10に記載の医薬組成物。
- 生物学的サンプルにおいてHLA-Gを検出またはモニタリングするためのインビトロ診断法における、請求項1から8のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片の使用。
- 請求項1から8のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片を含む、診断用キット。
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Citations (1)
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CN1312182C (zh) * | 2004-10-26 | 2007-04-25 | 四川新创生物科技有限公司 | 抗hla-g的单克隆抗体及分泌它的杂交瘤细胞株、癌症诊断试剂盒及其应用 |
WO2008121894A2 (en) * | 2007-03-30 | 2008-10-09 | Escape Therapeutics, Inc. | Endogenous expression of hla-g and/or hla-e by mesenchymal cells |
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