JP7028287B2 - 微小粒子分析システム及び微小粒子分析方法 - Google Patents
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Description
本発明では、前記検出部で検出した各波長領域の光を電圧パルスに変換する変換部を有していてもよい。
また、本発明では、前記色素で修飾された複数の微小粒子は、無染色の微小粒子、一つの色素で修飾された微小粒子、二つ以上の色素で修飾された微小粒子、又はこれらのいずれか2種以上を混合したものであってもよい。
更に、本発明では、前記光照射部は、波長が異なる励起光を照射する複数の光源を有してしてもよい。
加えて、本発明では、前記検出器は、センサ又は多チャンネル光電子倍増管のチャンネルであってもよく、この場合、前記センサ又は多チャンネル光電子倍増管のチャンネルの数が6以上であってもよい。
また、本発明では、前記検出部は、前記微小粒子に修飾された色素の数以上の検出器を有していてもよい。
更に、本発明では、前記解析部は、前記検出した蛍光データに基づいて、微小粒子に修飾した色素に関する情報を解析し、微小粒子の群を特定してもよい。
加えて、本発明では、前記検出した蛍光データを、前記波長領域を示す波長情報をパラメーターとしてスペクトル表示する表示部を有していてもよく、この場合、前記表示部は、前記スペクトルに対するゲーティング処理に応じて前記ゲーティング処理された領域のデータを表示してもよい。また、この場合、前記ゲーティング処理された領域のデータは、二次元プロットとして表示されてもよい。
1.第1の実施の形態
(スペクトル表示の方法の例)
2.第2の実施の形態
(スペクトル表示する微小粒子分析装置の例)
[全体構成]
先ず、本発明の第1の実施形態のデータ表示方法について説明する。本実施形態のデータ表示方法においては、細胞やマイクロビーズなどの微小粒子から発せられた蛍光を、複数の波長領域で同時に検出し、波長領域毎の検出データをスペクトル表示する。
本実施形態のデータ表示方法では、光検出器により検出された光を、波長領域毎に電圧パルス(電気的信号)に変換し、定量化して検出データとする。具体的には、電圧パルスの高さ、幅又は面積を求めて、検出データとする。
本実施形態のデータ表示方法では、前述した方法で求めた波長領域毎の検出データを、スペクトル表示する。その表示方法は、特に限定されるものではないが、例えば、密度プロット、ドットプロット又は等高線などが挙げられる。また、表示されているスペクトルから特定領域のデータのみを抽出し、そのスペクトラムチャートを拡大表示したり、ヒストグラムや二次元プロットを表示したりすることもできる。
[装置の全体構成]
次に、本発明の第2の実施形態に係る微小粒子分析装置について説明する。図1は本実施形態の微小粒子分析装置の構成を示す図であり、図2はその測定結果の表示例を示す図である。図1に示すように、本実施形態の微小粒子分析装置1には、少なくとも、検出部2と、変換部3と、解析部4と、表示部5が設けられている。
検出部2は、分析対象の微小粒子から発せられた蛍光を、複数の波長領域で同時に検出可能な構成であればよい。具体的には、波長領域毎にその波長領域を検出可能なセンサを配置した構成や、多チャンネル光電子倍増管(Photo-Multiplier Tube:PMT)などのように複数の光を同時に検出可能な検出器を備えた構成とすることができる。この検出部2で検出する波長領域の数、即ち、検出部2に配設される検出器のチャンネル数又はセンサ数などは、使用する色素の数以上であればよいが、現在のマルチカラー分析では6~8色が一般的で、最大でも10~12色であることから、12以上であることが好ましい。
変換部3は、検出部2で検出した各波長領域の光を、それぞれ電圧パルス(電気的信号)に変換するものであり、例えばADコンバータなどを使用することができる。
解析部4では、電子計算機などを用いて変換部3で変換された電圧パルスを処理して定量化し、検出データとする。具体的には、電圧パルスの高さ(peak)、幅(width)又は面積(integral)を求め、これらを検出データとして使用する。そして、その結果は、波長領域毎に関連付けられ、記憶部(図示せず)などに保存される。
表示部5は、解析部4での処理で得た検出データ、即ち、本実施形態の微小粒子分析装置1の測定結果を表示するものである。具体的には、表示部5には、例えば、図2に示すように、横軸に検出部のチャンネル番号をとり、縦軸に強度をとって、チャンネル毎の蛍光強度を示した「密度プロット」などが表示される。このとき、チャンネル番号が大きくなるに従い、検出波長が高くなるようにすると、検出光(蛍光)のスペクトラム情報が得られる。
次に、本実施形態の微小粒子分析装置1の動作について説明する。本実施形態の微小粒子分析装置1で分析とする微小粒子は、特に限定されるものではないが、例えば細胞やマイクロビーズなどが挙げられる。また、これら微小粒子を修飾する蛍光色素の種類及び数も、特に限定されるものではなくFITC(fluorescein isothiocyanete:C21H11NO5S)、PE(phycoerythrin)、PerCP(periidinin chlorophyll protein)、PE-Cy5及びPE-Cy7などの公知の色素を、必要に応じて適宜選択して使用することができる。更に、各微小粒子が複数の蛍光色素で修飾されていてもよい。
2 検出部
3 変換部
4 解析部
5 表示部
Claims (22)
- 流路を通流する色素で修飾された複数の微小粒子に少なくとも一つの励起光を照射する光照射部と、
前記励起光の照射により前記微小粒子から発せられた蛍光を、複数の波長領域で検出する複数の検出器を有する検出部と、
各波長領域で検出して得た検出データを、前記波長領域を示す波長情報と前記検出データに基づく蛍光強度をパラメーターとして、複数の色で表示する表示部と、
を有し、
前記色は、前記複数の微小粒子の検出データの数を示し、
前記色素の数は、前記検出器の数より少ない、微小粒子分析システム。 - 前記表示部は、前記検出データに基づく蛍光強度を縦軸とし、前記波長情報を横軸として、前記検出データを表示する、請求項1に記載の微小粒子分析システム。
- 前記波長情報は、前記波長領域を有する検出器の番号又は波長である、請求項1又は2に記載の微小粒子分析システム。
- 前記検出部で検出した各波長領域の光を電圧パルスに変換する変換部を有する、請求項1から3のいずれか一項に記載の微小粒子分析システム。
- 前記電圧パルスより前記検出データを取得する解析部を有する、請求項4に記載の微小粒子分析システム。
- 前記検出データは、前記電圧パルスの高さ、前記電圧パルスの幅、及び前記電圧パルスの面積からなる群より選択されるいずれか一つを少なくとも含む、請求項5に記載の微小粒子分析システム。
- 前記微小粒子毎に前記色素の数以上の検出器で検出した検出データに基づいて、微小粒子に修飾した色素に関する情報を解析する解析部を有する、請求項1から6のいずれか一項に記載の微小粒子分析システム。
- 前記色素で修飾された複数の微小粒子は、無染色の微小粒子、一つの色素で修飾された微小粒子、二つ以上の色素で修飾された微小粒子、又はこれらのいずれか2種以上を混合したものである、請求項1から7のいずれか一項に記載の微小粒子分析システム。
- 前記光照射部は、波長が異なる励起光を照射する複数の光源を有する、請求項1から8のいずれか一項に記載の微小粒子分析システム。
- 前記検出器は、センサ又は多チャンネル光電子倍増管のチャンネルである、請求項1から9のいずれか一項に記載の微小粒子分析システム。
- 前記波長情報は、チャンネル番号である、請求項10に記載の微小粒子分析システム。
- 前記センサ又は多チャンネル光電子倍増管のチャンネルの数が6以上である、請求項10又は11に記載の微小粒子分析システム。
- 前記センサ又は多チャンネル光電子倍増管のチャンネルの数が12以上である、請求項12に記載の微小粒子分析システム。
- 前記解析部は、前記検出した検出データに基づいて、微小粒子に修飾した色素に関する情報を解析し、微小粒子の群を特定する、請求項7に記載の微小粒子分析システム。
- 前記表示部は、前記スペクトルに対するゲーティング処理に応じて、前記ゲーティング処理された領域のデータを表示する、請求項1から14のいずれか一項に記載の微小粒子分析システム。
- 前記ゲーティング処理された領域のデータは、二次元プロットとして表示される、請求項15に記載の微小粒子分析システム。
- 前記光照射部と前記検出部とを含むフローサイトメータ装置を有する、請求項1から16のいずれか一項に記載の微小粒子分析システム。
- 前記検出データを記憶する記憶部を有する、請求項1から17のいずれか一項に記載の微小粒子分析システム。
- 前記微小粒子から発せられた蛍光を分光する分光器を有する、請求項1から18のいずれか一項に記載の微小粒子分析システム。
- 前記微小粒子は細胞である、請求項1から19のいずれか一項に記載の微小粒子分析システム。
- 前記色素は、FITC、PE、PerCP、及びPE-Cy5からなる群より選択されるいずれか一つを少なくとも含む、請求項1から20のいずれか一項に記載の微小粒子分析システム。
- 流路を通流する色素で修飾された複数の微小粒子に少なくとも一つの励起光を照射する光照射工程と、
前記励起光の照射により前記微小粒子から発せられた蛍光を、複数の波長領域で検出する複数の検出器を有する検出工程と、
各波長領域で検出して得た検出データを、前記波長領域を示す波長情報と前記検出データに基づく蛍光強度をパラメーターとして、複数の色で表示する表示工程と、
を行い、
前記色は、前記複数の微小粒子の検出データの数を示し、
前記色素の数は、前記検出器の数より少ない、微小粒子分析方法。
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