JP7010439B2 - MHCクラスIaオープンコンフォーマー - Google Patents
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Description
アミノ酸配列は、アミノ末端からカルボキシル末端へ与えられる。配列位置の大文字は、1文字コードのL-アミノ酸を指す(Stryer、Biochemistry、第3版 p.21)。
本発明は、MHC-Iaオープンコンフォーマー(HLA-オープンコンフォーマー)を提供する。MHC-Iaオープンコンフォーマーには、HLA-A、HLA-B及びHLA-Cオープンコンフォーマーが含まれる。表1に、既知のMHC-Ia対立遺伝子のリストを示す。本発明は、HLA-B27又はHLA-B57対立遺伝子を含むMHC-Iaオープンコンフォーマーを含まない。
‐ 薬剤としての使用のために、
‐ 特に癌の治療又は予防に使用するために、
若しくは、
‐ 特に免疫調節剤としての使用のために、
‐ 特に感染症の治療のために、
‐ さらに特にヒト免疫不全ウイルス(HIV)、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎ウイルス(それぞれHAV、HBV、HCV)、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス(RSV)、はしかウイルス、ヘルペスウイルス及び/又は黄熱病ウイルスの予防、治療又は療法のために、
提供される。
‐ 薬剤としての使用のために、
‐ 特に癌の治療又は予防に使用するために、
若しくは、
‐ 特に免疫調節剤としての使用のために、
‐ 特に感染症の治療のために、
‐ さらに特にヒト免疫不全ウイルス(HIV)、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎ウイルス(それぞれHAV、HBV、HCV)、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス(RSV)、はしかウイルス、ヘルペスウイルス及び/又は黄熱病ウイルスの予防、治療又は療法のために、
提供される。
‐ 薬剤としての使用のために、
‐ 特に癌の治療又は予防に使用するために、
若しくは、
‐ 特に免疫調節剤としての使用のために、
‐ 特に感染症の治療のために、
‐ さらに特にヒト免疫不全ウイルス(HIV)、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎ウイルス(それぞれHAV、HBV、HCV)、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス(RSV)、はしかウイルス、ヘルペスウイルス及び/又は黄熱病ウイルスの予防、治療又は療法のために、
提供される。
‐ 薬剤としての使用のために、
‐ 特に癌の治療又は予防に使用するために、
若しくは、
‐ 特に免疫調節剤としての使用のために、
‐ 特に感染症の治療のために、
‐ さらに特にヒト免疫不全ウイルス(HIV)、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎ウイルス(それぞれHAV、HBV、HCV)、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス(RSV)、はしかウイルス、ヘルペスウイルス及び/又は黄熱病ウイルスの予防、治療又は療法のために、
提供される。
項目1:薬剤として使用するための、特に癌の治療又は予防に使用するため又は免疫調節剤としての使用のための、会合β2-ミクログロブリンを本質的に含まない、MHC-Ia対立遺伝子由来の単離された単一HLA重鎖ポリペプチド単量体。
項目2:単量体がペプチドエピトープ断片をさらに含む、項目1に記載の癌の治療又は予防、又は免疫調節剤として使用するための、MHC-Ia対立遺伝子由来の単離された単一HLA重鎖ポリペプチド単量体。
項目3:HLA重鎖がHLAアルファ1、2及び3ドメインのみからなる、項目1又は2に記載の癌の治療又は予防、又は免疫調節剤として使用するための、MHC-Ia対立遺伝子由来の単離された単一HLA重鎖ポリペプチド単量体。
項目4:HLA重鎖が膜貫通ドメインを含み、かつ細胞内ドメイン(細胞質尾部)を含まない、前記項目のいずれか1項に記載の癌の治療又は予防、又は免疫調節剤として使用するための、MHC-Ia対立遺伝子由来の単離された単一HLA重鎖ポリペプチド単量体。
項目5:併用薬剤であって、:
a.項目1~4のいずれか一項に特定されるとおり、MHC-Ia対立遺伝子由来の単離された単一HLA重鎖ポリペプチド単量体と、
b.チェックポイント阻害剤、特にチェックポイント阻害抗体及び/又はチェックポイントアゴニスト剤、特にチェックポイントアゴニスト抗体、
とを含む前記併用薬剤。
項目6:項目5に記載の併用薬剤であって、前記チェックポイント阻害剤が、CD80又はCD86とのCTLA4相互作用の阻害剤、及びPD-1とそのリガンドPD-L1との相互作用の阻害剤、特にCTLA4、CD80、CD86、PD-1、PD-L1のいずれか一つに対する抗体、さらに特にヒトCTLA4、PD-1又はPD-L1に対するモノクローナル抗体から選択され、及び/又は前記チェックポイントアゴニスト剤はアゴニスト抗体又は4-1BB及び/又は4-1BBL(CD137L、Uniprot P41273)に対するリガンドから選択される、前記併用薬剤。
- 本発明の上記態様又は実施形態のいずれか一つに記載の単離されたMHC-Iaオープンコンフォーマー、又は融合MHC-Iaオープンコンフォーマー、及び、
- 免疫チェックポイント調節剤であって、
○ 免疫チェックポイント阻害剤(CPI)であって:
・ B7-1(CD80)及び/又はB7-2(CD86)との細胞傷害性Tリンパ球関連タンパク質4(CTLA4;CD152としても知られている)相互作用の阻害剤、特に例えば抗体のようなCTLA-4又はcd80又はcd86に対するポリペプチドリガンド、
・ プログラム細胞死タンパク質1(PD-1;CD279としても知られている)とそのリガンドPD-L1(CD274としても知られる;UniProt ID:Q9NZQ7)及び/又はPD-L2(CD273としても知られる;UniProt ID:Q9BQ51)との相互作用の阻害剤。特に、例えば抗体のような、PD-1又はPD-L1又はPD-L2に対するポリペプチドリガンド、及び
・ 特に抗体のような、T細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有3(TIM-3)の阻害性ポリペプチドリガンド、
から選択される前記免疫チェックポイント阻害剤(CPI)、及び
○ チェックポイントアゴニスト剤、特に、腫瘍壊死因子受容体4-1BB(CD137又はTNFRSF9としても知られている)に結合して活性化するように選択されたチェックポイントアゴニスト抗体、
から選択される前記免疫チェックポイント調節剤、
とを含む。
項目A:組換えバイオテクノロジーの方法により、ヒトHLA重鎖ポリペプチドを産生するための方法であって、前記方法は以下の工程を含む:
a.発現段階:
i.細胞、特に真核細胞、さらに特に哺乳類細胞において作動可能なプロモーター配列の制御下でHLA重鎖の少なくともα1鎖、α2鎖及びα3鎖をコードするHLAコード核酸配列、及び
ii.前記細胞(項目1のaと同じ細胞)において作動可能なプロモーター配列の制御下で、ヒトHLAβ2ミクログロブリン(UniProt P61769)をコードするβ2-ミクログロブリンコード核酸配列を、哺乳動物細胞(「産生細胞株」)において同時発現させる;
b.精製工程:得られたHLA-重鎖/β2-ミクログロブリン複合体を哺乳動物細胞(産生細胞株)から精製し;
c.解離工程:精製されたHLA-重鎖/β2-ミクログロブリン複合体を適切な条件下で解離させ、HLA重鎖ポリペプチドをβ2-ミクログロブリンポリペプチドから分離し;
d.リフォールディング段階:分離されたHLA重鎖ポリペプチドを、リフォールディング(生理的に活性なHLAオープンコンフォーマー分子に見られるそれらの天然の三次タンパク質構造へ)することを誘導する条件下でインキュベートする。
項目AA:ヒトHLA重鎖ポリペプチドがB27重鎖でもB57重鎖でもないということを条件とする項目A。
項目B:項目A又は項目AAに記載のヒトHLA重鎖ポリペプチドの製造方法であって、HLAコード核酸配列が、コードされたポリペプチドのN末端からC末端へ、α1鎖、α2鎖、α3鎖と安定化配列とを含む。
項目C:項目Bに記載のヒトHLA重鎖ポリペプチドの製造方法であって、安定化配列が、ウシ血清アルブミン及び免疫グロブリン定常断片(Fc)、特に免疫グロブリンG定常断片、さらに特にIgG4Fcから選択される。
項目D:上記項目のいずれかに記載のヒトHLA重鎖ポリペプチドの製造方法であって、HLAコード核酸配列及びβ2ミクログロブリンコード核酸配列が、同一の核酸ベクター分子(特に、DNA発現プラスミド)上に存在する。
項目E:上記項目A~Cのいずれかに記載のヒトHLA重鎖ポリペプチドの製造方法であって、HLAコード核酸配列及びβ2ミクログロブリンコード核酸配列が異なる核酸ベクター分子(特に、異なるDNA発現プラスミド)上に存在する。
項目F:項目Eの方法であって、HLAコード核酸配列を含む核酸ベクターが、β2-ミクログロブリンコード核酸配列、特に約3重過剰に含む核酸ベクターに対して、約1~5重過剰、特に1.5~5重過剰に存在する。
項目G:前記項目のいずれかに記載の方法であって、HLAコード核酸配列が安定化配列としての免疫グロブリンFc断片を含み、精製工程は、プロテインAへ連結された表面に組換えHLA重鎖ポリペプチドを吸着させることによって行われる。
項目H:上記項目のいずれかに記載の方法であって、解離工程は、酸性条件下、特に約pH 2での処理により、かつ還元条件下での透析により行われる。
項目I:前記項目のいずれかに記載の方法であって、リフォールディング工程が、中性条件下での処理により行われる。
項目A’:組換えバイオテクノロジーの方法により、ヒトHLA重鎖ポリペプチドを製造する方法であって、前記方法は以下の工程を含む:
a.発現段階:
i.細胞、特に真核細胞、さらに特に哺乳動物細胞において作動可能なプロモーター配列の制御下でHLA重鎖の少なくともアルファ1鎖、アルファ2鎖及びアルファ3鎖をコードするHLA重鎖コード核酸配列、及び
ii.前記細胞(項目1のaと同じ細胞)において作動可能なプロモーター配列の制御下で、ヒトHLAβ2ミクログロブリン(UniProt P61769)をコードするβ2-ミクログロブリンコード核酸配列を、哺乳動物細胞(「産生細胞株」)において同時発現させる;
b.精製工程:得られたHLA重鎖/β2-ミクログロブリン複合体を哺乳動物細胞(産生細胞株)から精製し;
c.解離工程:精製されたHLA重鎖/β2-ミクログロブリン複合体を適切な条件下で解離させ、HLA重鎖ポリペプチドをβ2-ミクログロブリンポリペプチドから分離し;
d.リフォールディング段階:分離されたHLA重鎖ポリペプチドは、リフォールディング(生理学的に活性なHLAオープンコンフォーマー分子に見られるそれらの天然の三次タンパク質構造へ)することを誘導する条件下でインキュベートする。
項目AA’:ヒトHLA重鎖ポリペプチドがB27重鎖でもB57重鎖でもないということを条件とする項目A’。
項目B’:項目A’又は項目AA’に記載のヒトHLA重鎖ポリペプチドの製造方法であって、HLAコード核酸配列が、コードされたポリペプチドのN末端からC末端へ、アルファ1鎖、アルファ2鎖、アルファ3鎖と安定化配列とを含む。
項目C’:項目B’に記載のヒトHLA重鎖ポリペプチドの製造方法であって、安定化配列が、ウシ血清アルブミン及び免疫グロブリン定常断片(Fc)、特に免疫グロブリンG定常断片、さらに特にIgG4Fcから選択される。
項目D’:上記項目のいずれかに記載のヒトHLA重鎖ポリペプチドの製造方法であって、HLA-B57コード核酸配列及びβ2ミクログロブリンコード核酸配列が同一の核酸ベクター分子(特に、DNA発現プラスミド)上に存在する。
項目E’:上記項目A’~C’のいずれかに記載のヒトHLA重鎖ポリペプチドの製造方法であって、HLA-B57コード核酸配列及びβ2-ミクログロブリンコード核酸配列が異なる核酸ベクター分子(特に、異なるDNA発現プラスミド)上に存在する。
項目F’:項目E’の方法であって、HLA-B57コード核酸配列を含む核酸ベクターが、β2-ミクログロブリンコード核酸配列、特に約3重過剰に含む核酸ベクターに対して、約1~5重過剰、特に1.5~5倍過剰に存在する。
項目G’:前記項目のいずれかに記載の方法であって、HLAコード核酸配列が安定化配列として免疫グロブリンFc断片を含み、精製工程は、プロテインAへ連結された表面に組換えHLA重鎖ポリペプチドを吸着させることによって行われる。
項目H’:前記項目のいずれかに記載の方法であって、解離工程は、酸性条件下、特に約pH 2での処理により、かつ還元条件下での透析により行われる。
項目I’:前記項目のいずれかに記載の方法であって、リフォールディング工程が、中性条件下での処理により行われる。
MHC-Iaオープンコンフォーマーは、それらのHLA-β2m-Fcコントロール対応物とは独特の結合又は異なる親和性で、多様な型の白血球に発現している免疫調節受容体に結合する。
iTreg変換についてのナイーブCD4+T細胞におけるMHC-Ia分子の影響を、iTreg変換に最適な培養条件でナイーブCD4+T細胞とインキュベートした、10μg/mLのHLA2-Fc(A252-Fc、A302-Fc、B272-Fc、B532-Fc、B572-Fc、B582-Fc、C082-Fc及びC122-Fc)、HLA-β2m-Fcコントロール(A25-β2m-Fc、A30-β2m-Fc、B27-β2m-Fc、B53-β2m-Fc、B57-β2m-Fc、B58-β2m-Fc、C08-β2m-Fc及びC12-β2m-Fc)、アイソタイプ、及びPBSで分析した。MHC-Iaオープンコンフォーマーは、FoxP3の誘導(図6)、つまりナイーブCD4+T細胞のiTregへの変換を常に下方調節することを実証した。
本発明者らは、異なる腫瘍細胞株における増殖の遮断を伴うMHC-Iaオープンコンフォーマー(A252-Fc、A302-Fc、B272-Fc、B532-Fc、B572-Fc、B582-Fc、C082-Fc及びC122-Fc)の効果を測定した。結果、MHC-Iaオープンコンフォーマーは、コントロール対応物のHLA-β2m-Fc(図7)又はアイソタイプIgG4(データは提供しない)と比較して、リンパ腫T細胞株の増殖を常に調節することが示され、標的療法としてのリンパ腫の治療の潜在的適用を示している。
癌治療のための免疫調節治療分子としてのMHC-Iaオープンコンフォーマーの概念のインビボ実証は、有効な前臨床同系マウスC38及びMC38-OVA結腸癌モデル(図8及び9)を用いて、並びに膵臓(Pan02)癌マウスモデルにおいて実証された。(図10、13、16、19、22、25、28及び31)。
治療上の観点からの有効な戦略とは、溶解性、安定性、結合活性、半減期の増加、及び哺乳動物系での技術的観点、費用対効果の高い生産及び精製のために安定な型(Fc融合)においてMHC-Iaオープンコンフォーマー分子を産生することである。HLA-β2m-Fc複合体は、HLA-A25、HLA-A30、HLA-B27、HLA-B53、HLA-B57、HLA-B58、HLA-C08及びHLA-C12のアルファ1、2及び3ドメインを、ヒトIgG4-Fcベクターカセット(図3A)に、HLA-β2m-Fcタンパク質の細胞外産生に必要なヒト-β2mベクターと共に挿入することにより産生される(図3A、B)。チャイニーズハムスター卵巣細胞(CHO)細胞におけるトランスフェクションは、HLA-Fcベクター+β2mベクターの両方を1:1の比率で用いて行った。上清を回収し、標準的な抗体精製手順(組換えタンパク質精製ハンドブック(Recombinant Protein Purification Handbook)、原則及び方法、2009.GEヘルスケア(GE Healthcare)、18-1142-75)を用いてHLA-β2m-Fcを精製した。HLA-Fc遊離重鎖からのβ2mの分離は、SEC(図4A)又は透析法(データは示さず)により変性状態を利用し行った。リフォールディング緩衝液において希釈法を用いてHLA2-Fcのリフォールディングを評価し、ポリアクリルアミド電気泳動(SDS page)(図4B,C)又はウエスタンブロットにより分析した(データは示さず)。
免疫調節治療分子としてHLA2-Fc(A302-Fc、B272-Fc、B572-Fc、B582-Fc及びC082-Fc)を用いたインビボ概念実証試験は、C38及びMC38-OVAマウス結腸癌腫モデルにおいて、単独療法として、又はマウスCTLA4又はマウスPD-1抗体との併用療法として実証された。
膵臓(Pan02)癌マウスモデルについては、確立された手順に従ってPan02細胞を同系マウスの右側腹部にそれぞれ1×105で注射した。腫瘍が300mm3に達したら(細胞注射後約3週間)、マウスをそれらの腫瘍体積に従って統計的に分布させた。大きな腫瘍は小さな腫瘍よりも処置が困難であるが、腫瘍浸潤リンパ球(TIL)のさらなる分析には有用であることを言及する。さらに、大きな腫瘍は、免疫調節剤による介入が患者の大きなサイズの腫瘍において行われる臨床的設定により近い。
本発明は、β2mを有さない重鎖(HLA-A、HLA-B及びHLA-Cオープンコンフォーマー及びそれらの対応するHLA2-Fc融合タンパク質)として産生される場合の古典的なMHC-Ia分子のファミリーが、それらのコントロールHLA-β2m対応物とは異なる免疫調節特性を有することを初めて実証する。非限定的な例として、HLA対立遺伝子の多様なセットを使用して、本発明者らは、オープンコンフォーマーとして存在する場合は常にMHC-Ia分子が腫瘍微小環境及び血中に存在する白血球の調節によって実証されるとおりの独特な特性を有する免疫調節剤であることを実証するデータを提供する。さらに、その使用は調節剤だけでなく、結腸癌及び膵臓癌の前臨床癌マウスモデルにおいて単独療法として又はチェックポイント阻害剤抗体(例えばCTLA4及びPD-1)及びチェックポイントアゴニスト抗体(例えば4-1BB)との併用療法として実証されるような癌治療用の治療薬としての使用にも用いられる。
細胞株
C38及びMC38-OVA結腸癌マウス細胞株を用いてインビボ実験を行った。
iTreg変換実験のためのリンパ球集団は:CD4(FITC-BD バイオサイエンス(Bioscience))、FoxP3+(efluor 450- eバイオサイエンス(eBioscience))、CD3(PE-Cy7- eバイオサイエンス)、CD45(PerCP- eバイオサイエンス)で染色した。
HLA-β2m-Fc(A25-β2m-Fc、A30-β2m-Fc、B27-β2m-Fc、B53-β2m-Fc、B57-β2m-Fc、B58-β2m-Fc、C08-β2m-Fc及びC12-β2m-Fc)の組換え生産は、HLAのアルファ1、2及び3ドメインをヒトIgG4-Fcベクター(インビボゲン(InvivoGen))に挿入し、そしてヒトβ2-ミクログロブリン(β2m)を別のベクターに挿入することによって達成した。組換えHLA-β2m-Fcの産生は、HLA-Fc-ベクターとβ2m-ベクターをチャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞へ同時トランスフェクションすることによって行った。HLA-β2m-Fcの生産はEvitria AGに外部委託した。
競合ELISAアッセイは、クリエイティブバイオマート(Creative Biomart)から購入した10μg/mLの選択された白血球受容体(ヒトKIR3DL1、ヒトKIR3DL2、ヒトKIR3DL3、ヒトLILRB1、ヒトLILRB2、ヒトPTPRJ及びマウスPirb)で被覆したマキシソープ(Maxisorp)(ヌンク(Nunc)、スイス)96ウェルプレートを用いて行った。受容体を4℃で終夜インキュベートし、5%粉乳-TBSで2時間ブロックした。HLA2-Fc選択された構築物(A252-Fc、A302-Fc、B272-Fc、B532-Fc、B572-Fc、B582-Fc、C082-F及びC122-Fc)及びそれらのコントロール(A25-β2m-Fc、A30-β2m-Fc、B27-β2m-Fc、B53-β2m-Fc、B57-β2m-Fc、B58-β2m-Fc、C08-β2m-Fc及びC12-β2m-Fc)、並びにアイソタイプIgG4を10μg/mL、室温にて2時間で添加した。ヒトFcに対するHRP結合抗体を検出器として使用した。
フローサイトメトリー分析は、FACS canto II(BD バイオサイエンス)を用いて行い、データはFlowJoバージョン7.6.4を用いて分析した。
マウスCD4+T細胞においてFoxp3の発現を誘導するために、C57BL/6脾細胞から脾臓細胞を採取し、そして精製して(マウスナイーブCD4+T細胞単離キット イージーセプ(Easy Sep))CD4+Tナイーブ細胞を得た。次いで、細胞を、5μg/mLの抗CD3mAb(eバイオサイエンス)、可溶性2μg/mLの抗CD28mAb(バイオレジェンド)、10μg/mLのTGF-β1(R&Dシステム)及び100IU/mLのIL-2(R&Dシステム)で被膜された96ウェルプレートにおいて105細胞/200μL/ウェルで96時間培養した。
iTreg変換に最適な培養条件のマウスナイーブCD4+T細胞を、用量濃度(5μg/200μL)のHLA2-Fc(A252-Fc、A302-Fc、B272-Fc、B532-Fc、B572-Fc、B582-Fc、C082-Fc及びC122-Fc)、コントロール(A25-β2m-Fc、A30-β2m-Fc、B27-β2m-Fc、B53-β2m-Fc、B57-β2m-Fc、B58-β2m-Fc、C08-β2m-Fc及びC12-β2m-Fc)、アイソタイプIgG4、分化因子を含まない培地及びPBSの存在下で72時間インキュベートした。iTreg変換はフローサイトメトリーにより測定した。
細胞を1日間、異なる濃度(25、10、及び5μg/ウェル)の試薬を添加した後、5×105細胞/ウェルの密度で円形96ウェルプレートに播種した。マニュアルの指示(細胞増殖キットII、ロシュ(Roche))に従って、XTT増殖アッセイを実施した。マイクロタイタープレートリーダーを用いて450nmでのウェルの吸光度で結果を得た。
C38又はMC38-OVA腫瘍断片を6週目に同系雌C57BL/6マウスの右脇腹に皮下注射した。Pan02細胞株を6週目に同系マウスC57BL/6の右脇腹に1×105で注射した。それらの個々の腫瘍体積サイズに従い区分し、そしてそれらの間に統計的差異を示さない群に分けた。C38及びMC38-OVAについては、腫瘍が±60mm3に達したときに実験的治療を開始した。膵臓Pan02については、実験治療は300mm3の大きさの腫瘍において開始した。キャリパーを用いて腫瘍直径を測定し、式D/2×d2に従って体積を計算した。ここで、D及びdはそれぞれmm単位の腫瘍の最長及び最短直径である。
Claims (16)
- 単離されたMHC-IaオープンコンフォーマーがHLA-B27又はHLA-B57オープンコンフォーマーではないことを条件とし、A25、B58、C08、A30、B53、及びC12から選択される1つ又は2つのHLA重鎖を含む、又は、からなる、薬剤として使用するための、単離されたMHC-Iaオープンコンフォーマー。
- 前記単離されたMHC-Iaオープンコンフォーマーは、第1及び第2の単量体を含み、かつ他の単量体と独立する各単量体はHLA重鎖であり又は含み、HLA重鎖は、HLA-B27又はHLA-B57重鎖ではないことを条件とする、請求項1に記載の薬剤として使用するための、単離されたMHC-Iaオープンコンフォーマー。
- 癌の治療又は予防における使用のための、又は免疫調節剤としての、請求項1又は2に記載の単離されたMHC-Iaオープンコンフォーマー。
- 感染症の治療において、又は、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)感染症、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、インフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルス(RSV)感染症、はしか、ヘルペス及び黄熱病の治療において、免疫調節剤として使用するための、請求項1又は2に記載の単離されたMHC-Iaオープンコンフォーマー。
- 融合MHC-IaオープンコンフォーマーがHLA-B27又はHLA-B57オープンコンフォーマーではないことを条件とする、融合MHC-Iaオープンコンフォーマーであって、前記融合MHC-Iaオープンコンフォーマーは第1及び第2の単量体を含み、又はからなり、
a.他の単量体と独立する前記第1及び第2の単量体のそれぞれは、A25、B58、C08、A30、B53、及びC12から選択されるHLA重鎖を含み、かつ
b.前記第1及び第2の単量体のそれぞれは、Fcポリペプチド配列に共有結合的に連結される、
前記融合MHC-Iaオープンコンフォーマー。 - アミノ酸リンカーがHLA重鎖とFcポリペプチド配列とを連結する、請求項5に記載の融合MHC-Iaオープンコンフォーマー。
- Fcドメインは、免疫グロブリンG型(IgG)、A型(IgA)、D型(IgD)、E型(IgE)又はM型(IgM)のいずれか1つから選択される重鎖定常領域CH2及びCH3を含む、請求項5~6のいずれか一項に記載の融合MHC-Iaオープンコンフォーマー。
- アミノ酸リンカーが、1~50個のアミノ酸を含み、HLA重鎖を1本の単一ポリペプチド鎖としてFcドメインに連結する、請求項5~7のいずれか一項に記載の融合MHC-Iaオープンコンフォーマー。
- アミノ酸リンカーが、5~40個のアミノ酸を含み、HLA重鎖を1本の単一ポリペプチド鎖としてFcドメインに連結する、請求項5~7のいずれか一項に記載の融合MHC-Iaオープンコンフォーマー。
- アミノ酸リンカーが、10~30個のアミノ酸を含み、HLA重鎖を1本の単一ポリペプチド鎖としてFcドメインに連結する、請求項5~7のいずれか一項に記載の融合MHC-Iaオープンコンフォーマー。
- アミノ酸リンカーが、15~25個のアミノ酸を含み、HLA重鎖を1本の単一ポリペプチド鎖としてFcドメインに連結する、請求項5~7のいずれか一項に記載の融合MHC-Iaオープンコンフォーマー。
- 薬剤として使用するための、
a.癌の治療又は予防において、又は
b.免疫調節剤として、又はヒト免疫不全ウイルス(HIV)感染症、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、インフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルス(RSV)感染症、はしか、ヘルペス及び黄熱病から選択される感染症の治療において
の使用のための、請求項5~11のいずれか一項に記載の融合MHC-Iaオープンコンフォーマー。 - 癌の治療又は予防における使用のための、免疫調節剤としての使用のための、又は感染症の治療における使用のための核酸分子であって、前記核酸分子は、請求項1~11のいずれか一項に記載の単離されたMHC-Iaオープンコンフォーマー又は融合MHC-Iaオープンコンフォーマーをコードする、前記核酸分子。
- 癌の治療又は予防における使用のための、又は免疫調整剤として使用のための、又は感染症の治療における使用のための、哺乳動物細胞又はヒト細胞において作動可能なプロモーター配列の制御下で、請求項13に記載の核酸分子を含むウイルス。
- 請求項13に記載の核酸分子を含むインビトロで遺伝子改変された宿主細胞。
- 医薬組成物であって、
a.請求項1~11のいずれか一項で特定されるとおりの単離されたMHC-Iaオープンコンフォーマー又は融合MHC-Iaオープンコンフォーマー、及び
b.チェックポイント調節剤であって、
i.チェックポイント阻害剤(CPI)、前記CPIは:
‐ CTLA4とB7-1(cd80)及び/又はB7-2(cd86)のいずれかとの相互作用の阻害剤;
‐ PD-1とPD-L1及び/又はPD-L2のいずれかとの相互作用の阻害剤;及び、
‐ 抗体である、T細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有3(TIM-3)の阻害性ポリペプチドリガンド;
から選択される前記チェックポイント阻害剤(CPI);及び
ii.チェックポイントアゴニスト剤である、腫瘍壊死因子受容体4-1BBに結合し、かつ活性化するように選択されたチェックポイントアゴニスト抗体、又は4-1BBに対するモノクローナル抗体、
から選択される前記チェックポイント調節剤、を含み、
前記チェックポイント調節剤は、抗体、抗体断片、及び抗体様分子から選択されるポリペプチドであり、かつポリペプチドはCTLA4、PD-1、CD80、CD86、PD-L1、PD-L2、TIM-3、4-1BB及び4-1BBLから選択されるチェックポイントメディエータに対して、選択的に反応性である、
前記医薬組成物。
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