ES2807424T3 - Uso de homodímeros de hla-b27 para el tratamiento del cáncer - Google Patents

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Abstract

Un homodímero de proteína de fusión de HLA-B27 para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer, en donde dicho homodímero comprende, o consiste en, un primer y un segundo monómero, y cada monómero comprende independientemente del otro monómero: i. una cadena pesada de HLA-B27, y ii. un fragmento Fc.

Description

DESCRIPCIÓN
Uso de homodímeros de hla-b27 para el tratamiento del cáncer
La presente invención se refiere al uso de homodímeros de cadena pesada de HLA-B27, para su uso en la profilaxis o terapia contra el cáncer.
Los antígenos leucocitarios humanos (HLA) pertenecen a la familia de proteínas del complejo principal de histocompatibilidad (MHC) clásico. El complejo HLA ayuda al sistema inmunitario a distinguir las proteínas propias del cuerpo de las proteínas producidas por invasores extraños tales como virus y bacterias. Los humanos tienen tres genes principales del m Hc de clase I, conocidos como HLA-A, HLA-B y HLA-C. Los genes HLA tienen muchas variaciones posibles, lo que permite que el sistema inmunitario de cada persona reaccione a una amplia gama de invasores extraños. Algunos genes HLA tienen cientos de versiones identificadas (alelos), cada una de las cuales recibe un número particular (tal como HLA-B27). Los alelos estrechamente relacionados se clasifican juntos; por ejemplo, al menos 40 alelos muy similares son subtipos de HLA-B27. Estos subtipos se designan como HLA-B*2701 a HLA-B*2743.
Las moléculas del MHC-I clásico (denominadas HLA-I en humanos) son estructuras triméricas que comprenden una cadena pesada unida a la membrana con tres dominios extracelulares (a1, a2 y a3) que se asocia de manera no covalente con la microglobulina p2 (p2m) y un péptido pequeño. Las cadenas pesadas de HLA I pueden presentarse en una forma no asociada a la microglobulina p2 o al péptido. Estas formas se conocen como confórmeros abiertos.
Como todas las otras moléculas HLA, la función principal de HLA-B27 es presentar péptidos derivados de células a linfocitos T citotóxicos (CTL) CD8+, como parte de la respuesta inmunitaria adaptativa. En condiciones fisiológicas normales, las moléculas HLA-B27 forman complejos heterotriméricos que consisten en cadenas pesadas de B27, microglobulina p2 y péptidos, que se derivan de proteínas propias, virus o bacterias. A este respecto, HLA-B27 se asemeja a todos los demás alelos de HLA de clase I. Sin embargo, HLA-B27 también puede presentarse en las células como cadenas pesadas libres que carecen de microglobulina p2m y péptido, también denominados como confórmeros abiertos de HLA-B27. Además, las propiedades bioquímicas del confórmero abierto de HLA-B27 también pueden inducir la formación de homodímeros de cadena pesada libres-p2m mediante la formación de un enlace disulfuro de cisteína en la posición 67 (Cys 67) y la posición 164 (Cys 164) (Antoniou y otros, JBC, 2003, 279, 8895-8902). La formación de los confórmeros abiertos de B27 no se altera por la presencia de péptidos, por lo tanto, las moléculas de confórmeros abiertos B27 pueden presentarse unidas al péptido o sin él.
Los confórmeros abiertos de B27 se han asociado con el desarrollo de espondiloartritis (SpA) en pacientes +HLA-B27. La posesión de HLA-B27 se asocia fuertemente con el desarrollo de espondiloartritis, un grupo de enfermedades relacionadas que incluyen espondilitis anquilosante (AS), artritis psoriásica, artritis enteropática en pacientes con enfermedad inflamatoria intestinal (IBD), artritis reactiva después de infecciones gastrointestinales y urogenitales específicas y SpA juvenil, donde la más reconocida es la AS.
La demostración de la expresión en la superficie celular de los confórmeros abiertos de B27 condujo a la propuesta de que los receptores leucocitarios inmunorreguladores podrían interactuar específicamente con los confórmeros abiertos de B27. Cómo la interacción de los confórmeros abiertos de B27 con receptores inmunorreguladores conduce a la AS, no se ha determinado aún.
Una variedad de receptores inmunorreguladores pueden reconocer confórmeros abiertos de B27 (además del receptor de células T (TCR)). Estos incluyen los receptores tipo inmunoglobulina de las células asesinas naturales (KIR) y los receptores leucocitarios tipo inmunoglobulina (LILR), que se expresan en muchos tipos de leucocitos, lo que incluye células NK, células NKT, monocitos, macrófagos, DC y células T.
El cáncer es un grupo de enfermedades caracterizadas porque células anormales del cuerpo experimentan un crecimiento descontrolado y destructivo. Las células cancerosas pueden diseminarse por el cuerpo y hacer metástasis para formar tumores; este patrón de crecimiento se denomina maligno.
Tarazona y otros, 2000, J. Immunology 165(12), 6776-6782 muestran que un péptido dimérico de 7 aminoácidos derivado de HLA-B27 puede bloquear la toxicidad de las células asesinas naturales (NK). El péptido dimérico se une a la tubulina p, induce la polimerización de la tubulina e interfiere con la dinámica normal de ensamblaje/desensamblaje de los microtúbulos.
Santos y otros, 2008, Arthritis Research Therapy 10(4), R100, describen que los homodímeros de HLA-B27 están implicados en la etiología de la espondilitis anquilosante.
Términos y definiciones
Las secuencias de aminoácidos se dan de amino terminal a carboxilo terminal. Las letras mayúsculas para las posiciones de secuencia se refieren a L-aminoácidos en el código de una letra (Stryer, Biochemistry, 3ra ed. pág. 21).
En el contexto de las presentes descripciones, los términos identidad de secuencia y porcentaje de identidad de secuencia se refieren a los valores determinados mediante la comparación de dos secuencias alineadas. Los métodos para el alineamiento de secuencias para la comparación se conocen bien en la técnica. El alineamiento de secuencias para la comparación puede realizarse mediante el algoritmo de homología local de Smith y Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981), mediante el algoritmo de alineamiento global de Needleman y Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), mediante la búsqueda por el método de similitud de Pearson y Lipman, Proc. Nat. Acad. Sci. 85:2444 (1988) o mediante implementaciones computarizadas de estos algoritmos, lo que incluye, pero no se limita a: CLUSTAL, GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA y TFASTA. A menos que se indique de cualquier otra manera, los valores de identidad de secuencia proporcionados en la presente descripción se refieren al valor obtenido mediante el uso del conjunto de programas BLAST mediante el uso de parámetros predeterminados (Altschul y otros, J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)). El programa informático para realizar el análisis BLAST está a disposición del público, por ejemplo, a través del National Center for Biotechnology-Information (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/). Un ejemplo para la comparación de secuencias de aminoácidos es el algoritmo BLASTP que usa configuraciones predeterminadas tales como: Umbral esperado: 10; Tamaño de palabra: 3; Coincidencias máximas en un rango de consulta: 0; Matriz: BLOSUM62; Penalizaciones por huecos: Existencia 11, Extensión 1; Ajustes composicionales: ajuste de la matriz de puntuación de composicional condicional. Un ejemplo de este tipo para la comparación de secuencias de ácido nucleico es el algoritmo BLASTN que usa las configuraciones predeterminadas: Umbral esperado: 10; Tamaño de palabra: 28; Coincidencias máximas en un rango de consulta: 0; Puntuaciones por coincidencia/falta de coincidencia: 1.-2; Penalizaciones por huecos: lineal
En el contexto de la presente descripción, el término complejo principal de histocompatibilidad (MHC) se usa en su significado conocido en la técnica de la biología celular y la bioquímica; se refiere a una molécula de la superficie celular que muestra una fracción específica (péptido), también denominado como un epítopo, de una proteína. Existen dos clases principales de moléculas MHC: clase I y clase II.
Generalmente, las moléculas de cadena pesada del MHC de clase I (es decir, cuando no están en la forma de confórmero abierto) se presentan como una cadena alfa enlazada a una unidad de la molécula no MHC microglobulina p2. La cadena alfa comprende, en dirección desde el extremo N terminal al extremo C terminal, un péptido señal, tres dominios extracelulares (a1-3, donde a l está en el extremo N terminal), una región transmembrana y una cola citoplasmática C-terminal. El péptido que se muestra o presenta se sostiene en el surco de unión al péptido, en la región central de los dominios a1/a2.
En el contexto de la presente descripción, el término dominio microglobulina ¡32 se usa en su significado conocido en la técnica de la biología celular y la bioquímica; se refiere a una molécula no MHC que forma parte de la molécula heterodimérica MHC clase I. En otras palabras, constituye la cadena p del heterodímero MHC de clase I.
En el contexto de la presente descripción, el término antígeno leucocitario humano (HLA) se usa en su significado conocido en la técnica de la biología celular y la bioquímica; se refiere al loci de genes que codifican las proteínas del MHC clase I humano. Los tres genes principales del MHC clase I en el HLA son HLA-A, HLA-B y HLA-C, y todos estos genes tienen un número variable de alelos, por ejemplo, HLA-B tiene 3590 alelos conocidos. Los alelos estrechamente relacionados se combinan en subgrupos de un alelo determinado. Por ejemplo, el alelo de HLA-B27 tiene más de 160 alelos estrechamente relacionados que, de acuerdo con el Comité de Nomenclatura de la OMS para los Factores del Sistema HLA, se etiquetan como h La -B*27:01:00 a HLA-B*27:99:00. La secuencia completa o parcial de todos los genes de HLA conocidos y sus alelos respectivos están disponibles para el experto en la técnica en bases de datos especializadas tales como IMGT/HLA (http://www.ebi.ac.uk/ipd/imgt/hla/).
En el contexto de la presente descripción, el término anticuerpo se usa en su significado conocido en la técnica de la biología celular y la inmunología; se refiere a anticuerpos completos, lo que incluye, pero no se limita a, inmunoglobulina tipo G (IgG), tipo A (IgA), tipo D (IgD), tipo E (IgE) o tipo M (IgM), cualquier fragmento de unión a antígeno o cadenas simples de estos y constructos relacionados o derivados. Un anticuerpo completo es una glicoproteína que comprende al menos dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro. Cada cadena pesada comprende una región variable de la cadena pesada (VH) y una región constante de la cadena pesada (CH). La región constante de la cadena pesada comprende tres dominios, CH1, CH2 y CH3. Cada cadena ligera comprende una región variable de la cadena ligera (abreviada en la presente descripción como VL) y una región constante de la cadena ligera (CL). La región constante de la cadena ligera comprende un dominio, CL. Las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras contienen un dominio de unión que interactúa con un antígeno. Las regiones constantes de los anticuerpos pueden mediar la unión de la inmunoglobulina a los tejidos o factores del huésped, lo que incluye diversas células del sistema inmunitario (por ejemplo, células efectoras) y el primer componente del sistema del complemento clásico.
En el contexto de la presente descripción, el término región de fragmento cristalizable (Fc) se usa en su significado conocido en la técnica de la biología celular y la inmunología; se refiere a una fracción de un anticuerpo que comprende dos fragmentos de cadena pesada idénticos que comprenden un dominio Ch2 y un dominio Ch3, unidos covalentemente por enlaces disulfuro.
En el contexto de la presente descripción, el término dímero se refiere a una unidad que consiste en dos subunidades.
En el contexto de la presente descripción, el término homodímero se refiere a un dímero que comprende dos subunidades que son ya sea miembros idénticos o muy similares de la misma clase de subunidades. Un ejemplo de un homodímero sería un dímero que consiste en dos subunidades seleccionadas independientemente de la lista de alelos de HLA-B27. En ciertas modalidades, los homodímeros consisten en dos alelos de HLA-B27 idénticos.
En el contexto de la presente descripción, el término enlazador de aminoácidos se refiere a un polipéptido de longitud variable que se usa para conectar dos polipéptidos para generar un polipéptido de cadena única. Modalidades ilustrativas de enlazadores útiles para la práctica de la invención especificada en la presente descripción son cadenas de oligopéptidos que consisten en 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 40 o 50 aminoácidos. Un ejemplo no limitante de un enlazador de aminoácidos es el polipéptido GGGGSGGGGS (SEQ ID NO 173) que une un polipéptido HLA-B27 con un dominio Fc.
La presente invención proporciona homodímeros de cadena pesada de HLA-B27 para su uso en un tratamiento contra el cáncer.
En ciertas modalidades, el homodímero de cadena pesada de HLA-B27 comprende dos cadenas de polipéptidos de HLA-B27 idénticas. En ciertas modalidades, el homodímero de la proteína HLA-B27 comprende dos cadenas de polipéptidos de HLA-B27 diferentes.
De acuerdo con un primer aspecto de la invención, se proporciona un homodímero de proteína de fusión de confórmero abierto de HLA-B27 para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer. El homodímero de proteína de fusión comprende o consiste en dos monómeros, y cada monómero independientemente de cualquier otro monómero comprende una cadena de HLA-B27 y un dominio de polipéptidos que se conoce que estabiliza metabólicamente un polipéptido in vivo. Un ejemplo de dicho dominio estabilizador es un dominio Fc (fragmento cristalizable) de una inmunoglobulina. La cadena de HLA-B27 y el dominio estabilizador pueden unirse, opcionalmente, mediante un enlazador de aminoácidos. Una proteína de fusión de confórmero abierto que comprende la cadena de HLA-B27 y un fragmento Fc de inmunoglobulina se denomina en lo adelante, en la presente descripción, confórmero abierto HLA-B27 Fc o B272-Fc.
En ciertas modalidades, el dominio Fc se presenta en la proteína de fusión para aumentar la solubilidad, la estabilidad, la avidez, la vida media, y desde un punto de vista tecnológico, la producción y purificación rentables en sistemas de mamíferos (purificación de proteínas A o G).
En ciertas modalidades, los homodímeros de cadena pesada de HLA-B27 se producen sin región Fc y se acoplan a una secuencia de reconocimiento de biotinilación, lo que conduce a su biotinilación durante la síntesis en cultivo. El producto resultante comprende un resto de biotina. En ciertas modalidades, una pluralidad de homodímeros de la proteína de fusión de HLA-B27 se acoplan a un sustrato tal como, pero sin limitarse a, perlas recubiertas con estreptavidina. Esta multimerización aumenta la estabilidad de los confórmeros abiertos de HLA-B27 para pruebas in vitro. En ciertas modalidades, cuatro homodímeros de confórmeros abiertos de HLA-B27 se ensamblan en un tetrámero mediante la unión a perlas recubiertas con estreptavidina (B272-Tet).
En ciertas modalidades, el homodímero de cadena pesada de HLA-B27 comprende adicionalmente un fragmento de epítopo peptídico.
Además, en la presente descripción se describe un monómero de confórmero abierto de HLA-B27 (es decir, e1HLA-B27 no unido a un segundo polipéptido de cadena pesada de HLA-B27, y no unido mediante microglobulina p2) proporcionado para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer. En ciertas modalidades de este aspecto, el monómero de HLA-B27 comprende adicionalmente un fragmento de epítopo peptídico.
Este aspecto de la descripción puede resumirse en los siguientes elementos:
Elemento 1: Un monómero de polipéptido de cadena pesada de HLA-B27 individual aislado esencialmente libre de microglobulina p2 asociada para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer.
Elemento 2: El monómero de polipéptido de cadena pesada de HLA-B27 individual aislado para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer de acuerdo con el elemento 1, en donde el monómero comprende adicionalmente un fragmento de epítopo peptídico.
Elemento 3: El monómero de polipéptido de cadena pesada de HLA-B27 individual aislado para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer de acuerdo con los elementos 1 o 2, en donde la cadena de HLA-B27 consiste solo en los dominios alfa 1, 2 y 3 de HLA-B27.
Elemento 4: El monómero de polipéptido de cadena pesada de HLA-B27 individual aislado para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer de acuerdo con uno cualquiera de los elementos anteriores, en donde la cadena de HLA-B27 comprende el dominio transmembrana y no comprende el dominio intracelular (cola citoplasmática).
Elemento 5: El monómero de polipéptido de cadena pesada de HLA-B27 individual aislado para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer de acuerdo con uno cualquiera de los elementos anteriores, en donde la cadena de HLA-B27 tiene > 70 %, > 80 %, > 85 %, > 90 %, > 92 %, > 93 %, > 94 %, > 95 %, > 96 %, > 97 % o > 98 % o 100 % de identidad de secuencia en comparación con una cualquiera de las secuencias identificadas mediante las SEQ ID NO., enumeradas consecutivamente de la SEQ ID NO 006 a la SEQ ID NO 172.
Elemento 6: Un medicamento combinado que comprende
a. un monómero de polipéptido de cadena pesada de HLA-B27 individual aislado como se especifica en uno cualquiera de los elementos 1 a 5, y
b. un agente inhibidor de puntos de control.
Elemento 7: El medicamento combinado de acuerdo con el elemento 6, en donde dicho agente inhibidor de puntos de control se selecciona de un inhibidor de la interacción del CTLA4 con CD80 o CD86, un inhibidor de la interacción de PD-1 con su ligando PD-L1, y un ligando TIM-3, particularmente un anticuerpo contra uno cualquiera de CTLA4, CD80, CD86, PD-1, PD-L1 o TIM-3, más particularmente, un anticuerpo monoclonal contra el Ct La 4 o PD-1 humano.
En ciertas modalidades de uno cualquiera de los aspectos de la invención expuestos anteriormente, el fragmento de epítopo peptídico se une de manera no covalente al polipéptido dentro del dominio de presentación de antígeno de la cadena peptídica de HLA-B27.
En ciertas modalidades de uno cualquiera de los aspectos de la invención expuestos anteriormente, la cadena de HLA-B27 comprende solo los dominios extracelulares alfa 1, 2 y 3 de HLA-B27. En estas modalidades, los dominios transmembrana e intracelular de la cadena de HLA-B27 no se incluyen para permitir la expresión extracelular de la molécula en células recombinantes.
En ciertas modalidades de uno cualquiera de los aspectos de la invención expuestos anteriormente, la cadena de HLA-B27 del homodímero se selecciona de HLA-B*27:05, HLA-B*27:02, HLA-B*27:04, HLA-B*27:01, HLA-B*27:03, HLA-B*27:07, HLA-B*27:08, HLA-B*27:10, HLA-B*27:13, HLA-B*27:14, HLA-B*27:15, HLA-B*27:19, HLA-B*27:23, HLA-B*27:24, HLA-B*27:25 o HLA-B*27:49.
En ciertas modalidades de uno cualquiera de los aspectos de la invención expuestos anteriormente, la cadena de HLA-B27 comprende solo los dominios alfa 1, 2 y 3 de HLA-B27, pero no el dominio transmembrana e intracelular de una secuencia seleccionada de HLA-B*27:05, HLA-B*27:02, HLA-B*27:04, HLA-B*27:01, HLA-B*27:03, HLA-B*27:07, HLA-B*27:08, HLA-B*27:10, HLA-B*27:13, HLA-B*27:14, HLA-B*27:15, HLA-B*27:19, HLA-B*27:23, HLA-B*27:24, HLA-B*27:25 o HLA-B*27:49.
HLA-B*27:05 es el alelo asociado a la enfermedad más ampliamente distribuido. Sin embargo, otros subtipos asociados a la enfermedad comunes incluyen, pero no se limitan a, HLA-B*27:02 (poblaciones mediterráneas) y HLA-B*27:04 (chinos y otras poblaciones asiáticas) y además HLA-B*27:01, HLA-B*27:03, HLA-B*27:07, HLA-B*27:08, HLA-B*27:10, HLA-B*27:13, HLA-B*27:14, HLA-B*27:15, HLA-B*27:19, HLA-B*27:23, HLA-B*27:24, HLA-B*27:25 y HLA-B*27:49 se contemplan para su uso con la presente invención. Además, se conoce que estos tipos se asocian a la enfermedad, ya que se han observado al menos uno o más pacientes con espondiloartritis que poseen estos subtipos.
En ciertas modalidades de uno cualquiera de los aspectos de la invención expuestos anteriormente, la cadena de HLA-B27 tiene > 70 %, > 80 %, > 85 %, > 90 %, > 92 %, > 93 %, > 94 %, > 95 %, > 96 %, > 97 % o > 98 % o 100 % de identidad de secuencia en comparación con una cualquiera de las SEQ ID NO 006 a 172.
En ciertas modalidades, el homodímero de cadena pesada de HLA-B27 o el homodímero de la proteína de fusión de HLA-B27 consiste en dos subunidades seleccionadas independientemente de los alelos de HLA-B27 anteriores. En ciertas modalidades, los homodímeros consisten en dos alelos de HLA-B27 idénticos.
En ciertas modalidades, el homodímero de la proteína de fusión de HLA-B27 comprende un dominio Fc. En ciertas modalidades particulares, el dominio Fc comprende regiones constantes de la cadena pesada Ch2 y Ch3 de inmunoglobulina tipo G (IgG), tipo A (IgA), tipo D (IgD), tipo E (IgE) o tipo M (IgM).
En ciertas modalidades, el homodímero de la proteína de fusión de HLA-B27 comprende un enlazador de aminoácidos que une un dominio estabilizador, particularmente un dominio Fc, al polipéptido HLA. En ciertas modalidades particulares, el enlazador de aminoácidos comprende de 1 a 50 aminoácidos, particularmente, de 5 a 40 aminoácidos, más particularmente, de 10 a 30 aminoácidos, aún más particularmente, de 15 a 25 aminoácidos que unen la cadena de HLA-B27 al dominio Fc como una única cadena polipeptídica.
De acuerdo con un tercer aspecto de la invención, se proporciona una molécula de ácido nucleico que codifica un monómero de confórmero abierto de HLA-B27, o un monómero de la proteína de fusión de acuerdo con los aspectos anteriores de la invención, para su uso en el tratamiento o la terapia contra el cáncer. La expresión de la proteína de fusión in vivo a partir de la molécula de ácido nucleico conducirá, después de la dimerización, al polipéptido de la proteína de fusión de la invención. El concepto de expresar polipéptidos farmacéuticamente activos a partir de ácidos nucleicos que los codifican en el cuerpo del paciente se conocen bien y puede conferir beneficios significativos al paciente.
En ciertas modalidades, la molécula de ácido nucleico codifica un monómero de la proteína de fusión de HLA-B27 que comprende un fragmento de epítopo peptídico. En ciertas modalidades, la molécula de ácido nucleico codifica un monómero de proteína de fusión de HLA-B27 que comprende solo los dominios extracelulares alfa 1, 2 y 3 de HLA-B27. En ciertas modalidades, la molécula de ácido nucleico codifica un monómero de la proteína de fusión de HLA-B27 que comprende solo los dominios extracelulares alfa 1,2 y 3 de HLA-B27 y un fragmento de epítopo peptídico.
En ciertas modalidades, la molécula de ácido nucleico codifica un monómero de la proteína de fusión de HLA-B27 que comprende un enlazador de aminoácidos y/o un dominio Fc (fragmento cristalizable) y se usa en el tratamiento o la terapia contra el cáncer.
De acuerdo con un cuarto aspecto de la invención, se proporciona un vector de expresión recombinante que comprende la molécula de ácido nucleico de acuerdo con el tercer aspecto de la invención, para su uso en el tratamiento o la terapia contra el cáncer.
En ciertas modalidades, el vector de expresión recombinante es un plásmido que comprende un promotor que es operable en una célula de mamífero, particularmente en una célula humana. El promotor se une operativamente a la molécula de ácido nucleico de la invención.
De acuerdo con otro aspecto de la invención, se proporciona un virus que comprende la molécula de ácido nucleico de acuerdo con el tercer aspecto de la invención, para su uso en el tratamiento o la terapia contra el cáncer. La molécula de ácido nucleico está bajo el control de una secuencia promotora operable en una célula de mamífero, particularmente en una célula humana. En ciertas modalidades, el virus es un adenovirus, un virus adenoasociado, un herpesvirus o un lentivirus.
De acuerdo con aún otro aspecto de la invención, se proporciona una célula huésped modificada genéticamente in vitro que comprende la molécula de ácido nucleico de acuerdo con el tercer aspecto de la invención.
Otro aspecto de la invención proporciona el uso del homodímero de la cadena pesada de HLA-B27 o del homodímero de la proteína de fusión de acuerdo con el primer y el segundo aspecto de la invención, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención del cáncer.
De acuerdo con aún otro aspecto, la invención proporciona un método de tratamiento contra el cáncer, que comprende administrar una cadena pesada de HLA-B27 de acuerdo con el primer y segundo aspecto de la invención a un paciente que lo necesita.
De acuerdo con otro aspecto de la invención, se proporciona un medicamento combinado, en donde el medicamento combinado comprende:
- un homodímero de la cadena pesada de HLA-B27 o una proteína de fusión de acuerdo con uno cualquiera de los aspectos o modalidades anteriores de la invención, y
- un agente inhibidor de puntos de control inmunitarios seleccionado de un inhibidor de la interacción de la proteína 4 asociada a linfocitos T citotóxicos (CTLA4; también conocida como CD152) con CD80 o CD86, un inhibidor de la interacción de la proteína 1 de muerte celular programada (PD-1; también conocida como CD279) con su ligando PD-L1, y un ligando de la proteína 3 que contiene los dominios de inmunoglobulina y mucina de las células T (TIM-3).
En ciertas modalidades, el agente inhibidor de puntos de control inmunitarios es un inhibidor de la interacción de la CTLA4 con CD80 o CD86.
En ciertas modalidades, el agente inhibidor de puntos de control inmunitarios es ipilimumab (Yervoy; núm. CAS 477202-00-9).
En ciertas modalidades, el homodímero de la cadena pesada de HLA-B27 o el homodímero de la proteína de fusión de HLA-B27 se proporcionan como una forma de dosificación parenteral, particularmente confeccionada para la inyección. En ciertas modalidades, el agente inhibidor de puntos de control inmunitarios se proporciona como una forma de dosificación parenteral, particularmente confeccionada para la inyección. En ciertas modalidades, tanto el homodímero de HLA-B27 como el agente inhibidor de puntos de control inmunitarios se presentan en la misma forma de administración.
En aún otro aspecto, la invención describe un método para producir polipéptidos de cadena pesada de HLA recombinantes. Este método se resume en los siguientes elementos:
Elemento A: Un método para producir, mediante métodos de biotecnología recombinante, un polipéptido de cadena pesada de HLA humano, en donde dicho método comprende las siguientes etapas:
a. Etapa de expresión:
i. una secuencia de ácido nucleico que codifica HLA que codifica al menos la cadena alfa 1, la cadena alfa 2 y la cadena alfa 3 de una cadena pesada de HLA bajo el control de una secuencia promotora operable en una célula, particularmente, una célula eucariota, más particularmente, una célula de mamífero, y
ii. una secuencia de ácido nucleico que codifica la microglobulina p2 que codifica la microglobulina beta 2 de HLA humano (Un-iProt P61769) bajo el control de una secuencia promotora operable en dicha célula (la misma célula que en el elemento 1. a.) se expresan conjuntamente en una célula de mamífero ("línea celular para la producción");
b. Etapa de purificación: el complejo de cadena pesada de HLA/microglobulina p2 resultante se purifica a partir de la célula de mamífero (la línea celular para la producción);
c. Etapa de disociación: el complejo de cadena pesada de HLA/microglobulina p2 purificado se disocia en condiciones adecuadas y los polipéptidos de la cadena pesada de HLA se separan de los polipéptidos de la microglobulina p2;
d. Etapa de replegamiento: los polipéptidos de la cadena pesada de HLA separados se incuban en condiciones que conducen al replegamiento (de su estructura terciaria de proteína nativa que se encuentra en moléculas de confórmero abierto de HLA fisiológicamente activas).
Elemento B: El método para producir un polipéptido de la cadena pesada de HLA humano de acuerdo con el elemento A, en donde la secuencia de ácido nucleico que codifica el HLA comprende, del extremo N-terminal al extremo C-terminal del polipéptido codificado, la cadena alfa 1, la cadena alfa 2, la cadena alfa 3 y una secuencia estabilizadora.
Elemento C: El método para producir un polipéptido de la cadena pesada de HLA humano de acuerdo con el elemento B, en donde la secuencia estabilizadora se selecciona de albúmina de suero bovino y un fragmento constante de inmunoglobulina (Fc), particularmente, un fragmento constante de inmunoglobulina G, más particularmente, un Fc de IgG4.
Elemento D: El método para producir un polipéptido de la cadena pesada de HLA humano de acuerdo con uno cualquiera de los elementos anteriores, en donde la secuencia de ácido nucleico que codifica e1HLA y la secuencia de ácido nucleico que codifica la microglobulina p2 están presentes en la misma molécula de vector de ácido nucleico (particularmente, un plásmido de expresión de ADN).
Elemento E: El método para producir un polipéptido de la cadena pesada de HLA humano de acuerdo con uno cualquiera de los elementos anteriores A al C, en donde la secuencia de ácido nucleico que codifica e1HLA y la secuencia de ácido nucleico que codifica la microglobulina p2 están presentes en diferentes moléculas de vector de ácido nucleico (particularmente, diferentes plásmidos de expresión de ADN).
Elemento F: El método del elemento E, en donde el vector de ácido nucleico que comprende la secuencia de ácido nucleico que codifica el HLA está presente en aproximadamente un exceso de 1 a 5 veces, particularmente, un exceso de 1,5 a 5 veces con respecto al vector de ácido nucleico que comprende la secuencia de ácido nucleico que codifica la microglobulina p2, particularmente, en un exceso de aproximadamente 3 veces.
Elemento G: El método de cualquiera de los elementos anteriores, en donde la secuencia de ácido nucleico que codifica el HLA comprende un fragmento Fc de inmunoglobulina como una secuencia estabilizadora y la etapa de purificación se efectúa mediante la adsorción de los polipéptidos de la cadena pesada de HLA recombinante a una superficie unida a la proteína A.
Elemento H: El método de cualquiera de los elementos anteriores, en donde la etapa de disociación se efectúa mediante el tratamiento en condiciones ácidas, particularmente, a aproximadamente pH 2, y diálisis en condiciones reductoras.
Elemento I: El método de cualquiera de los elementos anteriores, en donde la etapa de replegamiento se efectúa mediante el tratamiento en condiciones neutras.
Dondequiera que se exponen en la presente descripción como "modalidades" las alternativas para elementos separables individuales, tales como, por ejemplo, un alelo o una secuencia de codificación, debe entenderse que dichas alternativas pueden combinarse libremente para formar modalidades discretas de la invención descritas en la presente descripción.
La invención se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos y figuras, a partir de los cuales pueden extraerse modalidades y ventajas adicionales. Estos ejemplos se destinan a ilustrar la invención pero no a limitar su alcance.
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 muestra que B272-Tet bloquea la conversión de las células T CD4+ en iTreg. La incubación de B272-Tet con células T CD4+ vírgenes bloquea la conversión a iT reg (FoxP3). Los tetrámeros de control demuestran la influencia específica de B272-Tet en la inducción de iTreg.
La Figura 2 muestra que B272-Tet afecta la supresión de Treg murinos y humanos en una manera dependiente de la dosis. a) B272-Tet (2 pg/200 pl) bloquea la supresión de los iTreg de ratón y permite la proliferación de las células T CD8+. El HLA-B27 y la BSA de control no alteran la función de supresión de los iTreg. b) B272-Tet (2 pg / 200 pl) bloquea la supresión de los nTreg humanos y permite la proliferación de células T CD8+ humanas. Los heterotrímeros HLA-B27-Tet y HLA-B8-Tet de control y BSA-Tet no alteran la función de supresión de los Treg. c) % de supresión de iTreg de células T CD8+ murinas a diferentes concentraciones de B272-Tet (pg/200 pl). d) % de supresión de nTreg de células T CD8+ humanas a diferentes concentraciones de B272-Tet (pg/200 pl).
La Figura 3 muestra que B272 modula la activación de las células T CD4+ . Las células T CD4+ Tg HLA-B27 y WT de rata producen TNF después de la incubación con B272-Tet. La incubación previa de los anticuerpos HD5 o HC10 que bloquean B272 inhibió la interacción con las células T CD4+ y la producción de TNF, lo que demuestra que B272-Tet es capaz de activar solo las células T CD4+ para producir citocinas.
La Figura 4 muestra la expansión reducida de células T CD4+ proinflamatorias del bazo y MLN en ratas tratadas con HD5 (anticuerpo anti-B272). A. Puntos temporales del estudio in vivo en ratas con HLA-B27 e inyecciones de HD5. Las ratas se administraron por vía intraperitoneal (i.p.) con 10 mg/kg de anticuerpo HD5 por rata, todas las semanas durante un período de 12-15 semanas. b-c. Las células estimuladas in vitro obtenidas a partir de crías de la misma camada WT, Tg-HD5 y Tg-ctrl se evaluaron mediante ICS para detectar la presencia de células proinflamatorias que expresan TNF (B) e IL-17 (C). Se obtuvieron células de MLN y de bazo en la semana 15 (n = 5) y en la semana 23 (n = 5). Los resultados se representan gráficamente como el porcentaje de células T CD4+ clasificadas como positivas para TNF, IL-17 e IFN-y. Los valores se expresan como media ± SEM. *p<0,05, **p<0,01, ***p<0,005 según lo determinado mediante ANOVA unidireccional seguido por análisis post-hoc de Bonferroni.
La Figura 5 muestra la representación esquemática de casetes de ADN de B272-Fc y p2m y la expresión de moléculas de B272-Fc a partir de células CHO. A. El complejo B272-p2m-Fc se produjo al insertar los dominios alfa 1, 2 y 3 de HLA-B27 en un casete de vector de IgG4-Fc humano, junto con un vector de p2m humano, necesario para la producción extracelular de la proteína B272-p2m-Fc. B. Las transfecciones en células de células de ovario de hámster chino (CHO) se realizaron mediante el uso tanto del vector de B272-Fc como del vector de p2m en una relación 1:3. Se recolectaron los sobrenadantes y se purificó el B272-Fc-p2m mediante el uso de protocolos estándar de purificación de anticuerpos.
La Figura 6 muestra la separación de p2m del complejo B272-p2m-Fc y la purificación y replegamiento de B272-Fc mediante SEC o diálisis. A) El gráfico de histograma de cromatografía y el análisis de transferencia Western de oligómeros B272-p2m-Fc y productos de B272-p2m-Fc purificados a partir de columnas Superdex 200 de grado preparativo por SEC, muestran que las condiciones no desnaturalizantes no separan la p2m del complejo y se forman oligómeros B272-p2m-Fc. B) El gráfico de histograma de cromatografía y la transferencia Western de moléculas B272-p2m-Fc en tampón desnaturalizante Urea-Tris-BME muestran la disociación de las cadenas pesadas libres de B27-Fc de p2m mediante el uso de columnas Sephacryl S-100 HR por SEC. C) La diálisis de moléculas B272-p2m-Fc en tampón Urea-Tris-BME disocia las cadenas pesadas libres de B27-Fc de p2m mediante el uso de membranas dializadoras de 30 KDa (5) o 50 KDa (6). D) El replegamiento de las cadenas pesadas libres de B27-Fc en moléculas B272-Fc se realiza mediante el método de dilución en tampón de replegamiento y se detecta por HC10 (anticuerpo monoclonal contra cadenas pesadas libres de HLA). BME = p-mercaptoetanol. Tamaño aproximado en KDa de B272-Fc = 125 KDa; cadenas pesadas libres de B27-Fc = 62,5 KDa.
La Figura 7 muestra que las inyecciones de B272-Fc reducen el tamaño de los tumores en el modelo en ratón de carcinoma de colon MC38. A) Diseño experimental de puntos temporales de inyección de células de carcinoma de colon (MC38-OVAdim) e inyección de B272-Fc. B) Tamaño del tumor de ratones después de la eutanasia que muestra una reducción significativa de tumores en ratones tratados con B272-Fc en comparación con los controles. C) El % de células NK que infiltran el tumor fue significativamente mayor en los ratones tratados con B272-Fc. D) % de células NKT que infiltran el tumor, no se observó cambio significativo. E) % de células T reg que infiltran el tumor, no se observó cambio significativo, pero se observa una tendencia a una cantidad reducida de Treg en ratones con B272-Fc en comparación con el isotipo. Los resultados se representan gráficamente a partir de dos experimentos idénticos en diferentes puntos temporales. Los valores se expresan como media ± SEM. *p<0,05, **p<0,01 según lo determinado mediante ANOVA unidireccional seguido por análisis post-hoc de Bonferroni.
Figura 8 Muestra la combinación de B272-Fc con anticuerpos anti CTLA4 o anti PD-1 mediante el uso de modelos singénicos de: modelo pancreático murino Pan02, modelo de mama murino EMT6 y modelo de linfoma murino EG.7.
A) Volumen tumoral medio en ratones con Pan02 (n=6). B) Volumen tumoral medio en ratones con EMT6 (n=6). C) Volumen tumoral medio en ratones con EG.7 representados gráficamente a partir de dos experimentos separados. El diseño experimental de los puntos temporales de inyección de las células y de la inyección de sustancias fue el siguiente: isotipo (10 mg/kg) Q3Dx7; B272-Fc (10 mg/kg); anti-CTLA4 Q3Dx3 (1ra inyección 200 |jg, 2da y 3ra inyección 100 jg); PD-1 bisem x 3 (100 jg); B272-Fc CTLA4 (Q3Dx7 y Q3Dx3, respectivamente) y B272-Fc PD-1 (Q3Dx7 y bisem x 3, respectivamente). Los volúmenes tumorales se expresan como media ± s Em y se analizan mediante ANOVA bidireccional seguido de análisis post-hoc de Bonferroni, *p<0,05, **p<0,01. Q= días entre inyecciones; Dx= número de inyecciones, bisem= dos veces por semana.
Ejemplos
Los inventores encontraron sorprendentemente que los confórmeros abiertos de HLA-B27, particularmente cuando están presentes como proteínas de fusión que comprenden un fragmento de inmunoglobulina Fc, podrían ser útiles en la terapia contra el cáncer. Las moléculas B272-Fc pueden usarse solas o en combinaciones con otras terapias contra el cáncer.
Pruebas in vitro
La molécula B272-Tet es capaz de modular las respuestas inmunitarias tanto en humanos como en roedores al influir en la supresión de los Treg y activar las células T in vitro (Figura 1-3)
B272-Tet bloquea la conversión de las células T CD4+ murinas en iTreg
Se analizó la influencia de las moléculas HLA con células T CD4+ vírgenes para la conversión de iTreg. Se incubaron 0,5 jg/m l de tetrámeros B272, HLA-B27 y HLA-B8 con células T CD4+ vírgenes en condiciones de cultivo óptimas para la conversión a iTreg. B272-Tet demostró que modula negativamente la inducción de FoxP3 (Figura 1).
B272-Tet afecta la supresión de las células T CD8+ murinas y humanas por los Treg
Se determinó la función supresora de los Treg murinos y humanos mediante el uso de células T CD8+ vírgenes marcadas con violeta como células respondedoras (Figura 2). Los Treg se cultivaron conjuntamente con tetrámeros de HLA y BSA y se midió la proliferación de células T CD8+ después de 96 horas. Las células T CD8+ solas mostraron una fuerte proliferación y, como se esperaba, las células Treg suprimieron la proliferación de las células T CD8+ cuando se incubaron con tetrámeros de control (HLA-B27, HLA-B8 y BSA). Sorprendentemente, la función supresora de los Treg se afectó mucho en presencia de tetrámeros de B272, indicado por una fuerte proliferación de las células T CD8+ en ensayos de supresión tanto en ratones (Figura 2A) como en humanos (Figura 2B). El efecto de B272-Tet dependió de la dosis tanto en ratones (Figura 2C) como en humanos (Figura 2D).
Los anticuerpos contra los homodímeros de confórmeros abiertos de B27 reducen la expansión de las células T CD4+ efectoras y demuestran el efecto inmunomodulador de los homodímeros de confórmeros abiertos de B27 en ratas transgénicas HLA-B27
Para demostrar la implicación de los homodímeros de confórmeros abiertos de B27 en la enfermedad in vivo, se generó un anticuerpo específico contra los homodímeros de confórmeros abiertos de B27 (HD5). Como modelo in vivo, usamos el modelo de rata HLA-B27 de SpA que progresa a una enfermedad que se asemeja a la patología de la SpA humana con un número elevado de linfocitos proinflamatorios (células T CD4+ TNF+, Th1, Th 17). Los datos ex vivo a partir de linfocitos de ratas HLA-B27 demostraron que la sola presencia de B272-Tet fue capaz de inducir la expresión de citocinas proinflamatorias a partir de las células T CD4+ (Figura 3). Además, los resultados in vivo generados mediante la inyección de anticuerpos contra homodímeros de confórmeros abiertos de B27 (HD5) (Figura 4A-C) demostraron que al bloquear in vivo las moléculas de homodímeros de confórmeros abiertos de B27, las respuestas inmunitarias se modularon y la expansión de las células T CD4+ TNF (Figura 4B) y las células Th17 (Figura 4C) en diferentes órganos disminuyó significativamente.
Para demostrar la prueba de concepto de B272-Fc como una molécula terapéutica contra el cáncer, se llevaron a cabo experimentos mediante el uso de un modelo preclínico validado de carcinoma de colon murino singénico.
Producción de confórmeros abiertos de B27 como una proteína de fusión Fc humana en células CHO
Una estrategia válida, desde un punto de vista terapéutico, es producir moléculas de confórmeros abiertos de HLA-B27 en formato estable (fusión Fc), para aumentar la solubilidad, la estabilidad, la avidez, la vida media y, desde un punto de vista tecnológico, la producción y purificación rentables en sistemas de mamíferos. El complejo B272-p2m-Fc se produjo exitosamente al insertar los dominios alfa 1, 2 y 3 de HLA-B27 en un casete de vector de IgG4-Fc humano (Figura 5A), junto con un vector de p2m humana, necesario para la producción extracelular de la proteína B272-p2m-Fc (Figura 5A,B). Las transfecciones en células de ovario de hámster chino (CHO) se realizaron mediante el uso de tanto el vector de B27-Fc como el vector de p2m en una relación 1:3. Se recolectaron los sobrenadantes y se purificó B272-p2m-Fc mediante el uso de protocolos de purificación de anticuerpos estándar (Recombinant Protein Purification Handbook, principles and methods. 2009. GE Healthcare, 18-1142-75) (Figura 5B). La separación de p2m a partir de las cadenas pesadas libres de B27-Fc se realizó mediante el uso de condiciones desnaturalizantes por SEC o métodos de diálisis (Figura 6). El replegamiento de B272-Fc se evaluó mediante el uso del método de dilución en tampón de replegamiento y se analizó mediante transferencia Western (Figura 6D).
Estudio de toxicidad de B272-Fc
Se realizaron estudios de toxicidad en ratones de tipo silvestre C57BL/6 de 6 semanas de edad. Las dosis de B272-Fc a 0, 0,1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg se inyectaron i.p. en ratones dos veces por semana durante tres semanas. Las condiciones generales de salud no mostraron cambios (parálisis, estrés, ansiedad, apatía, signos de infección, respiración abdominal, espalda encorvada o pelaje erizado, peso y heces), al comparar el grupo PBS con los grupos tratados. Las poblaciones de linfocitos se mantuvieron constantes entre grupos, las células T CD4+ vírgenes y efectoras, células T CD8+, células NK, células B y monocitos no mostraron cambios en números entre grupos. En base a estos datos, buscamos probar 10 mg/kg de B272-Fc en pruebas in vivo en modelos de ratones con cáncer singénicos.
Pruebas preclínicas de monoterapia con B272-Fc en un modelo en ratón de carcinoma de colon singénico
Las inyecciones de la molécula B272-Fc (10 mg/kg) se realizaron en un escenario terapéutico (Figura 7A). De acuerdo con protocolos establecidos, se inyectaron subcutáneamente tumores MC38-OVAdim fragmentados en el flanco de ratones singénicos. Una vez que el tumor alcanzó los 100 mm3 (entre 1-2 semanas después de la inyección de los tumores) se inyectó B272-Fc i.p. dos veces por semana durante un período de tres semanas (Figura 7A) y los tumores se midieron y analizaron para determinar la infiltración de linfocitos (Figura 7BE).
Los resultados demostraron que B272-Fc fue capaz de reducir significativamente el desarrollo tumoral en ratones con MC38-OVAdim en comparación con los controles (Figura 7B). Se observó un efecto mecanicista del modo de acción de B272-Fc mediante una infiltración significativa de células NK en los tumores en comparación con los controles (Figura 7C), lo que apunta hacia un mecanismo en el que las células NK son actores clave en la modulación del crecimiento tumoral. Se observó una tendencia a la disminución en el número de Treg en comparación con el isotipo, pero no fue significativa (p<0,1) (Figura 7E). Los resultados se representaron gráficamente a partir de dos experimentos separados.
Pruebas preclínicas de terapia combinada de B272-Fc con anticuerpos anti-CTLA4 y anti-PD-1 en modelos de ratón con cáncer singénicos
De acuerdo con protocolos establecidos, se inyectaron subcutáneamente 1x106 células de Pan02, 1x106 células de EMT6 y 1x106 células de EG.7 en el flanco de grupos de ratones singénicos, respectivamente. Los ratones se distribuyeron de acuerdo con su volumen tumoral (Pan02 y EMT6) o su peso (EG.7). El B272-Fc se inyectó i.p. siete veces cada 3er día (Q3Dx7), CTLA4 se inyectó 3 veces a intervalos seleccionados (Q3Dx7) (Figura 8) y PD-1 se inyectó 6 veces, dos veces por semana (bisem x 3) (Figura 8).
Los resultados demostraron que la combinación de los anticuerpos anti-CTLA4 junto con B272-Fc fue capaz de potenciar los efectos terapéuticos de los anticuerpos anti-CTLA4 y reducir significativamente el desarrollo tumoral en los modelos de cáncer de páncreas Pan02 y de mama EMT6 en comparación con los grupos de monoterapia con CTLA4 y control de isotipo. Los resultados en los enfoques combinados con los anticuerpos anti-PD-1 mostraron que B272-Fc potenció los efectos terapéuticos de los anticuerpos anti-PD-1 en el modelo de linfoma EG.7 en comparación con el isotipo o el vehículo (p<0,01), pero no con la monoterapia con PD-1. La monoterapia con PD-1 no fue significativamente diferente en comparación con el isotipo o el vehículo.
Conclusión
La prueba de principio para el uso de moléculas B272-Fc para combatir el cáncer se demostró en experimentos preclínicos en diferentes modelos de ratones con cáncer singénicos, ya sea como monoterapia o terapia combinada con anticuerpos anti-CTLA4 o anti-PD-1.
Los estudios de toxicidad demostraron que la terapia con B272-Fc no indujo ningún signo de toxicidad, y durante los experimentos in vivo la supervivencia de los ratones no se vio comprometida en los grupos tratados en ningún punto temporal de la terapia.
En MC38-OVAdim, encontramos que la infiltración de células NK en el microambiente tumoral se elevó en los ratones tratados con B272-Fc. Estos datos apuntan a un mecanismo en el que las células NK participan activamente en las respuestas antitumorales a través de la activación de B272. En adelante, B272-Fc se desarrollará y se probará posteriormente como una nueva clase de fármaco en el manejo de las terapéuticas contra el cáncer.
El B272-Fc emerge como una nueva clase de fármaco inmunomodulador. Los datos in vitro e in vivo apuntan hacia un mecanismo en el que las moléculas B272-Fc actúan como un mecanismo de encendido para la activación de la inmunidad antitumoral, muy probablemente mediante la alteración de los mecanismos relacionados con los puntos de control inmunitarios o la ruptura de la tolerancia de las DC, NK y/o células T.
Sin desear limitarse por la teoría, los inventores plantean la hipótesis de que la interacción de los confórmeros abiertos de B27 con DC, células T y células NK da como resultado una señalización celular alterada para promover la supervivencia/expansión de las células que participan en, y exacerban, la respuesta inmunitaria.
Materiales y Métodos
Animales y líneas celulares
Se obtuvieron ratones reporteros para FoxP3 (eGFP) (B6.Cg-Foxp3tm2Tch/J) de The Jackson Laboratories para el ensayo de iTreg y se criaron en las instalaciones para animales del Hospital Universitario de Zúrich. Se obtuvieron ratas macho HLA-B27/h$2m transgénicas (línea 33-3) (Tg) y Fischer F344 de tipo silvestre (WT) de Taconic (Germantown, NY) y se criaron en las instalaciones para animales del Hospital Universitario de Zúrich. Los ratones C57BI/6 de tipo silvestre se criaron y mantuvieron en las instalaciones para animales de1Hospital Universitario de Basilea. MC38-OVAdim es una línea celular tumoral de carcinoma de colon derivada de ratón.
Tratamientos in vivo
Las ratas machos HLA-B27/hp2m transgénicas (línea 33-3) (Tg) y Fischer F344 de tipo silvestre (WT) se dividieron en tres grupos y se asignaron aleatoriamente al tratamiento con AcM HD5 (anti-B272) o anti-Her2neu (anticuerpo de control) en consecuencia: a. Crías de la misma camada WT (n=8), b. Tg-HD5 (n=10), c. Grupo Control Tg-ctrl (anti-Her2neu) (n=10). Cada rata Tg recibió una inyección intraperitoneal (i.p.) semanal de HD5 o anti-Her2neu (ctrl) (10 mg/kg) hasta la edad de 15 semanas o 23 semanas. Las crías de la misma camada WT no recibieron tratamiento.
Los estudios de toxicidad se realizaron en ratones C57BL/6 de 6 semanas de edad. Se inyectaron i.p. dosis de 0, 0,1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 y 20 mg/kg de B272-Fc en ratones dos veces por semana durante un período de tres semanas.
Se inyectaron fragmentos tumorales de MC38-OVAdim subcutáneamente en los flancos derechos de ratones C57BL/6 singénicos hembras en la semana 6. Una vez que el tumor alcanzó ±50 mm3 , los animales se distribuyeron de acuerdo con su tamaño de volumen tumoral individual y se dividieron en grupos que no mostraban diferencias estadísticas entre ellos. En el modelo en ratón de cáncer de páncreas Pan02, se inyectaron 1 x 106 células de Pan02 en el flanco de ratones C57BL/6 singénicos hembras, y los animales se distribuyeron de acuerdo con su volumen tumoral ±10 mm3 y se dividieron en grupos que no mostraban diferencias estadísticas entre ellos. En el modelo en ratón de cáncer de mama EMT6, se inyectaron 5 x 106 células de EMT6 en el flanco de ratones BALB/c singénicos hembras, y los animales se distribuyeron de acuerdo con su volumen tumoral ±40 mm3 y se dividieron en grupos que no mostraban diferencias estadísticas entre ellos. En el modelo en ratón de linfoma EG.7, se inyectaron 1 x 106 células de EG.7 en el flanco de ratones C57BL/6 singénicos hembras, y los animales se distribuyeron de acuerdo con su peso corporal y se dividieron en grupos que no mostraban diferencias estadísticas entre ellos. Los diámetros de los tumores se midieron mediante el uso de un calibre, y el volumen se calculó de acuerdo con la fórmula, D/2xd2 , donde D y d son el diámetro más largo y más corto del tumor en mm, respectivamente.
El diseño experimental de los puntos temporales de inyección de las células y la inyección de las sustancias se estableció de la siguiente manera: vehículo (PBS 200 pl); isotipo (10 mg/kg) Q3Dx7; B272-Fc (10 mg/kg); anti-CTLA4 Q3Dx3 (1ra inyección 200 pg, 2da y 3ra inyección 100 pg); PD-1 bisem x 3 (100 pg); B272-Fc c TlA4 (Q3Dx7 y Q3Dx3, respectivamente) y B272-Fc PD-1 (Q3Dx7 y bisem x 3, respectivamente). Los tumores se midieron y analizaron para determinar la infiltración de linfocitos mediante análisis de citometría de flujo en el modelo MC38-OVAdim.
Los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las leyes federales y cantonales suizas sobre la protección animal.
Anticuerpos
Las poblaciones de linfocitos de ratones se tiñeron con: CD4 (FITC-BD Bioscience), FoxP3+ (efluor 450-eBioscience), CD3 (PE-Cy7-eBioscience), CD45 (PerCP-eBioscience), Cd 3 (PE-eBioscience), Granzima B (Alexa 647, GB11; Biol), NK1.1 (BV421-eBioscience), CD11b (FITC-eBioscience), CD11c (FITC-eBioscience) y Ter119 (FITC-eBioscience). Las poblaciones de linfocitos de ratas se tiñeron con: CD3 (APC-Cy7-BD-Pharmingen), CD4 (PE-Cy7-BD-Pharmingen), IL-17A (eBio17B7-APC, eBioscience), TNF (PE-Biolegend),
Las poblaciones de linfocitos humanos se tiñeron con: CD4 (PE-Biolegend), FoxP3 (eFluor 450-eBioscience), CD3 (APC-Cy7-Biolegend).
La unión del AcM HC10 (IgG2a) a cadenas pesadas libres-p2m de los alelos HLA-B y -C y a B272 fue cortesía del Dr. Hidde Ploegh (MIT, MA). Anticuerpo AcM h D5 (producido internamente) contra homodímeros de confórmeros abiertos de B27. Control de isotipo k IgG1 de ratón (Biolegend). AcM anti-Her2neu (Trastuzumab, Roche). Anticuerpo antimicroglobulina p2 (Abcam) para detectar la p2m humana mediante transferencia Western.
Citometría de flujo de leucocitos
La tinción de citocina intracelular (ICS) para la detección de células Treg FoxP3+ se realizó mediante el uso de paraformaldehído al 1 %, se permeabilizó con saponina al 0,1 % en tampón FACS y se tiñó con anticuerpos primarios (FoxP3, CD4 y CD3).
La tinción de citocina intracelular (ICS) para estimular los leucocitos se realizó con acetato de miristato forbol (PMA) e ionomicina (ambos a 0,5 pg/ml), en presencia de GolgiPlug™ (BD Bioscience) durante 5 horas.
El análisis de citometría de flujo se realizó mediante el uso de un FACS canto II (BD Bioscience) y los datos se analizaron mediante el uso de FlowJo versión 7.6.4.
Producción de complejos HLA para pruebas in vitro
Los complejos de homodímero y heterotrímero de confórmero abierto de HLA-B*2705 se replegaron mediante dilución limitante con o sin p2m en presencia del epítopo peptídico de nucleoproteína de influenza NP383-391 SRYWAIRTR (SEQ ID NO 174) o epítopo de EBV EBNA3C RRIYDLIEL (SEQ ID NO 175). El complejo heterotrimérico HLA-B8 de control se replegó con hCMVpp65 (TPRTGGGAM; SEQ ID NO 176). Se usó estreptavidina o estreptavidina-PE (Life technologies) para construir los tetrámeros de HLA. Se usó BSA biotinilado (Sigma) en tetrámeros de control y en combinaciones con complejos de HLA.
Generación de Treg
Para inducir la expresión de Foxp3 en células T CD4+ murinas, cosechamos células del bazo de ratones F344FoxP3EGFP. Los esplenocitos se clasificaron para obtener células T CD4+ vírgenes. Después, las células se cultivaron durante 96 horas a 105 células/200 pl/pocillo en placas de 96 pocillos recubiertas con 5 pg/ml de AcM anti-CD3 (eBioscience), 2 pg/ml de AcM anti-CD28 soluble (Biolegend), 10 pg/ml de TGF-p1 (R&D systems) y 100 Ul/ml de IL-2 (R&D systems).
Para expandir los nTreg humanos, primero aislamos las PBMC a partir de una capa leucocitaria sanguínea mediante extracción de Ficoll. A continuación, aislamos las células CD4+ CD25+ mediante el uso del kit Dynabeads Regulatory T cell (Invitrogen) y posteriomente las expandimos mediante el uso del kit Human Treg Expander (Invitrogen) según las instrucciones del manual. Las células se cultivaron en RPMI completo durante 8 días con la adición de 500 UI de IL-2 cada segundo día.
Inducción de iTreg en presencia de tetrámeros de B272
Las células T CD4+ vírgenes murinas en condiciones óptimas de cultivo para la conversión de iTreg se incubaron en presencia de 0,5 pg de B272-Tet, HLA-B27-Tet y HLA-B8-Tet durante 72 horas. La conversión de iTreg se midió por citometría de flujo.
Ensayo de supresión
Las células T efectoras CD4+ o CD8+ fueron PBMC purificadas a partir de ya sea ratón o humano (kit de aislamiento de células T CD4+ vírgenes de ratón Easy Sep; Dynabeads® FlowComp™ CD8 de ratón-Life Technologies; Dynabeads® CD8 humano-Life Technologies) y se marcaron con 10 pM de tinción de proliferación Cell Trace Violet (Molecular Probes). Se cultivaron células Treg (2,5 x 104) y células T efectoras (2,5 x 104) en placas con fondo en U de 96 pocillos recubiertas con anticuerpo anti-CD3 (eBioscience) (3 pg/ml) y anti-CD28 soluble (eBioscience) (1 pg/ml) durante 96 horas. La proliferación de las células T efectoras se midió mediante el uso de un FACS canto II y los datos se analizaron mediante el uso de un programa informático de análisis de proliferación de FlowJo versión 7.6.4.
Producción, purificación y replegamiento de B272-Fc
La producción recombinante de B272-p2m-Fc se logró al insertar los dominios alfa 1, 2 y 3 de HLA-B27 en un vector de IgG4-Fc humano (InvivoGen), y la microglobulina p2 humana (p2m) en un vector separado. La producción de B272-p2m-Fc recombinante se realizó mediante la transfección conjunta del vector de B27-Fc y el vector de p2m en células de ovario de hámster chino (CHO). La producción de B272-p2m-Fc se subcontrató a Evitria AG.
La purificación de B272-p2m-Fc se realizó mediante el uso de protocolos convencionales para la purificación de anticuerpos. La producción de B272-Fc se realizó con la adición de una etapa de desnaturalización para extraer la p2m del complejo B272-p2m-Fc.
Brevemente, la etapa de captura de B272-p2m-Fc se realizó después de correr sobrenadantes (5 ml/min) a través de columnas de proteína G (Amersham Pharmacia). Las etapas intermedias de purificación se realizaron al eluir B272-p2m-Fc a partir de las columnas de proteína G mediante el uso de tampón de elución (glicina 100 mM, pH 2,0) y recuperación de las fracciones en urea 8 M, Tris-HCl 100 mM pH 8,0 y p-mercaptoetanol (BME) 5 mM. La 1ra etapa de pulido fue separar las fracciones de cadenas pesadas libres de B27-Fc de p2m mediante cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) mediante el uso de superdex 200 grado preparativo o Sephacryl S-100 HR (GE Lifescience) con un sistema ÁKTA (GE Lifescience), o por diálisis con membranas de tamaño de poro de 30 KDa o 50 KDa (Millipore). Las cadenas pesadas libres de B27 recuperadas a partir de ambos protocolos se replegaron por el método de dilución después de pulsar las cadenas pesadas libres de B273 veces con intervalos de 8 horas cada una en 100 veces el volumen de tampón de replegamiento (Tris-HCl 50 mM pH 8,5, L-Arginina 500 mM, EDTA 1 mM, NaCl 0,15 mM, sacarosa al 1 %, polisorbato-80 al 0,01 %, Gs H 1 mM y Gs Sh 0,1 mM). La 2da etapa de Pulido mediante SEC se realizó para eliminar impurezas adicionales y para cambiar de tampón fracciones recién recuperadas de moléculas B272-Fc a tampón de dilución (Tris 50 mM pH 8,0, NaCl 150 mM, sacarosa al 1 %, polysorbate-80 al 0,01 %). Las soluciones purificadas de B272-Fc se esterilizaron por filtración mediante el uso de membranas de 0,2 pm (Millipore).
Las fracciones de los complejos B272-p2m-Fc y B272-Fc se analizaron por electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS (SDS-PAGE) y transferencia Western mediante el uso de anticuerpos HC10 (específicos para cadenas pesadas libres de HLA). Las transferencias Western de p2m se realizaron en condiciones desnaturalizantes (DTT 10 mM).
Los anticuerpos inhibidores de puntos de control anti-CTLA4 clon 9H10 (probado en los modelos singénicos de EG.7 y EMT6), anti-CTLA4 clon 9D9 (probado en el modelo singénico de Pan02) y anti-PD-1 clon RMP1-14 se obtuvieron de Bio X Cell Co.
Secuencias completas y parciales de alelos de HLA-B27
Los dominios funcionales de la cadena alfa de HLA-B27 de longitud completa desde el extremo N terminal al extremo C terminal son: péptido señal, alfa 1, alfa 2 , alfa 3 (los dominios alfa 1-3 están subrayados; alfa 2 está en negrita), dominio transmembrana y cola citoplasmática.
Por ejemplo, la SEQ ID NO. 8 comprende:
un dominio de señal
SEQ ID NO. 1. MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWA,
un dominio alfa 1
¡SEQ ID NO. 2. G S H S M R Y F H T S V S R P G R G E P R F I T V G Y V D D T L F V R F D S D A A S P R E E P R A P W I EQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRENLRIALRYYNQSEA,
un dominio alfa 2
SEQ ID NO. 3. GSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQI TQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA,
un dominio alfa 3
SEQ ID NO. 4. D P P K T H V T H H P I S D H E A T L R C W A L G F Y P A E I T L T W Q R D G E D Q T Q D T E L V E T R PAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEPSSQSTVPIV,
y un dominio transmembrana y una cola citoplasmática
SEQ ID NO. 5. G I V A G L A V L A W V I G A W A A V M C R R K S S G G K G G S Y S Q A A C S D S A Q G S D V S L T
A.
SEQ ID NO. 6. > H L A - B 2705 280 aa
GSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDR EDLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLS SWTAADTAAQITQRKWEAA RVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLEHGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQT QDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEPSSQS
SEQ ID NO. 7. > H L A : H L A 00220 B * 27 :01 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTYRE NLRTALRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKE TLQRA
:SEQ ID NO. 8. > H L A : H LA 00221 B * 27 :02 :01 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRENLRIALRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVWIGAWAAVMC RRKSSGGKGGSY SQAACSDSAQG SDVSLTA
SEQ ID NO. 9. > H L A : H LA 06955 B * 27 :02 :02 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE NLRIAL RYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQ ID NO. 10. > H L A : H LA 00222 B * 27 :03 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEHWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVG IVAGLAVLAVWI GAWAAVMC RRKSSGGKGGS YSQAACSDSAQGS DVSLTA
SEQ ID NO. 11.
Figure imgf000014_0001
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRE TQICKAKAQ TDRESLRTLLRYYNQ SEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPGEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVG IVAGLAVLAVW IGAWAAVMC RRK SSGGKGGSY SQAACSDSAQGS DVSLTA
SEQIDNO. 12. > H L A : H LA0224 6 B * 27 :04 :02 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPKIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR EAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
ISEQIDNO. 13. > H L A : H LA03987 B * 27 :04 :03 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYNQS EAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKD YIALNEDL SSWTAADTAAQIT QRKWEAAR EAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQIDNO. 14. > H L A : HLA10469 B *27 :04 : 04 337 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRESLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQLRAYLEGECVEWLKRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPGEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAWVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVG IVAGLAVLAWVI GAWAAVMC RRK SS
SEQIDNO. 15. > H L A : HLA 00225 B * 27 : 05 : 02 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLKRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVWIGAWAAVMC RRKS SGGKGGSYSQAAC SDSAQGSDVSL TA
SEQIDNO. 16. >HLA:HLA00226 B*27:05: 03 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQS EAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLS SWTAADTAAQIT QRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQIDNO. 17. >HLA:HLAO117 9 B*27:05:04 206 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLS SWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQIDNO. 18. >HLA: HLA01 64 2 B*27:05:05 298 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRW
SEQIDNO. 19. >HLA:HLA01635 B*27:05:06 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYMQS EAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAADTAAQIT QRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEO IDNO.20. >HLA:HLA01985 B*27:05:07 337 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEG PEYWDRETQICKAKAQ TDREDL RTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL
RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAWVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVG IVAGLAVLAVWI GAWAAVMC RRKSS
SEQIDNO. 21. >HLA: HLAO 2100 B*27:05:08 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQS EAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEO IDNO.22. >HLA: HLA02218 B*27:05:09 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQS EAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAADTAAQIT QRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEO IDNO.23. >HLA: HLA02 826 B*27:05:10 296 aa
GAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQ ICKAKAQTDREDLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAA QITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITL TWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEPSSQSTVPIVG SEQ ID NO. 24.
Figure imgf000016_0001
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ IDNO.25. >HLA: HLA04197 B*27:05:12 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQS EAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLS SWTAADTAAQIT QRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
;SEQ IDNO.26. >HLA: HLA04 509 B*27:05:13 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYMDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYMQS EAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQ IDNO.27. >HLA: HLA054 00 B*27:05:14 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAADTAAQIT QRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQ IDNO.28. >HLA: HLA054 77 B*27:05:15 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQS EAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAADTAAQIT QRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQ IDNO.29. >HLA: HLA05 925 B*27:05:16 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKRKAQTDRE DLRTLLRYYNQS EAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAADTAAQIT QRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQ IDNO.30. >HLA: HLA0 692 6 B*27:05:17 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYMDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQS EAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAADTAAQIT QRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQ IDNO. 31. >HLA: HLA07 634 B*27:05:18 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEG PEYWDRETQICKAKAQ TDREDLRT LLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVWIG AWAAVMC RRKSSGGKGGSY SQAACSDSAQG SDVSLTA
SEQ IDNO. 32. >HLA: HLA07 901 B*27:05:19 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYY NQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAADTAAQIT QRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ IDNO. 33. >HLA: HLA08 661 B*27:05:20 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQS EfiGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAADTAAQIT QRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQ ID NO. 34. > H L A : HLA08979 B * 27 : 05 : 21 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DL RTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLS SWTAADTAAQIT QRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQ ID NO. 35. > H L A : HLA08980 B * 27 :05 :22 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAAD TAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 36. > H L A : H LA 09882 B * 27 :05 :23 325 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYNQS EAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAWVIGA
SEQ ID NO. 37. > H L A : H LA 09884 B * 27 :05 :24 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DL RTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAAD TAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQ ID NO. 38. > H L A : H L A 10198 B * 27 :05 :25 298 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL HEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVVyPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRW
SEQ ID NO. 39. > H L A : H LA 10269 B * 27 :05 :26 273 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQS EAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAAD TAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLKRYLENGKETLQRAD PPKTHVTHH PISDHEAT LRCWALGFYPAEIT LTWQRDGEDQTQ DTELVETRPAGDRTFQKWAAW\'PSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRW
SEQ ID NO. 40. > H L A : H LA 11005 B * 27 :05 :27 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYMDRETQICKAKAQTDRE DL RTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAAD TAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 41. > H L A : H LA 11226 B * 27 :05 :28 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQS EAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAAD TAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQ ID NO. 42. > H L A : H LA 00227 B * 27 :06 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRESLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYDQYAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPGEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVG IVAGLAVLAVWIG AWAAVMC RRKS SGGKGGSYSQAAC SDSAQGSDVSL TA
SEQIDNO. 43. > H L A : HLA 00228 B * 27 : 07 : 01 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDR.EDLRTLLRYYNQSEAGSHTLQSMYGCDVGPDGRLLRGHNQYAYDGKDYIAL NEDLRSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHyTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVWIGAWAAVMC RRKS SGGKGGSYSQAAC SDSAQGSDVSL TA
SEQIDNO. 44. >HLA: HLA07 340 B*27:07:02 273 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQSMYGCDVGPDGRLLRGHNQYAYDGKDYIALNEDLRSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADP PKTHVTHH PISDHEAT LRCWALGFYPAEITL TWQRDGEDQTQ DTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRW
SEQIDNO. 45. >HLA: HLA0832 9 B*27r07:03 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQ SMYGCDVGPDGRLLRGHNQYAYDGKDYIALNEDLRSWTAAD TAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVE WLRRYLENGKE TLQRA
SEQIDNO. 46. >HLA: HLAO 9883 B*27:07 :04 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQ SMYGCDVGPDGRLLRGHNQYAYDGKDYIALNEDLRSWTAAD TAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQIDNO. 47. >HLA: HLA0022 9 B*27:08 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRET QICKAKAQTDRE SLRNLRGYYNQ SEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVG IVAGLAVLAVW IGAWAAVMC RRKS SGGKGGSYSQAAC SDSAQGSDVSL TA
SEQIDNO. 48. >HLA: HLAO 0230 B*27:09 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQHAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVG IVAGLAVLAVW IGAWAAVMC RRKS SGGKGGSYSQAAC SDSAQGSDVSL TA
SEQIDNO. 49. >HLA: HLAO 0231 B*27:10 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVG IVAGLAVLAVW IGAWAAVMC RRKS SGGKGGSYSQAAC SDSAQGSDVSL TA
SEO ID NO. 50. >HLA: HLA08 911 B*27:100 273 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDMGPDGRLLRGYHQDAYDGKD YIALNEDLS SWTAADTAAQIT QRKWEAAR EAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPGEITLTWQRDGEDQTQ DTELVETRPAGDRTFQKWAAW7PSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRW
SEQIDNO. 51. >HLA: HLAO 9308 B*27:101 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAQAQTDRE DLRTLLRYYNQS EAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAAD TAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQIDNO. 52. > H L A : H LA 09309 B * 27 : 102 181 a a
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE NLRIALRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYNQYAYDGKDYIALNEDLRSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQIDNO.53. >HLA :HLA0932 6 B*27:103 273 aa
SHSMRYFHTSVSRPGCGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLR.TLLR.YYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR EAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPGEITLTWQRDGEDQTQ DTELVETRPAGDRTFQKWAAWVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRW
SEQIDNO. 54. >HLA: HLAO 9426 B*27:104 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYHQSEAGSHTLQNMYGCDVAPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAADTAAQIT QRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQIDNO. 55. >HLA: HLA094 52 B*27:105 273 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYNQ5EAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLHGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR EAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEA.TLRCWALGFYPGEITLTWQRDGEDQTQ DTELVETRPAGDRTFQKWAAT7WPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRW
SEQIDNO. 56. >HLA:HLA09703 B*27:106 181 aa
SHSMRYFHTAMSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYDQYAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR EAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEO IDNO. 57. >HLA: HLA1015 9 B*27:107 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDLGPDGRLLRGYDQSAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR EAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
.SEQIDNO. 58. >HLA: HLA10402 B*27:108 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR EAEQRRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEO IDNO. 59. >HLA:HLA10 468 B*27:109 337 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETRICKAKAQTDRESLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPGEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAW'/PSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVWIGAWAAVMC RRKSS
SEQIDNO. 60. >HLA:HLAO 0232 B*27:ll 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRESLRTLLRYYNQSEAGSHTLQ SMYGCDVGPDGRLLRGHNQYAYDGKDYIAL NEDLRSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADP PKTHVT HHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAWVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVG IVAGLAVLAVW IGAWAAVMC RRKSSGGKGGSY SQAACSDSAQG SDVSLTA
SEQ ID NO. 61. > H L A : HLA 10470 B * 27 : 110 337 a a
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRENLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVWIGAWAAVMC RRK SS
SEQ ID NO. 62. > H L A : HLA10698 B * 2 7 : l l l 337 a a
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGCGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEHWDRE TQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQ SEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL
P.CWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVW IGAWAAVMC RRK SS
,SEQ ID NO. 63. >HLA: HLA10699 B * 27 :112 337 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAVSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRESLRTLLRYYMQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGKLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADP P KTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPGEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAWVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVW IGAWAAVMC RRK SS
;SEQ ID NO. 64. > H L A :H L A 10700 B * 27 :113 337 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMGYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRESLRTLLRYYHQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPGEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVG IVAGLAVLAVW IGAWAAVMC RRKSS
SEQ ID NO. 65. > H L A : H L A 10701 B * 27 :114 337 a a
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRGPW IEQEGPEYWDRE TQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYNQ SEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDY TAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPGEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVW IGAWAAVMC RRK SS
SEQ ID NO. 66. > H L A : H LA 10702 B * 27 :115 337 a a
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRE TQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYNQ SEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQWRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPGEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVW IGAWAAVMC RRK SS
SEQ ID NO. 67. >HLA : H LA10703 B * 27 :116 337 a a
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPE YWDRETQICKAKAQ TDREDLRTL LHYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVG IVAGLAVLAVW IGAWAAVMC RRKSS
SEQ ID NO. 68. > H L A : H LA 10705 B * 27 :117 337 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW
Figure imgf000020_0001
RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVW IGAWAAVMC RRK SS
SEQ ID NO. 69. > H L A : HLA10906 B * 27 : 118 181 a a
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPR.fiTVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEfiGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLS SWTAADTAAQIT QRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLKNGKE TLQRA
SEQ ID NO. 70. > H L A : H LA 11002 B * 27 :119 181 a a
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKTMTQTYRE NLRIALRYYHQ SEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL SSWTAADTAAQIT QRKWEAAR VAEQLRAYLE GECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQIDNO.71. >H LA : H LA 00233 B * 27 :12 341 aa
MRVTAPRT LLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKTNTQTDRESLRNLRGYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL MEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVWIGAWAAVMC RRK SSGGKG
SEQ ID NO. 72. . >HLA : H _A11003 B -27 :12 C 18_ aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR EAEQLRAYLEGECVEWLCRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 73. >HLA : H LA 11004 B * 27 :121 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQHMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENRKETLQRA
SEQ ID NO. 74. , > H L A : H LA11006 B * 27 ;122 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYCNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 75. >HLA : H LA 11225 B * 27 :123 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQHMYGCDVGPDRRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 76. , >HLA : H LA 11227 B * 27 :124 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALHEDLSSWSAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 77. >H LA : H LA 11200 B * 27 :125 337 aa
MRVTAPRT LLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRESLRTLLRYYNQSEAGSHTLQRMYGCDVGPDGRLLRGHNQYAYDGKDYIAL NEDLRSWTAADTAAQISQRKLEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLEKrGKDKLERADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAWVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVG IVAGLAVLAVW IGAWAAVMCRRKS S
SEQ ID NO. 78. >H LA: HLA 11648 B * 27 : 126 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE NLRIALRYYHQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR WEQLRRYLEGECVEWRRRYLEMGKETLQRA
■SEQ ID NO. 79. > H L A : H LA 11649 B * 27 :127 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHIIQRMYGCDVGPDGRLLRGYDQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQDRAYLEGLCVESLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 80. > H L A : H LA 11729 B * 27 :128 206 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAyALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFyRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLEHGKDTLQRA
SEQ ID NO. 81. >HLA: HLAl 1818 B * 27 :129 181 aa
SHSMRYFHTSySRPGRGEPRFITVGYVDDTLFyRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKANTQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQ ID NO. 82. > H L A : H LA 00234 B * 27 :13 362 aa
MRyTEPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHyTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRirtEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVWIGAWAAVMCRRKSSGGKGGSYSQAACSDSAQGSDVSLTA
SEQ ID NO. 83. >H LA : H LA 12037 B * 27 :130 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTWQTMYGCDVGPDGRLLRGHHQYAYDGKDYIALHEDLRSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQ ID NO. 84. > H L A : H L A l2072 B * 27 :131 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSySRPGRGEPRFITyGYyDDTLFyRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTYRESLRTLLRYYNQSEAGSHTLQMMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHyTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVyVPSGEEQRYTCHyQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVWIGAWAAVMCRRKSSGGKGGSYSQAACSDSAQGSDVSLTA
SEQ ID NO. 85. > H L A : H LA 00235 B * 27 :14 206 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITyGYyDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYNQSEAGSHTWQTMYGCDLGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLEHGKETLQRA
SEQ ID NO. 86. > H L A : H LA 00236 B * 27 :15 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITyGYyDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYHQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR EAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 87. > H L A : HLAO1056 B * 27 : 16 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKTNTQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDL5SWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 88. > H L A : H LA 01130 B * 27 :17 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEFWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYNQSEAGSHTLQMMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELyETRPAGDRTFQKWAAWVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVWIGAWAAVMCRRKS SGGKGGSYSQAAC SDSAQGSDVSL TA
SEQ ID NO. 89. > H L A : HLAO 1143 B * 27 :18 206 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQISKINTQTYRESLRNLRGYYMQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 90. . > H L A :H L A 01147 B * 27 :19 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHIIQKMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWIAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 91. >HLA : HLA02173 B * 27 :20 273 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGHNQYAYDGKDYIALNSDLRSWTAADTAAQITQRKWEAAR EAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPGEITLTWQRDGEDQTQ DTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRW
SEQ ID NO. 92. >HLA : HLAO 1277 B * 27 :21 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYNQSEAGSHTLQRMYGCDVGPDGRLLRGYDQYAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR EAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 93. > H L A : HLAO 1348 B * 27 :23 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRNTQIFKTNTQTYRE SLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQ ID NO. 94. > IILA : IH A 0150 4 B * 27 :24 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRESLRTLLRYYNQSEAGSHTLQSMYGCDVGPDGRLLRGHNQYAYDGKDYIAL NEDLRSWTAADTAAQISQRKWEAAREAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPGEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGI VAGLAVLAVWI GAWAAVMCRRKS SGGKGGSYSQAAC SDSAQGSDVSL TA
SEQ ID NO. 95. M IL A : Í ILA 0152 9 B - 27 : 25 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFyRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQ1DRESLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL MEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQWRAYLEGLCVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPGEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVWIGAWAAVMCRRKSSGGKGGSYSQAACSDSAQGSDVSLTA
SEQ ID NO. 96. >H 1A : I iL A ü l 952 B * 27 :2 ñ 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAQAQTDRE
5LRNLRGYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO.97. > H 1 A :H L A 02025 B * 27 :27 181 aa
SHSHRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGHNQYAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWIiRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 98. > H I A : H 1,802 Al 8 B * ? 7 :2 S 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGTCVEWLRRHLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 99. >8.1.6:8 1,8.02:7.'. b * / 7 : 29 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQISKTNTQTYRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO.100. >H LA : H LA 02238 B ^ 2 > : 30 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE NLRIALRYYNQSEAGSHIIQRMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 101. >H LA : H LA 02301 B * 2 > : 31 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLF'/RFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAQAQTDRE SLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 102. >HLA:HLA02370 B*27:32 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYRQSEAGSHTLQSMYGCDVGFDGELLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAWVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRiíEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVWIGAWAAVMCRRKSSGGKGGSYSQAACSDSAQGSDVSLTA
SEQ ID NO. 103. > M A : H I A 02437 h * 27 : 33 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRMLRGYYNQSEAGSHTLQSMYGCDVGPDGRLLRGHHQYAYDGKDYIALNEDLRSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 104. > H L A : H L A 02473 B * 27 : 34 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQSMYGCDVGPDGRLLRGHDQYAYDGKDYIALNEDLRSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 105. >HLA: HLA02499 B*27:35 337 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYMQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYNQFAYDGKDYIAIi NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVWIGAWAAVMCRRK SS
SEQ ID NO. 106. >HLA:HLA02513 B*27:36 302 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYNQSEAGSHTLQMMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLRSWTAADTAAQISQRKLEAAR VAEQLRAYLEGECVEWIiRRYLENGKDKLERADPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQ DTELVETRPAGDRTFQKWAAyWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEPSSQSTVPIVGIVAGLAyLAVyVI GA W
SEQ ID NO. 107. > A AA : A2 A027 P4 3 * 27 : 37 i g i aa
SHSMRYFYTSVSRPGRGEPRFIiyGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEY'rtDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYI4QSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWXRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 108. > H LA :H LA 32 931 B * 27 : 38 309 aa
PRTLLLLLWGAyALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYyDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEG PEYWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLS SWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGLCVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEA1LRCWAL GFYPAEITLTViQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAWVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEPSSQST VPIVGIVAG
SEQ ID NO. 109. >HLA:HLA03176 B*27:39 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFIiyGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKALTDRE DLRTLLRYYI4QSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWXRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 110. > I IL A :IIL A 03200 B * 27 : 4 Ü 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRNLRGYYMQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR EAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 111. >AAA:B1A0327 0 33 2 1 : - ! 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYMQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGHDQSAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 112. > H L A : H L A 03278 B * 27 : 42 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRNLRGYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO.113. > IIL A ::iL A C 3323 B ‘ 27 : 43 331 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKaKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQSMYGCDVGSDGRLLRGHNQYAYDGKDYIALNEDLRSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWI.RRYLEHGKETLQRA
SEQ ID NO. 114. >HT A ::-n ,AC355'. R ‘ 37 : 4 ¿ ' 31 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTYP.E SLRNLRGYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLEHGKETLQRA
SEQ ID NO. 115. .>HJ_A:ALAC3554 B * 2 T ' : 45 273 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQ1DRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQRRAYLEGECVEWLRRY1ENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQ DTELVETRPAGDRTFQKWAAWVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRW
SEQ ID NO. 116. >HI .A:HI ,AC361 6 R , 27: 46 3I aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQYAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 117. > A B A : HL A 03659 B * 27 : 47 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETOAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITyGYVDDTLFyR.FDSDA.ASPREEPRAPA1 IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQDRAYLEGLCVESLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEyTL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVVyPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAWVIGAWAAVMCRRKSSGGKGGSYSQAACSDSAQGSDVSLTA
SEQ ID NO. 118. >H LA:H LAC 3 562 B* 27 : - 18 231 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEFRFITVGYVDDTLFyRFDSDAASPREEPRAPWREQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ_ID NO. 119. >HI A : HI , AC3677 h * , 27 : 49 31 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLFRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 120. >H LA :H LA C 3712 B * 27 : 50 _31 aa
SHSMRYFHTSySRPGRGEPRFITyGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVE SLRRYLENGKETLQRA
s e q id n o .121. .
Figure imgf000027_0001
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVP.FDSDAASPREEQRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQ DTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRW
SEQ ID NO. 122. . >HLA: HLA03824 B*27:52 362 aa
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPRTEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDREDLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAARVAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRAD PPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAWVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAVLAVWIGAWAAVMCRRKSSGGKGGSYSQAACSDSAQGSDVSLTA
SEQ ID NO. 123. ,
Figure imgf000027_0002
_
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRIALRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQ ID NO. 124. M iL A : 11 ^1 ' a -17,
Figure imgf000027_0003
aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYHQS EAG SHTLQNMYGCDVGPDRRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLS SWTAADTAAQIT QRKWEAAR EAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 125. . > ft - :HT,a C4::)-P R * > / : aa ; ? |
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTVAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 126. .
Figure imgf000027_0005
C 105:
Figure imgf000027_0004
aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAAGTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 127. .
Figure imgf000027_0006
:-; .r
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRARWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE NLRIALRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 128.
Figure imgf000027_0007
13 1 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQCA
SEQ ID NO. 129. >HLA:HLA04164 B 27:59N 71 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAX SEQ ID NO. 130. ■ >HLA:HLA04443 B*27:60 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLF’VRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQGKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ_ ID NO. 131. . ,
Figure imgf000028_0001
I a ■,
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEW1RRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 132. . >HT,R : HTAÜl á í- l ^ ' 77 : c Y :77 a a
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE NLRIALRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGTCVEWLRRHLEHGKETLQRA
SEQ ID NO. 133. .
Figure imgf000028_0002
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICEAKAQTPRE SLRTLLRYYNQS EAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALMEDLS SWTAAD TAAQITQRKWEAAR EAEQLRAYLEGLCVEWLRRYLENGKE TLQRA
SEQ ID NO. 134. . YHT.A : FT.A Í 4 789 R * 73 : 6 a K 3.77 do
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYMQSEAG SHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNX
SEQ ID NO. 135. . >HLA:HLA04771 B 27:65N 53 aa SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEX
SEQ ID NO. 136. . >HT Á : A ;:r,.73 r? TV ■' r’ : 3315 .7 7 ....
MRVTAPRT LLLLLWGAVALTE TWAGSH SMRYFHT SVSRPGRGEPRFITVGYVDDT LFVRFDS DAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRESLRTLLRYYMQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQLRATWRASAWSGSADTWRTGRRRCSARTPQRHTX
SEQ ID NO. 137. . /."HL7 : HTFYJcl 73 ^ ' .37 : 7.7 773 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPRMAPRAPWIEQEGPEYWDR.ETQICKAKAQTPRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQ DTELVETRPAGDRTFQKWAAWVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRW
SEQ ID NO. 138. . - : 7 : 7 : ' a : .777 h ' 77 3 : ' 373 ...
MRVTAPRT LLLLLWGAVALTE TMAGSH SMRYFHT SVSRPGRGEPRFITVGYVDDT LFVRFDS DAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRESLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDLEATL RCWALGFYPGEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRW
SEQ ID NO. 139. . - ' a v a C T M I R * : 73; 37 ' .-.o
MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWAGSHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPW IEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRESLRTLLRYYMQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAL NEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAREAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRADPPKTHVTHHPISDHEATL RCWALGFYPGEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDRTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLLKPLTLRWEP SSQSTVPIVGIVAGLAV LAVWIG AWAAVMC RRKSS
SEQ ID NO. 140. >HLA:HLA05473 B*27:70 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQRMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALHEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 141. ■ >HLA :HLA05492 B*27:71 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 142. . >HLA: HLA05534 B * 27 : 72 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMNGCDVGPDGBT.T.RGYHQDAYDGKDYIAENEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWIiRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 143. >HLA: HLA05517 B*27:73 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAFWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYMQSEAGSQTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO.144. > H L A : H L A 0613 3 B'k' 27 : 74 181 aa
SHSMRYFHTFVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYMQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWIiRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 145. . >H I A : H.l ,.AÜ6218 B 27 : 75 131 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFISVGYVDDTQFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE WLRIALRYYNQSEAGSHTLQHMYGCDVGPDGRXI.RGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 146. ■ >HLA:HLA0 6230 B*27:76 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYNQYAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGLCVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 147. . >HLA:HLA0 625 5 B*27:77 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKANTQTDRE NLRIALRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGSCVEWliRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 148. ■ >HLA :HLA06256 B*27:78 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQSAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 149. > H L A : HLAO8232 2 - 27 : 73 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYMQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKVYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR EAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 150. >HL A: HL A0G333 B * 2 Y ; 8 C 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYHQSEAGSRTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALHEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 151. . > H L A : H L A 06940 B * 27 : 81 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTWQTMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEW1RRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 152. . >H LA : HLA06993 B * 27 : 82 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALHEDLSSWTAAVTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 153. >BLA : IILAÜ 7187 B A27 : 83 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE NLRIALRYYMQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKDTLERA
SEQ ID NO. 154. , > H L A : H L A O 188 B * 27 ; 84 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYMQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIAQNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWIiRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 155. >HLA : HLAO 7177 B * 27 ; 83 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFI TVGYVDDTLFyRFDSDAASPB-EEPRAPifJIEQEGPEYWDRETQICQAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 156. >H I ,A : H ,A07339 - ^ .27 : 88 ' 8 : aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFI TVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE SLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR EAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKGTLQRA
SEQ ID NO. 157. >HLA : HLA07441 B * 27 : 87 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPWAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWIiRRYLEHGKETLQRA
SEQ ID NO. 158.
Figure imgf000031_0001
_ 7 I u,,
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRILLRYYNQSEAGSHTLQNIYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 159. ■ >HLA: HLA07689 B*27:89 181 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE HLRNLRGYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
Figure imgf000031_0004
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYKQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLRSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO. 163. . >HT,7\: - T A 803 F y A a 7I A Aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDYTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQ1CKAKAQTDRE SLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYDQYAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR EAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID N° . 164.
Figure imgf000031_0002
777
Figure imgf000031_0003
i _a í
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRNTQICKTMTQTYRE DLRTLLRYYNQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR EAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYADDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE DLRTLLRYYHQSEAGSHTLQHMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLSSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA
SEQ ID NO.166.. >HLA:HLA0833C B 27.94N 58 aa
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEY
SEQ ID NO. 167. A 3 A : HLA7A 337 R A I / : Y : _.= 1 u,,
SHSMRYFHTSVSRPGRGEPRFITVGYVDDTLFVRFDSDAASPREEPRAPWIEQEGPEYWDRETQICKAKAQTDRE HLRIALRYYMQSEAGSHTLQNMYGCDVGPDGRLLRGYHQDAYDGKDYIALNEDLRSWTAADTAAQITQRKWEAAR VAEQLRAYLEGECVEWLRRYLENGKETLQRA

Claims (13)

REIVINDICACIONES
1. Un homodímero de proteína de fusión de HLA-B27 para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer, en donde dicho homodímero comprende, o consiste en, un primer y un segundo monómero, y cada monómero comprende independientemente del otro monómero:
i. una cadena pesada de HLA-B27, y
ii. un fragmento Fc.
2. El homodímero de proteína de fusión de HLA-B27 para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el primer y el segundo monómero son iguales.
3. El homodímero de proteína de fusión de HLA-B27 para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en donde el monómero comprende adicionalmente un fragmento de epítopo peptídico.
4. El homodímero de proteína de fusión de HLA-B27 para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la cadena de HLA-B27 solo consiste en los dominios alfa 1, 2 y 3 de HLA-B27.
5. El homodímero de proteína de fusión de HLA-B27 para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la cadena de HLA-B27 comprende el dominio transmembrana y no comprende el dominio intracelular.
6. El homodímero de proteína de fusión de HLA-B27 para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la cadena de HLA-B27 tiene > 70 %, > 80 %, > 85 %, > 90 %, > 92 %, > 93 %, > 94 %, > 95 %, > 96 %, > 97 % o > 98 % o 100 % de identidad de secuencia en comparación con cualquiera de las secuencias identificadas por SEQ ID NO enumeradas consecutivamente de SEQ ID NO 006 a SEQ ID NO 172.
7. El homodímero de proteína de fusión de HLA-B27 para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 6, en donde el enlazador de aminoácidos comprende 1 a 50, particularmente 5 a 40, más particularmente 10 a 30, aún más particularmente 15 a 25 aminoácidos, que unen la cadena de HLA-B27 con el dominio Fc como una sola cadena polipeptídica.
8. Una medicamento combinado que comprende
a. un homodímero de proteína de fusión de HLA-B27 como se especifica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, y
b. un agente inhibidor de puntos de control.
9. El medicamento combinado de acuerdo con la reivindicación 8, en donde dicho agente inhibidor de puntos de control se selecciona de un inhibidor de la interacción de CTLA4 con CD80 o CD86, un inhibidor de la interacción de PD-1 con su ligando PD-L1, y un ligando TIM-3, particularmente un anticuerpo contra cualquiera de CTLA4, CD80, CD86, PD-1, PD-L1 o TIM-3, más particularmente un anticuerpo monoclonal contra CTLA4 0 PD-1 humano.
10. Una molécula de ácido nucleico para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer, en donde dicha molécula de ácido nucleico codifica un homodímero de proteína de fusión de HLA-B27 de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
11. Un vector de expresión recombinante que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 10, particularmente un plásmido que comprende un promotor que es operable en una célula de mamífero, particularmente en una célula humana, para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer.
12. Un virus que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 10 bajo el control de una secuencia promotora operable en una célula de mamífero, particularmente en una célula humana, particularmente un adenovirus, un virus adenoasociado, un herpesvirus o un lentivirus, para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer.
13. Una célula huésped modificada genéticamente in vitro que comprende una molécula de ácido nucleico que codifica un homodímero de proteína de fusión de HLA-B27 de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
ES16703507T 2015-02-04 2016-02-03 Uso de homodímeros de hla-b27 para el tratamiento del cáncer Active ES2807424T3 (es)

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