JP6992201B2 - 合成ペプチド化合物及び使用方法 - Google Patents

Description

関連出願への相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下、その全内容が本明細書中での参照によって組み込まれる、２０１５年６月２６日出願の米国仮特許出願第６２／１８５，２０２号に基づく優先権を主張する。

連邦政府資金による研究に関する言及
本発明は、米国商務省（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｏｍｍｅｒｃｅ）によって授与された、Ｖｉｒｇｉｎｉａ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｐａｒｔｎｅｒｓｈｉｐ ｉ６資金機構（Ｓｕｂ－Ａｗａｒｄ ＃ＧＧ１１５９８１４２５１５）の下、政府支援を受けてなされたものである。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。

分野
本発明は、合成ペプチド化合物、ならびに炎症性疾患、自己免疫疾患、微生物及び細菌感染症などの補体介在疾患；及び嚢胞性線維症及び種々の急性疾患などの非補体介在疾患の治療及び診断を含む治療及び診断のためのその使用に関する。

背景
補体系
自然免疫系の不可欠な要素である補体系は、侵入病原体に対する防衛機構としての重要な役割を果たし、適応免疫反応を刺激し、そして免疫複合体及びアポトーシス細胞の除去を補助する。古典経路、レクチン経路及び副経路の３つの異なる経路が、補体系を構成する。Ｃ１ｑ及びマンノース結合レクチン（ＭＢＬ）は、それぞれ、古典及びレクチン経路の構造上関連する認識分子である。ＩｇＭまたはクラスター化ＩｇＧは、Ｃ１ｑに関する主要リガンドとして機能するのに対して、ＭＢＬは、マンナンなどの多糖類を認識する。Ｃ１ｑ及びＭＢＬによるリガンド結合は、Ｃ４及びＣ２の連続的活性化をもたらし、古典及びレクチン経路Ｃ３－転換酵素を形成する。対照的に、副経路活性化は認識分子を必要としないが、古典またはレクチン経路によって開始されたＣ３活性化を増幅することが可能である。これらの３つの経路のいずれの活性化によっても、炎症介在物質（Ｃ３ａ及びＣ５ａ）、ならびに細胞溶解を引き起こす膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の形成がもたらされる。

補体系は、多くの保護免疫機能において重要な役割を果たすが、補体活性化は、広範囲の自己免疫疾患プロセス及び炎症性疾患プロセスにおける組織損傷の有意な介在物質である（Ｒｉｃｋｌｉｎ及びＬａｍｂｒｉｓ，“Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．”Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００７；２５（１１）：１２６５－７５（非特許文献１））。

補体調節因子が必要とされる。一方では、補体系は、病原体に対する重要な宿主防御である。他方では、その抑制されない活性化によって、破壊的な宿主細胞損傷がもたらされる可能性がある。現在、全身性紅斑性狼瘡、重症性筋無力症、及び多発性硬化症などの自己免疫疾患を含む多くの疾患プロセスにおける補体調節不全と関連する罹患率及び死亡率が周知であるにもかかわらず、ヒトでの使用を認可されている抗補体療法はわずか２つである：１）遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）の患者での使用に関して認可された、精製されたヒトＣ１－阻害剤、及び２）発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）の治療で使用されるＣ５に対するヒト化長時間作用性モノクローナル抗体であるエクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（商標））。ＰＮＨ及びＨＡＥは両方とも、極めて少数のヒトが患う難病である。現在、調節不全補体活性化が中枢的役割を果たすより一般的な疾患プロセスに関して認可されている補体調節因子はない。調節不全補体活性化は、慢性疾患徴候及び急性疾患徴候の両方において役割を果たす可能性がある。急性疾患徴候には、特に、急性血管内溶血性輸血反応（ＡＩＨＴＲ）、出生時仮死、低酸素虚血性脳障害、虚血再灌流障害（ＩＲＩ）、心筋梗塞症、冠状動脈バイパス手術及び卒中、ならびに臓器移植拒絶が含まれる。

アストロウイルスコートタンパク質
アストロウイルス科（Ａｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）は、一本鎖のメッセンジャー－センスＲＮＡゲノムを有する、非エンベロープ型二十面体ウイルスの科を構成する。これらのウイルスは、ヒトにおいて胃腸炎、ならびに他の動物種での他の疾患の有意な原因である。それらは、全世界の小児下痢性疾患の推定２～１７％を引き起こすと推定されている。

アストロウイルスコートタンパク質（「ＣＰ」）は、補体系の活性を減少させ、タンパク質の「活性」部分が、補体介在疾患からの組織損傷を減少させることにおいて臨床的有用性を有し得ることが示唆される。ヒトアストロウイルス１型（ＨＡｓｔＶ－１）から精製された野生型タンパク質（「ＷＴ ＣＰ」）は、Ｃ１ｑ及びＭＢＬを結合することが可能であり、かつ古典及びレクチン経路活性化の両方を調節することが可能である（Ｂｏｎａｐａｒｔｅ ｅｔ ａｌ．，２００８．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８２，８１７－８２７（非特許文献２）；Ｈａｉｒ ｅｔ ａｌ．，２０１０．Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４７，７９２－７９８（非特許文献３））。この特性は、ヒト好中球ペプチド－１（ＨＮＰ－１）に関して記載された特性に類似している（Ｖａｎ Ｄｅｎ Ｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，１９９８．Ｂｌｏｏｄ．９２，３８９８－３９０３（非特許文献４）；Ｇｒｏｅｎｅｖｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，２００７．Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４，３６０８－３６１４（非特許文献５））。ＨＡｓｔＶ－１コートタンパク質は、組換型バキュロウイルス構築物から発現されて、次いで精製された７８７アミノ酸分子である（Ｂｏｎａｐａｒｔｅ ｅｔ ａｌ．，２００８．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８２，８１７－８２７（非特許文献２））。

古典経路、レクチン経路、及び副経路の３つの経路のそれぞれが多数の自己免疫疾患プロセス及び炎症性疾患プロセスの要因になることが実証されているため、補体系の古典経路、レクチン経路、及び副経路を阻害するためのペプチド化合物の開発が必要とされている。古典経路及びレクチン経路の両方が、多くの動物モデルにおける虚血再灌流誘発障害に関連していたため、これらの経路の特異的遮断が特に必要とされている。副経路欠損を有するヒトは、重度の細菌感染症を患う。したがって、機能性副経路は、侵入病原体に対する免疫学的監視のために不可欠である。

微生物及び細菌感染症
多くの微生物は、現在利用可能な抗生物質に対して耐性がある。現在の抗生物質は、細菌が、空間及びエネルギーについて何年もの間競合してきた他の微生物から誘導されるが、迅速かつ予測可能な耐性の出現をもたらした。ヒトに対する最も多くの病原細菌のいくつかは、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、ＭＲＳＡ、及び肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）などのカルバペネム耐性腸内細菌（ＣＲＥ）である。緑膿菌及び黄色ブドウ球菌は、肺嚢胞性線維症においても主要な病原体である。ガードネレラ（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ）は、細菌性膣症の一般的な原因である、グラム不定性嫌気性球桿菌である。ガードネレラは、細菌性膣症の症候を引き起こし、かつ膣内での正常なバリア防御を崩壊させることによってＨＩＶ感染のリスクを増加させる、補体活性化及び炎症も引き起こす。原因となる有機体を死滅させ、かつ炎症を遮断する、細菌性膣症の治療が必要とされる。従来の抗生物質に対する耐性の増加を考えると、新規抗微生物性化合物も必要とされる。

単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ－１）及び単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ－２）は、ヘルペスを引き起こすウイルスである。ＨＳＶ－１による感染は、同一用具からの食事、リップクリームの共有、またはキスなどの一般的接触から引き起こされる可能性がある。このウイルスは非常に感染力が高く、個人が口唇ヘルペスを患っていて、かつその期間に性的活動を実行した場合、ＨＳＶ－１から性器ヘルペスに感染する可能がある。同様に、ＨＳＶ－２も非常に感染力が高い。ＨＳＶ－２は、ＨＳＶ－２を患うヒトとの性的接触の形態により感染する。米国皮膚科学会（ＡＡＤ）によれば、米国内の約２０パーセントの性的に活動的な成人がＨＳＶ－２に感染していると推定される。ＨＳＶ－２感染症は、ヘルペスによる傷に接触することによって拡大するが、ＡＡＤによれば、ほとんどのヒトは、無症状、または傷を有さない感染者からＨＳＶ－１に感染することが報告されている。ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２のためのアシクロビルのような現在の治療は、完全に有効ではあり得ない。したがって、ウイルスに対してより有効なＨＳＶ－１及びＨＳＶ－２の抗ウイルス治療が必要とされている。

ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）の増殖
ラクトバチルスは、１８０超の種を含有する細菌属である。単一のプロバイオティクス剤として複数のラクトバチルス種が一緒に投与されることが多い。組み合わせることで、種々のラクトバチルス種が、過敏性大腸症候群を患う個人を助け、壊死性腸炎及び他の新生児感染症を予防することが知られている。その多くの健康上の利点のため、ラクトバチルス種の増殖を促進することが可能な化合物が必要とされている。

嚢胞性線維症
嚢胞性線維症（ＣＦ）は、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）遺伝子における突然変異によってもたらされる遺伝性疾患である。ＣＦの患者は、異常に濃厚で粘性の粘液を産生し、これは肺を詰まらせて、そして生命を脅かす肺感染症を引き起こし、かつ膵臓を妨害して、そして体が食物を分解し重要な栄養を吸収するのを助ける天然酵素の機能を停止させる。ＣＦは、小気道閉鎖、細菌性病原体、例えば、緑膿菌、黄色ブドウ球菌（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）を含む）、バークホルデリア・セパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）による感染症、及び炎症による肺損傷のサイクルによって特徴づけられる。補体介在炎症は、ＣＦにおける炎症性肺損傷に対する主要な要因であり得る。ＣＦの治療は、肺の健康及び良好な栄養を維持するための通常の治療手順を含む。ＣＦの他の治療としては、肺に蓄積される可能性のある濃厚粘液を緩めてきれいにすることに有用な毎日の気道浄化、気道を清潔に保つのに有用な抗生物質を含む吸入薬、ならびに重要な栄養の吸収を改善するための膵臓酵素サプリメントを含む。ＣＦの抗炎症治療及び抗微生物治療の両方が必要とされている。

溶血性輸血反応
輸血によって生命を救うことができるが、急性血管内溶血性輸血反応（ＡＩＨＴＲ）などのいくつかの潜在的に生命を脅かす様々な反応のリスクを伴う可能性もある。ＡＩＨＴＲは、全輸血の５分の１で生じると推定される。頻繁に輸血を受けている個人は、経時的に、赤血球（ＲＢＣ）抗原に対して同種抗体及び自己抗体を発現し、クロスマッチがますます困難となり、したがって、ＡＩＨＴＲのリスクが増加することになる。現在の輸血安全対策には、「タイピング」、「抗体スクリーニング」、ならびに「クロスマッチング」が含まれる。これらの手段により輸血はより安全になったが、なお輸血反応は生じる。ＡＩＨＴＲは、宿主の抗体が輸血された赤血球に結合して、古典補体経路活性化を開始し、それによって、炎症介在物質Ｃ３ａ及びＣ５ａの産生、ならびにＣ３ｂオプソニン化及び膜侵襲複合体（ＭＡＣ）による輸血細胞の溶血反応がもたらされる時に生じる。今日まで、補体アナフィラトキシンＣ３ａ及びＣ５ａの産生阻害によるＡＩＨＴＲの臨床的介入を説明するケースは１つのみ報告されている。これらの反応に関する特定の介入はなく、現在の反応の管理が、本質的に支持される。既存の安全対策のため、先進国世界においてはＡＢＯ不適合はまれであるが、頻繁な輸血を必要とする、鎌状赤血球症及び重症地中海貧血症の個人では、赤血球におけるマイナー抗原決定基に対する抗体の蓄積のため、輸血反応のリスクが増加する。新生児における新生児ＡＢＯ不適合は、黄疸と、深刻な症例の場合、核黄疸をもたらすおそれがある。血液銀行組織または輸血医学診療は、ドナーとレシピエントとの間の補体介在赤血球溶解に関するリスクを直接評価する方法を有さない。輸血を止めることを除いて、ＡＴＲのために効果的な医療的介入は現在ない。診断手段、ＡＩＨＴＲを予防するための予防的治療、及びＡＩＨＴＲの際の救命治療が必要とされる。

出生時仮死
出生時仮死は、脳損傷を引き起こす、新生児への酸素欠乏に起因する健康状態である。低酸素虚血性脳障害（ＨＩＥ）は、脳全体が適切な酸素供給を欠乏するが、欠乏が全体的ではない場合に生じる状態である。ＨＩＥは、出生時仮死と関連することが最も多い。再灌流障害は、虚血または酸素欠乏の期間の後に血液供給が組織に戻る時に生じる組織損傷である。虚血期間における血液からの酸素及び栄養の欠如によって、循環の回復が、通常機能の回復ではなく、酸化的ストレスの誘発を介して炎症及び酸化的損傷をもたらすという状態が生じる。補体活性化は、新生児ＨＩＥなどの虚血再灌流障害の発症に関与する。人工低体温法（ＨＴ）は、ＨＩＥのケアのための現在の標準的方法であるが、死亡または障害を１１％減少させるだけである。発表されたデータによると、ＨＴは、逆説的に、炎症促進性補体活性化を増加し、これにより潜在的にその利点が制限されることが示されている。補体を調節し、かつ神経保護作用を有するＨＩＥ及び出生時仮死の治療が必要とされている。

自己免疫溶血性貧血
自己免疫溶血性貧血（ＡＩＨＡ）は、個人の赤血球に対する抗体が、それらの破裂を引き起こし、不十分な血漿濃度をもたらす時に生じる疾患である。ＡＩＨＡは、最も一般には、ＩｇＧ及びＩｇＭによって引き起こされる。ＩｇＭは、古典補体経路の有効な活性化因子である。したがって、ＡＩＨＡは、赤血球の補体介在溶解によって特徴づけられる。したがって、ＡＩＨＡを治療するための、補体系を対象とする療法が必要とされている。

補体活性化を調節することができ、かつ炎症性疾患及び自己免疫疾患などの補体介在疾患を予防及び治療するために治療的に使用することができる、ペプチド化合物を開発することは望ましい。特に、急性血管内溶血性輸血反応（ＡＩＨＴＲ）、出生時仮死、自己免疫溶血性貧血、ウイルス性感染症、及び細菌感染症などの急性疾患及び状態を治療するペプチド化合物を開発することも望ましい。嚢胞性線維症を治療するペプチド化合物を開発することも望ましい。

Ｒｉｃｋｌｉｎ及びＬａｍｂｒｉｓ，"Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．"Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００７；２５（１１）：１２６５－７５ Ｂｏｎａｐａｒｔｅ ｅｔ ａｌ．，２００８．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８２，８１７－８２７ Ｈａｉｒ ｅｔ ａｌ．，２０１０．Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４７，７９２－７９８ Ｖａｎ Ｄｅｎ Ｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，１９９８．Ｂｌｏｏｄ．９２，３８９８－３９０３ Ｇｒｏｅｎｅｖｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，２００７．Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４，３６０８－３６１４

概要
一態様において、本発明は、補体系を調節する合成ペプチド化合物及びこれらの化合物を使用する方法を提供する。特に、いくつかの実施形態において、合成ペプチド化合物は、Ｃ１及びＭＢＬを結合し、調節し、かつ不活性化することができ、したがって、副経路は変化させないが、その最も初期のポイントにおいて古典経路活性化及びレクチン経路活性化を効率的に阻害することができる。これらのペプチド化合物は、副経路に影響を与えることなく、Ｃ１及びＭＢＬの活性化を選択的に調節及び阻害するための治療価値を有し、かつ古典経路及びレクチン経路の調節不全活性化によって介在された疾患を治療するために使用することができる。他の実施形態において、ペプチド化合物は、レクチン経路活性化ではなく、古典経路活性化を調節する。ペプチド化合物は、様々な治療の指標として有用であり、補体調節と無関係な指標としても有用である。いくつかの実施形態において、これらのペプチド化合物は、特に、急性血管内溶血性輸血反応（ＡＩＨＴＲ）、出生時仮死、ならびに細菌、ウイルス、及び微生物感染症などの急性の疾患及び状態を治療するための治療価値を有する。これらのペプチド化合物は、嚢胞性線維症を治療するための治療価値も有する。

いくつかの実施形態において、本発明は、Ｐｏｌａｒ Ａｓｓｏｒｔａｎｔ（ＰＡ）ペプチド（配列番号：３）からの１５アミノ酸のペプチドの識別及び修飾、そのペプチドの誘導体、ならびにそれらの使用方法に基づく。ＰＡペプチドは、ＣＰ１（配列番号：１）と呼ばれるヒトアストロウイルスタンパク質から誘導されたスクランブル化ペプチドである。ＰＡペプチドは、ＰＩＣ１（補体Ｃ１のペプチド阻害剤）、ＡｓｔｒｏＦｅｎｄ、ＡＦ、または配列番号：３としても知られている。本明細書で使用される場合、「ＰＩＣ１ペプチド」という用語には、配列番号：３、ならびに配列番号：３と同一であるが、ＰＥＧ化修飾を有する他のアミノ酸配列が含まれる。ＰＩＣ１ペプチドは、最初に、それが補体系によって介在された疾患と関連することが見出されたため、そのように命名された。驚くべきことに、いくつかの態様において、本発明は、限定されないが、嚢胞性線維症及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの補体系と関連しない疾患及び状態を治療するためのＰＡペプチド及び誘導体の使用にも関する。いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号：３～４７に示されるアミノ酸配列及び修飾を有するＰＩＣ１ペプチド及びその修飾に基づく。これらのペプチドは、補体阻害を含む補体活性化の調節；溶血性反応の治療及び／または予防；低酸素虚血性脳障害の治療；嚢胞性線維症の治療；抗微生物的使用；ならびに本明細書に開示された他の疾患及び状態の治療及び／または予防のために使用することができる。

いくつかの態様において、本発明は、例えば、内部ペプチド欠失及び置換、Ｎ末端及びＣ末端における欠失及び置換を有するＰＡのペプチド模倣体、ペプチド類似体及び／または合成誘導体であり、かつＣ１ｑ及びＭＢＬに結合することによって、古典経路活性及びレクチン経路活性化を調節することが可能であるペプチド化合物に関する。

本発明のさらなる実施形態は、サルコシン置換、アラニン置換及び／またはＮ末端、Ｃ末端またはＮ末端及びＣ末端のＰＥＧ化によって修飾された、本発明のペプチド化合物のいずれか１つである。

いくつかの実施形態において、ペプチド配列は、配列番号：３～４７に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％の配列同一性を有する。

一態様において、本発明は、それを必要とする対象において溶血性反応を治療及び／または予防する方法であって、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約９０％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、合成ペプチドは、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する。他の実施形態において、溶血性反応は、急性血管内溶血性輸血反応（ＡＩＨＴＲ）、輸血関連急性肺障害（ＴＲＡＬＩ）及び血小板輸血不応からなる群より選択される。さらなる実施形態において、対象に輸血が実施される前、対象に輸血が実施された後、及び／または輸血の間に、組成物は投与される。

別の態様において、本発明は、それを必要とする対象において低酸素虚血性脳障害を治療する方法であって、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約９０％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、合成ペプチドは、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する。

別の態様において、本発明は、それを必要とする対象において嚢胞性線維症を治療する方法であって、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約９０％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、合成ペプチドは、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する。

別の態様において、本発明は、それを必要とする対象において細菌感染症を治療する方法であって、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約９０％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、合成ペプチドは、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する。いくつかの実施形態において、細菌感染症は、黄色ブドウ球菌、肺炎桿菌、緑膿菌、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）及びガードネレラ種からなる群より選択される細菌によって引き起こされる。さらなる実施形態において、細菌感染症はグラム陽性菌またはグラム陰性菌によって引き起こされる。

別の態様において、本発明は、対象におけるラクトバチルスの増殖を増強する方法であって、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約９０％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、合成ペプチドは、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する。

別の態様において、本発明は、それを必要とする対象においてウイルス感染症を治療する方法であって、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾への少なくとも約９０％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、合成ペプチドは、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する。いくつかの実施形態において、ウイルス感染症は、単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ－１）または単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ－２）によって引き起こされる。

別の態様において、本発明は、それを必要とする対象において自己免疫溶血性貧血を治療する方法であって、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約９０％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、合成ペプチドは、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する。自己免疫溶血性貧血は、上昇した血清ビリルビン、過剰な尿ウロビリノーゲン、減少した血漿ハプトグロビン、上昇した血清乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、ヘモジデリン尿、メトヘムアルブミン血症、球状赤血球症、網状赤血球増加症、及び／または骨髄の赤血球過形成のうちの１つ以上によって特徴づけられてよい。

別の態様において、本発明は、それを必要とする対象において出生時仮死を治療する方法であって、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約９０％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、合成ペプチドは、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する。いくつかの実施形態において、出生時仮死の存在は、３以下のアプガースコアが５分以上続くことによって特徴づけられる。

別の態様において、本発明は、それを必要とする対象において急性腎障害を治療する方法であって、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約９０％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、合成ペプチドは、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する。

別の態様において、本発明は、配列番号：３～４７からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約９０％の配列同一性を含む合成ペプチドである。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、治療有効量の合成ペプチド及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含むことができる。

別の態様において、本発明は、配列番号：３～４７のアミノ酸配列及び修飾を含む合成ペプチドである。いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号：４～１８及び３０～４７のアミノ酸配列及び修飾を含む合成ペプチドである。いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号：３及び１９～２９のアミノ酸配列及び修飾を含む合成ペプチドである。いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号：２１のアミノ酸配列及びＰＥＧ化修飾を含む合成ペプチドである。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、治療有効量の合成ペプチド及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含むことができる。

別の態様において、本発明は、ペプチドが、Ｎ末端、Ｃ末端、またはＮ末端及びＣ末端の両方のＰＥＧ化によって修飾される、ＰＩＣ１ペプチドに関する。別の態様において、本発明は、サルコシン及び／またはアラニン置換によって修飾される、ＰＩＣ１ペプチドに関する。他の実施形態において、ペプチドは、ＰＥＧ化、ならびにサルコシン及び／またはアラニンの置換によって修飾される。いくつかの実施形態において、ペプチドは、単離及び／または精製される。

一態様において、本発明は、嚢胞性線維症を有する対象の治療のための少なくとも１種のペプチドを選択する方法であって、（ａ）嚢胞性線維症における活性に関して、配列番号：３～４７からなる群より選択されるペプチドを試験すること；及び（ｂ）配列番号：３～４７からなる群より、嚢胞性線維症における活性を有する少なくとも１種の合成ペプチドを選択することを含む、方法を提供する。

別の態様において、本発明は、溶血性反応を有する対象の治療のための少なくとも１種のペプチドを選択する方法であって、（ａ）溶血性反応における活性に関して、配列番号：３～４７からなる群より選択されるペプチドを試験すること；及び（ｂ）配列番号：３～４７からなる群より、溶血性反応における活性を有する少なくとも１種の合成ペプチドを選択することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、溶血性反応は、ＡＩＨＴＲ、輸血関連急性肺障害（ＴＲＡＬＩ）、及び血小板輸血不応からなる群より選択される。

別の態様において、本発明は、細菌感染症を有する対象の治療のための少なくとも１種のペプチドを選択する方法であって、（ａ）細菌感染症における活性に関して、配列番号：３～４７からなる群より選択されるペプチドを試験すること；及び（ｂ）配列番号：３～４７からなる群より、細菌感染症における活性を有する少なくとも１種の合成ペプチドを選択することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、細菌感染症は、黄色ブドウ球菌、肺炎桿菌、緑膿菌、淋菌、クラミジア・トラコマチス及びガードネレラ種からなる群より選択される細菌によって引き起こされる。いくつかの実施形態において、細菌感染症は、グラム陽性菌またはグラム陰性菌によって引き起こされる。

別の態様において、本発明は、ラクトバチルスの増殖を増強するための少なくとも１種のペプチドを選択する方法であって、（ａ）ラクトバチルス種の増殖を増強する活性に関して、配列番号：３～４７からなる群より選択されるペプチドを試験すること；及び（ｂ）配列番号：３～４７からなる群より、ラクトバチルス種の増殖を増強する活性を有する少なくとも１種の合成ペプチドを選択することを含む、方法を提供する。

別の態様において、本発明は、ウイルス感染症の治療及び／または予防のための少なくとも１種のペプチドを選択する方法であって、（ａ）ウイルス感染症を治療または予防する活性に関して、配列番号：３～４７からなる群より選択されるペプチドを試験すること；及び（ｂ）配列番号：３～４７からなる群より、ウイルス感染症を治療または予防する活性を有する少なくとも１種の合成ペプチドを選択することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、ウイルス感染症は、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２によって引き起こされる。

別の態様において、本発明は、自己免疫溶血性貧血の治療及び／または予防のための少なくとも１種のペプチドを選択する方法であって、（ａ）自己免疫溶血性貧血における活性に関して、配列番号：３～４７からなる群より選択されるペプチドを試験すること；及び（ｂ）配列番号：３～４７からなる群より、自己免疫溶血性貧血における活性を有する少なくとも１種の合成ペプチドを選択することを含む、方法を提供する。

別の態様において、本発明は、出生時仮死の治療のための少なくとも１種のペプチドを選択する方法であって、（ａ）出生時仮死における活性に関して、配列番号：３～４７からなる群より選択されるペプチドを試験すること；及び（ｂ）配列番号：３～４７からなる群より、出生時仮死における活性を有する少なくとも１種の合成ペプチドを選択することを含む、方法を提供する。

別の態様において、本発明は、低酸素虚血性脳障害の治療のための少なくとも１種のペプチドを選択する方法であって、（ａ）低酸素虚血性脳障害における活性に関して、配列番号：３～４７からなる群より選択されるペプチドを試験すること；及び（ｂ）配列番号：３～４７からなる群より、低酸素虚血性脳障害における活性を有する少なくとも１種の合成ペプチドを選択することを含む、方法を提供する。

別の態様において、本発明は、本明細書に記載の組成物を投与することによる、疾患の治療方法であって、上記疾患が、少なくとも部分的に補体に介在されており、限定されないが、溶血性輸血反応、寒冷凝集素疾患、免疫複合物疾患、地中海貧血、鎌状赤血球症、ＡＢＯ不適合、急性／超急性臓器移植拒絶、超急性期血液介在炎症反応（ＩＢＭＩＲ）、臓器移植温／冷虚血、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、関節リウマチ、虚血再灌流障害、心筋梗塞、卒中、低酸素虚血性脳障害、外傷性脳障害、冠状動脈バイパス手術、創傷治癒、がん、アルツハイマー病、パーキンソン病、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、ぜんそく、クローン病、敗血症症候群／ＡＲＤＳ／ＳＩＲＳ、糸球体腎炎、狼瘡腎炎、抗糸球体基底膜抗体病、抗好中球細胞質自己抗体誘発、膜性増殖性糸球体腎炎、密沈積症、膜性腎症、ＩｇＡ腎症またはＣ３糸球体症を含む、方法を提供する。

別の態様において、本発明は本明細書に記載の組成物を投与することによる、疾患の治療方法であって、上記疾患が、補体に介在されておらず、限定されないが、嚢胞性線維症及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を含む、方法を提供する。

本発明の別の実施形態は、補体介在組織損傷に関連する疾患の治療方法であって、疾患の治療において有効である少なくとも１種の他の活性成分を対象に投与することをさらに含み、少なくとも１種の他の活性成分としては、非ステロイド性消炎剤、コルチコステロイド、疾患修飾性抗リウマチ薬、Ｃ１－阻害剤及びエクリズマブが含まれる、治療方法である。

別途定義されない限り、本明細書中で使用された全ての技術的及び科学的用語は、当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本発明の実施または試験において、本明細書に記載のものと類似または同等の方法及び材料が使用可能であるが、適切な方法及び材料が以下に記載される。本明細書に引用された、全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参照文献は、全体として参照によって組み込まれる。加えて、材料、方法、及び実施例は単に例示を目的とするものであり、限定を意図するものではない。

[本発明1001]
それを必要とする対象において溶血性反応を治療及び／または予防する方法であって、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約90％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
[本発明1002]
前記合成ペプチドが、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記溶血性反応が、急性血管内溶血性輸血反応（ＡＩＨＴＲ）、輸血関連急性肺障害（ＴＲＡＬＩ）、及び血小板輸血不応からなる群より選択される、本発明1001の方法。
[本発明1004]
前記対象に輸血が実施される前、前記対象に輸血が実施された後、及び／または輸血の間に、前記組成物が投与される、本発明1001の方法。
[本発明1005]
それを必要とする対象において低酸素虚血性脳障害を治療する方法であって、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約90％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
[本発明1006]
前記合成ペプチドが、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する、本発明1005の方法。
[本発明1007]
それを必要とする対象において嚢胞性線維症を治療する方法であって、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約90％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
[本発明1008]
前記合成ペプチドが、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する、本発明1007の方法。
[本発明1009]
それを必要とする対象において細菌感染症を治療する方法であって、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約90％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
[本発明1010]
前記合成ペプチドが、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する、本発明1009の方法。
[本発明1011]
前記細菌感染症が、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、及びガードネレラ（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ）種からなる群より選択される細菌によって引き起こされる、本発明1009の方法。
[本発明1012]
前記細菌感染症が、グラム陽性菌またはグラム陰性菌によって引き起こされる、本発明1009の方法。
[本発明1013]
対象においてラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）の増殖を増強する方法であって、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約90％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、前記対象に投与することを含む、前記方法。
[本発明1014]
前記合成ペプチドが、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する、本発明1013の方法。
[本発明1015]
それを必要とする対象においてウイルス感染症を治療する方法であって、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約90％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
[本発明1016]
前記合成ペプチドが、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する、本発明1015の方法。
[本発明1017]
前記ウイルス感染症が、単純ヘルペスウイルス1（ＨＳＶ－1）または単純ヘルペスウイルス2（ＨＳＶ－2）によって引き起こされる、本発明1015の方法。
[本発明1018]
それを必要とする対象において自己免疫溶血性貧血を治療する方法であって、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約90％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
[本発明1019]
前記合成ペプチドが、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する、本発明1018の方法。
[本発明1020]
前記自己免疫溶血性貧血が、上昇した血清ビリルビン、過剰な尿ウロビリノーゲン、減少した血漿ハプトグロビン、上昇した血清乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、ヘモジデリン尿、メトヘムアルブミン血症、球状赤血球症、網状赤血球増加症、及び／または骨髄の赤血球過形成のうちの1つ以上によって特徴づけられる、本発明1018の方法。
[本発明1021]
それを必要とする対象において出生時仮死を治療する方法であって、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約90％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
[本発明1022]
前記合成ペプチドが、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する、本発明1021の方法。
[本発明1023]
出生時仮死の存在が、3以下のアプガースコアが5分以上続くことによって特徴づけられる、本発明1021の方法。
[本発明1024]
それを必要とする対象において急性腎障害を治療する方法であって、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約90％の配列同一性を含む合成ペプチドの治療有効量を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
[本発明1025]
前記合成ペプチドが、配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列及び修飾を有する、本発明1024の方法。
[本発明1026]
前記組成物が、少なくとも1種の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、本発明1001～1025のいずれかの方法。
[本発明1027]
配列番号：3～47からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約90％の配列同一性を含む、合成ペプチド。
[本発明1028]
配列番号：3～47のアミノ酸配列及び修飾を含む、合成ペプチド。
[本発明1029]
配列番号：21のアミノ酸配列及びＰＥＧ化修飾を含む、合成ペプチド。
[本発明1030]
治療有効量の本発明1027～1029のいずれかの合成ペプチド及び少なくとも1種の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、医薬組成物。
本発明の他の特徴及び利点は、詳細な説明、図面、及び特許請求の範囲から明白となるであろう。

Ｂ因子枯渇血清を使用する溶血アッセイにおける、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）、ＰＡ－Ｐ７Ｓａｒ（配列番号：１０）及びＰＡ－Ｃ９Ｓａｒ（配列番号：１２）の滴定を示す。ペプチドの濃度は、ｍＭで示される。 図２Ａ～Ｂは、Ｂ因子枯渇血清を使用する溶血アッセイにおいて、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）が、ＰＡ（配列番号：３）と同程度まで補体活性化を阻害することを示す。 ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の構造を示す。 図４Ａ～Ｅは、プレート希釈アッセイを示す。図４Ａは、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）または生理食塩水対照で処理された黄色ブドウ球菌のプレート希釈アッセイを示す。Ｘ軸は、ｍｇ／ｍｌでのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の阻害剤濃度を示す。図４Ｂは、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４またはバンコマイシンで処理された黄色ブドウ球菌のプレート希釈アッセイを示す。Ｘ軸は、ｍｇ／ｍｌでのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）及び５μｇ／ｍｌで開始するバンコマイシンの阻害剤濃度を示す。図４Ｃは、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）またはゲンタマイシンで処理された肺炎桿菌のプレート希釈アッセイを示す。Ｘ軸は、ｍｇ／ｍｌでのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の阻害剤濃度を示す。ゲンタマイシンは、４μｇ／ｍｌで開始する。図４Ｄは、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）またはゲンタマイシン対照で処理された緑膿菌のプレート希釈アッセイを示す。Ｘ軸は、ｍｇ／ｍｌでのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の阻害剤濃度を示す。ゲンタマイシンは、４μｇ／ｍｌで開始する。図４Ｅは、４種の異なるバージョンのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）またはゲンタマイシン対照で処理された緑膿菌のプレート希釈アッセイを示す。図凡例：ＰＩＣ１＝ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）；ＰＡ－Ｌ３Ｓａｒ（Ｈ２Ｎ－ＩＡ（Ｓａｒ）ＩＬＥＰＩＣＣＱＥＲＡＡ－ＯＨ）（配列番号：６）；ＰＡ－Ｉ４Ｓａｒ（Ｈ２Ｎ－ＩＡＬ（Ｓａｒ）ＬＥＰＩＣＣＱＥＲＡＡ－ＯＨ）（配列番号：７）；ＰＡ－Ｌ５Ｓａｒ（Ｈ２Ｎ－ＩＡＬＩ（Ｓａｒ）ＥＰＩＣＣＱＥＲＡＡ－ＯＨ）（配列番号：８）。 図４Ａの説明を参照のこと。 図４Ａの説明を参照のこと。 図４Ａの説明を参照のこと。 図４Ａの説明を参照のこと。 ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）、ＰＡ－Ｌ３Ｓａｒ（配列番号：６）、ＰＡ－Ｉ４Ｓａｒ（配列番号：７）、またはＰＡ－Ｌ５Ｓａｒ（配列番号：８）の存在下でのガードネレラ増殖の阻害を示す。ＰＩＣ１＝ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）；Ｓａｒｃ－１＝ＰＡ－Ｌ３Ｓａｒ（配列番号：６）；Ｓａｒｃ－２＝ＰＡ－Ｉ４Ｓａｒ（配列番号：７）；Ｓａｒｃ－３＝ＰＡ－Ｌ５Ｓａｒ（配列番号：８）。 ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の異なる濃度において、血清がガードネレラと一緒にインキュベーションされる時のＣ５ａ放出を示す。ＰＩＣ１＝ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）。 血液Ｂ型レシピエントにおいてＡＴＲを引き起こしたＲＢＣ輸血からの２種のＯ型血漿を示す。各血漿のＩｇＧ力価は非常に高いが、無差別的である。しかしながら、ＣＨ５０タイプの溶血アッセイにおいて、それらは劇的に異なる挙動を示す。一方は、非常に溶血性であるが、他方は、有意の溶血を引き起こさない。 血液Ｂ型レシピエントにおいてＡＴＲを引き起こしたＲＢＣ輸血からのＯ型血漿（＃４２６）を示す。Ｂ型赤血球を添加する前に、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）を、増加する濃度で血漿に添加した。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）により溶血の用量反応阻害が実証され、＞９５％までの阻害が実証された。 Ｃ５ａによって介在された好中球動員及び活性化による、細菌が開始する古典経路補体活性化を示す。 図１０Ａ～Ｄは、ＣＦ及び対照肺流体における補体アナフィラトキシンを示す。図１０Ａは、ＣＦ患者（ｎ＝１５）及び対照（ｎ＝３）の痰からの可溶性（ゾル）画分中のＣ５ａ濃度である。箱は四分位数を示し、ひげは第９０及び第１０の百分位数であり、そして破線は平均である。ＣＦゾルのＣ５ａレベルは、対照ゾルより５倍高い（Ｐ＝０．０４）。図１０Ｂは、２人の健康対照（Ａ及びＢ）ならびに２人のＣＦ対象（Ｘ及びＹ）の痰ゾルのＣ５ａウエスタンブロットである。図１０Ｃは、ＣＦ患者（ｎ＝１４）及び対照（ｎ＝４）の痰からのゾル画分中のＣ３ａ濃度である。箱は四分位数を示し、ひげは第９０及び第１０の百分位数であり、破線は平均である。Ｐ＝０．０３。図１０Ｄは、ＣＦ患者（ｎ＝１５）及び対照（ｎ＝５）の痰からのゾル画分中のＣ４ａ濃度である。箱は四分位数を示し、ひげは第９０及び第１０の百分位数であり、破線は平均である。Ｐ＝０．０５。 図１１Ａ～Ｂは、黄色ブドウ球菌の補体オプソニン化を示す。図１１Ａは、ＣＦ患者（ｎ＝５）及び対照（ｎ＝３）の痰からのゾル画分中でのインキュベーション後の黄色ブドウ球菌結合Ｃ３フラグメントである。箱は四分位数を示し、ひげは第９０の百分位数であり、破線は平均である。Ｐ＝０．４２。図１１Ｂは、ＣＦ患者（ｎ＝５）及び対照（ｎ＝３）の痰からのゾル画分中でのインキュベーション後の黄色ブドウ球菌結合Ｃ４フラグメントである。箱は四分位数を示し、ひげは第９０及び第１０の百分位数であり、破線は平均である。Ｐ＝０．１３。 図１２Ａ～Ｄは、ＣＦゾル中で細菌によって発生したＣ５ａを示す。図１２Ａは、生存または死滅緑膿菌または黄色ブドウ球菌とのインキュベーション前後のＣＦ患者（ｎ＝３）及び対照（ｎ＝３）の痰からのゾル画分中でのＣ５ａ濃度である。データは、平均±ＳＥである。Ｃ５ａは、緑膿菌（Ｐ＝０．０３）または黄色ブドウ球菌（Ｐ＝０．０３）の存在下、ＣＦゾル中で発生した。図１２Ｂは、生存または死滅緑膿菌とのインキュベーション前（当初）及び後のＣＦ患者（対象Ａ、Ｂ、及びＣ）の痰からのゾル画分中でのＣ５ａ濃度である。図１２Ｃは、生存または死滅黄色ブドウ球菌とのインキュベーション前（当初）及び後のＣＦ患者（対象Ａ、Ｂ及びＣ）の痰からのゾル画分中でのＣ５ａ濃度である。図１２Ｄは、緩衝液中で単独でインキュベーションされた（ＣＦゾルのみ）か、死滅緑膿菌とインキュベーションされた（ＣＦゾル＋緑膿菌）か、またはＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）及び死滅緑膿菌（ＣＦゾル＋ＰＡ－ｄＰＥＧ２４＋Ｐ．ａｅｒｕｇ）とインキュベーションされた、ＣＦゾル中でのＣ５ａ濃度である。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４、配列番号：２１は、緑膿菌とインキュベーションされたＣＦゾル中でのＣ５ａ発生を低減させる。 図１３Ａ～Ｃは、補体エフェクター及び臨床的介入に関する相関プロットを示す。図１３Ａは、ＣＦゾル中のＣ５ａ濃度が、年齢増加と正の相関を示すことを示す。ｒ＝０．５３、Ｐ＝０．０４。図１３Ｂは、ＣＦゾル中のＣ５ａ濃度が、小児のＢＭＩ百分位数と逆相関を示すことを示す。ｒ＝－０．７７、Ｐ＝０．０４。図１３Ｃは、ＣＦゾル中のＣ３ａ濃度が、ＦＥＶ１％と正の相関を示すことを示す。ｒ_ｓ＝０．６３、Ｐ＝０．０２。 図１４Ａ～Ｅは、ペプチド化合物がＣ１ｑに結合し、かつ阻害していることを示す。図１４Ａは、ＰＡ（配列番号：３）が、ＣＲＴまたはＢＳＡではなく、Ｃ１ｑに結合することを示す。 図１４Ａ～Ｅは、ペプチド化合物がＣ１ｑに結合し、かつ阻害していることを示す。図１４Ｂは、ＰＩＣ１（配列番号：２１）が、組換ＣＲＴにおけるＤｙＬｉｇｈｔ ６８０標識Ｃ１ｑの結合を阻害することを示す。 図１４Ａ～Ｅは、ペプチド化合物がＣ１ｑに結合し、かつ阻害していることを示す。図１４Ｃは、ＰＩＣ１（配列番号：２１）が、Ｒａｊｉ細胞へのＤｙＬｉｇｈｔ標識４８８Ｃ１ｑの結合を阻害することを示す。 図１４Ａ～Ｅは、ペプチド化合物がＣ１ｑに結合し、かつ阻害していることを示す。図１４Ｄは、ＰＩＣ１（配列番号：２１）の量増加が、Ｒａｊｉ細胞の結合からＤｙＬｉｇｈｔ ６８０標識Ｃ１ｑを阻害することを実証する、ＬＩＣＯＲ Ｏｄｙｓｓｅｙにおいて描写された代表的なＩｎ－Ｃｅｌｌウエスタンプレートアッセイを示す。 図１４Ａ～Ｅは、ペプチド化合物がＣ１ｑに結合し、かつ阻害していることを示す。図１４Ｅは、実験構成を示す。 ＢＳＡではなく、カルレティキュリン（ＣＲＴ）と結合する可溶性Ｃ１ｑを示す。 ＰＡ（配列番号：３）が、負の対照ペプチドＣＰ２と比較して、Ｃ１ｑのカルレティキュリン（ＣＲＴ）への結合を阻害することを示す。 図１７Ａ～Ｃは、２０倍でのＲａｊｉ細胞を示す。図１７Ｂは、１／５０秒曝露におけるＦＩＴＣ（Ｃ１ｑ）を示す。図１７Ｃは、１／５００秒曝露におけるＤＡＰＩを示す。図１７Ａはオーバーレイを示す。 図１８Ａ～Ｃは、２０倍での、０．５２３ｍＭのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）で処理されたＲａｊｉ細胞を示す。図１８Ｂは、１／５０秒曝露におけるＦＩＴＣ（Ｃ１ｑ）を示す。図１８Ｃは、１／５００秒曝露におけるＤＡＰＩを示す。図１８Ａはオーバーレイを示す。 図１９Ａ～Ｃは、２０倍での、１．０５ｍＭのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）で処理されたＲａｊｉ細胞を示す。図１９Ｂは、１／５０秒曝露におけるＦＩＴＣ（Ｃ１ｑ）を示す。図１９Ｃは、１／５００秒曝露におけるＤＡＰＩを示す。図１９Ａはオーバーレイを示す。 ２つの異なる用量のＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）で、または通常生理食塩溶液で処理されたラットにおける溶血アッセイにおける赤血球溶解を示す。 図２１Ａ～Ｂは、実験デザイン及び試験アームを示す。図２１Ａは、ＡＩＨＴＲモデルでのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）投与を示し、図２１Ｂは、ＡＩＨＴＲモデルでのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の有効性を示す。 図２２Ａ～Ｂは、高用量ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）（４０ｍｇ）対低用量ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）（２０ｍｇ）を比較する、ＡＩＨＴＲモデルにおけるＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）投与試験を示す。図２２Ａは、分光光度法によって測定された、ヒト赤血球（ＨｕＲＢＣ）の１５％輸血後、０秒（採血前）、３０秒、５分、２０分、６０分、及び１２０分の時点において採取されたラット血漿に存在する遊離ヘモグロビンを示す。媒体対照は、生理食塩水である。正の対照は、コブラ毒因子（ＣＶＦ）である。ｎ＝各郡の動物の数。エラーバーは、平均値の標準誤差を示す。図２２Ｂは、フローサイトメトリーによって測定された、輸血後、３０秒、５分及び２０分の時点における生存ＨｕＲＢＣ（ＦＩＴＣ結合型抗ヒトＣＤ２３５ａ（グリコホリンＡモノクローナル抗体）を使用して検出される）のパーセントを示す。エラーバーは、平均値の標準誤差を示す。ＣＶＦ：コブラ毒因子。生理食塩水：０．９％の通常生理食塩溶液。 図２３Ａ～Ｃは、ＡＩＨＴＲモデルにおける予防（輸血前）対治療（輸血後の救命治療）におけるＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の有効性を示す。図２３Ａは、分光光度法によって測定された、ＨｕＲＢＣの１５％輸血後、０秒（採血前）、３０秒、５分、２０分、６０分及び１２０分の時点において採取されたラット血漿に存在する遊離ヘモグロビンを示す。エラーバーは、平均値の標準誤差を示す。 図２３Ａ～Ｃは、ＡＩＨＴＲモデルにおける予防（輸血前）対治療（輸血後の救命治療）におけるＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の有効性を示す。図２３Ｂは、１２０分にわたる曲線下面積（放出された全ヘモグロビン）を示す。エラーバーは、平均値の標準誤差を示す。 図２３Ａ～Ｃは、ＡＩＨＴＲモデルにおける予防（輸血前）対治療（輸血後の救命治療）におけるＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の有効性を示す。図２３Ｃは、輸血前（採血前）と比較して、１２０分の時点において測定された非結合型ビリルビンを示す。エラーバーは、平均値の標準誤差を示す。 図２４Ａ～Ｄは、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）による、生体外でのラット血清による溶解からのヒトＲＢＣの保護を示す。図２４Ａは、ラット血清中で５分間インキュベーションし、次いで、抗グリコホリンＡ（ＡＰＣ）及び抗Ｃ３（ＦＩＴＣ）で標識されたＨｕＲＢＣのフローサイトメトリー分析を示す。標識されたオプソニン化ＲＢＣは、未標識ＲＢＣ中にスパイクした（代表的プロット）。図２４Ｂは、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４で処理されたラット血清中で５分間インキュベーションしたＨｕＲＢＣのフローサイトメトリー分析を示す（代表的プロット）。図２４Ｃは、５分後の、未処理の血清と比較して、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４で処理された血清中のＣ３沈着のないＨｕＲＢＣの数（Ｑ３）の相対的増加を示す。エラーバーは、２つの独立した実験の平均値の標準誤差を示す。図２４Ｄは、Ｃ３フラグメントと結合した血清インキュベーションＲＢＣのパーセント（Ｑ２／Ｑ２＋Ｑ３）が、５分後、未処理の血清と比較して、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４で処理された血清中で減少することを示す。エラーバーは、２つの独立した実験の平均値の標準誤差を示す。Ｑ２：Ｃ３及びグリコホリンＡで二重染色された細胞（グリコホリンＡ標識細胞上のＣ３沈着）。Ｑ３：グリコホリンＡ標識を有する細胞（変化のない細胞）。 図２４Ａの説明を参照のこと。 図２４Ａの説明を参照のこと。 図２４Ａの説明を参照のこと。 図２５Ａ～Ｆは、３０秒（図２５Ａ及び２５Ｄ）、５分（図２５Ｂ及び２５Ｅ）ならびに２０分（図２５Ｃ及び２５Ｆ）の時点におけるラット中に輸血されたヒトＲＢＣの、生理食塩水に対するＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）保護を示す。採血により回収され、抗グリコホリンＡ（ＡＰＣ）及び抗Ｃ３（ＦＩＴＣ）で標識されたＲＢＣのフローサイトメトリー分析。図２５Ａ～Ｃでは、動物には、生理食塩水対照を投与した。図２５Ｄ～Ｆでは、動物は、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）で予防治療された。Ｑ２：Ｃ３及びグリコホリンＡで二重染色された細胞。Ｑ３：グリコホリンＡ標識を有する細胞（変化のないＨｕＲＢＣ）。 図２６Ａ～Ｄは、ラットにおける輸血されたヒトＲＢＣ生存を示す。図２６Ａは、ＨｕＲＢＣによる輸血後３０秒の時点において測定された事象の数を示し、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）予防、生理食塩水対照、ＣＶＦ（コブラ毒因子）対照及びＰＡ－ｄＰＥＧ２４（救命）治療に関する全ての抗ｇｐＡ＋ＲＢＣ（Ｑ２＋Ｑ３）、抗ｇｐＡ＋抗Ｃ３－（Ｑ３）及び抗ｇｐＡ＋抗Ｃ３＋（Ｑ２）を示す。エラーバーは、平均値の標準誤差を示す。図２６Ｂは、全抗ｇｐＡ＋ＲＢＣ（Ｑ２／Ｑ２＋Ｑ３）と比較する、抗ｇｐＡ＋、抗Ｃ３＋ＲＢＣのパーセントを示す。エラーバーは、平均値の標準誤差を示す。図２６Ｃは、対照（生理食塩水及びＣＶＦ）と比較する、５分及び２０分の時点における血液に存在する全抗ｇｐＡ＋ＲＢＣ（Ｑ２＋Ｑ３）を示す。エラーバーは、平均値の標準誤差を示す。図２６Ｄは、最大２０分間血液に存在する全抗ｇｐＡ－抗Ｃ３＋ＲＢＣ（Ｑ１）を示す。凡例：ＰＩＣ１（配列番号：２１）予防は、星形で示され；ＰＩＣ１（配列番号：２１）治療（生理食塩水対照と比較する救命治療）は、ひし形で示され；生理食塩水対照は、四角形で示され；ＣＶＦ対照は、三角形で示される。エラーバーは、平均値の標準誤差を示す。 図２６Ａの説明を参照のこと。 図２６Ａの説明を参照のこと。 図２６Ａの説明を参照のこと。 図２７Ａ～Ｆは、輸血後、３０秒（図２７Ａ及び２７Ｄ）、５分（図２７Ｂ及び２７Ｅ）ならびに２０分（図２７Ｃ及び２７Ｆ）の時点における、ラット中に輸血されたヒトＲＢＣの、免疫グロブリン静注（ＩＶＩＧ）と比較するＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）保護を示す。採血により回収され、抗グリコホリンＡ（ＡＰＣ）及び抗Ｃ３（ＦＩＴＣ）で標識されたＲＢＣのフローサイトメトリー分析。図２７Ａ～Ｃは、動物がＩＶＩＧによって予防治療されたことを示す。図２７Ｄ～Ｆは、動物がＰＡ－ｄＰＥＧ２４によって予防治療されたことを示す。Ｑ２は、Ｃ３及びグリコホリンＡで二重染色された細胞を示す。Ｑ３は、グリコホリンＡ標識を有する細胞（変化のないＨｕＲＢＣ）を示す。 図２８Ａ～Ｃは、予防免疫グロブリン静注（ＩＶＩＧ）と比較する、予防ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の有効性を示す。図２８Ａは、分光光度法によって測定された、ＨｕＲＢＣの１５％輸血後、０秒（採血前）、３０秒、５分、２０分、６０分、１２０分、１８０分、２４０分、３００分及び３６０分の時点において採取されたラット血漿に存在する遊離ヘモグロビンを示す。エラーバーは、平均値の標準誤差を示す。 図２８Ａ～Ｃは、予防免疫グロブリン静注（ＩＶＩＧ）と比較する、予防ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の有効性を示す。図２８Ｂは、ＨｕＲＢＣによる輸血後３０秒の時点において測定された事象の数を示し、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４予防及びＩＶＩＧ予防に関する全ての抗ｇｐＡ＋ＲＢＣ（Ｑ２＋Ｑ３）、抗ｇｐＡ＋抗Ｃ３－（Ｑ３）及び抗ｇｐＡ＋抗Ｃ３＋（Ｑ２）を示す。エラーバーは、平均値の標準誤差を示す。 図２８Ａ～Ｃは、予防免疫グロブリン静注（ＩＶＩＧ）と比較する、予防ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の有効性を示す。図２８Ｃは、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４予防及びＩＶＩＧ予防に関して、３０秒の時点において血液中に存在する抗ｇｐＡ－抗Ｃ３＋ＲＢＣ（Ｑ１）を示す。エラーバーは、平均値の標準誤差を示す。 図２８Ｄは、輸血後５分及び２０分の時点における、ＩＶＩＧ（線なし）及びＰＩＣ１（斜線）予防に関する全抗ｇｐＡ１ ＲＢＣを示す。 図２９Ａ～Ｃは、急性腎障害において、予防免疫グロブリン静注（ＩＶＩＧ）と比較する、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）（ＰＩＣ１として標識）の有効性を示す。図２９Ａは、ホルマリン定着前のＩＶＩＧ予防及びＰＡ－ｄＰＥＧ２４予防に関して測定された、総腎臓重量を示す。エラーバーは、平均値の標準誤差を示す。ｎ＝６。図２９Ｂは、ホルマリン定着の前のＩＶＩＧ予防及びＰＡ－ｄＰＥＧ２４予防に関する、総腎臓像を示す（代表的な動物）。図２９Ｃは、生理食塩水（ｉ、ｉｉ）、ＩＶＩＧ予防（ｉｉｉ、ｉｖ）またはＰＩＣ１予防（ｖ、ｖｉ）を与えられたラットからの腎臓の代表的な組織学（ヘマトキシリン及びエオシン染色）を示す。ＰＩＣ１によって治療されたラットは、通常の腎臓構造を示すのに対して、生理食塩水及びＩＶＩＧによって治療されたラットは、急性尿細管壊死と一致する細胞構造の破損を示す。バーは、２０ｍｍを表す。組織は、室温で、４００３の倍率において顕微鏡（Ｂｍａｘ，Ｏｌｙｍｐｕｓ）を用いて観察された。画像は、デジタルカメラ（ＤＰ７１，Ｏｌｙｍｐｕｓ）を用いて得られた。 図２９Ａの説明を参照のこと。 図２９Ａの説明を参照のこと。 ＰＩＣ１（ＰＡ－ｄＰＥＧ２４）（配列番号：２１）、コブラ毒因子（ＣＶＦ）、または（３１～３２℃で６時間の）治療低体温法による治療後、１、２、４、８、１６、２４、４８時間の時点におけるラットの低酸素状態になった後の最大血清溶血パーセントを示す。 ＰＩＣ１ペプチド（ＰＡ－ｄＰＥＧ２４）、コブラ毒因子（ＣＶＦ）、または（３１～３２℃で６時間の）治療低体温法によって治療されたラットの低酸素状態になった後の脳切片の画像を示す。 ＨＩＥにおける合計頭蓋Ｃ１ｑレベルを示す。脳障害後、４、１２、及び２４時間において、未治療のＨＩＥ対照（正常体温－ひし形）と比較した場合、ＰＩＣ１（配列番号：２１）治療群（正常体温＋ＰＩＣ１（配列番号：２１）－三角形）において、有意に少ないＣ１ｑ沈着がある。ＰＩＣ１（配列番号：２１）治療動物は、治療低体温法（四角形）を受けた動物と比較して、類似レベルのＣ１ｑを有した。 ＰＩＣ１（配列番号：２１）治療によるＨＩＥ後の神経保護の証拠を示す。図３２ＢのパネルＡ～Ｄは、クレジルバイオレット染色を示す。クレジルバイオレットは、神経細胞におけるニッスル物質を染色する。ＨＩＥ群（パネルＢ）は、ＰＩＣ１（配列番号：２１）群（パネルＤ）と比較して、クレジルバイオレット染色の有意な減少を示しており、治療低体温法（パネルＣ）に類似のＰＩＣ１（配列番号：２１）の神経保存作用を示す。パネルＥ～Ｈは、ヘマトキシリン及びエオシン染色を示す。ヘマトキシリン及びエオシン染色は、ＰＩＣ１（配列番号：２１）（パネルＨ）で治療されたものと比較した場合、ＨＩＥ脳におけるより高度の神経破壊（壊死、凝縮及び核崩壊）（パネルＦ）を示した。パネルＩ～Ｌは、アクリジンオレンジ染色を示す。アクリジンオレンジは、脳の生存可能な部分を明るい緑色に染色する（パネルＫ及びＬ）。ＨＩＥは、脳におけるアクリジンオレンジ染色を有意に減少する（パネルＪ）。ＰＩＣ１（配列番号：２１）治療によって、アクリジンオレンジ染色が回復し、脳におけるより多くの生存細胞の存在を示す（パネルＬ）。 組織学的神経保護が、ＨＩＥ後、神経機能の改善にも変換されることを示す。ＰＩＣ１（配列番号：２１）を注射された動物は、正常温動物より良好に、かつ非介入動物または治療低体温法を受けた動物と類似に機能した（介入なし、左側の第１のバー；ＨＩＥ：正常体温、左から２番目のバー；ＨＩＥ＋治療低体温法：低体温、左から３番目のバー、ＨＩＥ＋ＰＩＣ１（配列番号：２１）：正常体温－ＰＩＣ１（配列番号：２１）、左から４番目のバー）。 ＰＩＣ１（配列番号：２１）対アシクロビルのＧＦＰコード化ＨＳＶ－１阻害を示す。ウイルスのない負の対照（標識される）において、柱状図は左にピークを示し、感染した細胞がないことを示す（ＧＦＰ－）。正の対照において、ピークは右にシフトし、感染した細胞を示す（ＧＦＰ＋）。第２列において、ＰＩＣ１（配列番号：２１）の濃度が増加すると、次第にピークは左にシフトし、ＰＩＣ１（配列番号：２１）がウイルス複製を阻害することを示す。それと対照的に、第３列は、ウイルス複製に対するアシクロビル（ＡＣＶ）の用量依存効果を示す。５ｍＭのＡＣＶによる治療によって、小さな右ピークが生じ、なお残留するウイルス複製があったことが示される。 図３３－１の説明を参照のこと。 ＰＩＣ１（配列番号：２１）対アシクロビルのＨＳＶ－２の阻害を示す。負の対照（標識される）において、柱状図は左にピークを示し、感染した細胞がないことを示す（ＧＦＰ－）。正の対照において、ピークは右にシフトし、感染した細胞を示す（ＧＦＰ＋）。第２列において、ＰＩＣ１（配列番号：２１）の濃度が増加すると、次第にピークは左にシフトし、ＰＩＣ１（配列番号：２１）がウイルス複製を阻害することを示す。それと対照的に、第３列は、ウイルス複製に対するアシクロビル（ＡＣＶ）の用量依存効果を示す。 図３４－１の説明を参照のこと。 図のｘ軸上でＡＦ１と記載されるＰＩＣ１（配列番号：２１）が、Ｌ．アシドフィルス（Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）及びＬ．ライヒマニ（Ｌ．ｌｅｉｃｈｍａｎｎｉｉ）の増殖を促進することを示す。 図３６Ａ～Ｃは、ＰＩＣ１（配列番号：７、８、１２及び２１）の抗微生物活性を示す。図３６Ａは、微量希釈ＭＩＣ試験において、ＰＩＣ１（配列番号：２１）が、黄色ブドウ球菌、緑膿菌及び肺炎桿菌の増殖を阻害することを示す。 図３６Ａ～Ｃは、ＰＩＣ１（配列番号：７、８、１２及び２１）の抗微生物活性を示す。図３６Ｂは、緑膿菌の微量希釈ＭＩＣ試験におけるペプチド変異体ＡＦ１～ＡＦ５（それぞれ、配列番号：２１、５、６、７及び８）を示す。 図３６Ａ～Ｃは、ＰＩＣ１（配列番号：７、８、１２及び２１）の抗微生物活性を示す。図３６Ｃは、ＰＩＣ１（配列番号：２１）が細菌の外面に結合していることを示す共焦点顕微鏡法を示す。 図３７Ａ～Ｄは、ＰＩＣ１（配列番号：２１）の存在下または不在下における淋菌増殖を示す。図３７Ａは、２０ｍｇ／ｍｌのＰＩＣ１（配列番号：２１）の存在下または不在下における淋菌増殖を示す。 図３７Ａ～Ｄは、ＰＩＣ１（配列番号：２１）の存在下または不在下における淋菌増殖を示す。図３７Ｂは、３０ｍｇ／ｍｌのＰＩＣ１（配列番号：２１）の存在下または不在下における淋菌増殖を示す。 図３７Ａ～Ｄは、ＰＩＣ１（配列番号：２１）の存在下または不在下における淋菌増殖を示す。図３７Ｃは、ＰＩＣ１（配列番号：２１）の漸増濃度における淋菌増殖を示す。 図３７Ａ～Ｄは、ＰＩＣ１（配列番号：２１）の存在下または不在下における淋菌増殖を示す。図３７Ｄは、ＰＩＣ１（配列番号：２１）と一緒に、及びなしでインキュベーションされた淋菌からのコロニー数を示す。 ＰＩＣ１（配列番号：２１）が、嚢胞性線維症（ＣＦ）患者から単離された痰試料（ゾル）中のＭＰＯ活性を阻害することを示す。ＣＦゾル試料は、２０ｍｇ／ｍｌのＰＩＣ１（配列番号：２１）の存在下または不在下で３０分間インキュベーションされ、続いて、室温において３０分間のＴＭＢの添加が行われた。次いで、ＭＰＯ活性は、４５０ｎｍで分光光度計においてＴＭＢ色変化の検出によって測定された。 ＰＩＣ１（配列番号：２１）が、嚢胞性線維症（ＣＦ）患者から単離された痰試料（ゾル）において用量依存的にＭＰＯ活性を阻害することを示す。ＣＦゾルは、増加量のＰＩＣ１（配列番号：２１）の存在下で室温でインキュベーションされた。次いで、ＭＰＯ活性は、４５０ｎｍで分光光度計においてＴＭＢ色変化の検出によって測定された。 ＰＩＣ１（配列番号：２１）が、低酸素虚血性脳障害（ＨＩＥ）のラット脳におけるＭＰＯ活性を阻害することを示す。ＨＩＥを患うラットの脳溶解産物からの浮遊物は、２０ｍｇ／ｍｌのＰＩＣ１（配列番号：２１）の存在下または不在下でインキュベーションされた。次いで、ＭＰＯ活性は、４５０ｎｍで分光光度計においてＴＭＢ色変化の検出によって測定された。 治療を受けていない（ＮＴ＝正常体温）、低体温法（ＨＴ）またはＰＩＣ１（配列番号：２１）腹腔内投与（ＮＰ＝正常体温＋ＰＩＣ１（配列番号：２１））を受けたＨＩＥを有する子ラットからの脳溶解産物を示す。次いで、溶解産物は、ＴＮＢによるＭＰＯ活性に関して試験された。４８時間にわたって、ＮＴ動物は、増加した再灌流障害及び梗塞サイズと一貫する、ＭＰＯ活性の増加を経験する。ＰＩＣ１（配列番号：２１）治療動物は、各時点において治療なし（ＮＴ）群と比較して、ＭＰＯ活性が減少する傾向があり、ＰＩＣ１（配列番号：２１）の腹腔内投与後のＨＩＥ脳でのＭＰＯ活性減少を暗示する。 ＰＩＣ１（配列番号：２１）が、精製ヒト好中球（ＰＭＮ）の溶解産物におけるＭＰＯ活性を用量依存的に阻害することを示す。ＰＭＮ溶解産物は、増加量のＰＩＣ１（配列番号：２１）の存在下でインキュベーションされた。次いで、ＭＰＯ活性は、４５０ｎｍで分光光度計においてＴＭＢ色変化の検出によって測定された。 ＰＩＣ１（配列番号：２１）の量増加による、ＭＰＯ活性の阻害の滴定を示す。ＰＩＣ１（配列番号：２１）は、ＭＰＯを直接阻害する。 ヘモグロビンを含有するＲＢＣ溶解産物の量増加が、クロモゲンテトラメチルベンズイジン（ＴＭＢ）基質の酸化の用量依存的増加を実証したことを示す。２０ｍｇ／ｍｌにおけるＰＩＣ１（配列番号：２１）の存在下、ＴＭＢの酸化は阻害された。 ＰＩＣ１（配列番号：２１）の量増加によって、ＲＢＣ溶解産物からのヘモグロビンによる酸化ＴＭＢシグナルの用量依存的減少がもたらされることを示す。 ＰＩＣ１（配列番号：２１）の量増加によって、ＲＢＣ溶解産物からのヘモグロビンの量増加によるテトラメチルベンジジンＴＭＢの酸化が用量依存的に阻害されることを示す。

詳細な説明
本発明は、Ｐｏｌａｒ Ａｓｓｏｒｔａｎｔ（ＰＡ）ペプチド（配列番号：３）からの１５アミノ酸の単離され精製されたペプチドの修飾に基づく合成ペプチド化合物、上記ペプチドの誘導体、及びその使用方法を提供する。ＰＡペプチドは、ＣＰ１（配列番号：１）と呼ばれるヒトアストロウイルスタンパク質から誘導された、スクランブル化、短縮化ペプチドである。いくつかの実施形態において、本発明は、ＣＰ１の単離され精製されたペプチドの修飾に基づき、そのペプチド誘導体は、配列番号：４～４７に示されるアミノ酸配列を有する。配列番号：４～４７は、例えば、Ｎ末端及びＣ末端において、ＰＥＧ化を含むサルコシン置換及び／または修飾を有する、ＰＡ（配列番号：３）の誘導体である。これらのペプチドは、補体阻害を含む補体活性化の調節；溶血性反応の治療及び／または予防；低酸素虚血性脳障害の治療；嚢胞性線維症の治療；抗微生物的使用；ならびに本明細書に開示された他の疾患及び状態の治療及び／または予防のために使用することができる。

いくつかの態様において、これらのペプチド化合物は、古典経路及びレクチン経路の調節不全活性化によって介在された疾患及び状態の治療に関して治療価値を有する。いくつかの態様において、本発明は、抗微生物活性を有し、嚢胞性線維症を治療するために使用可能であり、かつ／または種々の急性疾患を治療するために使用可能であるペプチドを選択するための方法を提供する。ＰＡペプチド（配列番号：３）は、水溶液中で低い溶解度を有する。配列番号：２１のペプチドならびに他のＰＥＧ化及びサルコシン置換物（例えば、配列番号：５～８、１０～１２、２１～２５、２７～２９、３０～４０、４３、４５及び４７）は、水溶液中での溶解度が増加しており、このため、治療化合物としてのそれらの有効性が増加し得る。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＣＰ１と呼ばれ、かつＣ１ｑ及びＭＢＬに結合することによって古典経路及びレクチン経路の活性化を調節することが可能な配列（配列番号：１）を有する、ヒトアストロウイルスコートタンパク質から誘導された３０アミノ酸の単離され精製されたペプチドの識別及び修飾に基づく。他の実施形態において、ペプチド化合物は、レクチン経路活性化ではなく、古典経路活性化を調節する。

ＣＰ１のアミノ酸構造の修飾によって、Ｃ１ｑ活性などの補体活性化を調節することが可能である追加的なペプチド化合物が発見された。

「ペプチド化合物（複数可）」という用語は、本明細書で使用される場合、天然由来であり得るアミノ酸配列、または、配列番号：３に基づく約１５アミノ酸のペプチド模倣体、ペプチド類似体及び／もしくは合成誘導体を指す。加えて、ペプチド化合物は、約１０～約１５アミノ酸残基、及び約５～約１０アミノ酸残基のペプチド化合物などの約１５未満のアミノ酸残基であり得る。例えば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、及び１５アミノ酸のペプチド残基は同様に、本発明に関連するペプチド化合物であり得る。ペプチド化合物は、１５超のアミノ酸、例えば、１６、１７、１８、１９、及び２０以上のアミノ酸であることも可能である。

開示されたペプチド化合物は、概して、約１５アミノ酸残基、または約１５未満のアミノ酸残基の、制限される（すなわち、例えば、βターンまたはβプリーツシートを開始するアミノ酸、またはジスルフィド結合Ｃｙｓ残基の存在によって環化されるアミノ酸の存在といった、いくつかの構造要素を有する）か、あるいは制限されていない（すなわち、直鎖）アミノ酸配列である。

ペプチド配列内のアミノ酸の置換は、そのアミノ酸が属するクラスの他の要素から選択されてよい。例えば、非極性（疎水性）アミノ酸としては、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン及びメチオニンが含まれる。芳香族環構造を含有するアミノ酸としては、フェニルアラニン、トリプトファン、及びチロシンが含まれる。極性中性アミノ酸としては、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、及びグルタミンが含まれる。正帯電（塩基性）アミノ酸としては、アルギニン及びリシンが含まれる。負帯電（酸性）アミノ酸としては、アスパラギン酸及びグルタミン酸が含まれる。例えば、配列中の１または複数のアミノ酸残基は、機能的に同等の役割を果たす別の類似の極性を有するアミノ酸によって置換可能であり、それによってサイレントな改変がもたらされる。

一般に、保存的な変更によってもたらされる、得られるタンパク質の構造及び機能の変化は小さい。保存的ではない変更は、得られるタンパク質の構造、活性、または機能を変更する可能性がいっそう高い。例えば、本開示のペプチドは、次の保存的アミノ酸置換の１つ以上を含む：アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシンなどの脂肪族アミノ酸と、別の脂肪族アミノ酸との置換；セリンと、トレオニンとの置換；トレオニンと、セリンとの置換；アスパラギン酸とグルタミン酸などの酸性残基と、別の酸性残基との置換；アスパラギン及びグルタミンなどのアミド基を有する残基と、アミド基を有する別の残基との置換；リシン及びアルギニンなどの塩基性残基と、別の塩基性残基との交換；ならびにフェニルアラニン及びチロシンなどの芳香族残基と、別の芳香族残基との置換。

特に好ましいアミノ酸置換としては、次のものが含まれる：
ａ）負電荷が減少し得るような、Ｇｌｕに対するＡｌａ、またはその逆；
ｂ）正電荷が維持されることが可能であるような、Ａｒｇに対するＬｙｓ、またはその逆；
ｃ）正電荷が減少し得るような、Ａｒｇに対するＡｌａ、またはその逆；
ｄ）負電荷が維持されることが可能であるような、Ａｓｐに対するＧｌｕ、またはその逆；
ｅ）遊離－ＯＨが維持されることが可能であるような、Ｔｈｒに対するＳｅｒ、またはその逆；
ｆ）遊離ＮＨ２が維持されることが可能であるような、Ａｓｎに対するＧｌｎ、またはその逆；
ｇ）ほぼ同等の疎水性アミノ酸としての、ＬｅｕもしくはＶａｌに対するＩｌｅ、またはその逆；
ｈ）ほぼ同等の芳香族アミノ酸としての、Ｔｙｒに対するＰｈｅ、またはその逆；ならびに
ｉ）ジスルフィド結合が影響を受けるような、Ｃｙｓに対するＡｌａ、またはその逆。

ペプチド配列内のアミノ酸に対する置換は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、ピロリシン、セレノシステイン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、Ｎ－ホルミル－Ｌ－メチオニン、サルコシンまたは他のＮ－メチル化アミノ酸を含むがこれらに限定されない任意のアミノ酸から選択され得る。いくつかの実施形態において、サルコシンは、ペプチド配列内のアミノ酸を置換する。

一実施形態において、本発明は、ヒトアストロウイルスコートタンパク質から誘導される合成ペプチドである、配列番号：３～４７のアミノ酸配列及び修飾を含むペプチドを開示する。いくつかの実施形態において、本発明は、ヒトアストロウイルスコートタンパク質から誘導される合成ペプチドである、配列番号：３及び１９～２９のアミノ酸配列及び修飾を含むペプチドを開示する。他の実施形態において、本発明は、ヒトアストロウイルスコートタンパク質から誘導される合成ペプチドである、配列番号：４～１８及び３０～４７のアミノ酸配列及び修飾を含むペプチドを開示する。

別の実施形態において、本発明は、配列番号：３のアミノ酸配列を含み、１または複数のアミノ酸置換、修飾、挿入、または欠失を有する合成ペプチドであって、本明細書に記載の他の治療活性のうち補体活性化を調節しかつ／または抗微生物活性を有する合成ペプチドを開示する。

別の実施形態において、本発明は、配列番号：３のアミノ酸配列を含み、１または複数のサルコシン置換を有する合成ペプチドであって、本明細書に記載の他の治療活性のうち補体活性化を調節しかつ／または抗微生物活性を有する合成ペプチドを開示する。

別の実施形態において、本発明は、配列番号：３のアミノ酸配列を含み、１または複数のアラニン置換を有する合成ペプチドであって、本明細書に記載の他の治療活性のうち補体活性化を調節しかつ／または抗微生物活性を有する合成ペプチドを開示する。

別の実施形態において、本発明は、配列番号：３のＰＥＧ化アミノ酸配列を含む合成ペプチドであって、本明細書に記載の他の治療活性のうち補体活性化を調節しかつ／または抗微生物活性を有する合成ペプチドを開示する。

ペプチド化合物は、配列番号：３に基づき、内部ペプチド欠失及び置換、ならびにＮ末端及びＣ末端における欠失及び置換を有し得る。いくつかの実施形態において、ペプチドは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上のアミノ酸置換、修飾、挿入、または欠失を有する。

いくつかの実施形態において、ペプチド配列は、配列番号：３に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％の配列同一性を有する。

いくつかの実施形態において、本発明は、中毒または薬剤治療による虚血、炎症及び／または中毒作用によって誘発された臓器機能不全を治療または予防する効果を有する治療活性ペプチドに関する。他の実施形態において、本発明は、抗微生物効果を有する治療活性ペプチドにも関する。他の実施形態において、本発明は、嚢胞性線維症の治療効果を有する治療活性ペプチドに関する。他の実施形態において、本発明は、急性血管内溶血性輸血反応（ＡＩＨＴＲ）の治療効果または予防効果を有する治療活性ペプチドに関する。他の実施形態において、本発明は、出生時仮死の治療効果を有する治療活性ペプチドに関する。本発明は、急性補体介在疾患の治療効果を有する治療活性ペプチドにも関する。

本明細書で使用される場合、ペプチド配列は、疾患状態、生理学的状態、症状、または病原学的徴候の治療、寛解、または減弱、あるいはその評価または診断のために使用可能である場合、「治療活性である」。ペプチド配列は、疾患状態、生理学的状態、症状または病原学的徴候を予防するために使用可能である場合、「予防活性である」。

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、診断、予後診断、または治療が所望される任意の対象を意味する。例えば、対象は、哺乳類、例えば、ヒトあるいは（類人猿、サル、オランウータンまたはチンパンジーなどの）ヒト以外の霊長類、イヌ、ネコ、テンジクネズミ、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシまたは雌ウシであることが可能である。

本明細書で使用される場合、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、障害（例えば、本明細書に記載の障害）またはその症状を改善するため、あるいは障害（例えば、本明細書に記載の障害）またはその症状を予防するかまたは進行を遅らせるために有効な量、様式（例えば、投与スケジュール）、及び／またはモード（例えば、投与経路）で治療薬を投与することを意味する。これは、例えば、統計学的に有意な度合まで、または当業者に検出可能である度合までの障害またはその症状に関連するパラメーターの改善によって証拠づけることができる。有効な量、様式、またはモードは、対象に応じて変更可能であり、かつ対象に合わせて調整されてもよい。障害またはその症状を予防するか、またはその進行を遅らせることによって、治療は、罹患したか、または診断を受けた対象における障害またはその症状から生じる悪化を予防することができるか、あるいは遅らせることができる。

アストロウイルスコートタンパク質ペプチド及び誘導体
ＣＰ１は、ヒトアストロウイルスコートタンパク質から誘導されたペプチドであり、配列番号：１のアミノ酸配列を含むペプチドである。

ＣＰ１を親ペプチドとして使用して、Δ８～２２ペプチド（配列番号：２）に関して、残基８～残基２２の内部欠失を行った（内部欠失は、表１中破線で示される）。このペプチドは、試験された全ての機能的アッセイで活性であり、かつＣ１ｑを結合した。Δ８～２２ペプチドからの１５アミノ酸残基をスクランブル化し、Ｐｏｌａｒ Ａｓｓｏｒｔａｎｔペプチド（配列番号３）を作成した。スクランブル化Ｐｏｌａｒ Ａｓｓｏｒｔａｎｔペプチド（配列番号：３）は、ＰＡ、ＰＩＣ１、ＡｓｔｒｏＦｅｎｄ、またはＡＦとも呼ばれる。本明細書で記載される場合、「ＰＩＣ１」ペプチドという用語は、配列番号：３に示されるアミノ酸配列を有するペプチド、ならびに同アミノ酸配列を有するが、ＰＥＧ化などの修飾を有するペプチドを含む。ＰＡペプチドは、試験された全ての機能的アッセイで活性であった。ＣＰ１の一連の他のペプチド欠失、置換、及び修飾は、その内容が参照によって全体的に組み込まれる米国特許第８，９０６，８４５号明細書に記載されている。

以下の表１、２、３及び４に示されるように、ＰＡの一連のペプチド置換及び修飾を開示する。本出願は、表１～４に示される配列番号：１～４７のアミノ酸配列のいずれか１つを含む合成ペプチドを開示する。ヒト用の治療剤として、ペプチド化合物は、投与経路が、例えば、局所的、経腸、吸入、非経口（すなわち、筋肉内、皮下、静脈内）であってもよく、あるいは噴霧器、ならびに当業者に既知の他の任意の投与経路で投与されてもよい。

（表１）

サルコシン置換
サルコシン（「Ｓａｒ」）は、Ｎ－メチルグリシンとしても知られている天然アミノ酸である。サルコシンは、コリンからグリシンへの代謝における中間体である。サルコシン置換を使用して、順次、ＰＡの各残基を置換した（表２）。サルコシン置換は、補体阻害活性を維持し、かつ水溶性のペプチドを識別するために使用することができる。

特定の位置においてサルコシンで置換されたペプチド化合物が本明細書に開示される。表２は、配列番号：３の配列を含み、１または複数のアミノ酸がサルコシンで置換され、かつ補体活性化を調節しかつ／または抗微生物活性を有する合成ペプチドを開示する。１または複数の実施形態において、アミノ酸は、７位または９位においてサルコシンで置換される。１または複数の実施形態において、２以上のアミノ酸がサルコシンで置換される。

（表２）

ＰＥＧ化
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、エチレンオキシドのオリゴマーまたはポリマーである。本明細書中、ＰＥＧ化された（すなわち、結合された１または複数のＰＥＧ部分を有する）ペプチド化合物が開示される。ＰＥＧ化は、補体阻害活性を維持し、かつ水溶性である修飾ペプチドを識別するために使用することができる。１または複数のＰＥＧ部分が、ペプチドのＮ末端、ペプチドのＣ末端またはペプチドのＮ及びＣ末端の両方に結合可能である。ＰＥＧ化ペプチド化合物としては、Ｎ末端、Ｃ末端、またはＮ末端及びＣ末端の両方のＰＥＧ化によって修飾された、本明細書に記載の任意のペプチドが含まれる（表１～４）。

ＰＥＧ化は、ＰＡのＮ末端、Ｃ末端、またはＮ末端及びＣ末端の両方に１または複数のＰＥＧ部分を結合するために使用された（表３）。１または複数の実施形態において、２４のＰＥＧ部分が、ＰＡのＮ末端に結合される。１または複数の実施形態において、２４のＰＥＧ部分が、ＰＡのＣ末端に結合される。１または複数の実施形態において、２４のＰＥＧ部分が、ＰＡのＮ末端及びＰＡのＣ末端に結合される。１または複数の実施形態において、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４またはそれ以上のＰＥＧ部分が、ＰＡのＮ末端に結合される。１または複数の実施形態において、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４またはそれ以上のＰＥＧ部分が、ＰＡのＣ末端に結合される。１または複数の実施形態において、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４またはそれ以上のＰＥＧ部分が、ＰＡのＮ末端及びＰＡのＣ末端に結合される。

本明細書において、ＰＥＧ化ペプチド化合物が開示される。本出願は、配列番号：３の配列を含む合成ペプチド（ＰＩＣ１）であって、１または複数のＰＥＧ部分が結合し、かつ補体活性化を調節しかつ／または抗微生物活性を有する合成ペプチドを開示する。

（表３）

アミノ酸置換と組み合わせたペプチドのＰＥＧ化
本出願は、サルコシン置換及び／またはアラニン置換及び／またはＰＥＧ化の組み合わせによって修飾されたＰＡ／ＰＩＣ１を開示する。ＰＡの一連のペプチド置換及び修飾は、以下の表４に示されるように開示される。修飾ペプチド及び置換ペプチドは、補体阻害活性を維持し、かつ水溶性であるペプチドを識別するために使用することができる。本出願は、配列番号：３の配列を含む合成ペプチドであって、１または複数のアミノ酸がサルコシンまたはアラニンで置換され、かつ補体活性化を調節しかつ／または抗微生物活性を有する合成ペプチドを開示する。本出願は、配列番号：３の配列を含む合成ペプチドであって、１または複数のアミノ酸がサルコシンまたはアラニンで置換され、かつ１または複数のＰＥＧ部分が、ペプチドのＮ末端、ペプチドのＣ末端、またはペプチドのＮ及びＣ末端の両方に結合し、補体活性化を調節しかつ／または抗微生物活性を有する合成ペプチドも開示する。

１または以上の実施形態において、２以上のアミノ酸がサルコシンで置換される。１または以上の実施形態において、２以上のアミノ酸がアラニンで置換される。１または以上の実施形態において、１または複数のアミノ酸がサルコシンで置換され、かつ１または複数のアミノ酸がアラニンによって置換される。置換ペプチドは、上記のとおり、ＰＥＧ化によってさらに修飾可能である。

（表４）

ＰＩＣ１ペプチドの抗微生物活性
多くの微生物が、現在処方される抗生物質に対して耐性を有するようになったため、現在、新規抗生物質が臨床的に必要とされている。さらに、多くの抗生物質は、細菌が、空間及びエネルギーについて何年もの間競合してきた他の微生物から誘導され、これによって迅速かつ予測可能な耐性の出現がもたらされた。

ＣＰ１ペプチドは、最初、ヒト好中球防御ペプチド１（ＨＮＰ－１）に対するその弱い相同性によって識別されていた。補体活性化の阻害に加えて、ＨＮＰ－１は、細菌増殖を阻害する能力を有する。本明細書に記載される、配列番号：３～４７を含むＰＩＣ１ペプチドは、ＨＮＰ－１とはアミノ酸配列順序が非常に異なり、かつ自然界では、周知の同族体を有さない。驚くべきことに、いくつかの態様において、ＰＩＣ１ペプチドは、抗細菌活性を有する。

いくつかの態様において、開示されたペプチド化合物は、直接的な抗微生物効果を有し、したがって、細菌疾患の増大を阻害するのに理想的である。開示されたペプチド化合物は、細菌によって介在された疾患を予防及び治療するために使用することができる。いくつかの実施形態において、開示されたペプチド化合物は、グラム陽性細菌感染症及びグラム陰性細菌感染症を予防及び治療するために使用することができる。いくつかの実施形態において、開示されたペプチド化合物は、例えば、緑膿菌、ＭＲＳＡ、及びカルバペネム耐性腸内細菌（ＣＲＥ）（例えば、耐性肺炎桿菌）を予防及び治療するために使用することができる。開示されたペプチド化合物は、細菌性膣疾患及び膣炎を予防及び治療するために使用することができる。１または複数の実施形態において、開示されたペプチド化合物は、細菌性膣疾患の原因生物体を死滅させ、また、バリア防御を崩壊させてＨＩＶ感染のリスクを増加させる炎症を防ぐ。ＰＩＣ１ペプチドは、周知のタンパク質またはペプチドとの相同性を有さないため、これは耐性の出現の可能性を減少させる可能性を有する。

開示されたペプチド化合物は、ラクトバチルスの増殖を増強することも可能である。本発明のいくつかの実施形態において、Ｌ．アシドフィルス及びＬ．ライヒマニは、開示されたペプチド化合物によって増強される。特定の態様において、本発明は、配列番号：３～４７からなる群より選択される少なくとも１種の合成ペプチドの治療有効量を投与することによる、ラクトバチルスの増殖を増強する方法を提供する。

細菌性膣疾患及び膣炎は、現在、全身性抗生物質によって治療される。開示されたペプチド化合物は、局所（ｌｏｃａｌ）投与（例えば、局所（ｔｏｐｉｃａｌ）投与）によって、または全身投与（例えば、静脈内投与）によって、細菌性膣疾患及び膣炎を予防及び治療するために使用することができる。

特定の態様において、本発明は、配列番号：３～４７から選択されるアミノ酸配列及び修飾を含む合成ペプチドの治療有効量を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、細菌感染症の治療方法を提供する。１または複数の実施形態において、細菌は、黄色ブドウ球菌、肺炎桿菌、緑膿菌、淋菌、クラミジア・トラコマチスまたはガードネレラ種である。１または複数の実施形態において、対象は嚢胞性線維症を有し、かつペプチド化合物は嚢胞性線維症を治療する。１または複数の実施形態において、対象は淋病またはクラミジアを有し、かつペプチド化合物は淋病またはクラミジアを治療する。１または複数の実施形態において、対象は肺炎を有し、かつペプチド化合物は肺炎を治療する。

特定の態様において、本発明は、配列番号：３～４７から選択されるアミノ酸配列及び修飾を含む合成ペプチドの治療有効量を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、細菌性膣炎の治療方法を提供する。

補体系及びその調節不全と関連する疾患
補体は、細菌及びいくつかのエンベロープ型ウイルスなどの微生物に対して重要な宿主防御であるが、その抑制されない活性化は、破壊的な宿主細胞損傷を引き起こす可能性がある。補体によって介在される宿主組織損傷は、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、自己免疫溶血性貧血、膜性増殖性糸球体腎炎、及び血清病などの自己免疫病態を含む多種多様な疾患に関連している。これは、また、次の疾患：成人の呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）、虚血再灌流障害（卒中及び心筋梗塞を含む）、同種及び異種移植合併症（超急性拒絶反応及び移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を含む）、アルツハイマー病、火傷、血液透析損傷、心肺バイパス損傷及び発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）の発現に寄与するものとして識別されている。

遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）は、機能性Ｃ１阻害剤のレベル減少または不在によって引き起こされる、まれな遺伝的障害であり；ＨＡＥの症状としては急性水腫が含まれる。Ｃ１阻害剤は、本質的にＣ１活性化を阻害し、そして急性水腫の治療は、Ｃ１阻害剤の実質的な注入または血漿輸血を必要とする。アストロウイルスＣＰは、Ｃ１活性化を機能的に阻害するため、開示されたペプチド化合物をＨＡＥを治療するために使用することは治療必要性を満たす。Ｃ１阻害剤は、複数の対象由来のヒト血清から精製される必要があり、したがって、ヒトの血液由来病原体によって汚染される可能性がある。開示されたペプチド化合物の治療投与は、Ｃ１阻害剤との補助療法において、または独立型の治療として、Ｃ１を調節する。

開示されたペプチド化合物は、副経路活性に影響を与えることなく、Ｃ１ｑ及びＭＢＬの活性化を選択的に調節することが可能であり、したがって、古典経路及びレクチン経路の調節不全活性化によって介在された疾患を予防及び治療するために理想的である。これらの経路の両方とも、多くの動物モデルにおいて、虚血再灌流誘発障害に関連していたため、古典経路及びレクチン経路の特異的遮断が特に必要とされている［Ｃａｓｔｅｌｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ａｎｄ ｌｅｃｔｉｎ ｐａｔｈｗａｙｓ ｏｆ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｆｒｏｍ ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｒｅｎａｌ ｄａｍａｇｅ．”Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．２０１０；１７６（４）：１６４８－５９；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｅａｒｌｙ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｏｃａｌ ｔｉｓｓｕｅ ｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｌｅｘ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ．”Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０ Ｆｅｂ；４７（５）：９７２－８１；Ｔｊｅｒｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ａｃｕｔｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｉｓｌｅｔｓ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍａｙ ｃａｕｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｌｏｓｓ ｉｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｓｌｅｔ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．”Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．２００８；Ａｐｒ ２７；８５（８）：１１９３－９；Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．“Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ ＩｇＭ ｉｎ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ．”Ｊ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ．２００６ Ｊｕｌ；４１（１）：６２－７）。副経路は、侵入病原体に対する免疫学的監視のために不可欠であり、かつ副経路欠損を有するヒトは、重症の細菌感染症を患う。Ｃ１ｑ及びＭＢＬに結合して不活性化することによって、ペプチド化合物は、副経路を変化させずに、古典経路及びレクチン経路活性化を効率的に調節することができる。

「調節する」という用語は、本明細書で使用される場合、ｉ）個々に、または複合体において、酵素、タンパク質、ペプチド、因子、副産物、またはその誘導体の生物学的機能を制御すること、減少させること、阻害すること、または調節すること；ｉｉ）生体内で、または生体外で生物学的タンパク質、ペプチド、またはその誘導体の量を減少させること；あるいはｉｉｉ）関連する一連の生物学的または化学的反応を含むことが知られている、事象の生物学的連鎖、カスケード、または経路を中断させることを意味する。したがって、「調節する」という用語は、例えば、対照試料と比較して補体カスケードの単一成分の量を減少させること、成分または成分の複合体の形成の速度または総量を減少させること、あるいは、細胞溶解、転換酵素の形成、補体によって誘導された膜攻撃複合体の形成、炎症または炎症性疾患といった結果がもたらされる複雑なプロセスまたは一連の生物学的反応の全体的な活性を減少させることを説明するために使用されてよい。生体外アッセイにおいて、「調節する」という用語は、いくらかの生物学的または化学的事象の測定可能な変化または減少を意味し得るが、当業者は、測定可能な変化または減少が全体として「調節性」であることを必要としないことを理解するであろう。

１または複数の態様において、開示されたペプチド化合物は、炎症性疾患を治療するために使用可能である。１または複数の実施形態において、開示されたペプチド化合物は、自己免疫疾患を治療するために使用可能である。１または複数の実施形態において、開示されたペプチド化合物は、溶血性輸血反応、寒冷凝集素疾患、免疫複合物疾患（例えば、血清病）、地中海貧血、鎌状赤血球症、ＡＢＯ不適合（例えば、新生児黄疸）、急性／超急性臓器移植拒絶、臓器移植温／冷虚血、超急性期血液介在炎症反応（ＩＢＭＩＲ）、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、関節リウマチ、虚血再灌流障害、心筋梗塞、卒中、低酸素虚血性脳障害（例えば、出生時仮死脳障害）、外傷性脳障害、冠状動脈バイパス手術、創傷治癒、がん、アルツハイマー病、パーキンソン病、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、ぜんそく、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、クローン病、敗血症症候群／ＡＲＤＳ／ＳＩＲＳ、糸球体腎炎（例えば、狼瘡腎炎、抗糸球体基底膜抗体病、抗好中球細胞質自己抗体誘発、膜性増殖性糸球体腎炎、（例えば、密沈積症）、膜性腎症）、ＩｇＡ腎症またはＣ３糸球体症を治療するために使用可能である。

補体介在血管内溶血性輸血反応（ＡＩＨＴＲ）
急性血管内溶血性輸血反応（「ＡＴＲ」、「ＡＨＴＲ」または「ＡＩＨＴＲ」）は、溶血と関連する輸血反応の一種である。ＡＩＨＴＲは、ドナー赤血球の補体介在溶解及び迅速な破壊をもたらす可能性がある。ＡＩＨＴＲは、軽度のかつ一時的な徴候及び症状から、ショック、汎発性血管内凝固、腎不全及び死といった重度の症例までの広範囲の臨床症状を有する。

米国赤十字によると、毎年３千万の血液成分が米国（ＵＳ）内で輸血されていると推定される［Ｂａｒｂｅｅ Ｉ．Ｗｈｉｔａｋｅｒ ＰＳＨ，ＰｈＤ，Ｔｈｅ ２０１１ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｕｒｖｅｙ Ｒｅｐｏｒｔ；２０１１］。米国の約７０，０００人の鎌状赤血球症患者及び１６０万人のがんと診断された個人は、疾患管理の一環として、定期的に、輸血を必要とする。輸血は生命を救うが、急性血管内溶血性輸血反応（ＡＩＨＴＲ）などのいくつかの潜在的に生命を脅かす様々な反応のリスクを伴う（Ｍｕｒｐｈｙ ＭＦ，Ｗａｔｅｒｓ ＪＨ，Ｗｏｏｄ ＥＭ，Ｙａｚｅｒ ＭＨ．“Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｎｇ ｂｌｏｏｄ ｓａｆｅｌｙ ａｎｄ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅｌｙ．”ＢＭＪ．２０１３；３４７：ｆ４３０３］。ＡＩＨＴＲは、全輸血の５分の１で生じると推定される（Ｒｅｆａａｉ ＭＡ，Ｂｌｕｍｂｅｒｇ Ｎ．“Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｄｉｌｅｍｍａ－ｗｅｉｇｈｉｎｇ ｔｈｅ ｋｎｏｗｎ ａｎｄ ｎｅｗｌｙ ｐｒｏｐｏｓｅｄ ｒｉｓｋｓ ｏｆ ｂｌｏｏｄ ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｓ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｕｎｃｅｒｔａｉｎ ｂｅｎｅｆｉｔｓ．”Ｂｅｓｔ ｐｒａｃｔｉｃｅ ＆ ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎａｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ．２０１３；２７（１）：１７－３５）。頻繁に輸血を受けている個人は、経時的に、赤血球（ＲＢＣ）抗原に対して同種抗体及び自己抗体を発現し、クロスマッチがますます困難となり、したがって、ＡＩＨＴＲのリスクが増加することになる（Ａｙｇｕｎ Ｂ，Ｐａｄｍａｎａｂｈａｎ Ｓ，Ｐａｌｅｙ Ｃ，Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋａｒａｎ Ｖ．“Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ＲＢＣ ａｌｌｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｓｉｃｋｌｅ ｃｅｌｌ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｈｏ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｓ．”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．２００２；４２（１）：３７－４３］。現在の輸血安全対策には、『タイピング』、『抗体スクリーニング』、ならびに『クロスマッチング』が含まれ、これらの介入によって、輸血は以前よりも安全になったが、なお輸血反応は生じる（Ｏｓｔｅｒｍａｎ ＪＬ，Ａｒｏｒａ Ｓ．“Ｂｌｏｏｄ ｐｒｏｄｕｃｔ ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｓ ａｎｄ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ．”Ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｃｌｉｎｉｃｓ ｏｆ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ．２０１４；３２（３）：７２７－７３８］。ＡＩＨＴＲは、宿主の抗体が輸血された赤血球に結合して、古典補体経路活性化を開始し、それによって、炎症介在物質Ｃ３ａ及びＣ５ａの産生、ならびにＣ３ｂオプソニン化及び膜侵襲複合体（ＭＡＣ）による輸血細胞の溶血反応がもたらされる時に生じる（Ｓｔｏｗｅｌｌ ＳＲ，Ｗｉｎｋｌｅｒ ＡＭ，Ｍａｉｅｒ ＣＬ，ｅｔ ａｌ．“Ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｄｕｒｉｎｇ ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ．”Ｃｌｉｎｉｃａｌ ＆ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１２；２０１２：３０７０９３］。ＡＩＨＴＲにおける補体の役割は十分に認識されているが、今日までに報告された、補体アナフィラトキシンＣ３ａ及びＣ５ａの産生阻害によるＡＩＨＴＲの臨床的介入を説明するケースは、わずか１つである［Ｗｅｉｎｓｔｏｃｋ Ｃ，Ｍｏｈｌｅ Ｒ，Ｄｏｒｎ Ｃ，ｅｔ ａｌ．“Ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ ｕｓｅ ｏｆ ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｎ ａｃｕｔｅ ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ＡＢＯ－ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．２０１５；５５（３）：６０５－６１０］。

補体の古典経路は、抗体による補体複合体Ｃ１の初期活性化後にカスケード的増幅の役割を果たす（Ｆｒａｎｋ ＭＭ ＡＪ ｅｄ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ．Ｉｎ：Ａｕｓｔｅｎ ＫＦ，Ａｔｋｉｎｓｏｎ ＪＰ，Ｃａｎｔｏｒ ＨＩ ｅｄ．Ｓａｍｔｅｒ’ｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ；２００１］。Ｃ１複合体は、パターン認識分子Ｃ１ｑ及びセリンプロテアーゼ四量体Ｃ１ｒ－Ｃ１ｓ－Ｃ１ｓ－Ｃ１ｒからなる。ＩｇＭまたはクラスター化ＩｇＧ抗体へのＣ１ｑの結合時、Ｃ１ｑが構造変化を経て、Ｃ１ｒ－Ｃ１ｓ－Ｃ１ｓ－Ｃ１ｒを活性化し、そして古典経路介在補体活性化を開始する。本明細書に記載の補体Ｃ１のペプチド阻害剤（ＰＩＣ１）は、補体の古典経路のペプチド阻害剤である（Ｍａｕｒｉｅｌｌｏ ＣＴ，Ｐａｌｌｅｒａ ＨＫ，Ｓｈａｒｐ ＪＡ，ｅｔ ａｌ．“Ａ ｎｏｖｅｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ａｎｄ ｌｅｃｔｉｎ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＡＢＯ ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ．”Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３；５３（１－２）：１３２－１３９；Ｓｈａｒｐ ＪＡ，Ｗｈｉｔｌｅｙ ＰＨ，Ｃｕｎｎｉｏｎ ＫＭ，Ｋｒｉｓｈｎａ ＮＫ．“Ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｃ１，ａ ｎｏｖｅｌ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｐａｔｈｗａｙ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ：ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．”ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌ．２０１４；５：４０６；Ｇｒｏｎｅｍｕｓ ＪＱ，Ｈａｉｒ ＰＳ，Ｃｒａｗｆｏｒｄ ＫＢ，Ｎｙａｌｗｉｄｈｅ ＪＯ，Ｃｕｎｎｉｏｎ ＫＭ，Ｋｒｉｓｈｎａ ＮＫ．“Ｐｏｔｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｐａｔｈｗａｙ ｏｆ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ Ｃ１ｑ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ａｓｔｒｏｖｉｒｕｓ ｃｏａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ．”Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０；４８（１－３）：３０５－３１３）。ＰＩＣ１は、Ｃ１ｑを結合し、かつＣ１ｒ－Ｃ１ｓ－Ｃ１ｓ－Ｃ１ｒ１２の活性化を予防することによって、抗体によって開始されたＣ１活性化を阻害する。ＰＩＣ１は、生体外で、ヒト赤血球の古典補体経路介在ＡＢＯ不適合性溶血を阻害することが示された（Ｍａｕｒｉｅｌｌｏ ＣＴ，Ｐａｌｌｅｒａ ＨＫ，Ｓｈａｒｐ ＪＡ，ｅｔ ａｌ．“Ａ ｎｏｖｅｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ａｎｄ ｌｅｃｔｉｎ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＡＢＯ ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ．”Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３；５３（１－２）：１３２－１３９；Ｓｈａｒｐ ＪＡ，Ｗｈｉｔｌｅｙ ＰＨ，Ｃｕｎｎｉｏｎ ＫＭ，Ｋｒｉｓｈｎａ ＮＫ．“Ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｃ１，ａ ｎｏｖｅｌ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｐａｔｈｗａｙ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ：ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．”ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌ２０１４；５：４０６；Ｓｈａｈ ＴＡ，Ｍａｕｒｉｅｌｌｏ ＣＴ，Ｈａｉｒ ＰＳ，ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｓ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｉｎ ａ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ ｈｅｍｏｌｙｓｉｓ．”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．２０１４）。本明細書に記載のＰＩＣ１の水性ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）結合型であるＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）をラットに経脈管的に投与すると、３０秒以内に、９０％を上回る動物の血清補体価の全身性阻害を達成することができる（Ｓｈａｒｐ ＪＡ，Ｗｈｉｔｌｅｙ ＰＨ，Ｃｕｎｎｉｏｎ ＫＭ，Ｋｒｉｓｈｎａ ＮＫ．“Ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｃ１，ａ ｎｏｖｅｌ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｐａｔｈｗａｙ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ：ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．”Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４；５：４０６］。補体活性化を阻害するＰＩＣ１の能力によって、これは、ＡＩＨＴＲに特徴的である迅速な補体介在溶血を遮断するために理想的な分子となる。

ヒトＲＢＣの異種輸血に基づくラットＡＩＨＴＲ疾患モデルが確立された（Ｓｈａｈ ＴＡ，Ｍａｕｒｉｅｌｌｏ ＣＴ，Ｈａｉｒ ＰＳ，ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｓ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｉｎ ａ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ ｈｅｍｏｌｙｓｉｓ．”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．２０１４］。ウィスターラットは、血清中に、ヒトＡＢ赤血球に結合する生得的な血球凝集素を有する（Ｓｈａｈ ｅｔ ａｌ；Ａｐｔｅｋｍａｎ ＰＭ，Ｂｏｇｄｅｎ ＡＥ．“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｎａｔｕｒａｌ ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｓ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｒａｔ ｓｅｒｕｍ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｈａｓｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．”Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１９５６；１６（３）：２１６－２２１）。ヒト赤血球の輸血時、それらは、抗体によって開始される古典補体経路活性化によって、迅速なＡＢＯ不適合様溶血を生じることになる（Ｙａｚｄａｎｂａｋｈｓｈ Ｋ，Ｋａｎｇ Ｓ，Ｔａｍａｓａｕｓｋａｓ Ｄ，Ｓｕｎｇ Ｄ，Ｓｃａｒａｄａｖｏｕ Ａ．“Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｆｏｒ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｒｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ：ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｕｓｅ ｉｎ ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ．”Ｂｌｏｏｄ．２００３；１０１（１２）：５０４６－５０５２］。

ＰＡ（配列番号：３）及びＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）を含むＰＩＣ１ペプチドは、生体外で、Ｏ血清によるＡＢヒト赤血球（ＲＢＣ）の補体介在溶解を遮断することができる。このアッセイは、ＡＢＯ不適合を模倣する。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４は、ＡＩＨＴＲのげっ歯類モデルにおいて有効性を有し、予防及び救命シナリオにおいてヒトＲＢＣ溶解の阻害を実証する。したがって、ＰＩＣ１ペプチドは、現在のところ療法が存在しないヒトにおける輸血反応の治療において使用可能である。

現在の血液銀行組織または輸血医学診療は、ドナーとレシピエントとの間の補体介在ＲＢＣ溶解に関するリスクを直接評価する方法を有さない。開示されたペプチド化合物は、診断ツールとして使用することができる。開示されたペプチド化合物は、ＡＩＨＴＲを予防するための予防治療として、またはＡＩＨＴＲが重要な臨床上の意義を有する間の救命治療として使用することも可能である。開示されたペプチド化合物は、ＡＩＨＴＲにおいて急性腎障害を引き起こす高濃度の遊離ヘモグロビンを予防することができる。ＡＴＲに対する療法は、現在、支持療法以外はない。

開示されたペプチド化合物は、ＲＢＣの補体介在溶解を検出するために使用可能であり、したがって、赤血球輸血がＡＩＨＴＲを引き起こし得るかどうかを判別するために理想的である。開示されたペプチド化合物は、ＡＩＨＴＲを予測するために使用することができる。

特定の態様において、本発明は、配列番号：３～４７から選択されるアミノ酸配列及び修飾を含む合成ペプチドの治療有効量を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、急性輸血反応の治療方法を提供する。１または複数の実施形態において、対象が輸血を受ける前に、医薬組成物は投与される。１または複数の実施形態において、対象が輸血を受けた後に、医薬組成物は投与される。１または複数の実施形態において、対象が輸血を受ける前及び輸血を受けた後に、医薬組成物は投与される。

嚢胞性線維症（ＣＦ）における補体エフェクター
嚢胞性線維症（ＣＦ）において、肺損傷は、閉塞、感染症、及び炎症のサイクルによって介在されると思われる。正常対照と比較して、ＣＦ患者の肺液中で補体エフェクターが上昇することが判定された。

米国において、３０，０００人の個人が嚢胞性線維症（ＣＦ）を患っており（Ｂｏｙｌｅ ＭＰ．“Ａｄｕｌｔ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ．”ＪＡＭＡ ２００７；２９８（１５）：１７８７－９３）、死亡原因の大半は呼吸不全である。肺実質の破壊の進行は、閉塞、細菌性病原体への感染、及び炎症のサイクルにより介在される（Ｒｏｗｅ ＳＭ，Ｍｉｌｌｅｒ Ｓ，Ｓｏｒｓｃｈｅｒ ＥＪ，“Ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ．”Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００５；３５２（１９）：１９９２－２００１）。サイクルが繰り返されると、肺の損傷が肺の瘢痕へと進行して、最終的に肺不全にまで進行する（Ｇｉｂｓｏｎ ＲＬ，Ｂｕｒｎｓ ＪＬ，Ｒａｍｓｅｙ ＢＷ．“Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ．”Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ ２００３；１６８（８）：９１８－５１］。

人体で最も破壊的な炎症カスケードは、多数の炎症性疾患プロセスにおいて宿主組織損傷の一因となる補体系である（Ｒｉｃｋｌｉｎ Ｄ，Ｌａｍｂｒｉｓ ＪＤ．“Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．”Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００７；２５（１１）：１２６５－７５）。最近の証拠によって、補体タンパク質がＣＦ患者及び健常者の肺液の主成分であり、Ｃ３及びＣ４が、４つの最も一般的なタンパク質の２つを構成することが示された（Ｇｈａｒｉｂ ＳＡ，Ｖａｉｓａｒ Ｔ，Ａｉｔｋｅｎ ＭＬ，ｅｔ ａｌ．“Ｍａｐｐｉｎｇ ｔｈｅ ｌｕｎｇ ｐｒｏｔｅｏｍｅ ｉｎ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ．”Ｊ Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｒｅｓ ２００９；８（６）：３０２０－８）。これは、補体が、ＣＦ肺炎症において、これまで推測されていたものよりもはるかに大きい役割を果たし得ることを示唆する。細菌に結合した抗体は、開始成分Ｃ１によって古典補体経路を活性化することができる（図９）。Ｃ４は、オプソニンＣ４ｂの形成及び下流のＣ３活性化をもたらす、古典（すなわち、抗体により開始される）経路に関するカスケード成分である（Ｌａｍｂｒｉｓ ＪＤ，Ｓａｈｕ Ａ，Ｗｅｔｓｅｌ ＲＡ．“Ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｃ３，Ｃ４，ａｎｄ Ｃ５．”Ｉｎ：Ｖｏｌａｎａｋｉｓ ＪＥ，Ｆｒａｎｋ ＭＭ，（ｅｄｓ）．Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ；１９９８，８３ －１１８）。Ｃ３は、活性化時に補体エフェクターＣ３ａを生成し、細胞をオプソニンフラグメントＣ３ｂ及びｉＣ３ｂと共有結合させる、中心的な補体成分である。次いで、Ｃ３ｂは、Ｃ５の活性化を開始し、極めて効力があるアナフィラトキシンＣ５ａを生成する。Ｃ５ａは、酸化性バースト及び脱顆粒をもたらす、好中球移動及び活性化のために最も強力な刺激である（Ｌａｍｂｒｉｓ ＪＤ，Ｓａｈｕ Ａ，Ｗｅｔｓｅｌ ＲＡ．“Ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｃ３，Ｃ４，ａｎｄ Ｃ５．”Ｉｎ：Ｖｏｌａｎａｋｉｓ ＪＥ，Ｆｒａｎｋ ＭＭ，（ｅｄｓ）．Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ；１９９８，８３ －１１８；Ｔｒａｌａｕ Ｔ，Ｍｅｙｅｒ－Ｈｏｆｆｅｒｔ Ｕ，Ｓｃｈｒｏｄｅｒ ＪＭ，ｅｔ ａｌ．“Ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｅｌａｓｔａｓｅ ａｎｄ ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｇ ａｒｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｃ５ａ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｅｎｚｙｍｅ ｒｅｌｅａｓｅ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ．”Ｅｘｐ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２００４；１３（５）：３１６－２５）。脱顆粒後の好中球死は、ＣＦ肺の気道の閉塞の一因となる粘着性ＤＮＡの主要源である（Ｄｗｙｅｒ Ｍ，Ｓｈａｎ Ｑ，Ｄ’Ｏｒｔｏｎａ Ｓ，ｅｔ ａｌ．“Ｃｙｓｔｉｃ Ｆｉｂｒｏｓｉｓ Ｓｐｕｔｕｍ ＤＮＡ Ｈａｓ ＮＥＴｏｓｉｓ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｒａｐ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｉｓ Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ－Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｆａｃｔｏｒ．”Ｊ Ｉｎｎａｔｅ Ｉｍｍｕｎ ２０１４；Ｈｏｄｓｏｎ ＭＥ．“Ａｅｒｏｓｏｌｉｚｅｄ ｄｏｒｎａｓｅ ａｌｆａ （ｒｈＤＮａｓｅ） ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ．”Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １９９５；１５１（３ Ｐｔ ２）：Ｓ７０－４］。好中性顆粒産物の中でも、好中球エラスターゼが放出され、これは、ＣＦにおける実質肺損傷に大きく寄与する（Ｇｉｆｆｏｒｄ ＡＭ，Ｃｈａｌｍｅｒｓ ＪＤ．“Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ ｉｎ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ．”Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ ２０１４；２１（１）：１６－２２；Ｌｅ Ｇａｒｓ Ｍ，Ｄｅｓｃａｍｐｓ Ｄ，Ｒｏｕｓｓｅｌ Ｄ，ｅｔ ａｌ．“Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｅｌａｓｔａｓｅ ｄｅｇｒａｄｅｓ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｖｉａ ｃａｌｐａｉｎｓ ａｎｄ ｄｉｓａｂｌｅｓ ｃｈａｎｎｅｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ．”Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ ２０１３；１８７（２）：１７０－９；Ｓａｇｅｌ ＳＤ，Ｗａｇｎｅｒ ＢＤ，Ａｎｔｈｏｎｙ ＭＭ，ｅｔ ａｌ．“Ｓｐｕｔｕｍ ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｕｎｇ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ．”Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ ２０１２；１８６（９）：８５７－６５］。したがって、補体活性化は、組織損傷に寄与する、ＣＦ肺における好中球動員及び活性化において重要な役割を果たし得る。ＣＦ肺疾患に寄与し得るＣ５ａの追加的特性は、ヒスタミン放出の刺激、血管浸透性の拡張、及び平滑筋収縮の誘因である（Ｌａｍｂｒｉｓ ＪＤ，Ｓａｈｕ Ａ，Ｗｅｔｓｅｌ ＲＡ．“Ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｃ３，Ｃ４，ａｎｄ Ｃ５．”Ｉｎ：Ｖｏｌａｎａｋｉｓ ＪＥ，Ｆｒａｎｋ ＭＭ，（ｅｄｓ）．Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ；１９９８，８３－１１］。Ｃ５ａの既知の炎症特性は、急性肺障害を含む炎症肺疾患におけるＣ５ａの役割についての増加する証拠と一致する（Ｓｃｈｍｕｄｄｅ Ｉ，Ｓｔｒｏｖｅｒ ＨＡ，Ｖｏｌｌｂｒａｎｄｔ Ｔ，ｅｔ ａｌ．“Ｃ５ａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｉｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｍａｌａｄａｐｔｉｖｅ Ｔｈ２ ａｎｄ Ｔｈ１７ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｌｌｅｒｇｉｃ ａｓｔｈｍａ．”Ｍｕｃｏｓａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１３；６（４）：８０７－２５；Ｂｏｓｍａｎｎ Ｍ，Ｗａｒｄ ＰＡ．“Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｃ３，Ｃ５ ａｎｄ ａｎａｐｈｙｌａｔｏｘｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ ａｎｄ ｉｎ ｓｅｐｓｉｓ．”Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ ２０１２；９４６：１４７－５９］。したがって、理論によって拘束されないが、複数の推論系統によって、補体介在炎症が、ＣＦにおける炎症肺損傷に大きく寄与し得ることが示される。

ＣＦ肺におけるＣ５ａの潜在的に重大な役割に関するいくつかの調査が実行された。１９８６年、Ｆｉｃｋらは、健康対照からの気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）と比較して、臨床的に安定した肺疾患を有する９人のＣＦ患者のＢＡＬにおける放射免疫測定によって測定された増加量のＣ５ａの存在を説明した（Ｆｉｃｋ ＲＢ，Ｊｒ．，Ｒｏｂｂｉｎｓ ＲＡ，Ｓｑｕｉｅｒ ＳＵ，ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｆｌｕｉｄｓ：ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃ５ａ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ．”Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ １９８６；２０（１２）：１２５８－６８）。ＣＦ ＢＡＬ液は、好中球に対して走化性であり、これは、Ｃ５ａ濃度と関連するように見えた。ＢＡＬ液は、交叉免疫電気泳動法によって分析された、Ｃ３ｃの存在によって事前の補体活性化の証拠を示した。最も低いＣ５ａ測定値を有する２人のＣＦ患者は、正常なＦＥＶ_１及びＦＶＣの測定値を有することがわかり、これは、肺損傷との潜在的な関連を示唆した。しかしながら、ＣＦ肺液中のＣ５ａ濃度が、ＣＦにおける急性肺悪化または慢性肺疾患進行と関連するかどうかを試験するためのさらなる試験は実行されなかった。

いずれの機構によっても拘束されないが、開示されたペプチド化合物は、副経路活性に影響を及ぼさずに、Ｃ１ｑ及びＭＢＬの活性化を選択的に調節することができ、したがって、嚢胞性線維症の治療に理想的である。１または複数の実施形態において、開示されたペプチド化合物は、嚢胞性線維症を治療するために使用することができる。１または複数の実施形態において、開示されたペプチド化合物は、抗炎症剤及び抗微生物剤として使用することができる。１または複数の実施形態において、開示されたペプチド化合物は、噴霧療法によって肺中にペプチド（複数可）を直接投与することによって、嚢胞性線維症を治療するために使用することができる。１または複数の実施形態において、噴霧療法による本開示のペプチド化合物（複数可）の投与は、嚢胞性線維症によって引き起こされた肺破壊を緩和する。開示されたペプチド化合物は、肺損傷の進行を遅らせることによってＣＦ患者に対する臨床的利益を有し、寿命を延長させ、かつ生活の質を向上させる。

特定の態様において、本発明は、配列番号：３～４７から選択されるアミノ酸配列及び修飾を含む合成ペプチドの治療有効量を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、嚢胞性線維症の治療方法を提供する。

Ｃ１ｑ受容体とＣ１ｑとの相互作用の調整
Ｃ１ｑはＣ１ｑ受容体と相互作用して、アポトーシス細胞砕片及び免疫複合体の掃去などの恒常性機能、ならびに抗原提示細胞（大型食細胞及び樹状細胞）を介するＴ細胞シグナル伝達において重要な役割を果たすと思われる。現在、Ｃ１ｑ受容体とＣ１ｑとの相互作用を調整する臨床的な薬剤はない。

開示されたペプチド化合物は、カルレティキュリン／ｃＣ１ｑＲを含むＣ１ｑ受容体に結合するＣ１ｑを遮断するために使用可能である。細胞受容体へのＣ１ｑの結合を遮断する、開示されたペプチド化合物の能力は、Ｃ１ｑ受容体に結合するＣ１ｑによって介在される細胞内シグナル伝達プロセスの調整において重要な役割を有し得る。開示されたペプチド化合物は、全身性エリテマトーデス及びがんなどの疾患プロセスにおいて補体反応を調節するために使用することができる。

出生時仮死における脳損傷
補体活性化は、新生児低酸素虚血性脳障害（ＨＩＥ）などの虚血再灌流障害の発生に寄与する。治療低体温法（ＨＴ）によってもたらされる死亡または障害の減少はわずか１１％である。発表された生体外でのデータによると、ＨＴは、逆説的に、炎症促進性補体活性化を増加し、潜在的にその利点を制限することが示されている。

ＰＩＣ１ペプチドは、長期の全身性補体欠乏を生じずに、脳梗塞量を低減することができる。ＰＩＣ１ペプチドは、ＨＩＥにおける神経学的転帰を改善するための、ＨＴの有用な補助剤となる可能性がある。

開示されたペプチド化合物は、出生時仮死による脳損傷を予防するために使用することができる。開示されたペプチド化合物は、心筋梗塞、冠状動脈バイパス手術、卒中などの疾患における虚血再灌流障害（ＩＲＩ）を予防するために使用することができる。開示されたペプチド化合物は、古典補体経路介在事象である、超急性及び急性臓器移植拒絶を予防するためにも使用することができる。

特定の態様において、本発明は、配列番号：３～４７から選択されるアミノ酸配列及び修飾を含む合成ペプチドの治療有効量を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、出生時仮死の治療方法を提供する。いくつかの実施形態において、対象は、治療低体温法によってさらに治療される。

特定の態様において、本発明は、配列番号：３～４７から選択されるアミノ酸配列及び修飾を含む合成ペプチドの治療有効量を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、低酸素虚血性脳障害の治療方法を提供する。いくつかの実施形態において、対象は、治療低体温法によってさらに治療される。

ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性
ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）は、急性炎症において次亜塩素酸（漂白剤）を形成し、また侵入細胞及び宿主細胞に損傷を与える好中球からの酵素である。この酵素は、嚢胞性線維症（ＣＦ）及び低酸素虚血性脳障害（ＨＩＥ）において、宿主組織に対して破壊的であることが知られている。

いくつかの実施形態において、ＰＩＣ１は、嚢胞性線維症患者の痰におけるＭＰＯの酵素活性を阻害した。いくつかの実施形態において、ＰＩＣ１は、ＨＩＥ患者からの脳組織における酵素活性を阻害した。いくつかの実施形態において、精製されたヒト好中球の溶解産物に存在するＭＰＯ活性は、ＰＩＣ１によって直接阻害することができる。いくつかの実施形態において、本発明は、ＰＩＣ１が嚢胞性線維症及びＨＩＥに対して抗炎症性活性を有することを実証する。

自己免疫溶血性貧血
本開示は、自己免疫溶血性貧血を治療することが可能であるペプチド化合物を提供する。自己免疫溶血性貧血は、赤血球が体にとって異物であるかのように赤血球を攻撃する自己抗体を生じる免疫系の機能不全によって特徴づけられる障害の群である。自己免疫溶血性貧血は、上昇した血清ビリルビン、過剰な尿ウロビリノーゲン、減少した血漿ハプトグロビン、上昇した血清乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、ヘモジデリン尿、メトヘムアルブミン血症、球状赤血球症、網状赤血球増加症、及び／または骨髄の赤血球過形成のうちの１つ以上によって特徴づけられ得る。本発明の特定の態様において、自己免疫溶血性貧血の治療は、配列番号３～４７からなる群より選択されるペプチド化合物を投与することを含む。

医薬製剤及び投与
本開示は、少なくとも１種の上記ペプチド及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体、希釈剤、安定剤、または賦形剤を含む、補体系を調節することが可能である医薬組成物を提供する。薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤は、利用される用量及び濃度においてレシピエントに無毒性である。それらは、固体、半固体、または液体であることが可能である。本発明の医薬組成物は、タブレット、ピル、粉末、ロゼンジ、サッシェ、カシェ剤、エリキシル、懸濁液、乳濁液、溶液、またはシロップの形態であることが可能である。

薬学的に許容される担体、希釈剤、安定剤、または賦形剤のいくつかの例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、でんぷん、アカシアガム、カルシウムホスフェート、アルギネート、トラガカント、ゼラチン、カルシウムシリケート、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、滅菌水、シロップ、及びメチルセルロースが含まれる。本発明の医薬組成物は、活性成分の迅速、通常、または持続的もしくは徐放的放出を提供するために、当該技術において既知の手順を使用して配合することができる。

本開示は、対象に上記組成物を与えることを含む、対象における補体系を調節する方法に関する。本発明の医薬組成物は、適切な純度を有するペプチド化合物を、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と混合することによって調製される。そのような製剤を調製するための配合及び方法の例は、当該技術において周知である。本発明の医薬組成物は、上記の種々の障害及び疾患のための予防及び治療剤として有用である。一実施形態において、組成物は、ペプチド化合物の治療有効量を含む。別の実施形態において、組成物は、補体介在組織損傷と関連する少なくとも１つの疾患を治療することにおいて効果がある、少なくとも１種の他の活性成分を含む。「治療有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、対象に利益を示すために十分である各活性成分の総量を意味する。

ペプチド化合物の治療有効量は、治療される状態、状態の重症度、投与時間、投与経路、利用された化合物の排出速度、治療の期間、関連する連携療法、ならびに対象の年齢、性別、体重、及び状態などのいくつかの因子に応じて変化する。当業者は、治療有効量を決定することができる。したがって、当業者は、最大治療効果を得るために、用量を滴定し、投与経路を調整する必要があり得る。

有効１日用量は、一般に、体重１ｋｇあたり約０．００１～約２００ミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）、好ましくは、約８０～約１６０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、約０．１～約２０ｍｇ／ｋｇの範囲内である。この用量は、１日あたり１～６回の投与レジメンによって達成することができる。代替的に、最適な治療は、より低頻度の投与レジメンによる徐放性製剤によって達成することができる。

医薬製剤は、例えば、経口、経鼻、局所（頬、舌下、または経皮を含む）、あるいは非経口（皮下、皮内、筋肉内、関節内、腹腔内、滑液嚢内、胸骨内、くも膜下腔内、病巣内、静脈、または皮内注射または点滴を含む）による、任意の適切な経路による投与に適合させてもよい。ヒトへの投与のために、製剤は、好ましくは、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって要求される滅菌、発熱原性、一般的安全性、及び純度の標準を満たす。

併用療法
本発明のさらなる実施形態は、対象に本発明の医薬組成物を投与することを含む、補体介在組織損傷と関連する疾患を予防または治療する方法を提供する。本発明の医薬組成物は、単一活性薬剤として投与することができるが、それらは、疾患を予防または治療数ために有効である１種またはそれ以上の治療剤または予防剤と組み合わせて使用することも可能である。この態様において、本発明の方法は、補体介在組織損傷と関連する少なくとも１つの疾患を治療することにおいて有効である１種またはそれ以上の追加の治療または予防剤の投与の前に、それと同時に、かつ／または後に、本発明の医薬組成物を投与することを含む。

例えば、本発明の医薬組成物は、単独で、または治療低体温法との組み合わせで、脳仮死または低酸素虚血性脳障害を治療するために使用することができる。

例えば、本発明の医薬組成物は、単独で、あるいは非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、コルチコステロイド、または疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）との組み合わせで、関節リウマチを治療するために使用することができる。

ＮＳＡＩＤの例としては、（アスピリン、アモキシプリン、ベノリラート、サリチル酸コリンマグネシウム、ジフルニサル、ファイスラミン、サリチル酸メチル、サリチル酸マグネシウム及びサリチル酸サリチル（サルサラート）などの）サリチル酸塩、（ジクロフェナク、アセクロフェナク、アセメタシン、ブロムフェナク、エトドラク、インドメタシン、ケトロラク、ナブメトン、スリンダク及びトルメチなどの）アリールアルカン酸、（イブプロフェン、カルプロフェン、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、ロキソプロフェン、ナプロキセン、チアプロフェン酸及びスプロフェンなどの）２－アリールプロピオン酸、（メフェナム酸及びメクロフェナム酸などの）Ｎ－アリールアントラニリン酸、（フェニルブタゾン、アザプロパゾン、メタミゾール、オキシフェンブタゾン及びスルフィンプラゾンなどの）ピラゾリジン誘導体、（ピロキシカム、ロルノキシカム、メロキシカム及びテノキシカムなどの）オキシカム、（エトリコキシブ、ルミラコキシブ及びパレコキシブなどの）ＣＯＸ－２阻害剤、ニメスリドなどのスルホンアニリド、ならびにリコフェロン及びオメガ－３脂肪酸などが含まれる。

コルチコステロイドの例としては、トリアムシノロン（Ａｒｉｓｔｏｃｏｒｔ（登録商標））、コルチゾン（Ｃｏｒｔｏｎｅ（登録商標）アセテート錠）、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標）エリキシル剤）、プレドニソン（Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標））及びメチルプレドニゾロン（Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標））が含まれる。

ＤＭＡＲＤの例としては、メトトレザト（Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（登録商標））、レフルノミド（Ａｒａｖａ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標））、スルファサラジン（Ａｚｕｌｆｉｄｉｎｅ ＥＮ－Ｔａｂｓ（登録商標））、抗マラリア薬、金塩、ｄ－ペニシラミン、サイクロプスポリルンＡ、シクロホスファミド及びアザチオプリンが含まれる。

Ｓｏｌｉｒｉｓ（商標）（エクリズマブ）は、ヒト化抗Ｃ５モノクローナル抗体である。これは、まれな形態の溶血性貧血、発作性夜間血色素尿症の治療用に、ＦＤＡによって認可されている。一実施形態において、本発明の医薬組成物は、発作性夜間血色素尿症、非典型尿毒症症候群、心臓疾患、肺疾患、自己免疫疾患、ぜんそくの治療、ならびに移植の補助的なケアにおいて、Ｓｏｌｉｒｉｓ（商標）と組み合わせて使用することができる。

本発明の医薬組成物は、一緒にもしくは別々に、または１つの組成物中に医薬組成物と追加的な薬剤（複数可）とを組み合わせることによって、併用療法において追加的な薬剤（複数可）と一緒に投与することができる。状態の最大管理を達成するために、用量は管理され、かつ調整される。例えば、医薬組成物及び追加的な薬剤（複数可）の両方は、通常、単一療法レジメンで通常投与される用量の約１０％～約１５０％、より好ましくは、約１０％～約８０％の用量レベルで存在する。

本発明は、以下の実施例によってさらに説明されるが、これらは、説明目的のみで提供される。これらは決して、本発明の範囲または内容を限定するものとして解釈されない。

実施例１：サルコシン（ＳＡＲ）置換ペプチドの溶解度及び溶血アッセイ
方法：溶血アッセイ
ペプチドは、Ｂ因子枯渇ヒト血清（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）中０．７７ｍＭまで希釈され、３７℃で１時間インキュベーションされた。次いで、これらのペプチドは、２．５％血清に等しくなるまでＧＶＢＳ^＋＋で希釈され、そのうちの０．２５ｍｌは０．４ｍｌのＧＶＢＳ^＋＋及び０．１ｍｌ感作ヒツジ赤血球（ＲＢＣ）と組み合わせられ、３７℃で１時間、再びインキュベーションされた。この手順は、４．０ｍｌのＧＶＢＳ^－－を添加することによって停止され、１，６２０ｘｇで５分間遠心分離され、上澄みの吸光度を分光光度計で４１２ｎｍで読み取った。それぞれの試料の溶解パーセントは、血清のみの対照のものに対し標準化された。

結果：サルコシン置換ペプチドの溶解度
表５に、Ｂ因子枯渇血清中のサルコシン（Ｓａｒ）置換ペプチドの溶解度及び溶血アッセイを示す。Ｂ因子枯渇血清中のペプチドの最終濃度は、０．７７ｍＭであった。それぞれのペプチドは３回評価されて、平均値が報告される。水溶性ではないペプチドをＤＭＳＯ中で再懸濁させた。溶血アッセイにおいて、溶解性ペプチドは、水に対し標準化されており、不溶解性ペプチドは、ＤＭＳＯに対し標準化されている。

（表５）

ペプチド誘導体ＰＡ－Ｐ７Ｓａｒ（配列番号：１０）及びＰＡ－Ｃ９Ｓａｒ（配列番号：１２）は、両方とも水溶性であり、ＰＡペプチド（配列番号：３）と同程度まで補体活性を阻害した。溶血アッセイにおけるＰＡ－Ｐ７Ｓａｒ及びＰＡ－Ｃ９Ｓａｒの両方による用量依存性の補体活性の阻害は、図１に示される。

実施例２－ＰＥＧ化ＰＡペプチドの溶解度及び溶血アッセイ
方法：溶血アッセイ
Ｐｏｌａｒ Ａｓｓｏｒｔａｎｔペプチドは、未希釈のＢ因子枯渇ヒト血清（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）中に連続的に希釈され、３７℃で１時間インキュベーションされた。水、ＧＶＢＳ^＋＋及びＤＭＳＯは、対照として含まれた。次いで、これらのペプチドは、２．５％血清に等しくなるまでＧＶＢＳ^＋＋で希釈され、そのうちの０．２５ｍｌは０．４ｍｌのＧＶＢＳ^＋＋及び０．１ｍｌ感作ヒツジ赤血球（ＲＢＣ）と組み合わせられ、３７℃で１時間、再びインキュベーションされた。この手順は、４．０ｍｌのＧＶＢＳ^－－を添加することによって停止され、１，６２０ｘｇで５分間遠心分離され、上澄みの吸光度を分光光度計にて４１２ｎｍで読み取った。それぞれの試料の溶解パーセントは、血清のみの対照のものに対し標準化された。

最初に、ＰＡは、Ｎ末端（ｄＰＥＧ２４－ＰＡ、配列番号：２０）、Ｃ末端（ＰＡ－ｄＰＥＧ２４、配列番号：２１）、またはＮ末端及びＣ末端の両方（ｄＰＥＧ２４－ＰＡ－ｄＰＥＧ２４、配列番号：１９）において、２４ＰＥＧ部分でＰＥＧ化された。全３種のＰＥＧ化ペプチドは、水溶性であり、そして様々な程度の補体阻害を示したが、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）はＰＡと同程度まで補体活性化を阻害した（図２Ａ）。

図２Ｂに示すように、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）は、ＰＡと同程度まで補体活性化を阻害し、またより広範囲の用量反応を示したが、これは水溶液における溶解度の増加に起因する可能性が最も高い。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の構造は、図３で示される。

次に、ＰＥＧ化ＰＩＣ１誘導体を、Ｃ末端におけるＰＥＧ部分の数を減少させて設計した。以下の表６に示されるように、これらのペプチドの多くは、溶解度及び補体阻害活性を維持したが、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）が最も良好な阻害活性を実証した。

結果：ＰＥＧ化ペプチドの溶解度
表６に、Ｂ因子枯渇血清中のＰＥＧ化ＰＡペプチドの溶解度及び溶血アッセイを示す。Ｂ因子枯渇血清中のペプチドの最終濃度は、０．７７ｍＭであった。水溶性でないペプチドはＤＭＳＯ中で再懸濁させた。溶血アッセイにおいて、溶解性ペプチドは、水に対し標準化され、不溶解性ペプチドは、ＤＭＳＯに対し標準化された。

（表６）

ラットでの生体内データによって、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）は、ラットへの注射から３０秒以内に９０％まで（溶血アッセイにおける赤血球溶解によって測定した場合）補体活性化を阻害し、阻害活性は最大４時間観察されたことが示された（図２０）。２つの投与量は、静脈内（ＩＶ）投与された。これは、全ての時点において最大溶血を示す、媒体対照（通常生理食塩溶液）と比較された。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）は、生体内で０．９％ ＮａＣｌ＋１０ｍＭ ＮａＨＰＯ_４において有効であったが、食塩水及びヒトへのＩＶ注射用の他の一般的な水溶液（例えば、乳酸リンゲル液、Ｄ５Ｗなど）中でも作用した。

実施例３－ＰＥＧ化ならびにサルコシン（ＳＡＲ）及び／またはアラニン置換ペプチドの溶解度及び溶血アッセイ
表７は、ＰＥＧ化及びサルコシン（ＳＡＲ）置換ペプチドのＢ因子枯渇血清中の溶解度及び溶血アッセイを示す。Ｂ因子枯渇血清中のペプチドの最終濃度は、０．７７ｍＭであった。水溶性でないペプチドはＤＭＳＯ中で再懸濁させた。溶血アッセイにおいて、溶解性ペプチドは、水に対し標準化されており、不溶解性ペプチドは、ＤＭＳＯに対し標準化されている。

（表７）

複数のアミノ酸がサルコシン及び／またはアラニンで置換されるように、ＰＡに変更を加えた。いくつかのペプチドは、さらにＰＥＧ化と組み合わせた。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）と同程度の阻害活性及び溶解度を維持する複数のペプチドとしては、ＰＡ－Ｒ１３Ｓａｒ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：３５）、ＰＡ－Ａ１４Ｓａｒ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：３６）、Ｅ６ＳａｒＰ７Ｓａｒ（配列番号：３７）、Ｑ１１ＳａｒＰ７Ｓａｒ（配列番号：３９）、Ａ１４ＳａｒＰ７Ｓａｒ（配列番号：４３）、Ｅ６ＡＥ１２Ａ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：４５）及びＥ６ＡＥ１２ＡＰ７Ｓａｒ（配列番号：４７）が含まれる。

実施例４－ＰＩＣ１ペプチドの最小阻害濃度（ＭＩＣ）
方法：最小阻害濃度（ＭＩＣ）アッセイ
微量希釈最小阻害濃度（ＭＩＣ）アッセイを実行し、マイクロタイタープレート中のブロス培養中で増殖した様々な細菌に、増加量のＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）またはサルコシン誘導体（配列番号：４～１８、３０～４７）を添加した。次いで、プレートを３７℃で一晩インキュベーションし、次にプレートを、ＯＤ６００ｎｍの吸光度にて分光光度計で読み取り、溶液の濁度を決定した。濁度の減少は、細菌増殖の阻害を示す。

結果
ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）は、食塩水対照と比較して、１ｍＭより高い濃度において、黄色ブドウ球菌の増殖を用量依存的に阻害することができ（図４Ａ）、かつ同病原体を抗生物質バンコマイシンと類似の様式で阻害した（図４Ｂ）。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）は、＞３ｍｇ／ｍｌではゲンタマイシンと同様に肺炎桿菌を阻害することができ（図４Ｃ）、≧１３ｍｇ／ｍｌでは緑膿菌も阻害することができた（図４Ｄ）。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の活性は、緑膿菌に対する３つの水溶性のサルコシン置換ペプチド（ＰＡ Ｌ３Ｓａｒ（配列番号：６）、ＰＡ Ｉ４Ｓａｒ（配列番号：７）及びＰＡ Ｌ５Ｓａｒ（配列番号：８））と比較され、全３種のサルコシン誘導ペプチドは、≧６ｍｇ／ｍｌで、この種類の細菌を用量依存的に阻害することが見出された（図４Ｅ）。これらの結果は、ＰＩＣ１ファミリーペプチドの補体阻害特性から完全に独立している、これまで報告されていないこれらのペプチドの全く新しい抗微生物特性を示す。

次に、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）、ＰＡ Ｌ３Ｓａｒ（配列番号：６）、ＰＡ Ｉ４Ｓａｒ（配列番号：７）及びＰＡ Ｌ５Ｓａｒ（配列番号：８）が細菌性膣疾患の一般原因であるグラム不定嫌気性球桿菌であるガードネレラの増殖を阻害することができるかどうかを試験した。全４種のペプチドは、ガードネレラの増殖を阻害した（図５）。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）が、ガードネレラ介在補体活性化を阻害することができるかどうかも分析された。このアッセイにおいて、正常ヒト血清を室温で１時間、増加量のＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の存在下、ガードネレラと一緒にインキュベーションした。補体活性化は、ＥＬＩＳＡ法を使用して、Ｃ５ａの産生を測定することによって分析した。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の量を増加させることによって、Ｃ５ａ形成が阻害された（図６）。これらの結果は、ＰＩＣ１ペプチド（例えば、配列番号：３～４７）は、ガードネレラの複製を抑制することにより細菌性膣疾患を治療するために、ならびにガードネレラによって引き起こされた炎症を治療するために、膣に局所的に送達されることができることを示唆する。この関連する炎症は、細菌性膣疾患の症状を引き起こし、膣内の正常なバリア防衛を崩壊させることによって、ＨＩＶ感染のリスクを増加させる。

実施例５－急性輸血反応（ＡＴＲ）を引き起こす可能性が高い赤血球輸血を識別することができる、補体介在溶血を検出するアッセイ
方法：補体介在溶血を検出するためのアッセイ
鎌状赤血球障害を有する１３歳女性Ｂ＋は、２人の異なるドナーから３ユニットのＯ＋濃厚赤血球（ｐＲＢＣ）を与えられた。２ユニットの最初の輸血の間、患者は低血圧（ＢＰ８９／３９）と、それに続いて発熱（Ｔｍａｘ１０２．６°Ｆ）を経験した。第３の血液製剤の輸血では許容性が示され、合併症は生じなかった。急性輸血反応（ＡＴＲ）の疑いのため、第１の輸血血液製剤の輸血反応検査によって、高い抗Ｂ力価が明らかにされた。両方の識別されたドナーのその後の調査試験によって、以下が示された：ドナー＃１は、輸血有害事象が報告されない４８歳男性であった。ドナー＃２は、妊娠経験があり、輸血有害事象が報告されない６１歳女性であった。

両方のドナーからの血漿をＧＶＢＳ＋＋（０．１％ゼラチン、０．１５ｍＭ ＣａＣｌ_２及び１ｍＭ ＭｇＣｌ_２を含むベロナール緩衝食塩水）で希釈し、３７℃で１時間、Ｂ＋ドナーからの精製された赤血球と一緒にインキュベーションした。遊離ヘモグロビンは、４１２ｎｍで分光光度計によって測定された。赤血球とのインキュベーションの前に、溶血性血漿試料中に古典補体経路阻害剤ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）を添加することによって、古典補体活性化がさらに評価された。

結果
補体介在溶血は、異なるドナーからの２つの血漿試料間で＞１００倍異なった（表８）。表８は、２人のＯ＋ドナーの血漿抗Ｂ力価及び補体溶血を示す。古典補体活性化は、古典補体経路阻害剤ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）による溶血の阻害によって確認された。

（表８）

このデータは、ＡＴＲが補体介在性であるかどうかを確認するためにＰＩＣ１ペプチド（例えば、配列番号：３～４７）が利用可能であることを明示する。上記表８のデータは、高度溶血性血漿試料の用量反応ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）阻害試験（図８）を伴って、図７に示される。溶血の用量反応阻害は、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）によって＞９５％阻害まで実証された。これは、Ｂ型レシピエントにおいてＡＴＲをもたらすＯ型ＲＢＣ輸血が、古典補体介在事象であったことを示した。図８は、このようなＡＴＲ生体外モデルにおいてドナー血漿によって介在される極めて強固な溶血性活性を薬理学的に阻害することが可能であったことを示した。

結論
過去の方法論は、補体介在ＡＴＲの可能性を十分に予測することが不可能であった。このケースでは、Ｏ型ＲＢＣの２ユニットがＢ型レシピエントに与えられ、次いで、このレシピエントはＡＴＲを患った。濃厚ＲＢＣ（ｐＲＢＣ）のユニット中、約３０～４０体積％の血漿があることが推定された（すなわち、５００ｍｌユニットあたり１５０～２００ｍｌの血漿）。ＲＢＣ輸血の血漿中の抗体が、おそらく、古典経路補体介在ＡＴＲを開始した。それぞれのＲＢＣ輸血のドナーからの血漿のＩｇＧ力価は両方とも高く、したがって、この血小板輸血によってＡＨＴＲが引き起こされることは予測不能であった。しかしながら、ＣＨ５０タイプの補体溶血アッセイでは、どのＯ型血漿がＢ型赤血球の大規模な（＞１００倍増加）溶血を引き起こすかについて、容易に識別することが可能であった。したがって、血小板輸血の前に実行された溶血補体アッセイによって、血小板のユニットの１つがＡＨＴＲを引き起こす可能性が高かったことが識別され、この重大な有害事象を予防することができた。

したがって、ＰＩＣ１ペプチド（配列番号：３～４７）は、輸血前に補体介在ＡＴＲのリスクを識別するために使用することができる。このデータは、種々の臨床的シナリオにおけるＡＴＲの治療としてのＰＩＣ１ペプチド（配列番号：３～４７）の使用も支持する。

実施例６－ＰＩＣ１（配列番号：２１）は、急性血管内溶血性輸血反応の動物モデルにおいてヒト赤血球の生存を増強する
方法：倫理的記載
留置頸静脈カテーテルを有する未成熟雄ウィスターラット（２００～２５０ｇ）をＨａｒｌａｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入し、Ｅａｓｔｅｒｎ Ｖｉｒｇｉｎｉａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ（ＥＶＭＳ） ＩＡＣＵＣ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）承認プロトコル１２－００３及び１５－００３の下で使用した。ＥＶＭＳ ＩＡＣＵＣからの承認を得て、動物供給業者によって推奨されるとおり中心線を維持した。

書面のインフォームド・コンセントが提供された後、健康なヒトのボランティアは、精製赤血球（ＲＢＣ）を生成するために使用されるＡＢ血液を供与した（ＥＶＭＳ ＩＲＢプロトコル０２－０６－ＥＸ０２１６）。これらのＲＢＣは、生体外分析のため、ヒトＲＢＣ（ｈｕＲＢＣ）の供給源としても使用された。

方法：ヒトＲＢＣ精製及び動物実験
動物実験の朝に獲得したヒトＲＢＣ（ｈｕＲＢＣ）は、（Ｓｈａｈ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｓ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｉｎ ａ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ ｈｅｍｏｌｙｓｉｓ．”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．２０１４）に記載されるように処理された。このプロセスは、８０％ヘマトクリットの１ｍｌ ｈｕＲＢＣを生成し、１５％輸血としてラットに与えられた。

ＡＩＨＴＲウィスターラットモデルは、以前に確立されており、コブラ毒因子（ＣＶＦ）がｈｕＲＢＣの補体介在溶解を阻害することが実証されており、一方、通常生理食塩溶液（ＮＳ）を与えられた動物は、古典経路の補体介在溶血を示した（Ｓｈａｈ ＴＡ，Ｍａｕｒｉｅｌｌｏ ＣＴ，Ｈａｉｒ ＰＳ，ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｓ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｉｎ ａ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ ｈｅｍｏｌｙｓｉｓ．”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．２０１４）。ＰＥＧ化誘導体ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ，ＭＡ）の投与は、ウィスターラットで確立された。図２１Ａは、ＡＩＨＴＲ動物モデルでのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の低用量（２０ｍｇ）及び高用量（４０ｍｇ）を使用する投与実験の連続事象を示す。動物は、ｈｕＲＢＣ輸血の前（予防アーム）に、通常生理食塩溶液（ｎ＝６）、２０ｍｇのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）（ｎ＝４）または４０ｍｇのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）（ｎ＝７）のいずれかを与えられる種々の群にランダムに割り当てられた。図２１Ｂは、動物の第１の群が、ｈｕＲＢＣ輸血の前（予防アーム）に４０ｍｇのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）（ｎ＝８）を与えられ、別の動物の組（ｎ＝１０）が、ｈｕＲＢＣ輸血の後（救命アーム）に４０ｍｇのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）を与えられる第２の実験セットを示す。両実験に関して、生理食塩水対照群に割り当てられた動物は、ｈｕＲＢＣ輸血前にＮＳを与えられるのに対して、ＣＶＦ群は、ｈｕＲＢＣ輸血の２４時間前に腹腔内（Ｉ．Ｐ．）で１３０μｇのＣＶＦ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を与えられた。追加実験において、動物の別個の群に、ｈｕＲＢＣ輸血の前に、４０ｍｇの静脈内免疫グロブリン（ＰＯＬＹＧＡＭ（登録商標），Ｂａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＣＡ）ＩＶＩＧ（ｎ＝３）及び４０ｍｇのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）（ｎ＝３）を注射した（ＩＶＩＧ対ＰＡ－ｄＰＥＧ２４）。

動物は、バイタルサインを周期的に監視しながら、ケタミン及びアセプロマジンの重量ベースの用量を使用して実験過程全体にわたり鎮静させた。血液試料は、ｈｕＲＢＣ輸血前に、次いで、ｈｕＲＢＣ輸血の３０秒、５分、２０分、６０分及び１２０分後に、動物からＥＤＴＡマイクロタイターチューブ（ＢＤ）中に回収された。ＩＶＩＧ対ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）を与えられた動物の群において、ｈｕＲＢＣ輸血前、次いで、ｈｕＲＢＣ輸血の３０秒、５分、２０分、６０分、１２０分、１８０分、２４０分、３００分及び３６０分後に血液試料を採取した。これらの試料を、処理前に室温で振とうさせ、２６５５ｘｇで５分間遠心分離させ、血漿と沈殿物ＲＢＣを分離した。血漿をアリコートにし、そしてＲＢＣペレットを下記のように別々に処理した。最終（１２０分または３６０分）血液採取の完了時、動物は、Ｆａｔａｌ Ｐｌｕｓ（Ｖｏｒｔｅｃｈ）を使用して安楽死させた。病理組織診断用に器官（肝臓、脾臓及び両側性腎臓）を回収して、剖検を完了した。ＩＶＩＧ対ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の実験において、それぞれの動物から得られた両側性腎臓は別々に重量を計量されて、処理及びパラフィン包埋の前にホルマリン中に保存された。ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色部分は、盲目化病理学者によって再検討された。

方法：フローサイトメトリー
フローサイトメトリーは、ＤＸＰ ８ Ｃｏｌｏｒ ４８８／６３７／４０７ Ｕｐｇｒａｄｅ（Ｃｙｔｅｋ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）とともにＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒフローサイトメトリー（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）を使用して、回収されたＲＢＣで実行した。試料は、ＦＩＴＣ及び／またはＡＰＣ標識抗体によって染色された。データは、Ｃｙｔｅｋ ＦｌｏｗＪｏ ＣＥのバージョン７．５．１１０．６を使用して得られた。試料あたり約１×１０^５及び５×１０^５の事象を、それぞれ単一標識フロー及び二重標識フローに関して回収した。データは、ＦｌｏｗＪｏ Ｘのバージョン１０．０．７ｒ２（ＦｌｏｗＪｏ ＬＬＣ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）を使用して分析された。ＦＩＴＣ及びＡＰＣは、多量のスピルオーバーを引き起こすことは予想されないが、分析においてデジタル補正が使用された。

単一標識フロー：血漿を分離した後に回収されたＲＢＣペレットを洗浄し、希釈し、凝集作用を最小化するために、室温で振とうしながら、２０分間かけて、ＧＶＢＳ－－（０．１％ゼラチン、０．０１モル／Ｌ ＥＤＴＡを含むベロナール緩衝食塩水（ＶＢＳ））中１：２００のＦＩＴＣ結合型抗ヒトＣＤ２３５ａ（グリコホリンＡ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で染色した。抗体対照は、洗浄され、希釈され、１：２００（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）のマウスＩｇＧ２ｂ Ｉｓｏ対照ＦＩＴＣで染色されていないか、または染色されたＲＢＣペレットからなった。

二重標識フロー：上記のとおり作製したＲＢＣペレットを洗浄し、ＧＶＢＳ－－中１：５０のＡＰＣ結合型マウス抗ヒトＣＤ２３５ａ（グリコホリンＡ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）及び１：２００のＦＩＴＣ結合型ヤギ抗ラットＣ３（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，Ｓａｎｔａ Ａｎａ，ＣＡ）で、室温で２０分間二重染色した。染色されていないＲＢＣ、ＡＰＣタグ化抗体及びＦＩＴＣタグ化抗体によって染色された３０秒で得られたＲＢＣからなる３種の対照を、４分割分析に使用した。

生体外フローサイトメトリー実験：ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）処理血清を生じさせるために、１００％の補体十分ウィスターラット血清（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｎｏｖｉ，ＭＩ）を、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）と１２ｍｇ／ｍｌ（４ｍＭｏｌ）で室温で５分間インキュベーションした。上記のとおり調製されたＨｕＲＢＣを、次いで、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）処理血清と、または１００％補体十分ウィスターラット血清未処理血清と３７℃で５分間インキュベーションした。次いで、細胞をＧＶＢＳで２回洗浄し、補体活性化を終了した。次いで、これらの細胞を、上記のＡＰＣ－結合型マウス抗ＣＤ２３５ａ及びＦＩＴＣ結合型ヤギ抗Ｃ３で二重染色した。洗浄後、生体内で使用された１５％輸血を擬態するために、細胞を８５％非オプソニン化非染色細胞と組み合わせ、上記二重標識フローで記載されたものと同条件を使用して、フローサイトメトリーによって分析した。

方法：ヘモグロビン及びビリルビン測定
上記の実験から生じた血漿は、上記のとおり、分光光度法を使用して、遊離ヘモグロビンに関して分析された（Ｓｈａｈ ｅｔ ａｌ．“Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｖｉａ ｔｈｅ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｐａｔｈｗａｙ．”Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ２０１４；１２：１８１．）。ビリルビン測定のために、予防（ｎ＝８）群及びＮＳ（ｎ＝７）群からの採血前の血漿試料及び１２０分の血漿試料は、製造業者が推奨する量の半分で、Ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用して、存在するビリルビンの量に関して分析された。より遅い時点における大量の溶血及びビリルビン分析における関連する光干渉のため、全ての試料は、Ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔによる分析の前に、ＨｅｍｏｇｌｏＢｉｎｄ（商標）（Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＮＪ）で前処理された（Ｋｏｓｅｏｇｌｕ Ｍ，Ｈｕｒ Ａ，Ａｔａｙ Ａ，Ｃｕｈａｄａｒ Ｓ．“Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｅｍｏｌｙｓｉｓ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｎ ｒｏｕｔｉｎｅ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ．”Ｂｉｏｃｈｅｍｉａ ｍｅｄｉｃａ．２０１１；２１（１）：７９－８５］。

結果
ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）は、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）が輸血前に予防的に与えられた場合、ならびにＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）が輸血後の救命治療として投与された場合、ラットにおいてＡＩＨＴＲを阻害した。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）は、ＡＩＨＴＲ疾患動物モデルにおいて、静脈注射免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）に対して用量比較可能様式において比較された。ＩＶＩＧは、ＡＢＯ不適合関連溶血性疾患による高ビリルビン血症を有する新生児における交換輸血の必要を低減するために、光線療法と共に臨床診療において使用されている［Ｓｃｈｗａｒｔｚ ＨＰ，Ｈａｂｅｒｍａｎ ＢＥ，Ｒｕｄｄｙ ＲＭ．“Ｈｙｐｅｒｂｉｌｉｒｕｂｉｎｅｍｉａ：ｃｕｒｒｅｎｔ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ａｎｄ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．”Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ ｃａｒｅ．２０１１；２７（９）：８８４－８８９；“Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｈｙｐｅｒｂｉｌｉｒｕｂｉｎｅｍｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｎｅｗｂｏｒｎ ｉｎｆａｎｔ ３５ ｏｒ ｍｏｒｅ ｗｅｅｋｓ ｏｆ ｇｅｓｔａｔｉｏｎ．”Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ．２００４；１１４（１）：２９７－３１６；Ｃｏｒｔｅｙ Ａ，Ｅｌｚａａｂｉ Ｍ，Ｗａｅｇｅｍａｎｓ Ｔ，Ｒｏｃｈ Ｂ，Ａｕｊａｒｄ Ｙ．“Ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｎｅｏｎａｔａｌ ｈｙｐｅｒｂｉｌｉｒｕｂｉｎｅｍｉａ ｄｕｅ ｔｏ ＡＢＯ ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ：ａ ｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓ．”Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｄｅ ｐｅｄｉａｔｒｉｅ：ｏｒｇａｎｅ ｏｆｆｉｃｉｅｌ ｄｅ ｌａ Ｓｏｃｉｅｔｅ ｆｒａｎｃａｉｓｅ ｄｅ ｐｅｄｉａｔｒｉｅ．２０１４；２１（９）：９７６－９８３］。

実施例７－ＰＩＣ１（配列番号：２１）は、急性血管内溶血性輸血反応の動物モデルにおいてヒト赤血球の生存を増強し、配列番号：２１の予防投与によって、ＡＩＨＴＲモデルにおけるｈｕＲＢＣの溶血は低減する
以前の研究によって、ウィスターラットにおけるＡＩＨＴＲモデルは確立されており、ＨｕＲＢＣの１５％輸血が、異種輸血細胞の古典経路介在血管内溶解をもたらしたことが実証された［Ｓｈａｈ ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｓ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｉｎ ａ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ ｈｅｍｏｌｙｓｉｓ．”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．２０１４ Ｎｏｖ；５４（１１）：２８９２－９００．］“Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｖｉａ ｔｈｅ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｐａｔｈｗａｙ．”Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ２０１４；１２：１８１．］。フローサイトメトリー及び遊離ヘモグロビン測定によって示されるように、ＣＶＦによる補体活性の欠乏が、ＨｕＲＢＣの生存の増加をもたらし、輸血された細胞は最終的に脾臓及び肝臓に隔離される［Ｓｈａｈ ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｓ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｉｎ ａ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ ｈｅｍｏｌｙｓｉｓ．”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．２０１４ Ｎｏｖ；５４（１１）：２８９２－９００．］。このＡＩＨＴＲモデルでのｈｕＲＢＣの生存に及ぼすＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）阻害の有効性を評価するために、動物を、２０及び４０ｍｇ／動物の用量のＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）によって予防治療し、続いて、ＨｕＲＢＣの１５％異種輸血を行い、示された時点で血液を採取した（図２２Ａ）。ＣＶＦで前もって治療された動物は、補体欠乏の陽性対照としての役割を果たし、動物の別の組にはＮＳ（媒体対照）が与えられた。放出された遊離ヘモグロビンによって分析されるように、ＮＳによって処理された動物から単離された血漿は、溶血の急上昇を示した（図２２Ａ）。それとは対照的に、ＣＶＦで前もって治療された動物は、以前に報告されたように、低濃度の遊離ヘモグロビンを有した（図２２Ａ）［Ｓｈａｈ ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｓ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｉｎ ａ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ ｈｅｍｏｌｙｓｉｓ．”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．２０１４ Ｎｏｖ；５４（１１）：２８９２－９００．］。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の両用量を与えられた動物は、ＣＶＦによって治療された動物に関して観察されたものと同様の遊離ヘモグロビン濃度の減少を示し；４０ｍｇのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）を与えられた動物は、５分及び２０分において、ＮＳ対照動物と比較して、遊離ヘモグロビンの有意な減少を示した（Ｐ≦０．０５）（図２２Ａ）。輸血されたｈｕＲＢＣの補体介在破壊を確認するために、示された時点で採取された血液からのＲＢＣを単離して、ヒトグリコホリンＡ（ＣＤ２３５ａ）に対する抗体で標識し、フローサイトメトリーによって分析した。２０または４０ｍｇの用量のＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）を与えられた動物は、２０分まで、ＣＶＦによって治療された動物で観察されたものに匹敵する輸血細胞の生存を示した（図２２Ｂ）。これらの実験におけるＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）及びＣＶＦの両用量によって引き起こされる影響の間で、統計的有意差は観察されなかった。これらの結果は、ＡＩＨＴＲの動物モデルにおける適合性のないＨｕＲＢＣの生存における、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の保護効果を示す。

実施例８－ＰＩＣ１（配列番号：２１）は、急性血管内溶血性輸血反応の動物モデルにおいてヒト赤血球の生存を増強する－ｈｕＲＢＣの輸血後の配列番号：２１の投与によって、輸血された細胞は、補体介在溶血から保護される
ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）は、異種輸血の前にラットに投与される場合、ＨｕＲＢＣの保護を示すことが可能であり、また、異種輸血の直後に投与されたＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）が、ＨｕＲＢＣを補体介在攻撃から保護することが可能であることも発見された。ラットは、ＨｕＲＢＣの異種輸血の３０秒前（予防アーム）または３０秒後（治療／救命アーム）に４０ｍｇ用量のＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）を与えられた。別の群の動物も、ＮＳ媒体対照を与えられるか、またはＣＶＦで前もって治療された（図２１Ｂ）。遊離ヘモグロビンによって分析されるように、輸血前（予防群）及び輸血後（治療／救命群）に与えられた４０ｍｇのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の、溶血量における保護効果は、このＡＩＨＴＲモデル（図２２Ａ及び２３Ａ）において最大量の溶血を表す５分（Ｐ≦０．００５）及び２０分（Ｐ≦０．００５）において、ＮＳを与えられた動物（図２３Ａ）と比較して有意に減少していた。図２３Ｂは、種々の動物の群（生理食塩水、予防、治療及びＣＶＦ）において生じる累積的な溶血を示す。治療群及び予防群の両方が、動物の食塩水群と比較して、溶血の減少を示した（Ｐ＜＝０．０５）。ヘモグロビン代謝の別の一般的経路は、それが血管内溶血の結果として血漿中に放出される場合、間接型ビリルビン血症である［Ｓｔｒｏｂｅｌ Ｅ．“Ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ．”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ ｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ：ｏｆｆｉｚｉｅｌｌｅｓ Ｏｒｇａｎ ｄｅｒ Ｄｅｕｔｓｃｈｅｎ Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｆｕｒ Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｓｍｅｄｉｚｉｎ ｕｎｄ Ｉｍｍｕｎｈａｍａｔｏｌｏｇｉｅ．２００８；３５（５）：３４６－３５３］。ＮＳ処理動物は、遊離ヘモグロビン及びフローサイトメトリーによって評価されるように、ＲＢＣ溶解と一致した、採血前と１２０分時点（図２３Ｃ）との間の遊離ビリルビンの大きな増加を示した。ＮＳ処理動物と対照的に、ＨｕＲＢＣの輸血前に４０ｍｇのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）を与えることによって、ＮＳを与えられた動物と比較して、１２０分時点で、循環するビリルビンの量は減少した（Ｐ＝０．００１５）（図２３Ｃ）。

実施例９－補体Ｃ１のペプチド阻害剤（配列番号：２１）は、急性血管内溶血性輸血反応の動物モデルにおいてヒト赤血球の生存を増強する－輸血されたｈｕＲＢＣにおける補体沈着の評価
上記の結果は、ｈｕＲＢＣ生存、遊離ヘモグロビン濃度及びビリルビン放出によって分析されるように、ＰＩＣ１（配列番号：２１）が、輸血されたｈｕＲＢＣの溶血を予防するための予防及び治療の戦略の両方において利用可能であることを明示する。輸血された細胞における補体沈着の役割のより完全な理解を得るために、ｈｕＲＢＣに結合するＣ３の分析が行われた。実験条件を確立するために、ラット血清に曝露されたＨｕＲＢＣを使用して生体外試験が実行され、続いて、フローサイトメトリーによる細胞上のＣ３沈着の分析が行われた。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）を用いて、及び用いずに治療されたラット血清をＨｕＲＢＣに添加し、そして５分間オプソニン化した。次いで、細胞を二重標識フローサイトメトリーによって分析し、未治療またはＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）で治療された血清に曝露されたＨｕＲＢＣの代表的なプロットを、それぞれ、図２４Ａ及び２４Ｂに示した。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）を用いて、及び用いずにラット血清においてオプソニン化されたＨｕＲＢＣの定量化によって、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）によって治療された血清におけるＣ３沈着のない細胞の数の相対的な増加が示された（図２４Ｃ）。グリコホリンＡ標識細胞の総数に対する二重標識細胞の割合を算出すると、未治療の血清（図２４Ｄ）に対して、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）によって治療された血清とインキュベーションされた細胞におけるＣ３沈着において、＞１．５倍の減少があった。未治療の血清において、二重標識細胞（Ｑ２）のより多くの集団が四分円１にシフトすることが観察され、Ｃ３沈着を有する細胞を表した。これらの知見は、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）が、生体外で補体タンパク質の活性化により、ＨｕＲＢＣをオプソニン化しかつ差し迫った溶血から救出したことを明示した。

ＡＩＨＴＲモデルにおける輸血されたＨｕＲＢＣのＣ３沈着に対するＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の効果を評価するために、異種輸血前または異種輸血後にＣＶＦ、ＮＳまたはＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）を与えられた動物の血液から単離されたＲＢＣに、ヒトグリコホリンＡ発現及びラットＣ３の両方に関して２つのカラーフローサイトメトリーを行った。輸血後３０秒、５分及び２０分におけるＲＢＣの代表的なフローサイトメトリープロットは、ＮＳ（図２５Ａ～Ｃ）及びＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）（図２５Ｄ～Ｆ）で治療された動物に関して示される。ＮＳ処理動物は、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）治療動物と比較して、経時的に二重陽性細胞数の増加を示した。逆に、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）治療動物は、単一標識フローサイトメトリー及び遊離ヘモグロビン測定（図２２Ａ～Ｂ及び２３Ａ～Ｃ）によって評価されるように、ＲＢＣ生存の増加と一致する、より多くのグリコホリンＡ陽性細胞を有した。より正確にこれらの結果を定量化するために、フローサイトメトリーによって得られた事象の数を分析し、グラフ化した（図２６Ａ）。ＨｕＲＢＣ輸血後３０秒において、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）による輸血予防治療では、介入なし（ＮＳ）またはＣＶＦ治療動物と比較して、循環ＨｕＲＢＣ（ヒト－Ｃ３なし）の数の劇的な増加が示された（図２６Ａ）。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）治療群の３０秒におけるＨｕＲＢＣ生存量は、ＮＳを与えられた動物に類似しており、これはＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）が輸血後３０秒において与えられたときに予想された（図２６Ａ）。輸血後５分及び２０分において、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）による予防及び治療を受けた動物の群は、介入を受けない（ＮＳ）動物と比較して、循環ＨｕＲＢＣの表面上のＣ３沈着の減少を示した（図２６Ｂ）。輸血後にＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）を与えられた動物（治療アーム）に関して、多くのＨｕＲＢＣは、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）治療の前に循環から除去されるが（図２６Ａ）、ＨｕＲＢＣは、ＮＳ群に関して観察されたものよりも多い数で、２０分にわたり循環中で持続した（図２６Ｃ）。イノセントなバイスタンダーＲＢＣ（すなわち、ラットＲＢＣ）の補体攻撃を評価するために、抗グリコホリンＡによって標識されていないＣ３－フラグメント結合ＲＢＣを数えた。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の予防投与によって、ＮＳ対照動物と比較して、全ての観測時点において非グリコホリンＡ ＲＢＣのイノセントなバイスタンダーの攻撃は減少した。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）による輸血後治療は、５分及び２０分の時点における「イノセントなバイスタンダーの」攻撃を減少させた（図２６Ｄ）。

実施例１０－嚢胞性線維症肺液における、炎症の補体エフェクターの研究－ＣＦ肺液における補体アナフィラトキシン
方法：倫理的記載
痰試料は、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｔｈｅ Ｋｉｎｇ’ｓ Ｄａｕｇｈｔｅｒｓ Ｃｙｓｔｉｃ Ｆｉｂｒｏｓｉｓ Ｃｅｎｔｅｒにおける標準的な治療来診の一環として、同意した患者から入手され、廃棄する前にＣｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから回収された。これは、Ｅａｓｔｅｒｎ Ｖｉｒｇｉｎｉａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ ＩＲＢ認可プロトコル１２－０８－ＥＸ－０２００の下で実行された。試料は、暗号化されたファイルで臨床データベースにリンクされた数値コードを与えられた。対照痰試料は、健康なヒトボランティアから得られた。

方法：痰ゾル
痰試料は、吐き出された痰として得られて、そしてすぐに氷上に配置された。痰の導入によってゾル中で補体が変化しないことを確認するために、健康なヒトボランティアが痰を吐き出し、そして痰を導入することによって対照実験が実行されたが、これによって、補体活性化または補体エフェクター濃度における差異は示されなかった。可溶性（ゾル）画分は、以前に記載された方法と同様に、１４，０００ｇにおける６０分の冷（４℃）遠心分離及び流動性液体画分の回収によって生成された［Ｄａｖｉｅｓ ＪＲ，Ｓｖｉｔａｃｈｅｖａ Ｎ，Ｌａｎｎｅｆｏｒｓ Ｌ，ｅｔ ａｌ．“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＵＣ５Ｂ，ＭＵＣ５ＡＣ ａｎｄ ｓｍａｌｌ ａｍｏｕｎｔｓ ｏｆ ＭＵＣ２ ｍｕｃｉｎｓ ｉｎ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｉｒｗａｙ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ．”Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ １９９９；３４４ Ｐｔ ２：３２１－３０］。ゾルをアリコートに分け、－８０℃で凍結した。

臨床データ
痰試料が回収された来診についてＰｏｒｔ ＣＦに入力されたデータ及び医療記録の再検討から、臨床データが得られた。ＦＥＶ１％予測値は、痰試料が回収された時の来診において実行された肺機能検査から得られた。気管支拡張スコアは、痰試料を得る前の最新Ｘ線撮影による肺試験、通常、単純Ｘ線撮影写真に基づいた。気管支拡張スコアは、次のように割り当てられた：０＝通常；１＝１ローブ、穏和；２＝２～４ローブ；３＝全ローブ。嚢胞性線維症関連糖尿病（ＣＦＲＤ）ステータスは、痰試料を得る前の最新の内分泌学検査に基づいた。ＣＦＲＤステータスは、次のように得点化された：０＝通常；１＝グルコース不耐性；２＝ＣＦＲＤ。それぞれの痰試料の一部は、ＣＨＫＤの臨床微生物学研究所での微生物学的検査のために送られて、有機体が記録された。有機体は、緑膿菌、黄色ブドウ球菌、バークホルデリア・セパシア複合体、またはカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属が存在するか、また非存在であるかについて分類された。来診の時点での患者の薬物療法も記録された。全身性コルチコステロイド、吸入コルチコステロイド、アジスロマイシン、吸入抗生物質、または全身性抗生物質（アジスロマイシンを除く）が存在するか、また非存在であるかについて、薬物療法を分類した。

方法：ＥＬＩＳＡ及びウエスタンブロット
痰ゾル中のＣ５ａ濃度は、Ｃ５ａ ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して定量化された。痰ゾルからのＣ３ａ及びＣ４ａは、両方とも、それぞれのＥＬＩＳＡキット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定された。結合Ｃ３フラグメントは、全Ｃ３ ＥＬＩＳＡを使用して決定された。簡単に言うと、ヤギ抗ヒトＣ３抗体（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して、前夜に平底Ｉｍｍｕｌｏｎ－２プレートをコートした。次いで、プレートを、ＰＢＳＴ（０．１％ ＴＷＥＥＮを含むＰＢＳ）で洗浄し、３％ ＢＳＡ／ＰＢＳによって２時間ブロックし、再び洗浄し、続いて、ブロック緩衝液中で試料及び純粋Ｃ３標準（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）の添加を１時間行った。プレートを洗浄し、ニワトリ抗ヒトＣ３抗体（Ｓｉｇｍａ）と１時間インキュベーションし、再び洗浄し、そしてヤギ抗ヒワトリＨＲＰ抗体（Ｇｅｎｗａｙ）とインキュベーションした。プレートは、ＴＭＢ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって顕色させて、２．５Ｎ Ｈ_２ＳＯ_４で停止させた［Ｈａｉｒ ＰＳ，Ｅｃｈａｇｕｅ ＣＧ，Ｒｏｈｎ ＲＤ，ｅｔ ａｌ．“Ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｉｎｈｉｂｉｔ Ｃ３－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ．”Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ２０１２；１０：３５］。結合Ｃ４フラグメントは、プレートをコートするためのヤギ抗ヒトＣ４抗体、標準としての純粋なＣ４（両方ともＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及び一次抗体としてニワトリ抗ヒトＣ４抗体（Ａｂｃａｍ）を使用することを除いて、Ｃ３と同様のＥＬＩＳＡ法で評価された。

Ｃ５ａフラグメントは、プローブにマウス抗ヒトＣ５ａ抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、それに続いて、ヤギ抗マウスＨＲＰ抗体（Ｓｉｇｍａ）を使用するウエスタンブロットによって分析され、ＥＣＬで検出された。

結果
ＣＦ肺液中で補体アナフィラトキシンが高められたかどうかを評価するために、ＣＦ患者の痰からのＣＦゾルを、それぞれの補体アナフィラトキシンに関して分析し、健康なヒト対照からの痰ゾルと比較した。ほとんどの炎症補体アナフィラトキシンはＣ５ａであり、これは、ＥＬＩＳＡ及びウエスタンブロットによって分析された。ＣＦゾル中の平均Ｃ５ａ濃度は、健康対照の平均と比較して、４．８倍高かった（Ｐ＝０．０４）（図１０Ａ）。Ｃ５ａに対するウエスタンブロットプローブによる定性分析によって、対照と比較して、大量のＣ５ａがＣＦゾルに存在したことが確認された（図１０Ｂ）。Ｃ３ａは、中心的補体成分Ｃ３の活性化の間に生じる補体エフェクターである。ＣＦゾル中の平均Ｃ３ａ濃度は、対照と比較して、４倍高かった（Ｐ＝０．０３）（図１０Ｃ）。Ｃ４ａは、最も効力の低い補体アナフィラトキシンであり、古典経路補体活性化またはレクチン経路補体活性化の間に生じる。ＣＦゾル中の平均Ｃ４ａ濃度は、対照と比較して、２倍高かった（Ｐ＝０．０５）（図１０Ｄ）。これらのデータを合わせると、ＣＦ肺液中の補体アナフィラトキシンの濃度は有意に高くなることを示し、ＣＦ肺液中の有意な補体活性化を示唆する。Ｃ５ａの好中球を動員して、脱顆粒を刺激する潜在的能力［Ｌａｍｂｒｉｓ ＪＤ，Ｓａｈｕ Ａ，Ｗｅｔｓｅｌ ＲＡ．“Ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｃ３，Ｃ４，ａｎｄ Ｃ５．Ｉｎ：Ｖｏｌａｎａｋｉｓ ＪＥ，Ｆｒａｎｋ ＭＭ，（ｅｄｓ）．”Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ；１９９８，８３－１１８；Ｍｏｌｌｎｅｓ ＴＥ，Ｂｒｅｋｋｅ ＯＬ，Ｆｕｎｇ Ｍ，ｅｔ ａｌ．“Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｃ５ａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ Ｅ ｃｏｌｉ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｂｕｒｓｔ ａｎｄ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ ｌｅｐｉｒｕｄｉｎ－ｂａｓｅｄ ｈｕｍａｎ ｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．”Ｂｌｏｏｄ ２００２；１００（５）：１８６９－７７；Ｌａｕｒｓｅｎ ＮＳ，Ｍａｇｎａｎｉ Ｆ，Ｇｏｔｔｆｒｅｄｓｅｎ ＲＨ，ｅｔ ａｌ．“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｃ５ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ．”Ｃｕｒｒ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ２０１２；１２（８）：１０８３－９７］は、実質破壊と関連するＣＦ肺液中の好中球エラスターゼの高濃度にＣ５ａが寄与する可能性があることを示唆した。さらに、ＣＦ肺液中の高濃度のＣ４ａは、ＣＦ肺液中で引き起こされる補体活性化の多くが、古典経路またはレクチン補体経路を介して引き起こされ得ることを示唆した。

実施例１１－嚢胞性線維症肺液における炎症の補体エフェクターの研究－ＣＦ肺液における黄色ブドウ球菌の補体オプソニン化
方法：ＣＦゾルによる黄色ブドウ球菌のオプソニン化
黄色ブドウ球菌菌株Ｒｅｙｎｏｌｄｓは、３７℃で２％ ＮａＣｌ Ｃｏｌｕｍｂｉａブロス中で対数期まで増殖され、ＧＶＢＳ^＋＋（０．１％ゼラチン、０．１５ｍＭ ＣａＣｌ_２、及び１．０ｍＭ ＭｇＣｌ_２を含むベロナール緩衝食塩水）で２回洗浄され、そして１×１０^９細胞／ｍｌまで再懸濁された。等体積の細菌及びＣＦまたは対照ゾルを３７℃で１時間インキュベーションした。細菌を、以前に記載されたとおり、ＧＶＢＳ^－－（０．１％ゼラチン及び０．０１Ｍ ＥＤＴＡを含むＶＢＳ）で洗浄し、次いで、メチルアミンを使用して、結合補体フラグメントを除去した［Ｃｕｎｎｉｏｎ ＫＭ，Ｌｅｅ ＪＣ，Ｆｒａｎｋ ＭＭ．“Ｃａｐｓｕｌｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｐｈａｓｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｔｏ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ．”Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ ２００１；６９（１１）：６７９６－８０３］。

結果
ＣＦ肺液中の補体が病原細菌を十分にオプソニン化することができたかどうかを評価するために、黄色ブドウ球菌のＣＦゾルのオプソニン化を評価した。ＣＦ肺液中で大量の補体活性化がすでに発生していると仮定すると、残りの補体介在宿主防御があったかどうかを決定することは重要であった。黄色ブドウ球菌をＣＦまたは対照ゾルとインキュベーションし、洗浄し、結合Ｃ３フラグメント及び結合Ｃ４フラグメントを除去した。黄色ブドウ球菌は、ＣＦゾル中で強くオプソニン化され、正常対照と比較して、ほぼ同一の平均レベルの結合Ｃ３フラグメントが得られた（図１１Ａ）。黄色ブドウ球菌は、Ｃ４フラグメントによって強く結合され（Ｐ＝０．１３）、正常対照と比較して、ＣＦゾルによる平均Ｃ４フラグメント結合の有意な増加傾向はなかった（図１１Ｂ）。これらの結果は、ＣＦ肺液が、細菌をオプソニン化する通常の能力を維持することを示唆し、このような宿主防御の側面が損なわれていないことを示唆した。これらの結果は、非常に高いアナフィラトキシンレベルによって明白なように有意な補体活性化が生じたにもかかわらず、有意な補体がＣＦ肺液に残ることを示す。これは、持続的炎症と一致する補体活性化及び過多のサイクルを示唆した。Ｃ４フラグメントによる強いオプソニン化は、古典補体経路またはレクチン補体経路が、ＣＦ肺液において活性であり、かつ補体活性化の主要経路であり得ることを示唆した。

実施例１２－嚢胞性線維症肺液における炎症の補体エフェクターの研究－緑膿菌及び黄色ブドウ球菌によるＣＦ肺液中のＣ５ａ発生
緑膿菌は、廃棄された匿名化臨床分離株として得られた。黄色ブドウ球菌で実行されたように、それをＭｕｅｌｌｅｒ Ｈｉｎｔｏｎブロス中で対数期まで増殖し、洗浄し、再懸濁した。両細菌を、７０℃の水浴中で１５分間インキュベーションすることによって、穏やかに熱死滅させた。試料は、細菌が死滅したことを確認するために平板培養した。ＣＦまたは対照ゾルを、等体積の、生存または死滅緑膿菌または黄色ブドウ球菌のいずれかと３７℃で１時間インキュベーションした。その後、試料を１４，０００×ｇで５分間回転させ、上澄みを回収し、Ｃ５ａに関して分析した。等体積のＣＦゾル及びＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）［Ｓｈａｈ ｅｔ ａｌ．“Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｖｉａ ｔｈｅ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｐａｔｈｗａｙ．”Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ２０１４；１２：１８１；Ｍａｕｒｉｅｌｌｏ ＣＴ，Ｐａｌｌｅｒａ ＨＫ，Ｓｈａｒｐ ＪＡ，ｅｔ ａｌ．“Ａ ｎｏｖｅｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ａｎｄ ｌｅｃｔｉｎ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＡＢＯ ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ．”Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１２；５３（１－２）：１３２－９］（５０ｍｇ／ｍｌ）、または対照用食塩水と組み合わせ、室温で３０分間プレインキュベーションした。その後、５×１０^７ＣＦＵの熱死滅緑膿菌を添加し、そして３７℃で３０分間インキュベーションした。次いで、試料を１４，０００×ｇで２分間回転させ、上澄みを回収し、Ｃ５ａ ＥＬＩＳＡで分析した。

ＣＦ肺に一般的に存在する病原細菌に曝露されたＣＦ肺液が、最も炎症性のアナフィラトキシンであるＣ５ａを新規に生じたかどうかを評価するために、ＣＦゾルを、生存及び死滅緑膿菌及び黄色ブドウ球菌とインキュベーションした。感染したＣＦ肺に両形態が存在する可能性が高いため、それぞれの細菌の生存及び死滅バージョンを試験した。さらに、生存細菌によって生じる可能性のある分泌因子または適応変化もＣ５ａ発生を変更することになる。細菌とのインキュベーションの前及び後、新規Ｃ５ａが発生したかどうかを決定するためにＣＦ中のＣ５ａ濃度を測定した。生存または死滅緑膿菌とのＣＦゾルのインキュベーションによって、Ｃ５ａ発生の２．３倍（Ｐ＝０．０２）の平均増加がもたらされる。同様に、生存または死滅黄色ブドウ球菌とのインキュベーションによって、Ｃ５ａ発生の２．４倍（Ｐ＝０．０２）の平均増加がもたらされる（図１２Ａ）。これらのデータは、生存または死滅黄色ブドウ球菌の間ではなく、生存または死滅緑膿菌の間のＣ５ａ発生における差異（Ｐ＝０．０５）を示した。生存または死滅緑膿菌曝露の間のこの関係は、異なるＣＦゾル試料に関して一貫していると考えられた（図１２Ｂ）が、生存または死滅黄色ブドウ球菌曝露の間に一貫した関係はなかった（図１２Ｃ）。これらのデータは、緑膿菌及び黄色ブドウ球菌は、両方ともＣＦ肺液中で高炎症性Ｃ５ａアナフィラトキシンの強固な生成を引き起こすことを示し、ＣＦ肺におけるこれらの細菌の存在が、炎症の増強及びそれに続いて宿主組織の損傷を引き起こし得ることを示唆した。緑膿菌は、死滅緑膿菌と比較して、ＣＦ肺液中のＣ５ａ発生を調節するいくらかの能力を有し得る。

緑膿菌がそれによってＣ５ａ発生を活性化すると考えられる補体経路を評価するために、古典補体経路活性化及びレクチン補体経路活性化の阻害剤が試験された。補体Ｃ１のペプチド阻害剤は、補体活性化の古典経路及びレクチン経路の小ペプチド阻害剤であり、ＣＦゾルは、緩衝液単独で、死滅緑膿菌と、またはＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）及び死滅緑膿菌と、インキュベーションされた（図１２Ｄ）。死滅緑膿菌は、緩衝液単独でのＣＦゾルのインキュベーションと比較して、Ｃ５ａ濃度を１．６倍増加した。ＣＦゾルへのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）の添加によって、緑膿菌によるＣ５ａ発生（Ｐ＝０．００１）が、ＣＦゾル単独とは有意に異ならないレベル（Ｐ＝０．２２）まで減少した。したがって、古典／レクチン経路阻害剤の添加は、緑膿菌によるＣ５ａ発生を阻害し、緑膿菌が、古典補体経路またはレクチン補体経路を介して補体及びＣ５ａ発生を活性化することを示唆した。この知見は、高いＣ４ａレベル及び強いＣ４フラグメントオプソニン化と一致した。

実施例１３－嚢胞性線維症肺液における炎症の補体エフェクターの研究－臨床的特徴と補体アナフィラトキシンとの相関関係
方法：Ｃ５ａ／Ｃ３ａによる臨床測定及び研究室データの統計的分析
データは、ＳＡＳ ９．４（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃａｒｙ，ＮＣ）及びＳＰＳＳ １９（ＳＰＳＳ Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）ソフトウェアを使用して分析された。有意水準は０．０５に設定された。Ｃ５ａレベル、Ｃ３ａレベル、及び臨床測定のために適切であるＰｅａｒｓｏｎ相関係数及びＳｐｅａｒｍａｎ相関係数が報告された。記述統計は、臨床測定値によって階層化されたＣ５ａレベル及びＣ３ａレベルに関して報告された。Ｃ５ａレベルと、Ｃ３ａレベルと、臨床測定値との間の相関関係を判定するために適切である単純線形回帰及びＭａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ試験を使用した。ＦＥＶ１％の多可変線形回帰モデルを使用して、Ｃ５ａレベルとＣ３ａレベルとの相関関係を判定した。

中央値、四分位数、及び第９０の百分位数は、ＰＳＩプロットを使って計算された。平均値及び平均値の標準誤差（ＳＥＭ）は、独立した実験から計算された。０．０５に設定された有意水準で適切であるスチューデントｔ検定を使用して、統計的比較を行った。

結果
ＣＦ痰試料は、１５人の患者から回収された。これらの１５人の対象の臨床的特徴は表９で示される。対象は、２～６５歳の広い年齢範囲に及び、年齢中央値は１９歳であった。予測されたＦＥＶ１％中央値は５９であり；小児（ｎ＝７）ではＢＭＩ中央値は４８％であり、成人（ｎ＝４）ではＢＭＩ中央値は２３．８７ｍｇ／ｋｇ^２であった。痰サンプリングの時点で回収された臨床データは、予測されたＦＥＶ１％、ＢＭＩパーセンテージ（小児）、気管支拡張、ＣＦＲＤステータス、痰から培養された病原微生物ならびに薬剤（すなわち、コルチコステロイド、アジスロマイシン、及び抗生物質）を含む広範囲の測定に関して得られた。統計的相互関係は、アナフィラトキシンと、Ｃ５ａと、Ｃ３ａと、臨床測定値との間で評価された。表１０を参照のこと。図１３Ａで示されるように、高炎症性Ｃ５ａの濃度増加は、年齢増加と正の相関関係を示した（ｒ＝０．５３、Ｐ＝０．０４）。図１３Ｂで示されるように、Ｃ５ａ濃度の増加は、小児においてＢＭＩパーセンタイルと逆相関関係を示した（ｒ＝－０．７７、Ｐ＝０．０４）。図１３Ｃで示されるように、Ｃ３ａレベルの増加は、予測されたＦＥＶ１％の増加と正の相関関係を示した（ｒ_ｓ＝０．６３、Ｐ＝０．０２）。痰から回収された微生物（すなわち、緑膿菌、バークホルデリア・セパシア、黄色ブドウ球菌、または酵母）、コルチコステロイド、アジスロマイシン、または抗生物質は、Ｃ５ａまたはＣ３ａのレベルと相関関係を示さなかった。これらの結果は、Ｃ５ａ濃度の増加は、小児においてＢＭＩパーセンタイルの減少と相関関係を示し、肺液中の補体炎症性Ｃ５ａの増加が、ＣＦの小児におけるより低い全体的な健康と関連し得る示唆した。Ｃ３ａレベルは、予測されたＦＥＶ１％と正の相関関係を示し、ＣＦ肺機能におけるＣ３ａからの潜在的保護効果を示唆した。

（表９）ＣＦ対象の特徴

（表１０）補体エフェクター及び臨床測定値の相関係数

気管支拡張スコア: 0 = 通常; 1 = 1ローブ, 穏和; 2 = 2～4ローブ; 3 = 全ローブ
CFRDスコア: 0 = 通常; 1 =グルコース不耐性; 2 = CFRD
^aPearson相関係数
^bSpearman相関係数

実施例１４－Ｃ１ｑ受容体とＣ１ｑとの相互作用の調整－カルレティキュリン受容体への結合
方法
ＰＡがカルレティキュリン受容体への結合を阻害することを実証するために、次の実験が実行された。組換型カルレティキュリンまたはＢＳＡ（負の対照）を使用して、マイクロタイタープレートをコートした。次いで、単独でプレートに添加されたＣ１ｑは、ＰＡペプチド（配列番号：３）の量を増加させてインキュベーションし、次いで、カルレティキュリンへの結合に対して評価した。負の対照として、Ｃ１ｑを結合しない１５アミノ酸ペプチド（ＣＰ２）が使用された。

Ｒａｊｉ細胞と標識Ｃ１ｑとの相互作用は、共焦点顕微鏡法によって試験された。標識Ｃ１ｑをＲａｊｉ細胞に添加した。１．４１２５×１０^６細胞／ｍｌを４％パラホルムアルデヒドで５分間定着させ、４℃で一晩貯蔵した。１×１０^５細胞を１：４０ Ｃ１ｑ ４８８で２０分間染色し、２回洗浄し、ＤＡＰＩ封入剤で染色し、４℃で一晩貯蔵した。

Ｒａｊｉ細胞に添加する前に、ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）は、２つの異なる濃度で、Ｃ１ｑとプレインキュベーションされた。１．４１２５×１０^６細胞／ｍｌを４％パラホルムアルデヒドで５分間定着させ、４℃で一晩貯蔵した。１×１０^５細胞を１：４０ Ｃ１ｑ ４８８及び１．４５ｍｇ／ｍｌのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）（１：２０の２９ｍｇ／ｍｌ）または２．９ｍｇ／ｍｌのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）（１：１０の２９ｍｇ／ｍｌ）で２０分間染色し、２回洗浄し、ＤＡＰＩ封入剤で染色し、４℃で一晩貯蔵した。

結果
ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）は、生体外アッセイで、特定のＣ１ｑ細胞受容体（カルレティキュリン／ｃＣ１ｑＲ）へのＣ１ｑの結合を阻害し、Ｒａｊｉ細胞（Ｃ１ｑ受容体とＣ１ｑとの相互作用を評価するために使用される不死化Ｂリンパ球細胞系）へのＣ１ｑの結合も阻害した。

カルレティキュリンでコートされたプレートにＣ１ｑを添加したところ、その結果は、Ｃ１ｑが、予期されたように、ＢＳＡではなく、カルレティキュリンに特異的に結合することを示した（図１５）。プレートが、Ｃ１ｑ、カルレティキュリン及びＢＳＡでコートされた場合、ＰＡペプチド（配列番号：３）はＣ１ｑに特異的に結合し、ＰＡとの相互作用は、カルレティキュリンまたはＢＳＡではなく、Ｃ１ｑに対して特異的であった（図１４Ａ）。Ｃ１ｑが、増加量のＰＡペプチド（配列番号：３）とともにインキュベーションされ、次いで、カルレティキュリンへの結合に関して評価される場合、ＰＡは、用量依存的にカルレティキュリンへの結合を阻害した（図１６）。負の対照として、Ｃ１ｑを結合しない１５アミノ酸ペプチド（ＣＰ２）は、カルレティキュリンへのＣ１ｑの結合の競争的阻害を示さなかった（図１６）。さらに、精製されたカルレティキュリン（図１４Ｂ）及びＲａｊｉ細胞（図１４Ｃ～Ｄ）へのＣ１ｑの結合を阻害するＰＡ（配列番号：３）は、表面ＣＲＴへのＣ１ｑの結合の阻害と一致する。実験構成は、図１４Ｅに示される。

Ｒａｊｉ細胞と標識Ｃ１ｑとの相互作用は、共焦点顕微鏡法によって調査された。図１７Ａ～Ｃで示されるように、標識Ｃ１ｑ（ＦＩＴＣ）は、Ｒａｊｉ細胞（ＤＡＰＩ）に結合した。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）が２つの異なる濃度で、Ｃ１ｑとプレインキュベーションされた場合、Ｒａｊｉ細胞に結合した標識Ｃ１ｑの量は有意に減少するが（図１８Ａ～Ｃ及び１９Ａ～Ｃ）、このことは、（配列番号：２１）が、これらの細胞へのＣ１ｑの結合を阻害することを実証する。理論によって拘束されないが、（配列番号：２１）は、細胞表面上でのＣ１ｑ受容体（複数可）とＣ１ｑとの相互作用を崩壊させることによって、Ｃ１ｑの結合を阻害したと推測された。

実施例１５－ペプチド化合物は、新生児低酸素虚血性脳障害のラットモデルにおいて脳障害を有意に減少させた
方法
Ｐ１０ウィスターラットの仔に対して、一側性右頚動脈結紮（Ｖａｎｎｕｃｃｉモデル）行い、それに続いて８％低酸素に曝露させた。実験動物に、１５０ｍｇ／ｋｇのＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）を腹腔内注入した。対照には、（１）補体を枯渇させるためのコブラ毒因子（ＣＶＦ）注入、及び（２）６時間の治療低体温法が含まれる。動物は、介入後４、８、１６及び４８時間において採取された。ラット血漿においてＣＨ５０アッセイを実行し、全身性補体活性を測定した。イメージＪソフトウェアを使用して、採取した脳組織を２％ＴＴＣで染色することによって、脳梗塞量を測定した。

結果
全身性補体活性は、予期されたように、ＣＶＦが注入された動物において注入後７２時間でほとんど完全に排除された。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）群において、全身性補体活性は、注入後０．５時間で７０％減少し、その後、８時間かけて次第にベースラインまで戻った（図３０）。頚動脈結紮後の低酸素によって、２０％の梗塞がもたらされた。結紮／低酸素前のＣＶＦ注入によって、ほぼ完全に脳障害が軽減された。ＨＴは、梗塞を５０％低減する。ＰＡ－ｄＰＥＧ２４（配列番号：２１）による注入は、可変的な神経保護を示し、平均で４０％の梗塞の減少がもたらされた（図３１）。理論によって拘束されないが、配列番号：２１は、４８時間まで脳におけるＣ１ｑ沈着を減少させることによって、治療低体温法の神経保護効果を模倣し得る。脳障害後、４、１２、２４時間において、未治療のＨＩＥ対照（正常体温－ひし形）と比較した場合、配列番号：２１治療群（正常体温＋ＰＩＣ１（配列番号：２１）－三角形）において、有意に少ないＣ１ｑ沈着が生じた（図３２Ａ）。

配列番号：２１は、ＨＩＥ後の神経保護の組織学的証拠も示した。ＨＩＥの５日後の脳組織診断は、治療低体温法に類似した配列番号：２１の神経保存作用を示した。神経破壊は、配列番号：２１で治療された場合は減少し、治療によって脳における生存細胞が増加した（図３２Ｂ）。例えば、図３２Ｂにおいて、パネルＡ～Ｄは、クレジルバイオレット染色を示す。クレジルバイオレットは、神経細胞におけるニッスル物質を染色する。ＨＩＥ群（パネルＢ）は、配列番号：２１群（パネルＤ）と比較して、クレジルバイオレット染色の有意な減少を示しており、治療低体温法（パネルＣ）に類似した配列番号：２１の神経保存作用を示す。パネルＥ～Ｈは、ヘマトキシリン染色及びエオシン染色を示す。ヘマトキシリン染色及びエオシン染色は、配列番号：２１（パネルＨ）で治療されたものと比較した場合、ＨＩＥ脳におけるより高度の神経破壊（壊死、凝縮及び核崩壊）（パネルＥ、Ｆ、及びＧ）を示した。パネルＩ～Ｌは、アクリジンオレンジ染色を示す。アクリジンオレンジは、脳の生存可能な部分を明るい緑色に染色する。ＨＩＥは、脳におけるアクリジンオレンジ染色を有意に減少する（パネルＪ）。配列番号：２１治療によって、アクリジンオレンジ染色が回復し、脳におけるより多くの生存細胞の存在を示す（パネルＬ）。

組織学的神経保護も、ＨＩＥ後の機能的改善に変換した。ＨＩＥ後１～７日における負の走地性試験において、ＰＩＣ１（配列番号：２１）を注入された動物は、正常体温ＨＩＥ動物（図３２Ｃ、赤色バー）より有意に良好に機能した（図３２Ｃ、緑色バー）。負の走地性試験は、金網上で頭を下にして置いたときに、動物の仔がはい上がるのに要する時間を測定する生得的逃避反応試験である。

このデータは、長期の全身性補体枯渇が生じることなく、配列番号：２１が脳梗塞量を減少させることができ、そしてＨＩＥ後の機能的な結果を改善したことを示した。いかなる理論にも拘束されないが、配列番号：２１は、脳におけるＣ１ｑ沈着を減少させ得る。いくつかの実施形態において、配列番号：２１は、ＨＩＥにおける神経学的転帰を改善するための、ＨＴの有用な補助治療である。

実施例１６－ＰＩＣ１は、単純ヘルペスウイルス１型及び単純ヘルペスウイルス２型の複製を阻害した
ＣＶ－１細胞をＨＳＶ－１－ＧＦＰで１６時間感染させた。感染後、ＣＶ－１細胞はフローサイトメトリーによって検出された（図３３）。非感染性細胞（負の対照、ＧＦＰ－）は左側ピークをもたらすが、感染細胞（ＧＦＰ＋）のピークは右にシフトすることになる。ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）が感染前にＣＶ－１細胞に添加される場合、用量依存的様式でウイルス感染を阻害した。アシクロビル（重症ＨＳＶ－１感染症のケアの標準）も、同モル比で対照として添加された。アシクロビルは、ＨＳＶ－１複製を有意に阻害することが可能であるが、ＧＦＰ＋細胞小集団によって示されるように、複製を完全に阻害することは不可能であった。これは、４～５ｍＭのＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）においてＧＦＰ＋細胞の検出がなかったＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）とは対照的であった。加えて、ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）及びアシクロビルは、ＣＶ－１細胞において最小毒性を示し、このことは、ウイルス複製の阻害が細胞死によるものではないことを示した（図３３）。ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）は、用量依存的様式でＨＳＶ－２の複製も阻害した（図３４）。

実施例１７－ペプチド化合物は、Ｌ．アシドフィルス及びＬ．ライヒマニの増殖を促進した
有益な共生生物ラクトバチルスを死滅させないＰＩＣ１の能力は（図３５で示されるように）、この抗生物質の安全性を大きく増強する。抗生物質は、正常な腸管内菌叢を死滅させるため、現在の抗生物質の最も一般的な副作用は、抗生物質と関連する下痢及び酵母感染症である。中でも、最も重篤な抗生物質の副作用は、生命を脅かし、しばしば再発性であるクロストリジウム・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）腸炎である。図３５は、ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）が、用量依存的様式で、ラクトバチルスの増殖を促進することができることを示す。

実施例１８－ＰＩＣ１は、抗微生物活性を有した
いくつかのＰＩＣ１ペプチドは、広範囲の細菌性病原体に対する抗菌薬であった。例えば、（ＡＦ１、配列番号：２１としても知られている）ＰＡ－ｄＰＥＧ２４は、（図３６Ａで示されるように）用量依存的様式で、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、及び肺炎桿菌の増殖を阻害することが示された。さらに、緑膿菌増殖（図３６Ｂ）は、ＰＩＣ１（ＡＦ１－５）ペプチド（配列番号：７、８、１２、及び２１）の５種の変異体によって抑制された。ＰＩＣ１（配列番号：２１）の抗菌活性は、共焦点顕微鏡法によってさらに確認され、ＰＩＣ１ペプチドが黄色ブドウ球菌細菌の表面層に結合したことが示された（図３６Ｃ）。

いくつかの実施形態において、ペプチド化合物は、培養液中の淋菌増殖を阻害した。ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）は、２０ｍｇ（図３７Ａ）または３０ｍｇ（図３７Ｂ）のＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）で淋菌増殖を減少し、０～３０ｍｇ／ｍｌのＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）の用量依存的阻害を示した（図３７Ｃ）。さらに、ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）と一緒に、またはなしでインキュベーションされた淋菌からのコロニー数は、３０ｍｇ／ｍｌのＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）で処理された淋菌コロニーの実質的な減少を示した。

結論として、このデータは、配列番号：２１、５、６、７、及び８が、それぞれ、広範囲の細菌性病原体に対して抗菌活性を有することを示す。

実施例１９－ＰＩＣ１は、好中球のミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性を阻害した
ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）は、急性炎症において、侵入微生物及び宿主細胞に同様に損傷を与える次亜塩素酸塩（漂白剤）を産生する、好中球からの酵素である。この酵素は、嚢胞性線維症（ＣＦ）及び低酸素虚血性脳障害（ＨＩＥ）において宿主組織に対して破壊的であることが知られている。ＰＩＣ１（配列番号：２１）は、嚢胞性線維症（ＣＦ）患者から単離された痰試料（ゾル）においてＭＰＯ活性を阻害することが見出された。（図３８で示されるように）ＣＦゾル試料を、２０ｍｇ／ｍｌのＰＩＣ１（配列番号：２１）の存在下または不在下で３０分間インキュベーションし、続いて、室温で３０分間、ＴＭＢの添加を行った。次いで、ＭＰＯ活性は、４５０ｎｍで分光光度計でＴＭＢ色変化の検出によって測定された。ＭＰＯ活性は、ＰＩＣ１で処理されたＣＦゾル試料において減少することが見出された。ＣＦ患者の痰中の既存のＭＰＯは、用量依存的様式で、ペプチド化合物によって阻害された酵素活性を有することができた（図３９）。さらに、ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）は、（図４０～４２で示されるように）低酸素虚血性脳障害を受けたラットの脳または脳膜調製物の溶解産物においてＭＰＯ酵素活性を阻害することが可能であった。精製されたヒト好中球の溶解産物に存在するＭＰＯ活性も、（図４２で示されるように）ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）によって直接阻害することができる。図４２は、ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）が、精製されたヒト好中球（ＰＭＮ）の溶解産物においてＭＰＯ活性を用量依存的に阻害することを示す。ＰＭＮ溶解産物は、増加量のＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）の存在下でインキュベーションされた。次いで、ＭＰＯ活性は、４５０ナノメートルで分光光度計でＴＭＢ色変化の検出によって測定された。最終的に、（図４３で示されるように）ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）による精製されたＭＰＯ活性の阻害の滴定によって、ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）が、ＭＰＯを直接阻害できることが実証された。これらの知見は、ＰＩＣ１が、ＣＦ及びＨＩＥの両方に関連する驚くべき抗炎症作用を有することを実証した。これは、配列番号：３～４７が、どのように抗炎症活性を有するかを説明することができる、代替の機構を示す。

実施例２０－急性腎障害及び横紋筋融解症：ペプチド化合物は、フリーラジカルのヘモグロビン産生活性を阻害した
ペプチド化合物は、ヒト赤血球からのヘモグロビン（Ｈｇ）の擬ペルオキシダーゼ活性を阻害した。Ｈｇは、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）のように、タンパク質、核酸及び脂質に影響を与えるペルオキシド反応を触媒することができるヘム基を含むが、これは宿主組織に損傷を与える。Ｈｇの擬ペルオキシド活性は、過酸化水素（Ｈ_２Ｏ_２）とクロモーゲンテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）との間の反応を使用して測定される。酸化したＴＭＢは、分光光度計で読み取り可能な色変化を示す。ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）がＭＰＯペルオキシダーゼ活性を阻害することができると仮定して、同種の実験アッセイで、溶解させたヒトＲＢＣからのＨｇのペルオキシダーゼ活性をＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）が阻害することができたかどうかを試験した。この目的のために、遊離ＨｇをもたらすＲＢＣ溶解産物を、ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）の不在下または存在下で、ＴＭＢとインキュベーションした。図４４で示されるように、ＲＢＣ溶解産物の量が増加すると、吸光度が増加するが、このことは、酸化ＴＭＢ基質の増加を実証する。２０ｍｇ／ｍｌのＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）の存在下、検出可能な酸化ＴＭＢはなかった。図４５において、ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）の量の増加により、酸化ＴＭＢシグナルの用量依存的減少がもたらされた。図４６は、ＲＢＣ溶解産物の量を増加させた場合の酸化ＴＭＢの滴定を示す。増加量のＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）の存在下、酸化ＴＭＢシグナルは、用量依存的に減少する。ヒト循環において遊離Ｈｇの存在をもたらす溶血は、腎臓に有毒であり、急性腎臓毒性及び腎不全をもたらす。したがって、データは、ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）は、遊離ヘモグロビンの放出による溶血及び擬ペルオキシダーゼ活性を減少させることによって、急性腎障害を予防することができることを裏付けた。したがって、ペプチドは、急性腎障害を予防すること、ならびに例えば、鎌状赤血球障害、溶血性輸血反応、自己免疫溶血などの溶血状態を治療または予防することができる。

ＩＶＩＧの活性とＰＩＣ１の活性とを比較するために、動物を、等用量のＩＶＩＧもしくはＰＩＣ１（４０ｍｇ／動物）または生理食塩水対照で予防治療した。異種輸血の前にＩＶＩＧまたはＰＩＣ１を与えた動物の血液に、ＦヒトグリコホリンＡ発現及び結合Ｃ３フラグメントの両方に関する２色フローサイトメトリープロービングを行った。輸血後０．５、５、及び２０分におけるＲＢＣの代表的なフローサイトメトリープロットは、ＩＶＩＧ（図２７Ａ～Ｃ）及びＰＩＣ１（図２７Ｄ～Ｆ）動物に関して示される。図２８Ａは、生理食塩水対照と比較して、ＩＶＩＧまたはＰＩＣ１を予防のために与えた動物の遊離Ｈｂとして測定された溶血を示す。輸血後３０秒において、ＰＩＣ１治療動物では、ＩＶＩＧ治療動物と比較して、Ｃ３陰性ヒトＲＢＣ数が増加し（ｐ５ ０．０５）、Ｃ３オプソニン化ヒトＲＢＣが３．６分の１（ｐ５ ０．０４）に減少したことが実証された（図２８Ｂ）。輸血後３０秒において、ＰＩＣ１治療動物では、ＩＶＩＧ動物と比較して、非ヒト（グリコホリンＡ－陰性）ＲＢＣのＣ３オプソニン化の減少（ｐ５ ０．０８）の傾向を示した（図２８Ｃ）。２０分における全生存ヒトＲＢＣは、ＩＶＩＧ治療動物と比較して、ＰＩＣ１治療動物に関して、１．６倍増加した（ｐ５ ０．０３）（図２８Ｄ）。

血管内毒性遊離Ｈｂが急性腎障害を引き起こすかどうかを確認するために、動物を輸血後６時間監視した。ＩＶＩＧ予防群における３匹の動物のうち２匹、及び生理食塩水群における４匹の動物のうちの３匹が、肉眼的血尿を示すことがわかったが、ＰＩＣ１によって治療された動物の尿は正常であるように見えた。剖検において、ＩＶＩＧ群の腎臓は、ＰＩＣ１によって治療された群の正常に見える腎臓と比較して、より暗色であり、かつ肥大しているように見えた（図２９Ｂ）。個々に腎臓重量を測定したとき、生理食塩水群は、ＰＩＣ１を与えられた動物と比較して、重量の有意な増加を示し（ｐ５ ０．０００１）、ＩＶＩＧ群も、ＰＩＣ１を与えられた動物と比較して、重量の有意な増加を実証し（ｐ５ ０．００５）、浮腫状腎臓と一致した（図２９Ａ）。病理組織診断セクションによって、ＰＩＣ１動物に関する、わずかな浮腫があるが他は健康な腎臓構造（ＰＩＣ１予防、図２９Ｃ、ｖ及びｖｉ）と比較して、生理食塩水投与動物及びＩＶＩＧ治療動物は、核及び核物質の消失ならびに管浮腫によって示されるように、早期急性尿細管壊死があること（生理食塩水、図２９Ｃ、ｉ～ｉｉ；ＩＶＩＧ予防、図２９Ｃ、ｉｉｉ～ｉｖ）が明らかにされた。まとめると、これらのデータは、ＰＩＣ１が、輸血された不適合ＲＢＣの溶血を阻害し、その後の遊離Ｈｂ関連急性腎障害を予防することを実証した。

横紋筋融解症は、挫滅、特定の感染症、特定の薬物療法の使用、発作及び他の事象に起因する直接的または間接的筋肉障害によって引き起こされる重度の症候群である。結果として生じる組織への障害は、筋肉組織に見出される酸素結合タンパク質であるミオグロビンの血流中への放出を引き起こす。ミオグロビンは腎臓に有害であり、現在のところ、横紋筋融解症の治療法はない。ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）が、ヘモグロビン（Ｈｇ）の擬ペルオキシダーゼ活性を阻害することができるという発見は、ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）が横紋筋融解症の治療において有効であることを示す。ヘモグロビンはミオグロビンに類似しているため、ヘモグロビンを阻害するＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）の能力は、ミオグロビンのペルオキシダーゼ活性を阻害することに有効であることを示唆する。

実施例２１－ＰＩＣ１ペプチド及び変異体の有毒性データ
最大送達可能用量及び有効量範囲の上限の両方に関する、ラットにおけるＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）による単一用量毒性試験を実行した。治療群における、最大送達可能用量（ＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１）の最大達成可能濃度（静脈内６０ｍｇ［２４０ｍｇ／ｋｇ］によって限定される）及び送達可能体積に関して、１４日間、６匹の動物において複数回の血液採取を実行した。最初の２４時間、４８時間、７日目、または１４日目にわたっての血液試験（ＣＢＣ及び完全血液化学）において、毒性は認められなかった。最初の２４時間で行われた複数回の血液採取のため、４８時間において、ヘモグロビンのわずかな低下が認められる。脳、心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓、及び膵臓において、正常組織像が見出された。この実験に関する最も関連がある血液パラメーターを表１１に示す。

（表１１）最大送達可能PIC1: 毒性学

その後、有毒性試験を、治療範囲の上限（静脈内４０ｍｇ［１６０ｍｇ／ｋｇ］のＰＡ－ＰＥＧ２４（配列番号：２１））における高用量を使用して、より多数の動物（治療群においてｎ＝１８）で実行した。８匹の動物を３日目に屠殺し、そして１０匹を１４日目に屠殺した。血液化学アッセイ結果（ＣＢＣ、ｓｕｐｅｒｃｈｅｍ及び凝固）によって、予備治療、３日目、または１４日目の値の間の差異がないことを示した（表１２）。いずれの時点においても、（脳、心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓、及び膵臓を含む）いずれの器官においても毒性の組織学的証拠はなかった。したがって、配列番号：２１の単一用量毒性評価によって、安全性に関する懸念がないことが明らかになった。

（表１２）高用量PIC1: 毒性学

Claims (6)

1. それを必要とする対象において細菌感染症を治療するための医薬組成物であって、配列番号：５、６、７、および８からなる群より選択される合成ペプチドの治療有効量を含む、組成物。
2. 前記細菌感染症が、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、及びガードネレラ（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ）種からなる群より選択される細菌によって引き起こされる、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 前記細菌感染症が、グラム陽性菌またはグラム陰性菌によって引き起こされる、請求項１に記載の医薬組成物。
4. 前記組成物が、少なくとも１種の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
5. 配列番号：５、６、７、および８からなる群より選択される合成ペプチド。
6. 治療有効量の請求項５に記載の合成ペプチド及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、医薬組成物。

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