JP6974980B2 - 細胞処理試薬及び顕微鏡標本を作製する方法 - Google Patents
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Description
特に臨床細胞診検査は、病理組織検査に比べ検体の採取に制約が少なく、広範な対象に適用できる。更に患者に対する負荷が軽く、標本作製が簡便・安価であること等の理由から集団検診、日常検査、精密検査等の広範囲において各種疾患の鑑別や疾患の程度の判定、治療効果の判定、経過観察等のために行われる。
増粘多糖類としては、ヒドロキシプロピルセルロースが好ましく、ヒドロキシプロピルセルロース濃度は、0.01w/v%〜1.0/v%が好ましい。
上記細胞処理試薬には、グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドをさらに含んでもよい。グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド濃度は、0.002w/v%〜0.1w/v%が好ましい。本発明の細胞処理試薬は、既固定細胞を含む検体を処理することにより、細胞の剥離、乾燥がほとんどなく、固定、塗抹、染色性が均一な優れた標本を作製することができる。なお、上記ヒドロキシプロピルセルロース濃度及びグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド濃度を、当業者は、検体の種類や状態、染色方法等に応じて任意に変更可能である。例えば、血液や細胞塊を含む検体の場合には、高い濃度のヒドロキシプロピルセルロースやグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドを使用することにより、剥離等なく標本を作製することができる。
上記細胞処理試薬に含まれるポリエチレングリコールは、重量平均分子量400〜4000のものが好ましい。
また、未固定の体液サンプル、例えば、尿を簡便に固定処理して、低コストで短時間に細胞の剥離、乾燥がほとんどない、固定、塗抹、染色性が均一な優れた標本を作製できる。
細胞処理試薬に含まれるアルコール濃度は、検体の種類、形状、検体に含まれる細胞の量によって、任意に変更可能である。例えば、検体と混合後の濃度として、約10〜70v/v%、好ましくは約20〜50v/v%とすることができる。
細胞処理試薬に含まれるPEG濃度は、最終濃度として、約1〜10w/v%とすることができ、例えば、2〜3w/v%とすることができる。
子宮頚部の擦過ブラシ検体を市販の固定液(LBC固定液、ThinPrep(登録商標)、ホロジックジャパン株式会社製)に入れて懸濁し、そのうち約2mlをサンプル液とした。このサンプル液に、PEG1500、Klucel(商標)ヒドロキシプロピルセルロース(アシュランド スペシャルティ イングリーディエンツ(ASI)社製)及びグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド(三晶株式会社製、製品名JAGUAR C−162)、エタノール(武藤化学株式会社製、病理染色用エタノール100)を含む試薬2mlを加えて遠心操作した。ピペットを用いて、得られた沈渣をスライドガラスに塗りつけ、乾燥後、パパニコロウ染色をした。
混合液の組成は、以下の通りである。PEG1500、ヒドロキシプロピルセルロース及びグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドは、最終濃度がそれぞれ、3w/v%、0.1w/v%、0.01w/v%となるように蒸留水で希釈した。エタノールは、最終濃度が0v/v%、10v/v%、20v/v%、30v/v%、40v/v%又は50v/v%となるように添加した。
作成したスライドの写真を図1に示す。図1中、左から、エタノールの最終濃度が0v/v%、10v/v%、20v/v%、30v/v%、40v/v%又は50v/v%である。
サンプルのスライドガラスからのはがれ難さ、顕微鏡下における見易さ(顕鏡容易性、染色性、細胞の散在性、細胞の鮮明さ)、総合評価を表1にまとめた。
尿を遠心操作して得られた沈渣1滴と、2mlの下記の試薬を混ぜ合わせ、30分静置して固定した。その後さらに遠心操作し、得られた沈殿物をスライドガラスに塗沫し、パパニコロウ染色をした。
試薬の組成は、以下の通りである。PEG1500、ヒドロキシプロピルセルロース及びグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドは、最終濃度がそれぞれ、3w/v%、0.1w/v%、0.01w/v%となるように蒸留水で希釈した。エタノールは、最終濃度が0v/v%、10v/v%、20v/v%、30v/v%、40v/v%又は50v/v%となるように添加した。
作成したスライドの写真を図2に示す。図2中、左から、エタノールの最終濃度が0v/v%、10v/v%、20v/v%、30v/v%、40v/v%又は50v/v%である。
サンプルのスライドガラスからのはがれ難さ、顕微鏡下における見易さ(顕鏡容易性)、総合評価を表2にまとめた。
実施例1同様に作成した約2mlのサンプル液に、試薬2mlを加え混合液として遠心操作した。ピペットを用いて、得られた沈渣をスライドガラスに塗りつけ、パパニコロウ染色をした。
サンプルと試薬の混合液の組成は、以下の通りである。エタノール、PEG1500及びヒドロキシプロピルセルロースは、最終濃度がそれぞれ、50v/v%、2w/v%、0.05w/v%となるように蒸留水で希釈した。グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドは、最終濃度が0w/v%、0.005w/v%、0.01w/v%、0.015w/v%又は0.02w/v%となるように添加した。
作成したスライドの写真を図3に示す。図3中、左から、グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドの最終濃度が、0w/v%、0.005w/v%、0.01w/v%、0.015w/v%又は0.02w/v%である。
サンプルのスライドガラスからのはがれ難さ、顕微鏡下における見易さ(顕鏡容易性)、総合評価を表3にまとめた。
実施例2同様に尿を遠心操作して得られた沈渣1滴と、2mlの下記の試薬を混ぜ合わせ、30分静置して固定した。その後さらに遠心操作し、得られた沈殿物をスライドガラスに塗沫し、パパニコロウ染色をした。
試薬の組成は、以下の通りである。エタノール、PEG1500及びヒドロキシプロピルセルロースは、最終濃度がそれぞれ、50v/v%、2w/v%、0.05w/v%となるように蒸留水で希釈した。グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドは、最終濃度が0w/v%、0.005w/v%、0.01w/v%、0.015w/v%又は0.02w/v%となるように添加した。
作成したスライドの写真を図4に示す。図4中、左から、グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドの最終濃度が、0w/v%、0.005w/v%、0.01w/v%、0.015w/v%又は0.02w/v%である。
サンプルのスライドガラスからのはがれ難さ、顕微鏡下における見易さ(顕鏡容易性)、総合評価を表4にまとめた。
実施例2同様に尿を遠心操作して得られた沈渣1滴と、2mlの下記の試薬を混ぜ合わせ、30分静置して固定した。その後さらに遠心操作し、得られた沈殿物をスライドガラスに塗沫し、パパニコロウ染色をした。
試薬の組成は、以下の通りである。エタノール、PEG1500及びグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドは、最終濃度がそれぞれ、50v/v%、2w/v%、0.015w/v%となるように蒸留水で希釈した。ヒドロキシプロピルセルロースは、最終濃度が0w/v%、0.005w/v%、0.01w/v%、0.05w/v%又は0.1w/v%となるように添加した。
作成したスライドの写真を図5に示す。図5中、左から、ヒドロキシプロピルセルロースの最終濃度が、0w/v%、0.005w/v%、0.01w/v%、0.05w/v%又は0.1w/v%である。
サンプルのスライドガラスからのはがれ難さ、顕微鏡下における見易さ(顕鏡容易性)、総合評価を表5にまとめた。
実施例2同様に尿を遠心操作して得られた沈渣1滴と、2mlの下記の試薬を混ぜ合わせ、30分静置して固定した。その後さらに遠心操作し、得られた沈殿物をスライドガラスに塗沫し、パパニコロウ染色をした。
試薬の組成は、以下の通りである。エタノール及びPEG1500は、最終濃度がそれぞれ、50v/v%、2w/v%となるように蒸留水で希釈した。ヒドロキシプロピルセルロースは、最終濃度が0w/v%、0.005w/v%、0.01w/v%、0.05w/v%又は0.1w/v%となるように添加した。
作成したスライドの写真を図6に示す。図6中、左から、ヒドロキシプロピルセルロースの最終濃度が、0w/v%、0.005w/v%、0.01w/v%、0.05w/v%又は0.1w/v%である。
サンプルのスライドガラスからのはがれ難さ、顕微鏡下における見易さ(顕鏡容易性)、総合評価を表6にまとめた。
実施例2同様に尿を遠心操作して得られた沈渣1滴と、2mlの下記の試薬を混ぜ合わせ、30分静置して固定した。その後さらに遠心操作し、得られた沈殿物をスライドガラスに塗沫し、パパニコロウ染色をした。
試薬の組成は、以下の通りである。エタノールは、最終濃度が50v/v%となるように蒸留水で希釈した。ヒドロキシプロピルセルロースは、最終濃度が0w/v%、0.005w/v%、0.01w/v%、0.05w/v%又は0.1w/v%となるように添加した。なお、この試薬には、PEGは含まれない。
作成したスライドの写真を図7に示す。図7中、左から、ヒドロキシプロピルセルロースの最終濃度が、0w/v%、0.005w/v%、0.01w/v%、0.05w/v%又は0.1w/v%である。
サンプルのスライドガラスからのはがれ難さ、顕微鏡下における見易さ(顕鏡容易性)、総合評価を表7にまとめた。
Claims (9)
- ヒドロキシプロピルセルロース及び/又はグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドを含む細胞診用細胞処理試薬。
- ポリエチレングリコール、並びに、ヒドロキシプロピルセルロース及び/又はグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドを含む細胞診用細胞処理試薬。
- ポリエチレングリコールは、重量平均分子量400〜4000である請求項2に記載の細胞診用細胞処理試薬。
- ヒドロキシプロピルセルロース及びグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドをともに含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の細胞診用細胞処理試薬。
- アルコールをさらに含む、請求項1〜4のいずれか1項に記載の細胞診用細胞処理試薬。
- 細胞浮遊液と、請求項1〜5のいずれか1項に記載の細胞処理試薬とを混合するステップと、
生じた沈渣をスライドガラスに塗抹乾燥するステップと
を含む、細胞診用の顕微鏡標本を作製する方法。 - 細胞診用細胞処理試薬が、ヒドロキシプロピルセルロースを含み、細胞浮遊液と、細胞処理試薬との混合液におけるヒドロキシプロピルセルロース濃度が、0.01〜1.0%w/vである、請求項6に記載の方法。
- 細胞診用細胞処理試薬が、グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドを含み、細胞浮遊液と、細胞処理試薬との混合液におけるグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド濃度が、0.002〜0.1%w/vである、請求項6又は7に記載の方法。
- 細胞浮遊液と、細胞処理試薬との混合液におけるアルコール濃度が、10〜70v/v%%である、請求項6〜8のいずれか1項に記載の方法。
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