JP6925277B2 - アジュバント組成物及び関連する方法 - Google Patents
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Description
本願は、紙の形式とコンピューター可読形式の配列表を含み、その配列表の教示及び内容は、参照により、本明細書に援用される。
−−−−−−−−−−−−−−−−−
1 Luke J,Carnes AE,Hodgson CP,and Williams JA.(2009) Improved antibiotic−free DNA vaccine vectors utilizing a novel RNA based plasmid selection system.Vaccine 27:6454−6559
Luke J,Simon GG,Soderholm J,Errett JS,August JT,Gale M Jr.,Hodgson CP,and Williams JA.(2011a) Coexpressed RIG−I Agonist Enhances Humoral Immune Response to Influenza DNA Vaccine.J Virol 85:1370−1383
Luke J., Vincent JM, Du SX, Whalen B, Leen A, Hodgson CP, and Williams JA.(2011b) Improved antibiotic−free plasmid vector design by incorporation of transient expression enhancers. Gene Ther 18: 334−343
[項1]
a.親油性物質と、
b.アクリル酸またはメタクリル酸のポリマーと、
c.生理食塩水と、
d.コレステロールと、
e.アルコールと、
f.サポニンと、
g.水酸化ナトリウムと、
を含むアジュバント組成物。
[項2]
前記親油性物質がLabrafac(商標)である、上記項1に記載のアジュバント組成物。
[項3]
前記アクリル酸またはメタクリル酸のポリマーがCarbopol(商標)である、上記項1に記載のアジュバント組成物。
[項4]
前記コレステロールが、植物由来のコレステロールである、上記項1に記載のアジュバント組成物。
[項5]
前記アルコールがエタノールである、上記項1に記載のアジュバント組成物。
[項6]
前記サポニンがQuil−Aである、上記項1に記載のアジュバント組成物。
[項7]
前記親油性物質が、約0.01体積%〜約5体積%の量で存在する、上記項1に記載のアジュバント組成物。
[項8]
前記アクリル酸またはメタクリル酸のポリマーが、約0.1体積%〜約3体積%の量で存在する、上記項1に記載のアジュバント組成物。
[項9]
前記コレステロールが、約0.001体積%〜約3体積%の量で存在する、上記項1に記載のアジュバント組成物。
[項10]
前記アルコールが、約0.01体積%〜約3体積%の量で存在する、上記項1に記載のアジュバント組成物。
[項11]
前記サポニンが、約0.001体積%〜約0.5体積%の量で存在する、上記項1に記載のアジュバント組成物。
[項12]
室温において、かつ凍結乾燥したときに、安定している、上記項1に記載のアジュバント組成物。
[項13]
筋内投与、皮下投与、経皮投与、粘膜投与、経口投与及びこれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択した投与経路用に調合されている、上記項1に記載のアジュバント組成物。
[項14]
前記アジュバントを抗原と組み合わせて、ワクチン組成物を形成させる、上記項1に記載のアジュバント組成物。
[項15]
i.アジュバント組成物であって、
a.親油性物質、
b.アクリル酸またはメタクリル酸のポリマー、
c.生理食塩水、
d.コレステロール、
e.アルコール、
f.サポニン及び
g.水酸化ナトリウム
を含む前記アジュバント組成物と、
ii.抗原と、
を含むワクチン組成物。
[項16]
前記親油性物質がLabrafac(商標)である、上記項15に記載のワクチン組成物。
[項17]
前記アクリル酸またはメタクリル酸のポリマーがCarbopol(商標)である、上記項15に記載のワクチン組成物。
[項18]
前記コレステロールが、植物由来のコレステロールである、上記項15に記載のワクチン組成物。
[項19]
前記アルコールがエタノールである、上記項15に記載のワクチン組成物。
[項20]
前記サポニンがQuil−Aである、上記項15に記載のワクチン組成物。
[項21]
前記親油性物質が、約0.01体積%〜約5体積%の量で存在する、上記項15に記載のワクチン組成物。
[項22]
前記アクリル酸またはメタクリル酸のポリマーが、約0.1体積%〜約3体積%の量で存在する、上記項15に記載のワクチン組成物。
[項23]
前記コレステロールが、約0.001体積%〜約3体積%の量で存在する、上記項15に記載のワクチン組成物。
[項24]
前記アルコールが、約0.01体積%〜約3体積%の量で存在する、上記項15に記載のワクチン組成物。
[項25]
前記サポニンが、約0.001体積%〜約0.5体積%の量で存在する、上記項15に記載のワクチン組成物。
[項26]
筋内投与、皮下投与、経皮投与、粘膜投与、経口投与及びこれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択した投与経路用に調合されている、上記項15に記載のワクチン組成物。
[項27]
前記抗原が、非複製型コンピテントであるDNAである、上記項15に記載のワクチン組成物。
[項28]
前記抗原が、プラスミドの形態の非複製型コンピテントDNAである、上記項27に記載のワクチン組成物。
[項29]
プラスミドの形態の前記非複製型コンピテントDNAが、前記ワクチン組成物に、約10μg〜30μgの量で存在する、上記項28に記載のワクチン組成物。
[項30]
室温で、少なくとも18カ月間、保存安定性を有する、上記項15に記載のワクチン組成物。
[項31]
室温で、少なくとも2年間、保存安定性を有する、上記項15に記載のワクチン組成物。
[項32]
凍結乾燥したときに安定している、上記項15に記載のワクチン組成物。
[項33]
a.親油性物質と、
b.アクリル酸またはメタクリル酸のポリマーと、
を含むアジュバント組成物。
[項34]
a.親油性物質と、
b.コレステロールと、
c.サポニンと、
を含むアジュバント組成物。
[項35]
上記項1に記載のアジュバント組成物の投与が必要な動物に、上記項1に記載のアジュバント組成物を1回投与する工程を含む、免疫応答の惹起方法。
[項36]
上記項33に記載のアジュバント組成物の投与が必要な動物に、上記項33に記載のアジュバント組成物を1回投与する工程を含む、免疫応答の惹起方法。
[項37]
上記項34に記載のアジュバント組成物の投与が必要な動物に、上記項34に記載のアジュバント組成物を1回投与する工程を含む、免疫応答の惹起方法。
[項38]
上記項17に記載のワクチン組成物の投与が必要な動物に、上記項17に記載のワクチン組成物を1回投与する工程を含む、免疫応答の惹起方法。
本明細書に示されているいずれの上限値にも、それよりも低いすべての上限値が、本明細書に明示的に書かれているかのように含まれることを理解すべきである。本明細書に示されているいずれの下限値にも、それよりも高いすべての下限値が、本明細書に明示的に書かれているかのように含まれる。本明細書に明示的に示されているいずれの数値範囲にも、その広い数値範囲に含まれるすべての狭い数値範囲が、本明細書に明示的に書かれているかのように含まれる。
この実施例は、本開示の提供するアジュバントの例示的な製造方法を示している。
用いた材料は、下記のとおりであった。
A.Labrafac(商標)Lipophile WL1349(Gattefosseカタログ番号3139)
B.Carbopol(登録商標)974P NFポリマー(Lubrizolカタログ番号CBP974PNF)
C.カルシウムもしくはマグネシウム不含のダルベッコリン酸緩衝化生理食塩水(Cellgroカタログ番号21−031−CV)、または同等物
D.コレステロール、植物由来(Avantiカタログ番号700100P)
E.エタノール、100%溶液(Acrosカタログ番号61509−0010)または同等物
F.Quil−A(Brenntagカタログ精製サポニンQuil−A、凍結乾燥)
G.5N水酸化ナトリウム(VWRカタログ番号BDH3225−1)または同等物
アジュバント06ストックを用いて、Quil A20mLをアジュバント06ストック80mLに加えることによって、Quil Aストックの1:5希釈液を調製し、その希釈液は、旋回によって混合した。次に、コレステロールストック56mLをバルクのアジュバント06ストックに加えた。コレステロールストック56mLを含むこの残りのバルクアジュバント06ストックに、Quil Aの1:5希釈液100mLを加えた。続いて、このアジュバント混合物を約15分混合した。混合しながら、アジュバントを60mL滅菌PETGボトルに50mLずつ無菌分注した。続いて、各ボトルをねじ式トップキャップで密閉した。そして、2年を超えない期間、アジュバント06のボトルを2〜7℃で保存した。
実施例1で上記したように作製する。ただし、Quil Aまたはコレステロールは、この配合物では使用しない。
実施例1で上記したように作製する。ただし、Labrafac(商標)をレシチンに置き換える。
実施例1について上記したように作製する。ただし、Labrofecをレシチンに置き換え、Quil Aまたはコレステロールを加えない。
実施例1について上記したように作製する。ただし、Labrafac(商標)をレシチンに置き換え、コレステロールは、実施例1で記載した濃度が1:10であり、Quil Aの濃度は、実施例1に記載した濃度と同じままである。
これらの調査用の1×ストックを作製するためには、1部の5×ストックアジュバント06を4部の抗原とともに用いるものとして、上記したアジュバント06のストックの量を計算して、抗原と混合できる。この5×ストックを希釈して、2×(1部の5×アジュバント06と2.5部の抗原)または4×(1部の5×アジュバント06と0.25部の抗原)の抗原濃度物を形成することもできる。
この調査の目的は、2つの異なるアジュバント調合物(それぞれ、本開示の別の実施形態)が、ワクチンと使用する際に想定される濃度まで希釈したときに、マウスで試験できるかを判断することであった。
2つの死菌K99 E.coliワクチン(1つはアジュバント添加ワクチンで、1つは、PBS中に調製したワクチン)も、この調査に含めて、抗原を加えた場合に、同じ試験アジュバント調合物のみと比べて、マウスに異なる作用が及ぶのかを判断した。
Charles River Laboratoriesから得た64匹の雌CF−1マウスは、試験物質の投与時には、生後約6週間(44日)であった。受領時、マウスの体重は、平均19グラムであった。0日目、試験物質の投与前に、再度マウスの体重を量ったところ、平均27グラムであった。
アジュバント
アジュバント06(実施例1)−5×
アジュバント06(実施例1)−5×
ダルベッコリン酸緩衝化生理食塩水(DPBS):Cellgro、カタログ:21−031−CV、ロット:21031439 Exp.30Sep16
実施例1のアジュバント06 4×と、K99 piliを発現する死菌E.coliを含むワクチン
PBSと、K99 piliを発現する死菌E.coliを含むワクチン
受領時に、マウスの体重を1度に5匹測定し、各マウスを別々のケージに入れた。1つのケージに入れられたマウスが4匹になるまで、このプロセスを繰り返した。
すべての試験物質の調製は、投与日に無菌で行った。
実施例1で記載したような5×アジュバントストックのボトルを室温まで昇温させてから、少なくとも30回、上下振盪して混合した。4×アジュバントを作るために、該当するアジュバントをDPBSによって1:1.25で希釈し(0.25部のDPBS+1部のアジュバント)、少なくとも30回、上下振盪することによって混合した。調製した試験物質を2つの別の5ml滅菌輸送管に分注し、該当する処置グループのラベルを付けた。
死菌K99+PBSワクチンは、この調査で使用する前に、2〜7℃で保存した。ワクチンボトルを室温まで昇温させ、上下振盪して混合してから、その物質をワクチンバイアルから直接取り出して、該当する処置グループに接種した。
マウスの健康状態を調べてから、試験物質を投与した。2つのケージのマウス(合わせて8匹のマウス)に、各試験物質を0.5ml投与した。後頸部皮下(SC)注射は、3mlのシリンジとともに、25g、5/8”または25g、1”のニードルのいずれかを用いて行った。腹腔内(IP)注射は、3mlのシリンジとともに、25g、5/8”のニードルを用いて行った。すべての投与処置と投与時間を記録した。
マウスの体重は、受領時に、5匹のグループで、卓上秤を用いて測定し、そのグループの平均体重を割り出した。
7日の調査を通じて、少なくとも1日に1回、マウスの健康状態を観察した。健康状態の観察結果は、すべて記録した。
主要変数または評価項目は、7日の調査中における、試験物質に起因する有害事象の有無であった。この変数は、各アジュバントと投与経路について割り出した。記録した観察結果は下記の2つであった。
試験物質の投与時におけるすべてのマウスの平均体重は、26.87gであった。
SC注射によって、アジュバントまたは死菌K99+PBSワクチンのいずれかを接種したいずれのマウスにおいても、7日の調査期間を通じて、副作用は見られなかった。IP注射によって、アジュバントのいずれかを接種した各グループにおける8匹のマウスのうちの少なくとも6匹が、接種後24〜48時間以内に死亡した。IP注射によって、死菌K99+PBSワクチンを接種したマウスのみが、7日の調査期間中、健康を維持した。表5には、調査中に死亡したマウスが示されている。
この調査の結果に基づくと、この試験において、実施例1で説明した4×濃度で試験した5つのアジュバント調合物のいずれかとともに調製したワクチンは、最終生成物を後頸部SC注射によって投与した場合に、9CFR 113.33によるマウス安全性試験に適合できるようである。
実施例1で説明した4×濃度で、アジュバント調合物06、05または01とともに調製したアジュバント添加ワクチンは、使用可能であるとともに、9CFR 113.33に従って試験すると、後頸部皮下注射によって投与した場合に、マウスの安全性を満たす結果をもたらすことができる。
この実施例は、特許請求するアジュバント組成物を鳥インフルエンザH5DNAワクチンとともに用いたときの有効性を示すものである。
この調査では、雄及び雌の病原体未感染のニワトリ160羽を使用した。調査設計は、下記の表6のとおりであった。T01を除く各処置グループに、H5プラスミドDNAロット番号DNA130414TKWIで予防接種を行った。このDNAは、マルチクローニングサイト(MCS)を挟む真核プロモーター(CMV初期プロモーター)とポリA付加終結部位(SVV40)を含むpCIneo(Promega)に由来する骨格DNAである。このプラスミドは、発酵においてプラスミドを増幅中に、真核細胞において選択するための選択マーカーのネオマイシンと、E.coliにおいて選択するためのアンピシリン耐性マーカーを有する。鳥インフルエンザのH5N9 turkey/WI/68分離株に由来する赤血球凝集遺伝子(HA)をこのベクターのMCSにクローニングした。このDNAを単離して、AIV H5 DNAとした。異なるDNA骨格を含む第2のDNAを調製し、このDNAは、同じH5N9 turkey/WI/68 AIV HA遺伝子インサートを有していたが、この調査用に、Nature Technology(NT)によって構築されたものであった。そのNTプラスミド骨格は、NTC8685−eRNA41H−U79456 HAを含み、AIV H5DNA(nt)とした。
1この調査では、処置グループ(TG)の明示によって、ニワトリと試験物質が定められる。
2IM−筋内注射
3各ニワトリには、左胸部筋肉に0.2mlの体積、右胸部筋肉に0.2mlの体積を接種する。
4コントロールのT01を除き、AIV H5DNA(bbl)を各処置に含めた。
無作為化と馴化
ニワトリに対する毎日の健康状態の観察結果を、調査するすべてのトリについて、馴化フェーズ中、記録した。トリは、少なくとも3日間、馴化する。臨床観察を毎日行い、記録した。
すべてのトリに対して、試験物質を筋内注射によって胸部の左側と右側に投与した。
0日目に、トリの健康状態と外観が正常か調べ、調査に参加させた。1つのケージが1つの処置グループを表す。
14日目(14日目に試験物質をブースター投与する前)と28日目に、現場の手順に従って、各トリから血液を採取した。血液を凝固させてから、遠心分離して、血清を回収した。続いて、採血の48時間以内に試験を行わない場合には試験まで、及び/または血清を試験した後に、その血清を−18±5℃で保存した。そして、赤血球凝集抑制アッセイ(HAI)によって、血清のセロコンバージョンレベルについてアッセイした。
試験物質を投与後、調査終了(28日目)まで、臨床観察結果を毎日、少なくとも1回記録した。臨床観察結果は、すべて記録した。
HAIによって、血清サンプルのセロコンバージョンをアッセイした。続いて、各処置グループの各血清サンプルのHAI価を割り出した。次に、1×アジュバントで接種したトリのHAI価を、2×及び4×の各アジュバント調合物で接種したトリのHAI価と比較して、DNA/アジュバント調合物を用いて有効性を得るための、各アジュバントの濃度範囲を明示した。
投与日に、試験物質を調製し、臨床現場に移した。
AIV H5プラスミドDNA(bbl)ロット番号DNA130414TKWI(純度と品質について試験済み)
プラスミドDNA:75ug/mL
塩化カルシウム:2.68mM
リン酸ナトリウム:2.68mM
クエン酸ナトリウム:0.669mM
この調査は、本開示のアジュバントの6カ月にわたる安定性を示すものである。
安定性試験物質の調製
1回の投与につきBSA(ウシ血清アルブミン)50ugという標的濃度となるように、2つの異なるアジュバント調合物をBSAと組み合わせた。調製したすべての試験物質をゴム栓付きの滅菌ガラスバイアルに無菌分注し、圧着して閉じた。
馴化
毎日の健康状態の観察結果を、調査するすべての動物について、馴化フェーズ中、記録した。動物は、少なくとも6日間、馴化した。
識別のために、マウスの耳に切れ込みを入れた。マウスを調査用ケージに入れ、1ケージ当たり5匹のマウスを入れた。また、6カ月の試験中、マウスの体重を測定した。
マウスの健康状態と外観が正常か調べ、調査に参加させた。処置グループに従って、マウスを維持し、5匹のマウスの入った2つのケージがそれぞれ、1つの処置グループを表している。プラセボ(PBO)を接種するマウス(5匹のマウスの入った1つのケージから構成されていた)は、例外とした。
調査が終わるまで、有害事象を含む臨床観察結果を毎日記録した。
すべてのマウスには、試験物質を皮下注射によって、肩の間の背部に投与する。
−4日目と0日目との間に1回、ベースラインマウス(調査で使用しないマウス)から血液を採取し、プールして、プレスクリーニング血清を得た。この時には、マウスの平均体重に基づき、総血液体積の10%以下を採取した。血液を凝固させてから、遠心分離して、血清を回収した。その血清をプールし、試験で用いるマウスのBSA血清反応が陰性であることを確認するために、ELISAによって試験するまで、2〜7℃または−18±5℃で保存した。
1BSAストック1m1当たり500ug、1回の投与につきBSA50ug
2各処置グループの略称
3新鮮な試験物質の調製に用いた成分の保存温度
518〜27℃で保存した安定性サンプルと同じ保存場所と保存温度で保存した5×アジュバントストック
1この調査では、処置グループ(TG)の明示によって、マウスと試験物質が定められることになる。
2マウスには、皮下注射によって肩の間の背部に接種する。
3試験物質を接種しなかった追加のマウス、ベースライン血液サンプルを得るために使用
マウスの健康状態と外観が正常か調べ、調査に参加させた。各ケージが、1つの処置グループを表す。
1〜28日目に、必要に応じて、ベースラインマウス(調査で使用しないマウス)から血液を採取し、プールした。3〜4週間の期間内に、マウスの平均体重に基づき、総血液体積の10%以下を採取した。血液を凝固させてから、遠心分離して、血清を回収した。続いて、その血清をプールし、ネガティブコントロールとしてELISAで使用するまで、2〜7℃または−18±5℃で保存した。
13日目と28日目に、各接種済み動物から血液を採取した。3〜4週間の期間内に、マウスの平均体重に基づき、総血液体積の10%以下を採取した。血液を凝固させてから、遠心分離して、血清を回収した。続いて、試験まで、その血清を2〜7℃または−18±5℃で保存した。続いて、血清のセロコンバージョンレベルをELISAによってアッセイした。
すべての処置グループ調製剤(TGごとの調製剤)は、調査設計に従って、マウスに、皮下注射によって、肩の間の背部に投与した。
調査のタイムラインに示されているように、試験物質の投与後、臨床観察結果を毎日記録した。
血清サンプルのセロコンバージョンをELISAによってアッセイした。各処置グループの各血清サンプルにおける抗体産生レベルを割り出した。アジュバント+BSAを投与したマウスにおける抗体産生量を、BSAポジティブコントロールを投与したマウスにおける抗体産生量と比較した。各種のアジュバント調合物を投与したマウスにおける抗体産生量を比較した。安定性解析のために保存しておいた試験物質を投与したマウスにおける抗体産生量を、この調査の0日目に新たに調製した試験物質を投与したマウスと比較した。
1セロコンバージョンしたマウスの数/処置したマウスの数
2セロコンバージョンなしについては、10という値を用いた
3BSA/Adj06幾何平均÷BSA/PBS幾何平均
4未実施
この実施例は、特定病原体未感染の(SPF)ニワトリにおける免疫応答を惹起する能力を測定することによって、DNAまたはアジュバントをCa++で処置せずに、様々な濃度の本開示のアジュバント調合物を用いて、皮下投与した本開示のDNAワクチンの有効性を示すものである。
この調査では、雄及び雌のSPFニワトリ140羽を使用した。調査設計は、下記の表22に示されている。調査の14日目と28日目に、血液を採取した。
1この調査では、処置グループ(TG)の明示によって、ニワトリと試験物質が定められることになる。
2SC−皮下注射、IM−筋内
3各ニワトリに、合わせて0.4mLを接種する。
4BBLプラスミドTKWI−001(1回の投与につき30ug)
5NTプラスミドNTC8685−eRNA41H−U79456HA(1回の投与につき30ug)
注記:処置グループ02、03および04では、Ca++でDNAを処置し、すべての処置グループにおいて、実施例1で説明したような5×ストックアジュバントを使用した。
無作為化と馴化
すべてのケージに、合計10羽のトリが入るまで、出荷ボックスから取り出した順に、トリを調査用ケージに入れた。識別のために、トリに個々にタグを付けた。
トリに、胸部の左側と右側に筋内注射するか、または後頸部における1つの部位に皮下注射するかのいずれかによって、試験物質を投与した。
0日目に、トリの健康状態と外観が正常か調べ、調査に参加させた。1つのケージが、1つの処置グループを表していた。
試験物質を投与後、調査終了(28日目)まで、臨床観察結果を毎日、少なくとも1回記録した。
14日目の試験物質のブースター投与の前と28日目に、現場の手順に従って、各トリから血液を採取した。採血は、文書化した。血液を凝固させてから、遠心分離して、血清を回収した。試験するまで、血清を2〜7℃または−18±5℃で保存したとともに、−18±5℃で長期保存した。赤血球凝集抑制アッセイ(HAI)によって、血清のセロコンバージョンレベルをアッセイした。
HAIによって、血清サンプルのセロコンバージョンについてアッセイした。各処置グループの各血清サンプルのHAI価を割り出した。4×アジュバントで接種したトリのHAI価を、2×の各アジュバント調合物で接種したトリのHAI価と比較して、各アジュバントのどの濃度が最も有効か割り出した。
投与日に、試験物質を調製し、臨床現場に移した。
BBL AIV H5プラスミドDNA、純度と品質について試験済み
NT AIV H5プラスミドDNA、純度と品質について試験済み
ダルベッコリン酸緩衝化生理食塩水(DPBS)、Cellgro、カタログ:21−031−CV
この実施例は、本開示のアジュバントを用いて、筋内または皮下投与したDNAワクチンの30ugの最小免疫量と安定性との比較調査を示すものである。この調査では、アジュバントが、特定病原体未感染のニワトリにおける免疫応答を惹起する能力を測定した。
ニワトリは、調査開始時に2週齢であった。100羽のトリを使用し、調査の24日目に血液を採取した。
1この調査では、処置グループ(TG)の明示によって、ニワトリと試験物質が定められることになる。
2SC−皮下注射、IM−筋内
3各ニワトリに、合わせて0.4mLを接種する(1部位に0.4mL/SC、2部位に0.2mLずつ/胸部)
4BBLプラスミド
5NTプラスミド
6安定性サンプル
注記:処置グループ02、06、07、09及び010は、カルシウム沈殿DNAによって行った。
孵化した順に、1ケージ当たり20〜25羽で、トリを無作為に調査用ケージに入れた(−14日目)。生後1週間の時点(−7日目)に、1ケージ当たり少なくとも10羽でトリを分け、1処置グループ当たり1ケージとした。続いて、識別のために、トリに個々にタグを付けた。そして、トリの受領、タグの識別、ケージへの配置を文書化した。
トリに、胸部の左側と右側に筋内注射するか、または後頸部における1つの部位に皮下注射するかのいずれかによって、試験物質を投与した。
0日目に、2週齢のトリの健康状態と外観が正常か調べ、調査に参加させた。1つのケージが、1つの処置グループを表していた。
試験物質を投与後、調査終了(28日目)まで、臨床観察結果を毎日、少なくとも1回記録した。
14日目の試験物質のブースター投与の前と28日目に、現場の手順に従って、各トリから血液を採取した。血液を凝固させてから、遠心分離して、血清を回収した。試験するまで、血清を2〜7℃または−18±5℃で保存したとともに、−18±5℃で長期保存した。赤血球凝集抑制アッセイ(HAI)によって、血清のセロコンバージョンレベルをアッセイした。
AIV H5プラスミドDNA(bbl)、純度と品質について試験済み
AIV H5プラスミドDNA(nt)、純度と品質について試験済み
ダルベッコリン酸緩衝化生理食塩水(DPBS)、Cellgro、カタログ:21−031−CV
1アジュバントストック濃度は、実施例1による5.0Xであった。ワクチンは、2×濃度のアジュバントで配合する。
3T02、T06、T07、T09、T10(保持用)用に調製したワクチンは、カルシウム沈殿を使用し、残りは、カルシウム沈殿を使用しない。
4T01には、PBS0.4mLをSC投与する。
5T10は、NBHO2502から得た保持サンプルT12である
この実施例は、本開示のアジュバントにおけるDNAの、少なくとも18カ月にわたる安定性を示すものである。
プラスミド、家禽アジュバント01 P1/トリス−HCL緩衝液を作製して、2〜7℃で保存した。このプラスミドDNAは、CCCS DNAであり、このCCCS DNAは、細菌発酵物から精製される。精製プロセスでは、調製剤中に、85%超がCCSC DNAであるDNAが得られるが、直鎖状DNA(L DNA)とリラックス型環状DNA(RC)が、この精製DNAの残部を占めている。0日、2カ月、6カ月、12カ月及び18カ月の時点に、いずれも定量的に、緩衝液のみかまたは本開示のアジュバントとともにインキュベートしたサンプル間のA260を測定することによって、安定性を測定した。アガロースゲル電気泳動によって、処置済みサンプルから抽出したDNAサンプルを用いて、CCCS DNA、L DNA及びRC DNAについて、DNAを定性的に評価した。
結果によって、大半のDNAまたは遺伝子療法ワクチンの基礎となる共有結合性閉環状スーパーコイル化DNA(CCSC−DNA)が、本開示のアジュバント物において安定であることが示されている。この調査で用いたCCSC−DNAは、2.7℃で保存したときに、18カ月超にわたって安定していた。Ca++によって誘導体化したリポソーム調製剤は、安定しておらず、DNAとともに水溶液に懸濁した後は、長期間保存できない。本開示から調製したとともに、精製CCSC−DNAと組み合わせたアジュバントは、液体形態で懸濁したときに、18カ月超にわたって安定していることができる。さらに、この調査で用いた調製剤は、精製調製剤の一部として、直鎖状DNAとリラックス型環状DNAも含むので、これらの形態のDNAのアジュバント−DNA調製剤も、本開示のアジュバントに配置したときに、安定している(図1及び2)。したがって、本開示のアジュバントを用いたときには、有効なワクチン投与またはDNAの送達を行うために、Ca++で処置したDNAもしくはCa++で誘導体化したリポソームまたはその他のビヒクルの送達は不要であり、このことは、当該技術分野にとって、明らかな新規事項かつ利点である。
この調査は、冷蔵温度または周囲温度で、少なくとも18カ月インキュベートしたときのアジュバント/タンパク質配合物(ウシ血清アルブミン−BSA)の安定性を例示するものである。
この調査の目的は、本開示のアジュバントの2つの異なる実施形態と組み合わせたウシ血清アルブミン(BSA)の長期安定性の評価(12カ月)を行うことであった。保存した試験物質(2〜7℃または18〜27℃で12カ月±4週間保存)の安定性を、CF−1マウスにおけるセロコンバージョンによって測定した。保存した試験物質によって生じた、マウスにおけるセロコンバージョンのレベルを、この調査用に0日目と18カ月の終わりに調製した新鮮な試験物質によって生じたレベルと比較した。新鮮な試験物質は、−80±10℃で保存したBSAと、18〜27℃で保存したPBSと、2〜7℃または18〜27℃のいずれかで保存した2つのアジュバント調合物を用いて調製した。
1この12カ月の調査の0日目と14日目に接種するのに用いた各アリコートの残りの体積分は、使用日に破棄する。残りの保持アリコートは、保持する。
24×アジュバントサンプルは、実施例1による5×ストックアジュバントから調製した。
ウシ血清アルブミン(BSA)625ug/mlフリーザーストック、BBL
ダルベッコリン酸緩衝化生理食塩水(DPBS)、Cellgro、カタログ:21−031−CV、ロット:21031424
1500ug/mlのBSAストック、1回の投与につきBSA50ug
2各処置グループの略称
3新鮮な試験物質の調製に用いた成分の保存温度
45.0×アジュバントストックは、18〜27℃で保存した安定性サンプルと同じ保存場所と保存温度で保存した。
1この調査では、処置グループ(TG)の明示によって、マウスと試験物質が定められる。すべてのアジュバントは、実施例1で説明したような4×濃度である。
2マウスには、皮下注射で、肩の間の背部に接種する。
3試験物質を接種しなかった追加のマウスを用いて、ベースライン血液サンプルを得る。
**必要に応じて、血液をベースラインマウスから採取して、ELISAで使用するためのプレスクリーニング血清を得る。3〜4週間の期間内に、マウスの平均体重に基づき、総血液体積の10%以下を採取する。F=調製したて、S=安定性サンプル
すべてのマウスに、試験物質を皮下注射によって、肩の間の背部に投与する。
調査の0日目よりも前に1回、ベースラインマウス(調査で使用しないマウス)から血液を採取し、プールして、プレスクリーニング血清を得た。マウスの平均体重に基づき、総血液体積の10%以下を採取した。採血を文書化した。血液を凝固させてから、遠心分離して、血清を回収した。続いて、その血清をプールし、調査で用いるマウスのBSA血清反応が陰性であることを確認するために、ELISAによって試験するまで、2〜7℃または−18±5℃で保存した。
マウスの健康状態と外観が正常か調べ、調査に参加させた。各ケージが、1つの処置グループを表していたとともに、識別目的で、各ケージ内の個々のマウスの耳に切れ込みを入れる。
必要に応じて、1〜28日目に、ベースラインマウス(調査で使用しないマウス)から血液を採取し、プールした。3〜4週間の期間内に、マウスの平均体重に基づき、総血液体積の10%以下を採取した。採血を文書化した。血液を凝固させてから、遠心分離して、血清を回収した。続いて、その血清をプールし、ネガティブコントロールとしてELISAで使用するまで、2〜7℃または−18±5℃で保存した。
13日目と28日目に、各接種済みマウスから血液を採取した。3〜4週間の期間内に、マウスの平均体重に基づき、総血液体積の10%以下を採取した。採血を文書化した。血液を凝固させてから、遠心分離して、血清を回収した。続いて、試験するまで、その血清を2〜7℃または−18±5℃で保存した。血清のセロコンバージョンレベルをELISAによってアッセイした。
調査のタイムラインに示されているように、試験物質の投与後、臨床観察を毎日記録した。
血清サンプルのセロコンバージョンをELISAによってアッセイした。各処置グループの各血清サンプルにおける抗体産生レベルを割り出した。アジュバント+BSAを投与したマウスにおける抗体産生量を、BSA+PBSを投与したマウスにおける抗体産生量と比較した。各種アジュバント調合物を投与したマウスにおける抗体産生量を互いに比較した。安定性解析のために保存した試験物質を投与したマウスにおける抗体産生量を、この調査の0日目に新たに調製した試験物質を投与したマウスと比較した。
表35:0日目に調製する新たな処置グループの調製の概要
1試験物質は、この調査で試験したのみであった。次の安定性調査用に保存したものはなかった。すべてのアジュバントは、実施例1の説明による5×ストックに由来する4×濃度のものであった。
2−80±10℃で保存したBSA(625ug/ml)フリーザーストック
この実施例は、本開示のアジュバント調合物が室温においても、冷蔵したときにも安定しているといった、本開示のアジュバント調合物の特徴を示するものである。具体的には、この安定性調査は、周囲温度または2〜7℃のいずれかで、最長で24カ月間保存した本開示のアジュバントの安定性を割り出すように設計した。この調査は、冷蔵温度または周囲温度で少なくとも12カ月インキュベートしたアジュバント調合物の安定性を示すものである。
滅菌プラスチック製の蓋が付いた滅菌PETGボトル(Nalgene、Wheatonまたは同等のメーカー)にアジュバントを入れた。
SOP XQC−087に従って、アジュバントサンプルの外観を試験した。加えて、各サンプルにおける乳剤の目に見える分離を調べ、存在する分離の量を測定し、各時点に文書化する。
アジュバントサンプルの粒径解析を行った。
アジュバントサンプルのpHを試験した。
アジュバントサンプルの粘度を試験する。
材料と方法
71日齢のヒナに、DNAワクチン0.2mLを皮下接種したかまたはPBS0.2mLを接種した。このDNAワクチンは、GyrFalcon/Washington/41088−6/2014由来のHA遺伝子を含む真核DNAワクチンプラスミド骨格であった。合計60羽のヒナにDNAワクチンを投与し、10羽のヒナをコントロールとして用いた。最初のワクチン投与から2週間後、20羽のヒナに、DNAワクチン0.2mLで追加免疫を行い、20羽のヒナに、GyrFalcon/Washington/41088−6/2014リバースジェネティクス死菌ワクチン0.2mLをアジュバントとともに接種した。トリが4週齢になったときに(最後のワクチン投与から2〜4週間後)、106.5/EID50の用量でA/Turkey/Minnesota/12582/2015(H5N2)を0.5mLの用量で後鼻孔接種経路によって投与して、攻撃を行った。この攻撃ウイルスは、最近流行したものに由来し、攻撃用量は、ストリンジェントな攻撃として、ニワトリ半数致死量が1000となるように設計した。各処置グループに、実施例1に従って算出した2×のアジュバント05を投与した。
最後のワクチン投与から2または4週間後に、ワクチンを投与したトリとコントロールのトリをA/Turkey/Minnesota/12582/2015(H5N2)で攻撃した。すべてのコントロールのトリでは、攻撃から3日後までに、重篤な臨床疾患が見られたか、または死亡し、平均死亡時(MDT)は2.1日であったとともに、IACUCプロトコールで義務付けられているように、重篤な臨床疾患を罹患したトリは、安楽死させて、翌日に死亡したものとして記録した(図1)。
本開示のアジュバントと組み合わせたDNAワクチンのシチメンチョウにおける血清学的評価の有効性調査
ENABL 1と0.5× ENABL(商標)5をpHA DNAとともに(IVP1及び2)、またはリン酸緩衝化生理食塩水(PBS)をpHA DNAとともに(MPC)、各トリに皮下(SC)投与した。各IVP処置グループには、少なくとも22羽のトリが含まれていたとともに、MPCグループの10羽のトリには、0日目に接種した。調査全体にわたって、トリの全身の健康状態を観察した。すべてのトリに、調査0日目に接種した。各接種から約2週間後、血液を採取し、セロコンバージョンを試験した。
BBL SOP LP−054に従って、不活化ウイルスA/gyrfalcon/WA/41088−6/2014 H5N8 BEI(非改変HA遺伝子を含んでいた)の赤血球凝集の阻害によって、血清のセロコンバージョンレベルをアッセイした。各処置グループの各血清サンプルの赤血球凝集抑制(HAI)価を割り出した。簡潔には、血清の段階希釈液を4〜8ヘマグルチニンユニットとともにインキュベートし、最後に、ニワトリ赤血球に加えた。HAI価は、すべての複製物においてウイルス特異的な赤血球凝集の100%の阻害が見られる最後の希釈液の逆数logとして記録した。各種アジュバント調合物を投与したトリにおけるHAI価を比較した。
このシチメンチョウ調査において動物用治験製品(IVP)として試験した本開示のアジュバント調合物は、高病原性(HP)鳥インフルエンザウイルス(AIV)株A/gyrfalcon/Washington/41088−6/2014(H5N8)由来の改変ヘマグルチニン(HA)遺伝子を含むプラスミドDNA(pHA)とともに調合したENABL(登録商標)1及び6であった。H5配列を改変して、HP多塩基性切断部位(PLRERRRKRGLF)(配列番号1)を一塩基性切断部位に変更した。改変H5遺伝子は、合成によって作製し、NTC8685−eRNA41H最適化真核発現ベクターにクローニングした。同じpHAをリン酸緩衝化生理食塩水(PBS)と混合して、調査の対応するプラセボコントロール(MPC)として機能させた。
調査設計
pHA DNA(IVP1及び2)と組み合わせたENABL1及びENABL(商標)6、またはpHA DNAと組み合わせたリン酸緩衝化生理食塩水(PBS)(MPC)を各トリに皮下(SC)投与した。各処置グループは、0日目に接種した少なくとも10羽のトリから構成させた。21日間、トリの全身の健康状態を観察した。1日目〜7日目、14日目及び21日目に、部位特異的な観察を行った。調査の0日目以降かつ21日目以前に、病的状態のために安楽死させたか、または死亡が確認されたすべてのトリを検死して、死亡の原因がIVPであるか、MPCであるかを割り出した。21日目における残りのすべてのトリに、肉眼的病理検査と組織学的検査を行った。調査設計は、表46にまとめられている。
すべてのアジュバントは、実施例1の記載による4×濃度のものであった。ENABL(商標)1は、4×のアジュバント01であり、ENABL(商標)6は、実施例1による4×のアジュバント06である。
健康状態の評価、臨床観察及び注射部位観察案を処置日に記録した。各トリの後頸部中央部の皮下空間に、指定の製品を1回注射した。用量は、部位当たり0.2mLであった。
調査のタイムラインに示されているように、試験物質の投与後、すべてのトリの全身健康状態を毎日観察した。Veterinary Dictionary for Drug Regulatory Activities(VEDDRA)の作成した標準下層語に従って、臨床徴候を分類した。
組織学的データの収集のために、組織サンプルを注射部位と組織周辺から摘出した。病理学者が、注射部位の異常に関連する、注射部位の肉眼的病理を調べた。
注射部位を触診し、所見を記録した。皮膚を切開し、下の組織を調べた。検死中に、病理学者が、いずれかの排膿孔、膿瘍、浮腫、出血または壊死の存在に基づき、注射部位のスコアを付けた。いずれかの所定の注射部位における最も深刻な徴候によって、病理学者が注射部位に付けた、1つの注射部位のスコアを定めた。1つの注射部位で、2つ以上の徴候が観察される場合には、他方の徴候(スコアが低い徴候と、スコアが付けられなかった徴候)を記録したが、重篤度の低いこれらの所見によって、最も重篤な徴候に基づいて付けられたスコアは下げなかった。
回収した各組織の部位反応の組織学的エビデンスを調べた。肉眼的検死所見に関して、注射部位に、最も重篤な等級を付けて、その部位の組織学的スコアとして使用した。
各処置グループにおいて、最初のふるい分けと調査期間で、馴化時点の健康状態により、この調査における組み入れ基準を満たした14羽のトリが残った。検死時の部位の観察と、肉眼的/組織的病理の結果は、下記の表に示されている。
121日の観察期間の終わりまでに可視的腫脹が認められた動物の数
2検死時に、認識可能な炎症応答(軽度から中程度)が認められた動物の数
3検死時に、顕微鏡でのみ観察可能な生理応答が認められた動物の数
ENABL(商標)1は、実施例1におけるアジュバントの5×の市販のアジュバントの商品名である。
この調査によって、本開示の製品と方法の有効性の合理的な見込みを立てた。高病原性インフルエンザウイルス、すなわち、トリワクチンH5サブタイプDNAを用いた。本開示のアジュバント組成物を使用して、このワクチンを用いたニワトリにおける血清試験を行った。すべての処置グループは、2×アジュバント05のENABL(商標)LP7を含むものであった。
DNA骨格プラスミドNTC8685eRNA41H−KP307984.1を用いて、DNAワクチンを作製した。このプラスミド骨格を用いて、高病原性(HP)鳥インフルエンザウイルスA/gyrfalcon/WA/41088−6/2014(H5N8)のHV抗原をコードする改変合成ヘマグルチニン(HA)遺伝子を有していた。合成前に、公知のH5配列を、その多塩基性切断部位において改変して、低病原性鳥インフルエンザウイルスの一塩基性部位に特徴的なH5タンパク質を発現する配列を形成し、この改変によって、識別のための特有の制限部位も組み込んだ。改変H5遺伝子は、合成によって作製し、NTC8685−eRNA41H最適化真核発現ベクターにクローニングし、このコンストラクトをE.coli株NTC4862にトランスフォーメーションして、この改変プラスミドを含むE.coliマスターシード候補を得た。このE.coliを用いて、マスターシードMaster Seed AIV H5 Mod、ロット#MS16Jun15HPAIV(ML#171713)を作製した。
185羽のニワトリ(ロット#AVB18Nov15)をValoのSPF卵から孵化させて、この調査に参加させた。参加させるために、孵化日に、健康なトリを臨床現場に移した。
上頸部にSQ注射または胸部筋肉におけるIMのいずれかによって、トリに試験物質を投与した。
0DAワクチン投与グループ1〜7には、孵化日(調査0日目)に、1回目の試験物質の投与を行った。同じトリに、調査14日目に、それぞれの試験物質で追加免疫を行った(表52参照)。
0DAワクチン投与グループ1〜7に、孵化日(調査0日目)に、1回目の試験物質の投与を行った。同じトリに、調査14日目に、それぞれの試験物質で追加免疫を行った(表52参照)。
孵化日(0DA)及び14日齢(14DA)のトリでワクチンを試験した。0DAトリで、10μg、30μg、60μgという用量レベルのプラスミドDNAをIMまたはSQのいずれかで試験した。1回のワクチン投与後、HAIアッセイによって測定したところ、0DAグループでは、検出可能なレベルの抗体は見られなかった。2回目のワクチン投与後は、用量レベルにかかわらず、プラスミドを投与したすべてのグループにおいて、検出可能なレベルのセロコンバージョンを示したトリが見られた。低い方の2つの用量(10μg及び30μg)で投与した0DAトリでは、SQ投与した場合に、すべての採取時点において、セロコンバージョン率は低く、GMTも低かった(表57及び58)。しかしながら、同じ用量レベルをIM投与した場合には、特にブーストワクチン投与から特に21日後に、セロコンバージョン率がSQ投与よりも高くなった。10μgの用量では、59%のトリがセロポジティブであったとともに、GMTは5.8であった(4〜32の範囲、表56)。30μgの用量では、77%のトリがセロポジティブであったとともに、GMTは8.8であった(4〜64の範囲、表55)。HAIアッセイにおいて、すべての試験日に、開始時の希釈倍率を4ではなく、2にすれば、セロポジティブ率は高くなり得ることに留意されたい。それぞれ、60μgのpDNAH5mod(IVP−5 60μg)をSQ投与したグループ6のトリから血清を採取したところ、セロコンバージョン率は38%で、GMTは4.1であった(ブーストワクチン投与から34日後)とともに、IVP−6 60μgをIM投与したグループ7のトリから血清を採取したところ、セロコンバージョン率は100%であったとともに、GMTは14.1であった(ブーストワクチン投与から14日後)(表57)。
Claims (14)
- a.アジュバント組成物であって、
i. 中鎖トリグリセリド及び
ii.アクリル酸またはメタクリル酸のポリマー
を含み、Ca++、二価陽イオンまたは二価陽イオン由来のリポソームビヒクルを含まない、前記アジュバント組成物と、
b.抗原と、
を含み、前記抗原が非複製型コンピテントDNAである、免疫原性組成物。 - a.アジュバント組成物であって、
i. 中鎖トリグリセリド、
ii. コレステロール及び
iii.サポニン
を含み、Ca++、二価陽イオンまたは二価陽イオン由来のリポソームビヒクルを含まない、アジュバント組成物と、
b.抗原と、
を含み、前記抗原が非複製型コンピテントDNAである、免疫原性組成物。 - 前記中鎖トリグリセリドが、中鎖EPトリグリセリド、中鎖トリグリセリドNF、中鎖脂肪酸トリグリセリドJPE、カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項1または2に記載の免疫原性組成物。
- アクリル酸またはメタクリル酸のポリマー、生理食塩水、アルコール、水酸化ナトリウム及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも1つの成分をさらに含む、請求項2に記載の免疫原性組成物。
- 前記アルコールがエタノールである、請求項4に記載の免疫原性組成物。
- 前記免疫原性組成物が、筋内投与、皮下投与、経皮投与、粘膜投与及び経口投与からなる群から選択される投与経路用に調合される、請求項1または2に記載の免疫原性組成物。
- 前記抗原が、プラスミドの形態の非複製型コンピテントDNAである、請求項1または2に記載の免疫原性組成物。
- プラスミドの形態の前記非複製型コンピテントDNAが、前記アジュバント組成物中に、約10μg〜30μgの量で存在する、請求項7に記載の免疫原性組成物。
- 前記非複製型コンピテントDNAが、被投与者における免疫応答の標的をコードする、請求項1または2に記載の免疫原性組成物。
- 前記免疫応答の標的が、ブタ繁殖・呼吸障害症候群(PRRS)、Mycoplasma hyopneumoniae(M hyo)、ブタ増殖性腸炎、ウシウイルス性下痢症ウイルス(BVD)、ボーダー病、レプトスピラ症、Brucella属の細菌を原因とするブルセラ症、Clostridium、Clostridium tetaniによって産生される特異的神経毒を原因とする破傷風毒血症、Salmonella spp、Escherichia coli、豚痘、エペリスロゾーン症、ブタコレラウイルス(CSFV)またはアフリカブタコレラウイルス(ASFV)、Pasteurella multocidaと様々な種のstreptococci、典型的にはS.suisを原因とする肺炎性パスツレラ症及びStreptococci、レンサ球菌性髄膜炎、仮性狂犬病、ブタインフルエンザウイルス、Brachyspira pilosicoliという細菌を原因とするスピロヘータ性大腸炎、Brachyspira hyodysentheriaeという細菌を原因とするブタ赤痢、コロナウイルス、ブタパルボウイルス、Actinobacillus pleuropneumonia、Haemophilus parasuis(Hps)という細菌を原因とするグレーサー病、Staphylococcus hyicusという細菌を原因とする滲出性麦皮炎、Erysipelothrix rhusiopathiaeという細菌を原因とする豚丹毒、Eperythrozoonosis suisという細菌を原因とするエペリスロゾーン症(Epe)、脳心筋炎、ヘルペスウイルス、ヘルペスウイルスを原因とするブタサイトメガロウイルス感染症(PCMV)、日本脳炎ウイルス(JE)、コロナウイルスを原因とするブタ流行性下痢(PED)、ブタ呼吸性コロナウイルス感染症(PRCV)、ロタウイルス、狂犬病、ブタ水胞症(SVD)、Mycobacterium tuberculosisを原因とする結核、ブタ小水疱性発疹(VES)ウイルス、水疱性口内炎(VS)ウイルス、東部ウマ脳脊髄炎ウイルス(EEEV)、アデノ随伴ウイルス、アイチウイルス、オーストラリアコウモリリッサウイルス、BKポリオーマウイルス、バンナウイルス、バーマ森林ウイルス、ブニヤンベラウイルス、ブニヤウイルスラクロス、カンジキウサギブニヤウイルス、オナガザルヘルペスウイルス、チャンディプラウイルス、チクングニヤウイルス、コサウイルスA、牛痘ウイルス、コクサッキーウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、デングウイルス、ドーリウイルス、ジュグベウイルス、デュベンヘイジウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エボラウイルス、エコーウイルス、脳心筋炎ウイルス、エプスタインバーウイルス、ヨーロッパコウモリリッサウイルス、GBウイルスC/G型肝炎ウイルス、ハンターンウイルス、ヘンドラウイルス、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、E型肝炎ウイルス、デルタ肝炎ウイルス、馬痘ウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトアストロウイルス、ヒトコロナウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトエンテロウイルス68、70、ヒトヘルペスウイルス1、ヒトヘルペスウイルス2、ヒトヘルペスウイルス6、ヒトヘルペスウイルス7、ヒトヘルペスウイルス8、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス1、ヒトパピローマウイルス2、ヒトパピローマウイルス16、18、ヒトパラインフルエンザ、ヒトパルボウイルスB19、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、ヒトライノウイルス、ヒトSARSコロナウイルス、ヒトスプーマレトロウイルス、ヒトTリンパ球向性ウイルス、ヒトトロウイルス、インフルエンザAウイルス、インフルエンザBウイルス、インフルエンザCウイルス、イスファハンウイルス、JCポリオーマウイルス、日本脳炎ウイルス、フニンアレナウイルス、KIポリオーマウイルス、クンジンウイルス、ラゴスコウモリウイルス、ビクトリア湖マールブルグウイルス、ランガトウイルス、ラッサウイルス、ローズデールウイルス、跳躍病ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、マチュポウイルス、マヤロウイルス、MERSコロナウイルス、麻疹ウイルス、メンゴ脳炎ウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、モコラウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、サル痘ウイルス、ムンプスウイルス、マレーバレー脳炎ウイルス、ニューヨークウイルス、ニパウイルス、ノーウォークウイルス、オニョンニョンウイルス、オルフウイルス、オロプーシェウイルス、ピチンデウイルス、ポリオウイルス、プンタトロフレボウイルス、プーマラウイルス、狂犬病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ロサウイルスA、ロスリバーウイルス、ロタウイルスA、ロタウイルスB、ロタウイルスC、風疹ウイルス、サギヤマウイルス、サリウイルスA、スナバエ熱シチリア型ウイルス、サッポロウイルス、セムリキ森林ウイルス、ソウルウイルス、シミアン泡沫状ウイルス、シミアンウイルス5、シンドビスウイルス、サウサンプトンウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ダニ媒介性ポワッサンウイルス、トルクテノウイルス、トスカーナウイルス、ウークニエミウイルス、ワクシニアウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、痘瘡ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、WUポリオーマウイルス、ウエストナイルウイルス、ヤバサル腫瘍ウイルス、ヤバ様疾患ウイルス、黄熱ウイルス、ジカウイルス、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される生物に由来する、請求項9に記載の免疫原性組成物。
- 前記免疫原性組成物の1回投与が、動物またはヒトにおける前記標的に対する免疫応答を誘導するのに有効であり、前記免疫応答が、前記動物またはヒトにおける感染症の重症度または臨床徴候の発生率の低下によって認められる、請求項1または2に記載の免疫原性組成物。
- pH中和成分をさらに含み、及び/または好ましくは、前記組成物の前記pH中和成分は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム及び水酸化アンモニウムからなる群から選択され;及び/または前記pH中和成分は約0.1%〜10%の量で存在する、請求項1または2に記載の免疫原性組成物。
- 前記アジュバントが、直径10nm〜2000nmのサイズ範囲の粒子を有する乳剤を形成する、請求項1または2に記載の免疫原性組成物。
- 前記アジュバントが、コレステロール及びサポニンをさらに含む、請求項1に記載の免疫原性組成物。
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