JP6919792B2 - フルクトース−c4−エピメラーゼ及びこれを用いてタガトースを製造するための製造方法 - Google Patents
フルクトース−c4−エピメラーゼ及びこれを用いてタガトースを製造するための製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6919792B2 JP6919792B2 JP2020511177A JP2020511177A JP6919792B2 JP 6919792 B2 JP6919792 B2 JP 6919792B2 JP 2020511177 A JP2020511177 A JP 2020511177A JP 2020511177 A JP2020511177 A JP 2020511177A JP 6919792 B2 JP6919792 B2 JP 6919792B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tagatose
- fructose
- present application
- bisphosphate aldolase
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/90—Isomerases (5.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/24—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an isomerase, e.g. fructose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/02—Monosaccharides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
- C12Y207/01—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1)
- C12Y207/01144—Tagatose-6-phosphate kinase (2.7.1.144)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y401/00—Carbon-carbon lyases (4.1)
- C12Y401/02—Aldehyde-lyases (4.1.2)
- C12Y401/0204—Tagatose-bisphosphate aldolase (4.1.2.40)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
D−タガトース1,6−ビスリン酸 ⇔ ジヒドロキシアセトンリン酸 + D−グリセルアルデヒド3−リン酸
新規な耐熱性のフルクトース−4−エピメラーゼを提供するために、代表的にカルディリネア属であるカルディリネア・アエロフィラ(Caldilinea aerophila)DSM 14535由来のタガトース−ビスリン酸アルドラーゼの遺伝子情報を取得し、大腸菌で発現可能なベクター及び形質転換微生物を製造した。
前記実施例1で製造した形質転換菌株であるE. coli BL21(DE3)/CJ_CA_F4Eから組換え酵素を製造するために、形質転換した微生物をアンピシリン(ampicillin)抗生剤が含まれたLB液体培地5mLを含む培養チューブに接種し、600nmで吸光度が2.0になるまで37℃の振とう培養器で種菌培養を行った。前記種菌培養の結果、得られた培養液をLBとタンパク質の発現調節因子である乳糖とが含まれた液体培地を含む培養フラスコに接種して本培養を行った。前記種菌培養及び本培養は、攪拌速度180rpm及び37℃の条件で行った。次に、前記培養液を8,000rpmで4℃で20分間遠心分離した後、菌体を回収した。前記回収された菌体を50mM Tris−HCl(pH8.0)緩衝溶液で2回洗浄し、10mMイミダゾール(imidazole)と300mM NaClが含まれている50mM NaH2PO4(pH8.0)緩衝溶液に再懸濁した。前記再懸濁された菌体を細胞破砕機(sonicator)を用いて破砕し、13,000rpmで4℃で20分間遠心分離した後、上澄み液のみを取った。前記上澄み液をHis−tag親和性クロマトグラフィーを用いて精製して、20mMイミダゾール、及び300mM NaClを含有する50mM NaH2PO4(pH8.0)緩衝溶液を充填剤の10倍の液量で流して非特異的結合が可能なタンパク質を除去した。続いて、250mMイミダゾール及び300mM NaClを含有する50mM NaH2PO4(pH8.0)緩衝溶液をさらに流して溶出精製した後、50mM Tris−HCl(pH8.0)緩衝溶液で透析し、酵素の特性解析のために精製酵素CJ_CA_F4Eを確保した。
前記実施例2で確保した本出願の組換え酵素CJ_CA_F4Eのフルクトース−4−エピメラーゼ活性を測定するために、30重量%フルクトースに50mM Tris−HCl(pH8.0)、1mM NiSO4と20mg/mL CJ_CA_F4Eを添加して、60℃で10時間反応させた。
前記実施例2で製造した酵素であるCJ_CA_F4Eのフルクトース−4−エピメラーゼ活性に対する温度の影響力を調査するために、10重量%フルクトースを含む50mM Tris−HCl(pH8.0)緩衝溶液に、1mg/mLのCJ_CA_F4Eを添加して、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃及び70℃の様々な温度で3時間反応させた。前記反応完了後、反応物のタガトースはHPLCを用いて定量分析した。
前記実施例2で製造した酵素であるCJ_CA_F4Eのフルクトース−4−エピメラーゼ活性の金属イオン別の影響力を確認するために、10重量%フルクトースを含む50mM Tris−HCl(pH8.0)緩衝溶液に、1mg/mLのCJ_CA_F4Eと各1mMの様々な金属イオン(ZnSO4、MgCl2、MnCl2、NH4Cl、CaCl2、Na2SO4、CuSO4、MgSO4、MnSO4、(NH4)2SO4、またはNiSO4)を添加して、60℃で5時間反応させた。反応完了後、反応物のタガトースをHPLCを用いて定量分析した。
Claims (12)
- フルクトース、ならびに、
カルディリネア(Caldilinea)sp.由来のタガトース−ビスリン酸アルドラーゼ(tagatose−bisphosphate aldolase);これを発現する微生物;または前記微生物の培養物の1つ以上
を含み、前記タガトース−ビスリン酸アルドラーゼがフルクトースを直接タガトースに転換させる、タガトース生産用組成物。 - 前記フルクトースが、D−フルクトース(fructose)である、請求項1に記載のタガトース生産用組成物。
- 前記タガトース−ビスリン酸アルドラーゼ(tagatose−bisphosphate aldolase)が、配列番号1のアミノ酸配列またはそれと95%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項1に記載のタガトース生産用組成物。
- 前記組成物が、金属イオンまたは金属塩をさらに含む、請求項1に記載のタガトース生産用組成物。
- 前記金属が、マンガン、ニッケルからなる群から選択される1つ以上の金属である、請求項4に記載のタガトース生産用組成物。
- カルディリネア(Caldilinea)sp.由来のタガトース−ビスリン酸アルドラーゼ(tagatose−bisphosphate aldolase);これを発現する微生物;または前記微生物の培養物のうちの1つ以上とフルクトースを接触させ、前記フルクトースを直接タガトースに転換する段階を含み、前記タガトース−ビスリン酸アルドラーゼの基質がフルクトースである、タガトースの製造方法。
- 前記接触が、pH7.0〜9.0、及び45℃〜80℃の温度で0.5時間〜24時間行う、請求項6に記載の方法。
- 前記転換が、前記フルクトースに金属イオンまたは金属塩の存在下で行われるものである、請求項6に記載の方法。
- 前記金属が、マンガン、ニッケルからなる群から選択される1つ以上の金属である、請求項8に記載の方法。
- 前記タガトース−ビスリン酸アルドラーゼ(tagatose−bisphosphate aldolase)が、配列番号1のアミノ酸配列またはそれと95%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項6に記載の方法。
- フルクトース−4−エピメラーゼとしての、カルディリネア(Caldilinea)sp.由来のタガトース−ビスリン酸アルドラーゼ(tagatose−bisphosphate aldolase)の使用。
- 前記タガトース−ビスリン酸アルドラーゼが、配列番号1のアミノ酸配列またはそれと95%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項11に記載の使用。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR10-2017-0111489 | 2017-08-31 | ||
KR20170111489 | 2017-08-31 | ||
PCT/KR2018/010123 WO2019045510A1 (ko) | 2017-08-31 | 2018-08-31 | 과당-4-에피머화 효소 및 이를 이용한 타가토스의 제조 방법 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020531020A JP2020531020A (ja) | 2020-11-05 |
JP6919792B2 true JP6919792B2 (ja) | 2021-08-18 |
Family
ID=65525880
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020511177A Active JP6919792B2 (ja) | 2017-08-31 | 2018-08-31 | フルクトース−c4−エピメラーゼ及びこれを用いてタガトースを製造するための製造方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11408018B2 (ja) |
EP (1) | EP3677675A4 (ja) |
JP (1) | JP6919792B2 (ja) |
KR (1) | KR102078272B1 (ja) |
CN (1) | CN111212907A (ja) |
WO (1) | WO2019045510A1 (ja) |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1819836A2 (en) | 2004-11-22 | 2007-08-22 | Cargill Incorporated | Monosaccharide production system |
KR100964091B1 (ko) | 2008-01-28 | 2010-06-16 | 씨제이제일제당 (주) | 대두 올리고당을 이용한 타가토스의 제조 방법 |
KR101368731B1 (ko) | 2012-01-19 | 2014-03-06 | 씨제이제일제당 (주) | 유청 막 투과액 또는 유청 막 투과 분말로부터 타가토스의 제조 원료가 되는 갈락토스를 제조하는 방법 |
KR101610911B1 (ko) * | 2013-05-09 | 2016-04-08 | 주식회사 삼양사 | L-리불로스 5-인산 4-에피머화 효소를 이용한 과당에서 타가토스 생산 |
CN105431541B (zh) * | 2013-06-05 | 2019-09-24 | Cj第一制糖株式会社 | 塔格糖的生产方法、大肠杆菌及己酮糖c4-差向异构酶突变体 |
WO2015016544A1 (ko) * | 2013-07-29 | 2015-02-05 | 건국대학교 산학협력단 | 알돌레이즈, 알돌레이즈 돌연변이체 및 이를 이용한 타가토스 생산 방법과 생산용 조성물 |
KR101480422B1 (ko) * | 2013-07-29 | 2015-01-13 | 건국대학교 산학협력단 | 효소조합 반응에 의한 과당으로부터 타가토스 생산 방법 및 그 조성물 |
KR101638024B1 (ko) | 2014-10-22 | 2016-07-20 | 씨제이제일제당(주) | 타가토스 제조용 조성물 및 과당으로부터 타가토스를 제조하는 방법 |
PT3322803T (pt) * | 2015-10-02 | 2021-04-28 | Bonumose Llc | Produção enzimática de d-tagatose |
KR101978464B1 (ko) * | 2016-09-07 | 2019-05-14 | 주식회사 삼양사 | 프럭토스 4-에피머화 효소 및 이를 이용한 타가토스 제조 |
MX2019011758A (es) * | 2017-03-31 | 2020-01-09 | Cj Cheiljedang Corp | Composicion para producir tagatosa y procedimiento de produccion de tagatosa usando la misma. |
WO2020010260A1 (en) | 2018-07-03 | 2020-01-09 | Arzeda Corp. | Methods and compositions for preparing tagatose from fructose |
-
2018
- 2018-08-31 US US16/640,341 patent/US11408018B2/en active Active
- 2018-08-31 JP JP2020511177A patent/JP6919792B2/ja active Active
- 2018-08-31 WO PCT/KR2018/010123 patent/WO2019045510A1/ko unknown
- 2018-08-31 EP EP18852297.3A patent/EP3677675A4/en active Pending
- 2018-08-31 KR KR1020180103836A patent/KR102078272B1/ko active IP Right Grant
- 2018-08-31 CN CN201880055516.2A patent/CN111212907A/zh active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20200263217A1 (en) | 2020-08-20 |
EP3677675A4 (en) | 2021-06-09 |
EP3677675A1 (en) | 2020-07-08 |
JP2020531020A (ja) | 2020-11-05 |
CN111212907A (zh) | 2020-05-29 |
WO2019045510A1 (ko) | 2019-03-07 |
US11408018B2 (en) | 2022-08-09 |
KR102078272B1 (ko) | 2020-02-19 |
KR20190024848A (ko) | 2019-03-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR102395816B1 (ko) | 타가토스 생산용 조성물 및 이를 이용한 타가토스 제조방법 | |
JP6927467B2 (ja) | タガトース生産用組成物及びこれを用いたタガトースの製造方法 | |
US11408017B2 (en) | Composition for producing tagatose and method of producing tagatose using the same | |
US11697832B2 (en) | Fructose-C4-epimerase and method of producing tagatose using the same | |
JP6919792B2 (ja) | フルクトース−c4−エピメラーゼ及びこれを用いてタガトースを製造するための製造方法 | |
EP3845643B1 (en) | Novel fructose-4-epimerase and method for preparing tagatose using same | |
KR102399441B1 (ko) | 타가토스 생산용 조성물 및 이를 이용한 타가토스 제조 방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20200221 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200221 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200221 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210209 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210510 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210622 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210706 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6919792 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |