JP6904944B2 - 種子処理耐性微生物のハイスループットな取得方法 - Google Patents

種子処理耐性微生物のハイスループットな取得方法 Download PDF

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Description

関連出願の相互参照
本願は、２０１５年８月２０日に提出された米国特許仮出願６２／２０７，８６８号（参照により、その全体が本明細書に援用される）に基づく利益を主張するものである。
本発明で提供するのは、種子処理プロセス後も生き残ることのできる微生物のハイスループットな取得方法である。
農作物の生産では、種子の化学処理を利用することが多い。種子または得られる植物に、病害耐性または病害虫耐性の特性を付与するには、種子の化学処理に依存する場合が多い。播種前に種子処理を行うと、保存、発芽または播種中の種子への被害を軽減し得るとともに、出芽している植物を保護することもできる。これにより、均一な苗立ちの確保を助けることができ、種子自体への投資資金を守るという利点を得られるだけではなく、単位土地当たりの植物の性能も最大限に高められる。種子及び植物に有益な微生物を種子処理剤に含めることが広がり続けており、これにより、幅広い有益な農業形質を付与できる。微生物は、例えば、植物接種剤、土壌改良剤、生物防除剤または植物生長調節剤として使用できる。
この分野における進歩にもかかわらず、依然として、植物種子処理剤で使用するさらなる微生物を同定する必要性が存在する。
一態様においては、本発明で提供するのは、微生物のハイスループットな取得方法であって、ａ）生長環境において作物植物に関与する複数の微生物を取得するステップと、ｂ）複数の微生物を種子またはその代用物に塗布するステップと、ｃ）その複数の微生物の１つ以上の構成微生物が生存不能になる条件で、種子またはその代用物を保存するステップと、ｄ）種子またはその代用物を溶液に入れるステップと、ｅ）その溶液から、ステップ（ｃ）の後に生き残っている少なくとも第１の微生物を同定するステップとを含む方法である。一実施形態では、ステップａ）は、作物植物及び／または生長環境から、微生物細胞懸濁液を作製することを含む。あるいは、この方法は、ステップｂ）の前に、微生物細胞懸濁液を濃縮することを含んでもよい。具体的な実施形態では、ステップｅ）は、上記の溶液を増殖培地に播いて、上記の微生物を含むコロニーを選択することを含む。
本発明の特定的な一態様では、生長環境において作物植物に関与する複数の微生物を取得することは、ｉ）作物植物及び／または生長環境から微生物細胞懸濁液を作製することと、ｉｉ）その微生物細胞懸濁液を増殖培地に播くことと、ｉｉｉ）微生物コロニーを選択することと、ｉｖ）ステップｉｉｉ）で選択した微生物コロニーの構成微生物を組み合わせることによって、複数の微生物を作製することとを含む。本発明の方法では、生長環境は、農地の土壌を含んでも、非農業環境を含んでもよい。特定的な実施形態では、本発明で用いる複数の微生物は、作物植物の根圏、内部圏、葉圏またはこれらのいずれかを組み合わせた場所から得たものである。この複数の微生物は、作物植物の組織から得てもよい。
具体的な実施形態では、本発明の方法はさらに、作物植物種の播種時、微生物が付与できる少なくとも第１の有益な形質を同定するステップを含む。作物植物種は、本発明の方法で用いる種子と同じ種であってもなくてもよい。作物植物種は、双子葉植物種であってよく、アルファルファ、マメ、ビート、ブロッコリー、キャベツ、ニンジン、カリフラワー、セロリ、白菜、綿、キュウリ、ナス、アマ、レタス、ルピナス、メロン、エンドウ、コショウ、ラッカセイ、ジャガイモ、パンプキン、ダイコン、セイヨウアブラナ、ホウレンソウ、ダイズ、カボチャ、テンサイ、ヒマワリ、トマト及びスイカが挙げられるが、これらに限らない。作物植物種は、単子葉植物種であってもよく、オオムギ、トウモロコシ、リーキ、タマネギ、イネ、モロコシ、スイートコーン、コムギ、ライムギ、アワ、サトウキビ、オートムギ、ライコムギ、アメリカクサキビ及び芝草が挙げられるが、これらに限らない。
本発明の方法のさらなる実施形態では、生き残る微生物は、グラム陰性の非芽胞形成細菌、またはグラム陽性の芽胞形成もしくは非芽胞形成細菌である。別の実施形態では、種子またはその代用物は、約１時間〜約１年間保存するか、周囲温度で保存するか、または周囲温度よりも高いかもしくは低い温度で保存する。
本発明のさらなる実施形態では、複数の微生物を種子またはその代用物に塗布し、複数の微生物を塗布する前、塗布するのと同時または塗布した後に、種子処理剤を種子またはその代用物に塗布する。種子処理剤は、複数の微生物を含んでも含まなくてもよい。一実施形態では、複数の微生物を塗布する前または塗布した後に、種子処理剤を種子またはその代用物に塗布する。別の実施形態では、種子処理剤は、殺真菌剤、殺生物剤、殺虫剤、除草剤、殺ダニ剤、殺鼠剤、殺線虫剤、植物生長調節剤及び微量栄養素、またはこれらを組み合わせたものを含む。さらなる実施形態では、種子処理剤は、ポリマー、着色剤、結合剤、固着剤、付着剤、分散剤、界面活性剤、栄養剤、コーティング剤、湿潤剤、緩衝剤、多糖及び充填剤、またはこれらを組み合わせたものを含む。
種子処理耐性微生物をハイスループットに発見及び単離するための方法Ｂ１及び方法Ｂ２の概略図である。 方法Ｂ１によって発見した、生物分類上の目ごとの相違の代表ヒストグラムである。 方法Ｂ１によって発見した、生物分類上の網ごとの相違の代表ヒストグラムである。 方法Ｂ１によって発見した、生物分類上の網当たりの属の総数による相違の代表ヒストグラムである。 方法Ｂ２によって発見した、生物分類上の目ごとの相違の代表ヒストグラムである。 方法Ｂ２によって発見した、生物分類上の網ごとの相違の代表ヒストグラムである。 方法Ｂ２によって発見した、生物分類上の網当たりの属の総数による相違の代表ヒストグラムである。 方法Ｂ１と方法Ｂ２によって発見した、生物分類上の目ごとの相違の代表ヒストグラムである。 方法Ｂ１と方法Ｂ２によって発見した、生物分類上の網ごとの相違の代表ヒストグラムである。 方法Ｂ１と方法Ｂ２によって発見した、生物分類上の網当たりの属の総数による相違の代表ヒストグラムである。
本発明で提供するのは、対象の植物にコロニーを形成できるとともに、種子処理成分と種子処理プロセスに関連する条件に耐えることができる微生物の取得方法である。例えば、種子処理剤に組み込まれた微生物の生存能が、微生物の種によって異なり得るとともに、同じ種でも株によって異なる可能性があることを本発明者は発見した。したがって、どの微生物または株が、種子処理成分または種子処理プロセスに耐えられるかは、これまでは概ね予測不能であった。さらに、種子処理と最終的な播種との間には、少なくとも１カ月〜数カ月、さらには数年のタイムラグが生じることがある。これにより、一部の株の生存能が播種前に失われるために、農業にとって有益となり得る微生物を同定する性能が大きな影響を受けている。この影響は、どの株が播種前に生存能を喪失するかを予測するのが難しいことと、各生育期に、改善された有用な微生物を組み込む必要性によってさらに大きくなる。候補微生物をそれぞれ個別に試験するには、多大な時間が必要となり、現実的ではない。
過去の調査において、本発明者は、作物植物と関連する数百のグラム陰性細菌株の種子処理成分耐性について個別に試験し、その結果から、典型的には植物と微生物との共生環境から単離した種の大半が、１つの種子当たり１０６〜１０７コロニー形成単位（ＣＦＵ）で種子に塗布してから１〜２週間後の検出時点まで耐えられないことが示された。さらに、結果から、根圏に特に多く存在する微生物の一部は、種子に塗布する微生物の濃度を問わず、種子処理後に生存能をほぼ完全に喪失することが明らかになった。本発明で提供する方法は、このような問題点を解消し、短時間で、大きな集団の微生物を同定可能にし、種子処理成分及び種子処理プロセスに耐えられるとともに、微生物が農作物植物に及ぼす有益な作用についてさらに試験できる多数の微生物をもたらす。
驚くべきことに、本明細書に開示されている方法により、増殖の速い耐寒性微生物（芽胞形成細菌など）のみならず、多様なその他の微生物群（非芽胞形成細菌など）も同定可能になることが分かった。非限定的な例では、開示されている方法に従って、複数のグラム陰性細菌（種子処理プロセスまたは種子処理成分に耐えられないことが多いか、または、生き残る能力について試験するのが困難である）を作物植物の根圏から単離し、スクリーニングする。
一実施形態では、種子コーティング内で保存後でも、農業において有効に利用できる種子処理耐性微生物のハイスループットな単離、選択、及び同定方法を提供する。具体的な実施形態では、この方法は、所定の１つの環境または複数の環境に特有の複数の微生物を取得することと、種子処理成分、種子処理プロセス、及び試薬に耐えられる微生物を同定することとを含む。一実施形態では、微生物プールを所定の比率で種子に塗布する。別の実施形態では、種子に直接塗布するためのものとして、多様な微生物プールを含む濃縮微生物細胞懸濁液を作製する。この懸濁液は、微生物群（土壌、植物組織及び水域に見られるものが挙げられるが、これらに限らない）に存在するすべての細菌、真菌及び古細菌を反映した抽出物であることができる。この細胞懸濁液は、人工的に作製した微生物プールであって、事前に培養したプールに由来することもできる。種子処理プロセスに耐えられる微生物を同定する目的で、これらの細胞懸濁液を用いて、種子に接種できる。
追加の実施形態では、種子処理調製剤で用いてよいポリマー、着色剤、有害生物防除剤（殺真菌剤、殺生物剤、殺虫剤、除草剤、殺ダニ剤、殺鼠剤、殺線虫剤を含む）、またはその他の成分を同様の形式で種子に塗布して、様々な種子処理成分と種子処理プロセスに耐えられる微生物を選択する。特定の実施形態では、種子処理とインキュベートに耐える微生物株を培養し、植物の生長に対する有益な作用についての圃場試験スクリーニングで将来使用するのに備えて保存する。
実生、種子病害、早期害虫、病害虫などを抑えるために、特有の成分（例えば殺線虫剤、殺虫剤、殺真菌剤、接種剤を含む有害生物防除剤、または例えばコーティング剤もしくは保護剤を含む調合成分のうちの１つ以上など）による種子処理剤を作製及び塗布するための好適な方法及び組成物は、当該技術分野において知られている。保存及び播種の前に種子を前処理すると、例えば、収穫高を向上させる可能性を高めるように、早期苗立ち、均一性及び活力を最大化することができる。
本発明で用いる種子処理成分の使用率は、種子を播く特定の地理的領域における使用率または種子処理によって実現するように意図されている目的の恩恵を得るための使用率として、当該技術分野において標準的な使用率であってよい。標準的な範囲は、当該技術分野において周知であり、その国の規制要件によって勧告されていることが多く、その規制要件により、市販の種子に塗布する最小及び最大レベルが定められていることがある。本明細書に記載されている種子処理耐性の方法の特定の有害生物防除剤製品の好適な範囲の例は、商業用途用の製品ラベルに記載されている範囲である。あるいは、本明細書に記載されているハイスループットな方法では、微生物の生存能に影響を及ぼして、種子処理後に生存能を維持する能力について、よりストリンジェントまたはコンパクトな試験を行えるようにできる可能性のあるいずれかの１つ以上の種子処理成分の使用量を増やすことができる。
同様に、コーティング剤、微生物または保護剤の量は、様々な要因（用いる化合物、処理する種子のタイプ、提示されている播種条件、及び予測される極限条件など）に左右され得る。本明細書に示されている指針を用いれば、当業者は、本発明による使用に適する具体的な量を判断できるであろう。種子処理では、調合製品（純粋な活性成分に対するもの）を用いることが多い。有益なことに、供給の利便性と使いやすさのために、本明細書に記載されている方法では、調合製品を用いてもよい。
いくつかの実施形態では、植物／土壌抽出物に含まれる莫大な数の微生物（無数の微生物種と亜種を表す）を単離、選択し、任意に応じて同定し、種子処理耐性について１回のアッセイで試験する。本発明の別の態様では、対象の植物及び土壌からの抽出物で種子を直接コーティングして、微生物の単離工程を行うときに存在する培地による偏りを防ぐ。特定的な実施形態では、様々な土壌で生長した多数の異なる作物を収穫して、関連する微生物を所定の種の種子またはその別種に塗布できるようにし、それにより、これらの対象の植物にコロニーを形成するとともに、種子に塗布するプロセスに耐える微生物を選択するようにする。
本発明の方法により、初めて、対象の植物にコロニーを形成するとともに、種子処理剤に組み込んでも耐えることもできる株を環境試料から優先濃縮できるようになる。確立された単離プロトコールは概ね、特定の増殖パターンを示すか、特定の物質を利用するか、または試験で、所望の生化学的活性に関して陽性となる微生物を見つけることに対するものである。記載されている方法により、ユーザーは、種子処理組成物において微生物に適用されるインキュベート時間を変更できるようになり、それにより、必要な安定性の程度に対する制御性が向上し、実際のシナリオに更に適用可能になる。所望に応じて、本発明に従って解析する出発微生物から、対象となる特定の作物植物またはその変種にコロニーを形成する種を濃縮できる。
種子処理ステップを単離手順に挿入すると、圃場試験の前に、各微生物候補の種子処理耐性について個別に試験する必要がなくなるという利点が得られる（個別試験は、特定の微生物が商業的に実用可能か判断する際の現行のパラダイムである）。この結果、従来の方法よりも効率性が向上する。本明細書に開示されている方法は、上記のような微生物を同定するための迅速かつ簡素化されたプロセスをもたらし、長時間を要したりまたは個々に行ったりする作業の必要性を排除し、多大な資源を節約することになる。
定義
特に断りのない限り、用語は、当業者による従来の用法に従っているものと理解されたい。
いくつかのケースでは、明確にするため及び／または参照を容易にするために、広く理解されている意味を有する用語が、本明細書で定義されており、このような定義が本明細書に含まれていることは、必ずしも、当該技術分野において一般的に理解されている定義との実質的な違いを表すものと解釈するものではない。本明細書で説明または参照されている技法と手順の多くは、当業者に、よく理解されているとともに、従来の手法を用いて、広く利用されている。
文脈上、明らかに別段に解される場合を除き、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」には、複数の言及物が含まれる。例えば、「細胞」という用語には、細胞の混合物を含め、１つ以上の細胞が含まれる。
本明細書で使用する場合、「ハイスループット」という用語は、いずれかの微生物群集試料または複数の異なる試料（例えば、根圏、内部圏または土壌から得た環境試料）に由来する多数の微生物（いずれかの微生物種及び／または亜種を含む）を１つのプロトコールで試験するプロセス、例えば、多数の微生物種及び亜種を表している微生物アレイを１回のアッセイで試験するプロセスを指す。
本明細書で使用する場合、「病原体」という用語は、植物または動物において病害を引き起こすことのできる、例えば藻、クモ形類動物、細菌、真菌、虫、線虫、寄生植物、酵母、原生動物またはウイルスのような生物を指す。「植物病原体」と言う用語は、本明細書で使用する場合、植物に感染する病原生物を指す。
本明細書で使用する場合、「亜種」という用語は、微生物に関しては、その亜種が属する種を特定する特性を有するが、親株とのヌクレオチド配列の違いまたは同定可能な形質の違い（この場合の形質は、遺伝的系（経世代的）なものである）を少なくとも１つ有する株である。ヌクレオチド配列の違いには、置換、挿入、欠失またはこのようは変化のいずれかを組み合わせたものが含まれる。
本明細書で使用する場合、種子処理成分は、本明細書に記載されているとともに、当該技術分野において知られている少なくとも１つの有害生物防除剤または種子処理調合成分である。
ハイスループットなスクリーニング方法
環境試料（例えば土壌もしくは植物物質を含む）、または本明細書に記載されているような培養微生物のプール試料から直接単離できる微生物懸濁液をスクリーニングして、植物種子処理組成物及び植物種子処理プロセスに関連する条件に耐えられる微生物を同定できる。記載されている方法の培養ステップ、懸濁ステップ及び濃縮ステップで使用できる多くの培地と緩衝液が当該技術分野において知られている。様々な実施形態において、微生物は、種子、特には作物植物の種子、または種子代用物（例えば、岩石、大理石、結晶などのような粒子、または合成物質もしくは合成表面を含む）の上に塗布してよい。
特定の実施形態では、代用物は、異なる植物種の種子であってよい。例えば、本発明の方法では、トウモロコシ種子に塗布することによって、ダイズ植物の生長と関連する微生物の種子処理耐性を試験してよい。いくつかの実施形態では、選択した微生物株を液体コートまたは粉剤として、種子または種子代用物に塗布してよい。細菌懸濁液は、例えば、溶液で希釈して、種子をコーティングするのに直接使用できる。あるいは、非細菌は、例えば、胞子調製物として種子に塗布できる。別の例では、生きた培養液、発酵物または液体胞子培養液を種子に塗布できる。さらに別の例では、処理した種子は、転動するとともに、空気に曝すことによって乾燥できる。微生物は、不活性担体と混合し、乾燥し、粉砕して微粉末にして、種子に塗布することもできる。不活性担体材の例としては、タルク、シリカ、ファーバーク、パーライト、潤滑剤（ｆｌｕｅｎｃｙ ａｇｅｎｔ）、バーミキュライト、アルギネート及びクレーが挙げられる。
一実施形態では、植物関連微生物のプールを所定の比率で種子に塗布する。特に重要なのは、多数の微生物を塗布して、１回のアッセイで、多様なタイプの微生物を、従来のスクリーニング方法（圃場またはグロースチャンバー／アッセイ試験（２年のプロセスである場合が多い）において、単離体ベースで、個々の単離体で生残性と生存能について試験することを含む）よりも効率的にスクリーニング可能にすることである。具体的な実施形態では、微生物で処理した種子の胞子濃度または微生物細胞濃度は、種子１つ当たり約１０６〜約１０９個である。追加の実施形態では、種子には、種子１つ当たりに、上記よりも多い胞子または微生物細胞が存在してよい（例えば、種子１つ当たり１０１０個、１０１１個、１０１２個、またはこれを越える数の微生物または胞子）。濃度は、例えば、微生物培養液の濁度と６００ｎｍにおける光学密度（ＯＤ６００）を測定し、所望の対応するＣＦＵを直接種子に塗布することによって容易に調整できる。
微生物で処理する前、処理するのと同時または処理した後に、本明細書に記載されているように、他の種子処理剤及び調合成分を塗布することができる。特定の成分、例えばポリマーでは、微生物での処理を行った後に塗布するのが好ましいことがある。いくつかの実施形態では、１つ以上の有害生物防除剤（殺真菌剤、殺生物剤、殺虫剤、除草剤、殺ダニ剤、殺鼠剤及び殺線虫剤を含む）、植物生長調節剤（ＬＣＯ、ＣＯ、キチン性化合物、フラボノイド、ジャスモン酸、メチルジャスモネート、リノール酸、リノレン酸及びカリキンを含む）、または微量栄養素も種子に塗布する。種子処理成分の塗布は、微生物を塗布する前、塗布した後または塗布するのと同時に行ってよい。一実施形態では、イプコナゾール、メタラキシル、トリフロキシストロビン及びクロチアニジンから選択した１つ以上の有害生物防除剤と、任意に応じて、事前に単離した１つ以上の有益な微生物（例えばＢａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓを含む）を含む組成物で前処理したトウモロコシ種子に、微生物を塗布する。別の実施形態では、ピラクロストロビン、メタラキシル、フルキサピロキサド及びイミダクロプリドから選択した１つ以上の有害生物防除剤を含む組成物で前処理したダイズ種子に、微生物を塗布する。さらに別の実施形態では、ピラクロストロビン、メタラキシル、フルキサピロキサド、ミクロブタニル、イミダクロプリド、イプコナゾール、チアメトキサム、クロルピリホス及びアバメクチンから選択した１つ以上の有害生物防除剤を含む組成物で前処理した綿種子に、微生物を塗布する。様々な有害生物防除剤、植物生長調節剤及び微量栄養素が当該技術分野において知られているとともに、本明細書に記載されており、当業者は、例えば、作物の種子及び所望の有益な作用に応じて、これらの化合物の組成と濃度を変更することができる。
具体的な実施形態では、正確に、安全に、かつ効率的に種子処理製品を種子に塗布するように特別に設計及び製造されている処理剤塗布器具の使用を通じて、混合する従来の方法、噴霧する従来の方法またはこれらを組み合わせた方法を用いて、種子または種子代用物に、本発明の方法に従って取得した微生物懸濁液を均一にコーティングしてよい。
任意に応じて、微生物を塗布した後または塗布するのと同時に、ポリマーベースの種子仕上げ剤（「オーバーコート」）を加えることができる。そして、所望の条件で、一部の微生物を生存不能にできる期間にわたって種子を保存して、保存後でも生き残っている少なくとも第１の微生物を同定できるようにする。保存条件を必要に応じて修正して、所定の種子処理剤を塗布した後でも生き残っている微生物を同定するための所望のレベルのストリンジェンシーとストリンジェンシー特性を得てよい。変更してよい保存条件の非限定的な例としては、例えば、保存時間、温度及び湿度が挙げられる。一実施形態では、種子業界において農家に流通及び販売するまで種子を保存する際に典型的な条件で保存を行う。特定的な実施形態では、１時間未満から１年以上の範囲（約１時間、約６時間、約１２時間、約２４時間、約２日、約１週間、約２週間、約１カ月、約２カ月、約６カ月及び約１年またはそれを超える期間を含むとともに、これらの時間から導き出せるすべての範囲を含む）で保存を行う。別の実施形態では、保存は、周囲温度で行うか、または周囲温度よりも高いかもしくは低い温度（約０℃以下、約４℃、約２５℃、約３７℃及び約４５℃以上を含み、これらの温度から導き出せるすべての範囲を含む）で行ってもよい。
所望の保存条件の後、処理した種子を緩衝液に浸漬して、例えば固形寒天増殖培地に堆積できる細胞懸濁液を作製できる。形成される微生物コロニーは、種子処理と保存に耐えた株に由来し、これらのコロニーを単離し、微生物分類方法を用いて同定し、圃場試験またはその他の調査で将来使用するのに備えて保存することができる。多くの培地と緩衝液が当該技術分野において知られており、記載されている方法の培養ステップ、懸濁ステップ及び濃縮ステップで使用できる。
特に重要なのは、本明細書に記載されている方法において、市販の種子処理調合物で用いられている様々な化合物を使用する点である。このような化合物を含めると、市販の種子処理条件を再現可能になり、将来の試験及び商業用途で、そのような条件に耐える微生物の選択を確実に行える。さらなる試験に、追加の種子処理条件でのさらなるスクリーニングと、商業的な農業条件において植物に有益な作用を及ぼし得る微生物についての植物圃場条件での試験を含めてもよい。
本明細書に記載されているものを含め、発芽して植物を形成できるいずれかの植物種子であって、線虫、病原真菌及び／または病原細菌による攻撃の影響を受けやすい種子を、本明細書に記載されている方法によって得られる微生物で処理することができる。
微生物
本明細書に記載されている方法は、いずれの原核微生物または真核微生物も含むいずれの微生物にも適用可能である。いくつかの実施形態では、微生物は、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ属、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ属、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ属、Ａｕｒｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ａｚｏｂａｃｔｅｒ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｂｅｉｊｅｒｉｎｃｋｉａ属、Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ属、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属、Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ属、Ｃｏｍｏｍｏｎａｓ属、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｃｕｒｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ属、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ属、Ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｐｈａｇｅ属、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ属、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｐａｓｔｅｕｒｉａ属、Ｐｈｉｎｇｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ属、Ｐｈｙｌｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ属、Ｓｅｒｒａｔｉａ属、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属、Ｖａｒｉｏｖｏｒａｘ属及びＸｅｎｏｒｈａｄｂｕｓ属のうちの少なくとも１つの細菌に由来する生物系殺真菌剤（「ｂｆ」）である。特定的な実施形態では、細菌は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｆｏｒｍｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｉａ ｐｅｎｅｔｒａｎｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｉａ ｕｓａｇｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ及びこれらを組み合わせたものからなる群から選択する。
実施形態では、生物系殺真菌剤（「ｂｆ」）は、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ属、Ａｍｐｅｌｏｍｙｃｅｓ属、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ属、Ｂｅａｕｖｅｒｉａ属、Ｃａｎｄｉｄａ属、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ属、Ｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍ属、Ｃｒｙｐｈｏｎｅｃｔｒｉａ属、Ｆｕｓａｒｉｕｍ属、Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ属、Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ属、Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ属、Ｍｉｃｒｏｄｏｃｈｉｕｍ属、Ｍｕｓｃｏｄｏｒ属、Ｐａｅｃｉｌｏｎｙｃｅｓ属、Ｐｈｌｅｂｉｏｐｓｉｓ属、Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ属、Ｐｙｔｈｉｕｍ属、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ属、Ｔｙｐｈｕｌａ属、Ｕｌｏｃｌａｄｉｕｍ属及びＶｅｒｔｉｃｉｌｉｕｍ属の真菌であることができる。特定的な実施形態では、真菌は、Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ、Ｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍ ｍｉｎｉｔａｎｓ、Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ ｖｉｒｅｎｓ、Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ（当該技術分野では、Ｍｅｔａｒｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ、Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ｂｒｕｎｎｅｕｍまたは「緑きょう病菌」ということもある）、Ｍｕｓｃｏｄｏｒ ａｌｂｕｓ、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｌｉｌａｃｉｎｕｓ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｐｏｌｙｓｐｏｒｕｍ及びこれらを組み合わせたものである。
本明細書に開示されている方法で用いるのに適することのある生物系殺真菌剤（「ｂｆ」）の非限定的な例としては、Ａｍｐｅｌｏｍｙｃｅｓ ｑｕｉｓｑｕａｌｉｓ（ｂｆ．１）（例えば、ドイツのＩｎｔｒａｃｈｅｍ Ｂｉｏ ＧｍｂＨ ＆ Ｃｏ．ＫＧのＡＱ１０（登録商標）（ｂｆ．１ａ））、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ（ｂｆ．２）（例えば、スイスのＳｙｎｇｅｎｔａのＡＦＬＡＧＵＡＲＤ（登録商標）（ｂｆ．２ａ））、Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｐｕｌｌｕｌａｎｓ（ｂｆ．３）（例えば、ドイツのｂｉｏ ｆｅｒｍ ＧｍｂＨのＢＯＴＥＣＴＯＲ（登録商標）（ｂｆ．３ａ））、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ（ｂｆ．４）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ単離株ＡＱ７１７、ＮＲＲＬ Ｂ−２１６６２（ｂｆ．４ａ）（米国のＦａ．ＡｇｒａＱｕｅｓｔ Ｉｎｃ．製）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−３００８７（ｂｆ．４ｂ）（米国のＦａ．ＡｇｒａＱｕｅｓｔ Ｉｎｃ．製）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属単離株ＡＱ１７５、ＡＴＣＣ５５６０８（ｂｆ．５）（米国のＦａ．ＡｇｒａＱｕｅｓｔ Ｉｎｃ．製）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属単離株ＡＱ１７７、ＡＴＣＣ５５６０９（ｂｆ．６）（米国のＦａ．ＡｇｒａＱｕｅｓｔ Ｉｎｃ．製）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ（ｂｆ．７）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ単離株ＡＱ７１３、ＮＲＲＬ Ｂ−２１６６１（ｂｆ．７ａ）（ＲＨＡＰＳＯＤＹ（登録商標）、ＳＥＲＥＮＡＤＥ（登録商標）ＭＡＸ及びＳＥＲＥＮＡＤＥ（登録商標）ＡＳＯ）（米国のＦａ．ＡｇｒａＱｕｅｓｔ Ｉｎｃ．製）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ単離株ＡＱ７４３、ＮＲＲＬ Ｂ−２１６６５（ｂｆ．７ｂ）（米国のＦａ．ＡｇｒａＱｕｅｓｔ Ｉｎｃ．製）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ（ｂｆ．８）Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ＦＺＢ２４（ｂｆ．８ａ）（例えば、米国のＮｏｖｏｚｙｍｅｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．のＴＡＥＧＲＯ（登録商標）（ｂｆ．８ｂ））、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０３４９（ｂｆ．８ｃ）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ＴＪ１０００（ｂｆ．８ｄ）（すなわち、１ＢＥ、単離株ＡＴＣＣ ＢＡＡ−３９０としても知られている）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ（ｂｆ．９）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ単離株ＡＱ５２、ＮＲＲＬ Ｂ−２１６１９（ｂｆ．９ａ）（米国のＦａ．ＡｇｒａＱｕｅｓｔ Ｉｎｃ．製）、Ｃａｎｄｉｄａ ｏｌｅｏｐｈｉｌａ（ｂｆ．１０）、Ｃａｎｄｉｄａ ｏｌｅｏｐｈｉｌａ Ｉ−８２（ｂｆ．１０ａ）（例えば、米国のＥｃｏｇｅｎ Ｉｎｃ．のＡＳＰＩＲＥ（登録商標）（ｂｆ．１０ｂ））、Ｃａｎｄｉｄａ ｓａｉｔｏａｎａ（ｂｆ．１１）（例えば、米国のＭｉｃｒｏ Ｆｌｏ Ｃｏｍｐａｎｙ（ＢＡＳＦ ＳＥ）及びＡｒｙｓｔａのＢＩＯＣＵＲＥ（登録商標）（ｂｆ．１１ａ）（リゾチームとの混合物）及びＢＩＯＣＯＡＴ（登録商標）（ｂｆ．１１ｂ））、Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ ｒｏｓｅａ ｆ．ｃａｔｅｎｕｌａｔａ（Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍともいう）（ｂｆ．１２）（例えば、フィンランドのＶｅｒｄｅｒａの単離株Ｊ１４４６：ＰＲＥＳＴＯＰ（登録商標）（ｂｆ．１２ａ））、Ｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍ ｍｉｎｉｔａｎｓ（ｂｆ．１３）（例えば、ドイツのＰｒｏｐｈｙｔａのＣＯＮＴＡＮＳ（登録商標）（ｂｆ．１３ａ））、Ｃｒｙｐｈｏｎｅｃｔｒｉａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ（ｂｆ．１４）（例えば、フランスのＣＮＩＣＭのＥｎｄｏｔｈｉａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ（ｂｆ．１４ａ））、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ（ｂｆ．１５）（例えば、南アフリカのＡｎｃｈｏｒ Ｂｉｏ−ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＹＩＥＬＤ ＰＬＵＳ（登録商標）（ｂｆ．１５ａ））、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ（ｂｆ．１６）（例えば、イタリアのＳ．Ｉ．Ａ．Ｐ．Ａ．のＢＩＯＦＯＸ（登録商標）（ｂｆ．１６ａ）、フランスのＮａｔｕｒａｌ Ｐｌａｎｔ ＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎのＦＵＳＡＣＬＥＡＮ（登録商標））、Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ ｆｒｕｃｔｉｃｏｌａ（ｂｆ．１７）（例えば、イスラエルのＡｇｒｏｇｒｅｅｎのＳＨＥＭＥＲ（登録商標）（ｂｆ．１７ａ））、Ｍｉｃｒｏｄｏｃｈｉｕｍ ｄｉｍｅｒｕｍ（ｂｆ．１８）（例えば、フランスのＡｇｒａｕｘｉｎｅのＡＮＴＩＢＯＴ（登録商標）（ｂｆ．１８ａ））、Ｍｕｓｃｏｄｏｒ ａｌｂｕｓ（ｂｆ．１９）、Ｍｕｓｃｏｄｏｒ ａｌｂｕｓ単離株ＮＲＲＬ３０５４７（ｂｆ．１９ａ）（米国のＦａ．ＡｇｒａＱｕｅｓｔ Ｉｎｃ．製）、Ｍｕｓｃｏｄｏｒ ｒｏｓｅｕｓ（ｂｆ．２０）、Ｍｕｓｃｏｄｏｒ ｒｏｓｅｕｓ単離株ＮＲＲＬ３０５４８（ｂｆ．２０ａ）（米国のＦａ．ＡｇｒａＱｕｅｓｔ Ｉｎｃ．製）、Ｐｈｌｅｂｉｏｐｓｉｓ ｇｉｇａｎｔｅａ（ｂｆ．２１）（例えば、フィンランドのＶｅｒｄｅｒａのＲＯＴＳＯＰ（登録商標）（ｂｆ．２１ａ））、Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ ｆｌｏｃｃｕｌｏｓａ（ｂｆ．２２）（例えば、カナダのＰｌａｎｔ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｏ． Ｌｔｄ．のＳＰＯＲＯＤＥＸ（登録商標）（ｂｆ．２２ａ））、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｏｌｉｇａｎｄｒｕｍ（ｂｆ．２３）、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｏｌｉｇａｎｄｒｕｍ ＤＶ７４（ｂｆ．２３ａ）（例えば、チェコ共和国のＲｅｍｅｓｌｏ ＳＳＲＯ，ＢｉｏｐｒｅｐａｒａｔｙのＰＯＬＹＶＥＲＳＵＭ（登録商標）（ｂｆ．２３ｂ））、Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ ｆｌａｖｕｓ（ｂｆ．２４）、Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ ｆｌａｖｕｓ Ｖ１１７ｂ（ｂｆ．２４ａ）（例えば、ドイツのＰｒｏｐｈｙｔａのＰＲＯＴＵＳ（登録商標）（ｂｆ．２４ｂ））、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ａｓｐｅｒｅｌｌｕｍ（ｂｆ．２５）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ａｓｐｅｒｅｌｌｕｍ ＳＫＴ−１（ｂｆ．２５ａ）（例えば、日本のＫｕｍｉａｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．のＥＣＯ−ＨＯＰＥ（登録商標）（ｂｆ．２５ｂ））、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ（ｂｆ．２６）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ ＬＣ５２（ｂｆ．２６ａ）（例えば、ニュージーランドのＡｇｒｉｍｍ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＬｔｄのＳＥＮＴＩＮＥＬ（登録商標）（ｂｆ．２６ｂ））、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ（ｂｆ．２７）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ Ｔ−２２（ｂｆ．２７ａ）（例えば、米国のＦｉｒｍａ ＢｉｏＷｏｒｋｓ Ｉｎｃ．のＰＬＡＮＴＳＨＩＥＬＤ（登録商標）（ｂｆ．２７ｂ））、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ ＴＨ−３５（ｂｆ．２７ｃ）（例えば、イスラエルのＭｙｃｏｎｔｒｏｌ Ｌｔｄ．のＲＯＯＴ ＰＲＯ（登録商標）（ｂｆ．２７ｄ））、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ Ｔ−３９（ｂｆ．２７ｅ）（例えば、イスラエルのＭｙｃｏｎｔｒｏｌ Ｌｔｄ．及びイスラエルのＭａｋｈｔｅｓｈｉｍ Ｌｔｄ．のＴＲＩＣＨＯＤＥＸ（登録商標）及びＴＲＩＣＨＯＤＥＲＭＡ２０００（登録商標）（ｂｆ．２７ｆ））、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ ＩＣＣ０１２（ｂｆ．２７ｇ）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ及びＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ（ｂｆ．２８）（例えば、ニュージーランドのＡｇｒｉｍｍ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＬｔｄのＴＲＩＣＨＯＰＥＬ（ｂｆ．２８ａ））、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ ＩＣＣ０１２及びＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ ＩＣＣ０８０（ｂｆ．２８ｂ）（例えば、イタリアのＩｓａｇｒｏ ＲｉｃｅｒｃａのＲＥＭＥＤＩＥＲ（登録商標）ＷＰ（ｂｆ．２８ｃ））、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｐｏｌｙｓｐｏｒｕｍ及びＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ（ｂｆ．２９）（例えば、スウェーデンのＢＩＮＡＢ Ｂｉｏ−Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ ＡＢのＢＩＮＡＢ（登録商標）（ｂｆ．２９ａ））、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｓｔｒｏｍａｔｉｃｕｍ（ｂｆ．３０）（例えば、ブラジルのＣ．Ｅ．Ｐ．Ｌ．Ａ．Ｃ．のＴＲＩＣＯＶＡＢ（登録商標）（ｂｆ．３０ａ））、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｅｎｓ（ｂｆ．３１）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｅｎｓ ＧＬ−２１（ｂｆ．３１ａ）（例えば、米国のＣｅｒｔｉｓ ＬＬＣのＳＯＩＬＧＡＲＤ（登録商標）（ｂｆ．３１ｂ））、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｅｎｓ Ｇ１−３（ｂｆ．３１ｃ）（例えば、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ ＢｉｏＡｇ，Ｉｎｃ．のＡＴＣＣ５８６７８）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｅｎｓ Ｇ１−２１（ｂｆ．３１ｄ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｔｒｉｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから市販されている）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｅｎｓ及びＢａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ（ｂｆ．３２）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｅｎｓ Ｇ１−３及びＢａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ＦＺＢ２４（ｂｆ．３２ａ）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｅｎｓ Ｇ１−３及びＢａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０３４９（ｂｆ．３２ｂ）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｅｎｓ Ｇ１−３及びＢａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ＴＪ１０００（ｂｆ．３２ｃ）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｅｎｓ Ｇ１−２１及びＢａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ＦＺＢ２４（ｂｆ．３２ｄ）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｅｎｓ Ｇ１−２１及びＢａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０３４９（ｂｆ．３２ｅ）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｅｎｓ Ｇ１−２１及びＢａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ＴＪ１０００（ｂｆ．３２ｆ）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ（ｂｆ．３３）（例えば、インドのＥｃｏｓｅｎｓｅ Ｌａｂｓ．（Ｉｎｄｉａ）Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．のＴＲＩＥＣＯ（登録商標）（ｂｆ．３３ａ）、インドのＴ．Ｓｔａｎｅｓ ＆ Ｃｏ．Ｌｔｄ．のＢＩＯ−ＣＵＲＥ（登録商標）Ｆ）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ ＴＶ１（ｂｆ．３３ｂ）（例えば、イタリアのＡｇｒｉｂｉｏｔｅｃ ｓｒｌのＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ ＴＶ１）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ ＩＣＣ０８０（ｂｆ．３３ｃ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属単離株ＮＲＲＬ Ｎｏ．Ｂ−３０１４５（ｂｆ．３４）（米国のＦａ．ＡｇｒａＱｕｅｓｔ Ｉｎｃ．製）、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属単離株Ｍ１０６４（ｂｆ．３５）（米国のＦａ．ＡｇｒａＱｕｅｓｔ Ｉｎｃ．製）、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇａｌｂｕｓ（ｂｆ．３６）、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇａｌｂｕｓ単離株ＮＲＲＬ３０２３２（ｂｆ．３６ａ）（米国のＦａ．ＡｇｒａＱｕｅｓｔ Ｉｎｃ．製）、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｙｄｉｃｕｓ（ｂｆ．３７）、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｙｄｉｃｕｓ ＷＹＥＣ１０８（ｂｆ．３７ａ）（例えば、米国のＩｄａｈｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎのＡＣＴＩＮＯＶＡＴＥ（登録商標）、ＡＣＴＩＮＯＶＡＴＥ ＡＧ（登録商標）、ＡＣＴＩＮＯＶＡＴＥ ＳＴＰ（登録商標）、ＡＣＴＩＮＯ−ＩＲＯＮ（登録商標）、ＡＣＴＩＮＯＶＡＴＥ Ｌ＆Ｇ（登録商標）及びＡＣＴＩＮＯＧＲＯＷ（登録商標）における単離株ＡＴＣＣ５５４４５）、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｏｌａｃｅｕｓｎｉｇｅｒ（ｂｆ．３８）、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｏｌａｃｅｕｓｎｉｇｅｒ ＹＣＥＤ９（ｂｆ．３８ａ）（例えば、米国のＩｄａｈｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎのＤＥ−ＴＨＡＴＣＨ−９（登録商標）、ＤＥＣＯＭＰ−９（登録商標）及びＴＨＡＴＣＨ ＣＯＮＴＲＯＬ（登録商標）における単離株ＡＴＣＣ５５６６０）、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ＷＹＥ５３（ｂｆ．３９）（例えば、米国のＩｄａｈｏ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎのＤＥ−ＴＨＡＴＣＨ−９（登録商標）、ＤＥＣＯＭＰ−９（登録商標）及びＴＨＡＴＣＨ ＣＯＮＴＲＯＬ（登録商標）における単離株ＡＴＣＣ５５７５０）、ならびにＵｌｏｃｌａｄｉｕｍ ｏｕｄｅｍａｎｓｉｉ（ｂｆ．４０）、Ｕｌｏｃｌａｄｉｕｍ ｏｕｄｅｍａｎｓｉｉ ＨＲＵ３（ｂｆ．４０ａ）（例えば、ニュージーランドのＢｏｔｒｙ−Ｚｅｎ ＬｔｄのＢＯＴＲＹ−ＺＥＮ（登録商標）（ｂｆ．４０ｂ））が挙げられる。
特定的な実施形態では、微生物は、微生物の殺虫剤、殺ダニ剤または殺線虫剤である。本明細書に開示されている方法で用いてよい真菌の殺虫剤、殺ダニ剤または殺線虫剤の非限定的な例は、ＭｃＣｏｙ，Ｃ．Ｗ．，Ｓａｍｓｏｎ，Ｒ．Ａ．，ａｎｄ Ｃｏｕｃｉａｓ，Ｄ．Ｇ．“Ｅｎｔｏｍｏｇｅｎｏｕｓ ｆｕｎｇｉ．Ｉｎ“ＣＲＣ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ，Ｐａｒｔ Ａ．Ｅｎｔｏｍｏｇｅｎｏｕｓ Ｐｒｏｔｏｚｏａ ａｎｄ Ｆｕｎｇｉ．”（Ｃ．Ｍ．Ｉｎｏｆｆｏ，ｅｄ．），（１９８８）：Ｖｏｌ．５，１５１−２３６、Ｓａｍｓｏｎ，Ｒ．Ａ．，Ｅｖａｎｓ，Ｈ．Ｃ．，ａｎｄ Ｌａｔｇｅ’，Ｊ．Ｐ．“Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｅｎｔｏｍｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｆｕｎｇｉ．”（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ）（１９８８）及びｄｅＦａｒｉａ，Ｍ．Ｒ．ａｎｄ Ｗｒａｉｇｈｔ，Ｓ．Ｐ．“Ｍｙｃｏｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅｓ ａｎｄ Ｍｙｃｏａｃａｒｉｃｉｄｅｓ：Ａ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｌｉｓｔ ｗｉｔｈ ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ ｃｏｖｅｒａｇｅ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｔｙｐｅｓ．”Ｂｉｏｌ．Ｃｏｎｔｒｏｌ（２００７），ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ．２００７．０８．００１に記載されている。
実施形態では、真菌の殺虫剤、殺ダニ剤または殺線虫剤は、Ａｅｇｅｒｉｔａ属の真菌、Ａｋａｎｔｈｏｍｙｃｅｓ属の真菌、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ属の真菌、Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓ属の真菌、Ａｓｃｈｅｒｓｏｎｉａ属の真菌、Ａｓｃｏｐｈａｅｒａ属の真菌、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属の真菌、Ｂｅａｕｖｅｒｉａ属の真菌、Ｂｌａｓｔｏｄｅｎｄｒｉｏｎ属の真菌、Ｃａｌｏｎｅｃｔｒｉａ属の真菌、Ｃｏｅｌｅｍｏｍｙｃｅｓ属の真菌、Ｃｏｅｌｏｍｙｃｉｄｉｕｍ属の真菌、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ属の真菌、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ属の真菌、Ｃｏｕｃｈｉａ属の真菌、Ｃｕｌｉｃｉｎｏｍｙｃｅｓ属の真菌、Ｄａｃｔｙｌａｒｉａ属の真菌、Ｅｎｇｙｏｄｏｎｔｉｕｍ属の真菌、Ｅｎｔｏｍｏｐｈａｇａ属の真菌、Ｅｎｔｏｍｏｐｈｔｈｏｒａ属の真菌、Ｅｒｙｎｉａ属の真菌、Ｆｉｌａｒｉｏｍｙｃｅｓ属の真菌、Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｅｌｌａ属の真菌、Ｆｕｓａｒｉｕｍ属の真菌、Ｇｉｂｅｌｌｕｌａ属の真菌、Ｈａｒｐｏｓｐｏｒｉｕｍ属の真菌、Ｈｅｓｐｅｒｏｍｙｃｅｓ属の真菌、Ｈｉｒｓｕｔｅｌｌａ属の真菌、Ｈｙｍｅｎｏｓｔｉｌｂｅ属の真菌、Ｈｙｐｏｃｒｅｌｌａ属の真菌、Ｉｓａｒｉａ属の真菌、Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属の真菌、Ｌａｇｅｎｉｄｉｕｍ属の真菌、Ｌｅｐｔｏｌｅｇｎｉａ属の真菌、Ｍａｓｓｏｓｐｏｒａ属の真菌、Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ属の真菌、Ｍｅｒｉｓｔａｃｒｕｍ属の真菌、Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ属の真菌、Ｍｏｎａｃｒｏｓｐｏｒｉｕｍ属の真菌、Ｍｙｃｏｄｅｒｍａ属の真菌、Ｍｙｉｏｐｈａｇｕｓ属の真菌、Ｍｙｒｉａｎｇｉｕｍ属の真菌、Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ属の真菌、Ｎｅｃｔｒｉａ属の真菌、Ｎｅｍａｔｏｃｔｏｎｕｓ属の真菌、Ｎｅｏｚｙｇｉｔｅｓ属の真菌、Ｎｏｍｕｒａｅａ属の真菌、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ属の真菌、Ｐａｎｄｏｒａ属の真菌、Ｐａｒａｉｓａｒｉａ属の真菌、Ｐａｓｔｅｕｒｉａ属の真菌、Ｐｌｅｕｒｏｄｅｓｍｏｓｐｏｒａ属の真菌、Ｐｏｃｈｏｎｉａ属の真菌、Ｐｏｄｏｎｅｃｔｒｉａ属の真菌、Ｐｏｌｙｃｅｐｈａｌｏｍｙｃｅｓ属の真菌、Ｐｓｅｕｄｏｇｉｂｅｌｌｕｌａ属の真菌、Ｓｅｐｔｏｂａｓｉｄｉｕｍ属の真菌、Ｓｏｒｏｓｐｏｒｅｌｌａ属の真菌、Ｓｐｏｒｏｄｉｎｉｅｌｌａ属の真菌、Ｓｔｉｌｌｂｅｌｌａ属の真菌、Ｔｅｔｒａｎａｃｒｉｕｍ属の真菌、Ｔｉｌａｃｈｌｉｄｉｕｍ属の真菌、Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ属の真菌、Ｔｏｒｒｕｂｉｅｌｌａ属の真菌、Ｔｒｅｎｏｍｙｃｅｓ属の真菌、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ属の真菌、Ｕｒｅｄｉｎｅｌｌａ属の真菌、Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ属の真菌、Ｚｏｏｐｈｔｈｏｒａ属の真菌及びこれらを組み合わせたものであることができる。
本明細書に記載されている方法における真菌の殺虫剤、殺ダニ剤または殺線虫剤として有用であり得る特定の種の非限定的な例としては、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｃａｓｓｉａ（ｍｉａｎ．Ａ１）、Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓ ｄａｃｔｙｌｏｉｄｅｓ（ｍｉａｎ．Ａ２）、Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓ ｏｌｉｇｏｓｐｏｒａ（ｍｉａｎ．Ａ３）、Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓ ｓｕｐｅｒｂ（ｍｉａｎ．Ａ４）、Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓ ｄａｃｔｙｌｏｉｄｅｓ（ｍｉａｎ．Ａ５）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓ（ｍｉａｎ．Ａ６）、Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ（ｍｉａｎ．Ａ７）、Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ単離株ＡＴＣＣ−７４０４０（ｍｉａｎ．Ａ７ａ）、Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ単離株ＡＴＣＣ−７４２５０（ｍｉａｎ．Ａ７ｂ）、Ｄａｃｔｙｌａｒｉａ ｃａｎｄｉｄａ（ｍｉａｎ．Ａ８）、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｌａｔｅｒｉｔｕｍ（ｍｉａｎ．Ａ９）、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ（ｍｉａｎ．Ａ１０）、Ｈａｒｐｏｓｐｏｒｉｕｍ ａｎｇｕｉｌｌｕｌａｅ（ｍｉａｎ．Ａ１１）、Ｈｉｒｓｕｔｅｌｌａ ｒｈｏｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ（ｍｉａｎ．Ａ１２）、Ｈｉｒｓｕｔｅｌｌａ ｍｉｎｎｅｓｏｔｅｎｓｉｓ（ｍｉａｎ．Ａ１３）、Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｌｅｃａｎｉｉ（ｍｉａｎ．Ａ１４）、Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ（当該技術分野では、Ｍｅｔａｒｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ、Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ｂｒｕｎｎｅｕｍまたは「緑きょう病菌」ともいう）（ｍｉａｎ．Ａ１５）、Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ単離株Ｆ５２（ｍｉａｎ．Ａ１５ａ）（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ株５２、Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ株７、Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ株４３、Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ ＢＩＯ−１０２０、ＴＡＥ−００１としても知られており、ＤＳＭ３８８４、ＤＳＭ３８８５、ＡＴＣＣ９０４４８、ＳＤ１７０及びＡＲＳＥＦ７７１１として寄託されている）（米国のＮｏｖｏｚｙｍｅｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から入手可能である））、Ｍｏｎａｃｒｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃｉｏｎｏｐａｇｕｍ（ｍｉａｎ．Ａ１６）、Ｎｅｍａｔｏｃｔｏｎｕｓ ｇｅｏｇｅｎｉｕｓ（ｍｉａｎ．Ａ１７）、Ｎｅｍａｔｏｃｔｏｎｕｓ ｌｅｉｏｓｐｏｒｕｓ（ｍｉａｎ．Ａ１８）、Ｍｅｒｉｓｔａｃｒｕｍ ａｓｔｅｒｏｓｐｅｒｍｕｍ（ｍｉａｎ．Ａ１９）、Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅｒｒｕｃａｒｉａ（ｍｉａｎ．Ａ２０）、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓ（ｍｉａｎ．Ａ２１）、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓ ＦＥ９９１（ｍｉａｎ．Ａ２１ａ）（スペイン、バルセロナのＦｕｔｕｒＥｃｏ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ Ｓ．Ｌ．のＮＯＦＬＹ（登録商標）中）、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｌｉｌａｃｉｎｕｓ（ｍｉａｎ．Ａ２２）、Ｐａｓｔｅｕｒｉａ ｐｅｎｅｔｒａｎｓ（ｍｉａｎ．Ａ２３）、Ｐａｓｔｅｕｒｉａ ｕｓａｇｅ（ｍｉａｎ．Ａ２４）、Ｐｏｃｈｏｎｉａ ｃｈｌａｍｙｄｏｐｏｒａ（ｍｉａｎ．Ａ２５）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｍａｔｕｍ（ｍｉａｎ．Ａ２６）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ（ｍｉａｎ．Ａ２７）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｅｎｓ（ｍｉａｎ．Ａ２８）、Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒｕｍ（ｍｉａｎ．Ａ２９）、Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｌｅｃａｎｉｉ（ｍｉａｎ．Ａ３０）、ならびにこれらを組み合わせたものが挙げられる。
特定的な実施形態では、微生物は、細菌の殺虫剤、殺ダニ剤または殺線虫剤である。実施形態では、細菌の殺虫剤、殺ダニ剤または殺線虫剤は、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の細菌、Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ属の細菌、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ属の細菌、Ａｕｒｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の細菌、Ａｚｏｂａｃｔｅｒ属の細菌、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属の細菌、Ｂｅｉｊｅｒｉｎｃｋｉａ属の細菌、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ属の細菌、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の細菌、Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ属の細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属の細菌、Ｃｏｍｏｍｏｎａｓ属の細菌、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の細菌、Ｃｕｒｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の細菌、Ｄｅｓｕｌｆｏｒｉｂｔｉｏ属の細菌、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ属の細菌、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の細菌、Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ属の細菌、Ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｐｈａｇｅ属の細菌、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ属の細菌、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の細菌、Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ属の細菌、Ｐｈｙｌｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の細菌、Ｐｈｉｎｇｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の細菌、Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ属の細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属の細菌、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属の細菌、Ｓｅｒｒａｔｉａ属の細菌、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ属の細菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属の細菌、Ｘｅｎｏｒｈａｄｂｕｓ属の細菌、Ｖａｒｉｏｖｏｒａｘ属の細菌及びこれらを組み合わせたものである。本明細書に記載されている方法における細菌の殺虫剤、殺ダニ剤または殺線虫剤として有用であり得る特定の種の非限定的な例としては、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ（ｍｉａｎ．Ｂ１）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ単離株Ｉ−１５８２（ｍｉａｎ．Ｂ１ａ）（ＢｉｏＮｅｅｍ、Ｖｏｔｉｖｏ中）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｙｃｏｉｄｅｓ（ｍｉａｎ．Ｂ２）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｙｃｏｉｄｅｓ単離株ＡＱ７２６、ＮＲＲＬ Ｂ−２１６６４（ｍｉａｎ．Ｂ２ａ）、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ属（ｍｉａｎ．Ｂ３）、新種のＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｒｉｎｏｊｅｎｓｉｓ（ｍｉａｎ．Ｂ３ａ）、新種のＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ属Ａ３９６ ｒｉｎｏｊｅｎｓｉｓ、ＮＲＲＬ Ｂ−５０３１９（ｍｉａｎ．Ｂ３ｂ）、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｕｂｔｓｕｇａｅ（ｍｉａｎ．Ｂ４）、新種のＣｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｕｂｔｓｕｇａｅ（ｍｉａｎ．Ｂ４ａ）、新種のＣｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｕｂｔｓｕｇａｅ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−３０６５５（ｍｉａｎ．Ｂ４ｂ）、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖａｃｃｉｎｉｉ（ｍｉａｎ．Ｂ５）、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖａｃｃｉｎｉｉ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０８８０（ｍｉａｎ．Ｂ５ａ）、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖｉｏｌａｃｅｕｍ（ｍｉａｎ．Ｂ６）、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属（ｍｉａｎ．Ｂ７）、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属単離株Ｈ４９２、ＮＲＲＬ Ｂ−５０５８４（ｍｉａｎ．Ｂ７ａ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｙｄｉｃｕｓ（ｍｉａｎ．Ｂ８）、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｏｌａｃｅｕｓｎｉｇｅｒ（ｍｉａｎ．Ｂ９）及びこれらを組み合わせたものが挙げられる。
一実施形態では、本明細書に記載されている方法はさらに、有益な微生物（「ｂｍ」）を少なくとも１つ含んでよい。この少なくとも１つの有益な微生物は、胞子形態、栄養体形態またはこれらを組み合わせた形態であってよい。
特定的な実施形態では、少なくとも１つの有益な微生物（「ｂｍ」）は、ジアゾ栄養生物（すなわち、共生窒素固定細菌である細菌）である。実施形態では、このジアゾ栄養生物は、Ａｚｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ属の細菌、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ属の細菌、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ属の細菌、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ属の細菌、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ属の細菌、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ属の細菌及びこれらを組み合わせたものである。本明細書に記載されている方法における細菌のジアゾ栄養生物として有用であり得る特定の種の非限定的な例としては、Ａｚｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｃａｕｌｉｎｏｄａｎｓ（ｂｍ．Ａ１）、Ａｚｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｄｏｅｂｅｒｅｉｎｅｒａｅ（ｂｍ．Ａ２）、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ａｍａｚｏｎｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ３）、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ４）、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ単離株ＩＮＴＡ Ａｚ−３９（ｂｍ．Ａ４ａ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｃａｎａｄｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ５）、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｄｏｅｂｅｒｅｉｎｅｒａｅ（ｂｍ．Ａ６）、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｆｏｒｍｏｓｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ７）、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｈａｌｏｐｒａｅｆｅｒａｎｓ（ｂｍ．Ａ８）、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｉｒａｋｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ９）、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｌａｒｇｉｍｏｂｉｌｅ（ｂｍ．Ａ１０）、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｌｉｐｏｆｅｒｕｍ（ｂｍ．Ａ１１）、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｍｅｌｉｎｉｓ（ｂｍ．Ａ１２）、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｏｒｙｚａｅ（ｂｍ．Ａ１３）、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｐｉｃｉｓ（ｂｍ．Ａ１４）、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｒｕｇｏｓｕｍ（ｂｍ．Ａ１５）、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｔｈｉｏｐｈｉｌｕｍ（ｂｍ．Ａ１６）、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｚｅａｅ（ｂｍ．Ａ１７）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｂｅｔｅ（ｂｍ．Ａ１８）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｃａｎａｒｉｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ１９）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｅｌｋａｎｉｉ（ｂｍ．Ａ２０）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｅｌｋａｎｉｉ単離株ＳＥＭＩＡ５８７（ｂｍ．Ａ２０ａ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｅｌｋａｎｉｉ単離株ＳＥＭＩＡ５０１９（ｂｍ．Ａ２０ｂ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｉｒｉｏｍｏｔｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ２１）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ（ｂｍ．Ａ２２）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＳＥＭＩＡ５０７９（ｂｍ．Ａ２２ａ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＳＥＭＩＡ５０８０（ｂｍ．Ａ２２ｂ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０６０８（ｂｍ．Ａ２２ｃ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０６０９（ｂｍ．Ａ２２ｄ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０６１０（ｂｍ．Ａ２２ｅ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０６１１（ｂｍ．Ａ２２ｆ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０６１２（ｂｍ．Ａ２２ｇ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０５９２（ＮＲＲＬ Ｂ−５９５７１としても寄託されている）（ｂｍ．Ａ２２ｈ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０５９３（ＮＲＲＬ Ｂ−５９５７２としても寄託されている）（ｂｍ．Ａ２２ｉ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０５８６（ＮＲＲＬ Ｂ−５９５６５としても寄託されている）（ｂｍ．Ａ２２ｊ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０５８８（ＮＲＲＬ Ｂ−５９５６７としても寄託されている）（ｂｍ．Ａ２２ｋ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０５８７（ＮＲＲＬ Ｂ−５９５６６としても寄託されている）（ｂｍ．Ａ２２ｌ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０５８９（ＮＲＲＬ Ｂ−５９５６８としても寄託されている）（ｂｍ．Ａ２２ｍ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０５９１（ＮＲＲＬ Ｂ−５９５７０としても寄託されている）（ｂｍ．Ａ２２ｎ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ ＮＲＲＬ Ｂ−５０５９０（ＮＲＲＬ Ｂ−５９５６９としても寄託されている）（ｂｍ．Ａ２２ｏ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０５９４（ＮＲＲＬ Ｂ−５０４９３としても寄託されている）（ｂｍ．Ａ２２ｐ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７２６（ｂｍ．Ａ２２ｑ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７２７（ｂｍ．Ａ２２ｒ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７２８（ｂｍ．Ａ２２ｓ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７２９（ｂｍ．Ａ２２ｔ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７３０（ｂｍ．Ａ２２ｕ）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＵＳＤＡ ５３２Ｃ（ｂｍ．Ａ２２ｖ）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＵＳＤＡ １１０（ｂｍ．Ａ２２ｗ）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＵＳＤＡ １２３（ｂｍ．Ａ２２ｘ）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＵＳＤＡ １２７（ｂｍ．Ａ２２ｙ）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ単離株ＵＳＤＡ １２９（ｂｍ．Ａ２２ｚ）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊｉｃａｍａｅ（ｂｍ．Ａ２３）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｌｉａｏｎｉｎｇｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ２４）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ（ｂｍ．Ａ２５）、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｙｕａｎｍｉｎｇｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ２６）、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ａｌｂｉｚｉａｅ（ｂｍ．Ａ２７）、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ａｍｏｒｐｈａｅ（ｂｍ．Ａ２８）、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｃｈａｃｏｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ２９）、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｃｉｃｅｒｉ（ｂｍ．Ａ３０）、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｈｕａｋｕｉｉ（ｂｍ．Ａ３１）、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｌｏｔｉ（ｂｍ．Ａ３２）、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｕｍ（ｂｍ．Ａ３３）、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｐｌｕｉｆａｒｉｕｍ（ｂｍ．Ａ３４）、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｓｅｐｔｅｎｔｒｉｏｎａｌｅ（ｂｍ．Ａ３５）、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｍ（ｂｍ．Ａ３６）、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｔｉａｎｓｈａｎｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ３７）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｃｅｌｌｕｌｏｓｉｌｙｔｉｃｕｍ（ｂｍ．Ａ３８）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｄａｅｊｅｏｎｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ３９）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｅｔｌｉ（ｂｍ．Ａ４０）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｇａｌｅｇａｅ（ｂｍ．Ａ４１）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｇａｌｌｉｃｕｍ（ｂｍ．Ａ４２）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｇｉａｒｄｉｎｉｉ（ｂｍ．Ａ４３）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｈａｉｎａｎｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ４４）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｈｕａｕｔｌｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ４５）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｉｎｄｉｇｏｆｅｒａｅ（ｂｍ．Ａ４６）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｒｕｍ（ｂｍ．Ａ４７）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｒｕｍ単離株ＳＯ１２Ａ−２−（ＩＤＡＣ０８０３０５−０１）（ｂｍ．Ａ４７ａ）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｌｏｅｓｓｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ４８）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｌｕｐｉｎｉ（ｂｍ．Ａ４９）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｌｕｓｉｔａｎｕｍ（ｂｍ．Ａ５０）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉｌｏｔｉ（ｂｍ．Ａ５１）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｏｎｇｏｌｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ５２）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｉｌｕｏｎｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ５３）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｓｕｌｌａｅ（ｂｍ．Ａ５４）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｔｒｏｐｉｃｉ（ｂｍ．Ａ５５）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｕｎｄｉｃｏｌａ（ｂｍ．Ａ５６）、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｙａｎｇｌｉｎｇｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ５７）、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ａｂｒｉ（ｂｍ．Ａ５８）、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ａｄｈａｅｒｅｎｓ（ｂｍ．Ａ５９）、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ａｍｅｒｉｃａｎｕｍ（ｂｍ．Ａ６０）、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ａｂｏｒｉｓ（ｂｍ．Ａ６１）、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｆｒｅｄｉｉ（ｂｍ．Ａ６２）、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｉｎｄｉａｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ６３）、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｋｏｓｔｉｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ６４）、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｋｕｍｍｅｒｏｗｉａｅ（ｂｍ．Ａ６５）、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｄｉｃａｅ（ｂｍ．Ａ６６）、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉｌｏｔｉ（ｂｍ．Ａ６７）、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｘｉｃａｎｕｓ（ｂｍ．Ａ６８）、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｏｒｅｌｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ６９）、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｓａｈｅｌｉ（ｂｍ．Ａ７０）、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｔｅｒａｎｇａｅ（ｂｍ．Ａ７１）、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｘｉｎｊｉａｎｇｅｎｓｅ（ｂｍ．Ａ７２）及びこれらを組み合わせたものが挙げられる。
特定的な実施形態では、少なくとも１つの有益な微生物（「ｂｍ」）は、リン酸可溶化微生物である。実施形態では、少なくとも１つのリン酸可溶化微生物は、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属の真菌、Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ属の真菌及びこれらを組み合わせたものである。本明細書に記載されている方法においてリン酸可溶化真菌として有用であり得る特定の種の非限定的な例としては、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ａｌｂｉｄｕｍ（ｂｍ．Ｂ１）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ａｕｒａｎｔｉｏｇｒｉｓｅｕｍ（ｂｍ．Ｂ２）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ（以前はＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉｉ及びＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｊｉとして知られていた）（ｂｍ．Ｂ３）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＡＴＣＣ２０８５１（ｂｍ．Ｂ３ａ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＡＴＣＣ２２３４８（ｂｍ．Ｂ３ｂ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株Ｖ０８／０２１００１（ＮＲＲＬ Ｂ−５０６１２としても寄託されている）（ｂｍ．Ｂ３ｃ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７７６（ｂｍ．Ｂ３ｄ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７７７（ｂｍ．Ｂ３ｅ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７７８（ｂｍ．Ｂ３ｆ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７７９（ｂｍ．Ｂ３ｇ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７８０（ｂｍ．Ｂ３ｈ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７８１（ｂｍ．Ｂ３ｉ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７８２（ｂｍ．Ｂ３ｊ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７８３（ｂｍ．Ｂ３ｋ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７８４（ｂｍ．Ｂ３ｌ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７８５（ｂｍ．Ｂ３ｍ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７８６（ｂｍ．Ｂ３ｎ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７８７（ｂｍ．Ｂ３ｏ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０７８８（ｂｍ．Ｂ３ｐ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＮＲＲＬ Ｂ−５０１６９（ｂｍ．Ｂ３ｑ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｉａｅ単離株ＡＴＣＣ１８３０９（ｂｍ．Ｂ３ｒ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｒｅｖｉｃｏｍｐａｃｔｕｍ（ｂｍ．Ｂ４）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｒｅｖｉｃｏｍｐａｃｔｕｍ単離株ＡｇＲＦ１８（ｂｍ．Ｂ４ａ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃａｎｅｓｃｅｎｓ（ｂｍ．Ｂ５）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃａｎｅｓｃｅｎｓ単離株ＡＴＣＣ１０４１９（ｂｍ．Ｂ５ａ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ（ｂｍ．Ｂ６）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｉｔｒｅｏｎｉｇｒｕｍ（ｂｍ．Ｂ７）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｉｔｒｉｎｕｍ（ｂｍ．Ｂ８）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄｉｇｉｔａｔｕｍ（ｂｍ．Ｂ９）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｅｘｐａｎｓｕｍ（ｂｍ．Ｂ１０）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｅｘｐａｎｓｕｍ単離株ＡＴＣＣ２４６９２（ｂｍ．Ｂ１０ａ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｅｘｐａｎｓｕｍ単離株ＹＴ０２（ｂｍ．Ｂ１０ｂ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｆｅｌｌｕｔａｎｕｍ（ｂｍ．Ｂ１１）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｆｅｌｌｕｔａｎｕｍ単離株ＡＴＣＣ４８６９４（ｂｍ．Ｂ１１ａ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｆｒｅｑｕｅｎｔａｓ（ｂｍ．Ｂ１２）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｆｕｓｃｕｍ（ｂｍ．Ｂ１３）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｆｕｓｓｉｐｏｒｕｓ（ｂｍ．Ｂ１４）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｇａｅｓｔｒｉｖｏｒｕｓ（ｂｍ．Ｂ１５）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｇａｅｓｔｒｉｖｏｒｕｓ単離株ＮＲＲＬ ５０１７０（ｂｍ．Ｂ１５ａ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｇｌａｂｒｕｍ（ｂｍ．Ｂ１６）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｇｌａｂｒｕｍ単離株ＤＡＯＭ２３９０７４（ｂｍ．Ｂ１６ａ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｇｌａｂｒｕｍ単離株ＣＢＳ２２９．２８（ｂｍ．Ｂ１６ｂ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｇｌａｕｃｕｍ（ｂｍ．Ｂ１７）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｇｒｉｓｅｏｆｕｌｖｕｍ（ｂｍ．Ｂ１８）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｉｍｐｌｉｃａｔｕｍ（ｂｍ．Ｂ１９）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｊａｎｔｈｉｎｅｌｌｕｍ（ｂｍ．Ｂ２０）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｊａｎｔｈｉｎｅｌｌｕｍ単離株ＡＴＣＣ１０４５５（ｂｍ．Ｂ２０ａ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｌａｎｏｓｏｃｏｅｒｕｌｅｕｍ（ｂｍ．Ｂ２１）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｌａｎｏｓｏｃｏｅｒｕｌｅｕｍ単離株ＡＴＣＣ４８９１９（ｂｍ．Ｂ２１ａ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｌｉｌａｃｉｎｕｍ（ｂｍ．Ｂ２２）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍｉｎｉｏｌｕｔｅｕｍ（ｂｍ．Ｂ２３）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍｏｎｔａｎｅｎｓｅ（ｂｍ．Ｂ２４）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｎｉｇｒｉｃａｎｓ（ｂｍ．Ｂ２５）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｏｘａｌｉｃｕｍ（ｂｍ．Ｂ２６）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｉｎｅｔｏｒｕｍ（ｂｍ．Ｂ２７）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｉｎｏｐｈｉｌｕｍ（ｂｍ．Ｂ２８）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ（ｂｍ．Ｂ２９）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｒａｄｉｃｕｍ（ｂｍ．Ｂ３０）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｒａｄｉｃｕｍ単離株Ｎ９３／４７２６７（ｂｍ．Ｂ３０ａ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｒａｄｉｃｕｍ単離株ＦＲＲ４７１７（ｂｍ．Ｂ３０ｂ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｒａｄｉｃｕｍ単離株ＡＴＣＣ２０１８３６（ｂｍ．Ｂ３０ｃ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｒａｄｉｃｕｍ単離株ＦＲＲ４７１９（ｂｍ．Ｂ３０ｄ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｒａｉｓｔｒｉｃｋｉｉ（ｂｍ．Ｂ３１）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｒａｉｓｔｒｉｃｋｉｉ単離株ＡＴＣＣ１０４９０（ｂｍ．Ｂ３１ａ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｒｕｇｕｌｏｓｕｍ（ｂｍ．Ｂ３２）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｉｍｐｌｉｃｉｓｓｉｍｕｍ（ｂｍ．Ｂ３３）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｏｌｉｔｕｍ（ｂｍ．Ｂ３４）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｖａｒｉａｂｉｌｅ（ｂｍ．Ｂ３５）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｖｅｌｕｔｉｎｕｍ（ｂｍ．Ｂ３６）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｖｉｒｉｄｉｃａｔｕｍ（ｂｍ．Ｂ３７）、Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ（ｂｍ．Ｂ３８）、Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ単離株ＡＴＣＣ１０４０９（ｂｍ．Ｂ３８ａ）及びこれらを組み合わせたものが挙げられる。
特定的な実施形態では、少なくとも１つの有益な微生物（「ｂｍ」）は菌根菌である。好適な菌根菌としては、内菌根菌（ベシキュラーアービュスキュラー菌根菌、ＶＡＭ、アービュスキュラー菌根菌またはＡＭともいう）、外生菌根菌、ツツジ科菌根菌及びこれらを組み合わせたものが挙げられる。実施形態では、菌根菌は、Ｇｉｇａｓｐｏｒａ属の真菌、Ｇｌｏｍｕｓ属の真菌、Ｈｙｍｅｎｏｓｃｙｐｈｏｕｓ属の真菌、Ｌａｃｃａｒｉａ属の真菌、Ｏｉｄｉｏｄｅｎｄｒｏｎ属の真菌、Ｐａｒａｇｌｏｍｕｓ属の真菌、Ｐｉｓｏｌｉｔｈｕｓ属の真菌、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属の真菌、Ｒｈｉｚｏｐｏｇｏｎ属の真菌、Ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ属の真菌及びこれらを組み合わせたものである。本明細書に記載されている組成物において有用であり得る特定の菌根菌種の非限定的な例としては、Ｇｉｇａｓｐｏｒａ ｍａｒｇａｒｉｔａ（ｂｍ．Ｃ１）、Ｇｌｏｍｕｓ ａｇｇｒｅｇａｔｕｍ（ｂｍ．Ｃ２）、Ｇｌｏｍｕｓ ｂｒａｓｉｌｉａｎｕｍ（ｂｍ．Ｃ３）、Ｇｌｏｍｕｓ ｃｌａｒｕｍ（ｂｍ．Ｃ４）、Ｇｌｏｍｕｓ ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ（ｂｍ．Ｃ５）、Ｇｌｏｍｕｓ ｅｔｕｎｉｃａｔｕｍ（ｂｍ．Ｃ６）、Ｇｌｏｍｕｓ ｆａｓｃｉｃｕｌａｔｕｍ（ｂｍ．Ｃ７）、Ｇｌｏｍｕｓ ｉｎｔｒａｒａｄｉｃｅｓ（ｂｍ．Ｃ８）、Ｇｌｏｍｕｓ ｍｏｎｏｓｐｏｒｕｍ（ｂｍ．Ｃ９）、Ｇｌｏｍｕｓ ｍｏｓｓｅａｅ（ｂｍ．Ｃ１０）、Ｈｙｍｅｎｏｓｃｙｐｈｏｕｓ ｅｒｉｃａｅ（ｂｍ．Ｃ１１）、Ｌａｃｃａｒｉａ ｂｉｃｏｌｏｒ（ｂｍ．Ｃ１２）、Ｌａｃｃａｒｉａ ｌａｃｃａｔａ（ｂｍ．Ｃ１３）、Ｏｉｄｉｏｄｅｎｄｒｏｎ属（ｂｍ．Ｃ１４）、Ｐａｒａｇｌｏｍｕｓ ｂｒａｚｉｌｉａｎｕｍ（ｂｍ．Ｃ１５）、Ｐｉｓｏｌｉｔｈｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ（ｂｍ．Ｃ１６）、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属（ｂｍ．Ｃ１７）、Ｒｈｉｚｏｐｏｇｏｎ ａｍｙｌｏｐｏｇｏｎ（ｂｍ．Ｃ１８）、Ｒｈｉｚｏｐｏｇｏｎ ｆｕｌｖｉｇｌｅｂａ（ｂｍ．Ｃ１９）、Ｒｈｉｚｏｐｏｇｏｎ ｌｕｔｅｏｌｕｓ（ｂｍ．Ｃ２０）、Ｒｈｉｚｏｐｏｇｏｎ ｖｉｌｌｏｓｕｌｉ（ｂｍ．Ｃ２１）、Ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ ｃｅｐａ（ｂｍ．Ｃ２２）、Ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ ｃｉｔｒｉｎｕｍ（ｂｍ．Ｃ２３）、Ｒｈｉｚｏｐｌｅｘ（登録商標）（Ｇｉｇａｓｐｏｒａ ｍａｒｇａｒｉｔａ、Ｇｌｏｍｕｓ ａｇｇｒｅｇａｔｕｍ、Ｇｌｏｍｕｓ ｂｒａｓｉｌｉａｎｕｍ、Ｇｌｏｍｕｓ ｃｌａｒｕｍ、Ｇｌｏｍｕｓ ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ、Ｇｌｏｍｕｓ ｅｔｕｎｉｃａｔｕｍ、Ｇｌｏｍｕｓ ｉｎｔｒａｒａｄｉｃｅｓ、Ｇｌｏｍｕｓ ｍｏｎｏｓｐｏｒｕｍ、Ｇｌｏｍｕｓ ｍｏｓｓｅａｅ、Ｌａｃｃａｒｉａ ｂｉｃｏｌｏｒ、Ｌａｃｃａｒｉａ ｌａｃｃａｔａ、Ｐｉｓｏｌｉｔｈｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ、Ｒｈｉｚｏｐｏｇｏｎ ａｍｙｌｏｐｏｇｏｎ、Ｒｈｉｚｏｐｏｇｏｎ ｆｕｌｖｉｇｌｅｂａ、Ｒｈｉｚｏｐｏｇｏｎ ｌｕｔｅｏｌｕｓ、Ｒｈｉｚｏｐｏｇｏｎ ｖｉｌｌｏｓｕｌｉ、Ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ ｃｅｐａ及びＳｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ ｃｉｔｒｉｎｕｍ）（ｂｍ．Ｃ２４）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｒｈｉｚｏｍｙｃｏ（登録商標）（Ｇｉｇａｓｐｏｒａ ｍａｒｇａｒｉｔａ、Ｇｌｏｍｕｓ ａｇｇｒｅｇａｔｕｍ、Ｇｌｏｍｕｓ ｃｌａｒｕｍ、Ｇｌｏｍｕｓ ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ、Ｇｌｏｍｕｓ ｅｔｕｎｉｃａｔｕｍ、Ｇｌｏｍｕｓ ｉｎｔｒａｒａｄｉｃｅｓ、Ｇｌｏｍｕｓ ｍｏｎｏｓｐｏｒｕｍ、Ｇｌｏｍｕｓ ｍｏｓｓｅａｅ、Ｌａｃｃａｒｉａ ｂｉｃｏｌｏｒ、Ｌａｃｃａｒｉａ ｌａｃｃａｔａ、Ｐａｒａｇｌｏｍｕｓ ｂｒａｚｉｌｉａｎｕｍ、Ｐｉｓｏｌｉｔｈｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ、Ｒｈｉｚｏｐｏｇｏｎ ａｍｙｌｏｐｏｇｏｎ、Ｒｈｉｚｏｐｏｇｏｎ ｆｕｌｖｉｇｌｅｂａ、Ｒｈｉｚｏｐｏｇｏｎ ｌｕｔｅｏｌｕｓ、Ｒｈｉｚｏｐｏｇｏｎ ｖｉｌｌｏｓｕｌｉ、Ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ ｃｅｐａ及びＳｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ ｃｉｔｒｉｎｕｍ）（ｂｍ．Ｃ２５）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、Ｒｈｉｚｏｍｙｘ（登録商標）（Ｇｉｇａｓｐｏｒａ ｍａｒｇａｒｉｔａ、Ｇｌｏｍｕｓ ａｇｇｒｅｇａｔｕｍ、Ｇｌｏｍｕｓ ｂｒａｓｉｌｉａｎｕｍ、Ｇｌｏｍｕｓ ｃｌａｒｕｍ、Ｇｌｏｍｕｓ ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ、Ｇｌｏｍｕｓ ｅｔｕｎｉｃａｔｕｍ、Ｇｌｏｍｕｓ ｉｎｔｒａｒａｄｉｃｅｓ、Ｇｌｏｍｕｓ ｍｏｎｏｓｐｏｒｕｍ及びＧｌｏｍｕｓ ｍｏｓｓｅａｅ）（ｂｍ．Ｃ２６）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓから入手可能である）、ならびにこれらを組み合わせたものが挙げられる。
本発明で提供する方法において、種子処理成分及び種子処理プロセスに耐える能力についてスクリーニングする微生物は、任意の数の環境から取得できる。一実施形態では、この微生物は、非農業用地から得られる土壌、または農業用、例えば商業規模の栽培または小規模の栽培用として、現在用いられているかもしくは過去に用いられていた用地から得られる土壌を含む環境土壌試料から取得する。荒れ具合が最小限の非農業用地から土壌試料を得るときには、例えば、本明細書に記載されている方法によって、近代の農業設定とは無関係の微生物を単離、選択及び同定できる。土壌は、微生物の増殖を支えるいずれかの環境から得ることができ、この土壌としては、例えば、砂地、粘土質土壌、プレーリー土壌、泥炭土壌及びローム質土壌を挙げることができる。
一実施形態では、本明細書に記載されている方法で試験する微生物は、種子処理成分及び種子処理方法への耐性について試験する前に、所定の対象植物と関連することが分かっている。例えば、微生物は、農地、すなわち、作物植物を栽培しない非栽培環境と区別する用地として、作物植物を栽培する圃場で生長する作物植物と関連していてよい。あるいは、対象の環境の土壌試料を採取して、作物植物種子をその土壌に播種し、制御された環境（例えば、植物グロースチャンバーまたは温室を含む）で育成してよい。制御された環境で植物を育成する場合、環境土壌試料を、無機または有機の植物育成材（バーミキュライト、パーライト、泥炭などのような植物育成材を含む）と混合して、植物育成条件を最適化できる。農地で植物を育成する場合でも、制御された環境で植物を育成する場合でも、植物と根圏を採取して、関連する微生物をその試料から抽出できる。いずれかの数の植物生長段階で植物と土壌を採取してよいが、優先的には、第１本葉が出てから、植物を収穫する。これよりも後の生長段階（例えば、初期の栄養生長期、（Ｖ３〜Ｖ４）、後期の栄養生長期またはさらには成熟期を含む）に、植物を収穫してもよい。
特定した微生物を塗布することによって恩恵を受け得る植物は、植物と関連する微生物の初期供給源によって限定されない。例えば、１つの植物種と関連する微生物が、同じまたは異なる種の作物植物の生長に有益な特性をもたらすことが示されることがある。
一実施形態では、根圏微生物細胞懸濁液を作物植物の根から作製して、例えば、植物物質及び／または細胞懸濁液を攪拌（例えば、超音波処理）して、根と関連する微生物を溶液中に遊離させることによって、その懸濁液から微生物を単離してよい。別の実施形態では、植物の苗条、茎、葉、花または果実を溶液に浸漬し、激しい混合及び／またはビード打ちによって、これらを果肉の堅さまで液浸軟化させることによって、内部圏／葉圏細胞懸濁液を作製できる。特定の実施形態では、微生物細胞懸濁液を濃縮して、調製物の体積当たりの微生物数を向上させる。一実施形態では、本発明の方法で用いる微生物懸濁液を濃縮して、懸濁液１ミリリットル当たり１０６〜１０９ＣＦＵの懸濁液をもたらす。さらに別の実施形態では、当業者に知られている方法（例えば、ろ過、分別遠心分離及び／または密度勾配遠心分離）を用いて、得られた微生物細胞懸濁液を精製して、植物／土壌破片を除去し、さらに濃縮した微生物懸濁液をもたらす。一実施形態では、さらなる精製を用いて、同じまたは異なる種の植物を含む複数の植物から、プール細菌懸濁液をもたらす。さらに別の実施形態では、細胞懸濁液は、微生物群（土壌、植物組織及び水域で見られる微生物群が挙げられるが、これらに限らない）に存在するすべての細菌、真菌及び古細菌の代表試料であることができる。培養微生物を用いる他の実施形態では、植物の生長とすでに関連付けられているかにかかわらず、培養株保存機関から得た既知の微生物群を、例えば、本明細書に記載されているように、または当該技術分野において知られているようにして作製してもよく、あるいは、環境試料から単に単離して、本明細書に記載されている方法を用いてスクリーニングしてもよい。
種子処理成分
本明細書に記載されているスクリーニング方法における種子処理成分は、少なくとも１つの有害生物防除剤を含んでよい。種子処理剤としては例えば、殺真菌剤（「ｆ」）が挙げられる。有用な殺真菌剤は、生物系殺真菌剤（「ｂｆ」）、化学系殺真菌剤（「ｃｆ」）またはこれらを組み合わせたものであってよい。殺真菌剤は、広範な植物病原体真菌（Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒｏｍｙｃｅｔｅｓ綱、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒｏｍｙｃｅｔｅｓ綱（ｓｙｎ．Ｏｏｍｙｃｅｔｅｓ）、Ｃｈｙｔｒｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱、Ｚｙｇｏｍｙｃｅｔｅｓ綱、Ａｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓ綱、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱及びＤｅｕｔｅｒｏｍｙｃｅｔｅｓ綱（ｓｙｎ．Ｆｕｎｇｉ ｉｍｐｅｒｆｅｃｔｉ）に特に由来する土壌伝染性真菌を含む）を有効に防除するように選択してよい。有効な標的としてよいさらに一般的な真菌病原体としては、Ｐｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ、ＰｈｏｍｏｐｓｉｓまたはＳｅｌｅｒｏｔｉｎｉａ及びＰｈａｋｏｐｓｏｒａ、ならびにこれらを組み合わせたものが挙げられる。
特定の実施形態では、殺真菌剤は化学系殺真菌剤（「ｃｆ」）である。本開示で用いるのに適し得る有用な化学系殺真菌剤（「ｃｆ」）の代表的な例としては、芳香族炭化水素、ベンズイミダゾール、ベンズチアジアゾール、カルボキサミド、カルボン酸アミド、モルホリン、フェニルアミド、ホスホネート、キノンアウトサイドインヒビター（例えば、ストロビルリン）、チアゾリジン、チオファネート、チオフェンカルボキサミド及びトリアゾール、
Ａ）ストロビルリン（ｃｆ．Ａ）：
アゾキシストロビン（ｃｆ．Ａ１）、クメトキシストロビン（ｃｆ．Ａ２）、クモキシストロビン（ｃｆ．Ａ３）、ジモキシストロビン（ｃｆ．Ａ４）、エネストロブリン（ｃｆ．Ａ５）、フルオキサストロビン（ｃｆ．Ａ６）、クレソキシムメチル（ｃｆ．Ａ７）、メトミノストロビン（ｃｆ．Ａ８）、オリサストロビン（ｃｆ．Ａ９）、ピコキシストロビン（ｃｆ．Ａ１０）、ピラクロストロビン（ｃｆ．Ａ１１）、ピラメトストロビン（ｃｆ．Ａ１２）、ピラオキシストロビン（ｃｆ．Ａ１３）、ピリベンカルブ（ｃｆ．Ａ１４）、トリフロキシストロビン（ｃｆ．Ａ１５）、２［２−（２，５−ジメチル−フェノキシメチル）−フェニル］−３−メトキシ−アクリル酸メチルエステル（ｃｆ．Ａ１６）及び２（２−（３−（２，６−ジクロロフェニル）−１−メチル−アリリデンアミノオキシメチル）−フェニル）−２−メトキシイミノ−Ｎ−メチル−アセトアミド（ｃｆ．Ａ１７）、
Ｂ）カルボキサミド（ｃｆ．Ｂ）：
カルボキシアニリド（ｃｆ．Ｂ１）：ベナラキシル（ｃｆ．Ｂ１ａ）、ベナラキシル−Ｍ（ｃｆ．Ｂ１ｂ）、ベノダニル（ｃｆ．Ｂ１ｃ）、ビキサフェン（ｃｆ．Ｂ１ｄ）、ボスカリド（ｃｆ．Ｂ１ｄ）、カルボキシン（ｃｆ．Ｂ１ｅ）、フェンフラム（ｃｆ．Ｂ１ｆ）、フェンヘキサミド（ｃｆ．Ｂ１ｇ）、フルトラニル（ｃｆ．Ｂ１ｈ）、フルキサピロキサド（ｃｆ．Ｂ１ｉ）、フラメトピル（ｃｆ．Ｂ１ｊ）、イソピラザム（ｃｆ．Ｂ１ｋ）、イソチアニル（ｃｆ．Ｂ１ｌ）、キララキシル（ｃｆ．Ｂ１ｍ）、メプロニル（ｃｆ．Ｂ１ｎ）、メタラキシル（ｃｆ．Ｂ１ｏ）、メタラキシル−Ｍ（メフェノキサム）（ｃｆ．Ｂ１ｐ）、オフラセ（ｃｆ．Ｂ１ｑ）、オキサジキシル（ｃｆ．Ｂ１ｒ）、オキシカルボキシン（ｃｆ．Ｂ１ｓ）、ペンフルフェン（ｃｆ．Ｂ１ｔ）、ペンチオピラド（ｃｆ．Ｂ１ｕ）、セダキサン（ｃｆ．Ｂ１ｖ）、テクロフタラム（ｃｆ．Ｂ１ｗ）、チフルザミド（ｃｆ．Ｂ１ｘ）、チアジニル（ｃｆ．Ｂ１ｙ）、２−アミノ−４−メチル−チアゾール−５−カルボキシアニリド（ｃｆ．Ｂ１ｚ）、Ｎ−（４’−トリフルオロメチルチオビフェニル−２−イル）−３−ジフルオロメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド（ｃｆ．Ｂ１ａａ）及びＮ−（２−（１，３，３−トリメチルブチル）−フェニル）−１，３−ジメチル−５−フルオロ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド（ｃｆ．Ｂ１ａｂ）、
カルボン酸モルホリド（ｃｆ．Ｂ２）：ジメトモルフ（ｃｆ．Ｂ２ａ）、フルモルフ（ｃｆ．Ｂ２ｂ）、ピリモルフ（ｃｆ．Ｂ２ｃ）、安息香酸アミド（ｃｆ．Ｂ３）：フルメトベル（ｃｆ．Ｂ３ａ）、フルオピコリド（ｃｆ．Ｂ３ｂ）、フルオピラム（ｃｆ．Ｂ３ｃ）、ゾキサミド（ｃｆ．Ｂ３ｄ）、その他のカルボキサミド（ｃｆ．Ｂ４）：カルプロパミド（ｃｆ．Ｂ４ａ）、ジシクロメット（ｃｆ．Ｂ４ｂ）、マンジプロパミド（ｃｆ．Ｂ４ｃ）、オキシテトラサイクリン（ｃｆ．Ｂ４ｄ）、シルチオファム（ｃｆ．Ｂ４ｅ）及びＮ−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）シクロプロパンカルボン酸アミド（ｃｆ．Ｂ４ｆ）、
Ｃ）アゾール（ｃｆ．Ｃ）：
トリアゾール（ｃｆ．Ｃ１）：アザコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ａ）、ビテルタノール（ｃｆ．Ｃ１ｂ）、ブロムコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｃ）、シプロコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｄ）、ジフェノコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｅ）、ジニコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｆ）、ジニコナゾール−Ｍ（ｃｆ．Ｃ１ｇ）、エポキシコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｈ）、フェンブコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｉ）、フルキンコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｊ）、フルシラゾール（ｃｆ．Ｃ１ｋ）、フルトリアホール（ｃｆ．Ｃ１ｌ）、ヘキサコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｍ）、イミベンコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｎ）、イプコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｏ）、メトコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｐ）、ミクロブタニル（ｃｆ．Ｃ１ｑ）、オキシポコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｒ）、パクロブトラゾール（ｃｆ．Ｃ１ｓ）、ペンコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｔ）、プロピコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｕ）、プロチオコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｖ）、シメコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｗ）、テブコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｘ）、テトラコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ｙ）、トリアジメホン（ｃｆ．Ｃ１ｚ）、トリアジメノール（ｃｆ．Ｃ１ａａ）、トリチコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ａｂ）、ウニコナゾール（ｃｆ．Ｃ１ａｃ）、イミダゾール（ｃｆ．Ｃ２）：シアゾファミド（ｃｆ．Ｃ２ａ）、イマザリル（ｃｆ．Ｃ２ｂ）、ペフラゾエート（ｃｆ．Ｃ２ｃ）、プロクロラズ（ｃｆ．Ｃ２ｄ）、トリフルミゾール（ｃｆ．Ｃ２ｅ）、
Ｄ）複素環式化合物（ｃｆ．Ｄ）：
ピリジン（ｃｆ．Ｄ１）：フルアジナム（ｃｆ．Ｄ１ａ）、ピリフェノックス（ｃｆ．Ｄ１ｂ）、３−［５−（４−クロロ−フェニル）−２，３−ジメチル−イソオキサゾリジン−３−イル］−ピリジン（ｃｆ．Ｄ１ｃ）、３−［５−（４−メチル−フェニル）−２，３−ジメチル−イソオキサゾリジン−３−イル］−ピリジン（ｃｆ．Ｄ１ｄ）、ピリミジン（ｃｆ．Ｄ２）：ブピリメート（ｃｆ．Ｄ２ａ）、シプロジニル（ｃｆ．Ｄ２ｂ）、ジフルメトリム（ｃｆ．Ｄ２ｃ）、フェナリモル（ｃｆ．Ｄ２ｄ）、フェリムゾン（ｃｆ．Ｄ２ｅ）、メパニピリム（ｃｆ．Ｄ２ｆ）、ニトラピリン（ｃｆ．Ｄ２ｇ）、ヌアリモル（ｃｆ．Ｄ２ｈ）、ピリメタニル（ｃｆ．Ｄ２ｉ）、ピペラジン（ｃｆ．Ｄ３）：トリホリン（ｃｆ．Ｄ３ａ）、ピロール（ｃｆ．Ｄ４）：フェンピクロニル（ｃｆ．Ｄ４ａ）、フルジオキソニル（ｃｆ．Ｄ４ｂ）、モルホリン（ｃｆ．Ｄ５）：アルジモルフ（ｃｆ．Ｄ５ａ）、ドデモルフ（ｃｆ．Ｄ５ｂ）、ドデモルフ−アセテート（ｃｆ．Ｄ５ｃ）、フェンプロピモルフ（ｃｆ．Ｄ５ｄ）、トリデモルフ（ｃｆ．Ｄ５ｅ）、ピペリジン（ｃｆ．Ｄ６）：フェンプロピジン（ｃｆ．Ｄ６ａ）、ジカルボキシイミド（ｃｆ．Ｄ７）：フルオロイミド（ｃｆ．Ｄ７ａ）、イプロジオン（ｃｆ．Ｄ７ｂ）、プロシミドン（ｃｆ．Ｄ７ｃ）、ビンクロゾリン（ｃｆ．Ｄ７ｄ）、非芳香族５員複素環（ｃｆ．Ｄ８）：ファモキサドン（ｃｆ．Ｄ８ａ）、フェナミドン（ｃｆ．Ｄ８ｂ）、フルチアニル（ｃｆ．Ｄ８ｃ）、オクチリノン（ｃｆ．Ｄ８ｄ）、プロベナゾール（ｃｆ．Ｄ８ｅ）、５−アミノ−２−イソプロピル−３−オキソ−４−オルト−トリル−２，３−ジヒドロ−ピラゾール−１−カルボチオ酸Ｓ−アリルエステル（ｃｆ．Ｄ８ｆ）、その他（ｃｆ．Ｄ９）：アシベンゾラル−Ｓ−メチル（ｃｆ．Ｄ９ａ）、アメトクトラジン（ｃｆ．Ｄ９ｂ）、アミスルブロム（ｃｆ．Ｄ９ｃ）、アニラジン（ｃｆ．Ｄ９ｄ）、ブラストサイジン−Ｓ（ｃｆ．Ｄ９ｅ）、カプタホール（ｃｆ．Ｄ９ｆ）、キャプタン（ｃｆ．Ｄ９ｇ）、キノメチオナト（ｃｆ．Ｄ９ｈ）、ダゾメット（ｃｆ．Ｄ９ｉ）、デバカルブ（ｃｆ．Ｄ９ｊ）、ジクロメジン（ｃｆ．Ｄ９ｋ）、ジフェンゾコート（ｃｆ．Ｄ９ｌ）、ジフェンゾコート−メチルサルフェート（ｃｆ．Ｄ９ｍ）、フェノキサニル（ｃｆ．Ｄ９ｎ）、フォルペット（ｃｆ．Ｄ９ｏ）、オキソリン酸（ｃｆ．Ｄ９ｐ）、ピペラリン（ｃｆ．Ｄ９ｑ）、プロキナジド（ｃｆ．Ｄ９ｒ）、ピロキロン（ｃｆ．Ｄ９ｓ）、キノキシフェン（ｃｆ．Ｄ９ｔ）、トリアゾキシド（ｃｆ．Ｄ９ｕ）、トリシクラゾール（ｃｆ．Ｄ９ｖ）、２−ブトキシ−６−ヨード−３−プロピルクロメン−４−オン（ｃｆ．Ｄ９ｗ）、５−クロロ−１−（４，６−ジメトキシ−ピリミジン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール（ｃｆ．Ｄ９ｘ）及び５−クロロ−７−（４−メチルピペリジン−１−イル）−６−（２，４，６−トリフルオロフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ−［１，５−ａ］ピリミジン（ｃｆ．Ｄ９ｙ）、
Ｅ）ベンズイミダゾール（ｃｆ．Ｅ）：カルベンダジム（ｃｆ．Ｅ１）、
Ｆ）その他の活性物質（ｃｆ．Ｆ）：
グアニジン（ｃｆ．Ｆ１）：グアニジン（ｃｆ．Ｆ１ａ）、ドジン（ｃｆ．Ｆ１ｂ）、ドジン遊離塩基（ｃｆ．Ｆ１ｃ）、グアザチン（ｃｆ．Ｆ１ｄ）、グアザチン−アセテート（ｃｆ．Ｆ１ｅ）、イミノクタジン（ｃｆ．Ｆ１ｆ）、イミノクタジン−トリアセテート（ｃｆ．Ｆ１ｇ）、イミノクタジン−トリス（アルベシレート）（ｃｆ．Ｆ１ｈ）、抗生物質（ｃｆ．Ｆ２）：カスガマイシン（ｃｆ．Ｆ２ａ）、カスガマイシンハイドロクロライド水和物（ｃｆ．Ｆ２ｂ）、ストレプトマイシン（ｃｆ．Ｆ２ｃ）、ポリオキシン（ｃｆ．Ｆ２ｄ）、バリダマイシンＡ（ｃｆ．Ｆ２ｅ）、ニトロフェニル誘導体（ｃｆ．Ｆ３）：ビナパクリル（ｃｆ．Ｆ３ａ）、ジクロラン（ｃｆ．Ｆ３ｂ）、ジノブトン（ｃｆ．Ｆ３ｃ）、ジノカップ（ｃｆ．Ｆ３ｄ）、ニトロタール−イソプロピル（ｃｆ．Ｆ３ｅ）、テクナゼン（ｃｆ．Ｆ３ｆ）、有機金属化合物（ｃｆ．Ｆ４）：フェンチン塩（ｃｆ．Ｆ４ａ）（フェンチン−アセテート（ｃｆ．Ｆ４ｂ）、フェンチンクロライド（ｃｆ．Ｆ４ｃ）またはフェンチンハイドロキシド（ｃｆ．Ｆ４ｄ）など）、含硫ヘテロシクリル化合物（ｃｆ．Ｆ５）：ジチアノン（ｃｆ．Ｆ５ａ）、イソプロチオラン（ｃｆ．Ｆ５ｂ）、有機リン化合物（ｃｆ．Ｆ６）：エジフェンホス（ｃｆ．Ｆ６ａ）、ホセチル（ｃｆ．Ｆ６ｂ）、ホセチル−アルミニウム（ｃｆ．Ｆ６ｃ）、イプロベンホス（ｃｆ．Ｆ６ｄ）、リン酸及びその塩（ｃｆ．Ｆ６ｅ）、ピラゾホス（ｃｆ．Ｆ６ｆ）、トルクロホス−メチル（ｃｆ．Ｆ６ｇ）、有機塩素化合物（ｃｆ．Ｆ７）：クロロタロニル（ｃｆ．Ｆ７ａ）、ジクロフルアニド（ｃｆ．Ｆ７ｂ）、ジクロロフェン（ｃｆ．Ｆ７ｃ）、フルスルファミド（ｃｆ．Ｆ７ｄ）、ヘキサクロロベンゼン（ｃｆ．Ｆ７ｅ）、ペンシクロン（ｃｆ．Ｆ７ｆ）、ペンタクロルフェノル及びその塩（ｃｆ．Ｆ７ｇ）、フタリド（ｃｆ．Ｆ７ｈ）、キントゼン（ｃｆ．Ｆ７ｉ）、チオファネート−メチル（ｃｆ．Ｆ７ｊ）、チオファネート（ｃｆ．Ｆ７ｋ）、トリルフルアニド（ｃｆ．Ｆ７ｌ）、Ｎ−（４−クロロ−２−ニトロ−フェニル）−Ｎ−エチル−４−メチル−ベンゼンスルホンアミド（ｃｆ．Ｆ７ｍ）、無機活性物質（ｃｆ．Ｆ８）：ボルドー液（ｃｆ．Ｆ８ａ）、銅アセテート（ｃｆ．Ｆ８ｂ）、銅ハイドロキシド（ｃｆ．Ｆ８ｃ）、銅オキシクロライド（ｃｆ．Ｆ８ｄ）、塩基性銅サルフェート（ｃｆ．Ｆ８ｅ）及び硫黄（ｃｆ．Ｆ８ｆ）が挙げられる。
殺真菌剤を含む市販製品は、容易に入手可能である。本発明の方法における殺真菌剤濃度は概ね、特定の殺真菌剤において、ラベル表記されている使用率に対応する。
一実施形態では、本明細書に記載されている方法で用いる種子処理成分は、少なくとも１つの除草剤（「ｈ」）を含んでよい。
除草剤のタイプの非限定的な例としては、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣａｓｅ）インヒビター（ｈ．Ａ）、アセトラクテートシンターゼ（ＡＬＳ）（ｈ．Ｂ）またはアセトヒドロキシ酸シンターゼ（ＡＨＡＳ）インヒビター（ｈ．Ｃ）、光化学系ＩＩインヒビター（ｈ．Ｄ）、光化学系Ｉインヒビター（ｈ．Ｅ）、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ（ＰＰＯまたはＰｒｏｔｏｘ）インヒビター（ｈ．Ｆ）、カロテノイド生合成インヒビター（ｈ．Ｇ）、エノールピルビルシキメート−３−ホスフェート（ＥＰＳＰ）シンターゼインヒビター（ｈ．Ｈ）、グルタミンシンテターゼインヒビター（ｈ．Ｉ）、ジヒドロプテロエートシンテターゼインヒビター（ｈ．Ｊ）、有糸分裂インヒビター（ｈ．Ｋ）、４−ヒドロキシフェニル−ピルベート−ジオキシゲナーゼ（４−ＨＰＰＤ）インヒビター（ｈ．Ｌ）、合成オーキシン（ｈ．Ｍ）、オーキシン除草剤塩（ｈ．Ｎ）、オーキシン輸送インヒビター（ｈ．Ｏ）及び核酸インヒビター（ｈ．Ｐ）、これらの塩及びエステル、これらのラセミ混合物及び分割された異性体、ならびにこれらを組み合わせたものが挙げられる。
本明細書に記載されている種子処理方法で用いてよい考え得る除草剤（「ｈ」）の具体例としては、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）（ｈ．１）、２，４，５−トリクロロフェノキシ酢酸（２，４，５−Ｔ）（ｈ．２）、アメトリン（ｈ．３）、アミカルバゾン（ｈ．４）、アミノシクロピラクロル（ｈ．５）、アセトクロール（ｈ．６）、アシフルオルフェン（ｈ．７）、アラクロール（ｈ．８）、アトラジン（ｈ．９）、アザフェニジン（ｈ．１０）、ベンタゾン（ｈ．１１）、ベンゾフェナップ（ｈ．１２）、ビフェノックス（ｈ．１３）、ブロマシル（ｈ．１４）、ブロモキシニル（ｈ．１５）、ブタクロール（ｈ．１６）、ブタフェナシル（ｈ．１７）、ブトロキシジム（ｈ．１８）、カルフェントラゾン−エチル（ｈ．１９）、クロリムロン（ｈ．２０）、クロロトルロン（ｈ．２１）、クレトジム（ｈ．２２）、クロジナホップ（ｈ．２３）、クロマゾン（ｈ．２４）、シアナジン（ｈ．２５）、シクロキシジム（ｈ．２６）、シハロホップ（ｈ．２７）、デスメジファム（ｈ．２８）、デスメトリン（ｈ．２９）、ジカンバ（ｈ．３０）、ジクロホップ（ｈ．３１）、ジメフロン（ｈ．３２）、ジウロン（ｈ．３３）、ジチオピル（ｈ．３４）、フェノキサプロップ（ｈ．３５）、フルアジホップ（ｈ．３６）、フルアジホップ−Ｐ（ｈ．３７）、フルオメツロン（ｈ．３８）、フルフェンピル−エチル（ｈ．３９）、フルミクロラック−ペンチル（ｈ．４０）、フルミオキサジン（ｈ．４１）、フルオログリコフェン（ｈ．４２）、フルチアセット−メチル（ｈ．４３）、ホメサフェ（ｈ．４４）、ホメサフェン（ｈ．４５）、グリホセート（ｈ．４６）、グルホシネート（ｈ．４７）、ハロキシホップ（ｈ．４８）、ヘキサジノン（ｈ．４９）、イマザモックス（ｈ．５０）、イマザキン（ｈ．５１）、イマゼタピル（ｈ．５２）、アイオキシニル（ｈ．５３）、イソプロツロン（ｈ．５４）、イソキサフルトール（ｈ．５５）、ラクトフェン（ｈ．５６）、リニュロン（ｈ．５７）、メコプロップ（ｈ．５８）、メコプロップ−Ｐ（ｈ．５９）、メソトリオン（ｈ．６０）、メタミトロン（ｈ．６１）、メタゾクロール（ｈ．６２）、メチベンズロン（ｈ．６３）、メトラクロール（ｈ．６４）（及びＳ−メトラクロール（ｈ．６５））、メトキスロン（ｈ．６６）、メトリブジン（ｈ．６７）、モノリニュロン（ｈ．６８）、オキサジアルギル（ｈ．６９）、オキサジアゾン（ｈ．７０）、オキシフルオルフェン（ｈ．７１）、フェンメディファム（ｈ．７２）、プレチラクロール（ｈ．７３）、プロホキシジム（ｈ．７４）、プロメトン（ｈ．７５）、プロメトリン（ｈ．７６）、プロパクロール（ｈ．７７）、プロパニル（ｈ．７８）、プロパキザホップ（ｈ．７９）、プロピソクロール（ｈ．８０）、ピラフルフェン−エチル（ｈ．８１）、ピラゾン（ｈ．８２）、ピラゾリネート（ｈ．８３）、ピラゾキシフェン（ｈ．８４）、ピリデート（ｈ．８５）、キザロホップ（ｈ．８６）、キザロホップ−Ｐ（ｈ．８７）（例えば、キザロホップ−エチル（ｈ．８８）、キザロホップ−Ｐ−エチル（ｈ．８９）、クロジナホップ−プロパルギル（ｈ．９０）、シハロホップ−ブチル（ｈ．９１）、ジクロホップ−メチル（ｈ．９２）、フェノキサプロップ−Ｐ−エチル（ｈ．９３）、フルアジホップ−Ｐ−ブチル（ｈ．９４）、ハロキシホップ−メチル（ｈ．９５）、ハロキシホップ−Ｒ−メチル（ｈ．９６））、サフルフェナシル（ｈ．９７）、セトキシジム（ｈ．９８）、シデュロン（ｈ．９９）、シマジン（ｈ．１００）、シメトリン（ｈ．１０１）、スルコトリオン（ｈ．１０２）、スルフェントラゾン（ｈ．１０３）、テブチウロン（ｈ．１０４）、テンボトリオン（ｈ．１０５）、テプラロキシジム（ｈ．１０６）、ターバシル（ｈ．１０７）、テルブメトン（ｈ．１０８）、テルブチラジン（ｈ．１０９）、サクストミン（例えば、米国特許第７，９８９，３９３に記載されているようなサクストミン）（ｈ．１１０）、テニルクロール（ｈ．１１１）、トラルコキシジム（ｈ．１１２）、トリクロピル（ｈ．１１３）、トリエタジン（ｈ．１１４）、トプラメゾン（ｈ．１１５）、これらの塩及びエステル、これらのラセミ混合物及び分割された異性体、ならびにこれらを組み合わせたものが挙げられる。
除草剤を含む市販製品は、容易に入手可能である。本発明の組成物における除草剤濃度は概ね、特定の除草剤についてラベル表記されている使用率に対応する。
本明細書に開示されている方法で用いる種子処理成分において有用であり得る化学系の殺虫剤、殺ダニ剤、及び殺線虫剤（「ｃｉａｎ」）の非限定的な例としては、カルバメート（ｃｉａｎ．Ａ）、ジアミド（ｃｉａｎ．Ｂ）、大環状ラクトン（ｃｉａｎ．Ｃ）、ネオニコチノイド（ｃｉａｎ．Ｄ）、オルガノホスフェート（ｃｉａｎ．Ｅ）、フェニルピラゾール（ｃｉａｎ．Ｆ）、ピレトリン（ｃｉａｎ．Ｇ）、スピノシン（ｃｉａｎ．Ｈ）、合成ピレスロイド（ｃｉａｎ．Ｉ）、テトロン酸（ｃｉａｎ．Ｊ）及びテトラミン酸（ｃｉａｎ．Ｋ）が挙げられる。
特定的な実施形態では、有用な化学系の殺虫剤、殺ダニ剤及び殺線虫剤としては、アクリナトリン（ｃｉａｎ．１）、α−シペルメトリン（ｃｉａｎ．２）、βシフルトリン（ｃｉａｎ．３）、シハロトリン（ｃｉａｎ．４）、シペルメトリン（ｃｉａｎ．５）、デルタメトリ（ｃｉａｎ．６）、エスフェンバレレート（ｃｉａｎ．７）、エトフェンプロックス（ｃｉａｎ．８）、フェンプロパスリン（ｃｉａｎ．９）、フェンバレレート（ｃｉａｎ．１０）、フルシトリネート（ｃｉａｎ．１１）、ホスチアゼート（ｃｉａｎ．１２）、λ−シハロトリン（ｃｉａｎ．１３）、γ−シハロトリン（ｃｉａｎ．１４）、ペルメトリン（ｃｉａｎ．１５）、τ−フルバリネート（ｃｉａｎ．１６）、トランスフルトリン（ｃｉａｎ．１７）、ζ−シペルメトリン（ｃｉａｎ．１８）、シフルトリン（ｃｉａｎ．１９）、ビフェントリン（ｃｉａｎ．２０）、テフルトリン（ｃｉａｎ．２１）、エフルシラナト（ｃｉａｎ．２２）、フブフェンプロックス（ｃｉａｎ．２３）、ピレトリン（ｃｉａｎ．２４）、レスメトリン（ｃｉａｎ．２５）、イミダクロプリド（ｃｉａｎ．２６）、アセタミプリド（ｃｉａｎ．２７）、チアメトキサム（ｃｉａｎ．２８）、ニテンピラム（ｃｉａｎ．２９）、チアクロプリド（ｃｉａｎ．３０）、ジノテフラン（ｃｉａｎ．３１）、クロチアニジン（ｃｉａｎ．３２）、イミダクロチズ（ｃｉａｎ．３３）、クロルフルアズロン（ｃｉａｎ．３４）、ジフルベンズロン（ｃｉａｎ．３５）、ルフェヌロン（ｃｉａｎ．３６）、テフルベンズロン（ｃｉａｎ．３７）、トリフルムロン（ｃｉａｎ．３８）、ノバルロン（ｃｉａｎ．３９）、フルフェノクスロン（ｃｉａｎ．４０）、ヘキサフルムロン（ｃｉａｎ．４１）、ビストリフルオロン（ｃｉａｎ．４２）、ノビフルムロン（ｃｉａｎ．４３）、ブプロフェジン（ｃｉａｎ．４４）、シロマジン（ｃｉａｎ．４５）、メトキシフェノジド（ｃｉａｎ．４６）、テブフェノジド（ｃｉａｎ．４７）、ハロフェノジド（ｃｉａｎ．４８）、クロマフェノジド（ｃｉａｎ．４９）、エンドスルファン（ｃｉａｎ．５０）、フィプロニル（ｃｉａｎ．５１）、エチプロール（ｃｉａｎ．５２）、ピラフルプロール（ｃｉａｎ．５３）、ピリプロール（ｃｉａｎ．５４）、フルベンジアミド（ｃｉａｎ．５５）、クロラントラニリプロール（ｃｉａｎ．５６）（例えば、リナキシピル（ｃｉａｎ．５６ａ））、サイアジピル（ｃｉａｎ．５７）、エマメクチン（ｃｉａｎ．５８）、エマメクチンベンゾエート（ｃｉａｎ．５９）、アバメクチン（ｃｉａｎ．６０）、イベルメクチン（ｃｉａｎ．６１）、ミルベメクチン（ｃｉａｎ．６２）、レピメクチン（ｃｉａｎ．６３）、テブフェンピラド（ｃｉａｎ．６４）、フェンピロキシメート（ｃｉａｎ．６５）、ピリダベン（ｃｉａｎ．６６）、フェナザキン（ｃｉａｎ．６７）、ピリミジフェン（ｃｉａｎ．６８）、トルフェンピラド（ｃｉａｎ．６９）、ジコホール（ｃｉａｎ．７０）、シエノピラフェン（ｃｉａｎ．７１）、シフルメトフェン（ｃｉａｎ．７２）、アセキノシル（ｃｉａｎ．７３）、フルアクリピリム（ｃｉａｎ．７４）、ビフェナゼート（ｃｉａｎ．７５）、ジアフェンチウロン（ｃｉａｎ．７６）、エトキサゾール（ｃｉａｎ．７７）、クロフェンテジン（ｃｉａｎ．７８）、スピノサド（ｃｉａｎ．７９）、トリアラテン（ｃｉａｎ．８０）、テトラジホン（ｃｉａｎ．８１）、プロパルギット（ｃｉａｎ．８２）、ヘキシチアゾクス（ｃｉａｎ．８３）、ブロモプロピレート（ｃｉａｎ．８４）、キノメチオナト（ｃｉａｎ．８５）、アミトラズ（ｃｉａｎ．８６）、ピリフルキナゾン（ｃｉａｎ．８７）、ピメトロジン（ｃｉａｎ．８８）、フロニカミド（ｃｉａｎ．８９）、ピリプロキシフェン（ｃｉａｎ．９０）、ジオフェノラン（ｃｉａｎ．９１）、クロルフェナピル（ｃｉａｎ．９２）、メタフルミゾン（ｃｉａｎ．９３）、インドキサカルブ（ｃｉａｎ．９４）、クロルピリホス（ｃｉａｎ．９５）、スピロジクロフェン（ｃｉａｎ．９６）、スピロメシフェン（ｃｉａｎ．９７）、スピロテトラマト（ｃｉａｎ．９８）、ピリダリル（ｃｉａｎ．９９）、スピンクトラム（ｃｉａｎ．１００）、アセフェート（ｃｉａｎ．１０１）、トリアゾホス（ｃｉａｎ．１０２）、プロフェノホス（ｃｉａｎ．１０３）、オキサミル（ｃｉａｎ．１０４）、スピネトラム（ｃｉａｎ．１０５）、フェナミホス（ｃｉａｎ．１０６）、フェナミプクロチアホス（ｃｉａｎ．１０７）、４−｛［（６−クロロピリド−３−イル）メチル］（２，２−ジフルオロエチル）アミノ｝フラン−２（５Ｈ）−オン（ｃｉａｎ．１０８）、カズサホス（ｃｉａｎ．１０９）、カルバリル（ｃｉａｎ．１１０）、カルボフラン（ｃｉａｎ．１１１）、エトプロホス（ｃｉａｎ．１１２）、チオジカルブ（ｃｉａｎ．１１３）、アルジカルブ（ｃｉａｎ．１１４）、アルドキシカルブ（ｃｉａｎ．１１５）、メタミドホス（ｃｉａｎ．１１６）、メチオカルブ（ｃｉａｎ．１１７）、スルホキサフロル（ｃｉａｎ．１１８）、シアントラニリプロール（ｃｉａｎ．１１９）、チオキサザフェン（ｃｉａｎ．１２０）及びこれらを組み合わせたものが挙げられる。
種子処理剤としては、いくつかの実施形態では、Ａｃｃｅｌｅｒｏｎ（登録商標）におけるもののような市販の種子処理調合物を挙げてよい。これらの成分は、別個の層として種子の上に加えてよく、あるいは、種子コーティング組成物の一部として加えてもよい。一実施形態では、微生物懸濁液をトウモロコシ種子に塗布する場合には、種子処理成分としては、イプコナゾール、メタラキシル、トリフロキシストロビン及びクロチアニジンが挙げられる。一実施形態では、微生物懸濁液をダイズ種子に塗布する場合には、種子処理成分としては、ピラクロストロビン、メタラキシル、フルキサピロキサド、イミダクロプリド、フルオピラム、クロチアニジン、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓが挙げられる。一実施形態では、微生物懸濁液を綿種子に塗布する場合には、種子処理成分としては、メタラキシル、ミクロブタニル、トリフロキシストロビン、ピラクロストロビン、イミダクロプリド、イプコナゾール、チアメトキサム、アバメクチン、チオジカルブ、イプコナゾール及びフルキサピロキサドが挙げられる。
いくつかの実施形態では、種子処理有害生物防除剤と微生物組成物を種子処理剤に調合できる。単離、選択及び同定した微生物を含む種子処理調合物には、様々な添加剤を加えることができる。結合剤を加えることができ、結合剤としては、天然または合成のものであることができる固着剤ポリマーで構成されるものであって、コーティングする種子に植物毒性作用を及ぼさないものが挙げられる。結合剤は、ポリビニルアセテート、ポリビニルアセテートコポリマー、エチレンビニルアセテート（ＥＶＡ）コポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルアルコールコポリマー、セルロース（エチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース及びカルボキシメチルセルロースを含む）、ポリビニルピロリドン、多糖（デンプン、変性デンプン、デキストリン、マルトデキストリン、アルギネート及びキトサンを含む）、脂肪、油、タンパク質（ゼラチン及びゼインを含む）、アラビアゴム、セラック、ビニリデンクロライド及びビニリデンクロライドコポリマー、カルシウムリグノスルホネート、アクリル系コポリマー、ポリビニルアクリレート、ポリエチレンオキシド、アクリルアミドポリマー及びコポリマー、ポリヒドロキシエチルアクリレート、メチルアクリルアミドモノマー、ならびにポリクロロプレンから選択してよい。
ニトロソ、ニトロ、アゾ（モノアゾ、ビスアゾ及びポリアゾを含む）、アクリジン、アントラキノン、アジン、ジフェニルメタン、インダミン、インドフェノール、メチン、オキサジン、フタロシアニン、チアジン、チアゾール、トリアリールメタン、キサンテンとして分類される有機発色団を含む様々な着色剤のいずれかを用いてよい。加えることができるその他の添加剤としては、鉄、マンガン、ホウ素、銅、コバルト、モリブデン及び亜鉛の塩のような微量栄養素が挙げられる。ポリマーまたはその他の粉末制御剤を塗布して、処理剤を種子の表面上に保持できる。
具体的な実施形態では、コーティングはさらに、微生物細胞または胞子に加えて、付着剤の層を含むことができる。付着剤は、無毒で、生分解性、接着性を有する付着剤である必要がある。このような物質の例としては、ポリビニルアセテート、ポリビニルアセテートコポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルアルコールコポリマー、セルロース（メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース及びヒドロキシメチルプロピルセルロースなど）、デキストリン、アルギネート、糖、糖蜜、ポリビニルピロリドン、多糖、タンパク質、脂肪、油、アラビアゴム、ゼラチン、シロップ及びデンプンが挙げられるが、これらに限らない。
付着剤、分散剤、界面活性剤、及び栄養剤のような様々な添加剤と、緩衝液成分も、種子処理調合物に含めることができる。その他の従来の種子処理添加剤としては、コーティング剤、湿潤剤、緩衝剤及び多糖が挙げられるが、これらに限らない。少なくとも１つの農業上許容可能な担体（水、固体または乾燥粉末など）を種子処理調合物に含めることができる。乾燥粉末は、カルシウムカーボネート、石膏、潤滑剤（ｆｌｕｅｎｃｙ ａｇｅｎｔ）、バーミキュライト、タルク、腐植、活性炭及び様々なリン系化合物のような様々な物質に由来することができる。
いくつかの実施形態では、種子コーティング組成物は、活性成分と組み合わせて、種子への塗布を促進するための有機または無機、天然または合成の成分である少なくとも１つの充填剤を含むことができる。有益なことに、充填剤は、不活性固体、例えば、クレー、天然または合成シリケート、シリカ、樹脂、ろう、固体肥料（例えばアンモニウム塩）、天然の土壌鉱物（カオリン、クレー、タルク、石灰、石英、アタパルジャイト、モンモリロナイト、ベントナイトもしくは珪藻土など）、または合成鉱物（シリカ、アルミナもしくはシリケート、特には、アルミニウムシリケートもしくはマグネシウムシリケートなど）などである。
種子コーティング組成物と種子コーティングプロセス
正確に、安全に、及び効率的に種子処理製品を種子に塗布するために特別に設計及び製造された処理剤塗布器具の使用を通じて、従来の混合方法、従来の噴霧方法またはこれらを組み合わせた方法を用いて、１層以上の種子処理剤と、本発明の方法から得た試験微生物組成物で種子を実質的に均一にコーティングできることが想定されている。このような器具では、様々なタイプのコーティング技術（回転型コーター、ドラムコーター、流動床技法、噴流層、回転霧化またはこれらを組み合わせたものなど）が使用される。液体種子処理剤（本明細書に記載されている方法の処理剤など）は、「アトマイザー」ディスクまたはスプレーノズルを回転させることによって塗布でき、これにより、種子処理剤がスプレーパターンに沿って移動すると、種子処理剤が種子の上に均一に分布する。有益には、その後、さらに一定期間、種子を混合または転動させて、さらに処理剤を分布させて、乾燥させるようにする。種子は、本発明の組成物でコーティングする前に、発芽及び出芽の均一性を高めるために下塗りすることも、しないこともできる。代替的な実施形態では、乾燥粉末調合物を計量して、動いている種子の上に供給して、完全に分布するまで混合することができる。
概して、単離、選択及び同定した微生物、または種子処理剤で用いるその他の成分の量は、種子の発芽を阻害したり、または種子に植物毒性損傷を与えたりする量であってはならない。
微生物及び種子処理剤で処理した種子は、さらにフィルムオーバーコーティングで覆って、コーティングを保護してもよい。このようなオーバーコーティングは、当該技術分野において知られており、流動床及びドラムフィルムコーティング技法を用いて塗布してよい。
本発明の方法に適する植物
原則として、本発明による方法は、いずれの植物種の種子に対する種子処理にも関与するとともに、この種子処理に有用である種子処理耐性微生物を同定するのに用いることができる。単子葉植物ならびに双子葉植物種が特に好適である。本発明の方法と組成物は、農業、園芸、液体燃料分子もしくはその他の化学物質を作製するのに用いるバイオマスの作製、及び／または林業において重要であるかまたは関心の高い植物に用いることが多い。
したがって、本明細書に記載されている方法は、Ａｎｇｉｏｓｐｅｒｍａｅ網及びＧｙｍｎｏｓｐｅｒｍａｅ網に属する高等植物を含む広範な植物に対して使用される。Ｄｉｃｏｔｙｌｏｄｅｎａｅ亜綱及びＭｏｎｏｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｅ亜綱の植物が特に好適である。双子葉植物は、Ａｒｉｓｔｏｃｈｉａｌｅｓ目、Ａｓｔｅｒａｌｅｓ目、Ｂａｔａｌｅｓ目、Ｃａｍｐａｎｕｌａｌｅｓ目、Ｃａｐｐａｒａｌｅｓ目、Ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌａｌｅｓ目、Ｃａｓｕａｒｉｎａｌｅｓ目、Ｃｅｌａｓｔｒａｌｅｓ目、Ｃｏｒｎａｌｅｓ目、Ｄｉａｐｅｎｓａｌｅｓ目、Ｄｉｌｌｅｎｉａｌｅｓ目、Ｄｉｐｓａｃａｌｅｓ目、Ｅｂｅｎａｌｅｓ目、Ｅｒｉｃａｌｅｓ目、Ｅｕｃｏｍｉａｌｅｓ目、Ｅｕｐｈｏｒｂｉａｌｅｓ目、Ｆａｂａｌｅｓ目、Ｆａｇａｌｅｓ目、Ｇｅｎｔｉａｎａｌｅｓ目、Ｇｅｒａｎｉａｌｅｓ目、Ｈａｌｏｒａｇａｌｅｓ目、Ｈａｍａｍｅｌｉｄａｌｅｓ目、Ｉｌｌｉｃｉａｌｅｓ目、Ｊｕｇｌａｎｄａｌｅｓ目、Ｌａｍｉａｌｅｓ目、Ｌａｕｒａｌｅｓ目、Ｌｅｃｙｔｈｉｄａｌｅｓ目、Ｌｅｉｔｎｅｒｉａｌｅｓ目、Ｍａｇｎｉｏｌａｌｅｓ目、Ｍａｌｖａｌｅｓ目、Ｍｙｒｉｃａｌｅｓ目、Ｍｙｒｔａｌｅｓ目、Ｎｙｍｐｈａｅａｌｅｓ目、Ｐａｐｅｖｅｒａｌｅｓ目、Ｐｉｐｅｒａｌｅｓ目、Ｐｌａｎｔａｇｉｎａｌｅｓ目、Ｐｌｕｍｂａｇｉｎａｌｅｓ目、Ｐｏｄｏｓｔｅｍａｌｅｓ目、Ｐｏｌｅｍｏｎｉａｌｅｓ目、Ｐｏｌｙｇａｌａｌｅｓ目、Ｐｏｌｙｇｏｎａｌｅｓ目、Ｐｒｉｍｕｌａｌｅｓ目、Ｐｒｏｔｅａｌｅｓ目、Ｒａｆｆｌｅｓｉａｌｅｓ目、Ｒａｎｕｎｃｕｌａｌｅｓ目、Ｒｈａｍｎａｌｅｓ目、Ｒｏｓａｌｅｓ目、Ｒｕｂｉａｌｅｓ目、Ｓａｌｉｃａｌｅｓ目、Ｓａｎｔａｌｅｓ目、Ｓａｐｉｎｄａｌｅｓ目、Ｓａｒｒａｃｅｎｉａｃｅａｅ目、Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｌｅｓ目、Ｔｈｅａｌｅｓ目、Ｔｒｏｃｈｏｄｅｎｄｒａｌｅｓ目、Ｕｍｂｅｌｌａｌｅｓ目、Ｕｒｔｉｃａｌｅｓ目及びＶｉｏｌａｌｅｓ目に属する。単子葉植物は、Ａｌｉｓｍａｔａｌｅｓ目、Ａｒａｌｅｓ目、Ａｒｅｃａｌｅｓ目、Ｂｒｏｍｅｌｉａｌｅｓ目、Ｃｏｍｍｅｌｉｎａｌｅｓ目、Ｃｙｃｌａｎｔｈａｌｅｓ目、Ｃｙｐｅｒａｌｅｓ目、Ｅｒｉｏｃａｕｌａｌｅｓ目、Ｈｙｄｒｏｃｈａｒｉｔａｌｅｓ目、Ｊｕｎｃａｌｅｓ目、Ｌｉｌｌｉａｌｅｓ目、Ｎａｊａｄａｌｅｓ目、Ｏｒｃｈｉｄａｌｅｓ目、Ｐａｎｄａｎａｌｅｓ目、Ｐｏａｌｅｓ目、Ｒｅｓｔｉｏｎａｌｅｓ目、Ｔｒｉｕｒｉｄａｌｅｓ目、Ｔｙｐｈａｌｅｓ目及びＺｉｎｇｉｂｅｒａｌｅｓ目に属する。Ｇｙｍｎｏｓｐｅｒｍａｅ網に属する植物は、Ｃｙｃａｄａｌｅｓ、Ｇｉｎｋｇｏａｌｅｓ、Ｇｎｅｔａｌｅｓ及びＰｉｎａｌｅｓである。
好適な種としては、Ａｂｅｌｍｏｓｃｈｕｓ属、Ａｂｉｅｓ属、Ａｃｅｒ属、Ａｇｒｏｓｔｉｓ属、Ａｌｌｉｕｍ属、Ａｌｓｔｒｏｅｍｅｒｉａ属、Ａｎａｎａｓ属、Ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｉｓ属、Ａｎｄｒｏｐｏｇｏｎ属、Ａｒｔｅｍｉｓｉａ属、Ａｒｕｎｄｏ属、Ａｔｒｏｐａ属、Ｂｅｒｂｅｒｉｓ属、Ｂｅｔａ属、Ｂｉｘａ属、Ｂｒａｓｓｉｃａ属、Ｃａｌｅｎｄｕｌａ属、Ｃａｍｅｌｌｉａ属、Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ属、Ｃａｎｎａｂｉｓ属、Ｃａｐｓｉｃｕｍ属、Ｃａｒｔｈａｍｕｓ属、Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ属、Ｃｅｐｈａｌｏｔａｘｕｓ属、Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ属、Ｃｉｎｃｈｏｎａ属、Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ属、Ｃｏｆｆｅａ属、Ｃｏｌｃｈｉｃｕｍ属、Ｃｏｌｅｕｓ属、Ｃｕｃｕｍｉｓ属、Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ属、Ｃｙｎｏｄｏｎ属、Ｄａｔｕｒａ属、Ｄｉａｎｔｈｕｓ属、Ｄｉｇｉｔａｌｉｓ属、Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ属、Ｅｌａｅｉｓ属、Ｅｐｈｅｄｒａ属、Ｅｒｉａｎｔｈｕｓ属、Ｅｒｙｔｈｒｏｘｙｌｕｍ属、Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ属、Ｆｅｓｔｕｃａ属、Ｆｒａｇａｒｉａ属、Ｇａｌａｎｔｈｕｓ属、Ｇｌｙｃｉｎｅ属、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ属、Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ属、Ｈｅｖｅａ属、Ｈｏｒｄｅｕｍ属、Ｈｙｏｓｃｙａｍｕｓ属、Ｊａｔｒｏｐｈａ属、Ｌａｃｔｕｃａ属、Ｌｉｎｕｍ属、Ｌｏｌｉｕｍ属、Ｌｕｐｉｎｕｓ属、Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ属、Ｌｙｃｏｐｏｄｉｕｍ属、Ｍａｎｉｈｏｔ属、Ｍｅｄｉｃａｇｏ属、Ｍｅｎｔｈａ属、Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ属、Ｍｕｓａ属、Ｎｉｃｏｔｉａｎａ属、Ｏｒｙｚａ属、Ｐａｎｉｃｕｍ属、Ｐａｐａｖｅｒ属、Ｐａｒｔｈｅｎｉｕｍ属、Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ属、Ｐｅｔｕｎｉａ属、Ｐｈａｌａｒｉｓ属、Ｐｈｌｅｕｍ属、Ｐｉｎｕｓ属、Ｐｏａ属、Ｐｏｉｎｓｅｔｔｉａ属、Ｐｏｐｕｌｕｓ属、Ｒａｕｗｏｌｆｉａ属、Ｒｉｃｉｎｕｓ属、Ｒｏｓａ属、Ｓａｃｃｈａｒｕｍ属、Ｓａｌｉｘ属、Ｓａｎｇｕｉｎａｒｉａ属、Ｓｃｏｐｏｌｉａ属、Ｓｅｃａｌｅ属、Ｓｏｌａｎｕｍ属、Ｓｏｒｇｈｕｍ属、Ｓｐａｒｔｉｎａ属、Ｓｐｉｎａｃｅａ属、Ｔａｎａｃｅｔｕｍ属、Ｔａｘｕｓ属、Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ属、Ｔｒｉｔｉｃｏｓｅｃａｌｅ属、Ｔｒｉｔｉｃｕｍ属、Ｕｎｉｏｌａ属、Ｖｅｒａｔｒｕｍ属、Ｖｉｎｃａ属、Ｖｉｔｉｓ属及びＺｅａ属の植物を挙げてよい。
本明細書に記載されている方法は、農業、園芸、バイオ燃料分子及びその他の化学物質を作製するためのバイオマス、及び／または林業において重要であるかまたは関心の高い植物の種子において種子処理耐性である微生物を同定するのに用いてよい。非限定的な例としては、例えば、Ｐａｎｉｃｕｍ ｖｉｒｇａｔｕｍ（アメリカクサキビ）、Ｓｏｒｇｈｕｍ ｂｉｃｏｌｏｒ（モロコシ、スーダングラス）、Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ ｇｉｇａｎｔｅｕｓ（ススキ）、Ｓａｃｃｈａｒｕｍ属（エネルギー原料用サトウキビ）、Ｐｏｐｕｌｕｓ ｂａｌｓａｍｉｆｅｒａ（ポプラ）、Ｚｅａ ｍａｙｓ（トウモロコシ）、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ（ダイズ）、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ（カノラ）、Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ（コムギ）、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ（綿）、Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ（イネ）、Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ ａｎｎｕｕｓ（ヒマワリ）、Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ（アルファルファ）、Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ（テンサイ）、Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ ｇｌａｕｃｕｍ（トウジンビエ）、Ｐａｎｉｃｕｍ属種、Ｓｏｒｇｈｕｍ属種、Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ属種、Ｓａｃｃｈａｒｕｍ属種、Ｅｒｉａｎｔｈｕｓ属種、Ｐｏｐｕｌｕｓ属種、Ａｎｄｒｏｐｏｇｏｎ ｇｅｒａｒｄｉｉ（ビッグブルーステム）、Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ ｐｕｒｐｕｒｅｕｍ（エレファントグラス）、Ｐｈａｌａｒｉｓ ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ（リードカナリーグラス）、Ｃｙｎｏｄｏｎ ｄａｃｔｙｌｏｎ（バーミューダグラス）、Ｆｅｓｔｕｃａ ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ（トールフェスク）、Ｓｐａｒｔｉｎａ ｐｅｃｔｉｎａｔａ（プレーリーコードグラス）、Ａｒｕｎｄｏ ｄｏｎａｘ（ヨシタケ）、Ｓｅｃａｌｅ ｃｅｒｅａｌｅ（ライムギ）、Ｓａｌｉｘ属種（ヤナギ）、Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ属種（ユーカリ）、Ｔｒｉｔｉｃｏｓｅｃａｌｅ属種（コムギ属−−コムギ×ライムギ）、Ｂａｍｂｏｏ、Ｃａｒｔｈａｍｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ（ベニバナ）、Ｊａｔｒｏｐｈａ ｃｕｒｃａｓ（ジャトロファ）、Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ（ヒマ）、Ｅｌａｅｉｓ ｇｕｉｎｅｅｎｓｉｓ（アブラヤシ）、Ｐｈｏｅｎｉｘ ｄａｃｔｙｌｉｆｅｒａ（ナツメヤシ）、Ａｒｃｈｏｎｔｏｐｈｏｅｎｉｘ ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｉａｎａ（キングパーム）、Ｓｙａｇｒｕｓ ｒｏｍａｎｚｏｆｆｉａｎａ（クイーンパーム）、Ｌｉｎｕｍ ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ（アマ）、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ、Ｍａｎｉｈｏｔ ｅｓｃｕｌｅｎｔａ（キャッサバ）、Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ（トマト）、Ｌａｃｔｕｃａ ｓａｌｉｖａ（レタス）、Ｍｕｓａ ｐａｒａｄｉｓｉａｃａ（バナナ）、Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ（ジャガイモ）、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ（ブロッコリー、カリフラワー、メキャベツ）、Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ（チャ）、Ｆｒａｇａｒｉａ ａｎａｎａｓｓａ（イチゴ）、Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ ｃａｃａｏ（カカオ）、Ｃｏｆｆｅａ ａｒａｂｉｃａ（コーヒー）、Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ（ブドウ）、Ａｎａｎａｓ ｃｏｍｏｓｕｓ（パイナップル）、Ｃａｐｓｉｃｕｍ ａｎｎｕｍ（トウガラシ及びアマトウガラシ）、Ａｌｌｉｕｍ ｃｅｐａ（タマネギ）、Ｃｕｃｕｍｉｓ ｍｅｌｏ（メロン）、Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ（キュウリ）、Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍａｘｉｍａ（カボチャ）、Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ（カボチャ）、Ｓｐｉｎａｃｅａ ｏｌｅｒａｃｅａ（ホウレンソウ）、Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｌａｎａｔｕｓ（スイカ）、Ａｂｅｌｍｏｓｃｈｕｓ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｓ（オクラ）、Ｓｏｌａｎｕｍ ｍｅｌｏｎｇｅｎａ（ナス）、Ｐａｐａｖｅｒ ｓｏｍｎｉｆｅｒｕｍ（ケシ）、Ｐａｐａｖｅｒ ｏｒｉｅｎｔａｌｅ、Ｔａｘｕｓ ｂａｃｃａｔａ、Ｔａｘｕｓ ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ、Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ａｎｎｕａ、Ｃａｎｎａｂｉｓ ｓａｌｉｖａ、Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｕｍｉｎａｔｅ、Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ ｒｏｓｅｕｓ、Ｖｉｎｃａ ｒｏｓｅａ、Ｃｉｎｃｈｏｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｃｏｉｃｈｉｃｕｍ ａｕｔｕｍｎａｌｅ、Ｖｅｒａｔｒｕｍ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ、Ｄｉｇｉｔａｌｉｓ ｌａｎａｔａ、Ｄｉｇｉｔａｌｉｓ ｐｕｒｐｕｒｅａ、Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ属種、Ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｉｓ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ、Ａｔｒｏｐａ ｂｅｌｌａｄｏｎｎａ、Ｄａｔｕｒａ ｓｔｏｍｏｎｉｕｍ、Ｂｅｒｂｅｒｉｓ属種、Ｃｅｐｈａｌｏｔａｘｕｓ属種、Ｅｐｈｅｄｒａ ｓｉｎｉｃａ、Ｅｐｈｅｄｒａ属種、Ｅｒｙｔｈｒｏｘｙｌｕｍ ｃｏｃａ、Ｇａｌａｎｔｈｕｓ ｗｏｒｎｏｒｉｉ、Ｓｃｏｐｏｌｉａ属種、Ｌｙｃｏｐｏｄｉｕｍ ｓｅｒｒａｔｕｍ（Ｈｕｐｅｒｚｉａ ｓｅｒｒａｔａ）、Ｌｙｃｏｐｏｄｉｕｍ属種、Ｒａｕｗｏｌｆｉａ ｓｅｒｐｅｎｔｉｎａ、Ｒａｕｗｏｌｆｉａ属種、Ｓａｎｇｕｉｎａｒｉａ ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ、Ｈｙｏｓｃｙａｍｕｓ属種、Ｃａｌｅｎｄｕｌａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｐａｒｔｈｅｎｉｕｍ、Ｃｏｌｅｕｓ ｆｏｒｓｋｏｈｌｉｉ、Ｔａｎａｃｅｔｕｍ ｐａｒｔｈｅｎｉｕｍ、Ｐａｒｔｈｅｎｉｕｍ ａｒｇｅｎｔａｔｕｍ（グアユール）、Ｈｅｖｅａ属種（ゴム）、Ｍｅｎｔｈａ ｓｐｉｃａｔａ（ミント）、Ｍｅｎｔｈａ ｐｉｐｅｒｉｔａ（ミント）、Ｂｉｘａ ｏｒｅｌｌａｎａ、Ａｌｓｔｒｏｅｍｅｒｉａ属種、Ｒｏｓａ属種（バラ）、Ｄｉａｎｔｈｕｓ ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌｕｓ（カーネーション）、Ｐｅｔｕｎｉａ属種（ペチュニア）、Ｐｏｉｎｓｅｔｔｉａ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ（ポインセチア）、Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ（タバコ）、Ｌｕｐｉｎｕｓ ａｌｂｕｓ（ルピナス）、Ｕｎｉｏｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（オートムギ）、ｂｅｎｔｇｒａｓｓ（Ａｇｒｏｓｔｉｓ属種）、Ｐｏｐｕｌｕｓ ｔｒｅｍｕｌｏｉｄｅｓ（アスペン）、Ｐｉｎｕｓ属種（マツ）、Ａｂｉｅｓ属種（モミ）、Ａｃｅｒ属種（カエデ）、Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ（オオムギ）、Ｐｏａ ｐｒａｔｅｎｓｉｓ（ブルーグラス）、Ｌｏｌｉｕｍ属種（ライグラス）、Ｐｈｌｅｕｍ ｐｒａｔｅｎｓｅ（チモシー）及び針葉樹が挙げられる。別の実施形態では、本発明の方法で使用する植物は、エネルギー生産のために栽培する、いわゆるエネルギー作物であり、Ｐａｎｉｃｕｍ ｖｉｒｇａｔｕｍ（アメリカクサキビ）、Ｓｏｒｇｈｕｍ ｂｉｃｏｌｏｒ（モロコシ、スーダングラス）、Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓ ｇｉｇａｎｔｅｕｓ（ススキ）、Ｓａｃｃｈａｒｕｍ属種（エネルギー原料用サトウキビ）、Ｐｏｐｕｌｕｓ ｂａｌｓａｍｉｆｅｒａ（ポプラ）、Ａｎｄｒｏｐｏｇｏｎ ｇｅｒａｒｄｉｉ（ビッグブルーステム）、Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ ｐｕｒｐｕｒｅｕｍ（エレファントグラス）、Ｐｈａｌａｒｉｓ ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ（リードカナリーグラス）、Ｃｙｎｏｄｏｎ ｄａｃｔｙｌｏｎ（バーミューダグラス）、Ｆｅｓｔｕｃａ ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ（トールフェスク）、Ｓｐａｒｔｉｎａ ｐｅｃｔｉｎａｔａ（プレーリーコードグラス）、Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ（アルファルファ）、Ａｒｕｎｄｏ ｄｏｎａｘ（ヨシタケ）、Ｓｅｃａｌｅ ｃｅｒｅａｌｅ（ライムギ）、Ｓａｌｉｘ属種（ヤナギ）、Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ属種（ユーカリ）、Ｔｒｉｔｉｃｏｓｅｃａｌｅ属種（コムギ属−コムギ×ライムギ）及びＢａｍｂｏｏのようなセルロース系エネルギー作物、Ｚｅａ ｍａｙｓ（トウモロコシ）及びＭａｎｉｈｏｔ ｅｓｃｕｌｅｎｔａ（キャッサバ）のようなデンプン系エネルギー作物、Ｓａｃｃｈａｒｕｍ属種（サトウキビ）、Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ（テンサイ）及びＳｏｒｇｈｕｍ ｂｉｃｏｌｏｒ（Ｌ．）Ｍｏｅｎｃｈ（サトウモロコシ）のような糖系エネルギー作物、ならびにＧｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ（ダイズ）、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ（カノラ）、Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ ａｎｎｕｕｓ（ヒマワリ）、Ｃａｒｔｈａｍｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ（ベニバナ）、Ｊａｔｒｏｐｈａ ｃｕｒｃａｓ（ジャトロファ）、Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ（ヒマ）、Ｅｌａｅｉｓ ｇｕｉｎｅｅｎｓｉｓ（アフリカアブラヤシ）、Ｅｌａｅｉｓ ｏｌｅｉｆｅｒａ（アメリカアブラヤシ）、Ｃｏｃｏｓ ｎｕｃｉｆｅｒａ（ココナッツ）、Ｃａｍｅｌｉｎａ ｓａｔｉｖａ（ホソバウンラン）、Ｐｏｎｇａｍｉａ ｐｉｎｎａｔａ（クロヨナ）、Ｏｌｅａ ｅｕｒｏｐａｅａ（オリーブ）、Ｌｉｎｕｍ ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ（アマ）、Ｃｒａｍｂｅ ａｂｙｓｓｉｎｉｃａ（アビシニアン・カレ）及びＢｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａのようなバイオ燃料生産用エネルギー作物などである。
本開示を通じて、様々な情報源が参照されており、これらは、参照により援用する。情報源としては、例えば科学学術雑誌論文、特許文献及びテキストブックが挙げられる。このような情報源への参照は、提出時点における一般的な技術水準を示すために過ぎない。当業者は、これらのすべての情報源の内容と教示に依存し、これを使用して、本発明の実施形態を作製及び利用できるが、特定の情報源におけるいずれの論考及びコメントも、そのコメントを当該技術分野における一般的な意見として受け入れたと認めるものとしてみなすものでは決してないものとする。
本明細書で言及されているいずれの文献及び特許出願も、個々の各文献または特許出願が参照により援用されることが具体的かつ個々に記された場合と同程度に、参照により本明細書に援用される。
いずれの参照も、先行技術を構成することを認めるものではない。参照文献の論考には、その執筆者が主張するものが示されており、本出願人は、引用されている文書の正確性と妥当性に異議を申し立てる権利を留保する。本明細書では、数多くの先行技術文献が参照されているが、この参照により、これらの文献のいずれかが、当該技術分野における技術常識の一部を形成することを認めるものではないことは明確に分かるであろう。
本発明について詳細に説明してきたが、添付の特許請求の範囲で定義されている本発明の範囲から逸脱せずに、修正形態、変更形態及び均等な実施形態が可能であることは明らかであろう。さらに、本開示のすべての実施例が、非限定的な例として示されていることは明らかであるはずである。
下記の実施例は、例示的なものに過ぎず、本開示をいかようにも限定するものではない。
実施例１
実施例１Ａ
この実施例では、微生物細胞懸濁液を原料物質として使用した。この細胞懸濁液は、微生物群に存在するすべての細菌、真菌及び古細菌（土壌、植物組織及び水域で見られるものが挙げられるが、これらに限らない）を反映した抽出物であった（図１の方法Ｂ１）。種子処理プロセスに耐えられる微生物を同定するために、これらの細胞懸濁液を用いて、種子に接種した。
細胞懸濁液は、５００ＲＣＦで遠心分離してペレット状の破片にした出発微生物細胞懸濁液５０ｍＬに由来するものであった。上清をデカントで試料から移しとり、フィルターに通して、破片をさらに除去した。続いて、ろ過した上清を１６０００ＲＣＦで２０分遠心分離して、主に細胞物質からなるペレットを作製した。上清を破棄し、得られたペレットを１ｍＬの滅菌ＰＢＳに再懸濁して、細胞画分を濃縮した。
得られた細胞懸濁液１ｍＬを１．５ｍＬのマイクロ遠心チューブに移して、その試料を１４０００ＲＣＦで１０分回転させることによって、さらに濃縮した。８５０μＬの上清を除去し、ペレットを残りの上清に再懸濁した。この高濃縮試料１００μＬを、５０ｍＬの滅菌遠心チューブに入った４０個のトウモロコシ種子（ＤＫＣ６２−６１）に加えた。
種子と濃縮細胞懸濁液を激しく振とうし、３０秒ボルテックスした。続いて、６５μＬのＰｒｅｃｉｓｅ Ｓｅｅｄ Ｆｉｎｉｓｈｅｒ（登録商標）１００６を水で１／５に希釈したものを種子／細胞懸濁液混合物に加え、３０秒振とう／ボルテックスして、均一に覆われるようにした。微生物懸濁液で処理したトウモロコシ種子を滅菌皿に移し、バイオセーフティーキャビネット内で２０分乾燥させた。処理して乾燥した種子を室温（約２２℃）で一晩保管してから、１つの種子を、５０ｍＬ遠心チューブに入った１０ｍＬの滅菌ＰＢＳに加え、種子上に含まれた物質の１／１０希釈液を作製した。この複製試料を３０秒ボルテックスし、１時間置いてから、再び３０秒ボルテックスして、種子に付着したすべての細胞が除去されるようにした。この懸濁液をさらに１／１０及び１／１００に希釈し、それぞれの微生物種子処理剤の複製及び希釈系１００μＬを、１５０ｍｍペトリ皿内のＲ２Ａ寒天増殖培地に塗抹し、室温でインキュベートした。１〜１０日のうちに、寒天上に微生物コロニーが現れ、これらのコロニーを釣菌して、１５０μＬのＲ２Ｂ＋ＹＴ増殖培地がウェルに入った９６ウェルマイクロタイタープレートに入れた。
混濁に達したら、９６ウェルプレートに入った個々の培養液をＰＣＲにかけ、単離株の分類学的同定を行った。これらの微生物株を「種子処理生存菌」とみなした。続いて、下記のとおりに、これらの株に対して、既知物質の同定を行った。ログ期待値による複数配列比較（ＭＵＳＣＬＥ）によるアラインメントと、系統樹を用いて、配列を互いに比較して、保存のために、その試料に特有であった株のみを選択した。概して、遺伝子の長さにわたって互いに０．５％以上異なる配列は、特有なものとみなした。既知物質の同定（混合物における既知の生物の迅速な同定）は、当業者に知られている多くの方法を用いて行うことができる。
この調査結果は、図２Ａ〜Ｃに示されている。図２Ａ〜Ｃにおいて「方法Ａ」として示されているデータは、種子を処理するのに用いない細胞懸濁液を伴う非ハイスループットな方法を表している。「方法Ｂ」として示されているデータは、方法Ｂ１によって得られたデータを表している。見て取れるように、このアプローチを用いて、種子処理後も生存している菌として、複数の芽胞形成種の細菌が同定されたと同時に、この方法では、「非生存菌」を除去するのに成功し、種子処理耐性微生物が濃縮された。予想外にも、多様な非芽胞形成微生物群も同定された。
実施例１Ｂ
この実施例では、微生物細胞懸濁液を原料物質として使用した。細胞懸濁液は、人工的に作製した微生物プールであって、事前に培養した微生物プールから得た細胞懸濁液であった（図１の方法Ｂ２）。種子処理プロセスに耐えられる微生物を同定するために、これらの細胞懸濁液を用いて、種子に接種した。
方法Ｂ２に示されているように、存在する微生物培養液を併せてプールし、微生物の細胞懸濁液を作製した。種子と濃縮細胞懸濁液を激しく振とうし、３０秒ボルテックスした。続いて、６５μＬのＰｒｅｃｉｓｅ Ｓｅｅｄ Ｆｉｎｉｓｈｅｒ（登録商標）１００６を水で１／５に希釈したものを種子／細胞懸濁液混合物に加え、３０秒振とう／ボルテックスして、均一に覆われるようにした。微生物懸濁液で処理したトウモロコシ種子を滅菌皿に移し、バイオセーフティーキャビネット内で２０分乾燥させた。処理して乾燥した種子を室温（約２２℃）で一晩保管してから、１つの種子を、５０ｍＬ遠心チューブに入った１０ｍＬの滅菌ＰＢＳに加え、種子上に含まれた物質の１／１０希釈液を作製した。この複製試料を３０秒ボルテックスし、１時間置いてから、再び３０秒ボルテックスして、種子に付着したすべての細胞が除去されるようにした。この懸濁液をさらに１／１０及び１／１００に希釈し、それぞれの微生物種子処理剤の複製及び希釈系を１００μＬ、１５０ｍｍペトリ皿内のＲ２Ａ寒天増殖培地に塗抹し、室温でインキュベートした。１〜１０日のうちに、寒天上に微生物コロニーが現れ、これらのコロニーを釣菌して、１５０μＬのＲ２Ｂ＋ＹＴ増殖培地がウェルに入った９６ウェルマイクロタイタープレートに入れた。
混濁に達したら、９６ウェルプレートに入った個々の培養液をＰＣＲにかけ、単離株の分類学的同定を行った。これらの微生物株を「種子処理生存菌」とみなした。続いて、下記のとおりに、これらの株に対して、既知物質の同定を行った。ログ期待値による複数配列比較（ＭＵＳＣＬＥ）によるアラインメントと、系統樹を用いて、配列を互いに比較して、保存のために、その試料に特有であった株のみを選択した。概して、遺伝子の長さにわたって互いに０．５％以上異なる配列は、特有なものとみなした。既知物質の同定（混合物における既知の生物の迅速な同定）は、当業者に知られている多くの方法を用いて行うことができる。
この調査結果は、図３Ａ〜３Ｃに示されている。図３Ａ〜３Ｃにおいて「方法Ａ」として示されているデータは、種子を処理するのに用いない細胞懸濁液を伴う非ハイスループットな方法を表している。「方法Ｂ」として示されているデータは、いずれかの方法Ｂ２を用いて得られた複合データを表している。見て取れるように、このアプローチを用いて、種子処理後も生存している菌として、複数の芽胞形成種の細菌が同定されたと同時に、この方法では、「非生存菌」を除去するのに成功し、種子処理耐性微生物が濃縮された。予想外にも、多様な非芽胞形成微生物群も同定された。
実施例１Ａ及び１Ｂの結果を合わせ、図４Ａ〜Ｃに示してある。図２Ａ〜Ｃにおいて「方法Ａ」として示されているデータは、種子を処理するのに用いない細胞懸濁液を伴う非ハイスループットな方法を表している。「方法Ｂ」として示されているデータは、実施例１Ａ及び１Ｂのデータを組み合わせたものを表している。見て取れるように、このアプローチを用いて、種子処理後も生存している菌として、複数の芽胞形成種の細菌が同定されたと同時に、この方法では、「非生存菌」を除去するのに成功し、種子処理耐性微生物が濃縮された。予想外にも、多様な非芽胞形成微生物群も同定された。
実施例２
この実施例では、微生物細胞懸濁液を原料物質として使用する。この細胞懸濁液は、微生物群に存在するすべての細菌、真菌及び古細菌（土壌、植物組織及び水域で見られるものが挙げられるが、これらに限らない）を反映した抽出物であることも（方法Ｂ１）、または、細胞懸濁液は、人工的に作製した微生物プールであって、事前に培養した微生物プールに由来することもできる（方法Ｂ２）。
この試料５０ｍＬ以上を５００ＲＣＦで遠心分離して、ペレット状の破片にする。上清をデカントで試料から移しとり、フィルターに通して、破片をさらに除去する。続いて、ろ過した上清を１６０００ＲＣＦで２０分遠心分離して、主に細胞物質からなるペレットを作製する。上清を破棄し、得られたペレットを１ｍＬの滅菌ＰＢＳに再懸濁して、細胞画分を濃縮する。人工的に作製した培養微生物細胞懸濁液では、この濃縮及びろ過工程は不要としてもよい。
得られた細胞懸濁液１ｍＬを１．５ｍＬのマイクロ遠心チューブに移して、その試料を１４０００ＲＣＦで１０分回転させることによって、さらに濃縮する。８５０μＬの上清を除去し、ペレットを残りの上清に再懸濁する。化学種子処理剤で処理した４０個のトウモロコシ種子が５０ｍＬの滅菌遠心チューブに入ったもの（以下では「種子」という）に、上記の高濃縮試料１００μＬを加える。この種子と濃縮細胞懸濁液を激しく振とうし、３０秒ボルテックスする。続いて、６５μＬのＰｒｅｃｉｓｅ Ｓｅｅｄ Ｆｉｎｉｓｈｅｒ（登録商標）１００６を水で１／５に希釈したものを種子／細胞懸濁液混合物に加え、３０秒振とう／ボルテックスして、均一に覆われるようにする。微生物懸濁液で処理したトウモロコシ種子を滅菌皿に移し、バイオセーフティーキャビネット内で２０分乾燥させる。
処理して乾燥した種子を室温（約２２℃）で一晩保管してから、１つの種子を、５０ｍＬ遠心チューブに入った１０ｍＬの滅菌ＰＢＳに加え、種子上に含まれた物質の１／１０希釈液を作製する。この複製試料を３０秒ボルテックスし、１時間置いてから、再び３０秒ボルテックスして、種子に付着したすべての細胞が除去されるようにする。この懸濁液をさらに１／１０及び１／１００に希釈し、それぞれの微生物種子処理剤の複製及び希釈系を１００μＬ、１５０ｍｍペトリ皿内のＲ２Ａ寒天増殖培地に塗抹し、室温でインキュベートする。１〜１０日のうちに、寒天上に微生物コロニーが現れ、これらのコロニーを釣菌して、１５０μＬのＲ２Ｂ＋ＹＴ増殖培地がウェルに入った９６ウェルマイクロタイタープレートに入れる。
混濁に達したら、９６ウェルプレートに入った個々の培養液をＰＣＲにかけ、単離株の分類学的同定を行う。これらの微生物株を「種子処理生存菌」とみなす。続いて、下記のとおりに、これらの株に対して、既知物質の同定を行う。ログ期待値による複数配列比較（ＭＵＳＣＬＥ）によるアラインメントと、系統樹を用いて、配列を互いに比較して、保存のために、その試料に特有であった株のみを選択する。概して、遺伝子の長さにわたって互いに０．５％以上異なる配列は、特有なものとみなす。既知物質の同定（混合物における既知の生物の迅速な同定）は、当業者に知られている多くの方法を用いて行うことができる。
実施例３
単離した微生物細胞懸濁液の、上記のような精製及び濃縮を改良して、もっと少ない微生物を回収できる。例えば、超音波処理した根抽出物は希釈されており、大量の植物／土壌破片を含む。その結果、単離の際に、種子処理剤に組み込まれる初期ＣＦＵ数は少なく、これにより、種子処理後に回収できる微生物の数に影響が及び得る。しかし、より大きい植物の複数の複製物から、微生物細胞懸濁液プールを作製すると、単離する環境微生物の数を増やすことができる。続いて、密度勾配遠心分離を用いて、より大規模なこの微生物細胞懸濁液を精製して、種子処理後に、環境から単離した野生微生物集団中の少ない微生物の回収率を向上できる。

Claims (26)

  1. 種子処理耐性微生物のハイスループットな取得方法であって、
    ａ）複数の微生物を取得するステップと、
    ｂ）前記複数の微生物を種子に塗布するステップであって、ここで種子処理剤が、前記複数の微生物を塗布する前、塗布するのと同時、または塗布した後に、前記種子に塗布される、ステップと、
    ｃ）前記複数の微生物の１つ以上の構成微生物が生存不能になる条件で、前記種子を保存するステップと、
    ｄ）前記種子を溶液に入れるステップと、
    ｅ）前記溶液から、前記ステップ（ｃ）の後に生き残っている少なくとも第１の種子処理耐性微生物を同定するステップと、
    を含む前記方法。
  2. 前記ステップ（ａ）が、生長環境から得た前記複数の微生物を作物植物と関連付けることを含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記ステップ（ａ）が、前記複数の微生物から微生物細胞懸濁液を作製することを含む、請求項１に記載の方法。
  4. 前記ステップ（ｂ）の前に、前記微生物細胞懸濁液を濃縮することを含む、請求項３に記載の方法。
  5. 前記ステップ（ｅ）が、前記溶液を増殖培地に播いて、前記微生物を含むコロニーを選択することを含む、請求項１に記載の方法。
  6. 前記ステップ（ａ）が、
    ｉ）微生物細胞懸濁液を作製することと、
    ｉｉ）前記微生物細胞懸濁液を増殖培地に播くことと、
    ｉｉｉ）微生物コロニーを選択することと、
    ｉｖ）ステップｉｉｉ）で選択した前記微生物コロニーの構成微生物を組み合わせることによって、前記複数の微生物を作製することと、
    を含む、請求項１に記載の方法。
  7. 前記生長環境が、農地の土壌を含む、請求項２に記載の方法。
  8. 前記生長環境が、非農業環境である、請求項２に記載の方法。
  9. ｆ）作物植物種の播種時、前記微生物が付与できる少なくとも第１の有益な形質を同定するステップ
    をさらに含む、請求項１に記載の方法。
  10. 前記種子が、前記作物植物種と同じ種の種子である、請求項９に記載の方法。
  11. 前記複数の微生物が、作物植物の根圏、内部圏、葉圏またはこれらのいずれかを組み合わせた場所から得たものである、請求項１に記載の方法。
  12. 前記微生物細胞懸濁液を作物植物の組織から得る、請求項３に記載の方法。
  13. 前記作物植物が双子葉植物である、請求項２に記載の方法。
  14. 前記双子葉植物を、アルファルファ、マメ、ビート、ブロッコリー、キャベツ、ニンジン、カリフラワー、セロリ、白菜、綿、キュウリ、ナス、アマ、レタス、ルピナス、メロン、エンドウ、コショウ、ラッカセイ、ジャガイモ、パンプキン、ダイコン、セイヨウアブラナ、ホウレンソウ、ダイズ、カボチャ、テンサイ、ヒマワリ、トマト及びスイカからなる群から選択する、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記作物植物が単子葉植物である、請求項２に記載の方法。
  16. 前記単子葉植物を、オオムギ、トウモロコシ、リーキ、タマネギ、イネ、モロコシ、スイートコーン、コムギ、ライムギ、アワ、サトウキビ、オートムギ、ライコムギ、アメリカクサキビ及び芝草からなる群から選択する、請求項１５に記載の方法。
  17. 生き残っている前記微生物が、グラム陰性の非芽胞形成細菌である、請求項１に記載の方法。
  18. 生き残っている前記微生物が、グラム陽性の芽胞形成または非芽胞形成細菌である、請求項１に記載の方法。
  19. 前記種子を約１時間〜約１年間保存する、請求項１に記載の方法。
  20. 前記種子を周囲温度で保存する、請求項１に記載の方法。
  21. 前記種子を、周囲温度よりも高いかもしくは低い温度で保存する、請求項１に記載の方法。
  22. 前記種子処理剤が、前記複数の有益な微生物を含む、請求項１に記載の方法。
  23. 前記種子処理剤が、化学系有害生物防除剤を含む、請求項１に記載の方法。
  24. 前記複数の微生物を塗布する前または後に、前記種子処理剤を前記種子に塗布する、請求項１に記載の方法。
  25. 前記種子処理剤が、殺真菌剤、殺生物剤、殺虫剤、除草剤、殺ダニ剤、殺鼠剤、殺線虫剤、植物生長調節剤及び微量栄養素、またはこれらを組み合わせたものを含む、請求項１に記載の方法。
  26. 前記種子処理剤が、ポリマー、着色剤、結合剤、固着剤、付着剤、分散剤、界面活性剤、栄養剤、コーティング剤、湿潤剤、緩衝剤、多糖及び充填剤、またはこれらを組み合わせたものを含む、請求項１に記載の方法。
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