JP6855496B2 - 抗ｃｄ２２抗体−メイタンシンコンジュゲートおよびその使用方法 - Google Patents

抗ｃｄ２２抗体−メイタンシンコンジュゲートおよびその使用方法 Download PDF

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Description

本発明は抗ＣＤ２２抗体−メイタンシンコンジュゲートおよびその使用方法に関する。
関連出願に対する相互参照
本出願は、２０１５年１１月９日付け出願の米国仮特許出願第６２／２５２，９８５号（その開示の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）の、３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）に基づく利益を主張するものである。
タンパク質−小分子治療用コンジュゲートの分野は著しく進歩しており、臨床的に有益な多数の薬物が提供されており、今後数年間に更に多数の薬物が提供されると期待されている。タンパク質コンジュゲート治療剤は、例えば、特異性、多数の機能および比較的低いオフターゲット活性により、副作用の減少につながる幾つかの利点をもたらしうる。タンパク質の化学修飾は、それらをより強力にし、安定にし、または多様にすることにより、これらの利点を拡張しうる。
タンパク質上で翻訳後修飾を生成させ、操作するためには、多数の標準的な化学的変換が一般に用いられる。特定のアミノ酸の側鎖を選択的に修飾しうる多数の方法が存在する。例えば、カルボン酸側鎖（アスパルタートおよびグルタマート）は水溶性カルボジイミド試薬での最初の活性化により標的化可能であり、ついでアミンとの反応に付されうる。同様に、リジンは活性化エステルまたはイソチオシアナートの使用により標的化可能であり、システインチオールはマレイミドおよびα−ハロカルボニルで標的化されうる。
化学的に改変されたタンパク質治療剤または試薬の創製における１つの重要な課題は、そのようなタンパク質を生物学的に活性で均一な形態で製造することである。ポリペプチドへの薬物または検出可能標識のコンジュゲート化（結合）は制御が困難であるため、結合薬物分子の数および化学的コンジュゲート化の位置が異なるコンジュゲートの不均一混合物が生じる。場合によっては、ポリペプチド上の化学結合の正確かつ選択的な形成を導くために有機合成化学の手段を用いて、コンジュゲート化の部位および／またはポリペプチドにコンジュゲート化される薬物もしくは検出可能標識を制御することが望ましいであろう。
概括
本開示は抗ＣＤ２２抗体−メイタンシンコンジュゲート構造体を提供する。本開示はそのようなコンジュゲートの製造方法およびその使用方法も含む。
本開示の幾つかの態様は、式（Ｉ）：
Figure 0006855496
［式中、
ＺはＣＲ４またはＮである；
Ｒ１は水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される；
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択され、あるいはＲ２とＲ３とは、所望により、環状に連結されて、５または６員ヘテロシクリルを形成していてもよい；
各Ｒ４は、独立して、水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される；
Ｌは、−（Ｔ１−Ｖ１）ａ−（Ｔ２−Ｖ２）ｂ−（Ｔ３−Ｖ３）ｃ−（Ｔ４−Ｖ４）ｄ−を含むリンカーであり、ここで、ａ、ｂ、ｃおよびｄは、それぞれ独立して、０または１であり、ａ、ｂ、ｃおよびｄの合計は１〜４である；
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３およびＴ４は、それぞれ独立して、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（ＥＤＡ）ｗ、（ＰＥＧ）ｎ、（ＡＡ）ｐ、−（ＣＲ１３ＯＨ）ｈ−、ピペリジン−４−アミノ（４ＡＰ）、アセタール基、ヒドラジン、ジスルフィドおよびエステルから選択され、ここで、ＥＤＡはエチレンジアミン部分であり、ＰＥＧはポリエチレングリコールまたは修飾ポリエチレングリコールであり、ＡＡはアミノ酸残基であり、ｗは１〜２０の整数であり、ｎは１〜３０の整数であり、ｐは１〜２０の整数であり、ｈは１〜１２の整数である；
Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３およびＶ４は、それぞれ独立して、共有結合、−ＣＯ−、−ＮＲ１５−、−ＮＲ１５（ＣＨ２）ｑ−、−ＮＲ１５（Ｃ６Ｈ４）−、−ＣＯＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＳＯ２−および−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−からなる群から選択され、ここで、ｑは１〜６の整数である；
各Ｒ１３は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリールおよび置換アリールから選択される；
各Ｒ１５は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される；
Ｗ１はメイタンシノイドである；ならびに
Ｗ２は抗ＣＤ２２抗体である］の、少なくとも１つの修飾アミノ酸残基を含むコンジュゲートを含む。
ある実施形態においては、
Ｔ１は、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルおよび置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルから選択される；
Ｔ２、Ｔ３およびＴ４は、それぞれ独立して、（ＥＤＡ）ｗ、（ＰＥＧ）ｎ、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（ＡＡ）ｐ、−（ＣＲ１３ＯＨ）ｈ−、ピペリジン−４−アミノ（４ＡＰ）、アセタール基、ヒドラジンおよびエステルから選択される；ならびに
Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３およびＶ４は、それぞれ独立して、共有結合、−ＣＯ−、−ＮＲ１５−、−ＮＲ１５（ＣＨ２）ｑ−、−ＮＲ１５（Ｃ６Ｈ４）−、−ＣＯＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＳＯ２−および−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−からなる群から選択される；
ここで、
（ＰＥＧ）ｎは
Figure 0006855496
であり、ここで、ｎは１〜３０の整数である；
ＥＤＡは、以下の構造：
Figure 0006855496
を有するエチレンジアミン部分であり、ここで、ｙは１〜６の整数であり、ｒは０または１である；
ピペリジン−４−アミノは、
Figure 0006855496
である；
各Ｒ１２およびＲ１５は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、ポリエチレングリコール部分、アリールおよび置換アリールから選択され、ここで、任意の２つの隣接したＲ１２基は環状に連結されて、ピペラジニル環を形成していてもよい；ならびに
Ｒ１３は、水素、アルキル、置換アルキル、アリールおよび置換アリールから選択される。
ある実施形態においては、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３およびＴ４ならびにＶ１、Ｖ２、Ｖ３およびＶ４は以下の表から選択される。
Figure 0006855496
Figure 0006855496
ある実施形態においては、Ｌは以下の構造の１つから選択される。
Figure 0006855496
Figure 0006855496
Figure 0006855496
前記式中、
各ｆは、独立して、０または１〜１２の整数である；
各ｙは、独立して、０または１〜２０の整数である；
各ｎは、独立して、０または１〜３０の整数である；
各ｐは、独立して、０または１〜２０の整数である；
各ｈは、独立して、０または１〜１２の整数である；
各Ｒは、独立して、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルである；ならびに
各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アミノ酸の側鎖基、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルである。
ある実施形態においては、メイタンシノイドは式：
Figure 0006855496
のものである。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は４ＡＰであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ３は−ＣＯ−であり、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、リンカーＬは以下の構造：
Figure 0006855496
（式中、各ｆは、独立して、１〜１２の整数であり、ｎは１〜３０の整数である）を含む。
ある実施形態においては、抗ＣＤ２２抗体は、図８Ａ〜８Ｃに示されているＣＤ２２アミノ酸配列のアミノ酸１〜８４７（アミノ酸１−８４７）、アミノ酸１〜７５９（アミノ酸１−７５９）、アミノ酸１〜７５１（アミノ酸１−７５１）またはアミノ酸１〜６７０（アミノ酸１−６７０）におけるエピトープに結合する。
ある実施形態においては、抗ＣＤ２２抗体は式（ＩＩ）：
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
（式中、
ＦＧｌｙ’は式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
Ｚ２０はプロリンまたはアラニン残基である；
Ｚ３０は塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸である；
Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸でありうるが、該配列が該コンジュゲートのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；ならびに
Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である）
の配列を含む。
ある実施形態においては、該配列はＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲである。
ある実施形態においては、Ｚ３０はＲ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、ＩおよびＰから選択され、Ｘ１はＬ、Ｍ、ＳおよびＶから選択され、Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧおよびＣから選択される。
ある実施形態においては、該修飾アミノ酸残基は抗ＣＤ２２抗体の重鎖定常領域のＣ末端に位置する。
ある実施形態においては、該重鎖定常領域は式（ＩＩ）：
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
（式中、
ＦＧｌｙ’は式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
Ｚ２０はプロリンまたはアラニン残基である；
Ｚ３０は塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸である；
Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸でありうるが、該配列が該コンジュゲートのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；ならびに
Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である）
の配列を含み、ここで、該配列はアミノ酸配列ＳＬＳＬＳＰＧのＣ末端に存在する。
ある実施形態においては、該重鎖定常領域は配列ＳＰＧＳＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＧＳを含む。
ある実施形態においては、Ｚ３０はＲ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、ＩおよびＰから選択され、Ｘ１はＬ、Ｍ、ＳおよびＶから選択され、Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧおよびＣから選択される。
ある実施形態においては、該修飾アミノ酸残基は抗ＣＤ２２抗体の軽鎖定常領域内に位置する。
ある実施形態においては、該軽鎖定常領域は式（ＩＩ）：
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
（式中、
ＦＧｌｙ’は式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
Ｚ２０はプロリンまたはアラニン残基である；
Ｚ３０は塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸である；
Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸でありうるが、該配列が該コンジュゲートのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；ならびに
Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である）
の配列を含み、ここで、該配列は配列ＫＶＤＮＡＬのＣ末端に存在し、および／または配列ＱＳＧＮＳＱのＮ末端に存在する。
ある実施形態においては、該軽鎖定常領域は配列ＫＶＤＮＡＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＱＳＧＮＳＱを含む。
ある実施形態においては、Ｚ３０はＲ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、ＩおよびＰから選択され、Ｘ１はＬ、Ｍ、ＳおよびＶから選択され、Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧおよびＣから選択される。
ある実施形態においては、該修飾アミノ酸残基は抗ＣＤ２２抗体の重鎖ＣＨ１領域内に位置する。
ある実施形態においては、該重鎖ＣＨ１領域は式（ＩＩ）：
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
（式中、
ＦＧｌｙ’は式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
Ｚ２０はプロリンまたはアラニン残基である；
Ｚ３０は塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸である；
Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸でありうるが、該配列が該コンジュゲートのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；ならびに
Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である）
の配列を含み、ここで、該配列は配列ＳＷＮＳＧＡのＣ末端に存在し、および／または配列ＧＶＨＴＦＰのＮ末端に存在する。
ある実施形態においては、該重鎖ＣＨ１領域は配列ＳＷＮＳＧＡＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＧＶＨＴＦＰを含む。
ある実施形態においては、Ｚ３０はＲ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、ＩおよびＰから選択され、Ｘ１はＬ、Ｍ、ＳおよびＶから選択され、Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧおよびＣから選択される。
ある実施形態においては、該修飾アミノ酸残基は抗ＣＤ２２抗体の重鎖ＣＨ２領域内に位置する。
ある実施形態においては、該修飾アミノ酸残基は抗ＣＤ２２抗体の重鎖ＣＨ３領域内に位置する。
本開示の幾つかの態様は、本明細書に記載されているコンジュゲートと医薬上許容される賦形剤とを含む医薬組成物を含む。
本開示の幾つかの態様は、本明細書に記載されているコンジュゲートの有効量を対象に投与することを含む方法を含む。
本開示の幾つかの態様は対象における癌の治療方法を含む。該方法は、本明細書に記載されているコンジュゲートを含む医薬組成物の治療的有効量を対象に投与することを含み、ここで、該投与は、対象における癌を治療するのに有効である。
本開示の幾つかの態様は、対象における標的部位へ薬物を送達する方法を含む。該方法は、本明細書に記載されているコンジュゲートを含む医薬組成物を対象に投与することを含み、ここで、該投与は、対象における標的部位において該コンジュゲートから薬物の治療的有効量を放出するのに有効である。
定義
以下の用語は、特に示されていない限り、以下の意味を有する。定義されていない用語はいずれも、当技術分野において認識されている意味を有する。
「アルキル」は、１〜１０個の炭素原子、例えば１〜６個の炭素原子、または１〜５個、または１〜４個、または１〜３個の炭素原子を有する１価飽和脂肪族ヒドロカルビル基を意味する。この語は、例えば直鎖および分岐ヒドロカルビル基、例えばメチル（ＣＨ３−）、エチル（ＣＨ３ＣＨ２−）、ｎ−プロピル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−）、イソプロピル（（ＣＨ３）２ＣＨ−）、ｎ−ブチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソブチル（（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２−）、ｓｅｃ−ブチル（（ＣＨ３）（ＣＨ３ＣＨ２）ＣＨ−）、ｔ−ブチル（（ＣＨ３）３Ｃ−）、ｎ−ペンチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）およびネオペンチル（（ＣＨ３）３ＣＣＨ２−）を含む。
「置換アルキル」なる語は、アルキル鎖内の１以上の炭素原子（Ｃ１炭素原子以外）が、所望により、ヘテロ原子、例えば−Ｏ−、−Ｎ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−（ここで、ｎは０〜２である）、−ＮＲ−（ここで、Ｒは水素またはアルキルである）などで置換されていてもよく、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリールおよび−ＮＲａＲｂからなる群から選択される１〜５個の置換基を有する（ここで、Ｒ’およびＲ’’は同一であっても異なっていてもよく、水素、所望により置換されていてもよいアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリールおよび複素環から選択される）、本明細書に定義されているアルキル基を意味する。
「アルキレン」は、−Ｏ−、−ＮＲ１０−、−ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−から選択される１以上の基が所望により介在していてもよい、好ましくは１〜６個、より好ましくは１〜３個の炭素原子を有する直鎖または分岐２価脂肪族ヒドロカルビル基を意味する。この語は、例えば、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソプロピレン（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−）、（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２−）、（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−）、（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）、（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）などを含む。
「置換アルキレン」は、後記の「置換」の定義において炭素に関して記載されている置換基で１〜３個の水素が置換されているアルキレン基を意味する。
「アルカン」なる語は、本明細書に定義されているアルキル基およびアルキレン基を意味する。
「アルキルアミノアルキル」、「アルキルアミノアルケニル」および「アルキルアミノアルキニル」なる語はＲ’ＮＨＲ’’−なる基を意味し、ここで、Ｒ’は、本明細書に定義されているアルキル基であり、Ｒ’’は、本明細書に定義されているアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン基である。
「アルカリール」または「アルアルキル」なる語は−アルキレン−アリールおよび−置換アルキレン−アリールなる基を意味し、ここで、アルキレン、置換アルキレンおよびアリールは本明細書に定義されている。
「アルコキシ」は−Ｏ−アルキルなる基を意味し、ここで、アルキルは本明細書に定義されているとおりである。アルコキシは、例えばメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシなどを含む。「アルコキシ」なる語はアルケニル−Ｏ−、シクロアルキル−Ｏ−、シクロアルケニル−Ｏ−およびアルキニル−Ｏ−なる基をも意味し、ここで、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニルおよびアルキニルは本明細書に定義されているとおりである。
「置換アルコキシ」なる語は置換アルキル−Ｏ−、置換アルケニル−Ｏ−、置換シクロアルキル−Ｏ−、置換シクロアルケニル−Ｏ−および置換アルキニル−Ｏ−なる基を意味し、ここで、置換アルキル、置換アルケニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニルおよび置換アルキニルは本明細書に定義されているとおりである。
「アルコキシアミノ」なる語は−ＮＨ−アルコキシなる基を意味し、ここで、アルコキシは本明細書に定義されている。
「ハロアルコキシ」なる語は、アルキル基上の１以上の水素原子がハロ基で置換されたアルキル−Ｏ−基を意味し、例えばトリフルオロメトキシなどのような基を含む。
「ハロアルキル」なる語は、アルキル基上の１以上の水素原子がハロ基で置換された前記置換アルキル基を意味する。そのような基の例には、限定的なものではないが、フルオロアルキル基、例えばトリフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロエチルなどが含まれる。
「アルキルアルコキシ」なる語は、−アルキレン−Ｏ−アルキル、アルキレン−Ｏ−置換アルキル、置換アルキレン−Ｏ−アルキルおよび置換アルキレン−Ｏ−置換アルキルなる基を意味し、ここで、アルキル、置換アルキル、アルキレンおよび置換アルキレンは本明細書に定義されているとおりである。
「アルキルチオアルコキシ」なる語は、−アルキレン−Ｓ−アルキル、アルキレン−Ｓ−置換アルキル、置換アルキレン−Ｓ−アルキルおよび置換アルキレン−Ｓ−置換アルキルなる基を意味し、ここで、アルキル、置換アルキル、アルキレンおよび置換アルキレンは本明細書に定義されているとおりである。
「アルケニル」は、２〜６個の炭素原子、好ましくは２〜４個の炭素原子を有し、少なくとも１個、好ましくは１〜２個の二重結合不飽和部位を有する直鎖または分岐ヒドロカルビル基を意味する。この語は、例えば、ビ−ビニル、アリルおよびブタ−３−エン−１−イルを含む。この語にはシスおよびトランス異性体またはこれらの異性体の混合物が含まれる。
「置換アルケニル」なる語は、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される１〜５個の置換基または１〜３個の置換基を有する本明細書に定義されているアルケニル基を意味する。
「アルキニル」は、２〜６個の炭素原子、好ましくは２〜３個の炭素原子を有し、少なくとも１個、好ましくは１〜２個の三重結合不飽和部位を有する直鎖または分枝１価ヒドロカルビル基を意味する。そのようなアルキニル基の例には、アセチレニル（Ｃ≡ＣＨ）およびプロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）が含まれる。
「置換アルキニル」なる語は、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される１〜５個の置換基または１〜３個の置換基を有する本明細書に定義されているアルキニル基を意味する。
「アルキニルオキシ」は、アルキニルが本明細書に定義されているとおりである−Ｏ−アルキニル基を意味する。アルキニルオキシには、例えばエチニルオキシ、プロピニルオキシなどが含まれる。
「アシル」は、ＨＣ（Ｏ）−、アルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換アルキル−Ｃ（Ｏ）−、アルケニル−Ｃ（Ｏ）−、置換アルケニル−Ｃ（Ｏ）−、アルキニル−Ｃ（Ｏ）−、置換アルキニル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルケニル−Ｃ（Ｏ）−、置換シクロアルケニル−Ｃ（Ｏ）−、アリール−Ｃ（Ｏ）−、置換アリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、置換ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）−および置換ヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）−を意味し、ここで、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環（基）および置換複素環（基）は本明細書に定義されているとおりである。例えば、アシルは「アセチル」基ＣＨ３Ｃ（Ｏ）−を含む。
「アシルアミノ」は−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アルキル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換アルキル、ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）シクロアルキル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換シクロアルキル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）シクロアルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換シクロアルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換アルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アルキニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換アルキニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換アリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）ヘテロアリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換ヘテロアリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）複素環および−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換複素環なる基を意味し、ここで、Ｒ２０は水素またはアルキルであり、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環（基）および置換複素環（基）は本明細書に定義されているとおりである。
「アミノカルボニル」または「アミノアシル」なる語は−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２１Ｒ２２なる基を意味し、ここで、Ｒ２１およびＲ２２は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環（基）および置換複素環（基）からなる群から選択され、所望により、Ｒ２１およびＲ２２は、それらに結合している窒素と一緒に連結されて複素環基または置換複素環基を形成していてもよく、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環（基）および置換複素環（基）は本明細書に定義されているとおりである。
「アミノカルボニルアミノ」は−ＮＲ２１Ｃ（Ｏ）ＮＲ２２Ｒ２３なる基を意味し、ここで、Ｒ２１、Ｒ２２およびＲ２３は、独立して、水素、アルキル、アリールまたはシクロアルキルから選択され、あるいは２つのＲ基が連結されてヘテロシクリル基を形成している。
「アルコキシカルボニルアミノ」なる語は−ＮＲＣ（Ｏ）ＯＲなる基を意味し、ここで、各Ｒは、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルであり、ここで、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルは本明細書に定義されているとおりである。
「アシルオキシ」なる語は、アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換アリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−およびヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−なる基を意味し、ここで、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルは本明細書に定義されているとおりである。
「アミノスルホニル」は−ＳＯ２ＮＲ２１Ｒ２２なる基を意味し、ここで、Ｒ２１およびＲ２２は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環基、置換複素環基からなる群から選択され、所望により、Ｒ２１およびＲ２２は、それらに結合している窒素と一緒に連結されて複素環基または置換複素環基を形成していてもよく、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環（基）および置換複素環（基）は本明細書に定義されているとおりである。
「スルホニルアミノ」は−ＮＲ２１ＳＯ２Ｒ２２なる基を意味し、ここで、Ｒ２１およびＲ２２は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環基および置換複素環基からなる群から選択され、所望により、Ｒ２１およびＲ２２は、それらに結合している窒素と一緒に連結されて複素環基または置換複素環基を形成していてもよく、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環（基）および置換複素環（基）は本明細書に定義されているとおりである。
「アリール」または「Ａｒ」は、単環（例えば、フェニル基に存在するもの）または複数の縮合環を有する環系（そのような芳香環系の例にはナフチル、アントリルおよびインダニルが含まれる）を有する６〜１８個の炭素原子の１価芳香族炭素環基を意味し、該縮合環は芳香族であってもなくてもよいが、ただし、結合点は芳香環の原子を介したものである。この語は、例えば、例として、フェニルおよびナフチルを含む。アリール置換基に関する定義によって特段に制限されない限り、そのようなアリール基は、所望により、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリールおよびトリハロメチルから選択される１〜５個の置換基または１〜３個の置換基で置換されていてもよい。
「アリールオキシ」は−Ｏ−アリール（ここで、アリールは本明細書に定義されているとおりである）なる基を意味し、例えばフェノキシ、ナフトキシなどを含み、所望により置換されていてもよいアリール基（同様に本明細書に定義されているとおりである）を含む。
「アミノ」は−ＮＨ２なる基を意味する。
「置換アミノ」なる語は−ＮＲＲなる基を意味し、ここで、各Ｒは、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルケニル、置換アルケニル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルからなる群から選択され、ただし、少なくとも１つのＲは水素ではない。
「アジド」なる語は−Ｎ３なる基を意味する。
「カルボキシル」、「カルボキシ」または「カルボキシラート」は−ＣＯ２Ｈまたはその塩を意味する。
「カルボキシエステル」または「カルボキシエステル」、または「カルボキシアルキル」または「カルボキシアルキル」なる語は−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換シクロアルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−複素環および−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換複素環なる基を意味し、ここで、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環（基）および置換複素環（基）は本明細書に定義されているとおりである。
「（カルボキシエステル）オキシ」または「カルボナート」は−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換シクロアルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換シクロアルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換ヘテロアリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−複素環および−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換複素環なる基を意味し、ここで、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環（基）および置換複素環（基）は本明細書に定義されているとおりである。
「シアノ」または「ニトリル」は−ＣＮなる基を意味する。
「シクロアルキル」は、縮合、架橋およびスピロ環系を含む単環式または多環式環を有する３〜１０個の炭素原子の環状アルキル基を意味する。適切なシクロアルキル基の例には、例えば、アダマンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチルなどが含まれる。そのようなシクロアルキル基には、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチルなどのような単環構造、またはアダマンタニルなどのような多環構造が含まれる。
「置換シクロアルキル」なる語は、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される１〜５個の置換基または１〜３個の置換基を有するシクロアルキル基を意味する。
「シクロアルケニル」は、単環または複数の環を有し、少なくとも１つの二重結合、好ましくは１〜２個の二重結合を有する、３〜１０個の炭素原子の非芳香族環状アルキル基を意味する。
「置換シクロアルケニル」なる語は、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ケト、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される１〜５個の置換基または１〜３個の置換基を有するシクロアルケニル基を意味する。
「シクロアルキニル」は、単環または多環を有し、少なくとも１つの三重結合を有する、５〜１０個の炭素原子の非芳香族シクロアルキル基を意味する。
「シクロアルコキシ」は−Ｏ−シクロアルキルを意味する。
「シクロアルケニルオキシ」は−Ｏ−シクロアルケニルを意味する。
「ハロ」または「ハロゲン」はフルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを意味する。
「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」は−ＯＨなる基を意味する。
「ヘテロアリール」は、１〜１５個の炭素原子、例えば１〜１０個の炭素原子と、環内の酸素、窒素および硫黄からなる群から選択される１〜１０個のヘテロ原子との芳香族基を意味する。そのようなヘテロアリール基は単環（例えば、ピリジニル、イミダゾリルまたはフリルなど）または縮合多環（例えば、インドリジニル、キノリニル、ベンゾフラン、ベンゾイミダゾリルまたはベンゾチエニルのような基におけるもの）を環系内に有することが可能であり、ここで、環系内の少なくとも１つの環は芳香族である。原子価要件を満たすために、そのようなヘテロアリール環内の任意のヘテロ原子はＨまたは置換基（例えば、アルキル基または本明細書に記載されている他の置換基）に結合していても結合していなくてもよい。ある実施形態においては、ヘテロアリール基の窒素および／または硫黄環原子は、所望により、Ｎ−オキシド（Ｎ→Ｏ）、スルフィニルまたはスルホニル部分を与えるように酸化されていてもよい。この語は、例えば、ピリジニル、ピロリル、インドリル、チオフェニルおよびフラニルを含む。ヘテロアリール置換基に関する定義によって特段に制限されない限り、そのようなヘテロアリール基は、所望により、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールおよびトリハロメチルから選択される１〜５個の置換基または１〜３個の置換基で置換されていてもよい。
「ヘテロアルアルキル」なる語は−アルキレン−ヘテロアリールなる基を意味し、ここで、アルキレンおよびヘテロアリールは本明細書に定義されている。この語は、例えばピリジルメチル、ピリジルエチル、インドリルメチルなどを含む。
「ヘテロアリールオキシ」は−Ｏ−ヘテロアリールを意味する。
「複素環」、「複素環式（複素環基）」、「ヘテロシクロアルキル」および「ヘテロシクリル」は、１〜１０個のヘテロ原子を含む３〜２０個の環原子を有する、縮合架橋およびスピロ環系を含む単環または縮合多環を有する飽和または不飽和基を意味する。これらの環原子は窒素、硫黄または酸素から選択され、ここで、縮合環系においては、環の１以上はシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであることが可能であり、ただし、結合点は非芳香環を介したものである。ある実施形態においては、ヘテロアリール基の窒素および／または硫黄原子は、所望により、Ｎ−オキシド、−Ｓ（Ｏ）−または−ＳＯ２−部分を与えるように酸化されていてもよい。原子価要件を満たすために、そのような複素環内の任意のヘテロ原子は１以上のＨまたは１以上の置換基（例えば、アルキル基または本明細書に記載されている他の置換基）に結合していても結合していなくてもよい。
複素環およびヘテロアリールの例には、限定的なものではないが、アゼチジン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、ジヒドロインドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソオキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドリン、フタルイミド、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン、チアゾール、チアゾリジン、チオフェン、ベンゾ［ｂ］チオフェン、モルホリニル、チオモルホリニル（チアモルホリニルとも称される）、１，１−ジオキソチオモルホリニル、ピペリジニル、ピロリジン、テトラヒドロフラニルなどが含まれる。
複素環置換基に関する定義によって特段に制限されない限り、そのような複素環基は、所望により、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリールおよび縮合複素環から選択される１〜５個または１〜３個の置換基で置換されていてもよい。
「ヘテロシクリルオキシ」は−Ｏ−ヘテロシクリルなる語を意味する。
「ヘテロシクリルチオ」なる語は複素環−Ｓ−なる基を意味する。
「ヘテロシクレン」なる語は、本明細書に定義されている複素環から形成されるジラジカル基を意味する。
「ヒドロキシアミノ」なる語は−ＮＨＯＨなる基を意味する。
「ニトロ」は−ＮＯ２なる基を意味する。
「オキソ」は（＝Ｏ）なる原子を意味する。
「スルホニル」はＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−置換アルキル、ＳＯ２−アルケニル、ＳＯ２−置換アルケニル、ＳＯ２−シクロアルキル、ＳＯ２−置換シクロアルキル、ＳＯ２−シクロアルケニル、ＳＯ２−置換シクロアルケニル、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−置換アリール、ＳＯ２−ヘテロアリール、ＳＯ２−置換ヘテロアリール、ＳＯ２−複素環およびＳＯ２−置換複素環なる基を意味し、ここで、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環（基）および置換複素環（基）は本明細書に定義されているとおりである。スルホニルは、例えば、メチル−ＳＯ２−、フェニル−ＳＯ２−および４−メチルフェニル−ＳＯ２−を含む。
「スルホニルオキシ」は−ＯＳＯ２−アルキル、ＯＳＯ２−置換アルキル、ＯＳＯ２−アルケニル、ＯＳＯ２−置換アルケニル、ＯＳＯ２−シクロアルキル、ＯＳＯ２−置換シクロアルキル、ＯＳＯ２−シクロアルケニル、ＯＳＯ２−置換シクロアルケニル、ＯＳＯ２−アリール、ＯＳＯ２−置換アリール、ＯＳＯ２−ヘテロアリール、ＯＳＯ２−置換ヘテロアリール、ＯＳＯ２−複素環およびＯＳＯ２−置換複素環なる基を意味し、ここで、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環（基）および置換複素環（基）は本明細書に定義されているとおりである。
「アミノカルボニルオキシ」なる語は−ＯＣ（Ｏ）ＮＲＲなる基を意味し、ここで、各Ｒは、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環基であり、ここで、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリールおよび複素環基は本明細書に定義されているとおりである。
「チオール」は−ＳＨなる基を意味する。
「チオキソ」または「チオケト」なる語は（＝Ｓ）なる原子を意味する。
「アルキルチオ」または「チオアルコキシ」なる語は−Ｓ−アルキルなる基を意味し、ここで、アルキルは本明細書に定義されているとおりである。ある実施形態においては、該硫黄は−Ｓ（Ｏ）−へと酸化されうる。該スルホキシドは１以上の立体異性体として存在しうる。
「置換チオアルコキシ」なる語は−Ｓ−置換アルキルなる基を意味する。
「チオアリールオキシ」なる語はアリール−Ｓ−なる基を意味し、ここで、アリール基は本明細書に定義されているとおりであり、同様に本明細書に定義されている所望により置換されていてもよいアリール基を含む。
「チオヘテロアリールオキシ」なる語はヘテロアリール−Ｓ−なる基を意味し、ここで、ヘテロアリール基は本明細書に定義されているとおりであり、同様に本明細書に定義されている所望により置換されていてもよいアリール基を含む。
「チオヘテロシクロオキシ」なる語はヘテロシクリル−Ｓ−なる基を意味し、ここで、ヘテロシクリル基は本明細書に定義されているとおりであり、同様に本明細書に定義されている所望により置換されていてもよいヘテロシクリル基を含む。
本明細書の開示に加えて、特定の基またはラジカルを修飾するために用いられた場合の「置換（されている）」なる語は、その特定の基またはラジカルの、１以上の水素原子が、それぞれ、互いに独立して、後記で定義される同一の又は異なる置換基で置換されていることを意味する。
本明細書において個々の語に関して開示されている基に加えて、特定の基またはラジカルにおける飽和炭素原子上の１以上の水素を置換するための置換基（単一炭素上の任意の２つの水素は＝Ｏ、＝ＮＲ７０、＝Ｎ−ＯＲ７０、＝Ｎ２または＝Ｓで置換されうる）は、特に示されていない限り、−Ｒ６０、ハロ、＝Ｏ、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｒ７０、−ＳＯ２Ｏ−Ｍ＋、−ＳＯ２ＯＲ７０、−ＯＳＯ２Ｒ７０、−ＯＳＯ２Ｏ−Ｍ＋、−ＯＳＯ２ＯＲ７０、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｍ＋、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−Ｍ＋、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０ＣＯ２ −Ｍ＋、−ＮＲ７０ＣＯ２Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０および−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、ここで、Ｒ６０は、所望により置換されていてもよいアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、各Ｒ７０は、独立して、水素またはＲ６０であり、各Ｒ８０は、独立して、Ｒ７０であるか、あるいは２つのＲ８０が、それらが結合している窒素原子と一緒になって、５、６または７員ヘテロシクロアルキル（これは、所望により、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から選択される１〜４個の同一の又は異なる追加的ヘテロ原子を含んでいてもよく、ここで、Ｎは−ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキル置換基を有しうる）を形成しており、各Ｍ＋は、正味の単一正電荷を有する対イオンである。各Ｍ＋は、独立して、例えばアルカリイオン、例えばＫ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋；アンモニウムイオン、例えば＋Ｎ（Ｒ６０）４；またはアルカリ土類イオン、例えば［Ｃａ２＋］０．５、［Ｍｇ２＋］０．５または［Ｂａ２＋］０．５（下付きの「０．５」は、そのような２価アルカリ土類イオンの対イオンの一方が本発明の化合物のイオン化形態であることが可能であり、他方の典型的な対イオン、例えば塩化物イオンであることが可能であること、あるいは本明細書に開示されている２つのイオン化化合物がそのような２価アルカリ土類イオンの対イオンとして働きうること、あるいは本発明の二重イオン化化合物がそのような２価アルカリ土類イオンの対イオンとして働きうることを意味する）でありうる。具体例として、−ＮＲ８０Ｒ８０は−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、Ｎ−ピロリジニル、Ｎ−ピペラジニル、４Ｎ−メチル−ピペラジン−１−イルおよびＮ−モルホリニルを含むと意図される。
本明細書の開示に加えて、「置換」アルケン、アルキン、アリールおよびヘテロアリール基における不飽和炭素原子上の水素の置換基は、特に示されていない限り、−Ｒ６０、ハロ、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−Ｓ−Ｍ＋、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｒ７０、−ＳＯ３ −Ｍ＋、−ＳＯ３Ｒ７０、−ＯＳＯ２Ｒ７０、−ＯＳＯ３ −Ｍ＋、−ＯＳＯ３Ｒ７０、−ＰＯ３ −２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−ＣＯ２ −Ｍ＋、−ＣＯ２Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣＯ２ −Ｍ＋、−ＯＣＯ２Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０ＣＯ２ −Ｍ＋、−ＮＲ７０ＣＯ２Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０および−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、ここで、Ｒ６０、Ｒ７０、Ｒ８０およびＭ＋は既に定義されているとおりであるが、ただし、置換アルケンまたはアルキンの場合、置換基は−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０または−Ｓ−Ｍ＋ではない。
本明細書において個々の語に関して開示されている基に加えて、「置換」ヘテロアルキルおよびシクロヘテロアルキル基における窒素原子上の水素の置換基は、特に示されていない限り、−Ｒ６０、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−Ｓ−Ｍ＋、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ７０、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−Ｍ＋、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ７０、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ７０、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−Ｍ＋、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ７０、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）（ＯＲ７０）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０および−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、ここで、Ｒ６０、Ｒ７０、Ｒ８０およびＭ＋は既に定義されているとおりである。
本明細書の開示に加えて、ある実施形態においては、置換されている基は、１、２、３または４個の置換基、１、２または３個の置換基、１または２個の置換基、あるいは１個の置換基を有する。
前記で定義された全ての置換基においては、それ自体に対する更なる置換基を有する置換基を定めることにより得られるポリマー（例えば、置換アリール基により更に置換されたなどの置換アリール基でそれ自体が置換された置換基としての置換アリール基を有する置換アリール）は本発明には含まれないと意図されると理解される。そのような場合、そのような置換の最大数は３である。例えば、本発明において特に想定される置換アリール基の連続的置換は置換アリール−（置換アリール）−置換アリールに限定される。
特に示されていない限り、本明細書において明示的に定義されていない置換基の命名は、官能基の末端部分、およびそれに続く、結合点側の隣接官能基を明示することによってなされる。例えば、置換基「アリールアルキルオキシカルボニル」は（アリール）−（アルキル）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−なる基を意味する。
１以上の置換基を含有する本明細書に開示されている基のいずれに関しても、勿論、そのような基は、立体的に不可能および／または合成的に実施不可能ないずれの置換または置換パターンをも含まないと理解される。または、対象化合物は、これらの化合物の置換から生じる全ての立体化学異性体を含む。
「医薬上許容される塩」なる語は、患者、例えば哺乳動物への投与に関して許容される塩（与えられた投与計画に関して許容されうる哺乳動物安全性を示す対イオンを含有する塩）を意味する。そのような塩は、医薬上許容される無機または有機塩基、および医薬上許容される無機または有機酸から誘導されうる。「医薬上許容される塩」は、当技術分野でよく知られた種々の有機および無機対イオンから誘導される、化合物の医薬上許容される塩を意味し、単なる例示に過ぎないが、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムなど包含し、該分子が塩基性官能基を含有する場合には、有機または無機酸の塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ギ酸塩、酒石酸塩、ベシル酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩などを包含する。
「その塩」なる語は、酸のプロトンが金属カチオンまたは有機カチオンなどのようなカチオンにより置換された場合に形成される化合物を意味する。適用可能な場合には、該塩は医薬上許容される塩である。尤も、患者への投与を意図したものでない中間体化合物の塩には、これは要求されない。例えば、本化合物の塩には、該化合物が無機または有機酸によってプロトン化されてカチオンを形成し、該無機または有機酸の共役塩基が該塩のアニオン成分として存在するものが含まれる。
「溶媒和物」は、溶媒分子と溶質の分子またはイオンとの組合せによって形成される複合体を意味する。溶媒は有機化合物、無機化合物または両方の混合物でありうる。溶媒の幾つかの例には、限定的なものではないが、メタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシドおよび水が含まれる。溶媒が水である場合、形成される溶媒和物は水和物である。
「立体異性体」は、同じ原子結合性を有するが空間における異なる原子配置を有する化合物を意味する。立体異性体には、シス−トランス異性体、ＥおよびＺ異性体、エナンチオマーならびにジアステレオマーが含まれる。
「互変異性体」は、原子の電子結合および／またはプロトンの位置においてのみ異なる、分子の交互性（ａｌｔｅｒｎａｔｅ）形態を意味し、例えば、エノール−ケトおよびイミン−エナミン互変異性体、または−Ｎ＝Ｃ（Ｈ）−ＮＨ−環原子配置を含有するヘテロアリール基、例えばピラゾール、イミダゾール、ベンズイミダゾール、トリアゾールおよびテトラゾールの互変異性体を包含する。他の互変異性環原子配置も可能であると当業者は認識するであろう。
「またはその塩もしくは溶媒和物もしくは立体異性体」なる語は、塩、溶媒和物および立体異性体の順列（ｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎ）の全て、例えば、対象化合物の立体異性体の医薬上許容される塩の溶媒和物を含むと意図されると理解される。
「薬学的有効量」および「治療的有効量」は、特定されている障害もしくは疾患またはその症状の１以上を治療するのに、および／または該疾患もしくは障害の発生を予防するのに十分な化合物の量を意味する。腫瘍原性増殖性障害に関しては、薬学的または治療的有効量は、とりわけ、腫瘍の退縮を引き起こし、または腫瘍の増殖速度を減少させるのに十分な量を含む。
「患者」はヒトおよび非ヒト対象、特に哺乳動物対象を意味する。
本明細書中で用いる「治療する」または「治療」なる語は、患者、例えば哺乳動物（特にヒト）において疾患または医学的状態を治療すること、またはそのような治療を意味し、（ａ）疾患または医学的状態の発生の予防、例えば、対象における予防的処置、（ｂ）疾患または医学的状態の改善、例えば、患者における疾患または医学的状態の排除または退縮、（ｃ）例えば疾患または医学的状態の進展を減速または停止させることによる、疾患または医学的状態の抑制、あるいは（ｄ）患者における疾患または医学的状態の症状の緩和を含む。
「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」なる語は、任意長のアミノ酸の重合体形態を示すために本明細書において互換的に用いられる。特に示されていない限り、「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、遺伝的にコードされている及びコードされていないアミノ酸、化学的または生化学的に修飾または誘導体化されたアミノ酸、ならびに修飾ペプチド骨格を有するポリペプチドを含みうる。この語は融合タンパク質を含み、限定的なものではないが、異種アミノ酸配列を含有する融合タンパク質、異種（非相同）および同種（相同）リーダー配列を含有する融合体、（例えば、組換え細菌宿主細胞における産生を促進するための）少なくとも１つのＮ末端メチオニン残基を含有するタンパク質、免疫学的にタグ化されたタンパク質などを含む。
「天然アミノ酸配列」または「親アミノ酸配列」は、修飾アミノ酸残基を含有させるための修飾の前のポリペプチドのアミノ酸配列を示すために本明細書において互換的に用いられる。
「アミノ酸類似体」、「非天然アミノ酸」などの語は互換的に用いられることが可能であり、天然に存在するタンパク質において一般に見出される１以上のアミノ酸と構造および／または全体的形状において類似したアミノ酸様化合物を含む（例えば、ＡｌａまたはＡ、ＣｙｓまたはＣ、ＡｓｐまたはＤ、ＧｌｕまたはＥ、ＰｈｅまたはＦ、ＧｌｙまたはＧ、ＨｉｓまたはＨ、ＩｌｅまたはＩ、ＬｙｓまたはＫ、ＬｅｕまたはＬ、ＭｅｔまたはＭ、ＡｓｎまたはＮ、ＰｒｏまたはＰ、ＧｌｎまたはＱ、ＡｒｇまたはＲ、ＳｅｒまたはＳ、ＴｈｒまたはＴ、ＶａｌまたはＶ、ＴｒｐまたはＷ、ＴｙｒまたはＹ）。アミノ酸類似体には、修飾側鎖または主鎖を有する天然アミノ酸も含まれる。アミノ酸類似体にはまた、天然に存在するＤ体と同じ立体化学を有するアミノ酸類似体、およびアミノ酸類似体のＬ体を含む。幾つかの例においては、アミノ酸類似体は１以上の天然アミノ酸の主鎖（バックボーン）構造および／または側鎖構造を共有し、差異は分子内の１以上の修飾基である。このような修飾には、限定的なものではないが、原子（例えば、Ｎ）の、関連原子（例えば、Ｓ）による置換、基（例えば、メチルまたはヒドロキシルなど）または原子（例えば、ＣｌまたはＢｒなど）の付加、基の欠失、共有結合の置換（単結合の、二重結合による置換など）、またはそれらの組合せが含まれる。例えば、アミノ酸類似体は、α−ヒドロキシ酸およびα−アミノ酸などが含まれうる。
「アミノ酸側鎖」または「アミノ酸の側鎖」などの語は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸およびアミノ酸類似体を含むアミノ酸残基のα−炭素に結合した置換基を示すために用いられうる。アミノ酸側鎖には、本明細書に記載されている修飾アミノ酸および／またはコンジュゲートの文脈で記載されているアミノ酸側鎖も含まれうる。
「炭水化物」などの語は、単糖、二糖、オリゴ糖および多糖の単量体単位および／または重合体を示すために用いられうる。糖なる語は、より小さな炭水化物、例えば単糖、二糖を示すために用いられうる。「炭水化物誘導体」なる語は、関心のある炭水化物の官能基の１以上が置換されている（任意の簡便な置換基により置換されている）または修飾されている（任意の簡便な化学法を用いて別の基に変換されている）または存在しない（例えば、除去されている、またはＨにより置換されている）、化合物を含む。種々の炭水化物および炭水化物誘導体が入手可能であり、対象化合物およびコンジュゲートにおける使用のために適合化されうる。
「抗体」なる語は最も広い意味で用いられ、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体および多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト化抗体、一本鎖抗体、キメラ抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント）などを含む。抗体は標的抗原に結合しうる（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。標的抗原は、抗体の１以上の可変領域により形成される相補性決定領域（ＣＤＲ）により認識される、エピトープとも称される１以上の結合部位を有しうる。
「天然抗体」なる語は、抗体の重鎖および軽鎖が多細胞生物の免疫系により産生されペア形成している抗体を意味する。脾臓、リンパ節、骨髄および血清は、天然抗体を産生する組織の例である。例えば、抗原で免疫された最初の動物から単離される抗体産生細胞により産生される抗体は天然抗体である。
「ヒト化抗体」または「ヒト化免疫グロブリン」なる語は、ヒト抗体からの対応位置のアミノ酸で置換された１以上のアミノ酸（例えば、フレームワーク領域、定常領域またはＣＤＲ）を含有する非ヒト（例えば、マウスまたはウサギ）抗体を意味する。一般に、ヒト化抗体は、同じ抗体の非ヒト化形態と比較して低減した、ヒト宿主における免疫応答を生成する。抗体は、当技術分野で公知の種々の技術を用いてヒト化されることが可能であり、そのような技術には、例えば、ＣＤＲグラフティング（ＥＰ ２３９，４００；ＰＣＴ公開ＷＯ ９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号および第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたはリサーフェシング（ＥＰ ５９２，１０６；ＥＰ ５１９，５９６；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５−８１４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａら，ＰＮＡＳ ９１：９６９−９７３（１９９４））、および鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）が含まれる。ある実施形態においては、抗原結合に重要なフレームワーク残基を特定するたの、ＣＤＲおよびフレームワーク残基の相互作用のモデリング、ならびに特定の位置における異常フレームワーク残基を特定するための配列比較により、フレームワーク置換を特定する（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）を参照されたい）。本発明における使用が想定される抗体をヒト化するための追加的な方法は米国特許第５，７５０，０７８号、第５，５０２，１６７号、第５，７０５，１５４号、第５，７７０，４０３号、第５，６９８，４１７号、第５，６９３，４９３号、第５，５５８，８６４号、第４，９３５，４９６号および第４，８１６，５６７号ならびにＰＣＴ公開ＷＯ ９８／４５３３１およびＷＯ ９８／４５３３２に記載されている。特定の実施形態においては、対象ウサギ抗体は、ＵＳ２００４００８６９７９およびＵＳ２００５００３３０３１に記載されている方法に従いヒト化されうる。したがって、前記抗体は、当技術分野でよく知られた方法を用いてヒト化されうる。
「キメラ抗体」なる語は、異なる種に属する抗体可変領域および定常領域遺伝子から、典型的には遺伝子工学によって軽鎖および重鎖遺伝子が構築された抗体を意味する。例えば、マウスモノクローナル抗体由来の遺伝子の可変セグメントはガンマ１およびガンマ３のようなヒト定常セグメントに連結されうる。治療用キメラ抗体の一例は、マウス抗体由来の可変または抗原結合ドメインと、ヒト抗体由来の定常またはエフェクタードメインとから構成されるハイブリッドタンパク質であるが、他の哺乳類種由来のドメインも使用されうる。
免疫グロブリンポリペプチド免疫グロブリン軽または重鎖可変領域は、３つの超可変領域（「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とも称される）が間に介在しているフレームワーク領域（ＦＲ）から構成される。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は決定されている（“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，Ｅ．Ｋａｂａｔら，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９９１を参照されたい）。抗体のフレームワーク領域は構成軽鎖および重鎖の組合せフレームワーク領域であり、ＣＤＲを配置し整列させる働きをする。ＣＤＲは主に、抗原のエピトープへの結合をもたらす。
本開示の全体を通して、免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖における残基の番号付けは、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）（これを参照により明示的に本明細書に組み入れることとする）におけるものと同様である。
「親Ｉｇポリペプチド」は、本明細書に記載されているアルデヒドタグ付き定常領域を欠くアミノ酸配列を含むポリペプチドである。親ポリペプチドは天然配列定常領域を含むことが可能であり、あるいは既存アミノ酸配列修飾（例えば、付加、欠失および／または置換）を含有する定常領域を含むことが可能である。
Ｉｇポリペプチドとの関連において、「定常領域」なる語は当技術分野において十分に理解されており、Ｉｇ重鎖またはＩｇ軽鎖のＣ末端領域を意味する。Ｉｇ重鎖定常領域はＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン（および重鎖がμまたはε重鎖である場合にはＣＨ４ドメイン）を含む。天然Ｉｇ重鎖においては、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３（および存在する場合にはＣＨ４）ドメインは重鎖可変（ＶＨ）領域の直後（Ｃ末端）から始まり、それぞれ約１００アミノ酸〜約１３０アミノ酸の長さを有する。天然Ｉｇ軽鎖においては、定常領域は軽鎖可変（ＶＬ）領域の直後（Ｃ末端）から始まり、約１００アミノ酸〜１２０アミノ酸の長さを有する。
本明細書中で用いる「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」なる語は、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出される不連続抗原結合部位を意味すると意図される。ＣＤＲはＫａｂａｔら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６（１９７７）；Ｋａｂａｔら，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）；およびＭａｃＣａｌｌｕｍら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６）に記載されており、ここで、その定義は、互いに比較された場合のアミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。それでも、抗体またはそのグラフト化抗体もしくは変異体のＣＤＲを示すためのいずれの定義の適用も、本明細書において定義され用いられている用語の範囲内であると意図される。前記引用文献のそれぞれにより定義されているＣＤＲを含むアミノ酸残基を、比較として以下の表１に示す。
Figure 0006855496
ポリペプチド、ペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列に関して用いる「遺伝的にコード可能な」は、該アミノ酸配列が、該アミノ酸配列をコードする核酸の転写および翻訳により産生されうるアミノ酸残基から構成されていることを意味し、ここで、転写および／または翻訳は、細胞において、または無細胞インビトロ転写／翻訳系において生じうる。
「制御配列」なる語は、特定の発現系（例えば、哺乳類細胞、細菌細胞、無細胞合成など）において、機能的に連結されたコード配列の発現を促進するＤＮＡ配列を意味する。原核生物系に適した制御配列には、例えば、プロモーター、所望により、オペレーター配列、およびリボソーム結合部位が含まれる。真核細胞系はプロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを利用しうる。
核酸が「機能的に連結」されていると言えるのは、それが別の核酸配列に対して機能的な関係で配置されている場合である。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡがポリペプチドのＤＮＡに機能的に連結されていると言えるのは、それが、該ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合であり、プロモーターまたはエンハンサーがコード配列に機能的に連結されていると言えるのは、それが該配列の転写に影響を及ぼす場合であり、あるいはリボソーム結合部位がコード配列に機能的に連結されていると言えるのは、翻訳の開始を促進するようにそれが位置している場合である。一般に、「機能的に連結（されている）」は、連結されているそれらのＤＮＡ配列が連続的であり、分泌リーダーの場合には、連続的であり、かつ、リーディングフレーム内にあることを意味する。連結はライゲーションまたは増幅反応により達成される。配列を連結するために、通常の慣例に従い、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが使用されうる。
本明細書中で用いる「発現カセット」なる語は、（例えば、関心のある構築物内への連結に適した制限部位の使用により、または関心のある構築物内もしくは宿主細胞ゲノム内への相同組換えにより）核酸内に挿入されうる核酸（通常はＤＮＡ）のセグメントを意味する。一般に、核酸セグメントは、関心のあるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、カセットおよび制限部位は、転写および翻訳のための適切なリーディングフレームでのカセットの挿入を容易にするように設計される。発現カセットは、宿主細胞における関心ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現を促進するエレメントをも含みうる。これらのエレメントには、限定的なものではないが、プロモーター、最小プロモーター、エンハンサー、応答エレメント、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列などが含まれる。
本明細書中で用いる「単離（された）」なる語は、関心のある化合物が、該化合物が天然で存在する環境とは異なる環境中に存在すること示すと意図される。「単離（された）」は、化合物が、関心のある化合物に関して実質的に富化したサンプル内に存在すること、および／または関心のある化合物が部分的もしくは実質的に精製されていることを含む意である。
本明細書中で用いる「実質的に精製（された）」なる語は、化合物が、その天然環境から実質的に取り出されており、それに天然で付随している他の成分から少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または９８％以上取り出されている（ｆｒｅｅ）ことを意味する。
「生理的条件」なる語は、生細胞に適合した条件、例えば、生細胞に適合した温度、ｐＨ、塩分などの主に水性の条件を含むと意図される。
「反応相手」は、別の反応相手と特異的に反応して反応生成物を生成する分子または分子部分を意味する。典型的な反応相手には、スルファターゼモチーフおよびホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）のシステインまたはセリンが含まれ、これは、該モチーフにおいてシステインまたはセリンの代わりにホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）を含有する変換アルデヒドタグの反応生成物を生成するように反応する。他の典型的な反応相手には、変換アルデヒドタグのｆＧｌｙ残基のアルデヒド（例えば、反応性アルデヒド基）および「アルデヒド反応性反応相手」が含まれ、これはアルデヒド反応性基および関心のある部分を含み、修飾ｇＧｌｙ残基を介して修飾ポリペプチドにコンジュゲート化された関心のある部分を有する修飾アルデヒドタグ付きポリペプチドの反応生成物を生成するように反応する。
「Ｎ末端」は、遊離アミン基を有するポリペプチドの末端アミノ酸残基を意味し、非Ｎ末端アミノ酸残基におけるアミン基は通常、ポリペプチドの共有結合バックボーンの一部を形成する。
「Ｃ末端」は、遊離カルボキシル基を有するポリペプチドの末端アミノ酸残基を意味し、非Ｃ末端アミノ酸残基におけるカルボキシル基は通常、ポリペプチドの共有結合バックボーンの一部を形成する。
ポリペプチドまたはポリペプチドのアミノ酸配列に関して用いる「内部部位」は、Ｎ末端またはＣ末端には存在しない、該ポリペプチドの領域を意味する。
本発明をより詳細に説明する前に、本発明は、記載されている特定の態様に限定されるものではなく、したがって、勿論、変動しうると理解されるべきである。また、本明細書中で用いられる用語は、特定の態様を説明することを目的としたものであるに過ぎず、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、該用語は限定的なものではないと理解されるべきである。
値の範囲が示されている場合、その範囲の上限と下限との間の、文脈に明らかに矛盾しない限り下限の単位の１０分の１までの各介在値、およびその示されている範囲内の任意の他の示されている又は介在する値が本発明に含まれると理解される。これらの、より小さい範囲の、上限および下限は、独立して、より小さい範囲内に含まれることが可能であり、示されている範囲内のいずれかの特に除外される限界がありうることを前提として、同様に本発明に含まれる。示されている範囲がそれらの限界の一方または両方を含む場合、それらの含まれる限界の一方または両方を除外する範囲も本発明に含まれる。
本発明の或る特徴は、明瞭化のために別々の実施形態の文脈で記載されているが、単一実施形態において組合されて提供されることも可能であると理解される。逆に、本発明の種々の特徴は、簡潔化のために単一実施形態の文脈で記載されているが、別々に又は任意の適当な部分的組合せ（サブコンビネーション）として提供されることも可能である。本発明に関する実施形態の、全ての組合せは、そのような組合せが、例えば安定化合物（すなわち、製造、単離、特徴づけ、および生物活性に関する試験が可能な化合物）である化合物である発明内容を含む限りにおいて、各個の組合せが個々に且つ明示的に本明細書に開示されている場合と同様に、本発明に特に含まれ、本明細書に開示されている。また、種々の実施形態およびそれらの要素（例えば、そのような変形形態を記載する実施形態において挙げられている化学基の要素）の、全ての部分的組合せも、各個の部分的組合せが個々に且つ明示的に本明細書に開示されている場合と同様に、本発明に特に含まれ、本明細書に開示されている。
特に示されていない限り、本明細書中で用いる全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されているのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似した又は等価な任意の方法および材料も本発明の実施または試験において使用されうるが、以下においては好ましい方法および材料を記載する。本明細書中に挙げられている全ての刊行物を、該刊行物が引用されている対象である方法および／または材料を開示し記載するために、参照により本明細書に組み入れることとする。
本明細書および添付の特許請求の範囲で用いる単数形は、文脈に明らかに矛盾しない限り、複数対象物を含むことに注意すべきである。更に、特許請求の範囲は、任意の随意的（すなわち、所望により含まれていてもよい）要素を除くように書かれうることに注意すべきである。したがって、この陳述は、特許請求の範囲の要素の列挙に関する「専ら」、「だけ」などのような排他的用語の使用または「消極的」な限定の使用のための先行的基礎として働くと意図される。
本発明の或る特徴は、明瞭化のために別々の実施形態の文脈で記載されているが、単一実施形態において組合されて提供されることも可能であると理解される。逆に、本発明の種々の特徴は、簡潔化のために単一実施形態の文脈で記載されているが、別々に又は任意の適当な部分的組合せ（サブコンビネーション）として提供されることも可能である。
本明細書に記載されている刊行物は本出願の出願日の前のそれらの開示のために記載されているに過ぎない。本明細書におけるいずれのものも、本発明が先行発明としてそのような刊行物に先行する権利を有さないと認めるものと解釈されるべきではない。更に、示されている公開日は、独立して証明されることを要しうる実際の公開日とは異なりうる。
詳細な説明
本開示は抗ＣＤ２２抗体−メイタンシンコンジュゲート構造体を提供する。本開示はまた、そのようなコンジュゲートの製造方法およびその使用方法も含む。それぞれの実施形態は以下の節において更に詳細に説明される。
抗体−薬物コンジュゲート
本開示はコンジュゲート、例えば抗体−薬物コンジュゲートを提供する。「コンジュゲート」は、第１部分（例えば、抗体）が第２部分（例えば、薬物）に安定に結合しているものを意味する。例えば、メイタンシンコンジュゲートは、別の部分（例えば、抗体）に安定に結合しているメイタンシン（例えば、メイタンシン活性物質部分）を含む。「安定に結合（している）」は、ある部分が標準条件下で別の部分または構造に結合していることを意味する。ある実施形態においては、第１部分と第２部分とは１以上の共有結合により互いに結合している。
ある実施形態においては、該コンジュゲートは、第２部分にコンジュゲート化されたポリペプチドを含むポリペプチドコンジュゲートである。ある実施形態においては、ポリペプチドにコンジュゲート化される部分は、関心のある種々の部分のいずれか、例えば、検出可能標識、薬物、水溶性ポリマー、または膜もしくは表面への該ポリペプチドの固定化のための部分（これらに限定されるものではない）でありうる。ある実施形態においては、該コンジュゲートはメイタンシンコンジュゲートであり、この場合、ポリペプチドはメイタンシンまたはメイタンシン活性物質部分にコンジュゲート化されている。「メイタンシン」、「メイタンシン部分」、「メイタンシン活性物質部分」および「メイタンシノイド」はメイタンシンならびにその類似体および誘導体、ならびに薬学的に活性なメイタンシン部分および／またはその一部を意味する。ポリペプチドにコンジュゲート化されるメイタンシンは、種々のメイタンシノイド部分のいずれか、例えば、本明細書に記載されているメイタンシンならびにその類似体および誘導体（これらに限定されるものではない）でありうる。
関心のある部分は、ポリペプチドの任意の所望の部位において、ポリペプチドにコンジュゲート化されうる。したがって、本開示は、例えば、ポリペプチドのＣ末端またはＣ末端付近の部位においてコンジュゲート化された部分を有する修飾ポリペプチドを提供する。他の例には、ポリペプチドのＮ末端またはＮ末端付近の位置においてコンジュゲート化された部分を有する修飾ポリペプチドが含まれる。具体例には、ポリペプチドのＣ末端とＮ末端との間の位置（例えば、ポリペプチドの内部部位）においてコンジュゲート化された部分を有する修飾ポリペプチドも含まれる。修飾ポリペプチドが２以上の部分にコンジュゲート化されている場合、前記のものの組合せも可能である。
ある実施形態においては、本開示のコンジュゲートは、アミノ酸残基のα−炭素においてポリペプチドのアミノ酸残基にコンジュゲート化されたメイタンシンを含む。換言すれば、メイタンシンコンジュゲートは、ポリペプチドにおける１以上のアミノ酸残基の側鎖が、メイタンシンに結合するように（例えば、本明細書に記載されているリンカーを介してメイタンシンに結合するように）修飾されている、ポリペプチドを含む。例えば、メイタンシンコンジュゲートは、ポリペプチドにおける１以上のアミノ酸残基のα−炭素が、メイタンシンに結合するように（例えば、本明細書に記載されているリンカーを介してメイタンシンに結合するように）修飾されている、ポリペプチドを含む。
本開示の実施形態は、１以上の部分、例えば２個の部分、３個の部分、４個の部分、５個の部分、６個の部分、７個の部分、８個の部分、９個の部分または１０個またはそれ以上の部分にポリペプチドがコンジュゲート化されているコンジュゲートを含む。該部分は、ポリペプチドにおける１以上の部位においてポリペプチドにコンジュゲート化されうる。例えば、１以上の部分がポリペプチドの単一アミノ酸残基にコンジュゲート化されうる。幾つかの場合には、１つの部分がポリペプチドのアミノ酸残基にコンジュゲート化される。他の実施形態では、２つの部分がポリペプチドの同一アミノ酸残基にコンジュゲート化されうる。他の実施形態では、第１部分はポリペプチドの第１アミノ酸残基にコンジュゲート化され、第２部分はポリペプチドの第２アミノ酸残基にコンジュゲート化される。前記のものの組合せも可能であり、例えば、ポリペプチドは第１アミノ酸残基において第１部分にコンジュゲート化され、第２アミノ酸残基において２つの他の部分にコンジュゲート化される。他の組合せも可能であり、限定的なものではないが例えば、ポリペプチドは第１アミノ酸残基において第１および第２部分にコンジュゲート化され、第２アミノ酸残基において第３および第４部分にコンジュゲートされる、などである。
１以上の部分にコンジュゲート化される、１以上のポリペプチドアミノ酸残基は、天然に存在するアミノ酸、非天然アミノ酸またはそれらの組合せでありうる。例えば、コンジュゲートは、ポリペプチドの、天然に存在するアミノ酸残基にコンジュゲート化された部分を含みうる。他の例においては、コンジュゲートは、ポリペプチドの非天然アミノ酸残基にコンジュゲート化された部分を含みうる。１以上の部分が、前記の単一の天然または非天然アミノ酸残基においてポリペプチドにコンジュゲート化されうる。ポリペプチドにおける１以上の天然または非天然のアミノ酸残基が、本明細書に記載されている１以上の部分にコンジュゲート化されうる。例えば、ポリペプチドにおける２個（またはそれ以上）のアミノ酸残基（例えば、天然または非天然アミノ酸残基）がそれぞれ、１個または２個の部分にコンジュゲート化されて、ポリペプチドにおける複数の部位が修飾されうる。
本明細書に記載されているとおり、ポリペプチドは１以上の部分にコンジュゲート化されうる。ある実施形態においては、関心のある部分は化学的部分、例えば薬物または検出可能な標識である。例えば、薬物（例えば、メイタンシン）がポリペプチドにコンジュゲート化されることが可能であり、あるいは他の実施形態においては、検出可能な標識がポリペプチドにコンジュゲートされることが可能である。したがって、例えば、本開示の実施形態は、限定的なものではないが以下のものを含む：ポリペプチドと薬物とのコンジュゲート、ポリペプチドと検出可能な標識とのコンジュゲート、２以上の薬物とポリペプチドとのコンジュゲート、２以上の検出可能な標識とポリペプチドとのコンジュゲートなど。
ある実施形態においては、ポリペプチドおよび関心のある部分はカップリング部分を介してコンジュゲート化される。例えば、ポリペプチドおよび関心のある部分はそれぞれ、カップリング部分に結合（例えば、共有結合）することが可能であり、したがって、ポリペプチドおよび関心のある部分（例えば、メイタンシンのような薬物）を共にカップリング部分を介して間接的に結合させることが可能である。幾つかの場合においては、カップリング部分はヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニル化合物、またはヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニル化合物の誘導体を含む。例えば、関心のある部分（例えば、メイタンシン）をヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分を介してポリペプチドに結合させるための一般的スキームは、以下の一般的反応スキームにおいて示される。ヒドラジニル−インドリイルおよびヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分は、本明細書においては、それぞれ、ヒドラジノ−イソ−ピクテット−スペングラー（ＨＩＰＳ）カップリング部分およびアザ−ヒドラジノ−イソ−ピクテット−スペングラー（アザＨＩＰＳ）カップリング部分とも称される。
Figure 0006855496
前記反応スキームにおいて、Ｒは、ポリペプチドにコンジュゲート化される、関心のある部分（例えば、メイタンシン）である。前記反応スキームにおいて示されているとおり、２−ホルミルグリシン残基（ｆＧｌｙ）を含むポリペプチドを、カップリング部分（例えば、ヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分）を含むように修飾された薬物（例えば、メイタンシン）と反応させて、カップリング成分に結合したポリペプチドコンジュゲートを得、そのようにして、カップリング成分を介してメイタンシンをポリペプチドに結合させる。
本明細書に記載されているとおり、該部分は、限定的なものではないが例えば、検出可能な標識または薬物（例えば、メイタンシノイド）のような化学的部分などの種々の部分のいずれかであることが可能であり、Ｒ’およびＲ’’は、それぞれ独立して、任意の所望の置換基、限定的なものではないが例えば、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルでありうる。ＺはＣＲ１１、ＮＲ１２、Ｎ、ＯまたはＳであることが可能であり、ここで、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立して、前記のＲ’およびＲ’’に関して記載されている置換基のいずれかから選択される。
本明細書に記載されているコンジュゲートおよび化合物において示されているとおり、他のヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分も可能である。例えば、ヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分は、リンカーに結合（例えば、共有結合）するように修飾されうる。したがって、本開示の実施形態は、リンカーを介して薬物（例えば、メイタンシン）に結合したヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分を含む。ヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分を薬物（例えば、メイタンシン）に結合させうるリンカーの種々の実施形態は本明細書に詳細に記載されている。
ある実施形態においては、関心のある部分へのコンジュゲート化の前にポリペプチドが修飾され、関心のある部分にポリペプチドがコンジュゲート化されうる。ポリペプチドの修飾は、関心のある部分へのコンジュゲート化に適した１以上の反応性基を含有する修飾ポリペプチドを与えうる。幾つかの場合には、ポリペプチドは１以上のアミノ酸残基において修飾されて、関心のある部分（例えば、前記のヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分のようなカップリング部分を含む部分）に結合するのに適した１以上の反応性基を与えうる。例えば、ポリペプチドは、反応性アルデヒド基（例えば、反応性アルデヒド）を含むように修飾されうる。反応性アルデヒドは「アルデヒドタグ」または「ａｌｄ−タグ」に含まれることが可能であり、これらの語は、本明細書中で用いられる場合、２−ホルミルグリシン残基（本明細書においては「ＦＧｌｙ」と称される）を含有するようにホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用により変換された、スルファターゼモチーフ（例えば、Ｌ（Ｃ／Ｓ）ＴＰＳＲ）に由来するアミノ酸配列を意味する。ＦＧＥにより生成されるＦＧｌｙ残基は「ホルミルグリシン」とも称されうる。換言すれば、「アルデヒドタグ」なる語は、「変換された」スルファターゼモチーフ（すなわち、システインまたはセリン残基がＦＧＥの作用によりＦＧｌｙに変換された、スルファターゼモチーフ、例えばＬ（ＦＧｌｙ）ＴＰＳＲ）を含むアミノ酸配列を示すために本明細書中で用いられる。変換されるスルファターゼモチーフは、「未変換」スルファターゼモチーフ（すなわち、システインまたはセリン残基がＦＧＥの作用によりＦＧｌｙに未だ変換されていないが、変換可能である、スルファターゼモチーフ、例えば、配列Ｌ（Ｃ／Ｓ）ＴＰＳＲを有する未変換スルファターゼモチーフ）を含むアミノ酸配列に由来しうる。スルファターゼモチーフに対するホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用の文脈で用いられる「変換」は、スルファターゼモチーフにおけるシステインまたはセリン残基の、ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）残基への生化学的修飾（例えば、ＣｙｓからＦＧｌｙ、またはＳｅｒからＦＧｌｙ）を意味する。アルデヒドタグの追加的態様、および部位特異的タンパク質修飾におけるそれらの使用は、米国特許第７，９８５，７８３号および米国特許第８，７２９，２３２号（それらのそれぞれの開示を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている。
幾つかの場合においては、ＦＧｌｙ残基を含有する修飾ポリペプチドは、化合物（例えば、ヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分を含有する化合物）とのＦＧｌｙの反応により、関心のある部分にコンジュゲート化されうる。例えば、ＦＧｌｙ含有ポリペプチドを、ポリペプチドへの薬物のコンジュゲート化をもたらすのに適した条件下、反応相手を含有する薬物と接触させることが可能である。幾つかの場合においては、反応相手を含有する薬物は前記のヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分を含みうる。例えば、メイタンシンは、ヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分を含むように修飾されうる。幾つかの場合においては、メイタンシンはヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルに結合し、例えば、本明細書に詳細に記載されているとおり、リンカーを介してヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルに共有結合する。
ある実施形態においては、本開示のコンジュゲートは、少なくとも１つの修飾アミノ酸残基を有するポリペプチド（例えば抗体、例えば抗ＣＤ２２抗体）を含む。ポリペプチドの修飾アミノ酸残基は、前記のとおり、ヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分を含有する薬物（例えば、メイタンシン）にカップリング（結合）されうる。ある実施形態においては、ポリペプチド（例えば、抗ＣＤ２２抗体）の修飾アミノ酸残基は、前記のとおりにＦＧｌｙ残基に変換されたシステインまたはセリン残基から誘導されうる。ある実施形態においては、前記のヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分を含有する薬物にＦＧｌｙ残基をコンジュゲート化させて、本開示のコンジュゲートを得、ここで、薬物はヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分を介してポリペプチドにコンジュゲート化されている。本明細書中で用いるＦＧｌｙ’なる語は、関心のある部分（例えば、メイタンシノイドのような薬物）にカップリングされるポリペプチド（例えば、抗ＣＤ２２抗体）の修飾アミノ酸残基を意味する。
ある実施形態においては、該コンジュゲートは、本明細書に記載されている式（Ｉ）の、少なくとも１つの修飾アミノ酸残基を含む。例えば、該コンジュゲートは、式（Ｉ）の側鎖を有する少なくとも１つの修飾アミノ酸残基を含みうる。
Figure 0006855496
［式中、
ＺはＣＲ４またはＮである；
Ｒ１は水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される；
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択され、あるいはＲ２とＲ３とは、所望により、環状に連結されて、５または６員ヘテロシクリルを形成していてもよい；
各Ｒ４は、独立して、水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される；
Ｌは、−（Ｔ１−Ｖ１）ａ−（Ｔ２−Ｖ２）ｂ−（Ｔ３−Ｖ３）ｃ−（Ｔ４−Ｖ４）ｄ−を含むリンカーであり、ここで、ａ、ｂ、ｃおよびｄは、それぞれ独立して、０または１であり、ａ、ｂ、ｃおよびｄの合計は１〜４である；
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３およびＴ４は、それぞれ独立して、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（ＥＤＡ）ｗ、（ＰＥＧ）ｎ、（ＡＡ）ｐ、−（ＣＲ１３ＯＨ）ｈ−、ピペリジン−４−アミノ（４ＡＰ）、アセタール基、ヒドラジン、ジスルフィドおよびエステルから選択され、ここで、ＥＤＡはエチレンジアミン部分であり、ＰＥＧはポリエチレングリコールまたは修飾ポリエチレングリコールであり、ＡＡはアミノ酸残基であり、ｗは１〜２０の整数であり、ｎは１〜３０の整数であり、ｐは１〜２０の整数であり、ｈは１〜１２の整数である；
Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３およびＶ４は、それぞれ独立して、共有結合、−ＣＯ−、−ＮＲ１５−、−ＮＲ１５（ＣＨ２）ｑ−、−ＮＲ１５（Ｃ６Ｈ４）−、−ＣＯＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＳＯ２−および−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−からなる群から選択され、ここで、ｑは１〜６の整数である；
各Ｒ１３は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリールおよび置換アリールから選択される；
各Ｒ１５は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される；
Ｗ１はメイタンシノイドである；ならびに
Ｗ２は抗ＣＤ２２抗体である］。
ある実施形態においては、ＺはＣＲ４またはＮである。ある実施形態においては、ＺはＣＲ４である。ある実施形態においては、ＺはＮである。
ある実施形態においては、Ｒ１は水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される。ある実施形態においては、Ｒ１は水素である。ある実施形態においては、Ｒ１はアルキルまたは置換アルキル、例えば、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６置換アルキル、あるいはＣ１−４アルキルまたはＣ１−４置換アルキル、あるいはＣ１−３アルキルまたはＣ１−３置換アルキルである。ある実施形態においては、Ｒ１はアルケニルまたは置換アルケニル、例えば、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６置換アルケニル、あるいはＣ２−４アルケニルまたはＣ２−４置換アルケニル、あるいはＣ２−３アルケニルまたはＣ２−３置換アルケニルである。ある実施形態においては、Ｒ１はアルキニルまたは置換アルキニル、例えば、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６置換アルケニル、あるいはＣ２−４アルケニルまたはＣ２−４置換アルケニル、あるいはＣ２−３アルケニルまたはＣ２−３置換アルケニルである。ある実施形態においては、Ｒ１はアリールまたは置換アリール、例えば、Ｃ５−８アリールまたはＣ５−８置換アリール、例えば、Ｃ５アリールまたはＣ５置換アリール、あるいはＣ６アリールまたはＣ６置換アリールである。ある実施形態においては、Ｒ１はヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５−８ヘテロアリールまたはＣ５−８置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５ヘテロアリールまたはＣ５置換ヘテロアリール、あるいはＣ６ヘテロアリールまたはＣ６置換ヘテロアリールである。ある実施形態においては、Ｒ１はシクロアルキルまたは置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−８シクロアルキルまたはＣ３−８置換シクロアルキル、あるいはＣ３−６シクロアルキルまたはＣ３−６置換シクロアルキル、あるいはＣ３−５シクロアルキルまたはＣ３−５置換シクロアルキルである。ある実施形態においては、Ｒ１はヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−８ヘテロシクリルまたはＣ３−８置換ヘテロシクリル、あるいはＣ３−６ヘテロシクリルまたはＣ３−６置換ヘテロシクリル、あるいはＣ３−５ヘテロシクリルまたはＣ３−５置換ヘテロシクリルである。
ある実施形態においては、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択され、あるいはＲ２とＲ３とは、所望により、環状に連結されて、５または６員ヘテロシクリルを形成していてもよい。
ある実施形態においては、Ｒ２は水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される。ある実施形態においては、Ｒ２は水素である。ある実施形態においては、Ｒ２はアルキルまたは置換アルキル、例えば、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６置換アルキル、あるいはＣ１−４アルキルまたはＣ１−４置換アルキル、あるいはＣ１−３アルキルまたはＣ１−３置換アルキルである。ある実施形態においては、Ｒ２はアルケニルまたは置換アルケニル、例えば、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６置換アルケニル、あるいはＣ２−４アルケニルまたはＣ２−４置換アルケニル、あるいはＣ２−３アルケニルまたはＣ２−３置換アルケニルである。ある実施形態においては、Ｒ２はアルキニルまたは置換アルキニルである。ある実施形態においては、Ｒ２はアルコキシまたは置換アルコキシである。ある実施形態においては、Ｒ２はアミノまたは置換アミノである。ある実施形態においては、Ｒ２はカルボキシルまたはカルボキシルエステルである。ある実施形態においては、Ｒ２はアシルまたはアシルオキシである。ある実施形態においては、Ｒ２はアシルアミノまたはアミノアシルである。ある実施形態においては、Ｒ２はアルキルアミドまたは置換アルキルアミドである。ある実施形態においては、Ｒ２はスルホニルである。ある実施形態においては、Ｒ２はチオアルコキシまたは置換チオアルコキシである。ある実施形態においては、Ｒ２はアリールまたは置換アリール、例えば、Ｃ５−８アリールまたはＣ５−８置換アリール、例えば、Ｃ５アリールまたはＣ５置換アリール、あるいはＣ６アリールまたはＣ６置換アリールである。ある実施形態においては、Ｒ２はヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５−８ヘテロアリールまたはＣ５−８置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５ヘテロアリールまたはＣ５置換ヘテロアリール、あるいはＣ６ヘテロアリールまたはＣ６置換ヘテロアリールである。ある実施形態においては、Ｒ２はシクロアルキルまたは置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−８シクロアルキルまたはＣ３−８置換シクロアルキル、あるいはＣ３−６シクロアルキルまたはＣ３−６置換シクロアルキル、あるいはＣ３−５シクロアルキルまたはＣ３−５置換シクロアルキルである。ある実施形態においては、Ｒ２はヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−６ヘテロシクリルまたはＣ３−６置換ヘテロシクリル、あるいはＣ３−５ヘテロシクリルまたはＣ３−５置換ヘテロシクリルである。
ある実施形態においては、Ｒ３は水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される。ある実施形態においては、Ｒ３は水素である。ある実施形態においては、Ｒ３はアルキルまたは置換アルキル、例えば、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６置換アルキル、あるいはＣ１−４アルキルまたはＣ１−４置換アルキル、あるいはＣ１−３アルキルまたはＣ１−３置換アルキルである。ある実施形態においては、Ｒ３はアルケニルまたは置換アルケニル、例えば、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６置換アルケニル、あるいはＣ２−４アルケニルまたはＣ２−４置換アルケニル、あるいはＣ２−３アルケニルまたはＣ２−３置換アルケニルである。ある実施形態においては、Ｒ３はアルキニルまたは置換アルキニルである。ある実施形態においては、Ｒ３はアルコキシまたは置換アルコキシである。ある実施形態においては、Ｒ３はアミノまたは置換アミノである。ある実施形態においては、Ｒ３はカルボキシルまたはカルボキシルエステルである。ある実施形態においては、Ｒ３はアシルまたはアシルオキシである。ある実施形態においては、Ｒ３はアシルアミノまたはアミノアシルである。ある実施形態においては、Ｒ３はアルキルアミドまたは置換アルキルアミドである。ある実施形態においては、Ｒ３はスルホニルである。ある実施形態においては、Ｒ３はチオアルコキシまたは置換チオアルコキシである。ある実施形態においては、Ｒ３はアリールまたは置換アリール、例えば、Ｃ５−８アリールまたはＣ５−８置換アリール、例えば、Ｃ５アリールまたはＣ５置換アリール、あるいはＣ６アリールまたはＣ６置換アリールである。ある実施形態においては、Ｒ３はヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５−８ヘテロアリールまたはＣ５−８置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５ヘテロアリールまたはＣ５置換ヘテロアリール、あるいはＣ６ヘテロアリールまたはＣ６置換ヘテロアリールである。ある実施形態においては、Ｒ３はシクロアルキルまたは置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−８シクロアルキルまたはＣ３−８置換シクロアルキル、あるいはＣ３−６シクロアルキルまたはＣ３−６置換シクロアルキル、あるいはＣ３−５シクロアルキルまたはＣ３−５置換シクロアルキルである。ある実施形態においては、Ｒ３はヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−８ヘテロシクリルまたはＣ３−８置換ヘテロシクリル、Ｃ３−６ヘテロシクリルまたはＣ３−６置換ヘテロシクリル、あるいはＣ３−５ヘテロシクリルまたはＣ３−５置換ヘテロシクリルである。
ある実施形態においては、Ｒ２とＲ３とは、所望により、環状に連結されて、５または６員ヘテロシクリルを形成していてもよい。ある実施形態においては、Ｒ２とＲ３とは環状に連結されて、５または６員ヘテロシクリルを形成している。ある実施形態においては、Ｒ２とＲ３とは環状に連結されて、５員ヘテロシクリルを形成している。ある実施形態においては、Ｒ２とＲ３とは環状に連結されて、６員ヘテロシクリルを形成している。
ある実施形態においては、各Ｒ４は、独立して、水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される。
各Ｒ４の種々の可能性を以下に更に詳細に説明する。ある実施形態においては、Ｒ４は水素である。ある実施形態においては、各Ｒ４は水素である。ある実施形態においては、Ｒ４はハロゲン、例えばＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。ある実施形態においては、Ｒ４はＦである。ある実施形態においては、Ｒ４はＣｌである。ある実施形態においては、Ｒ４はＢｒである。ある実施形態においては、Ｒ４はＩである。ある実施形態においては、Ｒ４はアルキルまたは置換アルキル、例えば、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６置換アルキル、あるいはＣ１−４アルキルまたはＣ１−４置換アルキル、あるいはＣ１−３アルキルまたはＣ１−３置換アルキルである。ある実施形態においては、Ｒ４はアルケニルまたは置換アルケニル、例えば、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６置換アルケニル、あるいはＣ２−４アルケニルまたはＣ２−４置換アルケニル、あるいはＣ２−３アルケニルまたはＣ２−３置換アルケニルである。ある実施形態においては、Ｒ４はアルキニルまたは置換アルキニルである。ある実施形態においては、Ｒ４はアルコキシまたは置換アルコキシである。ある実施形態においては、Ｒ４はアミノまたは置換アミノである。ある実施形態においては、Ｒ４はカルボキシルまたはカルボキシルエステルである。ある実施形態においては、Ｒ４はアシルまたはアシルオキシである。ある実施形態においては、Ｒ４はアシルアミノまたはアミノアシルである。ある実施形態においては、Ｒ４はアルキルアミドまたは置換アルキルアミドである。ある実施形態においては、Ｒ４はスルホニルである。ある実施形態においては、Ｒ４はチオアルコキシまたは置換チオアルコキシである。ある実施形態においては、Ｒ４はアリールまたは置換アリール、例えば、Ｃ５−８アリールまたはＣ５−８置換アリール、例えば、Ｃ５アリールまたはＣ５置換アリール、あるいはＣ６アリールまたはＣ６置換アリール（例えば、フェニルまたは置換フェニル）である。ある実施形態においては、Ｒ４はヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５−８ヘテロアリールまたはＣ５−８置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５ヘテロアリールまたはＣ５置換ヘテロアリール、あるいはＣ６ヘテロアリールまたはＣ６置換ヘテロアリールである。ある実施形態においては、Ｒ４はシクロアルキルまたは置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−８シクロアルキルまたはＣ３−８置換シクロアルキル、あるいはＣ３−６シクロアルキルまたはＣ３−６置換シクロアルキル、あるいはＣ３−５シクロアルキルまたはＣ３−５置換シクロアルキルである。ある実施形態においては、Ｒ４はヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−８ヘテロシクリルまたはＣ３−８置換ヘテロシクリル、Ｃ３−６ヘテロシクリルまたはＣ３−６置換ヘテロシクリル、あるいはＣ３−５ヘテロシクリルまたはＣ３−５置換ヘテロシクリルである。
ある実施形態においては、Ｗ１はメイタンシノイドである。メイタンシノイドの更なる説明は本明細書の開示において見出される。
ある実施形態においては、Ｗ２は抗ＣＤ２２抗体である。抗ＣＤ２２抗体の更なる説明は本明細書の開示において見出される。
ある実施形態においては、式（Ｉ）の化合物はリンカーＬを含む。リンカーは、１以上の関心のある部分および／または１以上のポリペプチドにカップリング部分を結合させるために使用されうる。幾つかの実施形態においては、リンカーはカップリング部分をポリペプチドまたは化学的部分に結合させる。リンカーは任意の簡便な位置においてカップリング部分に結合（例えば、共有結合）しうる。例えば、リンカーはヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分を薬物（例えば、メイタンシン）に結合させうる。ヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分は、リンカー（およびそれによる薬物、例えばメイタンシン）をポリペプチド、例えば抗ＣＤ２２抗体にコンジュゲート化させるために使用されうる。
ある実施形態においては、Ｌはカップリング部分をＷ１に結合させ、したがって、カップリング部分はリンカーＬを介してＷ１に間接的に結合する。前記のとおり、Ｗ１はメイタンシノイドであり、したがって、Ｌはカップリング部分をメイタンシノイドに結合させ、例えば、カップリング部分はリンカーＬを介してメイタンシノイドに間接的に結合する。
本コンジュゲートおよび化合物においては任意の簡便なリンカーが使用されうる。ある実施形態においては、Ｌは、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換アルキルアミド、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される群を含む。ある実施形態においては、Ｌはアルキルまたは置換アルキル基を含む。ある実施形態においては、Ｌはアルケニルまたは置換アルケニル基を含む。ある実施形態においては、Ｌはアルキニルまたは置換アルキニルを含む。ある実施形態においては、Ｌはアルコキシまたは置換アルコキシ基を含む。ある実施形態においては、Ｌはアミノまたは置換アミノ基を含む。ある実施形態においては、Ｌはカルボキシルまたはカルボキシルエステル基を含む。ある実施形態においては、Ｌはアシルアミノ基を含む。ある実施形態においては、Ｌはアルキルアミドまたは置換アルキルアミド基を含む。ある実施形態においては、Ｌはアリールまたは置換アリール基を含む。ある実施形態においては、Ｌはヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール基を含む。ある実施形態においては、Ｌはシクロアルキルまたは置換シクロアルキル基を含む。ある実施形態においては、Ｌはヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリル基を含む。
ある実施形態において、Ｌはポリマー（重合体）を含む。例えば、ポリマーには、ポリアルキレングリコールおよびその誘導体、例えばポリエチレングリコール、メトキシポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールホモポリマー、ポリプロピレングリコールホモポリマー、エチレングリコールとプロピレングリコールとのコポリマー（例えば、該ホモポリマーおよびコポリマーは置換されていない、または一方の末端においてアルキル基で置換されている）、ポリビニルアルコール、ポリビニルエチルエーテル、ポリビニルピロリドン、これらの組合せなどが含まれる。ある実施形態においては、ポリマーはポリアルキレングリコールである。ある実施形態においては、ポリマーはポリエチレングリコールである。後記で更に詳細に記載されているコンジュゲートおよび化合物において示されているとおり、他のリンカーも可能である。
幾つかの実施形態においては、Ｌは、式−（Ｌ１）ａ−（Ｌ２）ｂ−（Ｌ３）ｃ−（Ｌ４）ｄ−により示されるリンカーであり、ここで、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、それぞれ独立して、リンカー単位であり、ａ、ｂ、ｃおよびｄは、それぞれ独立して、０または１であり、ａ、ｂ、ｃおよびｄの合計は１〜４である。
ある実施形態においては、ａ、ｂ、ｃおよびｄの合計は１である。ある実施形態においては、ａ、ｂ、ｃおよびｄの合計は２である。ある実施形態においては、ａ、ｂ、ｃおよびｄの合計は３である。ある実施形態においては、ａ、ｂ、ｃおよびｄの合計は４である。ある実施形態においては、ａ、ｂ、ｃおよびｄはそれぞれ１である。ある実施形態においては、ａ、ｂおよびｃはそれぞれ１であり、ｄは０である。ある実施形態においては、ａおよびｂはそれぞれ１であり、ｃおよびｄはそれぞれ０である。ある実施形態においては、ａは１であり、ｂ、ｃおよびｄはそれぞれ０である。
ある実施形態においては、Ｌ１はヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分（例えば、前記式（Ｉ）において示されるもの）に結合している。ある実施形態においては、Ｌ２は、存在する場合には、Ｗ１に結合している。ある実施形態においては、Ｌ３は、存在する場合には、Ｗ１に結合している。ある実施形態においては、Ｌ４は、存在する場合には、Ｗ１に結合している。
本リンカーにおいては任意の簡便なリンカー単位が使用されうる。関心のあるリンカー単位には、限定的なものではないが、ポリマー、例えばポリエチレングリコール、ポリエチレンおよびポリアクリレートの単位、アミノ酸残基、炭水化物系ポリマーまたは炭水化物残基およびその誘導体、ポリヌクレオチド、アルキル基、アリール基、複素環基、それらの組合せ、ならびにそれらの置換形態が含まれる。幾つかの実施形態においては、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４（存在する場合）のそれぞれは、ポリエチレングリコール、修飾ポリエチレングリコール、アミノ酸残基、アルキル基、置換アルキル、アリール基、置換アリール基およびジアミン（例えば、アルキレンジアミンを含む連結基）から、独立して選択される１以上の基を含む。
幾つかの実施形態においては、Ｌ１（存在する場合）はポリエチレングリコール、修飾ポリエチレングリコール、アミノ酸残基、アルキル基、置換アルキル、アリール基、置換アリール基またはジアミンを含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ１はポリエチレングリコールを含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ１は修飾ポリエチレングリコールを含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ１はアミノ酸残基を含む。幾つかの実施形態において、Ｌ１はアルキル基または置換アルキルを含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ１はアリール基または置換アリール基を含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ１はジアミン（例えば、アルキレンジアミンを含む連結基）を含む。
幾つかの実施形態においては、Ｌ２（存在する場合）はポリエチレングリコール、修飾ポリエチレングリコール、アミノ酸残基、アルキル基、置換アルキル、アリール基、置換アリール基またはジアミンを含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ２はポリエチレングリコールを含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ２は修飾ポリエチレングリコールを含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ２はアミノ酸残基を含む。幾つかの実施形態において、Ｌ２はアルキル基または置換アルキルを含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ２はアリール基または置換アリール基を含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ２はジアミン（例えば、アルキレンジアミンを含む連結基）を含む。
幾つかの実施形態においては、Ｌ３（存在する場合）はポリエチレングリコール、修飾ポリエチレングリコール、アミノ酸残基、アルキル基、置換アルキル、アリール基、置換アリール基またはジアミンを含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ３はポリエチレングリコールを含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ３は修飾ポリエチレングリコールを含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ３はアミノ酸残基を含む。幾つかの実施形態において、Ｌ３はアルキル基または置換アルキルを含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ３はアリール基または置換アリール基を含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ３はジアミン（例えば、アルキレンジアミンを含む連結基）を含む。
幾つかの実施形態においては、Ｌ４（存在する場合）はポリエチレングリコール、修飾ポリエチレングリコール、アミノ酸残基、アルキル基、置換アルキル、アリール基、置換アリール基またはジアミンを含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ４はポリエチレングリコールを含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ４は修飾ポリエチレングリコールを含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ４はアミノ酸残基を含む。幾つかの実施形態において、Ｌ４はアルキル基または置換アルキルを含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ４はアリール基または置換アリール基を含む。幾つかの実施形態においては、Ｌ４はジアミン（例えば、アルキレンジアミンを含む連結基）を含む。
幾つかの実施形態においては、Ｌは、−（Ｌ１）ａ−（Ｌ２）ｂ−（Ｌ３）ｃ−（Ｌ４）ｄ−を含むリンカーであり、ここで、
−（Ｌ１）ａ−は−（Ｔ１−Ｖ１）ａ−である；
−（Ｌ２）ｂ−は−（Ｔ２−Ｖ２）ｂ−である；
−（Ｌ３）ｃ−は−（Ｔ３−Ｖ３）ｃ−である；および
−（Ｌ４）ｄ−は−（Ｔ４−Ｖ４）ｄ−である；
ここで、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３およびＴ４は、存在する場合には、連結鎖（テザー（ｔｅｔｈｅｒ））基である；
Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３およびＶ４は、存在する場合には、共有結合または連結官能基である；ならびに
ａ、ｂ、ｃおよびｄは、それぞれ独立して、０または１であり、ａ、ｂ、ｃおよびｄの合計は１〜４である。
前記のとおり、ある実施形態においては、Ｌ１はヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分（例えば、前記式（Ｉ）に示されているもの）に結合している。したがって、ある実施形態においては、Ｔ１はヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分（例えば、前記式（Ｉ）に示されているもの）に結合している。ある実施形態においては、Ｖ１はＷ１（メイタンシノイド）に結合している。ある実施形態においては、Ｌ２は、存在する場合には、Ｗ１に結合している。したがって、ある実施形態においては、Ｔ２は、存在する場合には、Ｗ１に結合しており、あるいはＶ２は、存在する場合には、Ｗ１に結合している。ある実施形態においては、Ｌ３は、存在する場合には、Ｗ１に結合している。したがって、ある実施形態においては、Ｔ３は、存在する場合には、Ｗ１に結合しており、あるいはＶ３は、存在する場合には、Ｗ１に結合している。ある実施形態においては、Ｌ４は、存在する場合には、Ｗ１に結合している。したがって、ある実施形態においては、Ｔ４は、存在する場合には、Ｗ１に結合しており、あるいはＶ４は、存在する場合には、Ｗ１に結合している。
連結鎖基Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３およびＴ４に関しては、任意の簡便な連結鎖基が本リンカーにおいて使用されうる。幾つかの実施形態においては、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３およびＴ４はそれぞれ、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（ＥＤＡ）ｗ、（ＰＥＧ）ｎ、（ＡＡ）ｐ、−（ＣＲ１３ＯＨ）ｈ−、ピペリジン−４−アミノ（４ＡＰ）、アセタール基、ジスルフィド、ヒドラジンおよびエステルから、独立して選択される１以上の基を含み、ここで、ｗは１〜２０の整数であり、ｎは１〜３０の整数であり、ｐは１〜２０の整数であり、ｈは１〜１２の整数である。
ある実施形態においては、ａ、ｂ、ｃおよびｄの合計が２であり、Ｔ１−Ｖ１、Ｔ２−Ｖ２、Ｔ３−Ｖ３、またはＴ４−Ｖ４が（ＰＥＧ）ｎ−ＣＯである場合、ｎは６ではない。例えば、幾つかの場合においては、リンカーは以下の構造：
Figure 0006855496
（式中、ｎは６ではない）を有しうる。
ある実施形態においては、ａ、ｂ、ｃおよびｄの合計が２であり、Ｔ１−Ｖ１、Ｔ２−Ｖ２、Ｔ３−Ｖ３、またはＴ４−Ｖ４が（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル−ＮＲ１５である場合、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルはＣ５−アルキルではない。例えば、幾つかの場合においては、リンカーは以下の構造：
Figure 0006855496
（式中、ｇは４ではない）を有しうる。
ある実施形態においては、連結鎖基（例えば、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３および／またはＴ４）は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルまたは置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルを含む。ある実施形態においては、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルは、１〜１２個の炭素原子、例えば１〜１０個の炭素原子、または１〜８個の炭素原子、または１〜６個の炭素原子、または１〜５個の炭素原子、または１〜４個の炭素原子、または１〜３個の炭素原子を含む直鎖または分岐アルキル基である。幾つかの場合においては、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルはアルキルまたは置換アルキル、例えばＣ１−Ｃ１２アルキル、またはＣ１−Ｃ１０アルキル、またはＣ１−Ｃ６アルキル、またはＣ１−Ｃ３アルキルでありうる。幾つかの場合においては、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルはＣ２−アルキルである。例えば、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルはアルキレンまたは置換アルキレン、例えばＣ１−Ｃ１２アルキレン、またはＣ１−Ｃ１０アルキレン、またはＣ１−Ｃ６アルキレン、またはＣ１−Ｃ３アルキレンでありうる。幾つかの場合においては、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルはＣ２−アルキレンである。
ある実施形態においては、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルは、１〜１２個の炭素原子、例えば１〜１０個の炭素原子、または１〜８個の炭素原子、または１〜６個の炭素原子、または１〜５個の炭素原子、または１〜４個の炭素原子、または１〜３個の炭素原子を含む直鎖または分岐置換アルキル基である。幾つかの場合においては、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルは置換アルキル、例えば置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、または置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、または置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１−Ｃ３アルキルでありうる。幾つかの場合においては、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルは置換Ｃ２−アルキルである。例えば、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルは置換アルキレン、例えば置換Ｃ１−Ｃ１２アルキレン、または置換Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、または置換Ｃ１−Ｃ６アルキレン、または置換Ｃ１−Ｃ３アルキレンでありうる。幾つかの場合においては、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルは置換Ｃ２−アルキレンである。
ある実施形態においては、連結鎖基（例えば、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３および／またはＴ４）はエチレンジアミン（ＥＤＡ）部分、例えば、ＥＤＡ含有連結鎖を含む。ある実施形態においては、（ＥＤＡ）ｗは１以上のＥＤＡ部分を含み、ここで、例えば、ｗは１〜５０の整数、例えば、１〜４０の整数、１〜３０の整数、１〜２０の整数、１〜１２の整数、１〜６の整数、例えば、１、２、３、４、５または６である。連結エチレンジアミン（ＥＤＡ）部分は、所望により、１以上の簡便な位置において、任意の簡便置換基、例えばアルキル、置換アルキル、アシル、置換アシル、アリールまたは置換アリールで置換されていてもよい。ある実施形態においては、ＥＤＡ部分は構造：
Figure 0006855496
により示され、ここで、ｙは１〜６の整数であり、ｒは０または１であり、各Ｒ１２は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される。ある実施形態においては、ｙは１、２、３、４、５または６である。ある実施形態においては、ｙは１であり、ｒは０である。ある実施形態においては、ｙは１であり、ｒは１である。ある実施形態においては、ｙは２であり、ｒは０である。ある実施形態においては、ｙは２であり、ｒは１である。ある実施形態においては、各Ｒ１２は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリールおよび置換アリールから選択される。ある実施形態においては、ＥＤＡの任意の２つの隣接したＲ１２基が環状に連結されて、例えばピペラジニル環を形成していてもよい。ある実施形態においては、ｙは１であり、２つの隣接したＲ１２基はアルキル基であり、環状に連結されてピペラジニル環を形成している。ある実施形態においては、ｙは１であり、隣接したＲ１２基は、水素、アルキル（例えば、メチル）および置換アルキル（例えば、低級アルキル−ＯＨ、例えばエチル−ＯＨまたはプロピル−ＯＨ）から選択される。
ある実施形態においては、該連結鎖基は４−アミノ−ピペリジン（４ＡＰ）部分（本明細書においてはピペリジン−４−アミノ，Ｐ４Ａとも称される）を含む。４ＡＰ部分は、所望により、１以上の簡便な位置において、任意の簡便な置換基、例えば、アルキル、置換アルキル、ポリエチレングリコール部分、アシル、置換アシル、アリールまたは置換アリールで置換されていてもよい。ある実施形態においては、４ＡＰ部分は構造：
Figure 0006855496
により示され、ここで、Ｒ１２は、水素、アルキル、置換アルキル、ポリエチレングリコール部分（例えば、ポリエチレングリコールまたは修飾ポリエチレングリコール）、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される。ある実施形態においては、Ｒ１２はカルボキシ修飾ポリエチレングリコールである。
ある実施形態においては、Ｒ１２は、式：（ＰＥＧ）ｋにより示されるポリエチレングリコール部分を含み、これは構造：
Figure 0006855496
により表されることが可能であり、ここで、ｋは１〜２０、例えば１〜１８、または１〜１６、または１〜１４、または１〜１２、または１〜１０、または１〜８、または１〜６、または１〜４、または１もしくは２の整数、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９もしくは２０である。幾つかの場合においては、ｋは２である。ある実施形態においては、Ｒ１７はＯＨ、ＣＯＯＨまたはＣＯＯＲから選択され、ここで、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される。ある実施形態においては、Ｒ１７はＣＯＯＨである。
ある実施形態においては、連結鎖基（例えば、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３および／またはＴ４）は（ＰＥＧ）ｎを含み、ここで、（ＰＥＧ）ｎはポリエチレングリコールまたは修飾ポリエチレングリコール連結単位である。ある実施形態においては、（ＰＥＧ）ｎは構造：
Figure 0006855496
により示され、ここで、ｎは１〜５０、例えば１〜４０、１〜３０、１〜２０、１〜１２または１〜６の整数、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である。幾つかの場合においては、ｎは２である。幾つかの場合においては、ｎは３である。幾つかの場合においては、ｎは６である。幾つかの場合においては、ｎは１２である。
ある実施形態においては、連結鎖基（例えば、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３および／またはＴ４）は（ＡＡ）ｐを含み、ここで、ＡＡはアミノ酸残基である。任意の簡便なアミノ酸が使用されうる。関心のあるアミノ酸には、限定的なものではないが、Ｌ−およびＤ−アミノ酸、天然に存在するアミノ酸、例えば、２０種の主要アルファ−アミノ酸およびベータ−アラニンのいずれか、非天然アミノ酸（例えば、アミノ酸類似体）、例えば、非天然アルファ−アミノ酸および／または非天然ベータ−アミノ酸などが含まれる。ある実施形態においては、ｐは１〜５０、例えば１〜４０、１〜３０、１〜２０、１〜１２または１〜６の整数、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である。ある実施形態においては、ｐは１である。ある実施形態においては、ｐは２である。
ある実施形態においては、連結鎖基（例えば、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３および／またはＴ４）は、式：−（ＣＲ１３ＯＨ）ｈ−により示される部分を含み、ここで、ｈは０であるか、あるいはｎは１〜５０、例えば１〜４０、１〜３０、１〜２０、１〜１２または１〜６の整数、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２である。ある実施形態においては、ｈは１である。ある実施形態においては、ｈは２である。ある実施形態においては、Ｒ１３は水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される。ある実施形態においては、Ｒ１３は水素である。ある実施形態においては、Ｒ１３はアルキルまたは置換アルキル、例えば、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６置換アルキル、あるいはＣ１−４アルキルまたはＣ１−４置換アルキル、あるいはＣ１−３アルキルまたはＣ１−３置換アルキルである。ある実施形態においては、Ｒ１３はアルケニルまたは置換アルケニル、例えば、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６置換アルケニル、あるいはＣ２−４アルケニルまたはＣ２−４置換アルケニル、あるいはＣ２−３アルケニルまたはＣ２−３置換アルケニルである。ある実施形態においては、Ｒ１３はアルキニルまたは置換アルキニルである。ある実施形態においては、Ｒ１３はアルコキシまたは置換アルコキシである。ある実施形態においては、Ｒ１３はアミノまたは置換アミノである。ある実施形態においては、Ｒ１３はカルボキシルまたはカルボキシルエステルである。ある実施形態においては、Ｒ１３はアシルまたはアシルオキシである。ある実施形態においては、Ｒ１３はアシルアミノまたはアミノアシルである。ある実施形態においては、Ｒ１３はアルキルアミドまたは置換アルキルアミドである。ある実施形態においては、Ｒ１３はスルホニルである。ある実施形態においては、Ｒ１３はチオアルコキシまたは置換チオアルコキシである。ある実施形態においては、Ｒ１３はアリールまたは置換アリール、例えば、Ｃ５−８アリールまたはＣ５−８置換アリール、例えば、Ｃ５アリールまたはＣ５置換アリール、あるいはＣ６アリールまたはＣ６置換アリールである。ある実施形態においては、Ｒ１３はヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５−８ヘテロアリールまたはＣ５−８置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５ヘテロアリールまたはＣ５置換ヘテロアリール、あるいはＣ６ヘテロアリールまたはＣ６置換ヘテロアリールである。ある実施形態においては、Ｒ１３はシクロアルキルまたは置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−８シクロアルキルまたはＣ３−８置換シクロアルキル、あるいはＣ３−６シクロアルキルまたはＣ３−６置換シクロアルキル、あるいはＣ３−５シクロアルキルまたはＣ３−５置換シクロアルキルである。ある実施形態においては、Ｒ１３はヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−８ヘテロシクリルまたはＣ３−８置換ヘテロシクリル、Ｃ３−６ヘテロシクリルまたはＣ３−６置換ヘテロシクリル、あるいはＣ３−５ヘテロシクリルまたはＣ３−５置換ヘテロシクリルである。
ある実施形態においては、Ｒ１３は水素、アルキル、置換アルキル、アリールおよび置換アリールから選択される。これらの実施形態においては、アルキル、置換アルキル、アリールおよび置換アリールは、Ｒ１３に関して前記で記載されているとおりである。
連結官能基Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３およびＶ４に関しては、任意の簡便な連結官能基が本リンカーにおいて使用されうる。関心のある連結官能基には、限定的なものではないが、アミノ、カルボニル、アミド、オキシカルボニル、カルボキシ、スルホニル、スルホキシド、スルホニルアミノ、アミノスルホニル、チオ、オキシ、ホスホ、ホスホルアミダート、チオホスホライダートなどが含まれる。幾つかの実施形態においては、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３およびＶ４は、それぞれ独立して、共有結合、−ＣＯ−、−ＮＲ１５−、−ＮＲ１５（ＣＨ２）ｑ−、−ＮＲ１５（Ｃ６Ｈ４）−、−ＣＯＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＳＯ２−および−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−からなる群から選択され、ここで、ｑは１〜６の整数である。ある実施形態においては、ｑは１〜６の整数（例えば、１、２、３、４、５または６）である。ある実施形態においては、ｑは１である。ある実施形態においては、ｑは２である。
幾つかの実施形態においては、各Ｒ１５は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される。
各Ｒ１５の種々の可能性を以下に更に詳細に説明する。ある実施形態においては、Ｒ１５は水素である。ある実施形態においては、各Ｒ１５は水素である。ある実施形態においては、Ｒ１５はアルキルまたは置換アルキル、例えば、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６置換アルキル、あるいはＣ１−４アルキルまたはＣ１−４置換アルキル、あるいはＣ１−３アルキルまたはＣ１−３置換アルキルである。ある実施形態においては、Ｒ１５はアルケニルまたは置換アルケニル、例えば、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６置換アルケニル、あるいはＣ２−４アルケニルまたはＣ２−４置換アルケニル、あるいはＣ２−３アルケニルまたはＣ２−３置換アルケニルである。ある実施形態においては、Ｒ１５はアルキニルまたは置換アルキニルである。ある実施形態においては、Ｒ１５はアルコキシまたは置換アルコキシである。ある実施形態においては、Ｒ１５はアミノまたは置換アミノである。ある実施形態においては、Ｒ１５はカルボキシルまたはカルボキシルエステルである。ある実施形態においては、Ｒ１５はアシルまたはアシルオキシである。ある実施形態においては、Ｒ１５はアシルアミノまたはアミノアシルである。ある実施形態においては、Ｒ１５はアルキルアミドまたは置換アルキルアミドである。ある実施形態においては、Ｒ１５はスルホニルである。ある実施形態においては、Ｒ１５はチオアルコキシまたは置換チオアルコキシである。ある実施形態においては、Ｒ１５はアリールまたは置換アリール、例えば、Ｃ５−８アリールまたはＣ５−８置換アリール、例えば、Ｃ５アリールまたはＣ５置換アリール、あるいはＣ６アリールまたはＣ６置換アリールである。ある実施形態においては、Ｒ１５はヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５−８ヘテロアリールまたはＣ５−８置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５ヘテロアリールまたはＣ５置換ヘテロアリール、あるいはＣ６ヘテロアリールまたはＣ６置換ヘテロアリールである。ある実施形態においては、Ｒ１５はシクロアルキルまたは置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−８シクロアルキルまたはＣ３−８置換シクロアルキル、あるいはＣ３−６シクロアルキルまたはＣ３−６置換シクロアルキル、あるいはＣ３−５シクロアルキルまたはＣ３−５置換シクロアルキルである。ある実施形態においては、Ｒ１５はヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−８ヘテロシクリルまたはＣ３−８置換ヘテロシクリル、Ｃ３−６ヘテロシクリルまたはＣ３−６置換ヘテロシクリル、あるいはＣ３−５ヘテロシクリルまたはＣ３−５置換ヘテロシクリルである。
ある実施形態においては、各Ｒ１５は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルから選択される。これらの実施形態において、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリル置換基は、前記でＲ１５に関して記載されているとおりである。
ある実施形態においては、該連結鎖（テザー（ｔｅｔｈｅｒ））基には、アセタール基、ジスルフィド、ヒドラジンまたはエステルが含まれる。幾つかの実施形態においては、該連結鎖基には、アセタール基が含まれる。幾つかの実施形態においては、該連結鎖基には、ジスルフィドが含まれる。幾つかの実施形態においては、該連結鎖基には、ヒドラジンが含まれる。幾つかの実施形態においては、該連結鎖基には、エステルが含まれる。
前記のとおり、幾つかの実施形態においては、Ｌは、−（Ｔ１−Ｖ１）ａ−（Ｔ２−Ｖ２）ｂ−（Ｔ３−Ｖ３）ｃ−（Ｔ４−Ｖ４）ｄ−を含むリンカーであり、ここで、ａ、ｂ、ｃおよびｄは、それぞれ独立して、０または１であり、ａ、ｂ、ｃおよびｄの合計は１〜４である。
幾つかの実施形態においては、本リンカーにおいて、
Ｔ１は、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルおよび置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルから選択される；
Ｔ２、Ｔ３およびＴ４は、それぞれ独立して、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（ＥＤＡ）ｗ、（ＰＥＧ）ｎ、（ＡＡ）ｐ、−（ＣＲ１３ＯＨ）ｈ−、４−アミノ−ピペリジン（４ＡＰ）、アセタール基、ヒドラジンおよびエステルから選択される；ならびに
Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３およびＶ４は、それぞれ独立して、共有結合、−ＣＯ−、−ＮＲ１５−、−ＮＲ１５（ＣＨ２）ｑ−、−ＮＲ１５（Ｃ６Ｈ４）−、−ＣＯＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＳＯ２−および−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−からなる群から選択され、ここで、ｑは１〜６の整数である；
ここで、
（ＰＥＧ）ｎは
Figure 0006855496
であり、ここで、ｎは１〜３０の整数である；
ＥＤＡは、以下の構造：
Figure 0006855496
を有するエチレンジアミン部分であり、ここで、ｙは１〜６の整数であり、ｒは０または１である；
４−アミノ−ピペリジン（４ＡＰ）は、
Figure 0006855496
である；
ＡＡはアミノ酸残基であり、ここで、ｐは１〜２０の整数である；
各Ｒ１５およびＲ１２は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリールおよび置換アリールから選択され、ここで、任意の２つの隣接したＲ１２基は環状に連結されて、ピペラジニル環を形成していてもよい；ならびに
Ｒ１３は、水素、アルキル、置換アルキル、アリールおよび置換アリールから選択される。
ある実施形態においては、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３およびＴ４ならびにＶ１、Ｖ２、Ｖ３およびＶ４は以下の表、例えば、以下の表の１つの行から選択される。
Figure 0006855496
ある実施形態においては、Ｌは、−（Ｌ１）ａ−（Ｌ２）ｂ−（Ｌ３）ｃ−（Ｌ４）ｄ−を含むリンカーであり、ここで、−（Ｌ１）ａ−は−（Ｔ１−Ｖ１）ａ−であり、−（Ｌ２）ｂ−は−（Ｔ２−Ｖ２）ｂ−であり、−（Ｌ３）ｃ−は−（Ｔ３−Ｖ３）ｃ−であり、−（Ｌ４）ｄ−は−（Ｔ４−Ｖ４）ｄ−である。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ２は−ＮＲ１５−であり、Ｔ３は（ＰＥＧ）ｎであり、Ｖ３は−ＣＯ−であり、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＥＤＡ）ｗであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３は（ＣＲ１３ＯＨ）ｈであり、Ｖ３は−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ４は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ４は−ＣＯ−である。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ２は−ＮＲ１５−であり、Ｔ３は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ３は−ＣＯ−であり、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２は（ＰＥＧ）ｎであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３は存在せず、Ｖ３は存在せず、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ２は存在せず、Ｔ３は存在せず、Ｖ３は存在せず、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２は（ＰＥＧ）ｎであり、Ｖ２は−ＮＲ１５−であり、Ｔ３は存在せず、Ｖ３は存在せず、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ２は−ＮＲ１５−であり、Ｔ３は（ＰＥＧ）ｎであり、Ｖ３は−ＮＲ１５−であり、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＥＤＡ）ｗであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３は存在せず、Ｖ３は存在せず、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ２は−ＮＲ１５−であり、Ｔ３は存在せず、Ｖ３は存在せず、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２は（ＰＥＧ）ｎであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３は（ＥＤＡ）ｗであり、Ｖ３は存在せず、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＥＤＡ）ｗであり、Ｖ２は存在せず、Ｔ３は存在せず、Ｖ３は存在せず、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２は（ＰＥＧ）ｎであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ３は存在せず、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＥＤＡ）ｗであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３は（ＣＲ１３ＯＨ）ｈであり、Ｖ３は−ＣＯ−であり、Ｔ４は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ２は−ＮＲ１５−であり、Ｔ３は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ３は−ＣＯ−であり、Ｔ４は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ２は−ＮＲ１５−であり、Ｔ３は（ＰＥＧ）ｎであり、Ｖ３は−ＣＯ−であり、Ｔ４は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ２は−ＮＲ１１−であり、Ｔ３は（ＰＥＧ）ｎであり、Ｖ３は−ＳＯ２−であり、Ｔ４は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＥＤＡ）ｗであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３は（ＣＲ１３ＯＨ）ｈであり、Ｖ３は−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ４は（ＰＥＧ）ｎであり、Ｖ４は−ＣＯ−である。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＣＲ１３ＯＨ）ｈであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３は存在せず、Ｖ３は存在せず、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２は置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ２は−ＮＲ１５−であり、Ｔ３は（ＰＥＧ）ｎであり、Ｖ３は−ＣＯ−であり、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＳＯ２−であり、Ｔ２は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３は存在せず、Ｖ３は存在せず、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ２は存在せず、Ｔ３は（ＣＲ１３ＯＨ）ｈであり、Ｖ３は−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ２は−ＮＲ１５−であり、Ｔ３は（ＰＥＧ）ｎであり、Ｖ３は−ＣＯ−であり、Ｔ４は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ４は−ＮＲ１５−である。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ２は−ＮＲ１５−であり、Ｔ３は（ＰＥＧ）ｎであり、Ｖ３は−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−であり、Ｔ４は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＥＤＡ）ｗであり、Ｖ２は存在せず、Ｔ３は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ３は存在せず、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＥＤＡ）ｗであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３は（ＣＲ１３ＯＨ）ｈであり、Ｖ３は−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ４は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ４は−ＣＯ（ＡＡ）ｐである。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ２は−ＮＲ１５−であり、Ｔ３は存在せず、Ｖ３は−ＣＯ−であり、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ２は−ＮＲ１５−であり、Ｔ３は存在せず、Ｖ３は−ＣＯ−であり、Ｔ４は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ４は−ＮＲ１５−である。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は（ＥＤＡ）ｗであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３は（ＣＲ１３ＯＨ）ｈであり、Ｖ３は−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ４は（ＰＥＧ）ｎであり、Ｖ４は−ＣＯ（ＡＡ）ｐである。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は４ＡＰであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ３は−ＣＯ−であり、Ｔ４は（ＡＡ）ｐであり、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は４ＡＰであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ３は−ＣＯ−であり、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。
ある実施形態においては、リンカーは以下の構造の１つにより示される。
Figure 0006855496
Figure 0006855496
Figure 0006855496
前記のリンカー構造の或る実施形態においては、各ｆは、独立して、０または１〜１２の整数である；各ｙは、独立して、０または１〜２０の整数である；各ｎは、独立して、０または１〜３０の整数である；各ｐは、独立して、０または１〜２０の整数である；各ｈは、独立して、０または１〜１２の整数である；各Ｒは、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルである；ならびに各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アミノ酸の側鎖基、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルである。前記のリンカー構造の或る実施形態においては、各ｆは、独立して、０、１、２、３、４、５または６である；各ｙは、独立して、０、１、２、３、４、５または６である；各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５または６である；各ｐは、独立して、０、１、２、３、４、５または６である；および各ｈは、独立して、０、１、２、３、４、５または６である。前記のリンカー構造の或る実施形態においては、各Ｒは、独立して、Ｈ、メチルまたは−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨであり、ここで、ｍは１、２、３または４（例えば、２）である。
リンカーＬの或る実施形態においては、Ｔ１は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は４ＡＰであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３は（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｖ３は−ＣＯ−であり、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。ある実施形態においては、Ｔ１はエチレンであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は４ＡＰであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３はエチレンであり、Ｖ３は−ＣＯ−であり、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在しない。ある実施形態においては、Ｔ１はエチレンであり、Ｖ１は−ＣＯ−であり、Ｔ２は４ＡＰであり、Ｖ２は−ＣＯ−であり、Ｔ３はエチレンであり、Ｖ３は−ＣＯ−であり、Ｔ４は存在せず、Ｖ４は存在せず、ここで、Ｔ２（例えば、４ＡＰ）は以下の構造：
Figure 0006855496
を有し、ここで、Ｒ１２はポリエチレングリコール部分（例えば、ポリエチレングリコールまたは修飾ポリエチレングリコール）である。
ある実施形態においては、リンカーＬは以下の構造：
Figure 0006855496
（式中、各ｆは、独立して、１〜１２の整数であり、ｎは１〜３０の整数である）を含む。
ある実施形態においては、ｆは１である。ある実施形態においては、ｆは２である。ある実施形態においては、ｆの１つは２であり、ｆの１つは１である。
ある実施形態においては、ｎは１である。
ある実施形態においては、前記リンカー構造の左側はヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分に結合しており、前記リンカー構造の右側はメイタンシンに結合している。
前記構造に示される化学物質、リンカーおよびカップリング部分はいずれも、本化合物およびコンジュゲートにおける使用に適合化されうる。
ヒドラジニル−インドリルおよびヒドラジニル−ピロロ−ピリジニル化合物ならびにコンジュゲートの製造方法に関する更なる開示は、２０１３年３月１１日付け出願の米国特許出願公開第２０１４／０１４１０２５号および２０１４年１１月２６日付け出願の米国特許出願公開第２０１５／０１５７７３６号（それらのそれぞれの開示を参照により本明細書に組み入れることとする）に見出される。
抗ＣＤ２２抗体
前記のとおり、本コンジュゲートは置換基Ｗ２として抗ＣＤ２２抗体を含むことが可能であり、ここで、抗ＣＤ２２抗体は、２−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）残基を含むように修飾されている。本明細書中で用いるアミノ酸は、例えば以下のようなそれらの標準的な名称、それらの標準的な３文字略語および／またはそれらの標準的な１文字略語により示されうる：アラニンまたはＡｌａまたはＡ；システインまたはＣｙｓまたはＣ；アスパラギン酸またはＡｓｐまたはＤ；グルタミン酸またはＧｌｕまたはＥ；フェニルアラニンまたはＰｈｅまたはＦ；グリシンまたはＧｌｙまたはＧ；ヒスチジンまたはＨｉｓまたはＨ；イソロイシンまたはＩｌｅまたはＩ；リジンまたはＬｙｓまたはＫ；ロイシンまたはＬｅｕまたはＬ；メチオニンまたはＭｅｔまたはＭ；アスパラギンまたはＡｓｎまたはＮ；プロリンまたはＰｒｏまたはＰ；グルタミンまたはＧｌｎまたはＱ；アルギニンまたはＡｒｇまたはＲ；セリンまたはＳｅｒまたはＳ；スレオニンまたはＴｈｒまたはＴ；バリンまたはＶａｌまたはＶ；トリプトファンまたはＴｒｐまたはＷ；およびチロシンまたはＴｙｒまたはＹ。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体はＣＤ２２ポリペプチドに特異的に結合し、ここで、エピトープはＣＤ２２抗原内のアミノ酸残基（例えば、図８Ａ〜８Ｃに示されているＣＤ２２アミノ酸配列のアミノ酸１−８４７（１〜８４７）内、アミノ酸１−７５９内、アミノ酸１−７５１内、またはアミノ酸１−６７０内）を含む。
ＣＤ２２エピトープは、図８Ａ〜８Ｃに示されているヒトＣＤ２２アイソフォーム４のアミノ酸配列の約５００アミノ酸〜約６７０アミノ酸の連続的伸長に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドにより形成されうる。ＣＤ２２エピトープは、図８Ａ〜８Ｃに示されているヒトＣＤ２２アイソフォーム３のアミノ酸配列の約５００アミノ酸〜約７５１アミノ酸の連続的伸長に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドにより形成されうる。ＣＤ２２エピトープは、図８Ａ〜８Ｃに示されているヒトＣＤ２２アイソフォーム２のアミノ酸配列の約５００アミノ酸〜約７５９アミノ酸の連続的伸長に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドにより形成されうる。ＣＤ２２エピトープは、図８Ａ〜８Ｃに示されているヒトＣＤ２２アイソフォーム１のアミノ酸配列の約５００アミノ酸〜約８４７アミノ酸の連続的伸長に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドにより形成されうる。
「ＣＤ２２抗原」または「ＣＤ２２ポリペプチド」は、図８Ａ〜８Ｃに示されているヒトＣＤ２２アイソフォーム１、２、３または４のアミノ酸配列の約５００アミノ酸（ａａ）〜約８４７ａａ（アイソフォーム１）、〜約７５９ａａ（アイソフォーム２）、〜約７５１ａａ（アイソフォーム３）または〜約６７０ａａ（アイソフォーム４）の連続的伸長に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含みうる。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体はＣＤ２２への高いアフィニティの結合を示す。例えば、幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は少なくとも約１０−７Ｍ、少なくとも約１０−８Ｍ、少なくとも約１０−９Ｍ、少なくとも約１０−１０Ｍ、少なくとも約１０−１１Ｍまたは少なくとも約１０−１２Ｍまたは約１０−１２Ｍ以上のアフィニティでＣＤ２２に結合する。幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は約１０−７Ｍ〜約１０−８Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−９Ｍ〜約１０−１０Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１１Ｍ、または約１０−１１Ｍ〜約１０−１２Ｍ、または１０−１２Ｍ以上のアフィニティで、ＣＤ２２上に存在するエピトープに結合する。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体はＣＤ２２内のエピトープへの結合に関して第２抗ＣＤ２２抗体と競合し、および／または第２抗ＣＤ２２抗体と同じ、ＣＤ２２内のエピトープに結合する。幾つかの場合においては、ＣＤ２２内のエピトープへの結合に関して第２抗ＣＤ２２抗体と競合する抗ＣＤ２２抗体はまた、第２抗ＣＤ２２抗体と同じエピトープに結合する。幾つかの場合においては、ＣＤ２２内のエピトープへの結合に関して第２抗ＣＤ２２抗体と競合する抗ＣＤ２２抗体は、第２抗ＣＤ２２抗体により結合されるエピトープと重複するエピトープに結合する。幾つかの場合においては、抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、細胞表面上でＣＤ２２を発現する細胞においてアポトーシスを誘導しうる。
幾つかの場合においては、本コンジュゲートにおける使用に適した抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２を過剰発現するヒト腫瘍細胞の増殖を抑制し、この場合、該抑制はインビトロ、インビボまたはインビトロとインビボとの両方で生じる。例えば、幾つかの場合においては、本コンジュゲートにおける使用に適した抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２を過剰発現するヒト腫瘍細胞の増殖を、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％または８０％以上、例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％抑制する。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２エピトープ［例えば、ＣＤ２２抗原内（例えば、図８Ａ〜８Ｃに示されているＣＤ２２アミノ酸配列のアミノ酸１−８４７内、アミノ酸１−７５９内、アミノ酸１−７５１内またはアミノ酸１−６７０内）のアミノ酸残基を含むエピトープ］への結合に関して、ＩＹＤＭＳ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号／／）から選択される重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体と競合する。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２エピトープ［例えば、ＣＤ２２抗原内（例えば、図８Ａ〜８Ｃに示されているＣＤ２２アミノ酸配列のアミノ酸１−８４７内、アミノ酸１−７５９内、アミノ酸１−７５１内またはアミノ酸１−６７０内）のアミノ酸残基を含むエピトープ］への結合に関して、ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＴＳＩＬＨＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号／／）から選択される軽鎖ＣＤＲを含む抗体と競合する。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２エピトープ［例えば、ＣＤ２２抗原内（例えば、図８Ａ〜８Ｃに示されているＣＤ２２アミノ酸配列のアミノ酸１−８４７内、アミノ酸１−７５９内、アミノ酸１−７５１内またはアミノ酸１−６７０内）のアミノ酸残基を含むエピトープ］への結合に関して、ＶＨ ＣＤＲ ＩＹＤＭＳ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号／／）を含む抗体と競合する。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２エピトープ［例えば、ＣＤ２２抗原内（例えば、図８Ａ〜８Ｃに示されているＣＤ２２アミノ酸配列のアミノ酸１−８４７内、アミノ酸１−７５９内、アミノ酸１−７５１内またはアミノ酸１−６７０内）のアミノ酸残基を含むエピトープ］への結合に関して、ＶＬ ＣＤＲ ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＴＳＩＬＨＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号／／）を含む抗体と競合する。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２エピトープ［例えば、ＣＤ２２抗原内（例えば、図８Ａ〜８Ｃに示されているＣＤ２２アミノ酸配列のアミノ酸１−８４７内、アミノ酸１−７５９内、アミノ酸１−７５１内またはアミノ酸１−６７０内）のアミノ酸残基を含むエピトープ］への結合に関して、ＶＨ ＣＤＲ ＩＹＤＭＳ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号／／）ならびにＶＬ ＣＤＲ ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＴＳＩＬＨＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号／／）を含む抗体と競合する。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体はＶＨ ＣＤＲ ＩＹＤＭＳ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号／／）を含む。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。適切な抗ＣＤ２２抗体はＶＬ ＣＤＲ ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＴＳＩＬＨＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号／／）を含む。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体はＶＨ ＣＤＲ ＩＹＤＭＳ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号／／）ならびにＶＬ ＣＤＲ ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＴＳＩＬＨＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号／／）を含む。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、以下のアミノ酸配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号／／）を含む抗ＣＤ２２ ＶＨ領域内に存在するＶＨ ＣＤＲを含む。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、以下のアミノ酸配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＱＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号／／）を含む抗ＣＤ２２ ＶＬ領域内に存在するＶＬ ＣＤＲを含む。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号／／）に存在するＶＨ ＣＤＲおよびＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＱＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号／／）に存在するＶＬ ＣＤＲを含む。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、ａ）アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＸ１ＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＸ２ＬＹＬＱＭＸ３ＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）［ここで、Ｘ１はＫ（Ｌｙｓ）またはＲ（Ａｒｇ）である；Ｘ２はＳ（Ｓｅｒ）またはＴ（Ｔｈｒ）である；およびＸ３はＮ（Ａｓｎ）またはＳ（Ｓｅｒ）である］を有するＶＨ領域を含む重鎖と、ｂ）免疫グロブリン軽鎖とを含む。
軽鎖は、生じる抗体がＣＤ２２に特異的に結合する限り、任意の適切なＶＬアミノ酸配列を有しうる。
典型的なＶＬアミノ酸配列は、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＱＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号７；ＶＫ１）；
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号８；ＶＫ２）；および
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号９；ＶＫ４）
を含む。
したがって、例えば、適切な抗ＣＤ２２抗体は、ａ）配列番号１に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨ領域を含む重鎖と、ＶＫ１のＶＬ領域を含む軽鎖とを含みうる。他の場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、ａ）配列番号１に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨ領域を含む重鎖と、ＶＫ２のＶＬ領域を含む軽鎖とを含みうる。更に他の場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は、ａ）配列番号１に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨ領域を含む重鎖と、ＶＫ４のＶＬ領域を含む軽鎖とを含みうる。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、ａ）アミノ酸配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＸ１ＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＸ２ＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＸ３ＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２）［ここで、Ｘ１はＬ（Ｌｅｕ）またはＶ（Ｖａｌ）である；Ｘ２はＶ（Ｖａｌ）またはＰ（Ｐｒｏ）である；およびＸ３はＱ（Ｇｌｎ）またはＰ（Ｐｒｏ）である］を含む免疫グロブリン軽鎖と、ｂ）免疫グロブリン重鎖とを含む。該重鎖は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３；ＶＨ３）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４；ＶＨ４）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５；ＶＨ５）；および
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６；ＶＨ６）
から選択されるアミノ酸配列を含みうる。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、以下のアミノ酸配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号／／）を含むＶＨ領域を含む。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、以下のアミノ酸配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号／／）を含むＶＨ領域と、以下のアミノ酸配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＱＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号／／）を含むＶＬ領域とを含む。
修飾定常領域配列
前記のとおり、抗ＣＤ２２抗体のアミノ酸配列は、インビボ（例えば、細胞におけるａｌｄタグ含有タンパク質の翻訳時に）またはインビトロ（例えば、無細胞系においてａｌｄタグ含有タンパク質をＦＧＥと接触させることにより）でホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用により２−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）残基に変換（酸化）されうるセリンまたはシステイン残基を含有するスルファターゼモチーフを含むように修飾される。そのようなスルファターゼモチーフは本明細書においてはＦＧＥ修飾部位とも称されうる。
スルファターゼモチーフ
アルデヒドタグの最小スルファターゼモチーフは、通常、５または６アミノ酸残基の長さ、通常、６アミノ酸残基以下の長さである。Ｉｇポリペプチドにおいて提供されるスルファターゼモチーフは少なくとも５または６アミノ酸残基であり、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８または７アミノ酸残基未満の長さのスルファターゼモチーフを定めるためには、例えば、５〜１６、６〜１６、５〜１５、６〜１５、５〜１４、６〜１４、５〜１３、６〜１３、５〜１２、６〜１２、５〜１１、６〜１１、５〜１０、６〜１０、５〜９、６〜９、５〜８または６〜８アミノ酸残基の長さでありうる。
ある実施形態においては、関心のあるポリペプチドには、ポリペプチドにおいてスルファターゼモチーフの配列を得るために、天然アミノ酸配列に対して１以上のアミノ酸残基、例えば２以上、または３以上、または４以上、または５以上、または６以上、または７以上、または８以上、または９以上、または１０以上、または１１以上、または１２以上、または１３以上、または１４以上、または１５以上、または１６以上、または１７以上、または１８以上、または１９以上、または２０以上のアミノ酸残基が挿入され、欠失しており、置換されているものが含まれる。ある実施形態においては、該ポリペプチドは、該ポリペプチドの天然アミノ酸配列に対する、アミノ酸配列の２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３または２個以下のアミノ酸残基の修飾（挿入、付加、欠失および／または置換）を含む。該ポリペプチド（例えば、抗ＣＤ２２抗体）に固有のアミノ酸配列が所望のスルファターゼモチーフの残基の１以上を含有する場合、残基の修飾の総数は、例えば、所望のスルファターゼモチーフの配列を得るための、天然アミノ酸残基に隣接するアミノ酸残基の部位特異的修飾（挿入、付加、欠失、置換）により減少されうる。ある実施形態においては、標的抗ＣＤ２２ポリペプチドの天然アミノ酸配列の修飾の度合は、（例えば、ＮまたはＣ末端に対して）挿入、欠失、置換または付加されるアミノ酸残基の数を最小にするように最小化される。標的抗ＣＤ２２ポリペプチドのアミノ酸配列修飾の度合の最小化は、そのような修飾が抗ＣＤ２２の機能および／または構造に及ぼしうる影響を最小にしうる。
特に関心のあるアルデヒドタグは少なくとも最小スルファターゼモチーフ（「コンセンサススルファターゼモチーフ」とも称される）を含むものであるが、より長いアルデヒドタグも本開示により想定され且つ包含され、本開示の組成物および方法において有用でありうると容易に理解されることに注目すべきである。したがって、アルデヒドタグは５または６残基の最小スルファターゼモチーフを含むことが可能であり、あるいはより長いことも可能であり、該モチーフのＮ末端および／またはＣ末端に追加的アミノ酸残基が隣接していることが可能な最小スルファターゼモチーフを含みうる。例えば、５または６個のアミノ酸残基のアルデヒドタグ、および５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれ以上のアミノ酸残基の、より長いアミノ酸配列のアルデヒドタグも想定される。
アルデヒドタグはＩｇ重鎖のＣ末端またはその付近に存在しうる。例えば、アルデヒドタグは天然野生型Ｉｇ重鎖のＣ末端の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸内に存在しうる。アルデヒドタグはＩｇ重鎖のＣＨ１ドメイン内に存在しうる。アルデヒドタグはＩｇ重鎖のＣＨ２ドメイン内に存在しうる。アルデヒドタグはＩｇ重鎖のＣＨ３ドメイン内に存在しうる。アルデヒドタグはＩｇ軽鎖定常領域、例えばカッパ軽鎖定常領域またはラムダ軽鎖定常領域に存在しうる。
ある実施形態においては、使用されるスルファターゼモチーフは式：
Ｘ１Ｚ１０Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （Ｉ’）
により示されることが可能であり、ここで、
Ｚ１０はシステインまたはセリン（これは（Ｃ／Ｓ）によっても表されうる）である；
Ｚ２０はプロリンまたはアラニン残基（これは（Ｐ／Ａ）によっても表されうる）のいずれかである；
Ｚ３０は塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）、そしてリジン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、例えばリジンでありうる）または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）またはプロリン（Ｐ）、例えばＡ、Ｇ、Ｌ、ＶまたはＩ）である；
Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸、例えば脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えばＬ、Ｍ、Ｖ、ＳまたはＴ、例えばＬ、Ｍ、ＳまたはＶでありうるが、スルファターゼモチーフが標的ポリペプチドのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；
Ｘ２およびＸ３は、独立して、任意のアミノ酸でありうるが、通常は脂肪族アミノ酸、極性非荷電アミノ酸または硫黄含有アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えばＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧまたはＣ、例えばＳ、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧである。
抗ＣＤ２２重鎖および／または軽鎖のアミノ酸配列は、式：Ｘ１Ｚ１０Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０の少なくとも５アミノ酸の配列を与えるように修飾されることが可能であり、ここで、
Ｚ１０はシステインまたはセリンである；
Ｚ２０はプロリンまたはアラニン残基である；
Ｚ３０は脂肪族アミノ酸または塩基性アミノ酸である；
Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸であるが、異種スルファターゼモチーフが該ポリペプチドのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；
Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である；
該配列はＩｇ定常領域の溶媒接近可能ループ領域内に又はそれに隣接して存在し、該配列はＩｇ重鎖のＣ末端には存在しない。
該スルファターゼモチーフは、一般に、選択されたＦＧＥ（例えば、アルデヒドタグ付きポリペプチドが発現される宿主細胞内に存在するＦＧＥ、または無細胞インビトロ法においてアルデヒドタグ付きポリペプチドと接触されることになるＦＧＥ）により変換されうるように選択される。
例えば、ＦＧＥが真核生物ＦＧＥ（例えば哺乳類ＦＧＥ、例えばヒトＦＧＥ）である場合、スルファターゼモチーフは式：
Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３０ （Ｉ’’）
のものであることが可能であり、ここで、
Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸、例えば脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えばＬ、Ｍ、ＳまたはＶでありうるが、スルファターゼモチーフが標的ポリペプチドのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；
Ｘ２およびＸ３は、独立して、任意のアミノ酸、例えば脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えばＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧまたはＣ、例えばＳ、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧである；
Ｚ３０は塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）、そしてリジン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、例えばリジンでありうる）または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）またはプロリン（Ｐ）、例えばＡ、Ｇ、Ｌ、ＶまたはＩ）である。
スルファターゼの具体例には、ＬＣＴＰＳＲ（配列番号／／）、ＭＣＴＰＳＲ（配列番号／／）、ＶＣＴＰＳＲ（配列番号／／）、ＬＣＳＰＳＲ（配列番号／／）、ＬＣＡＰＳＲ（配列番号／／）、ＬＣＶＰＳＲ（配列番号／／）、ＬＣＧＰＳＲ（配列番号／／）、ＩＣＴＰＡＲ（配列番号／／）、ＬＣＴＰＳＫ（配列番号／／）、ＭＣＴＰＳＫ（配列番号／／）、ＶＣＴＰＳＫ（配列番号／／）、ＬＣＳＰＳＫ（配列番号／／）、ＬＣＡＰＳＫ（配列番号／／）、ＬＣＶＰＳＫ（配列番号／／）、ＬＣＧＰＳＫ（配列番号／／）、ＬＣＴＰＳＡ（配列番号／／）、ＩＣＴＰＡＡ（配列番号／／）、ＭＣＴＰＳＡ（配列番号／／）、ＶＣＴＰＳＡ（配列番号／／）、ＬＣＳＰＳＡ（配列番号／／）、ＬＣＡＰＳＡ（配列番号／／）、ＬＣＶＰＳＡ（配列番号／／）およびＬＣＧＰＳＡ（配列番号／／）が含まれる。
ＦＧｌｙ含有配列
修飾抗ＣＤ２２重鎖および／または軽鎖に対するＦＧＥの作用に際して、スルファターゼモチーフ内のセリンまたはシステインがＦＧｌｙに変換される。したがって、ＦＧｌｙ含有スルファターゼモチーフは式：
Ｘ１（ＦＧｌｙ）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （Ｉ’’’）
のものであることが可能であり、ここで、
ＦＧｌｙはホルミルグリシン残基である；
Ｚ２０はプロリンまたはアラニン残基（これは（Ｐ／Ａ）によっても表されうる）のいずれかである；
Ｚ３０は塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）、そしてリジン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、通常はリジンでありうる）または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）またはプロリン（Ｐ）、例えばＡ、Ｇ、Ｌ、ＶまたはＩ）である；
Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸、例えば脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えばＬ、Ｍ、Ｖ、ＳまたはＴ、例えばＬ、Ｍ、ＳまたはＶでありうるが、スルファターゼモチーフが標的ポリペプチドのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；
Ｘ２およびＸ３は、独立して、任意のアミノ酸、例えば脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えばＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧまたはＣ、例えばＳ、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧでありうる。
前記のとおり、ＦＧｌｙ残基を含有する修飾ポリペプチドは、ＦＧｌｙと薬物（例えば、前記のヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分を含有する薬物）との反応により薬物（例えば、メイタンシノイド）にコンジュゲート化されて、ＦＧｌｙ’含有スルファターゼモチーフを与えうる。本明細書中で用いるＦＧｌｙ’なる語は、メイタンシノイドのような薬物にカップリングされるスルファターゼモチーフの修飾アミノ酸残基（例えば、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基）を意味する。したがって、ＦＧｌｙ’含有スルファターゼモチーフは式：
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
のものであることが可能であり、ここで、
ＦＧｌｙ’は式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
Ｚ２０はプロリンまたはアラニン残基（これは（Ｐ／Ａ）によっても表されうる）のいずれかである；
Ｚ３０は塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）、そしてリジン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、通常はリジンでありうる）または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）またはプロリン（Ｐ）、例えばＡ、Ｇ、Ｌ、ＶまたはＩ）である；
Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸、例えば脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えばＬ、Ｍ、Ｖ、ＳまたはＴ、例えばＬ、ＭまたはＶでありうるが、スルファターゼモチーフが標的ポリペプチドのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；
Ｘ２およびＸ３は、独立して、任意のアミノ酸、例えば脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えばＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧまたはＣ、例えばＳ、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧでありうる。
ある実施形態においては、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基は抗ＣＤ２２抗体の重鎖定常領域のＣ末端に位置する。幾つかの場合においては、該重鎖定常領域は式：
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
の配列を含み、ここで、
ＦＧｌｙ’は式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
Ｚ２０はプロリンまたはアラニン残基（これは（Ｐ／Ａ）によっても表されうる）のいずれかである；
Ｚ３０は塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）、そしてリジン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、通常はリジンでありうる）または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）またはプロリン（Ｐ）、例えばＡ、Ｇ、Ｌ、ＶまたはＩ）である；
Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸、例えば脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えばＬ、Ｍ、Ｖ、ＳまたはＴ、例えばＬ、ＭまたはＶでありうるが、スルファターゼモチーフが標的ポリペプチドのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；
Ｘ２およびＸ３は、独立して、任意のアミノ酸、例えば脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えばＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧまたはＣ、例えばＳ、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧでありうる；
該配列はアミノ酸配列ＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫのＣ末端側に存在し、該配列は、天然野生型Ｉｇ重鎖定常領域には存在しない１、２、３、４、５個または５〜１０個のアミノ酸を含みうる。
ある実施形態においては、該重鎖定常領域は、Ｉｇ重鎖のＣ末端において、例えば天然ＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号／／）配列の代わりに、配列ＳＬＳＬＳＰＧＳＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＧＳを含む。
ある実施形態においては、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基は抗ＣＤ２２抗体の軽鎖定常領域に位置する。幾つかの実施形態においては、該軽鎖定常領域は式：
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
の配列を含み、ここで、
ＦＧｌｙ’は式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
Ｚ２０はプロリンまたはアラニン残基（これは（Ｐ／Ａ）によっても表されうる）のいずれかである；
Ｚ３０は塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）、そしてリジン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、通常はリジンでありうる）または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）またはプロリン（Ｐ）、例えばＡ、Ｇ、Ｌ、ＶまたはＩ）である；
Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸、例えば脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えばＬ、Ｍ、Ｖ、ＳまたはＴ、例えばＬ、ＭまたはＶでありうるが、スルファターゼモチーフが標的ポリペプチドのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；
Ｘ２およびＸ３は、独立して、任意のアミノ酸、例えば脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えばＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧまたはＣ、例えばＳ、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧでありうる；
該配列はアミノ酸配列ＫＶＤＮＡＬ（配列番号／／）のＣ末端側に存在し、および／またはアミノ酸配列ＱＳＧＮＳＱ（配列番号／／）のＮ末端側に存在する。
ある実施形態においては、該軽鎖定常領域は配列ＫＶＤＮＡＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＱＳＧＮＳＱ（配列番号／／）を含む。
ある実施形態においては、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基は抗ＣＤ２２抗体の重鎖ＣＨ１領域に位置する。ある実施形態においては、該重鎖ＣＨ１領域は式：
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
の配列を含み、ここで、
ＦＧｌｙ’は式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
Ｚ２０はプロリンまたはアラニン残基（これは（Ｐ／Ａ）によっても表されうる）のいずれかである；
Ｚ３０は塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）、そしてリジン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、通常はリジンでありうる）または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）またはプロリン（Ｐ）、例えばＡ、Ｇ、Ｌ、ＶまたはＩ）である；
Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸、例えば脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えばＬ、Ｍ、Ｖ、ＳまたはＴ、例えばＬ、ＭまたはＶでありうるが、スルファターゼモチーフが標的ポリペプチドのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；
Ｘ２およびＸ３は、独立して、任意のアミノ酸、例えば脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えばＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧまたはＣ、例えばＳ、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧでありうる；
該配列はアミノ酸配列ＳＷＮＳＧＡ（配列番号／／）のＣ末端側に存在し、および／またはアミノ酸配列ＧＶＨＴＦＰ（配列番号／／）のＮ末端側に存在する。
ある実施形態においては、該重鎖ＣＨ１領域は配列ＳＷＮＳＧＡＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＧＶＨＴＦＰ（配列番号／／）を含む。
修飾部位
前記のとおり、抗ＣＤ２２抗体のアミノ酸配列は、インビボ（例えば、細胞におけるａｌｄタグ含有タンパク質の翻訳時に）またはインビトロ（例えば、無細胞系においてａｌｄタグ含有タンパク質をＦＧＥと接触させることにより）でＦＧＥの作用によりＦＧｌｙ残基に変換（酸化）されうるセリンまたはシステイン残基を含有するスルファターゼモチーフを含むように修飾される。本開示のコンジュゲートを製造するために使用される抗ＣＤ２２ポリペプチドは、少なくとも、Ｉｇ定常領域、例えばＩｇ重鎖定常領域（例えば、少なくともＣＨ１ドメイン；少なくともＣＨ１およびＣＨ２ドメイン；ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン；またはＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４ドメイン）、またはＩｇ軽鎖定常領域を含む。そのようなＩｇポリペプチドは本明細書においては「標的Ｉｇポリペプチド」または「標的抗ＣＤ２２抗体」または「標的抗ＣＤ２２ Ｉｇポリペプチド」と称される。
スルファターゼモチーフが導入される抗ＣＤ２２抗体内の部位は任意の簡便な部位でありうる。前記のとおり、標的抗ＣＤ２２ポリペプチドの天然アミノ酸配列の修飾の度合は、（例えば、ＮまたはＣ末端に対して）挿入、欠失、置換および／または付加されるアミノ酸残基の数を最小にするように最小化される。標的抗ＣＤ２２ポリペプチドのアミノ酸配列修飾の度合の最小化は、そのような修飾が抗ＣＤ２２の機能および／または構造に及ぼしうる影響を最小にしうる。
抗ＣＤ２２抗体重鎖定常領域は、任意の重鎖アイソタイプ、非天然Ｉｇ重鎖定常領域（コンセンサスＩｇ重鎖定常領域を含む）のＩｇ定常領域を含みうる。Ｉｇ定常領域は、アルデヒドタグを含むように修飾されることが可能であり、ここで、アルデヒドタグはＩｇ定常領域の溶媒接近可能ループ領域内に又はそれに隣接して存在する。前記のスルファターゼモチーフのアミノ酸配列を得るために、Ｉｇ定常領域は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５もしくは１６アミノ酸または１６アミノ酸以上の挿入および／または置換により修飾されうる。
幾つかの場合においては、アルデヒドタグ付き抗ＣＤ２２抗体はアルデヒドタグ付きＩｇ重鎖定常領域（例えば、少なくともＣＨ１ドメイン；少なくともＣＨ１およびＣＨ２ドメイン；ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン；またはＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４ドメイン）を含む。アルデヒドタグ付きＩｇ重鎖定常領域は、ＦＧｌｙ修飾Ｉｇポリペプチドを得るためにＦＧＥにより修飾されうる少なくとも１つのスルファターゼモチーフを含むように修飾された、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４アイソタイプ重鎖またはその任意のアロタイプ変異体の重鎖定常領域配列、例えば、ヒト重鎖定常領域配列もしくはサル重鎖定常領域配列、ハイブリッド重鎖定常領域、合成重鎖定常領域、またはコンセンサス重鎖定常領域配列などを含みうる。Ｉｇ重鎖のアロタイプ変異体は当技術分野で公知である。例えば、ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｅｆｒａｎｃ（２００９）ＭＡｂｓ １：４を参照されたい。
幾つかの場合においては、アルデヒドタグ付き抗ＣＤ２２抗体はアルデヒドタグ付きＩｇ軽鎖定常領域を含む。アルデヒド標識Ｉｇ軽鎖定常領域は、ＦＧｌｙ修飾抗ＣＤ２２抗体ポリペプチドを得るためにＦＧＥにより修飾されうる少なくとも１つのスルファターゼモチーフを含むように修飾された、カッパ軽鎖、ラムダ軽鎖の定常領域配列、例えば、ヒトカッパまたはラムダ軽鎖定常領域、ハイブリッド軽鎖定常領域、合成軽鎖定常領域またはコンセンサス軽鎖定常領域配列などを含みうる。典型的な定常領域には、ヒトガンマ１およびガンマ３領域が含まれる。スルファターゼモチーフを除いて、修飾定常領域は野生型アミノ酸配列を有してもよく、またはそれは、野生型アミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一）であるアミノ酸配列を有しうる。
幾つかの実施形態においては、スルファターゼモチーフはＩｇポリペプチド重鎖のＣ末端以外の又はそれに加えた位置に存在する。前記のとおり、単離されたアルデヒドタグ付き抗ＣＤ２２ポリペプチドは、前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾された重鎖定常領域を含むことが可能であり、ここで、該スルファターゼモチーフは抗ＣＤ２２ポリペプチド重鎖定常領域の表面接近可能ループ領域に又はそれに隣接して存在する。
幾つかの場合においては、標的抗ＣＤ２２免疫グロブリンは前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１２２−１２７；２）アミノ酸１３７−１４３；３）アミノ酸１５５−１５８；４）アミノ酸１６３−１７０；５）アミノ酸１６３−１８３；６）アミノ酸１７９−１８３；７）アミノ酸１９０−１９２；８）アミノ酸２００−２０２；９）アミノ酸１９９−２０２；１０）アミノ酸２０８−２１２；１１）アミノ酸２２０−２４１；１２）アミノ酸２４７−２５１；１３）アミノ酸２５７−２６１；１４）アミノ酸２６９−２７７；１５）アミノ酸２７１−２７７；１６）アミノ酸２８４−２８５；１７）アミノ酸２８４−２９２；１８）アミノ酸２８９−２９１；１９）アミノ酸２９９−３０３；２０）アミノ酸３０９−３１３；２１）アミノ酸３２０−３２２；２２）アミノ酸３２９−３３５；２３）アミノ酸３４１−３４９；２４）アミノ酸３４２−３４８；２５）アミノ酸３５６−３６５；２６）アミノ酸３７７−３８１；２７）アミノ酸３８８−３９４；２８）アミノ酸３９８−４０７；２９）アミノ酸４３３−４５１；および３０）アミノ酸４４６−４５１の１以上に対応するＩｇＧ１重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、図９Ｂに示されているヒトＩｇＧのアミノ酸の番号付けに基づく。
幾つかの場合においては、標的抗ＣＤ２２免疫グロブリンは前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；および３０）アミノ酸３２４−３３１の１以上に対応するＩｇＧ１重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（ヒトＩｇＧ１定常領域；図９Ｂに示されている配列）に記載されているヒトＩｇＧ１のアミノ酸の番号付けに基づく。
ＩｇＧ１重鎖の典型的な表面接近可能ループ領域には以下のものが含まれる：図９Ａおよび９Ｂに示されている、１）ＡＳＴＫＧＰ（配列番号／／）；２）ＫＳＴＳＧＧＴ（配列番号／／）；３）ＰＥＰＶ（配列番号／／）；４）ＮＳＧＡＬＴＳＧ（配列番号／／）；５）ＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬ（配列番号／／）；６）ＱＳＳＧＬ（配列番号／／）；７）ＶＴＶ；８）ＱＴＹ；９）ＴＱＴＹ（配列番号／／）；１０）ＨＫＰＳＮ（配列番号／／）；１１）ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号／／）；１２）ＦＰＰＫＰ（配列番号／／）；１３）ＩＳＲＴＰ（配列番号／／）；１４）ＤＶＳＨＥＤＰＥＶ（配列番号／／）；１５）ＳＨＥＤＰＥＶ（配列番号／／）；１６）ＤＧ；１７）ＤＧＶＥＶＨＮＡＫ（配列番号／／）；１８）ＨＮＡ；１９）ＱＹＮＳＴ（配列番号／／）；２０）ＶＬＴＶＬ（配列番号／／）；２１）ＧＫＥ；２２）ＮＫＡＬＰＡＰ（配列番号／／）；２３）ＳＫＡＫＧＱＰＲＥ（配列番号／／）；２４）ＫＡＫＧＱＰＲ（配列番号／／）；２５）ＰＰＳＲＫＥＬＴＫＮ（配列番号／／）；２６）ＹＰＳＤＩ（配列番号／／）；２７）ＮＧＱＰＥＮＮ（配列番号／／）；２８）ＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳ（配列番号／／）；２９）ＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号／／）；および３０）ＳＬＳＰＧＫ（配列番号／／）。
幾つかの場合においては、標的免疫グロブリンは前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１３−２４；３）アミノ酸３３−３７；４）アミノ酸４３−５４；５）アミノ酸５８−６３；６）アミノ酸６９−７１；７）アミノ酸７８−８０；８）８７−８９；９）アミノ酸９５−９６；１０）１１４−１１８；１１）１２２−１２６；１２）１３４−１３６；１３）１４４−１５２；１４）１５９−１６７；１５）１７５−１７６；１６）１８４−１８８；１７）１９５−１９７；１８）２０４−２１０；１９）２１６−２２４；２０）２３１−２３３；２１）２３７−２４１；２２）２５２−２５６；２３）２６３−２６９；２４）２７３−２８２；２５）アミノ酸２９９−３０２の１以上に対応するＩｇＧ２重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（ヒトＩｇＧ２定常領域；図９Ｂにも示されている）に記載されているアミノ酸配列の番号付けに基づく。
ＩｇＧ２重鎖の典型的な表面接近可能ループ領域には以下のものが含まれる：図９Ｂに示されている、１）ＡＳＴＫＧＰ（配列番号／／）；２）ＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡ（配列番号／／）；３）ＦＰＥＰＶ（配列番号／／）；４）ＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰ（配列番号／／）；５）ＱＳＳＧＬＹ（配列番号／／）；６）ＶＴＶ；７）ＴＱＴ；８）ＨＫＰ；９）ＤＫ；１０）ＶＡＧＰＳ（配列番号／／）；１１）ＦＰＰＫＰ（配列番号／／）；１２）ＲＴＰ；１３）ＤＶＳＨＥＤＰＥＶ（配列番号／／）；１４）ＤＧＶＥＶＨＮＡＫ（配列番号／／）；１５）ＦＮ；１６）ＶＬＴＶＶ（配列番号／／）；１７）ＧＫＥ；１８）ＮＫＧＬＰＡＰ（配列番号／／）；１９）ＳＫＴＫＧＱＰＲＥ（配列番号／／）；２０）ＰＰＳ；２１）ＭＴＫＮＱ（配列番号／／）；２２）ＹＰＳＤＩ（配列番号／／）；２３）ＮＧＱＰＥＮＮ（配列番号／／）；２４）ＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳ（配列番号／／）；２５）ＧＮＶＦ（配列番号／／）；および２６）ＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号／／）。
幾つかの場合においては、標的免疫グロブリンは前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１３−２２；３）アミノ酸３３−３７；４）アミノ酸４３−６１；５）アミノ酸７１；６）アミノ酸７８−８０；７）８７−９１；８）アミノ酸９７−１０６；９）１１１−１１５；１０）１４７−１６７；１１）１７３−１７７；１６）１８５−１８７；１３）１９５−２０３；１４）２１０−２１８；１５）２２６−２２７；１６）２３８−２３９；１７）２４６−２４８；１８）２５５−２６１；１９）２６７−２７５；２０）２８２−２９１；２１）アミノ酸３０３−３０７；２２）アミノ酸３１３−３２０；２３）アミノ酸３２４−３３３；２４）アミノ酸３５０−３５２；２５）アミノ酸３５９−３６５；および２６）アミノ酸３７２−３７７の１以上に対応するＩｇＧ３重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（ヒトＩｇＧ３定常領域；図９Ｂにも示されている）に記載されているアミノ酸配列の番号付けに基づく。
ＩｇＧ３重鎖の典型的な表面接近可能ループ領域には以下のものが含まれる：図９Ｂに示されている、１）ＡＳＴＫＧＰ（配列番号／／）；２）ＰＣＳＲＳＴＳＧＧＴ（配列番号／／）；３）ＦＰＥＰＶ（配列番号／／）；４）ＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧ（配列番号／／）；５）Ｖ；６）ＴＱＴ；７）ＨＫＰＳＮ（配列番号／／）；８）ＲＶＥＬＫＴＰＬＧＤ（配列番号／／）；９）ＣＰＲＣＰＫＰ（配列番号／／）；１０）ＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号／／）；１１）ＦＰＰＫＰ（配列番号／／）；１２）ＲＴＰ；１３）ＤＶＳＨＥＤＰＥＶ（配列番号／／）；１４）ＤＧＶＥＶＨＮＡＫ（配列番号／／）；１５）ＹＮ；１６）ＶＬ；１７）ＧＫＥ；１８）ＮＫＡＬＰＡＰ（配列番号／／）；１９）ＳＫＴＫＧＱＰＲＥ（配列番号／／）；２０）ＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮ（配列番号／／）；２１）ＹＰＳＤＩ（配列番号／／）；２２）ＳＳＧＱＰＥＮＮ（配列番号／／）；２３）ＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳ（配列番号／／）；２４）ＧＮＩ；２５）ＨＥＡＬＨＮＲ（配列番号／／）；および２６）ＳＬＳＰＧＫ（配列番号／／）。
幾つかの場合においては、標的免疫グロブリンは前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−５；２）アミノ酸１２−２３；３）アミノ酸３２−３６；４）アミノ酸４２−５３；５）アミノ酸５７−６２；６）アミノ酸６８−７０；７）アミノ酸７７−７９；８）アミノ酸８６−８８；９）アミノ酸９４−９５；１０）アミノ酸１０１−１０２；１１）アミノ酸１０８−１１８；１２）アミノ酸１２２−１２６；１３）アミノ酸１３４−１３６；１４）アミノ酸１４４−１５２；１５）アミノ酸１５９−１６７；１６）アミノ酸１７５−１７６；１７）アミノ酸１８５−１８６；１８）アミノ酸１９６−１９８；１９）アミノ酸２０５−２１１；２０）アミノ酸２１７−２２６；２１）アミノ酸２３２−２４１；２２）アミノ酸２５３−２５７；２３）アミノ酸２６４−２６５；２４）２６９−２７０；２５）アミノ酸２７４−２８３；２６）アミノ酸３００−３０３；２７）アミノ酸３９９−４１７の１以上に対応するＩｇＧ４重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（ヒトＩｇＧ４定常領域；図９Ｂにも示されている）に記載されているアミノ酸配列の番号付けに基づく。
ＩｇＧ４重鎖の典型的な表面接近可能ループ領域には以下のものが含まれる：図９Ｂに示されている、１）ＳＴＫＧＰ（配列番号／／）；２）ＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡ（配列番号／／）；３）ＦＰＥＰＶ（配列番号／／）；４）ＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰ（配列番号／／）；５）ＱＳＳＧＬＹ（配列番号／／）；６）ＶＴＶ；７）ＴＫＴ；８）ＨＫＰ；９）ＤＫ；１０）ＹＧ；１１）ＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳ（配列番号／／）；１２）ＦＰＰＫＰ（配列番号／／）；１３）ＲＴＰ；１４）ＤＶＳＱＥＤＰＥＶ（配列番号／／）；１５）ＤＧＶＥＶＨＮＡＫ（配列番号／／）；１６）ＦＮ；１７）ＶＬ；１８）ＧＫＥ；１９）ＮＫＧＬＰＳＳ（配列番号／／）；２０）ＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰ（配列番号／／）；２１）ＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮ（配列番号／／）；２２）ＹＰＳＤＩ（配列番号／／）；２３）ＮＧ；２４）ＮＮ；２５）ＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳ（配列番号／／）；２６）ＧＮＶＦ（配列番号／／）；および２７）ＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号／／）。
幾つかの場合においては、標的免疫グロブリンは前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−１３；２）アミノ酸１７−２１；３）アミノ酸２８−３２；４）アミノ酸４４−５４；５）アミノ酸６０−６６；６）アミノ酸７３−７６；７）アミノ酸８０−８２；８）アミノ酸９０−９１；９）アミノ酸１２３−１２５；１０）アミノ酸１３０−１３３；１１）アミノ酸１３８−１４２；１２）アミノ酸１５１−１５８；１３）アミノ酸１６５−１７４；１４）アミノ酸１８１−１８４；１５）アミノ酸１９２−１９５；１６）アミノ酸１９９；１７）アミノ酸２０９−２１０；１８）アミノ酸２２２−２４５；１９）アミノ酸２５２−２５６；２０）アミノ酸２６６−２７６；２１）アミノ酸２９３−２９４；２２）アミノ酸３０１−３０４；２３）アミノ酸３１７−３２０；２４）アミノ酸３２９−３５３の１以上に対応するＩｇＡ重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（ヒトＩｇＡ；図９Ｂにも示されている）に記載されているアミノ酸配列の番号付けに基づく。
ＩｇＡ重鎖の典型的な表面接近可能ループ領域には以下のものが含まれる：図９Ｂに示されている、１）ＡＳＰＴＳＰＫＶＦＰＬＳＬ（配列番号／／）；２）ＱＰＤＧＮ（配列番号／／）；３）ＶＱＧＦＦＰＱＥＰＬ（配列番号／／）；４）ＳＧＱＧＶＴＡＲＮＦＰ（配列番号／／）；５）ＳＧＤＬＹＴＴ（配列番号／／）；６）ＰＡＴＱ（配列番号／／）；７）ＧＫＳ；８）ＹＴ；９）ＣＨＰ；１０）ＨＲＰＡ（配列番号／／）；１１）ＬＬＧＳＥ（配列番号／／）；１２）ＧＬＲＤＡＳＧＶ（配列番号／／）；１３）ＳＳＧＫＳＡＶＱＧＰ（配列番号／／）；１４）ＧＣＹＳ（配列番号／／）；１５）ＣＡＥＰ（配列番号／／）；１６）ＰＥ；１７）ＳＧＮＴＦＲＰＥＶＨＬＬＰＰＰＳＥＥＬＡＬＮＥＬ（配列番号／／）；１８）ＡＲＧＦＳ（配列番号／／）；１９）ＱＧＳＱＥＬＰＲＥＫＹ（配列番号／／）；２０）ＡＶ；２１）ＡＡＥＤ（配列番号／／）；２２）ＨＥＡＬ（配列番号／／）；および２３）ＩＤＲＬＡＧＫＰＴＨＶＮＶＳＶＶＭＡＥＶＤＧＴＣＹ（配列番号／／）。
スルファターゼモチーフはＩｇ重鎖のそのような修飾部位のこれらのアミノ酸配列内に又はそれらに隣接して提供されうる。例えば、これらの修飾部位の隣接Ｎ末端側および／または隣接Ｃ末端側にスルファターゼモチーフを提供するために、Ｉｇ重鎖ポリペプチドはこれらのアミノ酸配列の１以上において修飾されうる（例えば、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む）。代替的または追加的に、Ｉｇ重鎖修飾部位のいずれかの２つの残基の間にスルファターゼモチーフを提供するために、Ｉｇ重鎖ポリペプチドはこれらのアミノ酸配列の１以上において修飾されうる（例えば、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む）。幾つかの実施形態においては、Ｉｇ重鎖ポリペプチドは、２つのモチーフを含むように修飾されることが可能であり、該モチーフは互いに隣接していてもよく、あるいは１、２、３、４個またはそれ以上（例えば、約１〜約２５個、約２５〜約５０個、または約５０〜約１００個、またはそれ以上）のアミノ酸によって隔てられていてもよい。代替的または追加的に、天然アミノ酸配列がスルファターゼモチーフ配列のアミノ酸残基の１以上を提供する場合、Ｉｇ重鎖ポリペプチドアミノ酸配列の修飾部位の選択されたアミノ酸残基を修飾して、該修飾部位においてスルファターゼモチーフを得ることが可能である（例えば、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む）。
したがって、スルファターゼモチーフを得るために、表面接近可能ループ領域のアミノ酸配列が修飾されることが可能であり、ここで、該修飾は挿入、欠失および／または置換を含みうる。例えば、該修飾がＣＨ１ドメイン内に存在する場合、表面接近可能ループ領域はアミノ酸配列ＮＳＧＡＬＴＳＧ（配列番号／／）を有することが可能であり、アルデヒドタグ付き配列は例えばＮＳＧＡＬＣＴＰＳＲＧ（配列番号／／）であることが可能であり、例えば、ここで、ＮＳＧＡＬＴＳＧ（配列番号／／）配列の「ＴＳ」残基は「ＣＴＰＳＲ」（配列番号／／）で置換されていて、スルファターゼモチーフは配列ＬＣＴＰＳＲ（配列番号／／）を有する。もう１つの例としては、該修飾がＣＨ２ドメイン内に存在する場合、表面接近可能ループ領域はアミノ酸配列ＮＫＡＬＰＡＰ（配列番号／／）を有することが可能であり、アルデヒドタグ付き配列は例えばＮＬＣＴＰＳＲＡＰ（配列番号／／）であることが可能であり、例えば、ここで、ＮＫＡＬＰＡＰ（配列番号／／）配列の「ＫＡＬ」残基は「ＬＣＴＰＳＲ」（配列番号／／）で置換されていて、スルファターゼモチーフは配列ＬＣＴＰＳＲ（配列番号／／）を有する。もう１つの例としては、該修飾がＣＨ２／ＣＨ３メイン内に存在する場合、表面接近可能ループ領域はアミノ酸配列ＫＡＫＧＱＰＲ（配列番号／／）を有することが可能であり、アルデヒドタグ付き配列は例えばＫＡＫＧＬＣＴＰＳＲ（配列番号／／）であることが可能であり、例えば、ここで、ＫＡＫＧＱＰＲ（配列番号／／）配列の「ＧＱＰ」残基は「ＬＣＴＰＳ」（配列番号／／）で置換されていて、スルファターゼモチーフは配列ＬＣＴＰＳＲ（配列番号／／）を有する。
前記のとおり、単離されたアルデヒドタグ付き抗ＣＤ２２ Ｉｇポリペプチドは、前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾された軽鎖定常領域を含むことが可能であり、ここで、該スルファターゼモチーフはＩｇポリペプチド軽鎖定常領域の表面接近可能ループ領域内に又はそれに隣接して存在する。軽鎖定常領域の表面接近可能ループ領域の例示的典型例は図９Ａおよび９Ｃに示されている。
幾つかの場合においては、標的免疫グロブリンは前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１３０−１３５；２）アミノ酸１４１−１４３；３）アミノ酸１５０；４）アミノ酸１６２−１６６；５）アミノ酸１６３−１６６；６）アミノ酸１７３−１８０；７）アミノ酸１８６−１９４；８）アミノ酸２１１−２１２；９）アミノ酸２２０−２２５；１０）アミノ酸２３３−２３６の１以上に対応するＩｇ軽鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、図９Ｃに示されているヒトカッパ軽鎖のアミノ酸配列の番号付けに基づく。幾つかの場合においては、標的免疫グロブリンは前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１以上に対応するＩｇ軽鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは配列番号／／（ヒトカッパ軽鎖；図９Ｃに記載されているアミノ酸配列）に基づく。
Ｉｇ軽鎖（例えば、ヒトカッパ軽鎖）の典型的な表面接近可能ループ領域には以下のものが含まれる：図９Ａおよび９Ｃに示されている、１）ＲＴＶＡＡＰ（配列番号／／）；２）ＰＰＳ；３）Ｇｌｙ（例えば、図９Ｃに示されているヒトカッパ軽鎖配列の１５０位のＧｌｙを参照されたい）；４）ＹＰＲＥＡ（配列番号／／）；５）ＰＲＥＡ（配列番号／／）；６）ＤＮＡＬＱＳＧＮ（配列番号／／）；７）ＴＥＱＤＳＫＤＳＴ（配列番号／／）；８）ＨＫ；９）ＨＱＧＬＳＳ（配列番号／／）；および１０）ＲＧＥＣ（配列番号／／）。
Ｉｇラムダ軽鎖の典型的な表面接近可能ループ領域には以下のものが含まれる：図９Ｃに示されている、ＱＰＫＡＡＰ（配列番号／／）、ＰＰＳ、ＮＫ、ＤＦＹＰＧＡＶ（配列番号／／）、ＤＳＳＰＶＫＡＧ（配列番号／／）、ＴＴＰ、ＳＮ、ＨＫＳ、ＥＧおよびＡＰＴＥＣＳ（配列番号／／）。
幾つかの場合においては、標的免疫グロブリンは前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸１２１−２２；４）アミノ酸３１−３７；５）アミノ酸４４−５１；６）アミノ酸５５−５７；７）アミノ酸６１−６２；８）アミノ酸８１−８３；９）アミノ酸９１−９２；１０）アミノ酸１０２−１０５の１以上に対応するラットＩｇ軽鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（図９Ｃに示されている配列）に示されているラット軽鎖のアミノ酸配列の番号付けに基づく。
幾つかの場合においては、スルファターゼモチーフは抗ＣＤ２２重鎖定常領域のＣＨ１領域内に導入される。幾つかの場合においては、スルファターゼモチーフ、抗ＣＤ２２重鎖のＣ末端またはその付近（例えば、該Ｃ末端から１〜１０アミノ酸以内）に導入される。幾つかの場合においては、スルファターゼモチーフは軽鎖定常領域内に導入される。
幾つかの場合においては、スルファターゼモチーフは抗ＣＤ２２重鎖定常領域のＣＨ１領域内、例えば、図９Ａに示されているＩｇＧ１重鎖アミノ酸配列のアミノ酸１２１−２１９内に導入される。例えば、幾つかの場合においては、スルファターゼモチーフはアミノ酸配列：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥ（配列番号／／）内に導入される。例えば、これらの実施形態の幾つかにおいては、アミノ酸配列ＧＡＬＴＳＧＶＨ（配列番号／／）はＧＡＬＣＴＰＳＲＧＶＨ（配列番号／／）へと修飾され、ここで、スルファターゼモチーフはＬＣＴＰＳＲ（配列番号／／）である。
幾つかの場合においては、スルファターゼモチーフは抗ＣＤ２２重鎖のＣ末端またはその付近に導入され、例えば、スルファターゼモチーフは抗ＣＤ２２重鎖のＣ末端から１アミノ酸、２アミノ酸（ａａ）、３ａａ、４ａａ、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａまたは１０ａａ以内に導入される。１つの非限定的な例として、抗ＣＤ２２重鎖のＣ末端リジン残基はアミノ酸配列ＳＬＣＴＰＳＲＧＳ（配列番号／／）により置換されうる。
幾つかの場合においては、スルファターゼモチーフは抗ＣＤ２２抗体の軽鎖の定常領域内に導入される。１つの非限定的な例においては、幾つかの場合には、スルファターゼモチーフは抗ＣＤ２２抗体の軽鎖の定常領域内に導入され、ここで、スルファターゼモチーフはＫＶＤＮＡＬ（配列番号／／）のＣ末端側および／またはＱＳＧＮＳＱ（配列番号／／）のＮ末端側に存在する。例えば、幾つかの場合においては、スルファターゼモチーフはＬＣＴＰＳＲ（配列番号／／）であり、抗ＣＤ２２軽鎖はアミノ酸配列ＫＶＤＮＡＬＬＣＴＰＳＲＱＳＧＮＳＱ（配列番号／／）を含む。
典型的な抗ＣＤ２２抗体
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２エピトープ（例えば、図８Ａ〜８Ｃに示されているＣＤ２２アミノ酸配列のアミノ酸１−８４７内、アミノ酸１−７５９内、アミノ酸１−７５１内またはアミノ酸１−６７０内のエピトープ）への結合に関して、ＩＹＤＭＳ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号／／）から選択される重鎖ＶＨ ＣＤＲを含む抗体と競合する。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；および３０）アミノ酸３２４−３３１の１以上に対応するＩｇＧ１重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（図９Ｂに示されているヒトＩｇＧ１定常領域）に示されているヒトＩｇＧ１のアミノ酸の番号付けに基づく。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含み、例えば、ここで、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１以上に対応するＩｇカッパ定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは配列番号／／（ヒトカッパ軽鎖；図９Ｃに示されているアミノ酸配列）に基づく。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２エピトープ（例えば、図８Ａ〜８Ｃに示されているＣＤ２２アミノ酸配列のアミノ酸１−８４７内、アミノ酸１−７５９内、アミノ酸１−７５１内またはアミノ酸１−６７０内のエピトープ）への結合に関して、ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＴＳＩＬＨＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号／／）から選択される軽鎖ＣＤＲを含む抗体と競合する。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１２２−１２７；２）アミノ酸１３７−１４３；３）アミノ酸１５５−１５８；４）アミノ酸１６３−１７０；５）アミノ酸１６３−１８３；６）アミノ酸１７９−１８３；７）アミノ酸１９０−１９２；８）アミノ酸２００−２０２；９）アミノ酸１９９−２０２；１０）アミノ酸２０８−２１２；１１）アミノ酸２２０−２４１；１２）アミノ酸２４７−２５１；１３）アミノ酸２５７−２６１；１４）アミノ酸２６９−２７７；１５）アミノ酸２７１−２７７；１６）アミノ酸２８４−２８５；１７）アミノ酸２８４−２９２；１８）アミノ酸２８９−２９１；１９）アミノ酸２９９−３０３；２０）アミノ酸３０９−３１３；２１）アミノ酸３２０−３２２；２２）アミノ酸３２９−３３５；２３）アミノ酸３４１−３４９；２４）アミノ酸３４２−３４８；２５）アミノ酸３５６−３６５；２６）アミノ酸３７７−３８１；２７）アミノ酸３８８−３９４；２８）アミノ酸３９８−４０７；２９）アミノ酸４３３−４５１；および３０）アミノ酸４４６−４５１の１以上に対応するＩｇＧ１重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、図９Ｂに示されているヒトＩｇＧ１の番号付けに基づく。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含み、例えば、ここで、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１以上に対応するＩｇカッパ定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは配列番号／／（ヒトカッパ軽鎖；図９Ｃに示されているアミノ酸配列）に基づく。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２エピトープ（例えば、図８Ａ〜８Ｃに示されているＣＤ２２アミノ酸配列のアミノ酸１−８４７内、アミノ酸１−７５９内、アミノ酸１−７５１内またはアミノ酸１−６７０内のエピトープ）への結合に関して、ＶＨ ＣＤＲ：ＩＹＤＭＳ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号／／）を含む抗体と競合する。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；および３０）アミノ酸３２４−３３１の１以上に対応するＩｇＧ１重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（図９Ｂに示されているヒトＩｇＧ１定常領域）に示されているヒトＩｇＧ１のアミノ酸の番号付けに基づく。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含み、例えば、ここで、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１以上に対応するＩｇカッパ定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは配列番号／／（ヒトカッパ軽鎖；図９Ｃに示されているアミノ酸配列）に基づく。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２エピトープ（例えば、図８Ａ〜８Ｃに示されているＣＤ２２アミノ酸配列のアミノ酸１−８４７内、アミノ酸１−７５９内、アミノ酸１−７５１内またはアミノ酸１−６７０内のエピトープ）への結合に関して、ＶＬ ＣＤＲ：ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＴＳＩＬＨＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号／／）を含む抗体と競合する。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；および３０）アミノ酸３２４−３３１の１以上に対応するＩｇＧ１重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（図９Ｂに示されているヒトＩｇＧ１定常領域）に示されているヒトＩｇＧ１のアミノ酸の番号付けに基づく。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含み、例えば、ここで、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１以上に対応するＩｇカッパ定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは配列番号／／（ヒトカッパ軽鎖；図９Ｃに示されているアミノ酸配列）に基づく。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２エピトープ（例えば、図８Ａ〜８Ｃに示されているＣＤ２２アミノ酸配列のアミノ酸１−８４７内、アミノ酸１−７５９内、アミノ酸１−７５１内またはアミノ酸１−６７０内のエピトープ）への結合に関して、ＶＨ ＣＤＲ：ＩＹＤＭＳ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号／／）ならびにＶＬ ＣＤＲ：ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＴＳＩＬＨＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号／／）を含む抗体と競合する。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；および３０）アミノ酸３２４−３３１の１以上に対応するＩｇＧ１重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（図９Ｂに示されているヒトＩｇＧ１定常領域）に示されているヒトＩｇＧ１のアミノ酸の番号付けに基づく。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含み、例えば、ここで、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１以上に対応するＩｇカッパ定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは配列番号／／（ヒトカッパ軽鎖；図９Ｃに示されているアミノ酸配列）に基づく。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体はＶＨ ＣＤＲ：ＩＹＤＭＳ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号／／）を含む。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；および３０）アミノ酸３２４−３３１の１以上に対応するＩｇＧ１重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（図９Ｂに示されているヒトＩｇＧ１定常領域）に示されているヒトＩｇＧ１のアミノ酸の番号付けに基づく。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含み、例えば、ここで、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１以上に対応するＩｇカッパ定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは配列番号／／（ヒトカッパ軽鎖；図９Ｃに示されているアミノ酸配列）に基づく。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体はＶＬ ＣＤＲ：ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＴＳＩＬＨＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号／／）を含む。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；および３０）アミノ酸３２４−３３１の１以上に対応するＩｇＧ１重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（図９Ｂに示されているヒトＩｇＧ１定常領域）に示されているヒトＩｇＧ１のアミノ酸の番号付けに基づく。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含み、例えば、ここで、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１以上に対応するＩｇカッパ定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは配列番号／／（ヒトカッパ軽鎖；図９Ｃに示されているアミノ酸配列）に基づく。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体はＶＨ ＣＤＲ：ＩＹＤＭＳ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号／／）ならびにＶＬ ＣＤＲ：ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号／／）、ＹＴＳＩＬＨＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号／／）およびＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号／／）を含む。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；および３０）アミノ酸３２４−３３１の１以上に対応するＩｇＧ１重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（図９Ｂに示されているヒトＩｇＧ１定常領域）に示されているヒトＩｇＧ１のアミノ酸の番号付けに基づく。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含み、例えば、ここで、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１以上に対応するＩｇカッパ定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは配列番号／／（ヒトカッパ軽鎖；図９Ｃに示されているアミノ酸配列）に基づく。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、以下のアミノ酸配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号／／）を含む抗ＣＤ２２ ＶＨ領域内に存在するＶＨ ＣＤＲを含む。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；および３０）アミノ酸３２４−３３１の１以上に対応するＩｇＧ１重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（図９Ｂに示されているヒトＩｇＧ１定常領域）に示されているヒトＩｇＧ１のアミノ酸の番号付けに基づく。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含み、例えば、ここで、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１以上に対応するＩｇカッパ定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは配列番号／／（ヒトカッパ軽鎖；図９Ｃに示されているアミノ酸配列）に基づく。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、以下のアミノ酸配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＱＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号／／）を含む抗ＣＤ２２ ＶＬ領域内に存在するＶＬ ＣＤＲを含む。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；および３０）アミノ酸３２４−３３１の１以上に対応するＩｇＧ１重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（図９Ｂに示されているヒトＩｇＧ１定常領域）に示されているヒトＩｇＧ１のアミノ酸の番号付けに基づく。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含み、例えば、ここで、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１以上に対応するＩｇカッパ定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは配列番号／／（ヒトカッパ軽鎖；図９Ｃに示されているアミノ酸配列）に基づく。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号／／）内に存在するＶＨ ＣＤＲ、およびＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＱＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号／／）内に存在するＶＬ ＣＤＲを含む。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体はヒト化されている。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；および３０）アミノ酸３２４−３３１の１以上に対応するＩｇＧ１重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（図９Ｂに示されているヒトＩｇＧ１定常領域）に示されているヒトＩｇＧ１のアミノ酸の番号付けに基づく。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含み、例えば、ここで、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１以上に対応するＩｇカッパ定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは配列番号／／（ヒトカッパ軽鎖；図９Ｃに示されているアミノ酸配列）に基づく。
幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体はＶＨアミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号／／）を含む。幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体はＶＬアミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＱＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号／／）を含む。幾つかの場合においては、適切な抗ＣＤ２２抗体はＶＨアミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号／／）およびＶＬアミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＱＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号／／）を含む。幾つかの場合においては、該抗ＣＤ２２抗体は前記のスルファターゼモチーフを含むように修飾され、ここで、該修飾は１以上のアミノ酸残基の挿入、欠失および／または置換を含む。ある実施形態においては、スルファターゼモチーフは、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；および３０）アミノ酸３２４−３３１の１以上に対応するＩｇＧ１重鎖定常領域の領域内に又はそれに隣接して存在し、ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号／／（図９Ｂに示されているヒトＩｇＧ１定常領域）に示されているヒトＩｇＧ１のアミノ酸の番号付けに基づく。
ポリペプチドへのコンジュゲート化のための薬物
本開示は薬物−ポリペプチドコンジュゲートを提供する。薬物の例には、小分子薬物、例えば癌化学療法剤が含まれる。例えば、該ポリペプチドが、腫瘍細胞に対する特異性を有する抗体（またはそのフラグメント）である場合、該抗体は、微小管作用剤のような癌化学療法剤に後にコンジュゲート化される修飾アミノ酸を含むように、本明細書に記載されているとおりに修飾されうる。ある実施形態においては、該薬物はメイタンシノイドであり、これは以下の構造を有する。
Figure 0006855496
前記のとおり、ある実施形態においては、Ｌは、式−（Ｌ１）ａ−（Ｌ２）ｂ−（Ｌ３）ｃ−（Ｌ４）ｄ−により示されるリンカーであり、ここで、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、それぞれ独立して、リンカー単位である。ある実施形態においては、Ｌ１はカップリング部分、例えばヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分（例えば、前記式（Ｉ）において示されるもの）に結合している。ある実施形態においては、Ｌ２は、存在する場合には、Ｗ１（メイタンシノイド）に結合している。ある実施形態においては、Ｌ３は、存在する場合には、Ｗ１（メイタンシノイド）に結合している。ある実施形態においては、Ｌ４は、存在する場合には、Ｗ１（メイタンシノイド）に結合している。
前記のとおり、ある実施形態においては、リンカー：−（Ｌ１）ａ−（Ｌ２）ｂ−（Ｌ３）ｃ−（Ｌ４）ｄ−は式：−（Ｔ１−Ｖ１）ａ−（Ｔ２−Ｖ２）ｂ−（Ｔ３−Ｖ３）ｃ−（Ｔ４−Ｖ４）ｄ−により示され、ここで、ａ、ｂ、ｃおよびｄは、それぞれ独立して、０または１であり、ａ、ｂ、ｃおよびｄの合計は１〜４である。ある実施形態においては、前記のとおり、Ｌ１はヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分（例えば、前記式（Ｉ）に示されているもの）に結合している。したがって、ある実施形態においては、Ｔ１はヒドラジニル−インドリルまたはヒドラジニル−ピロロ−ピリジニルカップリング部分（例えば、前記式（Ｉ）に示されているもの）に結合している。ある実施形態においては、Ｖ１はＷ１（メイタンシノイド）に結合している。ある実施形態においては、前記のとおり、Ｌ２は、存在する場合には、Ｗ１（メイタンシノイド）に結合している。したがって、ある実施形態においては、Ｔ２は、存在する場合には、Ｗ１（メイタンシノイド）に結合しており、あるいはＶ２は、存在する場合には、Ｗ１（メイタンシノイド）に結合している。ある実施形態においては、前記のとおり、Ｌ３は、存在する場合には、Ｗ１（メイタンシノイド）に結合している。したがって、ある実施形態においては、Ｔ３は、存在する場合には、Ｗ１（メイタンシノイド）に結合しており、あるいはＶ３は、存在する場合には、Ｗ１（メイタンシノイド）に結合している。ある実施形態においては、Ｌ４は、存在する場合には、Ｗ１（メイタンシノイド）に結合している。したがって、ある実施形態においては、Ｔ４は、存在する場合には、Ｗ１（メイタンシノイド）に結合しており、あるいはＶ４は、存在する場合には、Ｗ１（メイタンシノイド）に結合している。
本開示の実施形態は、ポリペプチド（例えば、抗ＣＤ２２抗体）が１以上の薬物部分（例えば、メイタンシノイド）、例えば２個の薬物部分、３個の薬物部分、４個の薬物部分、５個の薬物部分、６個の薬物部分、７個の薬物部分、８個の薬物部分、９個の薬物部分または１０個以上の薬物部分にコンジュゲート化されているコンジュゲートを含む。薬物部分は、本明細書に記載されているとおり、ポリペプチドにおける１以上の部位でポリペプチドにコンジュゲート化されうる。ある実施形態においては、コンジュゲートは０．１〜１０、または０．５〜１０、または１〜１０、例えば１〜９、または１〜８、または１〜７、または１〜６、または１〜５、または１〜４、または１〜３、または１〜２の範囲の平均薬物対抗体比（ＤＡＲ）（モル比）を有する。ある実施形態においては、コンジュゲートは１〜２、例えば１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９または２の平均ＤＡＲを有する。ある実施形態においては、コンジュゲートは１．６〜１．９の平均ＤＡＲを有する。ある実施形態においては、コンジュゲートは１．７の平均ＤＡＲを有する。平均は算術平均を意味する。
製剤
本開示のコンジュゲート（抗体コンジュゲートを含む）は種々の方法で製剤化されうる。一般に、コンジュゲートがポリペプチド−薬物コンジュゲートである場合、コンジュゲートは、ポリペプチドにコンジュゲート化された薬物、治療される状態および使用される投与経路に適合する方法で製剤化（処方）される。
コンジュゲート（例えば、ポリペプチド−薬物コンジュゲート）は任意の適切な形態、例えば、医薬上許容される塩の形態で提供可能であり、経口、局所または非経口などの任意の適切な投与経路のために製剤化されうる。コンジュゲートが液体注射剤として提供される場合（例えば、それらが静脈内に投与される又は組織内に直接的に投与される実施形態）においては、コンジュゲートは、そのまま使用できる形態として、または再構成（還元）可能な貯蔵安定性粉末もしくは液体（医薬上許容される担体および賦形剤から構成されるもの）として提供されうる。
コンジュゲートを製剤化するための方法は、容易に利用可能なものから適合化されうる。例えば、コンジュゲートは、治療有効量のコンジュゲートと医薬上許容される担体（例えば、生理食塩水）とを含む医薬組成物中で提供されうる。医薬組成物は、所望により、他の添加剤（例えば、バッファー、安定剤、保存など）を含みうる。幾つかの実施形態においては、該製剤は哺乳動物への投与に適しており、例えば、ヒトへの投与に適している。
治療方法
本開示のポリペプチド−薬物コンジュゲートは、親薬物（すなわち、ポリペプチドへのコンジュゲート化の前の薬物）の投与による治療に適した、対象における状態または疾患の治療において有用である。「治療」は、宿主を苦しめている状態に関連した症状の少なくとも改善が達成されることを意味し、ここで、改善は、治療される状態に関連したパラメータ、例えば症状の度合の少なくとも減少を意味するものとして広義で用いられる。したがって、治療は、病的状態またはそれに関連した少なくとも症状が完全に抑制され、例えば、その発生が予防され、または阻止され、または終結されて、宿主が該状態または該状態を特徴づける少なくとも症状をもやは被らない状況をも含む。したがって、治療は、（ｉ）臨床症状の予防、すなわち、臨床症状の発生のリスクの低減、例えば、臨床症状を発生させないこと、例えば、有害な状態への疾患の進行の予防；（ｉｉ）臨床症状の抑制、すなわち、臨床症状の発生または更なる進展の阻止、例えば、活動性疾患の緩和または完全な抑制；および／または（ｉｉｉ）臨床症状の軽減、すなわち、臨床症状の退縮を引き起こすことを含む。
癌の文脈における「治療」なる語は、固形腫瘍の増殖の低減、癌細胞の複製の抑制、全体的な腫瘍負荷の低減、および癌に関連した１以上の症状の改善のいずれか又は全てを含む。
治療される対象は、治療を要するものであることが可能であり、ここで、治療される宿主は、親薬物を使用する治療に適したものでありうる。したがって、種々の対象が、本明細書に開示されているポリペプチド−薬物コンジュゲートを使用する治療に適しているであろう。一般に、そのような対象は「哺乳動物」であり、ヒトに関心が持たれる。他の対象には、飼育ペット（例えば、イヌおよびネコ）、家畜（例えば、ウシ、ブタ、ヤギ、ウマなど）、げっ歯類（例えば、マウス、モルモットおよびラット、例えば、疾患の動物モデルにおけるもの）ならびに非ヒト霊長類（例えば、チンパンジーおよびサル）が含まれる。
投与されるポリペプチド−薬物コンジュゲートの量は、最初は、親薬物の用量および／または投与レジメンの指針に基づいて決定されうる。一般に、ポリペプチド−薬物コンジュゲートは結合薬物の標的化運搬および／または血清半減期の改善をもたらすことが可能であり、したがって、投与レジメンにおける用量の減少または投与の減少の少なくとも１つをもたらしうる。したがって、ポリペプチド−薬物コンジュゲートは、本開示のポリペプチド−薬物コンジュゲートにおいてコンジュゲート化される前の親薬物と比較して、投与レジメンにおける用量の減少および／または投与の減少をもたらしうる。
更に、前記のとおり、ポリペプチド−薬物コンジュゲートは薬物運搬の化学量論の制御をもたらしうるため、ポリペプチド−薬物コンジュゲートの投与量は、ポリペプチド−薬物コンジュゲート当たりに提供される薬物分子の数に基づいて計算されうる。
幾つかの実施形態においては、複数用量のポリペプチド−薬物コンジュゲートを投与する。ポリペプチド−薬物コンジュゲートの投与頻度は、例えば、症状の重症度、対象の状態などのような種々の要因のいずれかに応じて変動しうる。例えば、幾つかの実施形態においては、ポリペプチド−薬物コンジュゲートは月１回、月２回、月３回、隔週、週１回（ｑｗｋ）、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、隔日、毎日（ｑｄ／ｏｄ）、１日２回（ｂｄｓ／ｂｉｄ）または１日３回（ｔｄｓ／ｔｉｄ）などで投与される。
癌の治療方法
本開示は、癌を有する個体に癌化学療法剤を投与するための方法を提供する。該方法は、癌腫、肉腫、白血病およびリンパ腫を含む多種多様な癌の治療に有用である。
本方法を用いて治療されうる癌腫には、食道癌、肝細胞癌、基底細胞癌（皮膚癌の一形態）、扁平上皮細胞癌（種々の組織）、移行上皮癌（膀胱の悪性新生物）を含む膀胱癌、気管支原性癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、肺の小細胞癌および非小細胞癌を含む肺癌、副腎皮質癌、甲状腺癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、腎細胞癌、非浸潤性乳管癌または、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣癌、骨原性癌、上皮性癌および鼻咽頭癌などが含まれるが、これらに限定されるものではない。
本方法を用いて治療されうる肉腫には、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、脊索腫、骨肉腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮細胞肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫および他の軟部組織肉腫が含まれるが、これらに限定されるものではない。
本方法を用いて治療されうる他の固形腫瘍には、神経膠腫、星細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫および網膜芽細胞腫が含まれるが、これらに限定されるものではない。
本方法を用いて治療されうる白血病には、ａ）慢性骨髄増殖性症候群（多分化能性造血幹細胞の腫瘍性障害）；ｂ）急性骨髄性白血病（多分化能性造血幹細胞または制限された系列可能性の造血細胞の腫瘍性トランスフォーメーション）；ｃ）慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ；免疫学的に未熟で機能不全の小リンパ球のクローン増殖）、例えば、Ｂ細胞ＣＬＬ、Ｔ細胞ＣＬＬ前リンパ球性白血病および毛様細胞白血病；ならびにｄ）急性リンパ芽球性白血病（リンパ芽球の蓄積により特徴づけられる）が含まれるが、これらに限定されるものではない。本方法を用いて治療されうるリンパ腫には、Ｂ細胞リンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンＢ細胞リンパ腫などが含まれるが、これらに限定されるものではない。
図１パネルＡは、標準的な分子生物学的技術を用いて抗体バックボーンに沿った所望の位置に挿入されたホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）認識配列を示す。真核細胞にとって内因性であるＦＧＥは、発現されると、コンセンサス配列内のＣｙｓの、ホルミルグリシン残基（ＦＧｌｙ）への変換を触媒する。図１パネルＢは、ヒドラジノ−イソ−ピクテット（Ｐｉｃｔｅｔ）−スペングラー（Ｓｐｅｎｇｌｅｒ）（ＨＩＰＳ）リンカーおよびペイロード（ｐａｙｌｏａｄ）と反応して部位特異的コンジュゲート化ＡＤＣを与えるアルデヒド部分（抗体当たり２個）を含有する抗体を示す。図１パネルＣはＨＩＰＳ化学を示し、これは中間体ヒドラゾニウムイオンを経由して進行し、ついで求核性インドールとの分子内アルキル化により、安定なＣ−Ｃ結合を形成する。 図２は、本開示の実施形態に従いＨＩＰＳ−４ＡＰリンカーに結合したメイタンシンペイロードにＣ末端（ＣＴ）においてコンジュゲート化されたアルデヒドタグ付き抗ＣＤ２２抗体の疎水性相互作用カラム（ＨＩＣ）トレースを示す。 図３は、本開示の実施形態に従いＨＩＰＳ−４ＡＰリンカーに結合したメイタンシンペイロードにＣ末端（ＣＴ）においてコンジュゲート化されたアルデヒドタグ付き抗ＣＤ２２抗体のＨＩＣトレースを示す。 図４は、本開示の実施形態に従いＨＩＰＳ−４ＡＰリンカーに結合したメイタンシンペイロードにＣ末端（ＣＴ）においてコンジュゲート化されたアルデヒドタグ付き抗ＣＤ２２抗体の逆相クロマトグラフィー（ＰＬＲＰ）トレースを示す。 図５は、本開示の実施形態に従いＨＩＰＳ−４ＡＰリンカーに結合したメイタンシンペイロードにＣ末端（ＣＴ）においてコンジュゲート化されたアルデヒドタグ付き抗ＣＤ２２抗体の分析用サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析のグラフを示す。 図６Ａは、本開示の実施形態に従いＨＩＰＳ−４ＡＰリンカーに結合したメイタンシンペイロードにＣ末端（ＣＴ）においてコンジュゲート化された抗ＣＤ２２ ＡＤＣに関するＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞に対するインビトロ効力［Ｌｏｇ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）濃度（ｎＭ）に対する生存率（％）］を示すグラフを示す。図６Ｂは、本開示の実施形態に従いＨＩＰＳ−４ＡＰリンカーに結合したメイタンシンペイロードにＣ末端（ＣＴ）においてコンジュゲート化された抗ＣＤ２２ ＡＤＣに関するＲａｍｏｓ（ラモス）細胞に対するインビトロ効力［Ｌｏｇ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）濃度（ｎＭ）に対する生存率（％）］を示すグラフを示す。 図７は、本開示の実施形態に従いＨＩＰＳ−４ＡＰリンカーに結合したメイタンシンペイロードにＣ末端（ＣＴ）においてコンジュゲート化された抗ＣＤ２２ ＡＤＣに関するＷＳＵ−ＤＬＣＬ２異種移植モデルに対するインビボ効力［日数に対する平均腫瘍体積（ｍｍ３）］を示すグラフを示す。 図８Ａ〜８ＣはＣＤ２２アイソフォーム（ｉｓｏｆｏｒｍ）のアミノ酸配列を示す（上から下へ配列番号／／〜配列番号／／）。 図９Ａはアルデヒドタグ付きＩｇポリペプチドの作製のための可能な修飾部位を示す部位地図を示す。上側の配列はＩｇＧ１軽鎖ポリペプチドの保存領域のアミノ酸配列（配列番号／／）であり、Ｉｇ軽鎖における可能な修飾部位を示し、下側の配列は、Ｉｇ重鎖ポリペプチドの保存領域のアミノ酸配列（配列番号／／；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＧ００９０９）であり、Ｉｇ重鎖における可能な修飾部位を示す。重鎖および軽鎖の番号付けは完全長の重鎖および軽鎖に基づく。図９ＢはＩｇＧ１（配列番号／／）、ＩｇＧ２（配列番号／／）、ＩｇＧ３（配列番号／／）、ＩｇＧ４（配列番号／／）およびＩｇＡ（配列番号／／）の免疫グロブリン重鎖定常領域のアライメントを示し、免疫グロブリン重鎖においてアルデヒドタグが設けられうる修飾部位を示す。重鎖および軽鎖の番号付けは完全重鎖および軽鎖に基づく。図９Ｃは免疫グロブリン軽鎖定常領域（配列番号／／）のアライメントを示し、免疫グロブリン軽鎖においてアルデヒドタグが設けられうる修飾部位を示す。 図１０は本開示の実施形態による種々のアナライトの検出のためのＥＬＩＳＡフォーマットの図示を示す。 本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣは高度に単量体であり、１．８の平均ＤＡＲを有し、単一の軽鎖および重鎖種を含んでいた。単量体比率（９９．２％）を評価するためにサイズ排除クロマトグラフィー（図１１パネルＡ）により、そして薬物対抗体比（ＤＡＲ）（これは１．８であった）を評価するために疎水性相互作用（ＨＩＣ；図１１パネルＢ）および逆相（ＰＬＲＰ）クロマトグラフィー（図１１パネルＣ）により、抗ＣＤ２２ ＡＤＣを評価した。 本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣは野生型抗ＣＤ２２抗体と同等にヒトＣＤ２２タンパク質に結合した。競合的ＥＬＩＳＡを用いて、野生型（ＷＴ）抗ＣＤ２２抗体への抗ＣＤ２２ ＡＤＣの結合を比較した。データは平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝４）として示されている。 本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣは野生型抗ＣＤ２２抗体と同様にＣＤ２２のインターナリゼーションを媒介した。ＮＨＬ細胞株、Ｒａｍｏｓ、Ｇｒａｎｔａ−５１９およびＷＳＵ−ＤＬＣＬ２を使用して、ＷＴ抗ＣＤ２２またはＣＡＴ−０２−１０６のいずれかへの結合により媒介される細胞表面ＣＤ２２のインターナリゼーションを比較した。 本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣは親およびＭＤＲ１発現ＮＨＬ腫瘍細胞に対してインビトロで同等に有効であった。ＲａｍｏｓおよびＷＳＵ−ＤＬＣＬ２親（ＷＴ）細胞（図１４パネルＡおよびパネルＣ）、ならびにＭＤＲ１を発現するように操作されたそれらの系の変異体（ＭＤＲ１＋；図１４パネルＢおよびパネルＤ）を抗ＣＤ２２ ＡＤＣ活性のインビトロ細胞毒性試験のための標的として使用した。ＣＡＴ−０２抗体を使用して作製されたが、バリン−シトルリン切断性リンカーを使用してメイタンシンにコンジュゲート化されたαＣＤ２２ ＡＤＣおよび遊離メイタンシンを対照として使用した。追加的対照実験において、ＭＤＲ１インヒビターであるシクロスポリンをＷＴまたはＭＤＲ１＋ ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞に加えた（図１４パネルＥおよびパネルＦ）。データは平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝２）として示されている。 本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣはオフターゲット細胞毒性を媒介しなかった。胃腫瘍細胞系であるＮＣＩ−Ｎ８７を、漸増濃度の抗ＣＤ２２ ＡＤＣの存在下、インビトロで５日間インキュベートした。ついで、ＭＴＳに基づく方法を用いて細胞生存性を評価した。データは平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝２）として示されている。 抗ＣＤ２２ ＡＤＣ関連ＡＤＣ、ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシンリンカーペイロードにコンジュゲート化された抗ＨＥＲ２はバイスタンダー殺傷を誘発しなかった。ＨＥＲ２＋ ＮＣＩ−Ｎ８７細胞、ＨＥＲ２− Ｒａｍｏｓ細胞または両方の細胞の共培養を標的として使用して、インビトロ細胞毒性試験を行った。切断性バリン−シトルリン（ｖｃ）リンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲート化された抗ＨＥＲ２（２ｎＭ ペイロード）および遊離メイタンシン（２ｎＭ）をバイスタンダー殺傷に関する陽性対照として使用した。抗ＨＥＲ２ ＡＤＣを２ｎＭ ペイロードで投与した。データは平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝２）として示されている。 本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣはＮＨＬ由来ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２およびＲａｍｏｓ異種移植モデルに対してインビボで有効であった。単一の１０ｍｇ／ｋｇ用量（図１７パネルＡ）としての、または４日ごとに合計４用量（ｑ４ｄ×４）で投与される複数の１０ｍｇ／ｋｇ用量としての抗ＣＤ２２ ＡＤＣで、またはビヒクルのみで、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２異種移植片を含有する雌ＣＢ１７ ＩＣＲ ＳＣＩＤマウス（８匹／群）を処理した。該単一または複数用量試験に関して、腫瘍が、それぞれ１１８または２６２ｍｍ３の平均サイズに達したら、処理を開始した。（図１７パネルＣ）：Ｒａｍｏｓ異種移植片を含有する雌ＣＢ１７ ＩＣＲ ＳＣＩＤマウス（１２匹／群）をビヒクルのみで、または５もしくは１０ｍｇ／ｋｇ ＣＡＴ−０２−１０６ ｑ４ｄ×４で処理した。腫瘍が２４６ｍｍ３の平均サイズに達したら、投与を開始した。データは平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として示されている。 ＲａｍｏｓおよびＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞は、異なるレベルの細胞表面ＣＤ２２を発現した。ＲａｍｏｓおよびＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞をフルオレセイン標識抗ＣＤ２２抗体と共にインキュベートし、ついでフローサイトメトリーにより分析した。各細胞型に関するＦＬ１チャネル（フルオレセインを検出）の平均蛍光強度がグラフに示されている。 マウスの体重は本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣでの処理によっては影響されなかった。異種移植有効性試験におけるマウスの平均体重が示されている。（図１９パネルＡ）単一用量ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２試験；（図１９パネルＢ）複数用量ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２試験；（図１９パネルＣ）Ｒａｍｏｓ試験。エラーバーはＳ．Ｄ．を示す。 本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣは、最小の効果で６０ｍｇ／ｋｇまで、ラットにおいて投与されうる。Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（５匹／群）に６、２０、４０または６０ｍｇ／ｋｇ用量のＣＡＴ−０２−１０６を投与し、ついで１２日間の観察期間を設けた。（図２０パネルＡ）示されている時点で体重をモニターした。（図２０パネルＢ）アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）および（図２０パネルＣ）血小板数を投与後の第５日および第１２日に評価した。データは平均±Ｓ．Ｄ．として示されている。 本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣはカニクイザルＢ細胞に特異的に結合した。カニクイザル末梢血リンパ球をそれらの前方および側方散乱プロファイルに従いゲートした（左上）。フルオレセイン−イソチオシアナート（ＦＩＴＣ）結合ストレプトアビジン（ＳＡ）のみ（右上）、またはビオチン化抗ＣＤ２２ ＡＤＣおよびそれに続くＦＩＴＣ ＳＡの存在下、細胞をインキュベートした。Ｔ細胞（ＣＤ３、左下）またはＢ細胞（ＣＤ２０、右下）を認識する抗体とのコインキュベーションはＢ細胞集団へのＣＡＴ−０２−１０６結合の特異性を実証した。 本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣはヒト組織およびカニクイザル組織におけるＢ細胞特異的反応性を実証した。抗ＣＤ２２ ＡＤＣは脾臓のＢ細胞に富む領域に結合した（上）。心臓組織は染色に関して陰性であった（中央）。散在性白血球以外は、肺切片は陰性であった（下）。 カニクイザルにおいて本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣの６０ｍｇ／ｋｇの反復用量で副作用は観察されない。カニクイザル（２頭／性／群）に１０、３０または６０ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２２ ＡＤＣを、３週間に１回、合計２用量投与し、ついで２１日間の観察期間を設けた。（図２３パネルＡ）アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）、（図２３パネルＢ）アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、（図２３パネルＣ）血小板、および（図２３パネルＤ）単球を、示されている時点でモニターした。データは平均±Ｓ．Ｄ．として示されている。 （パネルＡおよびパネルＢ） − 本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣでの処理はカニクイザルにおける末梢Ｂ細胞集団を減少させた。投与前、および第７日、第１４日、第２８日および第３５日に、動物において観察されたＢ細胞（ＣＤ２０＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）およびＮＫ細胞（ＣＤ２０−／ＣＤ３−）の比を検出するために、該毒性試験に登録されたカニクイザルからの末梢血単核細胞をフローサイトメトリーでモニターした。データは平均±Ｓ．Ｄ．として示されている。 本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣは、ラット薬物動態試験により示されたとおり、非常に高いインビボ安定性を示した。Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（３匹／群）に３ｍｇ／ｋｇの単一のｉ．ｖ．ボーラス用量の抗ＣＤ２２ ＡＤＣを投与した。血漿サンプルを、示されている時点で採取し、全抗体、全コンジュゲートおよび全ＡＤＣ濃度（図１０に示されているとおり）に関して分析した。 図２６は表３を示し、これは、本開示の種々の実施形態における抗ＣＤ２２ ＡＤＣが投与された動物における全ＡＤＣ値の平均（±ＳＤ）薬物動態学的パラメータおよび毒物動態学的（ＴＫ）パラメータの要約である。
実施例
以下の実施例は、本発明を製造し使用する方法の完全な開示および説明を当業者に示すために記載されており、本発明者が発明と見なすものの範囲を限定ものではなく、また、後記の実験が、行った全て又は唯一の実験であることを示すものでもない。用いられている数字（例えば、量、温度など）に関する精度を確保するための努力がなされているが、幾らかの実験誤差および偏差が考慮されるべきである。特に示されていない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧またはそれに近い圧力である。「平均」は算術平均を意味する。例えば以下のような標準的な略語が用いられうる：ｂｐ，塩基対；ｋｂ，キロベース；ｐｌ，ピコリットル；ｓまたはｓｅｃ，秒；ｍｉｎ，分；ｈまたはｈｒ，時間；ａａ，アミノ酸；ｋｂ，キロベース；ｂｐ，塩基対；ｎｔ，ヌクレオチド；ｉ．ｍ．，筋肉内；ｉ．ｐ．，腹腔内；ｓ．ｃ．，皮下；など。
一般的合成法
開示されている化合物を合成するのに有用な一般的に公知の化学合成スキームおよび条件を示す多数の一般的参考文献が利用可能である（例えば、ＳｍｉｔｈおよびＭａｒｃｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，２００１；またはＶｏｇｅｌ，Ａ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｌｏｎｇｍａｎ，１９７８を参照されたい）。
本明細書に記載されている化合物は、クロマトグラフィー、例えばＨＰＬＣ、分取薄層クロマトグラフィー、フラッシュカラムクロマトグラフィーおよびイオン交換クロマトグラフィーを含む当技術分野で公知の任意の精製法により精製されうる。順相および逆相ならびにイオン性樹脂を含む任意の適切な固定相が使用されうる。ある実施形態においては、開示されている化合物はシリカゲルおよび／またはアルミナクロマトグラフィーにより精製される。例えば、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｍｏｄｅｒｎ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌ．Ｒ．ＳｎｙｄｅｒおよびＪ．Ｊ．Ｋｉｒｋｌａｎｄ編，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９７９；ならびにＴｈｉｎ Ｌａｙｅｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，Ｅ．Ｓｔａｈｌ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９６９を参照されたい。
本化合物の製造方法のいずれかの実施中に、対象分子のいずれかにおける感受性または反応性基を保護することが必要および／または望ましいかもしれない。これは、例えば以下のような標準的な研究文書に記載されている通常の保護基を使用して行われうる：Ｊ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９７３，Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９９９，“Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”；Ｖｏｌｕｍｅ ３（Ｅ．ＧｒｏｓｓおよびＪ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８１，“Ｍｅｔｈｏｄｅｎ ｄｅｒ ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ Ｃｈｅｍｉｅ”，Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１５／ｌ，Ｇｅｏｒｇ Ｔｈｉｅｍｅ Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ １９７４，Ｈ．−Ｄ．ＪａｋｕｂｋｅおよびＨ．Ｊｅｓｃｈｅｉｔ，“Ａｍｉｎｏｓａｕｒｅｎ，Ｐｅｐｔｉｄｅ，Ｐｒｏｔｅｉｎｅ”，Ｖｅｒｌａｇ Ｃｈｅｍｉｅ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ ＢｅａｃｈおよびＢａｓｅｌ １９８２，および／またはＪｏｃｈｅｎ Ｌｅｈｍａｎｎ，“Ｃｈｅｍｉｅ ｄｅｒ Ｋｏｈｌｅｎｈｙｄｒａｔｅ：Ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ａｎｄ Ｄｅｒｉｖａｔｅ”，Ｇｅｏｒｇ Ｔｈｉｅｍｅ Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ １９７４。保護基は、当技術分野で公知の方法を用いて、簡便な後続段階で除去されうる。
本化合物は、商業的に入手可能な出発物質および／または通常の合成方法により製造された出発物質を使用して、種々の合成経路により合成されうる。本明細書に開示されている化合物を合成するために使用されうる合成経路の種々の例を以下のスキームに記載する。
実施例１
以下に示すスキーム１に従い、４−アミノ−ピペリジン（４ＡＰ）基を含有するリンカーを合成した。
Figure 0006855496
（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル ４−オキソピペリジン−１−カルボキシラート（２００）の合成
磁気攪拌棒を含む１００ｍＬ丸底フラスコにピペリジン−４−オン塩酸塩一水和物（１．５３ｇ，１０ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃクロリド（２．５８ｇ，１０ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（３．１８ｇ，３０ｍｍｏｌ）、ジオキサン（２０ｍＬ）および水（２ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、水（１×１００ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。得られた物質を真空中で乾燥させて化合物２００を白色固体として得た（３．０５ｇ，収率９５％）。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ７．７８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６），７．５９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．２），７．４３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２），７．３７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２），４．６０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．０），４．２８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０），３．７２（ｂｒ，２Ｈ），３．６３（ｂｒ，２Ｈ），２．３９（ｂｒ，２Ｈ），２．２８（ｂｒ，２Ｈ）。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ２０Ｈ２０ＮＯ３としての計算値：３２２．４；実測値：３２２．２。
（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル ４−（（２−（２−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）アミノ）ピペリジン−１−カルボキシラート（２０１）の合成
磁気攪拌棒を含む乾燥シンチレーションバイアルにピペリジノン２００（６４２ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）、Ｈ２Ｎ−ＰＥＧ２−ＣＯ２ ｔ−Ｂｕ（５６０ｍｇ，２．４ｍｍｏｌ）、４オングストロームモレキュラーシーブ（活性粉末，５００ｍｇ）および１，２−ジクロロエタン（５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物にトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（８４５ｍｇ，４．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で５日間撹拌した。得られた混合物をＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３（１×５０ｍＬ）およびブライン（１×５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、化合物２０１を油状物として得、これを、更に精製することなく次に進めた。
１３−（１−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）ピペリジン−４−イル）−２，２−ジメチル−４，１４−ジオキソ−３，７，１０−トリオキサ−１３−アザヘプタデカン−１７−酸（２０２）の合成
磁気攪拌棒を含む乾燥シンチレーションバイアルに前工程からのＮ−Ｆｍｏｃ−ピペリジン−４−アミノ−ＰＥＧ２−ＣＯ２ ｔ−Ｂｕ（２０１）、無水コハク酸（２７０ｍｇ，２．７ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃと飽和ＮａＨＣＯ３との間で分配した。水層をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。水層をｐＨ〜３になるまでＨＣｌ（１Ｍ）で酸性化した。水層をＤＣＭで抽出した（３×）。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。反応混合物をＣ１８フラッシュクロマトグラフィー（０．１％ 酢酸を含有する１０〜１００％ ＭｅＣＮ／水で溶出）で精製した。生成物含有画分を減圧下で濃縮し、ついでトルエン（３×５０ｍＬ）と共沸させて残留酢酸を除去して、５３４ｍｇ（４２％，２工程）の化合物２０２を白色固体として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．９６（ｂｒ，１Ｈ），７．８９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．２），７．６３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．２），７．４２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２），７．３４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２），４．２５−４．５５（ｍ，３Ｈ），３．７０−４．３５（ｍ，３Ｈ），３．５９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０），３．３９（ｍ，５Ｈ），３．３５（ｍ，３Ｈ），３．２１（ｂｒ，１Ｈ），２．７９（ｂｒ，２Ｈ），２．５７（ｍ，２Ｈ），２．４２（ｑ，４Ｈ，Ｊ＝６．０），１．４９（ｂｒ，３Ｈ），１．３７（ｓ，９Ｈ）。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ３５Ｈ４７Ｎ２Ｏ９としての計算値：６３９．３；実測値：６３９．２。
（２Ｓ）−１−（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジナナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼンアシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）オキシ）−２，３−ジメチル−１，４，７−トリオキソ−８−（ピペリジン−４−イル）−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカン−１７−酸（２０３）の合成
２ｍＬのＤＭＦ中のエステル２０２（２２７ｍｇ，０．３５６ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１７４μＬ，１．０６５ｍｍｏｌ）、Ｎ−デアセチルメイタンシン１２４（２３１ｍｇ，０．３５５ｍｍｏｌ）の溶液にＰｙＡＯＰ（１８５ｍｇ，０．３５５ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を３０分間撹拌した。ピペリジン（０．５ｍＬ）を反応混合物に加え、更に２０分間撹拌した。粗反応混合物を、０〜１００％ アセトニトリル：水の勾配を用いるＣ１８逆相クロマトグラフィーにより精製して、２０３．２ｍｇ（５５％，２工程）の化合物２０３を得た。
１７−（ｔｅｒｔ−ブチル） １−（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジナナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼンアシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）（２Ｓ）−８−（１−（３−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−４−イル）−２，３−ジメチル−４，７−ジオキソ−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカンジオアート（２０４）の合成
ＤＭＦ １ｍＬ中のピペリジン２０３（２０３．２ｍｇ，０．１９４ｍｍｏｌ）、エステル１２（１２６．５ｍｇ，０．１９４ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリメチルピリジン（７７μＬ，０．５８２ｍｍｏｌ）、ＨＯＡＴ（２６．４ｍｇ，０．１９４ｍｍｏｌ）の溶液を３０分間撹拌した。粗反応物を、０．１％ ギ酸を含有する０〜１００％ アセトニトリル：水の勾配を用いるＣ１８逆相クロマトグラフィーにより精製して、２８０．５ｍｇ（収率９７％）の化合物２０４を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ８１Ｈ１０６ＣｌＮ８Ｏ１８としての計算値：１５１３．７；実測値：１５１４．０。
（２Ｓ）−８−（１−（３−（２−（（２−（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−４−イル）−１−（（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジナナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼンアシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）オキシ）−２，３−ジメチル−１，４，７−トリオキソ−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカン−１７−酸（２０５）の合成
５００μＬの無水ＤＣＭ中の化合物２０４（１０８ｍｇ，０．０７１４ｍｍｏｌ）の溶液にＤＣＭ中のＳｎＣｌ４の１Ｍ溶液３５７μＬを加えた。不均一混合物を１時間撹拌し、ついで０．１％ ギ酸を含有する０〜１００％ アセトニトリル：水の勾配を用いるＣ１８逆相クロマトグラフィーにより精製して、７８．４ｍｇ（収率７５％）の化合物２０５を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ−Ｈ］− Ｃ７７Ｈ９６ＣｌＮ８Ｏ１８としての計算値：１４５５．７；実測値：１４５５．９。
実施例２
以下に示すスキーム２に従い、４−アミノ−ピペリジン（４ＡＰ）基を含有するリンカーを合成した。
Figure 0006855496
ｔｅｒｔ−ブチル ４−オキソピペリジン−１−カルボキシラート（２１０）の合成
磁気攪拌棒を含む１００ｍＬ丸底フラスコに、ピペリジン−４−オン塩酸塩一水和物（１．５３ｇ，１０ｍｍｏｌ）、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボナート（２．３９ｇ，１１ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（１．２２ｇ，１１．５ｍｍｏｌ）、ジオキサン（１０ｍＬ）および水（１ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。得られた物質を真空中で乾燥して、１．７４ｇ（８７％）の化合物２１０を白色固体として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ３．７３（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．０），２．４６（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．０），１．５１（ｓ，９Ｈ）。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１０Ｈ１８ＮＯ３としての計算値：２００．３；実測値：２００．２。
ｔｅｒｔ−ブチル ４−（（２−（２−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）アミノ）ピペリジン−１−カルボキシラート（２１１）
磁気攪拌棒を含む乾燥シンチレーションバイアルにｔｅｒｔ−ブチル ４−オキソピペリジン−１−カルボキシラート（３９９ｍｇ，２ｍｍｏｌ）、Ｈ２Ｎ−ＰＥＧ２−ＣＯＯ ｔ−Ｂｕ（５５０ｍｇ，２．４ｍｍｏｌ）、４オングストロームモレキュラーシーブ（活性化粉末，２００ｍｇ）および１，２−ジクロロエタン（５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物にトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（８４５ｍｇ，４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３日間撹拌した。得られた混合物をＥｔＯＡｃと飽和水性ＮａＨＣＯ３との間に分配した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、８５０ｍｇの化合物２１１を粘性油状物として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ２１Ｈ４１Ｎ２Ｏ６としての計算値：４１７．３；実測値：４１７．２。
１３−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イル）−２，２−ジメチル−４，１４−ジオキソ−３，７，１０−トリオキサ−１３−アザヘプタデカン−１７−酸（２１２）
磁気攪拌棒を含む乾燥シンチレーションバイアルにｔｅｒｔ−ブチル ４−（（２−（２−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）アミノ）ピペリジン−１−カルボキシラート２１１（２２０ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）、無水コハク酸（５５ｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（５ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（３ｍＬ）を加えた。混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物をフラッシュクロマトグラフィー（５０〜１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出）により部分的に精製して１１７ｍｇの化合物２１２を透明油状物として得、これを、更に特徴づけすることなく次に進めた。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ２５Ｈ４５Ｎ２Ｏ９としての計算値：５１７．６；実測値：５１７．５。
１７−（ｔｅｒｔ−ブチル） １−（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジナナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼンアシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）（２Ｓ）−８−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イル）−２，３−ジメチル−４，７−ジオキソ−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカンジオアート（２１３）の合成
磁気攪拌棒を含む乾燥シンチレーションバイアルに１３−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イル）−２，２−ジメチル−４，１４−ジオキソ−３，７，１０−トリオキサ−１３−アザヘプタデカン−１７−酸２１２（５５ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）、Ｎ−デアシルメイタンシン１２４（６５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（４３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１ｍＬ）およびジクロロメタン（０．５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で８時間撹拌した。反応混合物をＣ１８フラッシュクロマトグラフィー（５〜１００％ ＭｅＣＮ／水で溶出）で直接精製して、１８ｍｇ（１６％）の化合物２１３を白色薄膜として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ５７Ｈ８７ＣｌＮ５Ｏ１７としての計算値：１１４８．６；実測値：１１４８．７。
（２Ｓ）−１−（（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジナナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼンアシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）−２，３−ジメチル−１，４，７−トリオキソ−８−（ピペリジン−４−イル）−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカン−１７−酸（２１４）の合成
磁気攪拌棒を含む乾燥シンチレーションバイアルにメイタンシノイド２１３（３１ｍｇ，０．０２７ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（１ｍＬ）を加えた。溶液を０℃に冷却し、四塩化スズ（ＩＶ）（１．０Ｍ ジクロロメタン溶液、０．３ｍＬ，０．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で１時間撹拌した。反応混合物をＣ１８フラッシュクロマトグラフィー（５〜１００％ ＭｅＣＮ／水で溶出）で直接精製して、１６ｍｇ（６０％）の化合物２１４を白色固体として得た（１６ｍｇ，収率６０％）。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ４８Ｈ７１ＣｌＮ５Ｏ１５としての計算値：９９２．５；実測値：９９２．６。
（２Ｓ）−８−（１−（３−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−４−イル）−１−（（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジナナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼンアシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）−２，３−ジメチル−１，４，７−トリオキソ−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカン−１７−酸（２１５）の合成
磁気攪拌棒を含む乾燥シンチレーションバイアルにメイタンシノイド２１４（１６ｍｇ，０．０１６ｍｍｏｌ）、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル １，２−ジメチル−２−（（１−（３−オキソ−３−（ペルフルオロフェノキシ）プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イル）メチル）ヒドラジン−１−カルボキシラート（５）（１３ｍｇ，０．０２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（８μＬ，０．０５ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１ｍＬ）を加えた。溶液を室温で１８時間撹拌した。反応混合物をＣ１８フラッシュクロマトグラフィー（５〜１００％ ＭｅＣＮ／水で溶出）により直接精製して、１８ｍｇ（７７％）の化合物２１５を白色固体として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ７７Ｈ９８ＣｌＮ８Ｏ１８としての計算値：１４５７．７；実測値：１４５７．９。
（２Ｓ）−１−（（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジナナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼンアシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）オキシ）−８−（１−（３−（２−（（１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−４−イル）−２，３−ジメチル−１，４，７−トリオキソ−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカン−１７−酸（２１６）の合成
磁気攪拌棒を含む乾燥シンチレーションバイアルにメイタンシノイド２１５（１８ｍｇ，０．０１２ｍｍｏｌ）、ピペリジン（２０μＬ，０．０２ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１ｍＬ）を加えた。溶液を室温で２０分間撹拌した。反応混合物をＣ１８フラッシュクロマトグラフィー（１〜６０％ ＭｅＣＮ／水で溶出）により直接精製して、１５ｍｇ（９８％）の化合物２１６（本明細書においてはＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシンまたはＨＩＰＳ−４−アミノ−ピペリジン−マイタンシンとも称される）を白色固体として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ６２Ｈ８８ＣｌＮ８Ｏ１６としての計算値：１２３５．６；実測値：１２３６．０。
実施例３
実験手順
概要
部位特異的コンジュゲート化抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を製造するための実験を行った。部位特異的ＡＤＣの製造は、非天然アミノ酸であるホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）をタンパク質配列に組込むことを含むものであった。ＦＧｌｙ（図１）を導入するために、短いコンセンサス配列であるＣＸＰＸＲ（ここで、Ｘはセリン、スレオニン、アラニンまたはグリシンである）を、標準的な分子生物学クローニング技術を用いて、抗体重鎖または軽鎖の保存領域内の所望の位置に挿入した。この「タグ付き」構築物は、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）を共発現する細胞において組換え法で得られた。ＦＧＥは、タグ内のシステインをＦＧｌｙ残基へ同時翻訳的に変換して、アルデヒド官能基（本明細書においてはアルデヒドタグとも称される）を与えた。アルデヒド官能基はバイオ直交型（ｂｉｏｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ）コンジュゲート化のための化学的ハンドルとして機能した。ヒドラジノ−イソ−ピクテット−スペングラー（ＨＩＰＳ）連結を用いて、ペイロード（例えば薬物、例えば細胞毒素（例えばメイタンシン））をＦＧｌｙに結合させて、細胞毒素ペイロードと抗体との間に安定な共有結合Ｃ−Ｃ結合を形成させた。このＣ−Ｃ結合は、循環およびＦｃＲｎリサイクリング中にＡＤＣが遭遇する生理的関連条件、例えばプロテアーゼ、低ｐＨおよび還元試薬に対して安定だと予想された。アルデヒドタグを含有する抗体は種々の場所で製造されうる。重鎖Ｃ末端（ＣＴ）にアルデヒドタグを挿入する効果を試験するための実験を行った。ＨＩＰＳリンカーを介したメイタンシンペイロードへのコンジュゲート化により製造された得られたＡＤＣに関して、生物物理学的および機能的特徴づけを行った。
タグ付き抗体のクローニング、発現および精製
アルデヒドタグ配列を、標準的な分子生物学技術を用いて、重鎖Ｃ末端（ＣＴ）に挿入した。小規模製造のために、ＣＨＯ−Ｓ細胞をヒトＦＧＥ発現構築物でトランスフェクトし、ＦＧＥ過剰発現細胞のプールを抗体の一過性産生のために使用した。より大規模な製造のために、ＧＰＥｘ技術（Ｃａｔａｌｅｎｔ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｍｅｒｓｅｔ，ＮＪ）を用いて、ヒトＦＧＥ（ＧＰＥｘ）を過剰発現するクローン細胞系を得た。ついで、該ＦＧＥクローンを使用して、抗体発現細胞のバルク安定プールを得た。プロテインＡクロマトグラフィー（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）を用いて、馴化培地から抗体を精製した。精製抗体を瞬間凍結し、更なる使用まで−８０℃で保存した。
バイオコンジュゲート化、精製およびＨＰＬＣ分析
０．８５％ ＤＭＡを含有する５０ｍＭ クエン酸ナトリウム、５０ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ７．４）中、Ｃ末端アルデヒドタグ付きαＣＤ２２抗体（１５ｍｇ／ｍＬ）をＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシン（８モル当量の薬物：抗体）に３７℃で７２時間コンジュゲート化した。移動相Ａ：１．０Ｍ 硫酸アンモニウム、２５ｍＭ リン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）および移動相Ｂ：２５％ イソプロパノール、１８．７５ｍＭ リン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）を使用する分取スケールの疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ １７−５１９５−０１）を用いて、非コンジュゲート化抗体を除去した。未コンジュゲート化物質を溶出するために３３％ Ｂのアイソクラティック勾配を用いて、ついでモノおよびジコンジュゲート化種を溶出するために４１〜９５％ Ｂの直線勾配を用いた。最終生成物のＤＡＲを決定するために、移動相Ａ：１．５Ｍ 硫酸アンモニウム、２５ｍＭ リン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）および移動相Ｂ：２５％ イソプロパノール、１８．７５ｍＭ リン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）を使用する分析用ＨＩＣ（Ｔｏｓｏｈ＃１４９４７，Ｇｒｏｖｅ Ｃｉｔｙ，ＯＨ）によりＡＤＣを調べた。凝集を測定するために、３００ｍＭ ＮａＣｌ、２５ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）の移動相を使用する分析用サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ；Ｔｏｓｏｈ＃０８５４１）を用いてサンプルを分析した。
結果
重鎖Ｃ末端（ＣＴ）にアルデヒドタグを含有するように修飾されたαＣＤ２２抗体を、前記のＨＩＰＳ−４ＡＰリンカーに結合したメイタンシンペイロードにコンジュゲート化した。コンジュゲート化反応の完了時に、未コンジュゲート化抗体を分取ＨＩＣにより除去し、残留遊離薬物をバッファー交換中にタンジェンシャルフロー濾過により除去した。これらの反応は高収率であり、コンジュゲート化効率は８４％以上であり、総収率は７０％を超えた。得られたＡＤＣは１．６〜１．９の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を有し、主として単量体であった。図２〜５は、ＨＩＣおよび逆相ＰＬＲＰクロマトグラフィーにより決定された代表的な粗反応物および精製ＡＤＣからのＤＡＲを示し、ＳＥＣにより決定された単量体の完全性を示す。
図２は、ＨＩＰＳ−４ＡＰリンカーに結合したメイタンシンペイロードにＣ末端（ＣＴ）においてコンジュゲート化されたアルデヒドタグ付き抗ＣＤ２２抗体の疎水性相互作用カラム（ＨＩＣ）トレースを示す。図２は、ＨＩＣにより決定された粗（ｃｒｕｄｅ）ＤＡＲが１．６８であったことを示している。
図３は、ＨＩＰＳ−４ＡＰリンカーに結合したメイタンシンペイロードにＣ末端（ＣＴ）においてコンジュゲート化されたアルデヒドタグ付き抗ＣＤ２２抗体のＨＩＣトレースを示す。図３は、ＨＩＣにより決定された最終ＤＡＲが１．７７であったことを示している。
図４は、ＨＩＰＳ−４ＡＰリンカーに結合したメイタンシンペイロードにＣ末端（ＣＴ）においてコンジュゲート化されたアルデヒドタグ付き抗ＣＤ２２抗体の逆相クロマトグラフィー（ＰＬＲＰ）トレースを示す。図４は、ＲＬＲＰにより決定された最終ＤＡＲが１．８１であったことを示している。
図５は、ＨＩＰＳ−４ＡＰリンカーに結合したメイタンシンペイロードにＣ末端（ＣＴ）においてコンジュゲート化されたアルデヒドタグ付き抗ＣＤ２２抗体の分析用サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析のグラフを示す。図５に示されているとおり、分析用ＳＥＣは最終生成物に関して９８．２％の単量体を示した。
インビトロ細胞毒性
ＣＤ２２陽性Ｂ細胞リンパ腫細胞系であるＲａｍｏｓおよびＷＳＵ−ＤＬＣＬ２を、それぞれ、ＡＴＣＣおよびＤＳＭＺ細胞バンクから得た。該細胞を、１０％ ウシ胎仔血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）およびＧｌｕｔａｍａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で補足されたＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｃｅｌｌｇｒｏ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）において維持した。プレーティングの２４時間前に、対数増殖が保証されるように細胞を継代した。プレーティングの日に、５０００細胞／ウェルを、１０ＩＵ ペニシリンおよび１０μｇ／ｍＬ ストレプトマイシン（Ｃｅｌｌｇｒｏ）で補足された９０μＬの正常増殖培地内で、９６ウェルプレートに播種した。細胞を種々の濃度の１０μＬの希釈アナライトで処理し、プレートを３７℃で５％ ＣＯ２の雰囲気下でインキュベートした。５日後、１００μＬ／ウェルのＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を加え、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５プレートリーダーを使用して発光を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアをデータ分析に使用した。
結果
αＣＤ２２ ＣＴ ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシンは、遊離メイタンシンと比較して、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２およびＲａｍｏｓ細胞に対して非常に強力な活性をインビトロで示した（図６）。ＩＣ５０濃度は、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞に対しては、ＡＤＣおよび遊離薬物に関して、それぞれ０．０１８および０．０８６ｎＭであり、Ｒａｍｏｓ細胞に対しては、ＡＤＣおよび遊離薬物に関して、それぞれ０．００７および０．０４０ｎＭであった。
図６Ａは、ＨＩＰＳ−４ＡＰリンカーに結合したメイタンシンペイロードにＣ末端（ＣＴ）においてコンジュゲート化された抗ＣＤ２２ ＡＤＣに関するＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞に対するインビトロ効力［Ｌｏｇ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）濃度（ｎＭ）に対する生存率（％）］を示すグラフを示す。図６Ｂは、ＨＩＰＳ−４ＡＰリンカーに結合したメイタンシンペイロードにＣ末端（ＣＴ）においてコンジュゲート化された抗ＣＤ２２ ＡＤＣに関するＲａｍｏｓ細胞に対するインビトロ効力［Ｌｏｇ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）濃度（ｎＭ）に対する生存率（％）］を示すグラフを示す。
異種移植研究
雌ＩＣＲ ＳＣＩＤマウス（８匹／群）に５×１０６個のＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞を皮下接種した。腫瘍が平均２６２ｍｍ３に達した時点で処理を開始し、その時点で、ビヒクルのみ又はＣＴタグ付きαＣＤ２２ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシン（１０ｍｇ／ｋｇ）を動物に静脈内投与した。投与は４日ごとに合計４用量（ｑ４ｄ×４回）行った。動物を体重および腫瘍サイズに関して毎週２回モニターした。腫瘍が２０００ｍｍ３に達したら動物を安楽死させた。
結果
ビヒクル対照群における動物のエンドポイントまでの時間の中央値は１６日であった。したがって、その日に腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ％）を計算した。ＴＧＩ％は以下の式により定義された。
ＴＧＩ（％）＝（ＴＶ対照群−ＴＶ処理群）／ＴＶ対照×１００
ここで、ＴＶは腫瘍体積である。
αＣＤ２２ ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシンを投与した動物は第１６日に９０％のＴＧＩを示し、８つの腫瘍のうち５つが完全な退縮を示した（図７）。これらの完全退縮のうちの３つは研究終了（第５８日）まで持続可能であった。図７は、ＨＩＰＳ−４ＡＰリンカーに結合したメイタンシンペイロードにＣ末端（ＣＴ）においてコンジュゲート化された抗ＣＤ２２ ＡＤＣに関するＷＳＵ−ＤＬＣＬ２異種移植モデルに対するインビボ効力［日数に対する平均腫瘍体積（ｍｍ３）］を示すグラフを示す。図７における垂直矢印は投与を示し、これは４日ごとに合計４用量（ｑ４ｄ×４）行った。
実施例４
序論
血液由来の腫瘍は、米国で新たに診断された全癌症例の約１０％を占める。これらのうち、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）なる名称は、世界中で最も一般的に診断される上位１０種類の癌のなかに一括して順位づけられている多様な群を示す。長期生存傾向は改善しているが、ＭＤＲ１のような生体異物（ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃ）ポンプのアップレギュレーションによる薬物排出を１つの原因とする再発性または難治性疾患を有する患者を助けるための治療に対する、未だ満たされていない重大な臨床的要求が尚も存在する。ＭＤＲ１媒介性排出に抵抗性である非切断性メイタンシンペイロードを含有しＣＤ２２に対して標的化される部位特異的コンジュゲート化抗体−薬物コンジュゲートを製造した。該構築物はＣＤ２２＋ ＮＨＬ異種移植片に対して有効であり、副作用が観察されることなく６０ｍｇ／ｋｇでカニクイザルにおいて反復投与されうる。総合すると、該データは、この薬物が、過去の療法に対してＭＤＲ１関連抵抗性を示すようになったＣＤ２２＋ 腫瘍を有する患者において有効に使用される可能性を有することを示した。ＣＤ２２は、ＮＨＬおよびＡＬＬの治療のための臨床的に検証された標的である。本開示による抗ＣＤ２２抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は再発性／難治性ＮＨＬおよびＡＬＬ患者の治療に使用されうる。
材料および方法
アルデヒドタグ技術を用いて、抗ＣＤ２２抗体を非切断性メイタンシンペイロードに部位特異的にコンジュゲート化した。該ＡＤＣを生物物理学的および機能的の両方でインビトロで特徴づけした。ついで、マウスにおいて、２つの異種移植モデルを用いてインビボ有効性を測定し、ラットおよびカニクイザルの両方において毒性試験を行った。薬力学的試験をサルにおいて行い、薬物動態学的および毒物動態学的試験は該有効性および毒性試験における全ＡＤＣ暴露と比較した。
結果
該ＡＤＣは、排出ポンプＭＤＲ１を過剰発現するように構築された細胞系に対してでさえ、インビボで非常に強力であった。この構築物はＮＨＬ異種移植腫瘍モデルに対して１０ｍｇ／ｋｇ×４用量において有効であり、カニクイザル毒性試験においては、該ＡＤＣを６０ｍｇ／ｋｇで２回投与し、副作用は観察されなかった。これらの用量における全ＡＤＣへの暴露（ＡＵＣ０−ｉｎｆにより評価される）は、有効性を達成するために必要な曝露が許容限界未満であることを示した。最後に、処理されたサルにおける薬力学的応答の試験は、Ｂ細胞コンパートメントが選択的に減少（枯渇）したことを示しており、このことは、ＡＤＣが、顕著なオフターゲット毒性を伴うことなく、標的細胞を排除したことを示している。
これらの結果は、該ＡＤＣが、過去の療法に対してＭＤＲ１関連抵抗性を示すようになったＣＤ２２＋腫瘍を有する患者において有効に使用されうることを示した。
実施例５
序論
白血病、リンパ腫および骨髄腫は集団において非常に一般的であり、２０１５年に米国で新たに診断された全癌症例の約１０％を占める。これらの癌のうち、Ｂ細胞由来の悪性疾患は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）および急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を含む大きな多様な群を構成する。同様に、１つの範疇として、ＮＨＬは約６０個のリンパ腫サブセットを含み、それらのうちの約８５％はＢ細胞由来であり、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）およびマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）を包含する。総合すると、ＮＨＬ疾患は、観察される最も一般的な癌型であり、２０１２年に世界中で診断された１０番目に多い癌として、そして米国で７番目に多い癌として順位づけられている。長期的な傾向はほとんどの血液癌の診断例に関して５年生存率において改善を示しているが、未だ満たされていない重大な臨床的要求が尚も存在し、２００４年から２０１０年に診断されたＣＬＬ患者の１６％、ＡＬＬ患者の３０％およびＮＨＬ患者の３０％は５年生存エンドポイントを満たしていない。
ＣＤ２２はＢ細胞系限局性細胞表面糖タンパク質の１つであり、これは、Ｂ細胞血液悪性疾患の大部分においては発現されるが、造血幹細胞、記憶Ｂ細胞または他の正常非造血組織においては発現されない。その発現パターンおよび迅速なインターナリゼーション動力学はそれを抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）療法に対する標的とし、それは、ＮＨＬおよびＡＬＬに対する臨床試験において、そのようなものとして検証されている。
本明細書に記載されている実験においては、アルデヒドタグおよびヒドラジノ−イソ−ピクテット−スペングラー（ＨＩＰＳ）化学に基づく部位特異的コンジュゲート化技術を用いて、非切断性リンカーを介して抗体重鎖Ｃ末端に結合したメイタンシンペイロードを配置した。遺伝的にコードされたアルデヒドタグは６アミノ酸配列ＬＣＴＰＳＲを組込んだ。同時翻訳で、過剰発現ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）はコンセンサス配列内のシステインを、アルデヒド官能基を有するホルミルグリシン残基へと変換した。これをＨＩＰＳリンカーペイロードと反応させてＡＤＣを得た。このアプローチはペイロード配置とＤＡＲとの両方の制御をもたらし、非常に均質なＡＤＣ調製物を与えた。部位特異的コンジュゲート化ＡＤＣは、確率論的（ｓｔｏｃｈａｓｔｉｃ）コンジュゲートと比較して改善された薬物動態（ＰＫ）および効力をもたらした。これはおそらく、それぞれ無効分子または過度毒性分子につながりうる、調製物中の過少および過剰コンジュゲート化種の欠如によるものであろう。更に、抗ＣＤ２２ ＡＤＣ上で使用された非切断性リンカー−メイタンシンペイロードはＭＤＲ１による排出に対して抵抗性であり、オフターゲットまたはバイスタンダー殺傷をもたらさなかった。総合すると、これらの特徴は、前臨床試験で観察された抗ＣＤ２２ ＡＤＣの有効性および安全性に寄与した。
材料および方法
概要
全ての動物試験は施設動物保護および使用委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）の指針に従い実施され、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｒａｇｅｎ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅまたはＣｏｖａｎｃｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓにおいて行われた。マウス抗メイタンシン抗体はＰｒｏＭａｂにより製造され、社内で検証された。ウサギ抗ＡＦ４８８抗体はＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入された。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合二次抗体はＪａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈからのものであった。薬力学的試験に使用した抗体はＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎからのものであった。細胞系はＡＴＣＣおよびＤＳＭＺ細胞バンクから入手され、それらにおいて、形態学、核型決定およびＰＣＲに基づくアプローチにより、本物であると証明された。
タグ付き抗体のクローニング、発現および精製
標準的なクローニングおよび精製技術ならびにＧＰＥｘ（登録商標）発現技術を用いて、抗体を製造した。
バイオコンジュゲート化、精製およびＨＰＬＣ分析
Ｄｒａｋｅら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２０１４，２５，１３３１−４１に記載されているとおりにＡＤＣを製造し、特徴づけした。
ＭＤＲ１＋ 細胞系の作製
ＭＤＲ１（ＡＢＣＢ１）ｃＤＮＡをＳｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌから得、ハイグロマイシン選択マーカーを含有するｐＥＦプラスミド内にクローニングした。製造業者の説明に従いＲａｍｏｓ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１９２３）およびＷＳＵ−ＤＬＣＬ２（ＤＳＭＺ ＡＣＣ ５７５）細胞をエレクトロポレーションするためにＡＭＡＸＡ Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（商標）装置を使用した。ハイグロマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ １０６８７０１０）で選択した後、該プールをパクリタキセル処理（２５ｎＭで最大１０日間）で濃縮して、機能的ＭＤＲ１を含有する細胞を更に選択した。得られた細胞を、１０％ ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および１×ＧｌｕｔａＭａｘ（Ｇｉｂｃｏ ３５０５０−０７９）で補足されたＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ ２１８７０−０９２）内でハイグロマイシン選択下で維持した。
インビトロ細胞毒性アッセイ
細胞系を１００μＬの増殖培地内で５×１０４細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ ３６１０）においてプレーティングし、５時間静置した。試験サンプルの連続希釈をＲＰＭＩ中で最終濃度の６倍で行い、２０μＬを細胞に加えた。３７℃、５％ ＣＯ２で５日間インキュベートした後、Ｐｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ細胞増殖アッセイ（Ｇ３５８１）を製造業者の説明に従い使用して生存率を測定した。ＧＩ５０曲線を、ＡＤＣの薬物対抗体比（ＤＡＲ）値を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにおいて計算し、用量をペイロード濃度に対して正規化した。
異種移植研究
雌ＣＢ１７ ＩＣＲ ＳＣＩＤマウスに、５０％ マトリゲル中のＷＳＵ−ＤＬＣＬ２またはＲａｍｏｓ細胞のいずれかを皮下接種した。腫瘍を週２回測定し、式：
Figure 0006855496
（ここで、ｗ＝腫瘍の幅、およびｌ＝腫瘍の長さ）により腫瘍体積を推定した。腫瘍が所望の平均体積に達したら、動物を８〜１２匹のマウスの群に無作為化し、後記のとおりにそれらに投与した。試験終了時または腫瘍が２０００ｍｍ３に達したら、動物を安楽死させた。
ラット毒性試験および毒物動態（ＴＫ）分析
雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（試験開始時に８〜９週齢）に６、２０、４０または６０ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２２ ＡＤＣの単一静脈内用量を投与した（５匹／群）。投与後１２日間にわたり動物を観察した。第０日、第１日、第４日、第８日および第１１日に体重を記録した。血液を８時間ならびに第５日、第９日および第１２日の時点で全動物から採取し、毒物動態分析（全時点）ならびに臨床化学および血液学的分析（第５日および第１２日）に使用した。薬物動態分析に関して記載されているのと同じ条件および試薬を用いて、ＥＬＩＳＡにより毒物動態分析を行った。
非ヒト霊長類の毒性およびＴＫ試験
カニクイザル（２頭／性／群）に１０、３０または６０ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２２ ＡＤＣの２用量を投与し（２１日ごと）、ついで２１日間の観察期間を設けた。第１日の投与の前ならびに第８日、第１５日、第２２日（投与前）、第２９日、第３６日および第４２日に体重を評価した。表２に示されているスケジュールに従い、毒物動態学的分析、臨床化学的分析および血液学的分析のために血液を採取した。薬物動態分析に関して記載されているのと同じ条件および試薬を用いて、ＥＬＩＳＡにより毒物動態分析を行った。ただし、この場合は、全抗体および全ＡＤＣ測定のための捕捉試薬としてＣＤ２２−Ｈｉｓタンパク質を使用した。
Figure 0006855496
非ヒト霊長類の薬力学的試験
抗ＣＤ２２ ＡＤＣ毒性試験に登録されたカニクイザルからの全血サンプルをフローサイトメトリーにより分析して、ＣＤ３＋、ＣＤ２０＋およびＣＤ３−／ＣＤ２０−白血球集団を評価した。簡潔に説明すると、全血の１００μＬアリコートに、フルオレセインおよびフィコエリトリン結合アイソタイプ対照抗体またはフルオレセイン結合抗ＣＤ２０およびフィコエリトリン結合抗ＣＤ３抗体のいずれかを加え、氷上で３０分間インキュベートした。ついで赤血球を塩化アンモニウム溶液（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で細胞溶解し、細胞をリン酸緩衝食塩水＋１％ ＦＢＳで２回洗浄した。標識細胞を、ＦＡＣＳＤｉｖａ（商標）ソフトウェアを実行するＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）装置において、フローサイトメトリーにより分析した。
薬物動態（ＰＫ）試験設計
マウスの試験においては、初回投与の１時間後に開始し、観察期間にわたって継続する種々の時点で、Ｒａｍｏｓ異種移植実験に使用した動物を３つの群においてサンプリングした。ラットの試験の場合には、雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（１群３匹）にＡＤＣの３ｍｇ／ｋｇのボーラスを静脈内投与した。投与後の１時間、８時間および２４時間ならびにならびに２，４，６，８，１０，１４および２１日の時点で血漿を採取した。血漿サンプルを使用まで−８０℃で保存した。
ＰＫおよびＴＫサンプルの分析
全抗体、全ＡＤＣ（ＤＡＲ感受性）および全コンジュゲート（ＤＡＲ＞１）の濃度を、図１０に図示されているとおりにＥＬＩＳＡにより定量した。全抗体に関しては、コンジュゲートを抗ヒトＩｇＧ特異的抗体で捕捉し、ＨＲＰ結合抗ヒトＦｃ特異的抗体で検出した。全ＡＤＣに関しては、コンジュゲートを抗ヒトＦａｂ特異的抗体で捕捉し、マウス抗メイタンシン一次抗体およびそれに続くＨＲＰ結合抗マウスＩｇＧサブクラス１特異的二次抗体で検出した。全コンジュゲートに関しては、コンジュゲートを抗メイタンシン抗体で捕捉し、ＨＲＰ結合抗ヒトＦｃ特異的抗体で検出した。Ｕｌｔｒａ ＴＭＢ Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ ＥＬＩＳＡ基質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して、結合二次抗体を検出した。硫酸で反応を停止させた後、ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏソフトウェアを備えたＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ Ｍ５プレートリーダーで４５０ｎｍの吸光度を得ることによりシグナルを読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ ＰｒｉｓｍおよびＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌソフトウェアを使用してデータを分析した。
間接的ＥＬＩＳＡ ＣＤ２２抗原結合
Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ）をＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬのヒトＣＤ２２−Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）で４℃で一晩コートした。プレートをカゼインバッファー（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）でブロッキングし、ついで抗ＣＤ２２野生型抗体およびＡＤＣを、２００ｎｇ／ｍＬから開始する２倍希釈の１１段階系列希釈物においてプレーティングした。該プレートを室温で２時間、振とうしながらインキュベートした。リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ） ０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０で洗浄した後、結合アナライトをロバ抗ヒトＦｃγ特異的西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合二次抗体で検出した。シグナルをＵｌｔｒａ ＴＭＢ（Ｐｉｅｒｃｅ）で可視化し、２Ｎ Ｈ２ＳＯ４でクエンチした。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５プレートリーダーを使用して４５０ｎｍの吸光度を測定し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用してデータを分析した。
ＣＤ２２＋ ＮＨＬ細胞系における抗ＣＤ２２ ＡＤＣ媒介性ＣＤ２２インターナリゼーション
Ｒａｍｏｓ、Ｇｒａｎｔａ−５１９およびＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞（１ｅ６／試験）を標識バッファーのみ［ＰＢＳ＋１％ ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）］において、または抗ＣＤ２２ ＡＤＣ（１μｇ／試験）を含有する標識バッファーにおいてインキュベートした。サンプルを４または３７℃で２時間配置した。ついで細胞をフルオレセイン標識抗ＣＤ２２と共に氷上で２０分間インキュベートした。標識バッファー中で２回洗浄した後、ＦＡＣＳＤｉｖａ（商標）ソフトウェアを実行するＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）装置におけるフローサイトメトリーにより細胞を分析した。４℃および３７℃±ＡＤＣにおける細胞間の蛍光における差は抗ＣＤ２２ ＡＤＣ媒介性インターナリゼーションとして解釈された。
カニクイザルおよびヒト組織の交差反応性試験
ビオチン化抗ＣＤ２２ ＡＤＣおよびビオチン化ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシンリンカーペイロードコンジュゲート化アイソタイプ抗体を対照として使用して、Ｅｎｓｉｇｎａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．（Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡ）により、組織交差反応性試験が行われた。皮膚、心臓、肺、腎臓、肝臓、膵臓、胃、小腸、大腸および脾臓（陽性対照）を含有する組織マイクロアレイを使用した。西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ストレプトアビジンを使用し、ついでＤＡＢ基質で視覚化することにより、一次抗体を検出した。
ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシンリンカーペイロードの合成
Figure 0006855496
（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル １，２−ジメチルヒドラジン−１−カルボキシラート（２）
ＭｅＮＨＮＨＭｅ・２ＨＣｌ（１）（５．０ｇ，３７．６ｍｍｏｌ）をＣＨ３ＣＮ（８０ｍＬ）に溶解した。Ｅｔ３Ｎ（２２ｍＬ，１５８ｍｍｏｌ）を加え、生じた沈殿物を濾過により除去した。ＭｅＮＨＮＨＭｅの残存溶液にＦｍｏｃＣｌ（０．４９ｇ，１８．９ｍｍｏｌ，０．５当量）の溶液を−２０℃で２．５時間かけて滴下した。ついで反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝３：２）により精製して３．６ｇ（３４％）の化合物２を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．７５−７．３７（ｍ，８Ｈ），４．４８（ｂｒ ｓ，２Ｈ），４．２７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ），２．５５（ｂｒ ｓ，３Ｈ）。
Figure 0006855496
２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−１Ｈ−インドール（４）
オーブン乾燥したフラスコにインドール−２−メタノール、３（１．５８１ｇ，１０．７４ｍｍｏｌ）、ＴＢＳＣｌ（１．７８９ｇ，１１．８７ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（２．１９７ｇ，３２．２７ｍｍｏｌ）を入れ、この混合物をＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ，無水物）に懸濁させた。１６時間後、反応混合物を濃縮してオレンジ色残渣を得た。粗混合物をＥｔ２Ｏ（５０ｍＬ）に取り、ＡｃＯＨ水溶液（５％ｖ／ｖ，３×５０ｍＬ）およびブライン（２５ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して２．７８９ｇ（９９％）の化合物４を結晶性固体として得、これを、更に精製することなく使用した。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ８．２９（ｓ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄｄ，Ｊ＝８．１，０．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１９−７．１４（ｍ，１Ｈ），７．１２−７．０７（ｍ，１Ｈ），６．３２（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８９（ｓ，２Ｈ），０．９５（ｓ，９Ｈ），０．１２（ｓ，６Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ １３８．３，１３６．０，１２８．６，１２１．７，１２０．５，１１９．８，１１０．９，９９．０，５９．４，２６．１，１８．５，−５．２。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ１５Ｈ２４ＮＯＳｉ［Ｍ＋Ｈ］＋としての計算値：２６２．１６２７；実測値：２６２．１６２５。
メチル ３−（２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノアート（６）
ＣＨ３ＣＮ（２５ｍＬ）中のインドール４（２．７８９μｇ，１０．６７ｍｍｏｌ）の溶液にアクリル酸メチル，５（４．８０ｍＬ，５３．３ｍｍｏｌ）を加え、ついで１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（８００μＬ，５．３５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を還流した。１８時間後、溶液を冷却し、濃縮してオレンジ色油状物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィー（９：１ ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）で精製して３．５４３ｇ（９６％）の化合物６を無色油状物として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．５８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２３−７．１８（ｍ，１Ｈ），７．１２−７．０７（ｍ，１Ｈ），６．３８（ｓ，１Ｈ），４．８４（ｓ，２Ｈ），４．５４−４．４９（ｍ，２Ｈ），２．８９−２．８４（ｍ，２Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．１０（ｓ，６Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ １７２．０，１３８．５，１３７．１，１２７．７，１２２．０，１２１．０，１１９．８，１０９．３，１０１．８，５８．２，５１．９，３９．５，３４．６，２６．０，１８．４，−５．２。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ１９Ｈ３０ＮＯ３Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］＋としての計算値：３４８．１９９５；実測値：３４８．１９９６。
メチル ３−（２−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノアート（７）
０℃のＴＨＦ（２０ｍＬ）中の化合物６（１．２８３ｇ，３．６９２ｍｍｏｌ）の溶液にＴＨＦ中のフッ化テトラブチルアンモニウムの１．０Ｍ溶液（３．９０ｍＬ，３．９０ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、反応混合物をＥｔ２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３（飽和水溶液、３×２０ｍＬ）で洗浄し、濃縮して淡緑色油状物を得た。該油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（２：１ ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）により精製して、８２２ｍｇ（９５％）の７を白色結晶性固体として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．６０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄｄ，Ｊ＝８．２，０．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２７−７．２３（ｍ，１Ｈ），７．１６−７．１１（ｍ，１Ｈ），６．４４（ｓ，１Ｈ），４．７７（ｓ，２Ｈ），４．４９（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），３．６６（ｓ，３Ｈ），２．８７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．６４（ｓ，１Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ １７２．３，１３８．５，１３７．０，１２７．６，１２２．２，１２１．１，１１９．９，１０９．３，１０２．３，５７．１，５２．０，３９．１，３４．３。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ１３Ｈ１５ＮＮａＯ３［Ｍ＋Ｎａ］＋としての計算値：２５６．０９５０；実測値：２５６．０９４６。
メチル ３−（２−ホルミル−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノアート（８）
デス−マーチン ペルヨージナン（５．１９５ｇ，１２．２５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）とピリジン（２．７０ｍＬ，３３．５ｍｍｏｌ）との混合物に懸濁させた。５分後、得られた白色懸濁液をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中のメチル ３−（２−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノアート（７；２．６１１ｇ，１１．１９ｍｍｏｌ）の溶液に移して赤褐色懸濁液を得た。１時間後、反応物をチオ硫酸ナトリウム（１０％ 水溶液，５ｍＬ）およびＮａＨＣＯ３（飽和水溶液，５ｍＬ）でクエンチした。水層をＣＨ２Ｃｌ２（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して褐色油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の５〜５０％ ＥｔＯＡｃ）により精製して、２．１６５ｇ（８４％）の化合物８を無色油状物として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ９．８７（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｄｔ，Ｊ＝８．１，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄｄ，Ｊ＝８．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４５−７．４０（ｍ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．０，６．９，１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８４（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），２．８３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ １８２．５２，１７１．７５，１４０．１２，１３５．１０，１２７．２０，１２６．３９，１２３．４６，１２１．１８，１１８．５５，１１０．６２，５１．８３，４０．５６，３４．９７。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ１３Ｈ１３ＮＯ３Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］＋としての計算値：２５４．０７９３；実測値：２５４．０７８６。
３−（２−ホルミル−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパン酸（９）
ジオキサン（１００ｍＬ）に溶解したインドール８（２．３６９ｇ，１０．２４ｍｍｏｌ）の溶液にＬｉＯＨ（４Ｍ水溶液、７．６８ｍＬ、３０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。数時間のうちに徐々に濃厚な白色沈殿物が生じた。２１時間後、ＨＣｌ（１Ｍ水溶液，３０ｍＬ）を滴下して、ｐＨ４の溶液を得た。溶液を濃縮し、得られた淡褐色油状物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に溶解し、水（２×５０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮してオレンジ色固体を得た。シリカゲルクロマトグラフィー（０．１％ 酢酸を含有するヘキサン中の１０〜５０％ ＥｔＯＡｃ）による精製は１．９９４ｇ（８４％）の化合物９を淡黄色固体として与えた。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ９．８９（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｄｔ，Ｊ＝８．１，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄｄ，Ｊ＝８．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４８−７．４３（ｍ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄｄｄ，Ｊ＝８．０，６．９，１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．９１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ １８２．６５，１７６．９６，１４０．１２，１３５．０２，１２７．３３，１２６．４２，１２３．５３，１２１．２７，１１８．７６，１１０．５５，４０．１９，３４．８２。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ１２Ｈ１０ＮＯ３ Ｍ−Ｈ］−としての計算値：２１６．０６６６；実測値：２１６．０６６５。
３−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパン酸（１０）
１，２−ジクロロエタン（無水，２５ｍＬ）中の化合物９（１．１９３ｇ，５．４９２ｍｍｏｌ）および（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル−１，２−ジメチル ヒドラジンカルボキシラート，２（２．１４７ｇ，７．６０４ｍｍｏｌ）の溶液にトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１．２７３ｇ，６．００６ｍｍｏｌ）を加えた。得られた黄色懸濁液を２時間撹拌し、ついでＮａＨＣＯ３（飽和水溶液，１０ｍＬ）でクエンチし、ついでＨＣｌ（１Ｍ水溶液）を加えてｐＨ４とした。有機層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（５×１０ｍＬ）で抽出した。合せた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮してオレンジ色油状物を得た。Ｃ１８シリカゲルクロマトグラフィー（水中の２０〜９０％ ＣＨ３ＣＮ）による精製は１．６５６ｇ（６２％）の化合物１０をワックス状桃色固体として与えた。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．７６（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），７．７０−７．４７（ｂｒ ｍ，３Ｈ），７．４２−７．１６（ｂｒ ｍ，６Ｈ），７．１２−７．０５（ｍ，１Ｈ），６．３７（ｓ，０．６Ｈ），６．０５（ｓ，０．４Ｈ），４．７５−４．３０（ｂｒ ｍ，４Ｈ），４．２３（ｍ，１Ｈ），４．１０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３．５５（ｂｒ ｄ，１Ｈ），３．１１−２．６９（ｍ，５Ｈ），２．５７（ｂｒ ｓ，２Ｈ），２．０９（ｂｒ ｓ，１Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ １７４．９０，１５５．６５，１４３．８１，１４１．４２，１３６．９８，１３４．６４，１２７．７５，１２７．４８，１２７．１２，１２４．９２，１２２．００，１２０．７３，１２０．０１，１１９．７５，１０９．１９，１０３．７４，６７．３３，６６．８０，５１．３９，４７．３０，３９．５８，３９．３２，３５．２３，３２．１０。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ２９Ｈ３０Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋としての計算値：４８４．２２３６；実測値：４８４．２２２２。
（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル １，２−ジメチル−２−（（１−（３−オキソ−３−（ペルフルオロフェノキシ）プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イル）メチル）ヒドラジン−１−カルボキシラート（ＲＥＤ−００４）
乾燥撹拌棒を含む乾燥した１００ｍＬ 二頚丸底フラスコに化合物１０（５．００６ｇ，１０．４ｍｍｏｌ）を加えた。無水ＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）をシリンジにより加え、溶液を２０℃で５分間撹拌して、透明淡黄緑色溶液を得た。溶液を氷水浴内で０℃に冷却し、３ｍＬの無水ＥｔＯＡｃ中のペンタフルオロフェノール（２０９８．８ｍｇ，１１．４ｍｍｏｌ）を滴下した。溶液を０℃で５分間攪拌した。７ｍＬの無水ＥｔＯＡｃ中のＤＣＣ（２３４８．０ｍｇ，１１．４ｍｍｏｌ）をシリンジによりゆっくり滴下した。溶液を０℃で５分間撹拌し、ついで浴から取り出し、２０℃に加温した。反応物を２時間撹拌し、０℃に冷却し、濾過して透明淡黄緑色溶液を得た。溶液を５０ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈し、２×２５ｍＬのＨ２Ｏ、１×２５ｍＬの５Ｍ ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶液を濾過し、蒸発させ、高真空下で乾燥させて、６５５２．５ｍｇ（９７％）のＲＥＤ−００４を緑白色固体として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７８０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．５８（ｍ，３Ｈ），７．４５−７．２２（ｍ，６Ｈ），７．１４（ｄｄ（ａｐｐｔ．ｔ），Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），６．４２＆６．１０（２ ｂｒ ｓ，１Ｈ），４．７４（ｄｄ（ａｐｐｔ．ｔ），Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６５−３．１８（ｂｒ，３Ｈ），３．０８＆２．６５（２ ｂｒ ｓ，３Ｈ），２．８８（ｓ，３Ｈ）。
Figure 0006855496
（Ｓ）−３，４−ジメチルオキサゾリジン−２，５−ジオン（ＲＥＤ−１９４）
０℃の塩化メチレン（２５ｍｌ）中のＮ−Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ（１１）（０．００５モル）の溶液に窒素下で１．２当量の三塩化リンを加えた。反応混合物を０℃で２時間撹拌し、溶媒を減圧下で除去し、残渣を四塩化炭素（３×２０ｍｌ）で洗浄してＲＥＤ−１９４を得た。
（１４Ｓ，１６Ｓ，３２Ｒ，３３Ｒ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジナナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼンアシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル メチル−Ｌ−アラニナート（ＲＥＤ−０６２）
メイタンシノール（ＲＥＤ−０６３）（４．５３ｇ，８ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１１ｍＬ）に溶解して透明無色溶液を得、これを、乾燥した二頚丸底フラスコにＮ２下で移した。無水ＴＨＦ（４４ｍＬ）を加え、ついでＤＩＰＥＡ（８．４ｍＬ，４８ｍｍｏｌ）を加えた。ＲＥＤ−１９４（５．４ｇ，４２ｍｍｏｌ）の溶液を加えて透明無色溶液を得た。乾燥させた微粉化Ｚｎ（ＯＴｆ）２（８．７ｇ，２４ｍｍｏｌ）を該撹拌溶液に加え、反応混合物を２０℃で２日間撹拌した。７０ｍＬの１．２Ｍ ＮａＨＣＯ３および７０ｍＬのＥｔＯＡｃの溶液を加えることにより反応をクエンチした。得られた混合物は撹拌に際して白色沈殿物を生成し、これを濾過により除去した。濾液をＥｔＯＡｃ（５×７０ｍＬ）で抽出し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮して、赤橙色油状物を得た。これをＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）に溶解し、Ｂｉｏｔａｇｅシステム（２×Ｂｉｏｔａｇｅ Ｕｌｔｒａ １０ｇサンプルに吸着、ＣＨ２Ｃｌ２中のＭｅＯＨの０〜２０％勾配での２×Ｂｉｏｔａｇｅ Ｕｌｔｒａ １００ｇカートリッジ上の精製）を用いて精製して、４．３８ｇのＲＥＤ−０６２を淡桃色固体として得た（９５％ ｄｅ，９３．７％の所望のジアステレオマー）。
Figure 0006855496
ｔｅｒｔ−ブチル ４−オキソピペリジン−１−カルボキシラート（１３）
磁気攪拌棒を含む１００ｍＬ 丸底フラスコにピペリジン−４−オン塩酸塩一水和物（１２）（１．５３ｇ，１０ｍｍｏｌ）、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナート（２．３９ｇ，１１ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（１．２２ｇ，１１．５ｍｍｏｌ）、ジオキサン（１０ｍＬ）および水（１ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。得られた物質を真空中で乾燥させて、１．７４ｇ（８７％）の化合物１３を白色固体として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ３．７３（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．０），２．４６（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝６．０），１．５１（ｓ，９Ｈ）。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１０Ｈ１８ＮＯ３としての計算値：２００．３；実測値：２００．２。
ｔｅｒｔ−ブチル ４−（（２−（２−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）アミノ）ピペリジン−１−カルボキシラート（１４）
磁気攪拌棒を含む乾燥シンチレーションバイアルに化合物１３（３９９ｍｇ，２ｍｍｏｌ）、Ｈ２Ｎ−ＰＥＧ２−ＣＯＯｔ−Ｂｕ（５５０ｍｇ，２．４ｍｍｏｌ）、４オングストロームモレキュラーシーブ（活性化粉末，２００ｍｇ）および１，２−ジクロロエタン（５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物にトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（８４５ｍｇ，４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３日間撹拌した。得られた混合物をＥｔＯＡｃと飽和水性ＮａＨＣＯ３との間に分配した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、８５０ｍｇの化合物１４を粘性油状物として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ２１Ｈ４１Ｎ２Ｏ６としての計算値：４１７．３；実測値：４１７．２。
１３−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イル）−２，２−ジメチル−４，１４−ジオキソ−３，７，１０−トリオキサ−１３−アザヘプタデカン−１７−酸（ＲＥＤ−１９５）
磁気攪拌棒を含む乾燥シンチレーションバイアルに化合物１４（２２０ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）、無水コハク酸（５５ｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（５ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（３ｍＬ）を加えた。混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物をフラッシュクロマトグラフィー（５０〜１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出）で部分的に精製して１１７ｍｇの化合物ＲＥＤ−１９５を透明油状物として得、これを、更に特徴づけることなく次に進めた。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ２５Ｈ４５Ｎ２Ｏ９としての計算値：５１７．６；実測値：５１７．５。
１７−（ｔｅｒｔ−ブチル） １−（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジナナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼンアシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル） （２Ｓ）−８−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イル）−２，３−ジメチル−４，７−ジオキソ−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカンジオアート（ＲＥＤ−１９６）
磁気撹拌棒を含む乾燥シンチレーションバイアルにＲＥＤ−１９５（４４５ｍｇ，０．８６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（３２０ｍｇ，０．８４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３１１ｍｇ，２．４２ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（６ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で５分間撹拌した。得られた溶液をＲＥＤ−０６２（５１６ｍｇ，０．７９ｍｍｏｌ）に加え、反応混合物を室温で更に３０分間撹拌した。反応混合物をフラッシュクロマトグラフィー（３〜１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）で直接精製して、８２０ｍｇ（９０％）のＲＥＤ−１９６を淡褐色固体として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ５７Ｈ８７ＣｌＮ５Ｏ１７としての計算値：１１４８．６；実測値：１１４８．８。
（２Ｓ）−１−（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジナナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼンアシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）オキシ）−２，３−ジメチル−１，４，７−トリオキソ−８−（ピペリジン−４−イル）−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカン−１７−酸（ＲＥＤ−１９７）
磁気攪拌棒を含む乾燥シンチレーションバイアルにＲＥＤ−１９６（３１ｍｇ，０．０２７ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（１ｍＬ）を加えた。溶液を０℃に冷却し、四塩化スズ（ＩＶ）（１．０Ｍ ジクロロメタン溶液，０．３ｍＬ，０．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で１時間撹拌した。反応混合物をＣ１８フラッシュクロマトグラフィー（５〜１００％ ＭｅＣＮ／水で溶出）により直接精製して、１６ｍｇ（６０％）のＲＥＤ−１９７を白色固体（１６ｍｇ，収率６０％）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ４８Ｈ７１ＣｌＮ５Ｏ１５としての計算値：９９２．５；実測値：９９２．６。
（２Ｓ）−８−（１−（３−（２−（（２−（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−４−イル）−１−（（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジナナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼンアシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）オキシ）−２，３−ジメチル−１，４，７−トリオキソ−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカン−１７−酸（ＲＥＤ−１９８）
磁気攪拌棒を含む乾燥シンチレーションバイアルにＲＥＤ−１９７（１６ｍｇ，０．０１６ｍｍｏｌ）、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル １，２−ジメチル−２−（（１−（３−オキソ−３−（ペルフルオロフェノキシ）プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イル）メチル）ヒドラジン−１−カルボキシラート（１２）（１３ｍｇ，０．０２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（８μＬ，０．０５ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１ｍＬ）の混合物を加えた。溶液を室温で１８時間撹拌した。反応混合物をＣ１８フラッシュクロマトグラフィー（５〜１００％ ＭｅＣＮ／水で溶出）により直接精製して、１８ｍｇ（７７％）のＲＥＤ−１９８を白色固体として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ７７Ｈ９８ＣｌＮ８Ｏ１８としての計算値：１４５７．７；実測値：１４５７．９。
（２Ｓ）−１−（（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジナナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼンアシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）オキシ）−８−（１−（３−（２−（（１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−４−イル）−２，３−ジメチル−１，４，７−トリオキソ−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカン−１７−酸（ＲＥＤ−１０６）
磁気攪拌棒を含む乾燥シンチレーションバイアルにＲＥＤ−１９７（１８ｍｇ，０．０１２ｍｍｏｌ）、ピペリジン（２０μＬ，０．０２ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１ｍＬ）を加えた。溶液を室温で２０分間撹拌した。反応混合物をＣ１８フラッシュクロマトグラフィー（１〜６０％ ＭｅＣＮ／水で溶出）により直接精製して、１５ｍｇ（９８％）の化合物ＲＥＤ−１０６を白色固体として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ６２Ｈ８８ＣｌＮ８Ｏ１６としての計算値：１２３５．６；実測値：１２３６．０。
結果と考察
抗ＣＤ２２ ＡＤＣの製造および初期特徴づけ
使用した抗ＣＤ２２抗体（ＣＡＴ−０２）はＲＦＢ４抗体のヒト化変異体であった。１．６ｇ／Ｌのバイオリアクター力価およびシステインからホルミルグリシンへの９７％の変換率を示すＧＰＥｘ（登録商標）クローン細胞系を用いて、Ｃ末端タグ付き抗ＣＤ２２抗体を製造した。ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシンリンカーペイロードを合成し（上記に記載）、該アルデヒドタグ付き抗体にコンジュゲート化した。得られたＡＤＣを、単量体含有率（９９．２％）を評価するためにサイズ排除クロマトグラフィーにより、そして薬物対抗体比（ＤＡＲ）（これは１．８であった）を評価するために疎水性相互作用（ＨＩＣ）および逆相（ＰＬＲＰ）クロマトグラフィーにより特徴づけした（図１１）。ヒトＣＤ２２タンパク質に対するアフィニティおよびＣＤ２２＋細胞上のインターナリゼーションに関して、それぞれ、ＥＬＩＳＡに基づく方法（図１２）およびフローサイトメトリーに基づく方法（図１３）を用いて、該ＡＤＣを野生型（タグ無し）抗ＣＤ２２抗体と比較した。両方の機能的尺度に関して、該ＡＤＣは該野生型抗体と同等に良好に機能し、このことは、コンジュゲート化がこれらのパラメータに影響を及ぼさないことを示した。
抗ＣＤ２２ ＡＤＣはＭＤＲ１の基質ではなく、オフターゲットまたはバイスタンダー殺傷を促進しない
抗ＣＤ２２ ＡＤＣの効力をＲａｍｏｓおよびＷＳＵ−ＤＬＣＬ２ ＨＮＬ腫瘍細胞系に対してインビトロで試験した。活性を、遊離メイタンシン、および切断性バリン−シトルリンジペプチドリンカーを介してメイタンシンにコンジュゲート化されたＣＡＴ−０２抗ＣＤ２２抗体を使用して製造された関連ＡＤＣの活性と比較した。両方のＡＤＣは野生型ＲａｍｏｓおよびＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞に対してサブナノモルの活性を示した（図１４パネルＡおよびパネルＣ）。生体異物（ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃ）排出ポンプＭＤＲ１を発現するように操作された細胞の変異体においては、本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣのみがその元の効力を保持した（図１４パネルＢおよびパネルＤ）。これとは対照的に、遊離メイタンシンは〜１０倍低い効力を示し、切断性メイタンシンを含有するＡＤＣは活性を実質的に欠いていた。対照実験においては、ＭＤＲ１インヒビターであるシクロスポリンでのＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞の同時処理は野生型細胞に影響を及ぼさなかったが、ＭＤＲ１＋細胞における遊離メイタンシンおよび切断性ＡＤＣの元の効力を回復させた（図１４パネルＥおよびパネルＦ）。総合すると、これらの結果は、本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣの活性代謝物がＭＤＲ１排出の基質ではないことを示した。関連インビトロ細胞毒性試験においては、本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣは、抗原陰性細胞系ＮＣＩ−Ｎ８７に影響を及ぼさなかった（図１５）。このことは、それが５日間の細胞培養期間にわたってオフターゲット活性を示さなかったことを示している。更に、ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシンリンカーペイロードにコンジュゲート化された、抗ＨＥＲ２に基づくＡＤＣは、抗原陽性細胞との共培養において抗原陰性細胞のバイスタンダー殺傷をもたらさなかった（図１６）。このことは、該抗ＨＥＲ２ ＡＤＣコンジュゲートの場合と同じである本開示の抗ＣＤ２２ ＡＤＣの活性代謝産物もバイスタンダー殺傷をもたらさないことを示唆している。
抗ＣＤ２２ ＡＤＣはＮＨＬ異種移植モデルに対して有効であった
抗ＣＤ２２ ＡＤＣのインビボ有効性をＷＳＵ−ＤＬＣＬ２およびＲａｍｏｓ異種移植モデル（図１７）（それらは、それぞれ、相対的により高いおよびより低い量のＣＤ２２を発現した）に対して評価した（図１８）。単一用量（単回投与）試験において、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２腫瘍を担持するマウスに１０ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２２ ＡＤＣまたはビヒクル対照を投与した。腫瘍が平均１１８ｍｍ３になった時点で投与を開始した。ＡＤＣを投与された動物のうち、２５％（８匹中２匹）は部分的応答を示し、それらの腫瘍は第３１日までに４ｍｍ３に退縮した。抗ＣＤ２２ ＡＤＣ処理群およびビヒクル対照群は、第３１日までに、それぞれ、４１５および１７８３ｍｍ３の平均腫瘍体積を有していた。つぎに、複数用量（多回投与）試験において、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２異種移植片を担持するマウスを１０ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２２ ＡＤＣまたはビヒクル対照（４日ごとに合計４用量）で処理した。腫瘍が平均２６２ｍｍ３になった時点で投与を開始した。ＡＤＣを投与した動物のうち、７５％（８匹中６匹）が完全応答を示し、これらの３８％（８匹中３匹）は試験の終了（第５９日）（最終投与の４３日後）までそれを持続した。これとは対照的に、ビヒクル対照群は第１７日までに２１９１ｍｍ３の平均腫瘍体積に達した。最後に、複数用量試験において、Ｒａｍｏｓ異種移植片を担持するマウスを５または１０ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２２ ＡＤＣまたはビヒクル対照（４日ごとに合計４用量）で処理した。腫瘍が平均２４６ｍｍ３になった時点で投与を開始した。予想どおり、５または１０ｍｇ／ｋｇ用量の投与を受けた群では、それぞれ６３％または８７％の腫瘍増殖遅延を示す用量効果が観察された。特に、エンドポイントまでの時間の中央値は、ビヒクル対照群、５ｍｇ／ｋｇ投与群および１０ｍｇ／ｋｇ投与群に関して、それぞれ、１２、１９および２２日であった。３つ全ての試験において、抗ＣＤ２２ ＡＤＣ投与群のマウスの体重への影響は観察されなかった（図１９）。
抗ＣＤ２２ ＡＤＣはラットおよびカニクイザルにおいて６０ｍｇ／ｋｇまで十分に耐容された
抗ＣＤ２２ ＡＤＣはげっ歯類ＣＤ２２に結合しなかったが、これらの動物におけるＡＤＣの投与は該リンカーペイロードのオフターゲット毒性および安全性に関する情報を提供した。前記のとおり、マウス異種移植試験においては、体重または臨床所見に対する投与の影響は観察されなかった。探索的ラット毒性試験（図２０）において、動物（１群あたり５匹）に６、２０、４０または６０ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２２ ＡＤＣの単一静脈内用量を投与し、投与後１２日間観察した。全ての動物は試験終了まで生存した。６０ｍｇ／ｋｇで投与された動物は、ビヒクル対照群と比較して体重における１０％の減少を示した。最小ないし軽度の肝胆管損傷に適合した臨床化学変化が、４０ｍｇ／ｋｇ以上で投与された動物において第５日に見出され、それはアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）およびアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）の活性上昇を含んでいた。ほとんどの変化は第１２日までに逆転していた。血液学に関しては、中等度ないし顕著に減少した血小板数が、４０ｍｇ／ｋｇ以上で投与された動物において第５日に見出され、第１２日までに完全に逆転していた。炎症に適合した変化が、４０ｍｇ／ｋｇで投与された動物において第５日および第１２日に見出され、それは、僅かないし中程度に増加した好中球数および単球数、僅かに増加したグロブリン濃度および減少したアルブミン：グロブリン比を含んでいた。
抗ＣＤ２２ ＡＤＣはカニクイザルＣＤ２２に結合し（図２１）、サルにおいて、ヒトと比較して類似した組織交差反応性プロファイルを示した（図２２）。したがって、カニクイザルは、このＡＤＣのオンターゲット毒性およびオフターゲット毒性の両方を試験するための適切なモデルに相当した。探索的反復投与試験において、サル（２頭／性／群）に１０、３０または６０ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２２ ＡＤＣを３週間に１回、合計２用量投与し、ついで２１日間の観察期間を設けた。全ての動物は研究終了まで生存した。臨床所見、体重または摂食量における抗ＣＤ２２ ＡＤＣに関連した変化は生じなかった。臨床病理学的変化は、主として、３０ｍｇ／ｋｇ以上で投与された動物で生じ、最小の肝損傷、血小板消費および／または喪失の上昇ならびに炎症と合致していた（図２３）。これらの変化は３０および６０ｍｇ／ｋｇならびに第１および第２の投与の後で類似しており、微視的変化または臨床効果に関連しているとは予想されない大きさであった。３０ｍｇ／ｋｇ以上で投与された動物における最小の肝損傷に適合する変化は、第２１日および第４２日までに部分的に逆転していたＡＬＴ、ＡＳＴおよびＡＬＰ活性の上昇からなるものであった。投与から１週間以内に観察された僅かないし中等度に減少した血小板数は第２１日および第４２日までにほとんど逆転していた。炎症に適合した変化は、最小限度ないし中程度に増加した好中球数および単球数、僅かないし中程度に増加したグロブリン濃度および最小限度で減少したアルブミン濃度であった。
抗ＣＤ２２ ＡＤＣの投与はカニクイザルにおいてＢ細胞減少をもたらした
交差反応性種における抗ＣＤ２２ ＡＤＣの薬力学的効果を評価するために、反復投与毒性試験において登録されたカニクイザルから採取されたサンプルにおける末梢血単核細胞集団をモニターした。具体的には、投与前ならびに第７日、第１４日、第２８および第３５日に動物において観察されたＢ細胞（ＣＤ２０＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）およびＮＫ細胞（ＣＤ２０−／ＣＤ３−）の比を見出すために、フローサイトメトリーを用いた（図５）。投与前の抗ＣＤ２２ ＡＤＣ処理動物においては、Ｂ細胞は全リンパ球の平均１１．６％を含んでいた。この値は第３５日までに平均３．８％に減少した。これは、ベースラインレベルと比較して、測定Ｂ細胞集団における６８％の平均減少に相当する（図２４）。Ｂ細胞減少は１０〜６０ｍｇ／ｋｇの全投与群において類似していたが、このことは、該効果を得るためには最低用量で十分であったことを示している。一方、ビヒクル対照処理動物におけるＢ細胞ならびに全群におけるＴ細胞およびＮＫ細胞（非表示）は処理の経過にわたってほとんど変化しなかった。これらの結果は、抗ＣＤ２２ ＡＤＣが、有害なオフターゲット毒性をもたらすことなく、カニクイザルＣＤ２２＋細胞の減少をインビボで選択的にもたらしうることを示した。
マウス、ラットおよびカニクイザルにおける抗ＣＤ２２ ＡＤＣの薬物動態および毒物動態
抗ＣＤ２２ ＡＤＣのインビボ安定性を評価するために、ラットにおける薬物動態（ＰＫ）試験を行った。３ｍｇ／ｋｇの単一用量の抗ＣＤ２２ ＡＤＣの投与後の２１日間にわたり、動物（３匹／群）の末梢血における全抗体、全ＡＤＣおよび全コンジュゲートの濃度をモニターした（表２および図２５）。図１０に示されているとおり、全ＡＤＣおよび全コンジュゲートアッセイは、それぞれ、ＤＡＲ感受性およびＤＡＲ非感受性測定を用いた。３つ全てのアナライトに関して得られたＰＫパラメーターは類似しており、このことは、該コンジュゲートが循環において概ね安定していたことを示している。例えば、全抗体、全ＡＤＣおよび全コンジュゲートの消失半減期は、それぞれ、９．４８、６．１３および７．２２日であった。
つぎに、前記のＲａｍｏｓ複数用量有効性試験からのマウスの末梢血において、抗ＣＤ２２ ＡＤＣアナライトの濃度を経時的に測定した。この分析の目的は、異種移植試験において有効用量で達成された全ＡＤＣ曝露レベルを決定することであった（図２６）。この基準に関しては、２２日間にわたる１０ｍｇ／ｋｇ×４用量はＲａｍｏｓモデルにおいて８７％の腫瘍増殖遅延をもたらしたこと、および２８日間にわたる１０ｍｇ／ｋｇ×４用量はＷＳＵ−ＤＬＣＬ２モデルにおいて７５％の動物に完全応答（触診可能な腫瘍は残存せず）をもたらしたことを思い出していただきたい。該マウスにおける１０ｍｇ／ｋｇ×４用量に関する時間０から無限大までの濃度対時間曲線下平均面積（ＡＵＣ０−ｉｎｆ）は２５３０±１３１（Ｓ．Ｄ．）日・μｇ／ｍＬであった。
最後に、前記のラットおよびカニクイザル毒性試験において投与された動物からの毒物動態血漿サンプルにおける抗ＣＤ２２ ＡＤＣアナライト濃度を評価した（図２６）。これらの分析の目的は、観察された毒性の存在または非存在と相関する用量で達成された全ＡＤＣ曝露レベルを決定することであった。該ラット試験に関しては、ＣｍａｘおよびＡＵＣ０−ｉｎｆ値は用量に概ね比例していた。６０ｍｇ／ｋｇ用量の平均ＡＵＣ０−ｉｎｆは５２０１±２７３日・μｇ／ｍＬであった。該サル試験に関しては、ＣｍａｘおよびＡＵＣ０−ｉｎｆ値は用量に概ね比例していた。最初の６０ｍｇ／ｋｇ用量の平均ＡＵＣ０−ｉｎｆは６１４０±６６７日・μｇ／ｍＬであった。該抗体はカニクイザルモデルにおいて抗原に結合したが、クリアランス（非表示）は全ての投与群において類似していた。このことは、標的媒介性クリアランスメカニズムを飽和させるためには低い（１０ｍｇ／ｋｇ）用量で十分であること、したがって、抗原媒介性クリアランスがこの試験の結果に有意な影響を及ぼさないことを示した。この観察はＢ細胞減少に対する抗ＣＤ２２ ＡＤＣ処理の薬力学的効果と合致し、その度合は全ての投与群において類似していた。
結論
ＭＤＲ１発現細胞による排出に対して抵抗性である、メイタンシンペイロードに部位特異的にコンジュゲート化されたＣＤ２２標的化ＡＤＣを製造した。該ＡＤＣは１．８のＤＡＲを有し、良好な生物物理学的特性を示し、有意（８７％）な腫瘍増殖遅延から、２つのＮＨＬ異種移植モデルに対するインビボでの完全応答までの範囲の有効性をもたらした。この有効性は、毒性を伴うレベルを十分に下回る曝露レベルで達成された。実際、反復投与カニクイザル毒性試験においては、６０ｍｇ／ｋｇの最高用量においてさえも副作用は認められず、このことは、より高い用量が使用されうることを示している。抗ＣＤ２２ ＡＤＣは有効性と安全性との両方を兼ね備えていた。追加的な利点として、標的抗原、親抗体およびメイタンシン系細胞毒性ペイロードを含む多数の基本成分がヒトにおいて使用されており、安全性および毒性に関して十分に研究されている。ヒトの薬物動態学的および毒性プロファイルを予測するための合理的なモデルであるカニクイザルに基づけば、これらの研究の結果は、抗ＣＤ２２ ＡＤＣが、ＭＤＲ１のアップレギュレーションにより難治性疾患になっているＮＨＬ患者のようなＮＨＬ患者に治療上有用であることを示した。
本発明はその特定の実施形態に関して記載されているが、本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく、種々の変更が施されることが可能であり、均等物が代用（置換）されうる、と当業者に理解されるべきである。また、個々の状況、材料、組成物、方法、方法工程または工程を本発明の目的、精神および範囲に適合させるために、多数の修飾が施されうる。全てのそのような修飾は添付の特許請求の範囲の範囲内であると意図される。

Claims (11)

  1. 式（Ｉ）：
    Figure 0006855496
     ［式中、Ｗ２は少なくとも１つの修飾アミノ酸残基を含む抗ＣＤ２２抗体である］
    のコンジュゲート。
  2. 抗ＣＤ２２抗体は、図８Ａ〜８Ｃに示されているＣＤ２２アミノ酸配列のアミノ酸１〜８４６、アミノ酸１〜７５９、アミノ酸１〜７５１またはアミノ酸１〜６７０におけるエピトープに結合する、請求項１記載のコンジュゲート。
  3. 抗ＣＤ２２抗体は式（ＩＩ）：
    Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
    （式中、
    ＦＧｌｙ’は式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
    Ｚ２０はプロリンまたはアラニン残基である；
    Ｚ３０は塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸である；
    Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸でありうるが、該配列が該コンジュゲートのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；ならびに
    Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である）
    の配列を含む、請求項１記載のコンジュゲートであって、好ましくは
    ａ）該配列はＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲであるか、または
    ｂ）
    Ｚ３０はＲ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、ＩおよびＰから選択される；
    Ｘ１はＬ、Ｍ、ＳおよびＶから選択される；ならびに
    Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧおよびＣから選択される、
    前記コンジュゲート。
  4. 該修飾アミノ酸残基は抗ＣＤ２２抗体の重鎖定常領域のＣ末端に位置する、請求項１記載のコンジュゲートであって、好ましくは
    該重鎖定常領域は式（ＩＩ）：
    Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
    （式中、
    ＦＧｌｙ’は式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
    Ｚ２０はプロリンまたはアラニン残基である；
    Ｚ３０は塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸である；
    Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸でありうるが、該配列が該コンジュゲートのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；ならびに
    Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である）
    の配列を含み、ここで、該配列はアミノ酸配列ＳＬＳＬＳＰＧのＣ末端に存在し、より好ましくは、
    ａ）該重鎖定常領域は配列ＳＰＧＳＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＧＳを含むか、または
    ｂ）
    Ｚ３０はＲ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、ＩおよびＰから選択される；
    Ｘ１はＬ、Ｍ、ＳおよびＶから選択される；ならびに
    Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧおよびＣから選択される、
    前記コンジュゲート。
  5. 該修飾アミノ酸残基は抗ＣＤ２２抗体の軽鎖定常領域内に位置する、請求項１記載のコンジュゲートであって、好ましくは
    該軽鎖定常領域は式（ＩＩ）：
    Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
    （式中、
    ＦＧｌｙ’は式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
    Ｚ２０はプロリンまたはアラニン残基である；
    Ｚ３０は塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸である；
    Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸でありうるが、該配列が該コンジュゲートのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；ならびに
    Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である）
    の配列を含み、ここで、該配列は配列ＫＶＤＮＡＬのＣ末端に存在し、および／または配列ＱＳＧＮＳＱのＮ末端に存在し、より好ましくは
    ａ）該軽鎖定常領域は配列ＫＶＤＮＡＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＱＳＧＮＳＱを含むか、
    ｂ）
    Ｚ３０はＲ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、ＩおよびＰから選択される；
    Ｘ１はＬ、Ｍ、ＳおよびＶから選択される；ならびに
    Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧおよびＣから選択される、
    前記コンジュゲート。
  6. 該修飾アミノ酸残基は抗ＣＤ２２抗体の重鎖ＣＨ１領域内に位置する、請求項１記載のコンジュゲートであって、好ましくは
    該重鎖ＣＨ１領域は式（ＩＩ）：
    Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
    （式中、
    ＦＧｌｙ’は式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
    Ｚ２０はプロリンまたはアラニン残基である；
    Ｚ３０は塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸である；
    Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸でありうるが、該配列が該コンジュゲートのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；ならびに
    Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である）
    の配列を含み、ここで、該配列は配列ＳＷＮＳＧＡのＣ末端に存在し、および／または配列ＧＶＨＴＦＰのＮ末端に存在し、より好ましくは
    ａ）該重鎖ＣＨ１領域は配列ＳＷＮＳＧＡＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＧＶＨＴＦＰを含か、
    ｂ）
    Ｚ３０はＲ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、ＩおよびＰから選択される；
    Ｘ１はＬ、Ｍ、ＳおよびＶから選択される；ならびに
    Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧおよびＣから選択される、
    前記コンジュゲート。
  7. 該修飾アミノ酸残基は
    ａ）抗ＣＤ２２抗体の重鎖ＣＨ２領域内に位置するか、
    ｂ）抗ＣＤ２２抗体の重鎖ＣＨ３領域内に位置する、請求項１記載のコンジュゲート。
  8. 請求項１〜７のいずれか１項記載のコンジュゲートと医薬上許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
  9. 癌の治療において使用するための請求項１記載のコンジュゲートまたは請求項８に記載の医薬組成物。
  10. 該修飾アミノ酸残基は抗ＣＤ２２抗体の重鎖ＣＨ３領域のＣ−末端に位置する、請求項４記載のコンジュゲートであって、好ましくは
    該重鎖ＣＨ３領域は式（ＩＩ）：
    Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
    （式中、
    ＦＧｌｙ’は式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
    Ｚ２０はプロリンまたはアラニン残基である；
    Ｚ３０は塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸である；
    Ｘ１は存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には、任意のアミノ酸でありうるが、該配列が該コンジュゲートのＮ末端に存在する場合には、Ｘ１は存在する；ならびに
    Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である）
    の配列を含み、ここで、該配列は配列ＳＬＳＬＳＰＧのＣ末端に存在し、より好ましくは
    ａ）該重鎖ＣＨ３領域は配列ＳＰＧＳＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＧＳを含か、
    ｂ）
    Ｚ３０はＲ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、ＩおよびＰから選択される；
    Ｘ１はＬ、Ｍ、ＳおよびＶから選択される；ならびに
    Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立して、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧおよびＣから選択される、
    前記コンジュゲート。
  11. 癌が、Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫または非ホジキンＢ細胞リンパ腫である、請求項９記載の使用のためのコンジュゲートまたは医薬組成物。
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