KR20220097392A - 항-cd37 항체-메이탄신 접합체 및 이의 사용 방법 - Google Patents

항-cd37 항체-메이탄신 접합체 및 이의 사용 방법 Download PDF

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KR20220097392A
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로빈 엠. 바필드
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알.피.쉐러 테크놀러지즈 엘엘씨
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Abstract

본 개시내용은 항-CD37 항체-메이탄신 접합체 구조를 제공한다. 본 개시내용은 또한 이러한 접합체의 제조 방법뿐만 아니라 이를 사용하는 방법도 포함한다.

Description

항-CD37 항체-메이탄신 접합체 및 이의 사용 방법
관련 출원에 대한 상호-참조
본 출원은 2019년 10월 31일자로 출원된 미국 가출원 제62/928,939호에 대한 우선권을 주장하며, 이의 개시내용은 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
단백질-소분자 치료용 접합체의 분야는 대단히 진보되어, 수년 내에 더 많은 약물이 제공될 것이라는 전망과 함께 다수의 임상적으로 유익한 약물이 제공된다. 단백질-접합체 치료제는, 예를 들어, 더 적은 부작용을 초래하는, 특이성, 기능의 다양성 및 상대적으로 낮은 표적외 활성으로 인해 여러 장점을 제공할 수 있다. 단백질의 화학적 변형은, 이들 장점을, 더 강력하거나, 안정적이거나 또는 다중모드로 부여함으로써 확대시킬 수 있다.
단백질에 대한 번역후 변형을 생성하고 조작하기 위해 다수의 표준 화학적 변환이 보통 사용된다. 당업자가 소정의 아미노산의 측쇄를 선택적으로 변형시킬 수 있는 다수의 방법이 있다. 예를 들어, 카복실산 측쇄(아스파테이트 및 글루타메이트)는 수용성 카보다이이미드 시약에 의한 초기 활성화 및 후속의 아민과의 반응에 의해 표적화될 수 있다. 유사하게, 라이신은 활성화된 에스터 또는 아이소티오사이아네이트의 사용을 통해 표적화될 수 있고, 시스테인 티올은 말레이미드 및 α-할로-카보닐로 표적화될 수 있다.
화학적으로 변경된 단백질 치료제 또는 시약의 생성에 대한 한가지 중요한 장애는 생물학적으로 활성인, 균일한 형태의 단백질의 생성이다. 폴리펩타이드에 대한 약물 또는 검출 가능한 표지의 접합은 제어가 어려울 수 있고, 결과적으로 부착된 약물 분자의 수 및 화학적 접합의 위치가 상이한 접합체의 불균일한 혼합물을 초래한다. 몇몇 경우에, 폴리펩타이드 상에서 화학적 결합의 정확하고 선택적인 형성을 지시하기 위하여 접합 및/또는 폴리펩타이드에 접합체된 약물 또는 검출 가능한 표지의 부위를 합성 유기 화학의 툴을 사용하여 제어하는 것이 바람직할 수 있다.
CD37은 테트라스파닌 계열로도 알려진 막관통 4 슈퍼패밀리의 구성원이다. CCD37은 인테그린 및 기타 막관통 4 슈퍼패밀리 단백질과 복합되는 것으로 알려진 세포 표면 당단백질이다. 이것은 정상적인 성숙한 B 세포 상에서 그리고 대부분의 B 세포 악성 종양에 의해 선택적으로 발현된다. CD37 항원은 B 세포에서 풍부하게 발현되지만, 형질세포와 정상 줄기세포에는 존재하지 않는다. 이와 같이, CD37은 B-세포 만성 림프구성 백혈병(CLL), 모발 세포 백혈병(HCL) 및 B-세포 비호지킨 림프종(NHL)과 같은 재발 B-세포 유래 악성 종양을 비롯한 B-세포 악성 종양을 지닌 환자에서 적합한 치료 표적이다.
본 개시내용은 항-CD37 항체-메이탄신 접합체 구조를 제공한다. 본 개시내용은 또한 이러한 접합체의 제조 방법뿐만 아니라 이를 사용하는 방법도 포함한다.
본 개시내용의 양상들은 하기 화학식 (I)의 측쇄를 가진 적어도 1개의 변형된 아미노산 잔기를 갖는 접합체를 포함한다:
Figure pct00001
식 중,
Z는 CR4 또는 N이고;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되거나, 또는 R2와 R3은 선택적으로 고리상으로 연결되어 5 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고;
각각의 R4는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되고;
L은 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-를 포함하는 링커이되, a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, a, b, c 및 d의 합계는 1 내지 4이고;
T1, T2, T3 및 T4는 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노(4AP), 아세탈기, 하이드라진, 설파이드 및 에스터로부터 선택되되, EDA는 에틸렌 다이아민 모이어티이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜이고, 그리고 AA는 아미노산 잔기이고, w는 1 내지 20의 정수이고, n은 1 내지 30의 정수이고, p는 1 내지 20의 정수이고, 그리고 h는 1 내지 12의 정수이고;
V1, V2, V3 및 V4는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 선택되되, q는 1 내지 6의 정수이고;
각각의 R13은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택되고;
각각의 R15는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되고;
W1은 메이탄시노이드이고; 그리고
W2는 항-CD37 항체이다.
몇몇 경우에, 접합체는 하기를 포함하되, 여기서:
T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
T2, T3 및 T4는 각각 독립적으로 (EDA)w, (PEG)n, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (AA)p, -(CR13OH)h-, 4-아미노-피페리딘(4AP), 아세탈기, 하이드라진, 및 에스터로부터 선택되고; 그리고
V1, V2, V3 및 V4는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
여기서:
(PEG)n은
Figure pct00002
이되, n은 1 내지 30의 정수이고;
EDA는 하기 구조:
Figure pct00003
를 갖는 에틸렌 다이아민 모이어티이되, y는 1 내지 6의 정수이고 r은 0 또는 1이고;
4-아미노-피페리딘(4AP)은
Figure pct00004
이고;
각각의 R12 및 R15는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택되되, 임의의 2개의 인접한 R12기는 환상으로 연결되어 피페라진일 고리를 형성하고; 그리고
R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택된다.
몇몇 경우에, 접합체는 하기를 포함하되, 여기서: T1, T2, T3 및 T4, 및 V1, V2, V3 및 V4는 다음 표로부터 선택된다:
Figure pct00005
Figure pct00006
몇몇 경우에, 접합체는 하기를 포함하되, 여기서: 링커 L은 하기 구조들 중 하나로부터 선택된다:
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
식 중,
각각의 f는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고;
각각의 y는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고;
각각의 n은 독립적으로 0 또는 1 내지 30의 정수이고;
각각의 p는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고;
각각의 h는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고;
각각의 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴이고; 그리고
각각의 R'은 독립적으로 H, 아미노산, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴의 측쇄기이다.
몇몇 경우에, 메이탄시노이드는 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00012
식 중,
Figure pct00013
는 메이탄시노이드와 L 간의 부착점을 나타낸다.
몇몇 경우에, 접합체는 하기를 포함하되, 여기서: T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 4AP이고, V2는 -CO-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고, 그리고 V4는 존재하지 않는다.
몇몇 경우에, 링커 L은 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00014
식 중,
각각의 f는 독립적으로 1 내지 12의 정수이고; 그리고
n은 1 내지 30의 정수이다.
몇몇 경우에, 항-CD37 항체는 IgG1 항체이다.
몇몇 경우에, 항-CD37 항체는 IgG1 카파 항체이다.
몇몇 경우에, 항-CD37 항체는 화학식 (II)의 서열을 포함한다:
X1(FGly')X2Z20X3Z30 (II)
식 중,
FGly'은 화학식 (I)의 변형된 아미노산 잔기이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고;
Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 경우, X1은 존재하고; 그리고
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이다.
몇몇 경우에, 서열은 L(FGly')TPSR이다.
몇몇 경우에, 접합체는 하기를 포함하되, 여기서:
Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I 및 P로부터 선택되고;
X1은 L, M, S 및 V로부터 선택되고; 그리고
X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 및 C로부터 선택된다.
몇몇 경우에, 변형된 아미노산 잔기는 항-CD37 항체의 중쇄 불변 영역의 C-말단에 위치된다.
몇몇 경우에, 중쇄 불변 영역은 하기 화학식 (II)의 서열을 포함한다:
X1(FGly')X2Z20X3Z30 (II)
식 중,
FGly'은 화학식 (I)의 변형된 아미노산 잔기이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고;
Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 경우, X1은 존재하고; 그리고
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
여기서 서열은 아미노산 서열 SLSLSPG에 대한 C-말단이다.
몇몇 경우에, 중쇄 불변 영역은 서열 SPGSL(FGly')TPSRGS를 포함한다.
몇몇 경우에, 접합체는 하기를 포함하되, 여기서:
Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I 및 P로부터 선택되고;
X1은 L, M, S 및 V로부터 선택되고; 그리고
X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 및 C로부터 선택된다.
몇몇 경우에, 변형된 아미노산 잔기는 항-CD37 항체의 경쇄 불변 영역에 위치된다.
몇몇 경우에, 경쇄 불변 영역은 하기 화학식 (II)의 서열을 포함한다:
X1(FGly')X2Z20X3Z30 (II)
식 중,
FGly'은 화학식 (I)의 변형된 아미노산 잔기이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고;
Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 경우, X1은 존재하고; 그리고
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
서열은 서열 KVDNAL에 대한 C-말단이고/이거나 서열 QSGNSQ에 대한 N-말단이다.
몇몇 경우에, 경쇄 불변 영역은 서열 KVDNAL(FGly')TPSRQSGNSQ를 포함한다.
몇몇 경우에, 접합체는 하기를 포함하되, 여기서:
Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I 및 P로부터 선택되고;
X1은 L, M, S 및 V로부터 선택되고; 그리고
X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 및 C로부터 선택된다.
몇몇 경우에, 변형된 아미노산 잔기는 항-CD37 항체의 중쇄 CH1 영역에 위치된다.
몇몇 경우에, 중쇄 CH1 영역은 하기 화학식 (II)의 서열을 포함한다:
X1(FGly')X2Z20X3Z30 (II)
식 중,
FGly'은 화학식 (I)의 변형된 아미노산 잔기이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고;
Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고 산;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 경우, X1은 존재하고; 그리고
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
여기서, 서열은 아미노산 서열 SWNSGA에 대한 C-말단이고/이거나 아미노산 서열 GVHTFP에 대한 N-말단이다.
몇몇 경우에, 중쇄 CH1 영역은 서열 SWNSGAL(FGly')TPSRGVHTFP를 포함한다.
몇몇 경우에, 접합체는 하기를 포함하되, 여기서:
Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I 및 P로부터 선택되고;
X1은 L, M, S 및 V로부터 선택되고; 그리고
X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 및 C로부터 선택된다.
몇몇 경우에, 변형된 아미노산 잔기는 항-CD37 항체의 중쇄 CH2 영역에 위치된다.
몇몇 경우에, 변형된 아미노산 잔기는 항-CD37 항체의 중쇄 CH3 영역에 위치된다.
몇몇 경우에, 항-CD37 항체는 하기를 포함하는 항-CD37 항체와 CD37에 대한 결합에 대해 경쟁한다:
아미노산 서열 GYNMN(서열번호 3)을 포함하는 VH CDR1,
아미노산 서열 NIDPYYGGTTYNRKFKG(서열번호 4)를 포함하는 VH CDR2, 및
아미노산 서열 SVGPFDS(서열번호 5)를 포함하는 VH CDR3
을 포함하는 가변 중쇄(VH) 폴리펩타이드; 및
아미노산 서열 RASENVYSYLA(서열번호 8)를 포함하는 VL CDR1,
아미노산 서열 FAKTLAE(서열번호 9)를 포함하는 VL CDR2, 및
아미노산 서열 QHHSDNPWT(서열번호 10)를 포함하는 VL CDR3
을 포함하는 가변 경쇄(VL) 폴리펩타이드.
몇몇 경우에, 항-CD37 항체는 하기를 포함한다:
아미노산 서열 GYNMN(서열번호 3)을 포함하는 VH CDR1,
아미노산 서열 NIDPYYGGTTYNRKFKG(서열번호 4)를 포함하는 VH CDR2, 및
아미노산 서열 SVGPFDS(서열번호 5)를 포함하는 VH CDR3
을 포함하는 가변 중쇄(VH) 폴리펩타이드; 및
아미노산 서열 RASENVYSYLA(서열번호 8)를 포함하는 VL CDR1,
아미노산 서열 FAKTLAE(서열번호 9)를 포함하는 VL CDR2, 및
아미노산 서열 QHHSDNPWT(서열번호 10)를 포함하는 VL CDR3
을 포함하는 가변 경쇄(VL) 폴리펩타이드.
몇몇 경우에, 항-CD37 항체는 하기를 포함한다:
서열번호 2에 제시된 아미노산 서열과 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 폴리펩타이드; 및
서열번호 7에 제시된 아미노산 서열과 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 폴리펩타이드.
본 개시내용의 양상들은 본 개시내용에 따른 접합체 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다.
본 개시내용의 양상들은 대상체에게 유효량의 본 개시내용에 따른 접합체를 투여하는 단계를 포함하는 방법을 포함한다.
본 개시내용의 양상들은 대상체의 암을 치료하는 방법을 포함한다. 해당 방법은 대상체에게 치료적 유효량의, 본 개시내용에 따른 접합체를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 투여는 대상체의 암을 치료하는데 효과적이다.
몇몇 경우에, 암은 혈액 악성종양이다.
몇몇 경우에, 혈액 악성종양은 악성 B 세포를 특징으로 한다. 몇몇 경우에, 악성 B 세포를 특징으로 하는 혈액 악성종양은 백혈병이다. 몇몇 경우에, 백혈병은 만성 림프구성 백혈병(CLL)이다.
몇몇 경우에, 혈액 악성종양은 림프종이다. 몇몇 경우에, 림프종은 비호지킨 림프종(NHL)이다.
본 개시내용의 양상들은 대상체의 표적 부위에 약물을 전달하는 방법을 포함한다. 해당 방법은 본 개시내용에 따른 접합체를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 투여는 대상체의 표적 부위에 접합체로부터 치료적 유효량의 약물을 방출하는데 효과적이다.
본 개시내용의 양상들은 폼일글리신(formylglycine: FGly) 잔기를 포함하는 항-CD37 항체를 포함한다.
몇몇 경우에, 항-CD37 항체는 하기 서열을 포함한다:
X1(FGly)X2Z20X3Z30
식 중,
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고;
Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 서열이 항체의 N-말단에 있을 경우, X1은 존재하고; 그리고
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이다.
몇몇 경우에, 서열은 L(FGly)TPSR이다.
몇몇 경우에, 항-CD37 항체는 하기를 포함하되, 여기서:
Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I 및 P로부터 선택되고;
X1은 L, M, S 및 V로부터 선택되고; 그리고
X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 및 C로부터 선택된다.
몇몇 경우에, 서열은 항-CD37 항체의 중쇄 불변 영역의 C-말단에 있다.
몇몇 경우에, 중쇄 불변 영역은 하기 서열을 포함한다:
X1(FGly)X2Z20X3Z30
식 중,
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고;
Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 경우, X1은 존재하고; 그리고
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
여기서 서열은 아미노산 서열 SLSLSPG에 대한 C-말단이다.
몇몇 경우에, 중쇄 불변 영역은 서열 SPGSL(FGly)TPSRGS를 포함한다.
몇몇 경우에, 항-CD37 항체는 하기 서열을 포함하되, 여기서:
Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I 및 P로부터 선택되고;
X1은 L, M, S 및 V로부터 선택되고; 그리고
X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 및 C로부터 선택된다.
몇몇 경우에, FGly 잔기는 항-CD37 항체의 경쇄 불변 영역에 위치된다.
몇몇 경우에, 경쇄 불변 영역은 하기 서열을 포함한다:
X1(FGly)X2Z20X3Z30 (II)
식 중,
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고;
Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 경우, X1은 존재하고; 그리고
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
여기서, 서열은 서열 KVDNAL에 대한 C-말단이고/이거나, 서열 QSGNSQ에 대한 N-말단이다.
몇몇 경우에, 경쇄 불변 영역은 서열 KVDNAL(FGly)TPSRQSGNSQ를 포함한다.
몇몇 경우에, 항-CD37 항체는 하기를 포함하되, 여기서:
Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I 및 P로부터 선택되고;
X1은 L, M, S 및 V로부터 선택되고; 그리고
X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 및 C로부터 선택된다.
몇몇 경우에, FGly 잔기는 항-CD37 항체의 중쇄 CH1 영역에 위치된다.
몇몇 경우에, 중쇄 CH1 영역은 하기 서열을 포함한다:
X1(FGly)X2Z20X3Z30
식 중,
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고;
Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 경우, X1은 존재하고; 그리고
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
여기서, 서열은 아미노산 서열 SWNSGA에 대한 C-말단이고/이거나 아미노산 서열 GVHTFP에 대한 N-말단이다.
몇몇 경우에, 중쇄 CH1 영역은 서열 SWNSGAL(FGly)TPSRGVHTFP를 포함한다.
몇몇 경우에, 항-CD37 항체는 하기를 포함하되, 여기서:
Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I 및 P로부터 선택되고;
X1은 L, M, S 및 V로부터 선택되고; 그리고
X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 및 C로부터 선택된다.
몇몇 경우에, FGly 잔기는 항-CD37 항체의 중쇄 CH2 영역에 위치된다.
몇몇 경우에, FGly 잔기는 항-CD37 항체의 중쇄 CH3 영역에 위치된다.
몇몇 경우에, 항-CD37 항체는 하기를 포함하는 항-CD37 항체와 CD37에 대한 결합에 대해 경쟁한다:
아미노산 서열 GYNMN(서열번호 3)을 포함하는 VH CDR1,
아미노산 서열 NIDPYYGGTTYNRKFKG(서열번호 4)를 포함하는 VH CDR2, 및
아미노산 서열 SVGPFDS(서열번호 5)를 포함하는 VH CDR3
을 포함하는 가변 중쇄(VH) 폴리펩타이드; 및
아미노산 서열 RASENVYSYLA(서열번호 8)를 포함하는 VL CDR1,
아미노산 서열 FAKTLAE(서열번호 9)를 포함하는 VL CDR2, 및
아미노산 서열 QHHSDNPWT(서열번호 10)를 포함하는 VL CDR3
을 포함하는 가변 경쇄(VL) 폴리펩타이드.
몇몇 경우에, 항-CD37 항체는 하기를 포함한다:
아미노산 서열 GYNMN(서열번호 3)을 포함하는 VH CDR1,
아미노산 서열 NIDPYYGGTTYNRKFKG(서열번호 4)를 포함하는 VH CDR2, 및
아미노산 서열 SVGPFDS(서열번호 5)를 포함하는 VH CDR3
을 포함하는 가변 중쇄(VH) 폴리펩타이드; 및
아미노산 서열 RASENVYSYLA(서열번호 8)를 포함하는 VL CDR1,
아미노산 서열 FAKTLAE(서열번호 9)를 포함하는 VL CDR2, 및
아미노산 서열 QHHSDNPWT(서열번호 10)를 포함하는 VL CDR3
을 포함하는 가변 경쇄(VL) 폴리펩타이드.
몇몇 경우에, 항-CD37 항체는 하기를 포함한다:
서열번호 2에 제시된 아미노산 서열과 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 폴리펩타이드; 및
서열번호 7에 제시된 아미노산 서열과 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 폴리펩타이드.
본 개시내용의 양상들은 본 개시내용에 따른 항-CD37 항체를 포함하는 세포를 포함한다.
본 개시내용의 양상들은 본 개시내용에 따른 항-CD37 항체를 암호화하는 핵산을 포함한다. 본 개시내용의 양상들은 또한 핵산을 포함하는 발현 벡터를 포함한다. 본 개시내용의 양상들은 또한 핵산 또는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 포함한다.
본 개시내용의 양상들은 본 개시내용의 항-CD37 항체를 제조하는 방법을 포함한다. 이러한 방법은 본 개시내용의 발현 벡터를 포함하는 세포를, 해당 세포가 항체를 발현하게 하는 적합한 조건 하에 배양하는 단계를 포함하며, 여기서 항체가 생산된다.
도 1, 패널 a는 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 항체 백본을 따라 목적하는 위치에 삽입된 폼일글리신-생성 효소(formylglycine-generating enzyme: FGE) 인식 서열을 도시한다. 발현 시, 진핵 세포에 대해 내인성인 FGE는 공통 서열 내에서 Cys의 폼일글리신 잔기(FGly)로의 전환을 촉매한다. 도 1, 패널 b는, 부위-특이적으로 접합된 ADC를 생성하기 위하여 하이드라지노-아이소-피쳇-슈펭글러(hydrazino-iso-Pictet-Spengler: HIPS) 링커 및 페이로드와 반응된 알데하이드 모이어티(항체당 2개)를 보유하는 항체를 도시한다. 도 1, 패널 c는, 안정적인 C-C 결합을 생성하기 위하여 중간체 하이드라조늄 이온에 이어서 친핵성 인돌과의 분자내 알킬화를 통하여 진행되는, HIPS 화학을 도시한다.
도 2는, 본 개시내용의 실시형태에 따른, HIPS-4AP 링커에 부착된 메이탄신 페이로드에 중쇄 C-말단(CT)에서 접합된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체의 소수성 상호작용 칼럼(hydrophobic interaction column: HIC) 자취를 도시한다.
도 3은, 본 개시내용의 실시형태에 따른, HIPS-4AP 링커에 부착된 메이탄신 페이로드에 중쇄 C-말단(CT)에서 접합된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체의 분석적 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 분석의 그래프를 도시한다.
도 4는, 본 개시내용의 실시형태에 따른, Daudi 세포에서 HIPS-4AP 링커(ADC)에 부착된 메이탄신 페이로드에 중쇄 C-말단에서 접합된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체에 대한 시험관내 세포독성 데이터를 도시한다.
도 5는, 본 개시내용의 실시형태에 따른, RL 세포에서 HIPS-4AP 링커(ADC)에 부착된 메이탄신 페이로드에 중쇄 C-말단에서 접합된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체에 대한 시험관내 세포독성 데이터를 도시한다.
도 6은, 본 개시내용의 실시형태에 따른, Ramos-RA 세포에서 HIPS-4AP 링커(ADC)에 부착된 메이탄신 페이로드에 중쇄 C-말단에서 접합된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체에 대한 시험관내 세포독성 데이터를 도시한다.
도 7은, 본 개시내용의 실시형태에 따른, WSU-DLCL2 세포에서 HIPS-4AP 링커(ADC)에 부착된 메이탄신 페이로드에 중쇄 C-말단에서 접합된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체에 대한 시험관내 세포독성 데이터를 도시한다.
도 8은, 본 개시내용의 실시형태에 따른, Granta 519 세포에서 HIPS-4AP 링커(ADC)에 부착된 메이탄신 페이로드에 중쇄 C-말단에서 접합된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체에 대한 시험관내 세포독성 데이터를 도시한다.
도 9는, 본 개시내용의 실시형태에 따른, BJAB 세포에서 HIPS-4AP 링커(ADC)에 부착된 메이탄신 페이로드에 중쇄 C-말단에서 접합된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체에 대한 시험관내 세포독성 데이터를 도시한다.
도 10은, 본 개시내용의 실시형태에 따른, DoHH-2 세포에서 HIPS-4AP 링커(ADC)에 부착된 메이탄신 페이로드에 중쇄 C-말단에서 접합된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체에 대한 시험관내 세포독성 데이터를 도시한다.
도 11은, 본 개시내용의 실시형태에 따른, SU-DHL-4 세포에서 HIPS-4AP 링커(ADC)에 부착된 메이탄신 페이로드에 중쇄 C-말단에서 접합된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체에 대한 시험관내 세포독성 데이터를 도시한다.
도 12는, 본 개시내용의 실시형태에 따른, Raji 세포에서 HIPS-4AP 링커(ADC)에 부착된 메이탄신 페이로드에 중쇄 C-말단에서 접합된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체에 대한 시험관내 세포독성 데이터를 도시한다.
도 13은, 본 개시내용의 실시형태에 따른, DoHH-2 이종이식 모델에서 HIPS-4AP 링커(ADC)에 부착된 메이탄신 페이로드에 중쇄 C-말단에서 접합된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체의 생체내 효능을 입증하는 데이터를 도시한다.
도 14는, 본 개시내용의 실시형태에 따른, Granta 519 이종이식 모델에서 HIPS-4AP 링커(ADC)에 부착된 메이탄신 페이로드에 중쇄 C-말단에서 접합된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체의 생체내 효능을 입증하는 데이터를 도시한다.
도 15a는 알데하이드 태그 부착된 Ig 폴리펩타이드의 생성을 위한 가능한 변형 부위를 나타내는 부위맵을 묘사한다. 상부 서열은 IgG1 경쇄 폴리펩타이드(서열번호 48)의 보존된 영역의 아미노산 서열이고, Ig 경쇄에서 가능한 변형 부위를 나타내고; 하부 서열은 Ig 중쇄 폴리펩타이드(서열번호 43; GenBank 수탁 번호 AAG00909)의 보존된 영역의 아미노산 서열이고 Ig 중쇄에서 가능한 변형 부위를 나타낸다. 중쇄 및 경쇄 넘버링은 중쇄 및 경쇄를 기준으로 한다.
도 15b는, 알데하이드 태그가 면역글로불린 중쇄에서 제공될 수 있는 변형 부위를 나타내는, IgG1(서열번호 43), IgG2(서열번호 44), IgG3(서열번호 45), IgG4(서열번호 46) 및 IgA(서열번호 47)에 대한면역글로불린 중쇄 불변 영역의 정렬을 묘사한다. 중쇄 및 경쇄 넘버링은 중쇄 및 경쇄를 기준으로 한다.
도 15c는, 면역글로불린 경쇄에서 알데하이드 태그가 제공될 수 있는 변형 부위를 나타내는, 면역글로불린 경쇄 불변 영역(위에서부터 밑으로 서열번호 48 내지 52)의 정렬을 묘사한다.
정의
다음의 용어는 달리 표시되지 않는 한 다음의 의미를 갖는다. 임의의 정의되지 않은 용어는 당해 기술분야에서 인식되는 의미를 갖는다.
"알킬"은 1 내지 10개의 탄소 원자, 예컨대, 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 5개, 또는 1 내지 4개, 또는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 1가의 포화 지방족 하이드로카빌기를 지칭한다. 이 용어는, 예로써, 선형 및 분지형 하이드로카빌기, 예컨대, 메틸(CH3-), 에틸(CH3CH2-), n-프로필(CH3CH2CH2-), 아이소프로필((CH3)2CH-), n-부틸(CH3CH2CH2CH2-), 아이소부틸((CH3)2CHCH2-), sec-부틸((CH3)(CH3CH2)CH-), t-부틸((CH3)3C-), n-펜틸(CH3CH2CH2CH2CH2-) 및 네오펜틸((CH3)3CCH2-)을 포함한다.
용어 "치환된 알킬"은, 알킬 사슬의 하나 이상의 탄소 원자(C1 탄소 원자는 제외됨)가 선택적으로 헤테로원자, 예컨대, -O-, -N-, -S-, -S(O)n-(여기서 n은 0 내지 2임), -NR-(여기서 R은 수소 또는 알킬임)로 대체되었고 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아자이도, 사이아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로사이클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 나이트로, -SO-알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-아릴, -SO2-헤테로아릴 및 -NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 5개의 치환기를 갖는, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 알킬기를 지칭하되, 여기서 R' 및 R"은 동일 또는 상이할 수 있고, 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 사이클로알킬, 알켄일, 사이클로알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릭으로부터 선택된다.
"알킬렌"은, 직쇄형 또는 분지형이고, -O-, -NR10-, -NR10C(O)-, -C(O)NR10- 등으로부터 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 중단된, 바람직하게는 1 내지 6개, 더욱 바람직하게는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 2가의 지방족 하이드로카빌기를 지칭한다. 이 용어는, 예로써, 메틸렌(-CH2-), 에틸렌(-CH2CH2-), n-프로필렌(-CH2CH2CH2-), 아이소-프로필렌(-CH2CH(CH3)-), (-C(CH3)2CH2CH2-), (-C(CH3)2CH2C(O)-), (-C(CH3)2CH2C(O)NH-), (-CH(CH3)CH2-) 등을 포함한다.
"치환된 알킬렌"은 이하의 "치환된"의 정의 내에서 탄소에 대해서 기재된 바와 같은 치환체로 대체된 1 내지 3개의 수소를 갖는 알킬렌기를 지칭한다.
용어 "알칸"은 본 명세서에 정의된 바와 같은 알킬기 및 알킬렌기를 지칭한다.
용어 "알킬아미노알킬", "알킬아미노알켄일" 및 "알킬아미노알킨일"은 R'NHR"기를 지칭하되, R'은 본 명세서에서 정의된 바와 같은 알킬기이고, R"은 본 명세서에 정의된 바와 같은 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌기이다.
용어 "알크아릴" 또는 "아르알킬"은 -알킬렌-아릴 및 -치환된 알킬렌-아릴 기를 지칭하되, 알킬렌, 치환된 알킬렌 및 아릴은 본 명세서에 정의되어 있다.
"알콕시"는 -O-알킬기를 지칭하되, 알킬은 본 명세서에 정의된 바와 같다. 알콕시는, 예로써, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 아이소프로폭시, n-부톡시, t-부톡시, sec-부톡시, n-펜톡시, 등을 포함한다. 용어 "알콕시"는 또한 알켄일-O-, 사이클로알킬-O-, 사이클로알켄일-O- 및 알킨일-O- 기를 지칭하되, 알켄일, 사이클로알킬, 사이클로알켄일 및 알킨일은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
용어 "치환된 알콕시"는 치환된 알킬-O-, 치환된 알켄일-O-, 치환된 사이클로알킬-O-, 치환된 사이클로알켄일-O-, 및 치환된 알킨일-O- 기를 지칭하되, 치환된 알킬, 치환된 알켄일, 치환된 사이클로알킬, 치환된 사이클로알켄일 및 치환된 알킨일은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
용어 "알콕시아미노"는 -NH-알콕시 기를 지칭하되, 알콕시는 본 명세서에 정의되어 있다.
용어 "할로알콕시"는, 알킬기 상의 1개 이상의 수소 원자가 할로기로 치환되어 있는 알킬-O-기를 지칭하되, 예로써, 트라이플루오로메톡시 등을 포함한다.
용어 "할로알킬"은, 알킬기 상의 1개 이상의 수소 원자가 할로기로 치환된, 위에서 기재된 바와 같은 치환된 알킬기를 지칭한다. 이러한 기의 예는, 제한 없이, 플루오로알킬기, 예컨대, 트라이플루오로메틸, 다이플루오로메틸, 트라이플루오로에틸 등을 포함한다.
용어 "알킬알콕시"는 -알킬렌-O-알킬, 알킬렌-O-치환된 알킬, 치환된 알킬렌-O-알킬, 및 치환된 알킬렌-O-치환된 알킬 기를 지칭하되, 알킬, 치환된 알킬, 알킬렌 및 치환된 알킬렌은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
용어 "알킬티오알콕시"는 -알킬렌-S-알킬, 알킬렌-S-치환된 알킬, 치환된 알킬렌-S-알킬 및 치환된 알킬렌-S-치환된 알킬기를 지칭하되, 알킬, 치환된 알킬, 알킬렌 및 치환된 알킬렌은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"알켄일"은, 2 내지 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 내지 4개의 탄소 원자를 갖고 적어도 1, 바람직하게는 1 내지 2 부위의 이중 결합 불포화를 갖는 직쇄 또는 분지형 하이드로카빌기를 지칭한다. 이 용어는, 예로써, 바이-비닐, 알릴, 및 부트-3-엔-1-일을 포함한다. 이 용어 내에는 시스 및 트랜스 이성질체 또는 이들 이성질체의 혼합물이 포함된다.
용어 "치환된 알켄일"은, 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아자이도, 사이아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로사이클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 나이트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택된, 1 내지 5개의 치환체, 또는 1 내지 3개의 치환체를 갖는 본 명세서에 정의된 바와 같은 알켄일기를 지칭한다.
"알킨일"은, 2 내지 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 내지 3개의 탄소 원자를 갖고 적어도 1, 바람직하게는 1 내지 2 부위의 삼중 결합 불포화를 갖는, 직쇄형 또는 분지형 1가 하이드로카빌기를 지칭한다. 이러한 알킨일기의 예는 아세틸렌일(-C≡CH) 및 프로파길(-CH2C≡CH)을 포함한다.
용어 "치환된 알킨일"은, 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아자이도, 사이아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로사이클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 나이트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택된, 1 내지 5개의 치환체, 또는 1 내지 3개의 치환체를 갖는, 본 명세서에 정의된 바와 같은 알킨일기를 지칭한다.
"알킨일옥시"는 -O-알킨일 기를 지칭하되, 알킨일은 본 명세서에 정의된 바와 같다. 알킨일옥시는, 예로써, 에틴일옥시, 프로핀일옥시 등을 포함한다.
"아실"은 H-C(O)-, 알킬-C(O)-, 치환된 알킬-C(O)-, 알켄일-C(O)-, 치환된 알켄일-C(O)-, 알킨일-C(O)-, 치환된 알킨일-C(O)-, 사이클로알킬-C(O)-, 치환된 사이클로알킬-C(O)-, 사이클로알켄일-C(O)-, 치환된 사이클로알켄일-C(O)-, 아릴-C(O)-, 치환된 아릴-C(O)-, 헤테로아릴-C(O)-, 치환된 헤테로아릴-C(O)-, 헤테로사이클릴-C(O)-, 및 치환된 헤테로사이클릴-C(O)- 기를 지칭하되, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다. 예를 들어, 아실은 "아세틸"기 CH3C(O)-를 포함한다.
"아실아미노"는 -NR20C(O)알킬, -NR20C(O)치환된 알킬, NR20C(O)사이클로알킬, -NR20C(O)치환된 사이클로알킬, -NR20C(O)사이클로알켄일, -NR20C(O)치환된 사이클로알켄일, -NR20C(O)알켄일, -NR20C(O)치환된 알켄일, -NR20C(O)알킨일, -NR20C(O)치환된 알킨일, -NR20C(O)아릴, -NR20C(O)치환된 아릴, -NR20C(O)헤테로아릴, -NR20C(O)치환된 헤테로아릴, -NR20C(O)헤테로사이클릭 및 -NR20C(O)치환된 헤테로사이클릭기를 지칭하되, R20은 수소 또는 알킬이고, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"아미노카보닐" 또는 용어 "아미노아실"은 -C(O)NR21R22기를 지칭하되, R21 및 R22는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 아릴, 치환된 아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 및 치환된 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고, R21과 R22는 선택적으로 이들에 결합된 질소와 함께 연결되어 헤테로사이클릭 또는 치환된 헤테로사이클릭기를 형성하고, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"아미노카보닐아미노"는 -NR21C(O)NR22R23기를 지칭하되, R21, R22 및 R23은 독립적으로 수소, 알킬, 아릴 또는 사이클로알킬로부터 선택되거나, 또는 2개의 R기는 연결되어 헤테로사이클릴기를 형성한다.
용어 "알콕시카보닐아미노"는 -NRC(O)OR기를 지칭하되, 각각의 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클릴이고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릴은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
용어 "아실옥시"는 알킬-C(O)O-, 치환된 알킬-C(O)O-, 사이클로알킬-C(O)O-, 치환된 사이클로알킬-C(O)O-, 아릴-C(O)O-, 헤테로아릴-C(O)O- 및 헤테로사이클릴-C(O)O-기를 지칭하되, 알킬, 치환된 알킬, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릴은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"아미노설포닐"은 -SO2NR21R22 기를 지칭하되, R21 및 R22는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 아릴, 치환된 아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 치환된 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고, R21과 R22는 이들에 결합된 질소와 함께 선택적으로 연결되어 헤테로사이클릭 또는 치환된 헤테로사이클릭기를 형성하고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"설포닐아미노"는 -NR21SO2R22기를 지칭하되, R21 및 R22는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 아릴, 치환된 아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 및 치환된 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고, R21과 R22는 이들에 연결된 원자들과 함께 선택적으로 연결되어 헤테로사이클릭 또는 치환된 헤테로사이클릭기를 형성하고, 여기서, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"아릴" 또는 "Ar"은 단일 고리(예컨대, 페닐기에 존재) 또는 다중 축합 고리를 가지는 고리계(이러한 방향족 고리계의 예는 나프틸, 안트릴 및 인단일을 포함함)를 갖는 6 내지 18개의 탄소 원자의 1가의 방향족 탄소고리기를 지칭하고, 축합 고리는 방향족일 수 있거나 방향족이 아닐 수 있으며, 단 부착점은 방향족 고리의 원자를 통한다. 이 용어는 예로써 페닐 및 나프틸을 포함한다. 아릴 치환체에 대한 정의에 의해 달리 한정되지 않는 한, 그러한 아릴기는 아실옥시, 하이드록시, 티올, 아실, 알킬, 알콕시, 알켄일, 알킨일, 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 알킬, 치환된 알콕시, 치환된 알켄일, 치환된 알킨일, 치환된 사이클로알킬, 치환된 사이클로알켄일, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아실아미노, 알크아릴, 아릴, 아릴옥시, 아자이도, 카복실, 카복실알킬, 사이아노, 할로겐, 나이트로, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 아미노아실옥시, 옥시아실아미노, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴, -SO2-헤테로아릴 및 트라이할로메틸로부터 선택된, 1 내지 5개의 치환체, 또는 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있다.
"아릴옥시"는 -O-아릴기를 지칭하되, 아릴은 본 명세서에서 정의된 바와 같고, 예로써, 페녹시, 나프톡시 등을 포함하고, 또한 명세서에서 정의된 바와 같이 선택적으로 치환된 아릴기를 포함한다.
"아미노"는 -NH2기를 지칭한다.
용어 "치환된 아미노"는 -NRR기를 지칭하되, 각각의 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 단 적어도 하나의 R은 수소가 아니다.
용어 "아자이도"는 -N3기를 지칭한다.
"카복실", "카복시" 또는 "카복실레이트"는 -CO2H 또는 이의 염을 지칭한다.
"카복실 에스터" 또는 "카복시 에스터" 또는 용어 "카복시알킬" 또는 "카복실알킬"은 -C(O)O-알킬, -C(O)O-치환된 알킬, -C(O)O-알켄일, -C(O)O-치환된 알켄일, -C(O)O-알킨일, -C(O)O-치환된 알킨일, -C(O)O-아릴, -C(O)O-치환된 아릴, -C(O)O-사이클로알킬, -C(O)O-치환된 사이클로알킬, -C(O)O-사이클로알켄일, -C(O)O-치환된 사이클로알켄일, -C(O)O-헤테로아릴, -C(O)O-치환된 헤테로아릴, -C(O)O-헤테로사이클릭 및 -C(O)O-치환된 헤테로사이클릭 기를 지칭하되, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"(카복실 에스터)옥시" 또는 "카보네이트"는 -O-C(O)O-알킬, -O-C(O)O-치환된 알킬, -O-C(O)O-알켄일, -O-C(O)O-치환된 알켄일, -O-C(O)O-알킨일, -O-C(O)O-치환된 알킨일, -O-C(O)O-아릴, -O-C(O)O-치환된 아릴, -O-C(O)O-사이클로알킬, -O-C(O)O-치환된 사이클로알킬, -O-C(O)O-사이클로알켄일, -O-C(O)O-치환된 사이클로알켄일, -O-C(O)O-헤테로아릴, -O-C(O)O-치환된 헤테로아릴, -O-C(O)O-헤테로사이클릭 및 -O-C(O)O-치환된 헤테로사이클릭 기를 지칭하되, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"사이아노" 또는 "나이트릴"은 -CN기를 지칭한다.
"사이클로알킬"은 단환식, 또는 융합된, 가교된 및 스피로 고리계를 포함하는 다환식 고리를 갖는 3 내지 10개의 탄소 원자의 고리형 알킬기를 지칭한다. 적합한 사이클로알킬기의 예는, 예를 들어, 아다만틸, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로옥틸 등을 포함한다. 이러한 사이클로알킬기는, 예로써, 단일 고리 구조, 예컨대, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로옥틸, 등, 또는 다중 고리 구조, 예컨대, 아다만탄일 등을 포함한다.
용어 "치환된 사이클로알킬"은 알킬, 치환된 알킬, 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아자이도, 사이아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로사이클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 나이트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택되는, 1 내지 5개의 치환체, 또는 1 내지 3개의 치환체를 갖는 사이클로알킬기를 지칭한다.
"사이클로알켄일"은 단일 또는 다중 고리를 갖고 적어도 1개의 이중 결합, 바람직하게는 1 내지 2개의 이중 결합을 갖는, 3 내지 10개의 탄소 원자의 비-방향족 환식 알킬기를 지칭한다.
용어 "치환된 사이클로알켄일"은, 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아자이도, 사이아노, 할로겐, 하이드록실, 케토, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로사이클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 나이트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택되는, 1 내지 5개의 치환체, 또는 1 내지 3개의 치환체를 갖는 사이클로알켄일기를 지칭한다.
"사이클로알킨일"은, 단일 또는 다중 고리를 갖고 적어도 1개의 삼중 결합을 갖는 5 내지 10개의 탄소 원자의 비-방향족 사이클로알킬기를 지칭한다.
"사이클로알콕시"는 -O-사이클로알킬을 지칭한다.
"사이클로알켄일옥시"는 -O-사이클로알켄일을 지칭한다.
"할로" 또는 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 및 아이오도를 지칭한다.
"하이드록시" 또는 "하이드록실"은 -OH기를 지칭한다.
"헤테로아릴"은, 1 내지 15개의 탄소 원자, 예컨대, 1 내지 10개의 탄소 원자와, 고리 내에 산소, 질소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 10개의 헤테로원자의 방향족 기를 지칭한다. 이러한 헤테로아릴기는 단일 고리(예컨대, 피리딘일, 이미다졸릴 또는 퓨릴) 또는 (예를 들어, 인돌리진일, 퀴놀린일, 벤조퓨란, 벤즈아미다졸릴 또는 벤조티엔일과 같은 기에서와 같이) 고리계 내 다중 축합 고리를 가질 수 있고, 여기서, 고리계 내 적어도 하나의 고리는 방향족이다. 원자가 요건을 충족시키기 위해, 이러한 헤테로아릴 고리 내 임의의 헤테로원자는 H 또는 치환체기, 예컨대, 알킬기 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 다른 치환체에 결합될 수 있거나 또는 결합되지 않을 수 있다. 소정의 실시형태에서, 헤테로아릴기의 질소 및/또는 황 고리 원자(들)는 선택적으로 산화되어 N-옥사이드(N→O), 설피닐, 또는 설포닐 모이어티를 제공한다. 이 용어는, 예로써, 피리딘일, 피롤릴, 인돌릴, 티오페닐 및 퓨란일을 포함한다. 헤테로아릴 치환체에 대한 정의에 의해 달리 한정되지 않는 한, 이러한 헤테로아릴기는 아실옥시, 하이드록시, 티올, 아실, 알킬, 알콕시, 알켄일, 알킨일, 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 알킬, 치환된 알콕시, 치환된 알켄일, 치환된 알킨일, 치환된 사이클로알킬, 치환된 사이클로알켄일, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아실아미노, 알크아릴, 아릴, 아릴옥시, 아자이도, 카복실, 카복실알킬, 사이아노, 할로겐, 나이트로, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 아미노아실옥시, 옥시아실아미노, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴 및 트라이할로메틸로부터 선택된, 1 내지 5개의 치환체, 또는 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있다.
용어 "헤테로아르알킬"은 -알킬렌-헤테로아릴기를 지칭하되, 알킬렌 및 헤테로아릴은 본 명세서에 정의되어 있다. 이 용어는, 예로써, 피리딜메틸, 피리딜에틸, 인돌릴메틸 등을 포함한다.
"헤테로아릴옥시"는 -O-헤테로아릴을 지칭한다.
"헤테로사이클", "헤테로사이클릭", "헤테로사이클로알킬" 및 "헤테로사이클릴"은, 1 내지 10개의 헤테로 원자를 포함하는 3 내지 20개의 고리 원자를 갖는, 융합된, 가교된 및 스피로 고리계를 포함하는, 단일 고리 또는 다중 축합 고리를 갖는 포화 또는 불포화기를 지칭한다. 이들 고리 원자는 질소, 황 또는 산소로부터 선택되되, 여기서, 융합된 고리계에서, 고리 중 하나 이상은 사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴일 수 있고, 단 부착점은 비-방향족 고리를 통한다. 소정의 실시형태에서, 헤테로사이클릭기의 질소 및/또는 황 원자(들)는 선택적으로 산화되어 N-옥사이드, -S(O)- 또는 -SO2- 모이어티를 제공한다. 원자가 요건을 충족시키기 위해, 이러한 헤테로사이클릭 고리 내의 임의의 헤테로원자는 1개 이상의 H 또는 1개 이상의 치환체 기(들), 예컨대, 알킬기 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 다른 치환체에 결합될 수 있거나 결합되지 않을 수 있다.
헤테로사이클 및 헤테로아릴의 예는, 아제티딘, 피롤, 이미다졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 인돌리진, 아이소인돌, 인돌, 다이하이드로인돌, 인다졸, 퓨린, 퀴놀리진, 아이소퀴놀린, 퀴놀린, 프탈라진, 나프틸피리딘, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 신놀린, 프테리딘, 카바졸, 카볼린, 페난트리딘, 아크리딘, 페난트롤린, 아이소티아졸, 페나진, 아이소옥사졸, 페녹사진, 페노티아진, 이미다졸리딘, 이미다졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌린, 프탈이미드, 1,2,3,4-테트라하이드로아이소퀴놀린, 4,5,6,7-테트라하이드로벤조[b]티오펜, 티아졸, 티아졸리딘, 티오펜, 벤조[b]티오펜, 모르폴린일, 티오모르폴린일(티아모르폴린일로도 지칭됨), 1,1-다이옥소티오모르폴린일, 피페리딘일, 피롤리딘, 테트라하이드로퓨란일 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
헤테로사이클릭 치환체의 정의에 의해 달리 한정되지 않는 한, 이러한 헤테로사이클릭기는 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아자이도, 사이아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로사이클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 나이트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴, -SO2-헤테로아릴, 및 융합된 헤테로사이클로부터 선택된 1 내지 5개, 또는 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있다.
"헤테로사이클릴옥시"는 -O-헤테로사이클릴기를 지칭한다.
용어 "헤테로사이클릴티오"는 헤테로사이클릭-S-기를 지칭한다.
용어 "헤테로사이클렌"은, 본 명세서에 정의된 바와 같은 헤테로사이클로부터 형성된 2가기를 지칭한다.
용어 "하이드록시아미노"는 -NHOH기를 지칭한다.
"나이트로"는 -NO2기를 지칭한다.
"옥소"는 원자(=O)기를 지칭한다.
"설포닐"은 SO2-알킬, SO2-치환된 알킬, SO2-알켄일, SO2-치환된 알켄일, SO2-사이클로알킬, SO2-치환된 사이클로알킬, SO2-사이클로알켄일, SO2-치환된 사이클로알켄일, SO2-아릴, SO2-치환된 아릴, SO2-헤테로아릴, SO2-치환된 헤테로아릴, SO2-헤테로사이클릭 및 SO2-치환된 헤테로사이클릭기를 지칭하되, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다. 설포닐은, 예로써, 메틸-SO2-, 페닐-SO2- 및 4-메틸페닐-SO2-를 포함한다.
"설포닐옥시"는 -OSO2-알킬, OSO2-치환된 알킬, OSO2-알켄일, OSO2-치환된 알켄일, OSO2-사이클로알킬, OSO2-치환된 사이클로알킬, OSO2-사이클로알켄일, OSO2-치환된 사이클로알켄일, OSO2-아릴, OSO2-치환된 아릴, OSO2-헤테로아릴, OSO2-치환된 헤테로아릴, OSO2-헤테로사이클릭 및 OSO2 치환된 헤테로사이클릭기를 지칭하되, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
용어 "아미노카보닐옥시"는 -OC(O)NRR기를 지칭하되, 각각의 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클릭이고, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"티올"은 -SH기를 지칭한다.
"틱소" 또는 용어 "티오케토"는 원자(=S)를 지칭한다.
"알킬티오" 또는 용어 "티오알콕시"는 -S-알킬기를 지칭하되, 알킬은 본 명세서에 정의된 바와 같다. 소정의 실시형태에서, 황은 -S(O)-로 산화될 수 있다. 설폭사이드는 하나 이상의 입체이성질체로서 존재할 수 있다.
용어 "치환된 티오알콕시"는 -S-치환된 알킬기를 지칭한다.
용어 "티오아릴옥시"는 아릴-S-기를 지칭하되, 아릴기는, 또한 본 명세서에서 정의된 선택적으로 치환된 아릴기를 포함하여 본 명세서에서 정의된 바와 같다.
용어 "티오헤테로아릴옥시"는 헤테로아릴-S-기를 지칭하되, 헤테로아릴기는, 또한 본 명세서에서 정의된 선택적으로 치환된 아릴기를 포함하여 본 명세서에서 정의된 바와 같다.
용어 "티오헤테로사이클로옥시"는 헤테로사이클릴-S- 기를 지칭하되, 여기서 헤테로사이클릴기는, 또한 본 명세서에서 정의된 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴기를 포함하여 본 명세서에서 정의된 바와 같다.
본 명세서의 개시에 부가해서, 용어 "치환된"은, 명시된 기 또는 라디칼을 변형시키기 위해 사용될 때, 또한 명시된 기 또는 라디칼의 하나 이상의 수소 원자가 각각, 서로 독립적으로, 하기에서 정의되는 것과 같이 동일한 또는 상이한 치환기로 대체되는 것을 의미할 수 있다.
본 명세서에서 개별적인 용어들과 관련하여 개시된 기들 외에, 명시된 기 또는 라디칼에서의 포화된 탄소 원자 상의 하나 이상의 수소를 치환하기 위한 치환기는 (단일 탄소 상의 임의의 두 수소는 =O, =NR70, =N-OR70, =N2 또는 =S로 대체될 수 있음), 달리 특정되지 않는 한, -R60, 할로, =O, -OR70, -SR70, -NR80R80, 트라이할로메틸, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, =N2, -N3, -SO2R70, -SO2O-M+, -SO2OR70, -OSO2R70, -OSO2O-M+, -OSO2OR70, -P(O)(O-)2(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70) 2, -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -C(O)O-M+, -C(O)OR70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OC(O)O-M+, -OC(O)OR70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70CO2 -M+, -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이고, 여기서 R60은 선택적으로 치환된 알킬, 사이클로알킬, 헤테로알킬, 헤테로사이클로알킬알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각의 R70은 독립적으로 수소 또는 R60이고, 각각의 R80은 독립적으로 R70이거나 또는 대안적으로, 2개의 R80'은, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, O, N 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된 동일한 또는 상이한 추가의 헤테로원자 중 1 내지 4개를 선택적으로 포함할 수 있는 5-, 6- 또는 7-원 헤테로사이클로알킬을 형성하고, 이때 N은 -H 또는 C1-C3 알킬 치환을 가질 수 있고; 각각의 M+는 순(net) 단일 양전하를 가지는 카운터 이온이다. 각각의 M+는 독립적으로, 예를 들어, 알칼리 이온, 예컨대, K+, Na+, Li+; 암모늄 이온, 예컨대, +N(R60)4; 또는 알칼리토류 이온, 예컨대, [Ca2+]0.5, [Mg2+]0.5, 또는 [Ba2+]0.5이다("아래첨자 0.5는 이러한 2가 알칼리토류 이온에 대한 카운터 이온들 중 하나가 본 발명의 화합물의 이온화된 형태일 수 있고 다른 것은 클로라이드와 같은 전형적인 카운터 이온이거나, 또는 본 명세서에 개시된 2종의 이온화된 화합물이 그러한 2가 알칼리토류 이온에 대한 카운터 이온으로서 작용할 수 있거나, 또는 본 발명의 이중으로 이온화된 화합물이 이러한 2가 알칼리토류 이온에 대한 카운터 이온으로서 작용할 수 있는 것을 의미한다). 구체예로서, -NR80R80은 -NH2, -NH-알킬, N-피롤리딘일, N-피페라진일, 4N-메틸-피페라진-1-일 및 N-모르폴린일을 포함하는 것을 의미한다.
본 명세서의 개시내용에 부가해서, "치환된" 알켄, 알킨, 아릴 및 헤테로아릴기 중의 불포화 탄소 원자 상의 수소에 대한 치환체기는, 달리 특정되지 않는 한, -R60, 할로, -O-M+, -OR70, -SR70, -S-M+, -NR80R80, 트라이할로메틸, -CF3, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, -N3, -SO2R70, -SO3 -M+, -SO3R70, -OSO2R70, -OSO3 -M+, -OSO3R70, -PO3 -2(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)2, -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -CO2 -M+, -CO2R70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OCO2 -M+, -OCO2R70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70CO2 -M+, -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이며, 여기서 R60, R70, R80 및 M+는 앞서 정의된 바와 같고, 단 치환된 알켄 또는 알킨의 경우에, 치환체는 -O-M+, -OR70, -SR70 또는 -S-M+가 아니다.
본 명세서에서 개별적인 용어와 관련하여 개시된 기에 부가해서, "치환된" 헤테로알킬 및 사이클로헤테로알킬기의 질소 원자 상의 수소에 대한 치환기는, 달리 특정되지 않는 한, -R60, -O-M+, -OR70, -SR70, -S-M+, -NR80R80, 트라이할로메틸, -CF3, -CN, -NO, -NO2, -S(O)2R70, -S(O)2O-M+, -S(O)2OR70, -OS(O)2R70, -OS(O)2O-M+, -OS(O)2OR70, -P(O)(O-)2(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)(OR70), -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -C(O)OR70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OC(O)OR70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70C(O)OR70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이며, 여기서 R60, R70, R80 및 M+는 앞서 정의된 바와 같다.
본 명세서의 개시내용에 부가해서, 소정의 실시형태에서, 치환된 기는 1, 2, 3 또는 4개의 치환체, 1, 2 또는 3개의 치환체, 1 또는 2개의 치환체, 또는 1개의 치환체를 갖는다.
상기 정의된 모든 치환된 기에서, 자체에 대한 추가의 치환기를 가지는 치환기를 정의함으로써 이루어진 중합체(예컨대, 치환된 아릴기로 자체 치환되는 치환체로서 치환된 아릴기를 갖는 치환된 아릴, 이것은 추가로 치환된 아릴기 등에 의해 치환됨)는 본 명세서에 포함되는 것으로 의도되지 않는다. 이러한 경우에, 이러한 치환의 최대수는 3이다. 예를 들어, 본 명세서에서 구체적으로 상정되는 치환된 아릴기의 연속적인 치환은 치환된 아릴-(치환된 아릴)-치환된 아릴로 한정된다.
달리 표시되지 않는 한, 본 명세서에서 분명하게 정의되지 않는 치환체의 명명법은 작용기의 말단 부분의 명칭을 정하고, 이어서 부착점을 향한 인접한 작용기의 명칭을 정함으로써 이루어진다. 예를 들어, 치환체 "아릴알킬옥시카보닐"은 (아릴)-(알킬)-O-C(O)-를 지칭한다.
하나 이상의 치환체를 함유하는, 본 명세서에 개시된 기들 중 임의의 것에 대하여, 물론, 이러한 기들이 입체적으로 비현실적으로 그리고/또는 합성적으로 실현가능성이 없는 임의의 치환 또는 치환 패턴을 함유하지 않는다는 것이 인지된다. 또한, 대상 화합물들은 모두 이들 화합물의 치환으로부터 발생하는 입체화학 이성질체를 포함한다.
용어 " 약제학적으로 허용 가능한 염"은 환자, 예컨대, 포유류에게 투여하는 것이 허용되는 염 (주어진 투약 처방에 대한 허용되는 포유류 안전성을 갖는 카운터이온을 가진 염)을 의미한다. 그러한 염은 약제학적으로 허용 가능한 무기 또는 유기 염기로부터 그리고 약제학적으로 허용 가능한 무기 또는 유기 산으로부터 유래될 수 있다. "약제학적으로 허용 가능한 염"은, 화합물의 제약학적으로 허용되는 염을 지칭하고, 그 염들은 당업계에 잘 알려져 있는 다양한 유기 및 무기 카운터 이온으로부터 유래되고, 단지 예로써, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 암모늄, 테트라알킬암모늄 등을 포함하고; 분자가 염기성 작용기를 함유할 때, 유기 또는 무기 산의 염, 예컨대, 염산염, 브로민화수소산염, 폼산염, 타르타르산염, 베실레이트, 메실레이트, 아세테이트, 말레에이트, 옥살레이트 등을 포함한다.
용어 "이의 염"은 산의 양성자가 양이온, 예컨대, 금속 양이온 또는 유기 양이온 등에 의해 대체될 때 형성된 화합물을 의미한다. 해당하는 경우, 염은 약제학적으로 허용 가능한 염이지만, 이것은 환자에게 투여하기 위해 의도되지 않은 중간체 화합물의 염에 대해서는 필요하지 않다. 예로써, 본 발명의 화합물의 염은 화합물이 무기 또는 유기 산에 의해 양자화되어 양이온을 형성하는 것들을 포함하고, 이때 무기 또는 유기산의 접합체 염기는 염의 음이온 성분이다.
"용매화물"은 용매 분자와 용질의 분자 또는 이온과의 조합에 의해 형성된 복합체를 지칭한다. 용매는 유기 화합물, 무기 화합물 또는 이들 둘 다의 혼합물일 수 있다. 용매의 몇몇 예는, 메탄올, N,N-다이메틸폼아마이드, 테트라하이드로퓨란, 다이메틸설폭사이드 및 물을 포함한다. 용매가 물일 때, 형성된 용매화물은 수화물이다.
"입체이성질체" 및 "입체이성질체들"은 동일한 원자 연결성을 갖지만 공간에서 상이한 원자 배열을 갖는 화합물을 나타낸다. 입체이성질체는 시스-트랜스 이성질체, E 및 Z 이성질체, 거울상이성질체 및 부분입체이성질체를 포함한다.
"호변이성질체"는 원자들의 전자 결합에서만 그리고/또는 양자의 위치에서만 상이한 분자의 대체 형태, 예컨대 엔올-케토 및 이민-엔아민 호변이성질체, 또는 -N=C(H)-NH-고리 원자 배열을 함유하는 헤테로아릴기, 예컨대, 피라졸, 이미다졸, 벤즈이미다졸, 트라이아졸 및 테트라졸의 호변이성질체 형태를 지칭한다. 당업자라면 다른 호변이성질체 고리 원자 배열이 가능한 것을 인지할 것이다.
용어 " 또는 이의 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체"는 염, 용매화물 및 입체이성질체의 모든 순열, 예컨대, 본 화합물의 입체이성질체의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용매화물을 포함하는 것으로 의도되는 것이 이해될 것이다.
"약제학적 유효량" 및 "치료적 유효량"은 명시된 장애 또는 질환 또는 이의 하나 이상의 증상을 치료하고 그리고/또는 질환 또는 장애의 발생을 방지하기에 충분한 화합물의 양을 나타낸다. 종양발생 증식성 장애와 관련하여, 약제학적 또는 치료적 유효량은, 다른 것들 중에서도, 종양이 종양의 성장 속도를 위축시키거나 감소시키기에 충분한 양을 포함한다.
"환자"는 인간 및 비-인간 대상체, 특히 포유류 대상체를 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "치료하는" 또는 "치료"는 환자, 예컨대, 포유류(특히 인간)의 질환 또는 의학적 병태를 치료하는 또는 치료를 의미하고, (a) 대상체의 질환 또는 의학적 병태가 발생하는 것을 방지하는 것, 예컨대, 예방적 치료; (b) 환자에서 질병 또는 의학적 상태를 개선하는 것, 예컨대, 질병 또는 의학적 상태의 제거 또는 퇴행 유발; (c) 환자의 질환 또는 의학적 병태를, 예를 들어, 질환 또는 의학적 병태의 둔화 또는 발달의 정지에 의해 억제하는 것; 또는 (d) 환자의 질환 또는 의학적 병태의 증상을 완화시키는 것을 포함한다.
용어 "폴리펩타이드", "펩타이드" 및"단백질"은 임의의 길이의 아미노산의 중합체 형태를 나타내기 위해 본 명세서에서 호환 가능하게 사용된다. 구체적으로 달리 표시되지 않는 한, "폴리펩타이드", "펩타이드" 및 "단백질"은 유전적으로 암호화된 및 암호화되지 않은 아미노산, 화학적으로 또는 생화학적으로 변형된 또는 유도체화된 아미노산, 및 변형된 펩타이드 백본을 갖는 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 이들 용어는, 이종성 아미노산 서열을 가진 융합 단백질, 이종성 및 동종성 리더 서열을 가진 융합체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 융합 단백질, 적어도 하나의 N-말단 메티오닌 잔기를 함유하는 단백질(예컨대 재조합 박테리아 숙주 세포에서 생성을 용이하게 하기 위한 것임); 면역학적으로 태그 부착된 단백질 등을 포함한다.
"천연 아미노산 서열" 또는 "모 아미노산 서열"은 변형된 아미노산 잔기를 포함하도록 변형 전에 폴리펩타이드의 아미노산 서열을 지칭하기 위하여 본 명세서에서 호환 가능하게 사용된다.
용어 "아미노산 유사체", "비천연 아미노산" 등은 호환 가능하게 사용되고, 천연 유래 단백질에서 통상적으로 발견되는 하나 이상의 아미노산(예컨대, Ala 또는 A, Cys 또는 C, Asp 또는 D, Glu 또는 E, Phe 또는 F, Gly 또는 G, His 또는 H, Ile 또는 I, Lys 또는 K, Leu 또는 L, Met 또는 M, Asn 또는 N, Pro 또는 P, Gln 또는 Q, Arg 또는 R, Ser 또는 S, Thr 또는 T, Val 또는 V, Trp 또는 W, Tyr 또는 Y)에 대해 구조 및/또는 전체 형상이 유사한 아미노산-유사 화합물들을 포함한다. 아미노산 유사체는 또한 변형된 측쇄 또는 백본을 가진 천연 아미노산을 포함한다. 아미노산 유사체는 또한 천연 유래 D-형태뿐만 아니라, 아미노산 유사체들의 L-형태와 동일한 입체화학을 가지는 아미노산 유사체를 포함한다. 몇몇 경우에, 아미노산 유사체는 하나 이상의 천연 아미노산의 백본 구조 및/또는 측쇄 구조를 공유하며, 이때 차이(들)는 분자의 하나 이상의 변형된 기이다. 이러한 변형은, 관련된 원자(예컨대, S)에 대한 원자(예컨대, N)의 치환, 기(예컨대, 메틸, 또는 하이드록실 등) 또는 원자(예컨대 Cl 또는 Br 등)의 첨가, 기의 결실, 공유 결합의 치환(이중 결합에 대한 단일 결합 등), 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 아미노산 유사체는 α-하이드록시산 및 α-아미노산 등을 포함할 수 있다.
용어 "아미노산 측쇄" 또는 "아미노산의 측쇄" 등은, 천연 아미노산, 비천연 아미노산, 및 아미노산 유사체를 포함하여, 아미노산 잔기의 α-탄소에 부착된 치환체를 지칭하는데 사용될 수 있다. 아미노산 측쇄는 또한 본 명세서에 기재된 변형된 아미노산 및/또는 접합체의 맥락에서 기재된 바와 같은 아미노산 측쇄를 포함할 수 있다.
용어 "탄수화물" 등은 단당류, 이당류, 올리고당류 및 다당류의 단량체 단위 및/또는 중합체를 지칭하기 위해 사용될 수 있다. 용어 당은 더 작은 탄수화물, 예컨대, 단당류, 이당류를 지칭하기 위해 사용될 수 있다. 용어 "탄수화물 유도체"는 관심 탄수화물의 하나 이상의 작용기가 치환(임의의 편리한 치환기에 의해 대체)되거나, 변형(임의의 편리한 화학을 사용하여 다른 기로 변환)되거나 또는 없는(예컨대 제거되거나 H에 의해 대체되는) 화합물들을 포함한다. 다양한 탄수화물 및 탄수화물 유도체가 활용될 수 있고 본 화합물 및 접합체에 사용하기 위해 적응될 수 있다.
용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 단클론성 항체(전장 단클론성 항체 포함), 다클론성 항체, 및 다중특이적 항체(예컨대, 이중특이적 항체), 인간화된 항체, 단쇄 항체(예컨대, scFv), 키메라 항체, 항체 단편(예컨대, Fab 단편) 등을 포함한다. 항체는 표적 항원에 결합할 수 있다(Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5th Ed., Garland Publishing, New York). 표적 항원은, 항체의 하나 이상의 가변 영역에 의해 형성된 상보성 결정 영역(CDR)에 의해 인식되는, 에피토프로도 불리는, 하나 이상의 결합 부위를 가질 수 있다.
용어 "천연 항체"는 항체의 중쇄 및 경쇄가 다세포 유기체의 면역체계에 의해 만들어지고 쌍을 이루는 항체를 지칭한다. 비장, 림프절, 골수 및 혈청이 천연 항체를 생산하는 조직들의 예이다. 예를 들어, 항원으로 면역화된 제1 동물로부터 단리된 항체 생산 세포에 의해 생산된 항체는 천연 항체이다.
용어 "인간화된 항체" 또는 "인간화된 면역글로불린"은 인간 항체로부터의 상응하여 위치된 아미노산으로 치환된 (예를 들어 프레임워크 영역, 불변 영역 또는 CDR에) 하나 이상의 아미노산을 함유하는 비-인간(예컨대 마우스 또는 토끼) 항체를 지칭한다. 일반적으로, 인간화된 항체는, 동일한 항체의 비-인간화된 버전에 비해서, 인간 숙주에서 감소된 면역 반응을 유발한다. 항체는, 예를 들어, CDR-그라프팅(EP 239,400; PCT 공보 WO 91/09967; 미국 특허 제5,225,539호; 제5,530,101호; 및 제5,585,089호), 비니어링(veneering) 또는 리서페이싱(resurfacing)((EP 592,106; EP 519,596; Padlan, Molecular Immunology 28(4/5):489-498 (1991); Studnicka et al., Protein Engineering 7(6):805-814 (1994); Roguska. et al., PNAS 91:969-973 (1994)), 및 사슬 셔플링(chain shuffling)(미국 특허 제5,565,332호)을 포함하여, 당업계에 공지된 다양한 기법을 사용하여 인간화될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 프레임워크 치환은 항원 결합에 중요한 프레임워크 잔기를 확인하기 위한 CDR과 프레임워크 잔기의 상호작용의 모델링 및 특정 위치에서 독특한 프레임워크 잔기를 확인하기 위한 서열 비교에 의해 확인된다(예컨대, 미국 특허 제5,585,089호; 문헌[Riechmann et al., Nature 332:323 (1988)] 참조). 본 발명에 사용하기 위해 상정된 항체를 인간화하기 위한 추가의 방법들은 미국 특허 제5,750,078호; 제5,502,167호; 제5,705,154호; 제5,770,403호; 제5,698,417호; 제5,693,493호; 제5,558,864호; 제4,935,496호; 및 제4,816,567호 및 PCT 공보 WO 98/45331 및 WO 98/45332에 기재되어 있다. 특정 실시형태에서, 대상 토끼 항체는 US20040086979 및 US20050033031에 제시된 방법에 따라 인간화될 수 있다. 따라서, 위에서 기재된 항체들은 당업계에 잘 알려져 있는 방법들을 사용하여 인간화될 수 있다.
용어 "키메라 항체"는 경쇄 및 중쇄 유전자들이 전형적으로 유전자 조작에 의해, 상이한 종에 속하는 항체 가변 및 불변 영역 유전자들로부터 작제된 항체를 나타낸다. 예를 들어, 마우스 단클론성 항체로부터의 유전자의 가변 분절은 인간 불변 분절, 예컨대, 감마 1 및 감마 3에 연결될 수 있다. 치료용 키메라 항체의 예는 마우스 항체로부터의 가변 또는 항원-결합 도메인과 인간 항체로부터의 불변 또는 이펙터 도메인으로 구성된 하이브리드 단백질이지만, 다른 포유류 종으로부터의 도메인도 사용될 수 있다.
면역글로불린 폴리펩타이드 면역글로불린 경쇄 또는 중쇄 가변 영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로도 불리는 3개의 초가변 영역이 사이에 끼어 있는 프레임워크 영역(FR)으로 구성된다. 프레임워크 영역 및 CDR의 정도는 정의되어 있다(문헌["Sequences of Proteins of Immunological Interest", E. Kabat et al., U.S. Department of Health and Human Services, 1991] 참조). 구성 경쇄 및 중쇄의 조합된 프레임워크 영역인, 항체의 프레임워크 영역은 CDR의 위치를 정하고 정렬시키는 작용을 한다. CDR은 주로 항원의 에피토프에 대한 결합을 담당한다.
본 개시 전체를 통해서, 면역글로불린 중쇄에서 그리고 면역글로불린 경쇄에서 잔기의 넘버링은 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)](명시적으로 참조에 의해 본 명세서에 원용됨)에서의 것과 같다.
"모 Ig 폴리펩타이드"는 본 명세서에 기재된 것과 같은 알데하이드-태그 부착된 불변 영역이 결여된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드이다. 모 폴리펩타이드는 천연 서열 불변 영역을 포함할 수 있거나, 또는 기존의 아미노산 서열 변형(예컨대 첨가, 결실 및/또는 치환)을 가진 불변 영역을 포함할 수 있다.
폴리펩타이드의 맥락에서, 용어 "불변 영역"은 당업계에서 잘 이해되고, Ig 중쇄 또는 Ig 경쇄의 C-말단 영역을 지칭한다. Ig 중쇄 불변 영역은 CH1, CH2, 및 CH3 도메인(및 CH4 도메인, 여기서 중쇄는 μ 또는 ε 중쇄임)을 포함한다. 천연 Ig 중쇄에서, CH1, CH2, CH3(및 존재한다면 CH4) 도메인은 중쇄 가변(VH) 영역 바로 뒤에서(C-말단쪽임) 시작하고, 각각 길이가 약 100개 아미노산 내지 약 130개 아미노산이다. 천연 Ig 경쇄에서, 불변 영역은 경쇄 가변(VL) 영역 바로 뒤에서(C-말단쪽임) 시작하고, 길이가 약 100개 아미노산 내지 120개 아미노산이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "CDR" 또는 "상보성 결정 영역"은 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드 둘 다의 가변 영역 내에서 발견된 비-연속성 항원 조합 부위를 의미하는 것으로 의도된다. CDR은 문헌[Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977); Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequences of proteins of immunological interest" (1991); by Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); 및 MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)]에서 기재된 바 있고, 여기에서의 정의는, 서로에 대해서 비교할 때 아미노산 잔기들의 중복 또는 하위세트를 포함한다. 그럼에도 불구하고, 항체 또는 그라프트된 항체 또는 이의 변종의 CDR을 언급하기 위한 어느 하나의 정의의 적용은 본 명세서에서 정의되고 사용된 용어의 범주 내에 있는 것으로 의도된다. 상기 인용된 참고문헌의 각각에 의해 정의된 CDR을 포함하는 아미노산 잔기들이 비교로서 하기 표 1에 제시된다.
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폴리펩타이드, 펩타이드 또는 단백질의 아미노산 서열과 관련하여 사용된 "유전적으로 암호화될 수 있는"은 아미노산 서열이 그 아미노산 서열을 암호화하는 핵산의 전사 및 번역에 의해 생산될 수 있는 아미노산 잔기들로 구성되는 것을 의미하고, 여기서 전사 및/또는 번역은 세포에서 또는 시험관내 전사/번역 시스템에서 무세포에서 일어날 수 있다.
용어 "대조 서열"은 특정 발현 시스템, 예컨대, 포유류 세포, 박테리아 세포, 무세포 합성 등에서 작동 가능하게 연결된 코딩 서열의 발현을 용이하게 하는 DNA 서열을 지칭한다. 원핵세포 시스템에 적합한 대조 서열은, 예를 들면, 프로모터, 선택적으로 오퍼레이터 서열 및 리보솜 결합 부위를 포함한다. 진핵세포 시스템은 프로모터, 폴리아데닐화 신호 및 인핸서를 이용할 수 있다.
핵산은 그것이 다른 핵산 서열과 기능적 관계에 있을 때 "작동 가능하게 연결"된다. 예를 들어, 전서열 또는 분비 신호에 대한 DNA는, 이것이 폴리펩타이드의 분비에 참여하는 전단백질로서 발현된다면 폴리펩타이드에 대한 DNA에 작동 가능하게 연결된 것이고; 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 미친다면 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된 것이고; 또는 리보솜 결합 부위는 그것이 번역의 개시를 용이하게 하기 위해 위치된다면 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된 것이다. 일반적으로, "작동 가능하게 연결된"은 연결되는 DNA 서열이 연속적이고, 분비 리더의 경우에, 연속적이고 리딩 프레임에 있는 것을 의미한다. 연결은 결찰에 의해 또는 증폭 반응을 통해 이루어진다. 합성 올리고뉴클레오타이드 어댑터 또는 링커는 종래의 실시에 따라 서열들을 연결시키기 위해 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "발현 카세트"는 (예컨대 관심 작제물로의 결찰과 부합하는 제한 부위의 사용에 의해 또는 관심의 구성물로의 또는 숙주 세포 게놈으로의 상동 재조합에 의해) 핵산에 삽입될 수 있는 핵산, 보통 DNA의 분절을 지칭한다. 일반적으로, 핵산 분절은 관심 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하고, 카세트 및 제한 부위는 전사 및 번역을 위한 적절한 리딩 프레임에 카세트의 삽입을 용이하게 하기 위 해 디자인된다. 발현 카세트는 또한 숙주 세포에서 관심 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 발현을 용이하게 하는 요소들을 포함할 수 있다. 이들 요소는, 프로모터, 최소 프로모터, 인핸서, 응답 요소, 종결자 서열, 폴리아데닐화 서열 등을 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "단리된"은 화합물이 자연적으로 발생하는 환경과 상이한 환경에 있는 관심 화합물을 묘사하는 것을 의미한다. "단리된"은 실질적으로 관심 화합물에 대해 풍부해진 그리고/또는 관심 화합물이 부분적으로 또는 실질적으로 정제된 샘플 내에 있는 화합물을 포함하는 것을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "실질적으로 정제된"은, 그의 천연 환경으로부터 제거되고 자연적으로 회합하는 다른 성분들이 적어도 60% 없는, 적어도 75% 없는, 적어도 80% 없는, 적어도 85% 없는, 적어도 90% 없는, 적어도 95% 없는, 적어도 98% 없는, 또는 98% 이상 없는 화합물을 나타낸다.
용어 "생리적 조건""은 생세포와 부합하는 조건, 예컨대 생세포와 부합하는 온도, pH, 염도 등의 지배적으로 수성 조건을 포함하는 것을 의미한다.
"반응 파트너"는 반응 생성물을 생성하기 위해 다른 반응 파트너와 특이적으로 반응하는 분자 또는 분자 모이어티를 의미한다. 예시적인 반응 파트너로는 설파타제 모티프 및 폼일글리신 생성 효소(FGE)의 시스테인 또는 세린을 포함하는데, 이들은 모티프의 시스테인 또는 세린 대신 폼일글리신(FGly)을 함유하는 전환된 알데하이드 태그의 반응 생성물을 형성하기 위해 반응한다. 다른 예시적인 반응 파트너는 전환된 알데하이드 태그의 fGly 잔기의 알데하이드(예컨대 반응성 알데하이드기) 및 "알데하이드-반응성 반응 파트너"를 포함하는데, 이것은 알데하이드-반응성 기와 관심 모이어티를 포함하며, 변형된 fGly 잔기를 통해 변형된 폴리펩타이드에 대해 접합된 관심 모이어티를 갖는 변형된 알데하이드 태그 부착된 폴리펩타이드의 반응 생성물을 형성하기 위하여 반응한다.
"N-말단"은 유리 아민기를 갖는 폴리펩타이드의 말단 아미노산 잔기를 나타내고, 비-N-말단 아미노산 잔기의 아민기는 통상 폴리펩타이드의 공유 백본의 부분을 형성한다.
"C-말단"은 유리 카복실기를 갖는 폴리펩타이드의 말단 아미노산 잔기를 나타내고, 비-C-말단 아미노산 잔기의 카복실기는 통상 폴리펩타이드의 공유 백본의 부분을 형성한다.
폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 아미노산 서열과 관련하여 사용되는 바와 같은 "내부 부위"는 N-말단 또는 C-말단에 있지 않은 폴리펩타이드의 영역을 의미한다.
본 발명을 추가로 기재하기 전에, 본 발명은 기재된 특정 실시형태로 제한되지 않는 것이 인지되어야 하는데, 이들은 당연히 달라질 수 있기 때문이다. 또한 본 명세서에서 사용되는 용어는 단지 특정 실시형태를 기술할 목적에 대한 것이고, 본 발명의 범주는 오직 첨부된 청구범위에 의해서만 제한될 것이기 때문에, 제한하려는 의도가 아니라는 것이 인지되어야 한다.
값의 범위가 제공되는 경우, 각각의 개재된 값은, 그 범위 및 임의의 다른 표시된 또는 그 표시된 범위의 개재된 값의 상한선과 하한선 사이에서, 맥락이 분명하게 다르게 표시하지 않는 한 하한선의 단위의 1/10까지, 발명에 다 포함되는 것이 인지된다. 이들 더 작은 범위의 상한선 및 하한선은 독립적으로 더 작은 범위들에 포함될 수 있고, 또한 발명 내에 다 포함되며, 표시된 범위의 임의의 특정하게 배제된 한계의 영향을 받는다. 표시된 범위가 한계들 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 경우에, 그 포함된 한계들 중 어느 하나 또는 둘 다를 배제하는 범위 또한 발명에 포함된다.
명료성을 위해, 별도의 실시형태의 맥락에서 기술된 발명의 특정 특징들은 또한 단일 실시형태에서 조합되어 제공될 수 있다는 것이 인지된다. 역으로, 간단함을 위해, 단일 실시형태의 맥락에서 기술된 발명의 다양한 특징은 또한 별도로 또는 임의의 적합한 하위-조합으로 제공될 수 있다. 발명에 속하는 실시형태들의 모든 조합은 구체적으로 본 발명에 의해 포함되고, 마치 각각의 및 모든 조합이 그런 조합들이 예를 들어 안정한 화합물(즉, 제조되고, 분리되고, 특성화되고, 생물학적 활성에 대해 시험될 수 있는 화합물)인 화합물인 대상물을 포함하는 정도로, 개별적으로 그리고 명백하게 개시된 것처럼 본 명세서에 개시된다. 또한, 다양한 실시형태 및 그들의 요소(예컨대 이러한 변수들을 기술하는 실시형태들에서 열거된 화학적 기들의 요소)의 모든 하위-조합 또한 본 발명에 의해 구체적으로 포함되며, 마치 각각의 및 모든 그런 하위-조합들이 개별적으로 그리고 명백하게 본 명세서에 개시된 것처럼 본 명세서에 개시된다.
달리 명시되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명에 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 통상적으로 인지되는 것과 같은 의미를 가진다. 비록 본 명세서에 기재된 것과 유사한 또는 동등한 임의의 방법 및 물질들이 또한 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 물질이 이제 기술된다. 본 명세서에서 언급된 모든 간행물은 그 간행물들이 인용되는 것과 관련된 방법 및/또는 물질을 개시하고 기술하기 위해 참조로 본 명세서에 포함된다.
본 명세서에서 그리고 첨부된 청구범위에서 사용되는 것과 같이, 단일한 형태를 나타내는 용어는 맥락이 분명하게 다른 것을 가리키지 않는 한 복수의 대상물을 포함하는 것이 주지되어야 한다. 추가로 청구범위는 임의의 선택적 요소를 배제하는 것으로 작성될 수 있다는 것이 주지된다. 그와 같이, 이런 진술은 청구범위 요소의 설명과 관련하여 "단지", "단독으로" 등과 같은 배타적 용어의 사용, 또는 "네거티브" 한계의 사용에 대한 선행적 기준으로서 작용하도록 의도된다.
명료성을 위해, 별도의 실시형태의 맥락에서 기술된 발명의 특정 특징들은 또한 단일 실시형태에서 조합되어 제공될 수 있다는 것이 인지된다. 역으로, 간단함을 위해, 단일 구체예의 맥락에서 기술된 발명의 다양한 특징은 또한 별도로 또는 임의의 적합한 하위-조합으로 제공될 수 있다.
본 명세서에서 논의된 간행물은 단지 본 출원의 출원일 이전에 개시된 것에 대해서만 제공된다. 여기서 본 발명이 선행 발명에 의해 그런 간행물에 앞선 것으로 자격을 가지는 것으로 인정되는 것으로 해석될 만한 것은 없다. 추가로, 제공된 간행물의 일자는 독립적으로 확인될 필요가 있을 수 있는 실제 간행 날짜와 다를 수 있다.
상세한 설명
본 개시내용은 항-CD37 항체-메이탄신 접합체 구조를 제공한다. 본 개시내용은 또한 그런 접합체의 제조 방법뿐만 아니라 이를 사용하는 방법도 포함한다. 각각의 실시형태는 하기 부문들에서 보다 상세하게 기재된다.
항체-약물 접합체
본 개시내용은 접합체, 예컨대, 항체-약물 접합체를 제공한다. "접합체"는 제1 모이어티(예컨대, 항체)가 제2 모이어티(예컨대, 약물)와 안정적으로 회합되는 것을 의미한다. 예를 들어, 메이탄신 접합체는 또 다른 모이어티(예컨대, 항체)와 안정적으로 회합된 메이탄신(예컨대, 메이탄신 활성제 모이어티)을 포함한다. " 안정적으로 회합된 "은 모이어티가 또 다른 모이어티 또는 구조에 표준 조건하에서 결합된 것을 의미한다. 소정의 실시형태에서, 제1 및 제2 모이어티는 서로 하나 이상의 공유 결합을 통해 결합된다.
소정의 실시형태에서, 접합체는, 제2 모이어티에 접합된 폴리펩타이드를 포함하는 폴리펩타이드 접합체이다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드에 접합된 모이어티는, 예컨대, 검출 가능한 표지, 약물, 수용성 중합체, 또는 막 또는 표면에 폴리펩타이드를 고정시키기 위한 모이어티를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 다양한 관심 모이어티 중 임의의 것일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 접합체는 메이탄신 접합체인데, 여기서 폴리펩타이드는 메이탄신 또는 메이탄신 활성제 모이어티에 접합된다. "메이탄신", "메이탄신 모이어티", "메이탄신 활성제 모이어티" 및 "메이탄시노이드"는 메이탄신 및 유사체 및 이들의 유도체, 및 약제학적 활성 메이탄신 모이어티 및/또는 이의 부분을 지칭한다. 폴리펩타이드에 접합된 메이탄신은, 제한 없이, 본 명세서에 기재된 바와 같은 메이탄신 및 이의 유사체 및 유도체와 같은 다양한 메이탄시노이드 모이어티 중 임의의 것일 수 있다.
관심 모이어티는 폴리펩타이드의 임의의 목적하는 부위에서 폴리펩타이드에 접합될 수 있다. 따라서, 본 개시내용은, 예를 들어, 폴리펩타이드의 C-말단에서 또는 그 부근에서 접합된 모이어티를 갖는 변형된 폴리펩타이드를 제공한다. 다른 예는 폴리펩타이드의 N-말단에서 또는 그 부근에서 접합된 모이어티를 갖는 변형된 폴리펩타이드를 제공한다. 그 예는 또한 폴리펩타이드의 C-말단과 N-말단 사이의 위치에서 (예컨대 폴리펩타이드의 내부 부위에서) 접합된 모이어티를 갖는 변형된 폴리펩타이드를 포함한다. 상기의 조합은 또한 변형된 폴리펩타이드가 둘 이상의 모이어티에 접합되어 있는 경우에도 가능하다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용의 접합체는 아미노산 잔기의 α-탄소에서 폴리펩타이드의 아미노산 잔기에 접합된 메이탄신을 포함한다. 기술된 또 다른 방식에서, 메이탄신 접합체는 폴리펩타이드의 1개 이상의 아미노산 잔기의 측쇄가 메이탄신에 부착되도록 변형되어 있는(예컨대 본 명세서에 기재된 바와 같은 링커를 통해 메이탄신에 부착된) 폴리펩타이드를 포함한다. 예를 들어, 메이탄신 접합체는 폴리펩타이드의 1개 이상의 아미노산 잔기의 α-탄소가 메이탄신에 부착되도록 변형되어 있는(예컨대, 본 명세서에 기재된 바와 같은 링커를 통해 메이탄신에 부착된) 폴리펩타이드를 포함한다.
본 개시내용의 실시형태는 폴리펩타이드가 1개 이상의 모이어티, 예컨대, 2개의 모이어티, 3개의 모이어티, 4개의 모이어티, 5개의 모이어티, 6개의 모이어티, 7개의 모이어티, 8개의 모이어티, 9개의 모이어티, 또는 10개 이상의 모이어티에 접합된 접합체를 포함한다. 모이어티는 폴리펩타이드의 1개 이상의 부위에서 폴리펩타이드에 접합될 수 있다. 예를 들어, 1개 이상의 모이어티는 폴리펩타이드의 단일 아미노산 잔기에 접합될 수 있다. 몇몇 경우에, 1개의모이어티는 폴리펩타이드의 아미노산 잔기에 접합된다. 다른 실시형태에서, 2개의 모이어티는 폴리펩타이드의 동일한 아미노산 잔기에 접합될 수 있다. 다른 실시형태에서, 제1 모이어티는 폴리펩타이드의 제1 아미노산 잔기에 접합되고, 제2 모이어티는 폴리펩타이드의 제2 아미노산 잔기에 접합된다. 상기의 조합이 또한 가능하며, 예를 들어, 폴리펩타이드는 제1 아미노산 잔기에서 제1 모이어티에 접합되고 제2 미노산 잔기에서 2개의 다른 모이어티에 접합된다. 제한 없이, 제1 아미노산 잔기에서 제1 및 제2 모이어티에 접합되고 제2 아미노산 잔기에서 제3 및 제4 모이어티에 접합된 폴리펩타이드 등과 같은 다른 조합이 또한 가능하다.
1개 이상의 모이어티에 접합된 폴리펩타이드의 1개 이상의 아미노산 잔기는 천연 유래 아미노산, 비천연 아미노산, 또는 이들의 조합일 수 있다. 예를 들어, 접합체는 폴리펩타이드의 천연 유래 아미노산 잔기에 접합된 모이어티를 포함할 수 있다. 다른 경우에, 접합체는 폴리펩타이드의 비천연 아미노산 잔기에 접합된 모이어티를 포함할 수 있다. 1개 이상의 모이어티는 위에서 기재된 바와 같은 단일의 천연 또는 비천연 아미노산 잔기에서 폴리펩타이드에 접합될 수 있다. 폴리펩타이드의 하나 이상의 천연 또는 비천연 아미노산 잔기는 본 명세서에 기재된 바와 같은 모이어티 또는 모이어티들에 접합될 수 있다. 예를 들어, 폴리펩타이드의 2개(또는 그 초과)의 아미노산 잔기(예컨대, 천연 또는 비천연 아미노산 잔기)는, 각각 1 또는 2개의 모이어티에 접합될 수 있어, 폴리펩타이드의 다수의 부위가 변형된다.
본 명세서에 기재된 비와 같이, 폴리펩타이드는 1개 이상의 모이어티에 접합될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 관심 모이어티는 화학적 실체(entity), 예컨대, 약물 또는 검출 가능한 표지이다. 예를 들어, 약물(예컨대, 메이탄신)은 폴리펩타이드에 접합될 수 있거나, 또는 다른 실시형태에서, 검출 가능한 표지는 폴리펩타이드에 접합될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 본 개시내용의 실시형태는 하기를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다: 폴리펩타이드와 약물의 접합체; 폴리펩타이드와 검출 가능한 표지의 접합체; 2가지 이상의 약물과 폴리펩타이드의 접합체, 및 2종 이상의 검출 가능한 표지와 폴리펩타이드의 접합체; 등.
소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드와 관심 모이어티는 커플링 모이어티를 통해서 접합된다. 예를 들어, 폴리펩타이드와 관심 모이어티는 커플링 모이어티에 결합(예컨대, 공유 결합)될 수 있고, 따라서 커플링 모이어티를 통해서 폴리펩타이드와 관심 모이어티(예컨대, 약물, 예컨대, 메이탄신)를 간접적으로 결합시킬 수 있다. 몇몇 경우에, 커플링 모이어티는 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 화합물, 또는 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 화합물의 유도체를 포함한다. 예를 들어, 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티를 통해서 폴리펩타이드에 관심 모이어티(예컨대, 메이탄신)를 결합시키기 위한 일반적 반응식은 이하의 일반적 반응식에 도시된다. 하이드라진일-인돌릴과 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티는 또한 각각 본 명세서에서 하이드라지노-아이소-피쳇-슈펭글러(HIPS) 커플링 모이어티 및 아자-하이드라지노-아이소-피쳇-슈펭글러(aza-hydrazino-iso-Pictet-Spengler: 아자HIPS) 커플링 모이어티로 지칭된다.
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상기 반응식에서, R은 폴리펩타이드에 접합된 관심 모이어티(예컨대, 메이탄신)이다. 상기 반응식에 도시된 바와 같이, 2-폼일글리신 잔기(fGly)를 포함하는 폴리펩타이드는 커플링 모이어티(예컨대, 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티)를 포함하도록 변형된 약물(예컨대, 메이탄신)과 반응하여 커플링 모이어티에 부착된 폴리펩타이드 접합체를 생성하므로, 커플링 모이어티를 통해서 폴리펩타이드에 메이탄신을 부착시킨다.
본 명세서에 기재된 비와 같이, 모이어티는 다양한 모이어티, 예컨대, 제한 없이, 화학적 실체, 예컨대, 검출 가능한 표지, 또는 약물(예컨대, 메이탄시노이드) 중 임의의 것일 수 있다. R' 및 R"은 각각 독립적으로 임의의 목적하는 치환체, 예컨대, 제한 없이, 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴일 수 있다. Z는 CR11, NR12, N, O 또는 S일 수 있는데, 여기서 R11 및 R12는 각각 독립적으로 위에서 R' 및 R"에 대해서 기재된 치환체 중 임의의 것으로부터 선택된다.
다른 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티가 또한 본 명세서에 기재된 접합체 및 화합물에서 나타난 것과 같이 가능하다. 예를 들어, 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티는 링커에 부착(예컨대, 공유 부착)되도록 변형될 수 있다. 이와 같이, 본 개시내용의 실시형태는 링커를 통해 약물(예컨대, 메이탄신)에 부착된 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티를 포함한다. 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티를 약물(예컨대, 메이탄신)에 커플링시킬 수 있는 링커의 각종 실시형태가 본 명세서에 상세히 기재된다.
소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드는 관심 모이어티에 접합될 수 있되, 여기서 폴리펩타이드는 관심 모이어티에 접합되기 전에 변형된다. 폴리펩타이드의 변형은 관심 모이어티에 접합되기에 적합한 1개 이상의 반응성 기를 함유하는 변형된 폴리펩타이드를 생성할 수 있다. 몇몇 경우에, 폴리펩타이드는 관심 모이어티(예컨대, 위에서 기재된 바와 같은 커플링 모이어티, 예컨대, 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티를 포함하는 모이어티)에의 접합에 적합한 1개 이상의 반응성 기를 제공하기 위해 1개 이상의 아미노산 잔기에서 변형될 수 있다. 예를 들어, 폴리펩타이드는 반응성 알데하이드기(예컨대, 반응성 알데하이드)를 포함하도록 변형될 수 있다. 반응성 알데하이드는, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이 2-폼일글리신 잔기(본 명세서에서 "FGly"로 지칭됨)를 함유하기 위해 폼일글리신 생성 효소(FGE)의 작용에 의해 전환된 설파타제 모티프(예컨대, L(C/S)TPSR)로부터 유래된 아미노산 서열을 지칭하는 "알데하이드 태그" 또는 "ald-태그"에 포함될 수 있다. FGE에 의해 생성된 FGly 잔기는 "폼일글리신" 으로도 지칭될 수 있다. 다르게 진술하면, 용어 "알데하이드 태그"는 "전환된" 설파타제 모티프(즉, 시스테인 또는 세린 잔기가 FGE의 작용에 의해 FGly로 전환된 설파타제 모티프, 예컨대, L(FGly)TPSR)를 포함하는 아미노산 서열을 지칭하기 위해 본 명세서에서 사용된다. 전환된 설파타제 모티프는 "미전환" 설파타제 모티프(즉, 시스테인 또는 세린 잔기가 FGE에 의해 FGly로 전환되지 않았지만, 전환될 수 있는 설파타제 모티프, 예컨대, 서열: L(C/S)TPSR을 가지는 미전환 설파타제 모티프)를 포함하는 아미노산 서열로부터 유래될 수 있다. 설파타제 모티프 상의 폼일글리신 생성 효소(FGE)의 작용의 맥락에서 사용되는 바와 같은 "전환"은 설파타제 모티프의 시스테인 또는 세린 잔기의 폼일글리신(FGly) 잔기로의 생화학적 변형(예컨대, Cys의 FGly로의 변형, 또는 Ser의 FGly로의 변형)을 지칭한다. 알데하이드 태그 및 부위-특이적 단백질 변형에서 그의 사용의 추가의 양상은 미국 특허 제7,985,783호 및 미국 특허 제8,729,232호에 기재되고, 상기 각 문헌의 내용은 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
몇몇 경우에, FGly 잔기를 함유하는 변형된 폴리펩타이드는 FGly와 화합물(예컨대, 위에서 기재된 바와 같은 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티를 함유하는 화합물)의 반응에 의해 관심 모이어티에 접합될 수 있다. 예를 들어, FGly-함유 폴리펩타이드는 약물의 폴리펩타이드에의 접합을 제공하기에 적합한 조건하에서 반응성 파트너-함유 약물과 접촉될 수 있다. 몇몇 경우에, 반응성 파트너-함유 약물은 위에서 기재된 바와 같은 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티를 포함할 수 있다. 예를 들어, 메이탄신은 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티를 포함하도록 변형될 수 있다. 몇몇 경우에, 메이탄신은 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티에 부착, 예컨대, 본 명세서에서 상세하게 기재된 바와 같이, 링커를 통해 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티에 공유 부착된다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용의 접합체는 적어도 1개의 변형된 아미노산 잔기를 갖는 폴리펩타이드(예컨대, 항체, 예컨대, 항-CD37 항체)를 포함한다. 폴리펩타이드의 변형된 아미노산 잔기는 위에서 기재된 바와 같은 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티를 함유하는 약물(예컨대, 메이탄신)에 커플링될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드(예컨대, 항-CD37 항체)의 변형된 아미노산 잔기는 위에서 기재된 바와 같이 FGly 잔기로 전환된 시스테인 또는 세린 잔기로부터 유래될 수 있다. 소정의 실시형태에서, FGly 잔기는 본 개시내용의 접합체를 제공하기 위해 위에서 기재된 바와 같은 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티를 함유하는 약물에 접합되고, 여기서 약물은 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티를 통해 폴리펩타이드이에 접합된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 FGly'은 관심 모이어티(예컨대, 약물, 예컨대, 메이탄신)에 결합되는 폴리펩타이드(예컨대, 항-CD37 항체)의 변형된 아미노산 잔기를 지칭한다.
소정의 실시형태에서, 접합체는 본 명세서에 기재된 화학식 (I)의 적어도 1개의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다. 예를 들어, 접합체는 하기 화학식 (I)의 측쇄를 갖는 적어도 1개의 변형된 아미노산 잔기를 포함할 수 있다:
Figure pct00017
식 중,
Z는 CR4 또는 N이고;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되거나, 또는 R2와 R3은 선택적으로 고리상으로 연결되어 5 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고;
각각의 R4는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되고;
L은 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-를 포함하는 링커이되, a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, a, b, c 및 d의 합계는 1 내지 4이고;
T1, T2, T3 및 T4는 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노 (4AP), 아세탈기, 하이드라진, 설파이드 및 에스터로부터 선택되되, EDA는 에틸렌 다이아민 모이어티이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜이고, 그리고 AA는 아미노산 잔기이고, w는 1 내지 20의 정수이고, n은 1 내지 30의 정수이고, p는 1 내지 20의 정수이고, 그리고 h는 1 내지 12의 정수이고;
V1, V2, V3 및 V4는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 선택되되, q는 1 내지 6의 정수이고;
각각의 R13은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택되고;
각각의 R15는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되고;
W1은 메이탄시노이드이고; 그리고
W2는 항-CD37 항체이다.
소정의 실시형태에서, Z는 CR4 또는 N이다. 소정의 실시형태에서, Z는 CR4이다. 소정의 실시형태에서, Z는 N이다.
소정의 실시형태에서, R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, R1은 수소이다. 소정의 실시형태에서, R1은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대, C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 소정의 실시형태에서, R1은 메틸이다. 소정의 실시형태에서, R1은 알켄일 또는 치환된 알켄일, 예컨대, C2-6 알켄일 또는 C2-6 치환된 알켄일, 또는 C2-4 알켄일 또는 C2-4 치환된 알켄일, 또는 C2-3 알켄일 또는 C2-3 치환된 알켄일이다. 소정의 실시형태에서, R1은 알킨일 또는 치환된 알킨일, 예컨대, C2-6 알켄일 또는 C2-6 치환된 알켄일, 또는 C2-4 알켄일 또는 C2-4 치환된 알켄일, 또는 C2-3 알켄일 또는 C2-3 치환된 알켄일이다. 소정의 실시형태에서, R1은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대, C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대, C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 소정의 실시형태에서, R1은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 소정의 실시형태에서, R1은 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 소정의 실시형태에서, R1은 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
소정의 실시형태에서, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되거나, 또는 R2와 R3은 선택적으로 환상으로 연결되어 5 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성한다.
소정의 실시형태에서, R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, R2는 수소이다. 소정의 실시형태에서, R2는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대, C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 소정의 실시형태에서, R2는 메틸이다. 소정의 실시형태에서, R2는 알켄일 또는 치환된 알켄일, 예컨대, C2-6 알켄일 또는 C2-6 치환된 알켄일, 또는 C2-4 알켄일 또는 C2-4 치환된 알켄일, 또는 C2-3 알켄일 또는 C2-3 치환된 알켄일이다. 소정의 실시형태에서, R2는 알킨일 또는 치환된 알킨일이다. 소정의 실시형태에서, R2는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 소정의 실시형태에서, R2는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 소정의 실시형태에서, R2는 카복실 또는 카복실 에스터이다. 소정의 실시형태에서, R2는 아실 또는 아실옥시이다. 소정의 실시형태에서, R2는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 소정의 실시형태에서, R2는 알킬아마이드 또는 치환된 알킬아마이드이다. 소정의 실시형태에서, R2는 설포닐이다. 소정의 실시형태에서, R2는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 소정의 실시형태에서, R2는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대, C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대, C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 소정의 실시형태에서, R2는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 소정의 실시형태에서, R2는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 소정의 실시형태에서, R2는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
소정의 실시형태에서, R3은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, R3은 수소이다. 소정의 실시형태에서, R3은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대, C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 소정의 실시형태에서, R3은 메틸이다. 소정의 실시형태에서, R3은 알켄일 또는 치환된 알켄일, 예컨대, C2-6 알켄일 또는 C2-6 치환된 알켄일, 또는 C2-4 알켄일 또는 C2-4 치환된 알켄일, 또는 C2-3 알켄일 또는 C2-3 치환된 알켄일이다. 소정의 실시형태에서, R3은 알킨일 또는 치환된 알킨일이다. 소정의 실시형태에서, R3은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 소정의 실시형태에서, R3은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 소정의 실시형태에서, R3은 카복실 또는 카복실 에스터이다. 소정의 실시형태에서, R3은 아실 또는 아실옥시이다. 소정의 실시형태에서, R3은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 소정의 실시형태에서, R3은 알킬아마이드 또는 치환된 알킬아마이드이다. 소정의 실시형태에서, R3은 설포닐이다. 소정의 실시형태에서, R3은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 소정의 실시형태에서, R3은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대, C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대, C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 소정의 실시형태에서, R3은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 소정의 실시형태에서, R3은 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 소정의 실시형태에서, R3은 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
소정의 실시형태에서, R2와 R3은 선택적으로 환상으로 연결되어 5 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성한다. 소정의 실시형태에서, R2 및 R3은 고리상에 연결되어 5 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성한다. 소정의 실시형태에서, R2 및 R3은 고리상에 연결되어 5-원 헤테로사이클릴을 형성한다. 소정의 실시형태에서, R2 및 R3은 고리상에 연결되어 6-원 헤테로사이클릴을 형성한다.
소정의 실시형태에서, 각각의 R4는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다.
각각의 R4에 대한 다양한 가능성은 다음과 같이 더욱 상세하게 설명된다. 소정의 실시형태에서, R4는 수소이다. 소정의 실시형태에서, 각각의 R4는 수소이다. 소정의 실시형태에서, R4는 할로겐, 예컨대, F, Cl, Br 또는 I이다. 소정의 실시형태에서, R4는 F이다. 소정의 실시형태에서, R4는 Cl이다. 소정의 실시형태에서, R4는 Br이다. 소정의 실시형태에서, R4는 I이다. 소정의 실시형태에서, R4는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대, C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 소정의 실시형태에서, R4는 메틸이다. 소정의 실시형태에서, R4는 알켄일 또는 치환된 알켄일, 예컨대, C2-6 알켄일 또는 C2-6 치환된 알켄일, 또는 C2-4 알켄일 또는 C2-4 치환된 알켄일, 또는 C2-3 알켄일 또는 C2-3 치환된 알켄일이다. 소정의 실시형태에서, R4는 알킨일 또는 치환된 알킨일이다. 소정의 실시형태에서, R4는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 소정의 실시형태에서, R4는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 소정의 실시형태에서, R4는 카복실 또는 카복실 에스터이다. 소정의 실시형태에서, R4는 아실 또는 아실옥시이다. 소정의 실시형태에서, R4는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 소정의 실시형태에서, R4는 알킬아마이드 또는 치환된 알킬아마이드이다. 소정의 실시형태에서, R4는 설포닐이다. 소정의 실시형태에서, R4는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 소정의 실시형태에서, R4는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대, C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대, C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴(예컨대, 페닐 또는 치환된 페닐)이다. 소정의 실시형태에서, R4는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 소정의 실시형태에서, R4는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 소정의 실시형태에서, R4는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
소정의 실시형태에서, W1은 메이탄시노이드이다. 메이탄시노이드의 추가의 설명은 본 명세서의 개시내용에서 발견된다.
소정의 실시형태에서, W2는 항-CD37 항체이다. 본 발명의 접합체에서의 용도를 발견하는 항-CD37 항체의 추가의 설명은 본 명세서의 개시내용에서 발견된다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 화합물은 링커 L을 포함한다. 링커는 커플링 모이어티를 하나 이상의 관심 모이어티 및/또는 하나 이상의 폴리펩타이드에 결합시키는데 이용될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 링커는 커플링 모이어티를 폴리펩타이드 또는 화학적 실체에 결합시킨다. 링커는 임의의 편리한 위치에서 (예컨대, 본 명세서에 기재된 바와 같은) 커플링 모이어티에 결합(예컨대, 공유 결합)될 수 있다. 예를 들어, 링커는 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티를 약물(예컨대, 메이탄신)에 부착시킬 수 있다. 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티는 링커(따라서 약물, 예컨대, 메이탄신)를 폴리펩타이드, 예컨대, 항-CD37 항체에 접합시키는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 커플링 모이어티는 링커(따라서 약물, 예컨대, 메이탄신)를 폴리펩타이드의 변형된 아미노산 잔기, 예컨대, 항-CD37 항체의 FGly 잔기에 접합시키는데 사용될 수 있다.
소정의 실시형태에서, L은 커플링 모이어티를 W1에 부착시키고, 따라서 커플링 모이어티는 링커 L을 통해서 W1에 간접적으로 결합된다. 위에서 기재된 바와 같이, W1은 메이탄시노이드이고, 따라서 L은 커플링 모이어티를 메이탄시노이드에 부착시키고, 예컨대, 커플링 모이어티는 링커 L을 통해서 메이탄시노이드에 간접적으로 결합된다.
임의의 편리한 링커는 본 접합체 및 화합물에 이용될 수 있다. 소정의 실시형태에서, L은 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실 아미노, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된 기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 알킬 또는 치환된 알킬기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 알켄일 또는 치환된 알켄일기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 알킨일 또는 치환된 알킨일기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 알콕시 또는 치환된 알콕시기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 아미노 또는 치환된 아미노기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 카복실 또는 카복실 에스터기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 아실 아미노기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 알킬아마이드 또는 치환된 알킬아마이드기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 아릴 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴기를 포함한다.
소정의 실시형태에서, L은 중합체를 포함한다. 예를 들어, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 동종중합체, 폴리프로필렌 글리콜 동종중합체, 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체(예컨대, 동종중합체 및 공중합체는 일단부에서 알킬기로 치환되거나 비치환됨), 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 에틸 에터, 폴리비닐피롤리돈, 이들의 조합 등을 포함하는, 폴리알킬렌 글리콜 및 이들의 유도체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 중합체는 폴리알킬렌 글리콜이다. 소정의 실시형태에서, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜이다. 이하에 더욱 상세히 기재된 접합체 및 화합물에 나타낸 바와 같은 기타 링커도 가능하다.
몇몇 실시형태에서, L은 화학식 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-로 표기된 링커이되, 여기서 L1, L2, L3 및 L4는 각각 독립적으로 링커 단위이고, a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, a, b, c 및 d의 합계는 1 내지 4이다.
소정의 실시형태에서, a, b, c 및 d의 합계는 1이다. 소정의 실시형태에서, a, b, c 및 d의 합계는 2이다. 소정의 실시형태에서, a, b, c 및 d의 합계는 3이다. 소정의 실시형태에서, a, b, c 및 d의 합계는 4이다. 소정의 실시형태에서, a, b, c 및 d는 각각 1이다. 소정의 실시형태에서, a, b 및 c는 각각 1이고, d는 0이다. 소정의 실시형태에서, a 및 b는 각각 1이고, c 및 d는 각각 0이다. 소정의 실시형태에서, a는 1이고, b, c 및 d는 각각 0이다.
소정의 실시형태에서, L1은 (예컨대, 상기 화학식 (I)에 나타낸 바와 같은) 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티에 부착된다. 소정의 실시형태에서, L2는, 존재한다면, W1에 부착된다. 소정의 실시형태에서, L3은, 존재한다면, W1에 부착된다. 소정의 실시형태에서, L4는, 존재한다면, W1에 부착된다.
임의의 편리한 링커 단위는 본 링커에서 활용될 수 있다. 관심 링커는, 중합체의 단위, 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 및 폴리아크릴레이트, 아미노산 잔기(들), 탄수화물-기반 중합체 또는 탄수화물 잔기 및 이들의 유도체, 폴리뉴클레오타이드, 알킬기, 아릴기, 헤테로사이클릭기, 이들의 조합, 및 이들의 치환된 버전을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 몇몇 실시형태에서, L1, L2, L3 및 L4의 각각은 (만약 존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기, 및 다이아민(예컨대, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결기)으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기를 포함한다.
몇몇 실시형태에서, L1은 (만약 존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기, 또는 다이아민을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L1은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L1은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L1은 아미노산 잔기를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L1은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L1은 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L1은 다이아민(예컨대, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, L2는 (만약 존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기, 또는 다이아민을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L2는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L2는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L2는 아미노산 잔기를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L2는 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L2는 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L2는 다이아민(예컨대, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, L3은 (만약 존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기, 또는 다이아민을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L3은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L3은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L3은 아미노산 잔기를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L3은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L3은 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L3은 다이아민(예컨대, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, L 4는 (만약 존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기, 또는 다이아민을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L4는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L4는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L4는 아미노산 잔기를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L4는 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L4는 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, L4는 다이아민(예컨대, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, L은 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-를 포함하는 링커이되, 여기서:
-(L1)a-는 -(T1-V1)a-이고;
-(L2)b-는 -(T2-V2)b-이고;
-(L3)c-는 -(T3-V3)c-이고; 그리고
-(L4)d-는 -(T4-V4)d-이고,
여기서, T1, T2, T3 및 T4는, 존재한다면, 테더기이고;
V1, V2, V3 및 V4는, 존재한다면, 공유 결합 또는 연결 작용기이고; 그리고
a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, 여기서 a, b, c 및 d의 합계는 1 내지 4이다.
위에서 기재된 바와 같이, 소정의 실시형태에서, L1은 (예컨대, 상기 화학식 (I)에 나타낸 바와 같은) 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티에 부착된다. 이와 같이, 소정의 실시형태에서, T1은 (예컨대, 상기 화학식 (I)에 나타낸 바와 같은) 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티에 부착된다. 소정의 실시형태에서, V1은 W1(메이탄시노이드)에 부착된다. 소정의 실시형태에서, L2는, 존재한다면, W1에 부착된다. 이와 같이, 소정의 실시형태에서, T2는, 존재한다면, W1에 부착되거나, 또는 V2는, 존재한다면, W1에 부착된다. 소정의 실시형태에서, L3은, 존재한다면, W1에 부착된다. 이와 같이, 소정의 실시형태에서, T3은, 존재한다면, W1에 부착되거나, 또는 V3은, 존재한다면, W1에 부착된다. 소정의 실시형태에서, L4는, 존재한다면, W1에 부착된다. 이와 같이, 소정의 실시형태에서, T4는, 존재한다면, W1에 부착되거나, 또는 V4는, 존재한다면, W1에 부착된다.
테더기 T1, T2, T3 및 T4에 관하여, 임의의 편리한 테더기는 본 링커에서 사용될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, T1, T2, T3 및 T4는 각각 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노(4AP), 아세탈기, 설파이드, 하이드라진, 및 에스터로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기를 포함하고, 여기서 w는 1 내지 20의 정수이고, n은 1 내지 30의 정수이고, p는 1 내지 20의 정수이고, h는 1 내지 12의 정수이다.
소정의 실시형태에서, a, b, c 및 d의 합계가 2이고 T1-V1, T2-V2, T3-V3, 또는 T4-V4 중 하나가 (PEG)n-CO이면, n은 6이 아니다. 예를 들어, 몇몇 경우에, 링커는 하기 구조를 가질 수 있다:
Figure pct00018
여기서, n은 6 이하이다.
소정의 실시형태에서, a, b, c 및 d의 합계가 2이고 T1-V1, T2-V2, T3-V3 또는 T4-V4 중 하나가 (C1-C12)알킬-NR15인 경우, (C1-C12)알킬은 C5-알킬이 아니다. 예를 들어, 몇몇 경우에, 링커는 하기 구조를 가질 수 있다:
Figure pct00019
여기서 g는 4가 아니다.
소정의 실시형태에서, 테더기(예컨대, T1, T2, T3 및/또는 T4)는 (C1-C12)알킬 또는 치환된 (C1-C12)알킬을 포함한다. 소정의 실시형태에서, (C1-C12)알킬은 1 내지 12 탄소 원자, 예컨대, 1 내지 10개의 탄소 원자, 또는 1 내지 8 탄소 원자, 또는 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 5 탄소 원자, 또는 1 내지 4 탄소 원자, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 분지형 알킬기이다. 몇몇 경우에, (C1-C12)알킬은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대, C1-C12 알킬, 또는 C1-C10 알킬, 또는 C1-C6 알킬, 또는 C1-C3 알킬일 수 있다. 몇몇 경우에, (C1-C12)알킬은 C2-알킬이다. 예를 들어, (C1-C12)알킬은 알킬렌 또는 치환된 알킬렌, 예컨대, C1-C12 알킬렌, 또는 C1-C10 알킬렌, 또는 C1-C6 알킬렌, 또는 C1-C3 알킬렌일 수 있다. 몇몇 경우에, (C1-C12)알킬은 C2-알킬렌이다.
소정의 실시형태에서, 치환된 (C1-C12)알킬은 1 내지 12 탄소 원자, 예컨대, 1 내지 10개의 탄소 원자, 또는 1 내지 8개의 탄소 원자, 또는 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 5개의 탄소 원자, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자, 또는 1 내지 3개의 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 분지형 치환된 알킬기이다. 몇몇 경우에, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 알킬, 예컨대, 치환된 C1-C12 알킬, 또는 치환된 C1-C10 알킬, 또는 치환된 C1-C6 알킬, 또는 치환된 C1-C3 알킬일 수 있다. 몇몇 경우에, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C2-알킬이다. 예를 들어, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 알킬렌, 예컨대, 치환된 C1-C12 알킬렌, 또는 치환된 C1-C10 알킬렌, 또는 치환된 C1-C6 알킬렌, 또는 치환된 C1-C3 알킬렌일 수 있다. 몇몇 경우에, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C2-알킬렌이다.
소정의 실시형태에서, 테더기(예컨대, T1, T2, T3 및/또는 T4)는 에틸렌 다이아민(EDA) 모이어티, 예컨대, EDA 함유 테더를 포함한다. 소정의 실시형태에서, (EDA)w는 1개 이상의 EDA 모이어티를 포함하며, 예컨대, w는 1 내지 50, 예컨대, 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6)이다. 연결된 에틸렌 다이아민(EDA) 모이어티는 선택적으로 임의의 편리한 치환체로, 예컨대, 알킬, 치환된 알킬, 아실, 치환된 아실, 아릴 또는 치환된 아릴로 하나 이상의 편리한 위치에서 치환될 수 있다. 소정의 실시형태에서, EDA 모이어티는 하기 구조로 표기된다:
Figure pct00020
여기서 y는 1 내지 6의 정수이고, r은 0 또는 1이고, 각각의 R12는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, y는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 소정의 실시형태에서, y는 1이고, r은 0이다. 소정의 실시형태에서, y는 1이고, r은 1이다. 소정의 실시형태에서, y는 2이고 r은 0이다. 소정의 실시형태에서, y는 2이고 r은 1이다. 소정의 실시형태에서, 각각의 R12는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, EDA의 임의의 2개의 인접한 R12기는, 예컨대, 환상으로 연결되어, 피페라진일 고리를 형성할 수 있다. 소정의 실시형태에서, y는 1이고, 2개의 인접한 R12기는 알킬기이고, 환상으로 연결되어 피페라진일 고리를 형성한다. 소정의 실시형태에서, y는 1이고, 인접한 R12기는 수소, 알킬(예컨대, 메틸) 및 치환된 알킬(예컨대, 저급 알킬-OH, 예컨대, 에틸-OH 또는 프로필-OH)로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, 테더기는 4-아미노-피페리딘(4AP) 모이어티(본 명세서에서 피페리딘-4-아미노, P4A로도 지칭됨)를 포함한다. 4AP 모이어티는 선택적으로 임의의 편리한 치환체로, 예컨대, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아실, 치환된 아실, 아릴 또는 치환된 아릴로 하나 이상의 편리한 위치에서 치환될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 4AP 모이어티는 하기 구조로 표기된다:
Figure pct00021
여기서 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티(예컨대, 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜), 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, R12는 폴리에틸렌 글리콜 모이어티이다. 소정의 실시형태에서, R12는 카복시 변형된 폴리에틸렌 글리콜이다.
소정의 실시형태에서, R12는 하기 구조로 표시될 수 있는, 화학식: (PEG)k로 표기된 폴리에틸렌 글리콜 모이어티를 포함한다:
Figure pct00022
여기서 k는 1 내지 20, 예컨대, 1 내지 18, 또는 1 내지 16, 또는 1 내지 14, 또는 1 내지 12, 또는 1 내지 10, 또는 1 내지 8, 또는 1 내지 6, 또는 1 내지 4, 또는 1 또는 2의 정수, 예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 몇몇 경우에, k는 2이다. 소정의 실시형태에서, R17은 OH, COOH 또는 COOR로부터 선택되되, 여기서 R은 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, R17은 COOH이다.
소정의 실시형태에서, 테더기(예컨대, T1, T2, T3 및/또는 T4)는 (PEG)n을 포함하는데, 여기서 (PEG)n은 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜 연결 단위이다. 소정의 실시형태에서, (PEG)n은 하기 구조로 표기된다:
Figure pct00023
여기서 n은 1 내지 50, 예컨대, 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6의 정수, 예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 몇몇 경우에, n은 2이다. 몇몇 경우에, n은 3이다. 몇몇 경우에, n은 6이다. 몇몇 경우에, n은 12이다.
소정의 실시형태에서, 테더기(예컨대, T1, T2, T3 및/또는 T4)는 (AA)p를 포함하는데, 여기서 AA는 아미노산 잔기이다. 임의의 편리한 아미노산이 사용될 수 있다. 관심 아미노산은, L- 및 D-아미노산, 천연 유래 아미노산, 예컨대, 20개의 1차 알파-아미노산 및 베타-알라닌 중 임의의 것, 비천연 유래 아미노산(예컨대, 아미노산 유사체), 예컨대, 비천연 유래 알파-아미노산 또는 비천연 유래 베타-아미노산 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 소정의 실시형태에서, p는 1 내지 50, 예컨대, 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6의 정수, 예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 소정의 실시형태에서, p는 1이다. 소정의 실시형태에서, p는 2이다.
소정의 실시형태에서, 테더기(예컨대, T1, T2, T3 및/또는 T4)는 화학식 -(CR13OH)h-로 표시되는 모이어티를 포함하되, 여기서 h는 0이거나 또는 n은 1 내지 50, 예컨대, 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12의 정수 또는 1 내지 6, 예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12이다. 소정의 실시형태에서, h는 1이다. 소정의 실시형태에서, h는 2이다. 소정의 실시형태에서, R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, R13은 수소이다. 소정의 실시형태에서, R13은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대, C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 소정의 실시형태에서, R13은 알켄일 또는 치환된 알켄일, 예컨대, C2-6 알켄일 또는 C2-6 치환된 알켄일, 또는 C2-4 알켄일 또는 C2-4 치환된 알켄일, 또는 C2-3 알켄일 또는 C2-3 치환된 알켄일이다. 소정의 실시형태에서, R13은 알킨일 또는 치환된 알킨일이다. 소정의 실시형태에서, R13은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 소정의 실시형태에서, R13은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 소정의 실시형태에서, R13은 카복실 또는 카복실 에스터이다. 소정의 실시형태에서, R13은 아실 또는 아실옥시이다. 소정의 실시형태에서, R13은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 소정의 실시형태에서, R13은 알킬아마이드 또는 치환된 알킬아마이드이다. 소정의 실시형태에서, R13은 설포닐이다. 소정의 실시형태에서, R13은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 소정의 실시형태에서, R13은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대, C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대, C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 소정의 실시형태에서, R13은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 소정의 실시형태에서, R13은 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 소정의 실시형태에서, R13은 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
소정의 실시형태에서, R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택된다. 이들 실시형태에서, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴은 R13에 대해서 위에서 기재된 바와 같다.
연결 작용기, V1, V2, V3 및 V4에 관하여, 임의의 편리한 연결 작용기는 본 링커에 사용될 수 있다. 관심 연결 작용기는, 아미노, 카보닐, 아미도, 옥시카보닐, 카복시, 설포닐, 설폭사이드, 설포닐아미노, 아미노설포닐, 티오, 옥시, 포스포, 포스포라미데이트, 티오포스포라미데이트 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 몇몇 실시형태에서, V1, V2, V3 및 V4는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로부터 선택되되, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이다. 소정의 실시형태에서, q는 1 내지 6의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6)이다. 소정의 실시형태에서, q는 1이다. 소정의 실시형태에서, q는 2이다.
몇몇 실시형태에서, 각각의 R15는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다.
각각의 R15에 대한 다양한 가능성은 다음과 같이 더 상세하게 기재된다. 소정의 실시형태에서, R15는 수소이다. 소정의 실시형태에서, 각각의 R15는 수소이다. 소정의 실시형태에서, R15는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대, C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 소정의 실시형태에서, R15는 알켄일 또는 치환된 알켄일, 예컨대, C2-6 알켄일 또는 C2-6 치환된 알켄일, 또는 C2-4 알켄일 또는 C2-4 치환된 알켄일, 또는 C2-3 알켄일 또는 C2-3 치환된 알켄일이다. 소정의 실시형태에서, R15는 알킨일 또는 치환된 알킨일이다. 소정의 실시형태에서, R15는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 소정의 실시형태에서, R15는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 소정의 실시형태에서, R15는 카복실 또는 카복실 에스터이다. 소정의 실시형태에서, R15는 아실 또는 아실옥시이다. 소정의 실시형태에서, R15는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 소정의 실시형태에서, R15는 알킬아마이드 또는 치환된 알킬아마이드이다. 소정의 실시형태에서, R15는 설포닐이다. 소정의 실시형태에서, R15는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 소정의 실시형태에서, R15는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대, C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대, C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 소정의 실시형태에서, R15는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 소정의 실시형태에서, R15는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 소정의 실시형태에서, R15는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
소정의 실시형태에서, 각각의 R15는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 이들 실시형태에서, 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴 치환체는 R15에 대해서 위에서 기재된바와 같다.
소정의 실시형태에서, 테더기는 아세탈기, 설파이드, 하이드라진 또는 에스터를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 테더기는 아세탈기를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 테더기는 설파이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 테더기는 하이드라진을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 테더기는 에스터를 포함한다.
위에서 기재된 바와 같이, 몇몇 실시형태에서, L은 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-를 포함하는 링커이되, a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, a, b, c 및 d의 합계는 1 내지 4이다.
몇몇 실시형태에서, 본 발명의 링커에서:
T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
T2, T3 및 T4는 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 4-아미노-피페리딘(4AP), 아세탈기, 설파이드, 하이드라진 및 에스터로부터 선택되고; 그리고
V1, V2, V3 및 V4는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로부터 선택되되, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이고;
여기서:
(PEG)n은
Figure pct00024
이되, n은 1 내지 30의 정수이고;
EDA는 하기 구조:
Figure pct00025
를 갖는 에틸렌 다이아민 모이어티이되, y는 1 내지 6의 정수이고 r은 0 또는 1이고;
4-아미노-피페리딘(4AP)은
Figure pct00026
이고;
AA는 아미노산 잔기이되, p는 1 내지 20의 정수이고; 그리고
각각의 R15 및 R12는독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택되되, 임의의 2개의 인접한 R12기는 환상으로 연결되어 피페라진일 고리를 형성하고; 그리고
R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, T1, T2, T3 및 T4 및 V1, V2, V3 및 V4는 하기 표, 예컨대, 하기 표의 하나의 행으로부터 선택된다:
Figure pct00027
Figure pct00028
소정의 실시형태에서, L은 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-를 포함하는 링커인데, 여기서 -(L1)a-는 -(T1-V1)a-이고; -(L2)b-는 -(T2-V2)b-이고; -(L3)c-는 -(T3-V3)c-이고; 그리고 -(L4)d-는 -(T4-V4)d-이다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고 V2는 -NR15-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 -CO-이고, T3은 (CR13OH)h이고, V3은 -CONR15-이고, T4는 (C1-C12)알킬이고, V4는 -CO-이다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR15-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 존재하지 않고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 존재하지 않고, T3은 존재하지 않고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -NR15-이고, T3은 존재하지 않고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR15-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -NR15-이고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 -CO-이고, T3은 존재하지 않고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 (C1-C12)알킬이고, V2는 -NR15-이고, T3은 존재하지 않고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 (EDA)w이고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 존재하지 않고, T3은 존재하지 않고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 (AA)p이고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 -CO-이고, T3은 (CR13OH)h이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR15-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR15-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -SO2-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 -CO-이고, T3은 (CR13OH)h이고, V3은 -CONR15-이고, T4는 (PEG)n이고, V4는 -CO-이다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (CR13OH)h이고, V2는 -CO-이고, T3은 존재하지 않고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 치환된 (C1-C12)알킬이고, V2는 -NR15-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -SO2-이고, T2는 (C1-C12)알킬이고, V2는 -CO-이고, T3은 존재하지 않고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 (C1-C12)알킬이고, V2은 존재하지 않고, T3은 (CR13OH)h이고, V3은 -CONR15-이고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR15-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 -NR15-이다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR15-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -P(O)OH-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2은 존재하지 않고, T3은 (AA)p이고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 -CO-이고, T3은 (CR13OH)h이고, V3은 -CONR15-이고, T4는 (C1-C12)알킬이고, V4는 -CO(AA)p-이다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 (C1-C12)알킬이고, V2는 -NR15-이고, T3은 존재하지 않고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 (C1-C12)알킬이고, V2는 -NR15-이고, T3은 존재하지 않고, V3은 -CO-이고, T4는 (C1-C12)알킬이고, V4는 -NR15-이다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 -CO-이고, T3은 (CR13OH)h이고, V3은 -CONR15-이고, T4는 (PEG)n이고, V4는 -CO(AA)p-이다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 4AP이고, V2는 -CO-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 4AP이고, V2는 -CO-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고, 그리고 V4는 존재하지 않는다.
소정의 실시형태에서, 링커는 하기 구조들 중 하나에 의해 기술된다:
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
위에서 묘사된 링커 구조의 소정의 실시형태에서, 각각의 f는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고; 각각의 y는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고; 각각의 n은 독립적으로 0 또는 1 내지 30의 정수이고; 각각의 p는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고; 각각의 h는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고; 각각의 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴이고; 각각의 R'은 독립적으로 H, 아미노산, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴의 측쇄이다. 위에서 묘사된 링커 구조의 소정의 실시형태에서, 각각의 f는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 각각의 y는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 각각의 n은 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 각각의 h는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 위에서 묘사된 링커 구조의 소정의 실시형태에서, 각각의 R은 독립적으로 H, 메틸 또는 -(CH2)m-OH이고, 여기서 m은 1, 2, 3 또는 4(예컨대, 2)이다.
링커 L의 소정의 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 4AP이고, V2는 -CO-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고, 그리고 V4는 존재하지 않는다. 소정의 실시형태에서, T1은 에틸렌이고, V1은 -CO-이고, T2는 4AP이고, V2는 -CO-이고, T3은 에틸렌이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고, 그리고 V4는 존재하지 않는다. 소정의 실시형태에서, T1은 에틸렌이고, V1은 -CO-이고, T2는 4AP이고, V2는 -CO-이고, T3은 에틸렌이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고, 그리고 V4는 존재하지 않고, 여기서 T2(예컨대, 4AP)는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00035
식 중,
R12는 폴리에틸렌 글리콜 모이어티(예컨대, 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜)이다.
소정의 실시형태에서, 링커 L은 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00036
식 중,
각각의 f는 독립적으로 1 내지 12의 정수이고; 그리고
n은 1 내지 30의 정수이다.
소정의 실시형태에서, f는 1이다. 소정의 실시형태에서, f는 2이다. 소정의 실시형태에서, 하나의 f는 2이고 하나의 f는 1이다.
소정의 실시형태에서, n은 1이다.
소정의 실시형태에서, 상기 링커 구조의 좌측은 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티에 부착되고, 상기 링커 구조의 우측은 메이탄신에 부착된다.
상기 구조에 제시된 화학적 실체, 링커 및 커플링 모이어티 중 어느 것이든지 본 화합물 및 접합체에 사용하기 위해 적응될 수 있다.
하이드라진일-인돌릴 및 하이드라진일-피롤로-피리딘일 및 접합체의 제조 방법과 관련된 추가의 개시내용은 2013년 3월 11일자로 출원된 미국 특허 출원 공개 제2014/0141025호 및 2014년 11월 26일자로 출원된 미국 특허 출원 공개 제2015/0157736호에서 찾아볼 수 있고, 이들의 개시내용은 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
항-CD37 항체
위에서 언급된 바와 같이, 본 접합체는, 치환체로서 W2 항-CD37 항체를 포함할 수 있으며, 여기서 항-CD37 항체는 2-폼일글리신(FGly) 잔기를 포함하도록 변형되었다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 아미노산은 이들의 표준 명칭, 표준 3문자 약어 및/또는 표준 한문자 약어로 지칭될 수 있는데, 예컨대, 알라닌 또는 Ala 또는 A; 시스테인 또는 Cys 또는 C; 아스파르트산 또는 Asp 또는 D; 글루탐산 또는 Glu 또는 E; 페닐알라닌 또는 Phe 또는 F; 글리신 또는 Gly 또는 G; 히스티딘 또는 His 또는 H; 아이소류신 또는 Ile 또는 I; 라이신 또는 Lys 또는 K; 류신 또는 Leu 또는 L; 메티오닌 또는 Met 또는 M; 아스파라긴 또는 Asn 또는 N; 프롤린 또는 Pro 또는 P; Glut아민 또는 Gln 또는 Q; 아르기닌 또는 Arg 또는 R; 세린 또는 Ser 또는 S; 트레오닌 또는 Thr 또는 T; 발린 또는 Val 또는 V; 트립토판 또는 Trp 또는 W; 및 티로신 또는 Tyr 또는 Y이다.
몇몇 경우에, 적합한 항-CD37 항체는 CD37 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하고, 이때 에피토프는 CD37 항원 내의 아미노산 잔기를 포함한다. 인간 CD37 폴리펩타이드(UniProtKB - P11049)의 아미노산 서열은 하기 표 3에 묘사된다.
Figure pct00037
CD37 에피토프는 표 3에 묘사된 인간 CD37 아미노산 서열의 약 200개 아미노산 내지 약 281개 아미노산의 인접한 스트레치(contiguous stretch)와 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리펩타이드에 의해 형성될 수 있다.
"CD37 항원" 또는 "CD37 폴리펩타이드"는 표 3에 묘사된 인간 CD37 아미노산 서열의 약 200개 아미노산 내지 약 281개 아미노산의 인접한 스트레치와 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
몇몇 경우에, 적합한 항-CD37 항체는 CD37에 결합하는 높은 친화도를 나타낸다. 예를 들어, 몇몇 경우에, 적합한 항-CD37 항체는 적어도 약 10-7 M, 적어도 약 10-8 M, 적어도 약 10-9 M, 적어도 약 10-10 M, 적어도 약 10-11 M, 또는 적어도 약 10-12 M 또는 10-12 M 초과의 친화도로 CD37에 결합한다. 몇몇 경우에, 적합한 항-CD37 항체는 약 10-7 M 내지 약 10-8 M, 약 10-8 M 내지 약 10-9 M, 약 10-9 M 내지 약 10-10 M, 약 10-10 M 내지 약 10-11 M, 또는 약 10-11 M 내지 약 10-12 M, 또는 10-12 M 초과의 친화도로 CD37 상에 존재하는 에피토프에 결합한다.
몇몇 경우에, 적합한 항-CD37 항체는 제2 항-CD37 항체(예컨대, K7153A 또는 AGS67E)와 CD37 내의 에피토프에 대한 결합에 대해 경쟁하고/하거나, CD37 내의, 제2 항-CD37 항체(예컨대, K7153A 또는 AGS67E)와 동일한 에피토프에 결합한다. 몇몇 경우에, 제2 항-CD37 항체와 CD37 내의 에피토프에 대한 결합에 대해 경쟁하는 항-CD37 항체는 또한 제2 항-CD37 항체(예컨대, K7153A 또는 AGS67E)와 동일한 에피토프에 결합한다. 몇몇 경우에, 제2 항-CD37 항체와 CD37 내의 에피토프에 대한 결합에 대해 경쟁하는 항-CD37 항체는 제2 항-CD37 항체(예컨대, K7153A 또는 AGS67E)에 의해 결합된 에피토프와 중첩되고 있는 에피토프에 결합한다. 몇몇 경우에, 항-CD37 항체는 인간화된다.
몇몇 실시형태에 따르면, 본 개시내용의 접합체는 CD37에 특이적으로 결합하는 항-CD37 항체를 포함하고, 하기를 포함하는 항-CD37 항체와 CD37에 대한 결합에 대해서 경쟁한다:
아미노산 서열 GYNMN(서열번호 3)을 포함하는 VH CDR1,
아미노산 서열 NIDPYYGGTTYNRKFKG(서열번호 4)를 포함하는 VH CDR2, 및
아미노산 서열 SVGPFDS(서열번호 5)를 포함하는 VH CDR3
을 포함하는 가변 중쇄(VH) 폴리펩타이드; 및
아미노산 서열 RASENVYSYLA(서열번호 8)를 포함하는 VL CDR1,
아미노산 서열 FAKTLAE(서열번호 9)를 포함하는 VL CDR2, 및
아미노산 서열 QHHSDNPWT(서열번호 10)를 포함하는 VL CDR3
을 포함하는 가변 경쇄(VL) 폴리펩타이드.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용의 접합체는 하기를 포함하는 항-CD37 항체를 포함한다:
아미노산 서열 GYNMN(서열번호 3)을 포함하는 VH CDR1,
아미노산 서열 NIDPYYGGTTYNRKFKG(서열번호 4)를 포함하는 VH CDR2, 및
아미노산 서열 SVGPFDS(서열번호 5)를 포함하는 VH CDR3
을 포함하는 가변 중쇄(VH) 폴리펩타이드; 및
아미노산 서열 RASENVYSYLA(서열번호 8)를 포함하는 VL CDR1,
아미노산 서열 FAKTLAE(서열번호 9)를 포함하는 VL CDR2, 및
아미노산 서열 QHHSDNPWT(서열번호 10)를 포함하는 VL CDR3
을 포함하는 가변 경쇄(VL) 폴리펩타이드.
몇몇 실시형태에 따르면, 본 개시내용의 접합체는 하기를 포함하는 항-CD37 항체를 포함한다:
서열번호 2에 제시된 아미노산 서열과 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 폴리펩타이드; 및
서열번호 7에 제시된 아미노산 서열과 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 폴리펩타이드.
제1 항체가 CD37에 대한 결합에 대해서 제2 항체"와 경쟁하는"지의 여부는 당업계에 공지된 경쟁적 결합 검정을 사용해서 용이하게 결정될 수 있다. 경쟁 항체는, 예를 들어, 항체 경쟁 검정을 통해서 식별될 수 있다. 예를 들어, 제1 항체의 샘플은 고체 지지체에 결합될 수 있다. 이어서, 이러한 제1 항체와 경쟁할 수 있는 것으로 의심되는 제2 항체의 샘플이 첨가된다. 2개의 항체 중 하나는 표지된다. 표지된 항체 및 미표지 항체가 CD37 상의 개별적인 이산적인 부위에 결합된다면, 표지된 항체는 의심되는 경쟁 항체가 존재하는지의 여부에 따라 동일 수준으로 결합될 것이다. 그러나, 상호작용 부위가 동일하거나 중첩된다면, 미표지 항체가 경쟁할 것이고, CD37에 결합된 표지된 항체의 양은 저하될 것이다. 미표지 항체가 과잉으로 존재한다면, 만약 있다면, 매우 적은 표지된 항체가 결합될 것이다.
본 개시내용의 목적을 위하여, 경쟁 항체는 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상, 약 95% 이상, 또는 약 99% 이상만큼 CD37에 대한 항체의 결합을 감소시키는 것들이다. 이러한 경쟁 검정을 수행하기 위한 절차의 상세는 당업계에 잘 알려져 있고, 예를 들어, 문헌[Harlow and Lane, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1988, 567-569, 1988, ISBN 0-87969-314-2]에서 찾을 수 있다. 이러한 검정은 정제된 항체를 사용함으로써 정량적으로 행해질 수 있다. 표준 곡선은 자체에 대해서 하나의 항체를 적정함으로써 확립될 수 있고, 즉, 동일한 항체가 표지 및 경쟁자 둘 다에 대해서 사용된다. 플레이트에 대한 표지된 항체의 결합을 저해하는 미표지 경쟁 항체의 능력이 적정될 수 있다. 그 결과가 플로팅될 수 있고, 목적하는 결합 저해 정도를 달성하기 위하여 필요한 농도가 비교될 수 있다.
몇몇 실시형태에 따르면, 본 개시내용의 접합체는 표 4에 제공된 중쇄 폴리펩타이드와 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 폴리펩타이드를 포함하는 항-CD37 항체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 항-CD37 항체는 표 4에 제공된 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함한다.
몇몇 실시형태에 따르면, 본 개시내용의 접합체는 표 4에 제공된 경쇄 폴리펩타이드와 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 폴리펩타이드를 포함하는 항-CD37 항체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 항-CD37 항체는 표 4에 제공된 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함한다.
몇몇 실시형태에 따르면, 본 개시내용의 접합체는 표 4에 제공된 중쇄 폴리펩타이드와70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 폴리펩타이드; 및 표 4에 제공된 경쇄 폴리펩타이드와 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 폴리펩타이드를 포함하는 항-CD37 항체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 항-CD37 항체는 표 4에 제공된 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함한다.
본 개시내용의 예시적인 항-CD37의 중쇄 폴리펩타이드, VH 폴리펩타이드, VH CDRs, 경쇄 폴리펩타이드, VL 폴리펩타이드 및 VL CDR의 아미노산 서열은 (밑줄쳐 있는 볼드체 및 가변 영역으로 Kabat에 따른 CDR과 함께) 하기 표 4에 제공된다.
Figure pct00038
몇몇 실시형태에 따르면, 본 개시내용의 접합체는 표 4에 제공된 중쇄 폴리펩타이드(서열번호 1)와 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 폴리펩타이드를 포함하는 항-CD37 항체를 포함하되, 항체는 L234A 치환, L235A 치환, 또는 둘 다(예컨대, L234A 치환 및 L235A 치환)를 포함하되, 여기서 234 및 235번 위치는 EU 넘버링 체계에 따른다. 문한[Edelman et al. (1969) Proc. Natl. Acad. 63:78-85]. EU 넘버링 체계에 따른 잔기 L234 및 L235는 표 4에서 볼드체이고 이탤릭체로 되어 있다. 소정의 실시형태에서, 이러한 항-CD37 항체는 표 4에 제시된 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 항체와 CD37에 대한 결합에 대해 경쟁한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 항-CD37 항체는 표 4에 제시된 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 항-CD37 항체는 IgG1 항체이다. 예를 들어, 소정의 양상에서, 항-CD37 항체는 IgG1 카파 항체이다.
소정의 양상에서, 항-CD37 항체는 표 4에 나타낸 항체에 기반한 FGly'-함유 항체이다. 예를 들어, 몇몇 실시형태에서, 항체는 표 4에 나타낸 항체의 유도체이되, 여기서 항체와 유도체 간의 차이는 유도체의 1개 이상의 FGly' 잔기(및 선택적으로, 연관된 FGE 인식 서열 아미노산)의 존재이다. 표 4에서의 아미노산 서열에서, 가변 영역은 밑줄쳐 있고 CDR은 볼드체로 나타낸다. 이 예에서, 중쇄의 C-말단에서의 이탤릭체로 표기된 잔기는 표준 IgG1 중쇄의 C-말단에서의 라이신 잔기를 대체한다. 이탤릭체로 표기된 잔기 중 밑줄쳐 있는 잔기(LCTPSR)는 알데하이드 태그를 구성하고, 여기서 C는 중쇄의 발현 시 FGE에 의해 FGly 잔기로 전환된다. 이탤릭체로 표기된 잔기 중 밑줄쳐 있지 않은 잔기는 표준 IgG1 중쇄 서열과는 상이한 추가의 잔기이다.
몇몇 실시형태에서, 항-CD37 항체는 항-CD37 항체 K7153A의 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두 6개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 소정의 양상에서, 항-CD37 항체는 항-CD37 항체 AGS67E의 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두 6개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다.
소정의 양상에서, 항-CD37 항체는 표 4에 나타낸 항체에 기반한 FGly'-함유 항체이다. 예를 들어, 몇몇 실시형태에서, 항체는 표 4에 나타낸 항체의 유도체이되, 여기서 항체와 유도체 간의 차이는 유도체의 1개 이상의 FGly' 잔기(및 선택적으로, 연관된 FGE 인식 서열 아미노산)의 존재이다. 일 실시형태에 따른 예시적인 다클리주맙-기반 항체에 대한 핵산 및 아미노산 서열이 표 4에 제공된다. 표 4에서의 아미노산 서열에서, 가변 영역은 밑줄쳐 있고 CDR은 볼드체로 나타낸다. 이 예시적인 다클리주맙-기반 항체에서, 중쇄의 C-말단에서의 이탤릭체로 표기된 잔기는 표준 IgG1 중쇄의 C-말단에서의 라이신 잔기를 대체한다. 이탤릭체로 표기된 잔기 중 밑줄쳐 있는 잔기(LCTPSR)는 알데하이드 태그를 구성하고, 여기서 C는 중쇄의 발현 시 FGE에 의해 FGly 잔기로 전환된다. 이탤릭체로 표기된 잔기 중 밑줄쳐 있지 않은 잔기는 표준 IgG1 중쇄 서열과는 상이한 추가의 잔기이다.
본 접합체에 사용하기에 적합한 항-CD37 항체는, 몇몇 경우에, CD37을 그 표면 상에 발현(예컨대, 과발현)하는 인간 종양 세포(예컨대, 악성 B 세포)의 증식을 저해할 것이고, 여기서 저해는 시험관내에서, 생체내에서 또는 시험관내 및 생체내 둘 다에서 일어난다. 예를 들어, 몇몇 경우에, 본 접합체에 사용하기에 적합한 항-CD37 항체는 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 80% 이상, 예컨대, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 100%만큼 CD37을 그 표면 상에 발현(예컨대, 과발현)하는 인간 종양 세포의 증식을 저해한다.
본 개시내용의 양상들은 본 명세서에 기재된 항체 중 임의의 것의 미접합 버전을 더 포함한다.
변형된 불변 영역 서열
위에서 언급된 바와 같이, 항-CD37 항체의 아미노산 서열은 폼일글리신 생성 효소(FGE)의 작용에 의해 생체내에서(예컨대, 세포에서 알데하이드 태그-함유 단백질의 번역 시) 또는 시험관내에서(예컨대, 무세포계에서 알데하이드 태그-함유 단백질을 FGE와 접촉시킴으로써) 2-폼일글리신(FGly) 잔기로 전환(산화)될 수 있는 세린 또는 시스테인 잔기를 함유하는 설파타제 모티프를 포함하도록 변형된다. 이러한 설파타제 모티프는 본 명세서에서 FGE-변형 부위로도 지칭될 수 있다.
설파타제 모티프
알데하이드 태그의 최소 설파타제 모티프는 보통 길이가 5 또는 6개의 아미노산 잔기, 보통 길이가 6개 이하의 아미노산 잔기이다. Ig 폴리펩타이드에 제공된 설파타제 모티프는, 길이가 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8 또는 7개 미만의 아미노산 잔기의 설파타제 모티프를 규정하기 위하여, 길이가 적어도 5 또는 6개의 아미노산 잔기이고, 예를 들면 5 내지 16, 6 내지 16, 5 내지 15, 6 내지 15, 5 내지 14, 6 내지 14, 5 내지 13, 6 내지 13, 5 내지 12, 6 내지 12, 5 내지 11, 6 내지 11, 5 내지 10, 6 내지 10, 5 내지 9, 6 내지 9, 5 내지 8, 또는 6 내지 8개의 아미노산 잔기의 길이일 수 있다.
소정의 실시형태에서, 관심 폴리펩타이드는 폴리펩타이드에서 설파타제 모티프의 서열을 제공하기 위한 천연 아미노산 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 잔기, 예컨대, 2개 이상, 또는 3개 이상, 또는 4개 이상, 또는 5개 이상, 또는 6개 이상, 또는 7개 이상, 또는 8개 이상, 또는 9개 이상, 또는 10개 이상, 또는 11개 이상, 또는 12개 이상, 또는 13개 이상, 또는 14개 이상, 또는 15개 이상, 또는 16개 이상, 또는 17개 이상, 또는 18개 이상, 또는 19개 이상, 또는 20개 이상의 아미노산 잔기가 삽입, 결실, 치환(대체)된 것들을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드는 폴리펩타이드의 천연 아미노산 서열에 비해 아미노산 서열의 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개 미만의 아미노산 잔기의 변형(삽입, 첨가, 결실 및/또는 치환/대체)을 포함한다. 폴리펩타이드(예컨대, 항-CD37 항체)에 대해 천연인 아미노산 서열이 목적하는 설파타제 모티프의 하나 이상의 잔기를 함유하는 경우에, 잔기의 변형의 총 수는, 예컨대, 목적하는 설파타제 모티프의 서열을 제공하기 위하여 천연 아미노산 잔기에 측접하는 아미노산 잔기의 부위-특이적 변형(삽입, 첨가, 결실, 치환/대체)에 의해 저감될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 표적 항-CD37 폴리펩타이드의 천연 아미노산 서열의 변형 정도는 최소화되어서, (예컨대, N- 또는 C-말단에) 삽입, 결실, 치환(대체) 또는 부가되는 아미노산 잔기의 수가 최소화될 수 있다. 표적 항-CD37 폴리펩타이드의 아미노산 서열 변형 정도를 최소화하는 것은 이러한 변형들이 항-CD37 기능 및/또는 구조에 미칠 수 있는 영향을 최소화할 수 있다.
특정 관심 알데하이드 태그는 적어도 최소 설파타제 모티프("공통 설파타제 모티프"로도 지칭됨)를 포함하는 것들인 한편, 더 긴 알데하이드 태그가 본 개시내용에 의해 상정되고 포함되며 본 개시내용의 조성물 및 방법에 사용될 수 있다는 것이 쉽게 인지될 것임이 주지되어야 한다. 그러므로, 알데하이드 태그는 5 또는 6개의 잔기의 최소 설파타제 모티프를 포함할 수 있거나, 또는 더 길 수 있고 추가의 아미노산 잔기에 의해 모티프의 N- 및/또는 C-말단 쪽에서 측접될 수 있는 최소 설파타제 모티프를 포함할 수 있다. 예를 들어, 5 또는 6개 아미노산 잔기의 알데하이드 태그가 고려될 뿐만 아니라, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상의 아미노산 잔기의 더 긴 아미노산 서열이 상정된다.
알데하이드 태그는 Ig 중쇄의 C-말단에 또는 그 부근에 존재할 수 있고; 예컨대, 알데하이드 태그는 천연, 야생형 Ig 중쇄의 C-말단의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 내에 존재할 수 있다. 알데하이드 태그는 Ig 중쇄의 CH1 도메인 내에 존재할 수 있다. 알데하이드 태그는 Ig 중쇄의 CH2 도메인 내에 존재할 수 있다. 알데하이드 태그는 Ig 중쇄의 CH3 도메인 내에 존재할 수 있다. 알데하이드 태그는 Ig 경쇄 불변 영역에, 예컨대, 카파 경쇄 불변 영역 또는 람다 경쇄 불변 영역에 존재할 수 있다.
소정의 실시형태에서, 사용된 설파타제 모티프는 다음 식에 의해 표시될 수 있다:
X1Z10X2Z20X3Z30 (I')
식 중,
Z10은 시스테인 또는 세린이고(이것은 또한 (C/S)로 표시될 수 있고);
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고(이것은 또한 (P/A)로 표시될 수 있고);
Z30은 염기성 아미노산(예컨대, 아르기닌(R), 그리고 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 예컨대, 라이신일 수 있음), 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 아이소류신(I) 또는 프롤린(P), 예컨대, A, G, L, V 또는 I이고;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산, 예컨대, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산, (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 예컨대, L, M, V, S 또는 T, 예컨대, L, M, S 또는 V일 수 있고, 단 설파타제 모티프가 표적 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 경우, X1은 존재하고; 그리고
X2 및 X3은 독립적으로, 보통 지방족 아미노산, 극성, 비하전된 아미노산, 또는 황 함유 아미노산(즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 예컨대, S, T, A, V, G 또는 C, 예컨대, S, T, A, V 또는 G이지만, 임의의 아미노산일 수 있다.
항-CD37 중쇄 및/또는 경쇄의 아미노산 서열은 화학식 X1Z10X2Z20X3Z30의 적어도 5개의 아미노산의 서열을 제공하도록 변형될 수 있는데, 여기서,
Z10은 시스테인 또는 세린이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;
Z30은 지방족 아미노산 또는 염기성 아미노산이고;
X1은 존재하거나 또는 존재하지 않고, 존재할 경우, 임의의 아미노산이고, 단 이종성 설파타제 모티프가 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 경우, X1은 존재하고;
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
서열은 Ig 불변 영역의 용매-접근 가능한 루프 영역 내에 또는 이에 인접하여 있고, 여기서 서열은 Ig 중쇄의 C-말단에 있지 않다.
설파타제 모티프는, 일반적으로, 선택된 FGE, 예컨대 알데하이드 태그 부착된 폴리펩타이드가 발현되는 숙주 세포에 존재하는 FGE 또는 무세포 시험관내 방법에서 알데하이드 태그 부착된 폴리펩타이드와 접촉되는 FGE에 의해 전환될 수 있도록 선택된다.
예를 들어, FGE가 진핵생물 FGE(예컨대, 인간 FGE를 포함하여 포유류 FGE)인 경우에, 설파타제 모티프는 하기 화학식의 것일 수 있다:
X1CX2PX3Z30 (I")
식 중,
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산, 예컨대, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산, (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 예컨대, L, M, S 또는 V일 수 있고, 단 설파타제 모티프가 표적 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 경우, X1은 존재하고;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산, 예컨대, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산, (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 예컨대, S, T, A, V, G, 또는 C, 예컨대, S, T, A, V 또는 G일 수 있고; 그리고
Z30은 염기성 아미노산(예컨대, 아르기닌(R), 그리고 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 예컨대, 라이신일 수 있음), 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 아이소류신(I), 또는 프롤린(P), 예컨대, A, G, L, V 또는 I이다.
설파타제 모티프의 구체예는 LCTPSR(서열번호 12), MCTPSR(서열번호 13), VCTPSR(서열번호 14), LCSPSR(서열번호 15), LCAPSR(서열번호 16), LCVPSR(서열번호 17), LCGPSR(서열번호 18), ICTPAR(서열번호 19), LCTPSK(서열번호 20), MCTPSK(서열번호 21), VCTPSK(서열번호 22), LCSPSK(서열번호 23), LCAPSK(서열번호 24), LCVPSK(서열번호 25), LCGPSK(서열번호 26), LCTPSA(서열번호 27), ICTPAA(서열번호 28), MCTPSA(서열번호 29), VCTPSA(서열번호 30), LCSPSA(서열번호 31), LCAPSA(서열번호 32), LCVPSA(서열번호 33) 및 LCGPSA(서열번호 34)를 포함한다.
FGly-함유 서열
변형된 항-CD37 중쇄 및/또는 경쇄에 FGE가 작용할 때, 설파타제 모티프의 세린 또는 시스테인은 FGly로 변형된다. 그러므로, FGly-함유 설파타제 모티프는 하기 화학식의 것일 수 있다:
X1(FGly)X2Z20X3Z30 (I''')
식 중,
FGly는 폼일글리신 잔기이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고(이것은 또한 (P/A)로 표시될 수 있고);
Z30은 염기성 아미노산(예컨대, 아르기닌(R), 그리고 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 보통 라이신일 수 있음), 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 아이소류신(I), 또는 프롤린(P), 예컨대, A, G, L, V 또는 I이고;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산, 예컨대, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산, (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 예컨대, L, M, V, S 또는 T, 예컨대, L, M 또는 V일 수 있고, 단 설파타제 모티프가 표적 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 경우, X1은 존재하고; 그리고
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산, 예컨대, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산, (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 예컨대, S, T, A, V, G 또는 C, 예컨대, S, T, A, V 또는 G일 수 있다.
위에서 기재된 바와 같이, FGly 잔기를 함유하는 변형된 폴리펩타이드는 FGly'-함유 설파타제 모티프를 생성하기 위해 FGly와 약물(예컨대, 위에서 기재된 바와 같이, 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티를 함유하는 약물)과 반응시킴으로써 약물(예컨대, 메이탄시노이드)에 접합체될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 FGly'는 약물, 예컨대, 메이탄시노이드(예컨대, 화학식 (I)의 변형된 아미노산 산기)에 커플링된 설파타제 모티프의 변형된 아미노산 잔기를 나타낸다. 그러므로, FGly'-함유 설파타제 모티프는 하기 화학식의 것일 수 있다:
X1(FGly')X2Z20X3Z30 (II)
식 중,
FGly'은 화학식 (I)의 변형된 아미노산 잔기이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고(이것은 또한 (P/A)로 표시될 수 있고);
Z30은 염기성 아미노산(예컨대, 아르기닌(R), 그리고 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 보통 라이신일 수 있음), 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 아이소류신(I), 또는 프롤린(P), 예컨대, A, G, L, V 또는 I이고;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산, 예컨대, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산, (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 예컨대, L, M, V, S 또는 T, 예컨대, L, M 또는 V일 수 있고, 단 설파타제 모티프가 표적 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 경우, X1은 존재하고; 그리고
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산, 예컨대, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산, (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 예컨대, S, T, A, V, G 또는 C, 예컨대, S, T, A, V 또는 G일 수 있다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 변형된 아미노산 잔기는 항-CD37 항체의 중쇄 불변 영역의 C-말단에 위치된다. 몇몇 경우에, 중쇄 불변 영역은 하기 화학식 (II)의 서열을 포함한다:
X1(FGly')X2Z20X3Z30 (II)
식 중,
FGly'은 화학식 (I)의 변형된 아미노산 잔기이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고(이것은 또한 (P/A)로 표시될 수 있고);
Z30은 염기성 아미노산(예컨대, 아르기닌(R), 그리고 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 보통 라이신일 수 있음), 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 아이소류신(I), 또는 프롤린(P), 예컨대, A, G, L, V, 또는 I이고;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산, 예컨대, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산, (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 예컨대, L, M, V, S 또는 T, 예컨대, L, M 또는 V일 수 있고, 단 설파타제 모티프가 표적 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 경우, X1은 존재하고;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산, 예컨대, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산, (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 예컨대, S, T, A, V, G 또는 C, 예컨대, S, T, A, V 또는 G일 수 있고; 그리고
여기서 서열은 아미노산 서열 QKSLSLSPGK에 대해서 C-말단이고, 여기서 서열은 천연의, 야생형 Ig 중쇄 불변 영역에 존재하지 않는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 5 내지 10개의 아미노산을 포함할 수 있다.
소정의 실시형태에서, 중쇄 불변 영역은 천연 SLSLSPGK(서열번호 36) 서열 대신에, 예컨대, Ig 중쇄의 C-말단에 서열 SLSLSPGSL(FGly')TPSRGS(서열번호 35)를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 변형된 아미노산 잔기는 항-CD37 항체의 경쇄 불변 영역에 위치된다. 소정의 실시형태에서, 경쇄 불변 영역은 하기 화학식 (II)의 서열을 포함한다:
X1(FGly')X2Z20X3Z30 (II)
식 중,
FGly'은 화학식 (I)의 변형된 아미노산 잔기이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고(이것은 또한 (P/A)로 표시될 수 있고);
Z30은 염기성 아미노산(예컨대, 아르기닌(R), 그리고 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 보통 라이신일 수 있음), 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 아이소류신(I), 또는 프롤린(P), 예컨대, A, G, L, V 또는 I이고;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산, 예컨대, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산, (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 예컨대, L, M, V, S 또는 T, 예컨대, L, M 또는 V일 수 있고, 단 설파타제 모티프가 표적 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 경우, X1은 존재하고;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산, 예컨대, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산, (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 예컨대, S, T, A, V, G 또는 C, 예컨대, S, T, A, V 또는 G일 수 있고; 그리고
여기서 서열은 아미노산 서열 KVDNAL(서열번호 37)의 C-말단이고/이거나 아미노산 서열 QSGNSQ(서열번호 38)의 N-말단이다.
소정의 실시형태에서, 경쇄 불변 영역은 서열 KVDNAL(FGly')TPSRQSGNSQ(서열번호 39)를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (I)의 변형된 아미노산 잔기는 항-CD37 항체의 중쇄 CH1 영역에 위치된다. 소정의 실시형태에서, 중쇄 CH1 영역은 하기 화학식 (II)의 서열을 포함한다:
X1(FGly')X2Z20X3Z30 (II)
식 중,
FGly'은 화학식 (I)의 변형된 아미노산 잔기이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고(이것은 또한 (P/A)로 표시될 수 있고);
Z30은 염기성 아미노산(예컨대, 아르기닌(R), 그리고 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 보통 라이신일 수 있음), 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 아이소류신(I), 또는 프롤린(P), 예컨대, A, G, L, V, 또는 I이고;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산, 예컨대, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산, (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 예컨대, L, M, V, S 또는 T, 예컨대, L, M 또는 V일 수 있고, 단 설파타제 모티프가 표적 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 경우, X1은 존재하고;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산, 예컨대, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산, (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 예컨대, S, T, A, V, G 또는 C, 예컨대, S, T, A, V 또는 G일 수 있고; 그리고
여기서 서열은 아미노산 서열 SWNSGA(서열번호 40)의 C-말단이고/이거나 아미노산 서열 GVHTFP(서열번호 41)의 N-말단이다.
소정의 실시형태에서, 중쇄 CH1 영역은 서열 SWNSGAL(FGly')TPSRGVHTFP(서열번호 42)를 포함한다.
변형 부위
위에서 언급된 바와 같이, 항-CD37 항체의 아미노산 서열은 FGE의 작용에 의해 생체내에서(예컨대 세포에서 알데하이드 태그-함유 단백질의 번역 시) 또는 시험관내에서(예컨대 무세포계(cell-free system)에서 알데하이드 태그-함유 단백질을 FGE와 접촉시킴으로써) FGly 잔기로 전환(산화)될 수 있는 세린 또는 시스테인 잔기를 함유하는 설파타제 모티프를 포함하도록 변형된다. 본 개시내용의 접합체를 생성하는데 사용되는항-CD37 폴리펩타이드는 적어도 Ig 불변 영역, 예컨대, Ig 중쇄 불변 영역(예컨대, 적어도 CH1 도메인; 적어도 CH1 및 CH2 도메인; CH1, CH2 및 CH3 도메인; 또는 CH1, CH2, CH3 및 CH4 도메인), 또는 Ig 경쇄 불변 영역을 포함한다. 이러한 Ig 폴리펩타이드는 본 명세서에서 "표적 Ig 폴리펩타이드" 또는 "표적 항-CD37 항체" 또는 "표적 항-CD37 Ig 폴리펩타이드"로 지칭된다.
설파타제 모티프가 도입되는 항-CD37 항체의 부위는 임의의 편리한 부위일 수 있다. 위에서 언급된 바와 같이, 몇몇 경우에, 표적 항-CD37 폴리펩타이드의 천연 아미노산 서열의 변형 정도는, 삽입되고, 결실되고, 치환(대체)되며 그리고/또는 (예컨대 N- 또는 C-말단에) 첨가되는 아미노산 잔기의 수를 최소화시키기 위해, 최소화된다. 표적 항-CD37 폴리펩타이드의 아미노산 서열 변형 정도를 최소화시키는 것은 항-CD37 기능 및/또는 구조에 대해 그러한 변형이 미칠 수 있는 영향을 최소화시킬 수 있다.
항-CD37 항체 중쇄 불변 영역은 임의의 중쇄 아이소타입의 Ig 불변 영역, 비천연 유래 Ig 중쇄 불변 영역(공통 Ig 중쇄 불변 영역 포함)을 포함할 수 있다. Ig 불변 영역은 알데하이드 태그를 포함하도록 변형될 수 있고, 여기서 알데하이드 태그는 Ig 불변 영역의 용매-접근 가능한 루프 영역에 또는 그에 인접하여 존재한다. Ig 불변 영역은, 위에서 기재된 바와 같은 설파타제 모티프의 아미노산 서열을 제공하기 위하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개의 아미노산, 또는 16개 이상의 아미노산의 삽입 및/또는 치환에 의해 변형될 수 있다.
몇몇 경우에, 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체는 알데하이드-태그 부착된 Ig 중쇄 불변 영역(예컨대, 적어도 CH1 도메인; 적어도 CH1 및 CH2 도메인; CH1, CH2 및 CH3 도메인; 또는CH1, CH2, CH3 및 CH4 도메인)을 포함한다. 알데하이드-태그 부착된 Ig 중쇄 불변 영역은, FGE에 의해 FGly-변형된 Ig 폴리펩타이드를 생성하도록 변형될 수 있는 적어도 하나의 설파타제 모티프를 포함하도록 변형된, IgA, IgM, IgD, IgE, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아이소타입 중쇄 또는 이것의 임의의 알로타입 변종의 중쇄 불변 영역 서열, 예컨대, 인간 중쇄 불변 영역 서열 또는 마우스 중쇄 불변 영역 서열, 하이브리드 중쇄 불변 영역, 합성 중쇄 불변 영역, 또는 공통 중쇄 불변 영역 서열 등을 포함할 수 있다. Ig 중쇄의 알로타입 변종은 당업계에 공지되어 있다. 예컨대, 문헌[Jefferis and Lefranc (2009) MAbs 1:4]을 참조한다.
몇몇 경우에, 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체는 알데하이드-태그 부착된 Ig 경쇄 불변 영역을 포함한다. 알데하이드-태그 부착된 Ig 경쇄 불변 영역은, FGE에 의해 FGly-변형된 항-CD37 항체 폴리펩타이드를 생성하도록 변형될 수 있는 적어도 하나의 설파타제 모티프를 포함하도록 변형된, 카파 경쇄, 람다 경쇄의불변 영역 서열, 예컨대, 인간 카파 또는 람다 경쇄 불변 영역, 하이브리드 경쇄 불변 영역, 합성 경쇄 불변 영역, 또는 공통 경쇄 불변 영역 서열 등을 포함할 수 있다. 예시적인 불변 영역은 인간 감마 1 및 감마 3 영역을 포함한다. 설파타제 모티프를 제외하고, 변형된 불변 영역은 야생형 아미노산 서열을 가질 수 있거나, 또는 이것은 야생형 아미노산 서열과 적어도 70% 동일한(예컨대, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한) 아미노산 서열을 가질 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 설파타제 모티프는 Ig 폴리펩타이드 중쇄의 C-말단 이외의 위치에, 또는 부가해서 C-말단에위치된다. 위에서 언급된 바와 같이, 단리된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 폴리펩타이드는 위에서 기재된 바와 같은 설파타제 모티프를 포함하도록 변형된 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있는데, 여기서 설파타제 모티프는 항-CD37 폴리펩타이드 중쇄 불변 영역에 또는 그에 인접한 곳에 있다.
몇몇 경우에, 표적 항-CD37 면역글로불린은 위에서 기재된 바와 같은 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되는데, 여기서 변형은 1개 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 설파타제 모티프는 하기 중 하나 이상에 대응하는 IgG1 중쇄 불변 영역의 영역 내에, 또는 그에 인접하여 위치된다: 1) 아미노산 122 내지 127; 2) 아미노산 137 내지 143; 3) 아미노산 155 내지 158; 4) 아미노산 163 내지 170; 5) 아미노산 163 내지 183; 6) 아미노산 179 내지 183; 7) 아미노산 190 내지 192; 8) 아미노산 200 내지 202; 9) 아미노산 199 내지 202; 10) 아미노산 208 내지 212; 11) 아미노산 220 내지 241; 12) 아미노산 247 내지 251; 13) 아미노산 257 내지 261; 14) 아미노산 269 내지 277; 15) 아미노산 271 내지 277; 16) 아미노산 284 내지 285; 17) 아미노산 284 내지 292; 18) 아미노산 289 내지 291; 19) 아미노산 299 내지 303; 20) 아미노산 309 내지 313; 21) 아미노산 320 내지 322; 22) 아미노산 329 내지 335; 23) 아미노산 341 내지 349; 24) 아미노산 342 내지 348; 25) 아미노산 356 내지 365; 26) 아미노산 377 내지 381; 27) 아미노산 388 내지 394; 28) 아미노산 398 내지 407; 29) 아미노산 433 내지 451; 및 30) 아미노산 446 내지 451; 여기서, 아미노산 넘버링은 인간 IgG1의 아미노산 넘버링을 기준으로 한다.
몇몇 경우에, 표적 항-CD37 면역글로불린은 위에서 기재된 바와 같은 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되는데, 여기서 변형은 1개 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 설파타제 모티프는 하기 중 하나 이상에 대응하는 IgG1 중쇄 불변 영역의 영역 내에, 또는 그에 인접하여 위치된다: 1) 아미노산 1 내지 6; 2) 아미노산 16 내지 22; 3) 아미노산 34 내지 47; 4) 아미노산 42 내지 49; 5) 아미노산 42 내지 62; 6) 아미노산 34 내지 37; 7) 아미노산 69 내지 71; 8) 아미노산 79 내지 81; 9) 아미노산 78 내지 81; 10) 아미노산 87 내지 91; 11) 아미노산 100 내지 121; 12) 아미노산 127 내지 131; 13) 아미노산 137 내지 141; 14) 아미노산 149 내지 157; 15) 아미노산 151 내지 157; 16) 아미노산 164 내지 165; 17) 아미노산 164 내지 172; 18) 아미노산 169 내지 171; 19) 아미노산 179 내지 183; 20) 아미노산 189 내지 193; 21) 아미노산 200 내지 202; 22) 아미노산 209 내지 215; 23) 아미노산 221 내지 229; 24) 아미노산 22 내지 228; 25) 아미노산 236 내지 245; 26) 아미노산 217 내지 261; 27) 아미노산 268 내지 274; 28) 아미노산 278 내지 287; 29) 아미노산 313 내지 331; 및 30) 아미노산 324 내지 331; 여기서 아미노산 넘버링은 도 15b에 묘사된 바와 같은 서열번호 43(인간 IgG1 불변 영역)에 제시된 아미노산 넘버링을 기준으로 한다.
IgG1 중쇄의 예시적인 표면-접근 가능한 루프 영역은 1) ASTKGP(서열번호 53); 2) KSTSGGT(서열번호 54); 3) PEPV(서열번호 55); 4) NSGALTSG(서열번호 56); 5) NSGALTSGVHTFPAVLQSSGL(서열번호 57); 6) QSSGL(서열번호 58); 7) VTV; 8) QTY; 9) TQTY(서열번호 59); 10) HKPSN(서열번호 60); 11) EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG(서열번호 61); 12) FPPKP(서열번호 62); 13) ISRTP(서열번호 63); 14) DVSHEDPEV(서열번호 64); 15) SHEDPEV(서열번호 65); 16) DG; 17) DGVEVHNAK(서열번호 66); 18) HNA; 19) QYNST(서열번호 67); 20) VLTVL(서열번호 68); 21) GKE; 22) NKALPAP(서열번호 69); 23) SKAKGQPRE(서열번호 70); 24) KAKGQPR(서열번호 71); 25) PPSRKELTKN(서열번호 72); 26) YPSDI(서열번호 73); 27) NGQPENN(서열번호 74); 28) TPPVLDSDGS(서열번호 75); 29) HEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호 76); 및 30) SLSPGK(서열번호 77)를 포함한다.
몇몇 경우에, 표적 면역글로불린은 위에서 기재된 바와 같이 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되는데, 여기서 변형은 1개 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 설파타제 모티프는 하기 중 하나 이상에 대응하는 IgG2 중쇄 불변 영역의 영역 내에 또는 이에 인접하여 위치된다: 1) 아미노산 1 내지 6; 2) 아미노산 13 내지 24; 3) 아미노산 33 내지 37; 4) 아미노산 43 내지 54; 5) 아미노산 58 내지 63; 6) 아미노산 69 내지 71; 7) 아미노산 78 내지 80; 8) 87 내지 89; 9) 아미노산 95 내지 96; 10) 114 내지 118; 11) 122 내지 126; 12) 134 내지 136; 13) 144 내지 152; 14) 159 내지 167; 15) 175 내지 176; 16) 184 내지 188; 17) 195 내지 197; 18) 204 내지 210; 19) 216 내지 224; 20) 231 내지 233; 21) 237 내지 241; 22) 252 내지 256; 23) 263 내지 269; 24) 273 내지 282; 25) 아미노산 299 내지 302; 여기서 아미노산 넘버링은 도 15b에 묘사된 바와 같은 서열번호 44(인간 IgG2)에 제시된 아미노산 넘버링을 기준으로 한다.
IgG2 중쇄의 예시적인 표면-접근 가능한 루프 영역은 1) ASTKGP(서열번호 78); 2) PCSRSTSESTAA(서열번호 79); 3) FPEPV(서열번호 80); 4) SGALTSGVHTFP(서열번호 81); 5) QSSGLY(서열번호 82); 6) VTV; 7) TQT; 8) HKP; 9) DK; 10) VAGPS(서열번호 83); 11) FPPKP(서열번호 84); 12) RTP; 13) DVSHEDPEV(서열번호 85); 14) DGVEVHNAK(서열번호 86); 15) FN; 16) VLTVV(서열번호 87); 17) GKE; 18) NKGLPAP(서열번호 88); 19) SKTKGQPRE(서열번호 89); 20) PPS; 21) MTKNQ(서열번호 90); 22) YPSDI(서열번호 91); 23) NGQPENN(서열번호 92); 24) TPPMLDSDGS(서열번호 93); 25) GNVF(서열번호 94); 및 26) HEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호 95)를 포함한다.
몇몇 경우에, 표적 면역글로불린은 위에서 기재된 바와 같이 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되는데, 여기서 변형은 1개 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 설파타제 모티프는 하기 중 하나 이상에 대응하는 IgG3 중쇄 불변 영역의 영역 내에 또는 이에 인접하여 위치된다: 1) 아미노산 1 내지 6; 2) 아미노산 13 내지 22; 3) 아미노산 33 내지 37; 4) 아미노산 43 내지 61; 5) 아미노산 71; 6) 아미노산 78 내지 80; 7) 87 내지 91; 8) 아미노산 97 내지 106; 9) 111 내지 115; 10) 147 내지 167; 11) 173 내지 177; 16) 185 내지 187; 13) 195 내지 203; 14) 210 내지 218; 15) 226 내지 227; 16) 238 내지 239; 17) 246 내지 248; 18) 255 내지 261; 19) 267 내지 275; 20) 282 내지 291; 21) 아미노산 303 내지 307; 22) 아미노산 313 내지 320; 23) 아미노산 324 내지 333; 24) 아미노산 350 내지 352; 25) 아미노산 359 내지 365; 및 26) 아미노산 372 내지 377; 여기서 아미노산 넘버링은 도 15b에 묘사된 바와 같은 서열번호 45(인간 IgG3)에 제시된 아미노산 넘버링을 기준으로 한다.
IgG3 중쇄의 예시적인 표면-접근 가능한 루프 영역은 1) ASTKGP(서열번호 96); 2) PCSRSTSGGT(서열번호 97); 3) FPEPV(서열번호 98); 4) SGALTSGVHTFPAVLQSSG(서열번호 99); 5) V; 6) TQT; 7) HKPSN(서열번호 100); 8) RVELKTPLGD(서열번호 101); 9) CPRCPKP(서열번호 102); 10) PKSCDTPPPCPRCPAPELLGG(서열번호 103); 11) FPPKP(서열번호 104); 12) RTP; 13) DVSHEDPEV(서열번호 105); 14) DGVEVHNAK(서열번호 106); 15) YN; 16) VL; 17) GKE; 18) NKALPAP(서열번호 107); 19) SKTKGQPRE(서열번호 108); 20) PPSREEMTKN(서열번호 109); 21) YPSDI(서열번호 110); 22) SSGQPENN(서열번호 111); 23) TPPMLDSDGS(서열번호 112); 24) GNI; 25) HEALHNR(서열번호 113); 및 26) SLSPGK(서열번호 114)를 포함한다.
몇몇 경우에, 표적 면역글로불린은 위에서 기재된 바와 같이 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되는데, 여기서 변형은 1개 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 설파타제 모티프는 하기 중 하나 이상에 대응하는 IgG4 중쇄 불변 영역의 영역 내에 또는 이에 인접하여 위치된다: 1) 아미노산 1 내지 5; 2) 아미노산 12 내지 23; 3) 아미노산 32 내지 36; 4) 아미노산 42 내지 53; 5) 아미노산 57 내지 62; 6) 아미노산 68 내지 70; 7) 아미노산 77 내지 79; 8) 아미노산 86 내지 88; 9) 아미노산 94 내지 95; 10) 아미노산 101 내지 102; 11) 아미노산 108 내지 118; 12) 아미노산 122 내지 126; 13) 아미노산 134 내지 136; 14) 아미노산 144 내지 152; 15) 아미노산 159 내지 167; 16) 아미노산 175 내지 176; 17) 아미노산 185 내지 186; 18) 아미노산 196 내지 198; 19) 아미노산 205 내지 211; 20) 아미노산 217 내지 226; 21) 아미노산 232 내지 241; 22) 아미노산 253 내지 257; 23) 아미노산 264 내지 265; 24) 269 내지 270; 25) 아미노산 274 내지 283; 26) 아미노산 300 내지 303; 27) 아미노산 399 내지 417; 여기서 아미노산 넘버링은 도 15b에 묘사된 바와 같은 서열번호 46(인간 IgG4)에 제시된 아미노산 넘버링을 기준으로 한다.
IgG4 중쇄의 예시적인 표면-접근 가능한 루프 영역은 1) STKGP(서열번호 115); 2) PCSRSTSESTAA(서열번호 116); 3) FPEPV(서열번호 117); 4) SGALTSGVHTFP(서열번호 118); 5) QSSGLY(서열번호 119); 6) VTV; 7) TKT; 8) HKP; 9) DK; 10) YG; 11) CPAPEFLGGPS(서열번호 120); 12) FPPKP(서열번호 121); 13) RTP; 14) DVSQEDPEV(서열번호 122); 15) DGVEVHNAK(서열번호 123); 16) FN; 17) VL; 18) GKE; 19) NKGLPSS(서열번호 124); 20) SKAKGQPREP(서열번호 125); 21) PPSQEEMTKN(서열번호 126); 22) YPSDI(서열번호 127); 23) NG; 24) NN; 25) TPPVLDSDGS(서열번호 128); 26) GNVF(서열번호 129); 및 27) HEALHNHYTQKSLSLSLGK(서열번호 130)를 포함한다.
몇몇 경우에, 표적 면역글로불린은 위에서 기재된 바와 같이 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되는데, 여기서 변형은 1개 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 설파타제 모티프는 하기 중 하나 이상에 대응하는 Ig 중쇄 불변 영역의 영역 내에 또는 이에 인접하여 위치된다: 1) 아미노산 1 내지 13; 2) 아미노산 17 내지 21; 3) 아미노산 28 내지 32; 4) 아미노산 44 내지 54; 5) 아미노산 60 내지 66; 6) 아미노산 73 내지 76; 7) 아미노산 80 내지 82; 8) 아미노산 90 내지 91; 9) 아미노산 123 내지 125; 10) 아미노산 130 내지 133; 11) 아미노산 138 내지 142; 12) 아미노산 151 내지 158; 13) 아미노산 165 내지 174; 14) 아미노산 181 내지 184; 15) 아미노산 192 내지 195; 16) 아미노산 199; 17) 아미노산 209 내지 210; 18) 아미노산 222 내지 245; 19) 아미노산 252 내지 256; 20) 아미노산 266 내지 276; 21) 아미노산 293 내지 294; 22) 아미노산 301 내지 304; 23) 아미노산 317 내지 320; 24) 아미노산 329 내지 353; 여기서 아미노산 넘버링은 도 15b에 묘사된 바와 같은 서열번호 47(인간 IgA)에 제시된 아미노산 넘버링을 기준으로 한다.
IgA 중쇄의 예시적인 표면-접근 가능한 루프 영역은 1) ASPTSPKVFPLSL(서열번호 131); 2) QPDGN(서열번호 132); 3) VQGFFPQEPL(서열번호 133); 4) SGQGVTARNFP(서열번호 134); 5) SGDLYTT(서열번호 135); 6) PATQ(서열번호 136); 7) GKS; 8) YT; 9) CHP; 10) HRPA(서열번호 137); 11) LLGSE(서열번호 138); 12) GLRDASGV(서열번호 139); 13) SSGKSAVQGP(서열번호 140); 14) GCYS(서열번호 141); 15) CAEP(서열번호 142); 16) PE; 17) SGNTFRPEVHLLPPPSEELALNEL(서열번호 143); 18) ARGFS(서열번호 144); 19) QGSQELPREKY(서열번호 145); 20) AV; 21) AAED(서열번호 146); 22) HEAL(서열번호 147); 및 23) IDRLAGKPTHVNVSVVMAEVDGTCY(서열번호 148)를 포함한다.
설파타제 모티프는 Ig 중쇄의 이러한 변형 부위의 이들 아미노산 서열 중 하나 이상 내에 또는 이에 인접하여 제공될 수 있다. 예를 들어, Ig 중쇄 폴리펩타이드는 이들 변형 부위에 대해서 인접하여 N-말단에 그리고/또는 인접하여 C-말단에 설파타제 모티프를 제공하도록 이들 아미노산 서열의 하나 이상에서 변형될 수 있다(예컨대, 여기서 변형은 1개 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다). 대안적으로 또는 부가적으로, Ig 중쇄 폴리펩타이드는 Ig 중쇄 변형 부위의 임의의 2개의 잔기 사이에 설파타제 모티프를 제공하도록 이들 아미노산 서열의 하나 이상에서 변형될 수 있다(예컨대, 여기서 변형은 1개 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다). 몇몇 실시형태에서, Ig 중쇄 폴리펩타이드는 2개의 모티프를 포함하도록 변형될 수 있는데, 이들은 서로 인접할 수 있거나, 또는 1, 2, 3, 4개 이상(예컨대, 약 1 내지 약 25, 약 25 내지 약 50, 또는 약 50 내지 약 100개, 또는 그 이상의 아미노산에 의해 분리될 수 있다. 대안적으로 또는 부가적으로, 천연 아미노산 서열이 설파타제 모티프 서열의 1개 이상의 아미노산 잔기를 제공하는 경우, Ig 중쇄 폴리펩타이드 아미노산 서열의 변형 부위의 선택된 아미노산 잔기는 변형 부위에 설파타제 모티프를 제공하도록 변형될 수 있다(예컨대, 여기서 변형은 1개 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다).
이와 같이 해서, 표면-접근 가능한 루프 영역의 아미노산 서열은 설파타제 모티프를 제공하도록 변형될 수 있는데, 여기서 변형은 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함할 수 있다. 예를 들어, 변형이 CH1 도메인에 있을 경우, 표면-접근 가능한 루프 영역은 아미노산 서열 NSGALTSG(서열번호 149)를 가질 수 있고, 알데하이드-태그 부착된 서열은, 예컨대, NSGALCTPSRG(서열번호 150)일 수 있는데, 예컨대, 여기서 NSGALTSG(서열번호 151) 서열의 "TS" 잔기는 설파타제 모티프가 서열 LCTPSR(서열번호 153)을 갖도록 "CTPSR"(서열번호 152)로 대체된다. 또 다른 예로서, 변형이 CH2 도메인에 있을 경우, 표면-접근 가능한 루프 영역은 아미노산 서열 NKALPAP(서열번호 154)를 가질 수 있고, 알데하이드-태그 부착된 서열은, 예컨대, NLCTPSRAP(서열번호 155)일 수 있고, 예컨대, NKALPAP(서열번호 156) 서열의 "KAL" 잔기는 설파타제 모티프가 서열 LCTPSR(서열번호 158)을 갖도록 "LCTPSR"(서열번호 157)로 대체된다. 또 다른 예로서, 변형이 CH2/CH3 도메인에 있을 경우, 표면-접근 가능한 루프 영역은 아미노산 서열 KAKGQPR(서열번호 159)을 가질 수 있고, 알데하이드-태그 부착된 서열은, 예컨대, KAKGLCTPSR(서열번호 160)일 수 있고, 예컨대, KAKGQPR(서열번호 161) 서열의 "GQP" 잔기는 설파타제 모티프가 서열 LCTPSR(서열번호 163)을 갖도록 "LCTPS"(서열번호 162)로 대체된다.
위에서 언급된 바와 같이, 단리된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 Ig 폴리펩타이드는 위에서 기재된 바와 같은 설파타제 모티프를 포함하도록 변형된 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있는데, 여기서 설파타제 모티프는 Ig 폴리펩타이드 경쇄 불변 영역의 표면-접근 가능한 루프 영역에 또는 이에 인접하여 위치된다.
몇몇 경우에, 표적 면역글로불린은 위에서 기재된 바와 같이 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되는데, 여기서 변형은 1개 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 설파타제 모티프는 하기 중 하나 이상에 대응하는 Ig 경쇄 불변 영역의 영역 내에 또는 이에 인접하여 위치된다: 1) 아미노산 130 내지 135; 2) 아미노산 141 내지 143; 3) 아미노산 150; 4) 아미노산 162 내지 166; 5) 아미노산 163 내지 166; 6) 아미노산 173 내지 180; 7) 아미노산 186 내지 194; 8) 아미노산 211 내지 212; 9) 아미노산 220 내지 225; 10) 아미노산 233 내지 236; 여기서 아미노산 넘버링은 도 15c에 묘사된 바와 같은 인간 카파 경쇄의 아미노산 넘버링을 기준으로 한다. 몇몇 경우에, 표적 면역글로불린은 위에서 기재된 바와 같이 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되는데, 여기서 변형은 1개 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 설파타제 모티프는 하기 중 하나 이상에 대응하는 Ig 경쇄 불변 영역의 영역 내에 또는 이에 인접하여 위치된다: 1) 아미노산 1 내지 6; 2) 아미노산 12 내지 14; 3) 아미노산 21; 4) 아미노산 33 내지 37; 5) 아미노산 34 내지 37; 6) 아미노산 44 내지 51; 7) 아미노산 57 내지 65; 8) 아미노산 83 내지 83; 9) 아미노산 91 내지 96; 10) 아미노산 104 내지 107; 여기서 아미노산 넘버링은 도 15c에 표시된 바와 같은 서열번호 48(인간 카파 경쇄)을 기준으로 한다.
Ig 경쇄(예컨대, 인간 카파 경쇄)의 예시적인 표면-접근 가능한 루프 영역은 1) RTVAAP(서열번호 164); 2) PPS; 3) Gly(예컨대, 도 15c에 묘사된 인간 카파 경쇄 서열의 150번 위치에서의 Gly 참조); 4) YPREA(서열번호 165); 5) PREA(서열번호 166); 6) DNALQSGN(서열번호 167); 7) TEQDSKDST(서열번호 168); 8) HK; 9) HQGLSS(서열번호 169); 및 10) RGEC(서열번호 170)를 포함한다.
Ig 람다 경쇄의 예시적인 표면-접근 가능한 루프 영역은 QPKAAP(서열번호 171), PPS, NK, DFYPGAV(서열번호 172), DSSPVKAG(서열번호 173), TTP, SN, HKS, EG, 및 APTECS(서열번호 174)를 포함한다.
몇몇 경우에, 표적 면역글로불린은 위에서 기재된 바와 같은 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되는데, 여기서 변형은 1개 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 설파타제 모티프는 하기 중 하나 이상에 대응하는 래트 Ig 경쇄 불변 영역의 영역 내에 또는 이에 인접하여 위치된다: 1) 아미노산 1 내지 6; 2) 아미노산 12 내지 14; 3) 아미노산 121 내지 22; 4) 아미노산 31 내지 37; 5) 아미노산 44 내지 51; 6) 아미노산 55 내지 57; 7) 아미노산 61 내지 62; 8) 아미노산 81 내지 83; 9) 아미노산 91 내지 92; 10) 아미노산 102 내지 105; 여기서 아미노산 넘버링은 도 15c에 묘사된 바와 같은 서열번호 52에 제시된 바와 같은 래트 경쇄의 아미노산 넘버링을 기준으로 한다.
몇몇 경우에, 설파타제 모티프는 항-CD37 중쇄 불변 영역의 CH1 영역에 도입된다. 몇몇 경우에, 설파타제 모티프는 항-CD37 중쇄의 C-말단에 또는 그 부근에(예컨대, 이의 1 내지 10개의 아미노산 내에) 도입된다. 몇몇 경우에, 설파타제 모티프는 경쇄 불변 영역에 도입된다.
몇몇 경우에, 설파타제 모티프는 항-CD37 중쇄 불변 영역의 CH1 영역에, 예컨대, IgG1 중쇄 아미노산 서열의 아미노산 121 내지 219 내에 도입된다. 예를 들어, 몇몇 경우에, 설파타제 모티프는 아미노산 서열: ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVE(서열번호 175)에 도입된다. 예를 들어, 이들 실시형태의 몇몇에 있어서, 아미노산 서열 GALTSGVH(서열번호 176)는 GALCTPSRGVH(서열번호 177)로 변형되는데, 여기서 설파타제 모티프는 LCTPSR(서열번호 178)이다.
몇몇 경우에, 설파타제 모티프는 항-CD37 중쇄의 C-말단에 또는 그 부근에 도입되고, 예컨대, 설파타제 모티프는 항-CD37 중쇄의 1개의 아미노산, 2개의 아미노산(aa), 3개의 aa, 4개의 aa, 5개의 aa, 6개의 aa, 7개의 aa, 8개의 aa, 9개의 aa, 또는 10개의 aa C-말단에 도입된다. 하나의 비제한적인 예로서, 항-CD37 중쇄의 C-말단 라이신 잔기는 아미노산 서열 SLCTPSRGS(서열번호 179)로 대체될 수 있다.
몇몇 경우에, 설파타제 모티프는 항-CD37 항체의 경쇄의 불변 영역에 도입된다. 하나의 비제한적인 예로서, 몇몇 경우에, 설파타제 모티프는 항-CD37 항체의 경쇄의 불변 영역에 도입되는데, 여기서 설파타제 모티프는 KVDNAL(서열번호 180)에 대해서 C-말단이고/이거나, QSGNSQ(서열번호 181)에 대해서 N-말단이다. 예를 들어, 몇몇 경우에, 설파타제 모티프는 LCTPSR(서열번호 182)이고, 항-CD37 경쇄는 아미노산 서열 KVDNALLCTPSRQSGNSQ(서열번호 183)를 포함한다.
폴리펩타이드에의 접합을 위한 약물
본 개시내용은 약물-폴리펩타이드 접합체를 제공한다. 약물의 예는 소분자 약물, 예컨대, 암 화학요법제를 포함한다. 예를 들어, 폴리펩타이드가 종양 세포에 대한 특이성을 갖는 항체(또는 이의 단편)인 경우, 항체는 변형된 아미노산을 포함하도록 본 명세서에 기재된 것과 같이 변형될 수 있고, 이것은 계속해서 암 화학요법제, 예컨대, 미세소관 제제에 접합될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 약물은 항증식 활성을 가지는 미세소관 작용제, 예컨대, 메이탄시노이드이다. 소정의 실시형태에서, 약물은 하기 구조를 갖는 메이탄시노이드이다:
Figure pct00039
여기서
Figure pct00040
는 화학식 (I)에서 메이탄시노이드와 링커 L 사이의 부착점을 나타낸다. "부착점"은
Figure pct00041
기호는 화학식 (I)에서 메이탄시노이드의 N과 링커 L 사이의 결합을 나타내는 것을 의미한다. 예를 들어, 화학식 (I)에서, W1은 메이탄시노이드, 예컨대, 상기 구조의 메이탄시노이드이고, 여기서
Figure pct00042
는 메이탄시노이드와 링커 L 사이의 부착점을 나타낸다. 몇몇 경우에, 위에서 나타낸 메이탄시노이드 구조는 데아실메이탄신으로 지칭될 수 있다.
위에서 기재된 바와 같이, 소정의 실시형태에서, L은 화학식 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-로 기재된 링커이되, 여기서 L1, L2, L3 및 L4는 각각 독립적으로 링커 단위이다. 소정의 실시형태에서, L1은 (예컨대, 상기 화학식 (I)에 나타낸 바와 같은) 커플링 모이어티, 예컨대, 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티에 부착된다. 소정의 실시형태에서, L2는, 존재한다면, W1(메이탄시노이드)에 부착된다. 소정의 실시형태에서, L3은, 존재한다면, W1(메이탄시노이드)에 부착된다. 소정의 실시형태에서, L4는, 존재한다면, W1(메이탄시노이드)에 부착된다.
위에서 기재된 바와 같이, 소정의 실시형태에서, 링커 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-는 화학식 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-로 기재되고, 여기서 a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, a, b, c 및 d의 합계는 1 내지 4이다. 소정의 실시형태에서, 위에서 기재된 바와 같이, L1은 (예컨대, 상기 화학식 (I)에 나타낸 바와 같은) 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티에 부착된다. 이와 같이, 소정의 실시형태에서, T1은 (예컨대, 상기 화학식 (I)에 나타낸 바와 같은) 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티에 부착된다. 소정의 실시형태에서, V1은 W1(메이탄시노이드)에 부착된다. 소정의 실시형태에서, 위에서 기재된 바와 같이, L2는, 존재한다면, W1(메이탄시노이드)에 부착된다. 이와 같이, 소정의 실시형태에서, T2는, 존재한다면, W1(메이탄시노이드)에 부착되거나, 또는 V2는, 존재한다면, W1(메이탄시노이드)에 부착된다. 소정의 실시형태에서, 위에서 기재된 바와 같이, L3은, 존재한다면, W1(메이탄시노이드)에 부착된다. 이와 같이, 소정의 실시형태에서, T3은, 존재한다면, W1(메이탄시노이드)에 부착되거나, 또는 V3은, 존재한다면, W1(메이탄시노이드)에 부착된다. 소정의 실시형태에서, 위에서 기재된 바와 같이, L4는, 존재한다면, W1(메이탄시노이드)에 부착된다. 이와 같이, 소정의 실시형태에서, T4는, 존재한다면, W1(메이탄시노이드)에 부착되거나, 또는 V4는, 존재한다면, W1(메이탄시노이드)에 부착된다.
본 개시내용의 실시형태는 폴리펩타이드(예컨대, 항-CD37 항체)가 1개 이상의 약물 모이어티(예컨대, 메이탄시노이드), 예컨대, 2개의 약물 모이어티, 3개의 약물 모이어티, 4개의 약물 모이어티, 5개의 약물 모이어티, 6개의 약물 모이어티, 7개의 약물 모이어티, 8개의 약물 모이어티, 9개의 약물 모이어티, 또는 10개 이상의 약물 모이어티에 접합된 접합체이다. 약물 모이어티는, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 폴리펩타이드의 하나 이상의 부위에서 폴리펩타이드에 접합될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 접합체는 0.1 내지 10, 또는 0.5 내지 10, 또는 1 내지 10, 예컨대, 1 내지 9, 또는 1 내지 8, 또는 1 내지 7, 또는 1 내지 6, 또는 1 내지 5, 또는 1 내지 4, 또는 1 내지 3, 또는 1 내지 2의 범위의 평균 약물-대-항체 비(DAR)(몰비)를 갖는다. 소정의 실시형태에서, 접합체는 1 내지 2, 예컨대, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9 또는 2의 평균 DAR을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 접합체는 1.5 내지 2의 평균 DAR을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 접합체는 1.75 내지 1.85의 평균 DAR을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 접합체는 1.8의 평균 DAR을 갖는다. 평균은 산술적 평균을 의미한다.
제형
본 개시내용의 접합체는 다양한 상이한 방법으로 제형화될 수 있다. 일반적으로, 접합체가 폴리펩타이드-약물 접합체인 경우에, 접합체는 폴리펩타이드에 접합된 약물, 처리될 병태 및 사용될 투여 경로와 부합하는 방식으로 제형화된다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용의 임의의 접합체 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
접합체(예컨대, 폴리펩타이드-약물 접합체)는 임의의 적합한 형태, 예컨대, 약제학적으로 허용 가능한 염의 형태로 제공될 수 있고, 임의의 적합한 투여 경로, 예컨대, 경구, 국소 또는 비경구 투여에 대해 제형될 수 있다. 접합체가 주사 가능한 액체로서 (예컨대, 정맥내로 투여되거나 또는 조직으로 직접 투여되는 실시형태들에서) 제공되는 경우, 접합체는 사용 준비가 되어 있는 투약 형태로서, 또는 복원 가능한 보관-안정한 분말 또는 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 부형제로 구성된 액체로서 제공될 수 있다.
접합체를 제형화하는 방법은 쉽게 활용할 수 있는 방법으로부터 적응될 수 있다. 예를 들어, 접합체는 치료적 유효량의 접합체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체(예컨대, 식염수)를 포함하는 약제학적 조성물로 제공될 수 있다. 약제학적 조성물은 선택적으로 다른 첨가제(예컨대, 완충제, 안정화제, 보존제 등)를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 제형은 포유류에 투여하기에 적합한데, 예컨대, 인간에 투여하기에 적합한 것들이다.
치료 방법
본 개시내용의 폴리펩타이드-약물 접합체는 모 약물(즉, 폴리펩타이드에 접합되기 전의 약물)의 투여에 의한 치료를 잘 받아들이는 대상체에서의 병태 또는 질환의 치료에 사용될 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 대상체에게 유효량의 본 개시내용의 임의의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다.
소정의 양상에서, 대상체에서 표적 부위에 약물을 전달하는 방법이 제공되되, 해당 방법은 대상체에게 본 개시내용의 임의의 접합체를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 투여는 대상체의 표적 부위에 접합체로부터 치료적 유효량의 약물을 방출시키는데 효과적이다.
"치료"는 적어도 숙주에 영향을 미치는 병태와 연관된 증상의 개선이 이루어지는 것을 의미하며, 여기서 개선은 적어도 치료 중인 병태와 연관된 파라미터, 예컨대, 증상의 정도의 저감을 나타내기 위해 넓은 의미로 사용된다. 그와 같이, 치료는 또한 병리적 병태, 또는 적어도 그것과 연관된 증상이 완전히 저해되어, 예컨대 발생하는 것이 예방되거나 중단되어, 예컨대 종결되어서, 더 이상 숙주가 그 병태로, 또는 그 병태를 특징으로 하는 적어도 증상으로 고생하지 않는 상황을 포함한다. 그러므로 치료는 (i) 임상적 증상이 발생하지 않도록 유발하는 것, 예컨대, 해로운 상태로의 질환 진행을 방지하는 것을 포함하여 예방, 즉 임상적 증상의 발생 위험을 감소시키는 것; (ii) 저해, 즉, 임상적 증상의 발생 또는 추가의 발달을 저지하는 것, 예컨대, 활성 질환을 경감시키거나 완전히 저해하는 것; 및/또는 (iii) 완화, 즉, 임상적 증상의 퇴행을 유발하는 것을 포함한다.
치료될 대상체는 치료를 필요로 하는 대상체일 수 있고, 치료될 숙주는 모 약물을 사용한 치료를 잘 받아들이는 숙주이다. 따라서, 다양한 대상체가 본 명세서에 개시된 폴리펩타이드-약물 접합체를 사용하여 치료를 받을 수 있다. 일반적으로, 그러한 대상체는 "포유류"이고, 인간이 관심 대상이다. 다른 대상체는 가정의 애완동물(예컨대, 개 및 고양이), 가축(예컨대, 소, 돼지, 염소, 말 등), 설치류(예컨대, 마우스, 기니아 피그 및 래트, 예컨대, 질환의 동물 모델에서와 같음)뿐만 아니라, 비-인간 영장류(예컨대, 침팬지, 및 원숭이)를 포함할 수 있다.
투여된 폴리펩타이드-약물 접합체의 양은 처음에 모 약물의 용량 및/또는 투여 처방을 기반으로 결정될 수 있다. 일반적으로, 폴리펩타이드-약물 접합체는 표적화된 전달 및/또는 결합된 약물의 향상된 혈청 반감기를 제공할 수 있고, 그러므로 투여 처방에서 적어도 하나의 감소된 용량 또는 감소된 투여를 제공할 수 있다. 그러므로, 폴리펩타이드-약물 접합체는 본 개시내용의 폴리펩타이드-약물 접합체에 접합되기 전의 모 약물에 비해 투여 처방에서 감소된 용량 및/또는 감소된 투여를 제공할 수 있다.
나아가, 위에서 언급된 바와 같이, 폴리펩타이드-약물 접합체는 제어된 화학양론의 약물 전달을 제공할 수 있기 때문에, 폴리펩타이드-약물 접합체의 투여량은 폴리펩타이드-약물 접합체 기준당 제공된 약물 분자의 수를 기반으로 계산될 수 있다.
일부 실시형태에서, 다회 용량의 폴리펩타이드-약물 접합체가 투여된다. 폴리펩타이드-약물 접합체의 투여 빈도는 다양한 요인, 예컨대, 증상의 중증도, 대상체의 병태 등 중의 임의의 요인에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드-약물 접합체는 1개월에 1회, 1개월에 2회, 1개월에 3회, 격주마다, 주 1회(qwk), 주 2회, 주 3회, 주 4회, 주 5회, 주 6회, 격일, 매일(qd/od), 1일 2회(bds/bid) 또는 1일 3회(tds/tid) 등으로 투여된다.
암을 치료하는 방법
본 개시내용은 암을 가진 개체에게 본 개시내용의 접합체를 전달하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 암종, 육종, 백혈병 및 림프종을 비롯하여 광범위한 암을 치료하는 데 유용하다. 암의 맥락에서, 용어 "치료하는"은 고형 종양의 성장을 저감시키는 것, 암 세포의 복제를 저해하는 것, 전체 종양 부담을 저감시키는 것 및 암과 연관된 하나 이상의 증상을 개선하는 것 중 하나 이상(예컨대, 각각)을 포함한다.
본 방법을 사용하여 치료될 수 있는 암종은, 식도 암종, 간세포 암종, 기저 세포 암종(피부암의 형태), 편평 세포 암종(다양한 조직), 이행 세포 암종(방광의 악성 신생물)을 포함하여 방광 암종, 기관지원성 암종, 결장 암종, 대장 암종, 위 암종, 폐의 소세포 암종 및 비-소세포 암종을 포함하여 폐 암종, 부신피질 암종, 갑상선 암종, 췌장 암종, 유방 암종, 난소 암종, 전립선 암종, 선암종, 땀샘 암종, 피지선 암종, 유두 암종, 유두 선암종, 낭샘암종, 수질 암종, 신장 세포 암종, 관상피내 암종 또는 담관 암종, 융모막 암종, 정상피종, 배아 암종, 빌름 종양, 자궁경부 암종, 자궁 암종, 고환 암종, 골원성 암종, 상피 암종, 및 비인두 암종 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 방법을 사용하여 치료될 수 있는 육종은, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 척삭종, 골원성 육종, 골육종, 혈관육종, 내피육종, 림프관육종, 림프관 내피 육종, 활막육종, 중피종, 유윙 육종, 평활근육종, 횡문근 육종, 및 다른 연조직 육종들을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 방법을 사용하여 치료될 수 있는 다른 고형 종양은, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청각 신경종, 핍지교세포종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종 및 망막모세포종을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 방법을 사용하여 치료될 수 있는 백혈병은, a) 만성 골수증식성 증후군(다능성 조혈 줄기 세포의 신생물 장애); b) 급성 골수성 백혈병(제한된 계통 잠재성의 다능성 조혈 줄기 세포 또는 조혈 세포의 신생 세포 변형); c) 만성 림프구성 백혈병(CLL; 면역학적으로 미성숙하고 기능적으로 무능한 작은 림프구들의 클론성 증식), 예를 들어, B-세포 CLL, T-세포 CLL 전림프구성 백혈병, 및 털세포 백혈병; 및 d) 급성 림프모세포성 백혈병(림프모세포의 축적이 특징임)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 방법을 사용하여 치료될 수 있는 림프종은, B-세포 림프종(버킷 림프종); 호지킨 림프종; 비호지킨 B-세포 림프종; 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
소정의 양상에서, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공되되, 이러한 방법은 대상체에게 본 개시내용의 접합체 중 임의의 것을 포함하는 치료적 유효량의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 투여는 대상체에서 암을 치료하는데 효과적이다. 몇몇 실시형태에서, 암은 혈액 악성종양이다. 관심 혈액 악성종양은 악성 B 세포를 특징으로 하는 혈액 악성종양을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 악성 B 세포를 특징으로 하는 혈액 악성종양의 비제한적인 예는 백혈병(예컨대, 만성 림프구성 백혈병(CLL)) 및 림프종(예컨대, 비호지킨 림프종(NHL))을 포함한다. 림프종이 NHL인 경우, 소정의 양상에서, NHL은 재발성 및/또는 난치성 비호지킨 림프종이다.
실시예
다음의 실시예는 본 발명을 만들고 사용하는 방법의 완전한 개시 및 설명을 당업자에게 제공하기 위해 제시되고, 본 발명자들이 그들의 발명으로서 간주하는 것의 범주를 제한하려 하거나 본 발명자들이 하기의 실험이 그들이 수행한 전부이거나 유일한 실험인 것을 나타내기 위해 의도한 것이 아니다. 사용된 숫자(예컨대, 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위한 노력을 기울였지만 일부 실험적 오류 및 편차가 해명되어야 한다. 달리 표시되지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 중량 평균 분자량이며, 온도는 섭씨 온도이고, 압력은 대기압이거나 거의 대기압이다. "평균"은 산술 평균을 의미한다. 표준 약어가 사용될 수 있는데, 예컨대 bp, 염기쌍(들); kb, 킬로염기쌍(들); pl, 피코리터(들); s 또는 sec, 제2(들); min, 분(들); h 또는 hr, 시간(들); aa, 아미노산(들); kb, 킬로염기(들); bp, 염기쌍(들); nt, 뉴클레오타이드(들); i.m., 근육내(로); i.p., 복강내(로); s.c., 피하(로); 등이다.
일반적인 합성 과정
개시된 화합물을 합성하기에 유용한 통상적으로 공지된 화학적 합성 반응식 및 조건을 제공하는 많은 일반적인 참고문헌이 이용될 수 있다(예컨대, 문헌[Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, Fifth Edition, Wiley-Interscience, 2001; 또는 Vogel, A Textbook of Practical Organic Chemistry, Including Qualitative Organic Analysis, Fourth Edition, New York: Longman, 1978] 참조).
본 명세서에 기재된 화합물은 크로마토그래피, 예컨대, HPLC, 분취용 박막 크로마토그래피, 플래시 칼럼 크로마토그래피 및 이온 교환 크로마토그래피를 포함하여, 기술분야에 공지되어 있는 임의의 정제 프로토콜에 의해 정제될 수 있다. 이온 수지뿐만 아니라 정상 상 및 역상을 포함하여, 임의의 적합한 정지상이 사용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 개시된 화합물은 실리카겔 및/또는 알루미나 크로마토그래피를 통해 정제된다. 예컨대, 문헌[Introduction to Modern Liquid Chromatography, 2nd Edition, ed. L. R. Snyder and J. J. Kirkland, John Wiley and Sons, 1979; 및 Thin Layer Chromatography, ed E. Stahl, Springer-Verlag, New York, 1969] 참조.
본 화합물의 제조 과정들 중 어느 과정 중에, 관련된 임의의 화합물 상에서 민감한 또는 반응성 기들을 보호하는 것이 필요하고/하거나 바람직할 수 있다. 이것은 표준 작업, 예컨대, 문헌[J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London and New York 1973, T. W. Greene and P. G. M. Wuts , "Protective Groups in Organic Synthesis", Third edition, Wiley, New York 1999, "The Peptides"; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981, "Methoden der organischen Chemie", Houben-Weyl, 4th edition, Vol. 15/l, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, H.-D. Jakubke and H. Jescheit, "Aminosauren, Peotide, Proteine", Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982, 및/또는 Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide and Derivate", Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974]에 기재된 것과 같이 종래의 보호기에 의해 이루어질 수 있다. 보호기는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 편리한 후속 단계에서 제거될 수 있다.
본 화합물들은 상업적으로 입수 가능한 출발 물질 및/또는 종래의 합성 방법에 의해 제조된 출발 물질을 사용하여 다양한 상이한 합성 경로를 통해 합성될 수 있다. 본 명세서에 개시된 화합물을 합성하기 위해 사용될 수 있는 합성 경로의 다양한 예는 하기 반응식에 기술된다.
실시예 1
4-아미노-피페리딘(4AP)기를 함유하는 링커를 하기 나타낸 반응식 1에 따라 합성하였다.
반응식 1
Figure pct00043
(9 H -플루오렌-9-일)메틸 4-옥소피페리딘-1-카복실레이트(200)의 합성
자기 교반 막대를 수용하는 100㎖의 둥근 바닥 플라스크에 피페리딘-4-온 염산염 일수화물(1.53g, 10 m㏖), 염화 Fmoc(2.58g, 10 m㏖), 탄산나트륨(3.18g, 30 m㏖), 다이옥산(20㎖) 및 물(2㎖)을 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 EtOAc(100㎖)로 희석시키고 물(1×100㎖)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 얻어진 물질을 진공 건조시켜서 화합물 200을 백색 고체로서 수득하였다(3.05g, 95% 수율).
1H NMR (CDCl3) δ 7.78 (d, 2H, J = 7.6), 7.59 (d, 2H, J = 7.2), 7.43 (t, 2H, J = 7.2), 7.37 (t, 2H, J = 7.2), 4.60 (d, 2H, J = 6.0), 4.28 (t, 2H, J = 6.0), 3.72 (br, 2H), 3.63 (br, 2H), 2.39 (br, 2H), 2.28 (br, 2H).
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C20H20NO3에 대한 계산값 322.4; 실측값 322.2.
(9 H -플루오렌-9-일)메틸 4-((2-(2-(3-( tert -부톡시)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)아미노)피페리딘-1-카복실레이트(201)의 합성
자기 교반 막대를 수용하는 건조된 신틸레이션 바이알에 피페리딘온 200(642㎎, 2.0 m㏖), H2N-PEG2-CO2t-Bu(560㎎, 2.4 m㏖), 4Å 분자체(활성화 분말, 500㎎) 및 1,2-다이클로로에탄(5㎖)을 첨가하였다. 이 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물에 나트륨 트라이아세톡시보로하이드라이드(845㎎, 4.0 m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 5일 동안 실온에서 교반하였다. 얻어진 혼합물을 EtOAc로 희석시켰다. 유기층을 포화 NaHCO3(1×50㎖) 및 염수(1×50㎖)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과한 후, 감압하에 농축시켜 화합물 201을 오일로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 계속 사용하였다.
13-(1-(((9 H -플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)피페리딘-4-일)-2,2-다이메틸-4,14-다이옥소-3,7,10-트라이옥사-13-아자헵타데칸-17-오산(202)의 합성
자기 교반 막대를 수용하는 건조된 신틸레이션 바이알에 이전 단계로부터의 N--Fmoc-피페리딘-4-아미노-PEG2-CO2t-Bu(201), 무수석신산(270㎎, 2.7 m㏖), 및 다이클로로메탄(5㎖)을 첨가하였다. 이 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc와 포화 NaHCO3 간에 분배시켰다. 수성 층을 EtOAc(3×)로 추출하였다. 수성 층을 pH가 대략 3이 될 때까지 HCl(1M)로 산성화하였다. 수성 층을 DCM으로 추출하였다(3×). 조합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과한 후, 감압하에 농축시켰다. 반응 혼합물을 C18 플래시 크로마토그래피(0.1% 아세트산이 첨가된 10 내지 100% MeCN/물을 용리)에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 감압하에 농축시킨 후 톨루엔(3×50㎖)으로 공비혼합시켜 잔류하는 아세트산을 제거하여 534㎎(42%, 2 단계)의 화합물 202를 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (DMSO-d 6) δ 11.96 (br, 1H), 7.89 (d, 2H, J = 7.2), 7.63 (d, 2H, J = 7.2), 7.42 (t, 2H, J = 7.2), 7.34 (t, 2H, J = 7.2), 4.25-4.55 (m, 3H), 3.70-4.35 (m, 3H), 3.59 (t, 2H, J = 6.0), 3.39 (m, 5H), 3.35 (m, 3H), 3.21 (br, 1H), 2.79 (br, 2H), 2.57 (m, 2H), 2.42 (q, 4H, J = 6.0), 1.49 (br, 3H), 1.37 (s, 9H).
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C35H47N2O9에 대한 계산값 639.3; 실측값 639.2.
(2 S )-1-(((1 4 S ,1 6 S ,3 3 S ,2 R ,4 S ,10 E ,12 E ,14 R )-8 6 -클로로-1 4 -하이드록시-8 5 ,14-다이메톡시-3 3 ,2,7,10-테트라메틸-1 2 ,6-다이옥소-7-아자-1(6,4)-옥사진아나-3(2,3)-옥시라나-8(1,3)-벤젠아사이클로테트라데카판-10,12-다이엔-4-일)옥시)-2,3-다이메틸-1,4,7-트라이옥소-8-(피페리딘-4-일)-11,14-다이옥사-3,8-다이아자헵타데칸-17-오산(203)의 합성
2㎖의 DMF 중의 에스터 202(227㎎, 0.356 m㏖), 다이아이소프로필에틸아민(174㎕, 1.065 m㏖), N-데아세틸 메이탄신 124(231㎎, 0.355 m㏖)의 용액에 PyAOP(185㎎, 0.355 m㏖)를 첨가하였다. 이 용액을 30분 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물에 피페리딘(0.5㎖)을 첨가하고 추가로 20분 동안 교반하였다. 미정제 반응 혼합물을 0 내지 100% 구배의 아세토나이트릴:물을 사용하여 C18 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여 203.2㎎(55%, 2 단계)의 화합물 203을 제공하였다.
17-( tert -부틸) 1-((1 4 S ,1 6 S ,3 3 S ,2 R ,4 S ,10 E ,12 E ,14 R )-8 6 -클로로-1 4 -하이드록시-8 5 ,14-다이메톡시-3 3 ,2,7,10-테트라메틸-1 2 ,6-다이옥소-7-아자-1(6,4)-옥사진아나-3(2,3)-옥시라나-8(1,3)-벤젠아사이클로테트라데카판-10,12-다이엔-4-일) (2 S )-8-(1-(3-(2-((2-(((9 H -플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-다이메틸하이드라진일)메틸)-1 H -인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-2,3-다이메틸-4,7-다이옥소-11,14-다이옥사-3,8-다이아자헵타데칸다이오에이트(204)의 합성
1㎖의 DMF 중의 피페리딘 203(203.2㎎, 0.194 m㏖), 에스터 12(126.5㎎, 0.194 m㏖), 2,4,6-트라이메틸피리딘(77㎕, 0.582 m㏖), HOAT(26.4㎎, 0.194 m㏖) 용액을 30분 동안 교반하였다. 미정제 반응을 0.1% 폼산이 첨가된 아세토나이트릴:물의 0 내지 100% 구배를 사용하여 C18 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여 280.5㎎(97% 수율)의 화합물 204를 제공하였다.
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C81H106ClN8O18에 대한 계산값 1513.7; 실측값 1514.0.
(2 S )-8-(1-(3-(2-((2-(((9 H -플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-다이메틸하이드라진일)메틸)-1 H -인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-1-(((1 4 S ,1 6 S ,3 3 S ,2 R ,4 S ,10 E ,12 E ,14 R )-8 6 -클로로-1 4 -하이드록시-8 5 ,14-다이메톡시-3 3 ,2,7,10-테트라메틸-1 2 ,6-다이옥소-7-아자-1(6,4)-옥사진아나-3(2,3)-옥시라나-8(1,3)-벤젠아사이클로테트라데카판-10,12-다이엔-4-일)옥시)-2,3-다이메틸-1,4,7-트라이옥소-11,14-다이옥사-3,8-다이아자헵타데칸-17-오산 (205)의 합성
500㎕의 무수 DCM 중의 화합물 204(108㎎, 0.0714 m㏖)의 용액에 DCM 중의 1M SnCl4 용액 357㎕를 첨가하였다. 불균일한 혼합물을 1시간 동안 교반한 후 0.1% 폼산이 첨가된 아세토나이트릴:물의 0 내지 100% 구배를 사용하여 C18 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여 78.4㎎(75% 수율)의 화합물 205를 제공하였다.
MS (ESI) m/z: [M-H]- C77H96ClN8O18에 대한 계산값 1455.7; 실측값 1455.9.
실시예 2
4-아미노-피페리딘(4AP)기를 함유한 링커를 하기 나타낸 반응식 2에 따라 합성하였다.
반응식 2
Figure pct00044
tert -부틸 4-옥소피페리딘-1-카복실레이트(210)의 합성
자기 교반 막대를 수용하는 100㎖ 둥근 바닥 플라스크에 피페리딘-4-온 염산염 일수화물(1.53g, 10 m㏖), 다이-tert-부틸 다이카보네이트(2.39g, 11 m㏖), 탄산나트륨(1.22g, 11.5 m㏖), 다이옥산(10㎖) 및 물(1㎖)을 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(100㎖)로 희석시키고 EtOAc(3×100㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과한 후 감압하에 농축시켰다. 얻어진 물질을 진공 중에서 건조시켜서 1.74g(87%)의 화합물 210을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (CDCl3) δ 3.73 (t, 4H, J = 6.0), 2.46 (t, 4H, J = 6.0), 1.51 (s, 9H).
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C10H18NO3에 대한 계산값 200.3; 실측값 200.2.
tert -부틸 4-((2-(2-(3-( tert -부톡시)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)아미노)피페리딘-1-카복실레이트(211)의 합성
자기 교반 막대를 수용하는 건조된 신틸레이션 바이알에 tert-부틸 4-옥소피페리딘-1-카복실레이트(399㎎, 2 m㏖), H2N-PEG2-COOt-Bu(550㎎, 2.4 m㏖), 4Å 분자체(활성화 분말, 200㎎) 및 1,2-다이클로로에탄(5㎖)을 첨가하였다. 이 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물에 나트륨 트라이아세톡시보로하이드라이드(845㎎, 4 m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 3일 동안 실온에서 교반하였다. 얻어진 혼합물을 EtOAc와 포화 수성 NaHCO3 간에 분배시켰다. 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과한 후, 감압하에 농축시켜 850㎎의 화합물 211을 점성 오일로서 제공하였다.
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C21H41N2O6에 대한 계산값 417.3; 실측값 417.2.
13-(1-( tert -부톡시카보닐)피페리딘-4-일)-2,2-다이메틸-4,14-다이옥소-3,7,10-트라이옥사-13-아자헵타데칸-17-오산(212)의 합성
자기 교반 막대를 수용하는 건조된 신틸레이션 바이알에 tert-부틸 4-((2-(2-(3-(tert-부톡시)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)아미노)피페리딘-1-카복실레이트 211(220㎎, 0.5 m㏖), 무수석신산(55㎎, 0.55 m㏖), 4-(다이메틸아미노)피리딘(5㎎, 0.04 m㏖) 및 다이클로로메탄(3㎖)을 첨가하였다. 이 혼합물을 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 부분적으로 플래시 크로마토그래피(50 내지 100%의 EtOAc/헥산으로 용리)에 의해 정제하여 117㎎의 화합물 212를 투명한 오일로서 수득하였고, 이것을 추가의 특성규명 없이 계속 사용하였다.
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C25H45N2O9에 대한 계산값 517.6; 실측값 517.5.
17-( tert -부틸) 1-((1 4 S,1 6 S,3 3 S,2R,4S,10E,12E,14R)-8 6 -클로로-1 4 -하이드록시-8 5 ,14-다이메톡시-3 3 ,2,7,10-테트라메틸-1 2 ,6-다이옥소-7-아자-1(6,4)-옥사진아나-3(2,3)-옥시라나-8(1,3)-벤젠아사이클로테트라데카판-10,12-다이엔-4-일) (2S)-8-(1-(tert-부톡시카보닐)피페리딘-4-일)-2,3-다이메틸-4,7-다이옥소-11,14-다이옥사-3,8-다이아자헵타데칸다이오에이트(213)의 합성
자기 교반 막대를 수용하는 건조된 신틸레이션 바이알에 13-(1-(tert-부톡시카보닐)피페리딘-4-일)-2,2-다이메틸-4,14-다이옥소-3,7,10-트라이옥사-13-아자헵타데칸-17-오산 212(55㎎, 0.1 m㏖), N-데아실 메이탄신 124(65㎎, 0.1 m㏖), HATU(43㎎, 0.11 m㏖), DMF(1㎖) 및 다이클로로메탄(0.5㎖)을 첨가하였다. 이 혼합물을 8시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 바로 C18 플래시 크로마토그래피(5 내지 100%의 MeCN/물로 용리)에 의해 정제하여 18㎎(16%)의 화합물 213을 백색 필름으로서 얻었다.
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C57H87ClN5O17에 대한 계산값 1148.6; 실측값 1148.7.
(2S)-1-(((1 4 S,1 6 S,3 3 S,2R,4S,10E,12E,14R)-8 6 -클로로-1 4 -하이드록시-8 5 ,14-다이메톡시-3 3 ,2,7,10-테트라메틸-1 2 ,6-다이옥소-7-아자-1(6,4)-옥사진아나-3(2,3)-옥시라나-8(1,3)-벤젠아사이클로테트라데카판-10,12-다이엔-4-일)옥시)-2,3-다이메틸-1,4,7-트라이옥소-8-(피페리딘-4-일)-11,14-다이옥사-3,8-다이아자헵타데칸-17-오산 (214)의 합성
자기 교반 막대를 수용하는 건조된 신틸레이션 바이알에 메이탄시노이드 213(31㎎, 0.027 m㏖) 및 다이클로로메탄(1㎖)을 첨가하였다. 그 용액을 0℃로 냉각하고 사염화제이주석(IV)(다이클로로메탄 중 1.0M 용액, 0.3㎖, 0.3 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 0℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 바로 C18 플래시 크로마토그래피(5 내지 100%의 MeCN/물로 용리)에 의해 정제하여 16㎎(60%)의 화합물 214를 백색 고체로서 수득하였(16㎎, 60% 수율).
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C48H71ClN5O15에 대한 계산값 992.5; 실측값 992.6.
(2S)-8-(1-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-다이메틸하이드라진일)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-1-(((1 4 S,1 6 S,3 3 S,2R,4S,10E,12E,14R)-8 6 -클로로-1 4 -하이드록시-8 5 ,14-다이메톡시-3 3 ,2,7,10-테트라메틸-1 2 ,6-다이옥소-7-아자-1(6,4)-옥사진아나-3(2,3)-옥시라나-8(1,3)-벤젠아사이클로테트라데카판-10,12-다이엔-4-일)옥시)-2,3-다이메틸-1,4,7-트라이옥소-11,14-다이옥사-3,8-다이아자헵타데칸-17-오산(215)의 합성
자기 교반 막대를 수용하는 건조된 신틸레이션 바이알에 메이탄시노이드 214(16㎎, 0.016 m㏖), (9H-플루오렌-9-일)메틸 1,2-다이메틸-2-((1-(3-옥소-3-(퍼플루오로페녹시)프로필)-1H-인돌-2-일)메틸)하이드라진-1-카복실레이트(5)(13㎎, 0.02 m㏖), DIPEA(8㎕, 0.05 m㏖) 및 DMF(1㎖)을 첨가하였다. 그 용액을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 바로 C18 플래시 크로마토그래피(5 내지 100%의 MeCN/물로 용리)에 의해 정제하여 18㎎(77%)의 화합물 215를 백색 고체로서 수득하였다.
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C77H98ClN8O18에 대한 계산값 1457.7; 실측값 1457.9.
(2S)-1-(((1 4 S,1 6 S,3 3 S,2R,4S,10E,12E,14R)-8 6 -클로로-1 4 -하이드록시-8 5 ,14-다이메톡시-3 3 ,2,7,10-테트라메틸-1 2 ,6-다이옥소-7-아자-1(6,4)-옥사진아나-3(2,3)-옥시라나-8(1,3)-벤젠아사이클로테트라데카판-10,12-다이엔-4-일)옥시)-8-(1-(3-(2-((1,2-다이메틸하이드라진일)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-2,3-다이메틸-1,4,7-트라이옥소-11,14-다이옥사-3,8-다이아자헵타데칸-17-오산(216)의 합성
자기 교반 막대를 수용하는 건조된 신틸레이션 바이알에 메이탄시노이드 215(18㎎, 0.012 m㏖), 피페리딘(20㎕, 0.02 m㏖) 및 DMF(1㎖)을 첨가하였다. 그 용액을 20분 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 바로 C18 플래시 크로마토그래피(1 내지 60%의 MeCN/물로 용리)에 의해 정제하여 수율 15㎎(98%)의 화합물216(본 명세서에서 HIPS-4AP-메이탄신 또는 HIPS-4-아미노-피페리딘-메이탄신으로도 지칭됨)을 백색 고체로서 수득하였다.
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C62H88ClN8O16에 대한 계산값 1235.6; 실측값 1236.0.
실시예 3
실험 절차
일반사항
부위-특이적으로 접합된 항체-약물 접합체(ADC)를 생성하기 위하여 실험을 수행하였다. 이 실시예에서 사용된 항체는 하기 중쇄 및 경쇄를 포함하였다: 표 4에 제시된 아미노산 서열(서열번호 1)을 갖지만 EU 넘버링 체계에 따라서 아미노산 치환 L234A 및 L235A를 포함하는 중쇄; 및 표 4에 제시된 아미노산 서열(서열번호 6)을 갖는 경쇄. 부위-특이적 ADC 생산은 단백질 서열에 폼일글리신(FGly), 비천연 아미노산의 혼입을 포함하였다. FGly를 설치하기 위하여(도 1), 짧은 공통 서열, CXPXR(여기서 X는 세린, 트레오닌, 알라닌 또는 글리신임)을 표준 분자 생물 클로닝 기법을 이용해서 항체 중쇄 또는 경쇄의 보존된 영역에서 목적하는 위치에 삽입하였다. 이 "태그 부착된" 작제물은, 태그 내의 시스테인을 FGly 잔기에 공동 번역적으로 변환시켜서, 알데하이드 작용기(본 명세서에서 알데하이드 태그로도 지칭됨)를 생성시키는, 폼일글리신-생성 효소(FGE)를 공발현하는 세포에서 재조합적으로 생산되었다. 알데하이드 작용기는 생물직교(bioorthogonal) 접합을 위한 화학적 손잡이(chemical handle)로서 작용하였다. 하이드라지노-아이소-피쳇-슈펭글러(HIPS) 결찰을 사용하여 페이로드(예컨대, 약물, 예컨대, 세포독소(예컨대, 메이탄신))를 FGly에 연결시켜서, 결과적으로 세포독소 페이로드와 항체 사이에 안정적인 공유 C-C 결합의 형성을 초래하였다. 이 C-C 결합은 순환 및 FcRn 재활용 중에 ADC가 조우하게 되는 생리적으로 관련된 조건, 예컨대, 프로테아제, 낮은 pH, 및 환원 시약에 대해 안정적인 것으로 예상되었다. 알데하이드 태그를 보유하는 항체는 다양한 위치에서 제조될 수 있다. 중쇄 C-말단(CT)에서 알데하이드 태그를 삽입시키는 효과를 시험하기 위해 실험을 수행하였다. 생물물리학적 및 기능적 특성규명을, HIPS 링커를 통해 메이탄신 페이로드에의 접합에 의해 만들어진 결과적인 ADC에 대해 수행하였다.
태그 부착된 항체의 클로닝, 발현 및 정제
알데하이드 태그 서열을 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 항-CD37의 중쇄 C-말단(CT)에 삽입하였다. 소규모 생산을 위해, CHO-S 세포를 인간 FGE 발현 작제물로 형질감염시키고 FGE-과발현 세포의 풀을 항체의 일시적인 제조를 위해 사용하였다. 대규모 생산을 위해, GPEx 기술(Catalent, Inc., 뉴저지주 서머셋 소재)을 사용하여 인간 FGE(GPEx)를 과발현하는 클론성 세포주를 생성하였다. 이어서, FGE 클론을 사용하여 항체-발현 세포의 안정적인 벌크 풀을 생성하였다. 항체를 조건조절된 배지로부터 단백질 A 크로마토그래피(MabSelect, GE Healthcare Life Sciences, 펜실베이니아주 피츠버그 소재)를 사용하여 정제하였다. 정제된 항체를 순간 냉동시켜서 추후 사용할 때까지 -80℃에서 보관하였다.
생체접합, 정제 및 HPLC 분석론
C-말단에 알데하이드-태그 부착된 αCD37 항체(15 ㎎/㎖)를 0.85% DMA를 함유하는 20mM 시트르산나트륨, 50mM NaCl pH 5.5에서 37℃에서 72시간 동안 HIPS-4AP 링커에 부착된 메이탄신 페이로드에 접합시켰다(8 ㏖. 당량 약물:항체). 20mM 시트르산나트륨, 50mM NaCl pH 5.5로의 접선유동여과(24 통과부피)에 의해 유리 약물을 제거하였다.
최종 산물의 약물-대-항체 비(DAR)를 결정하기 위하여, ADC는, 이동상 A: 1.5 M 황산암모늄, 25mM 인산나트륨 pH 7.0, 및 이동상 B: 25% 아이소프로판올, 18.75mM 인산나트륨 pH 7.0을 이용하는 분석용 HIC(Tosoh #14947)에 의해 조사하였다. 응집을 결정하기 위하여, 샘플은 300mM NaCl, 25mM 인산나트륨 pH 6.8의 이동상을 이용하는 분석적 크기 배제 크로마토그래피(SEC; Tosoh #08541)를 사용해서 분석하였다.
결과
중쇄 C-말단(CT)에서 알데하이드 태그를 함유하도록 변형된 αCD37 항체를 HIPS-4AP 링커에 부착된 메이탄신 페이로드에 접합시켰다. 완결 시, 남아 있는 유리 약물을 접선 유동 여과에 의해 완충제 교환 중에 제거하였다. 이들 반응은 높은 수율이었는데, 거의 정량적 접합 효율이었고, 95% 초과의 총 수율이었다. 얻어진 ADC는 1.79 내지 1.89의 약물-대-항체 비(DAR)를 지녔고, 단량체가 우세하였다. 도 2 및 도 3은 HIC에 의해 결정된 DAR 및 SEC에 의해 결정된 단량체 온전성에 대해서 대표적인 AC를 나타낸다.
도 2는 HIPS-4AP 링커에 부착된 메이탄신 페이로드에 중쇄 C-말단(CT)에서 접합된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 자취를 나타낸다. 도 2는 DAR이 HIC에 의해 결정된 바 1.84였음을 나타낸다.
도 3은 HIPS-4AP 링커에 부착된 메이탄신 페이로드에 중쇄 C-말단(CT)에서 접합된 알데하이드-태그 부착된 항-CD37 항체의 분석적 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 분석의 그래프를 도시한다. 도 3에 도시된 바와 같이, 분석적 SEC는 최종 산물에 대해서 98.2% 단량체를 나타내었다.
시험관내 세포독성
CD37-양성 B-세포 림프종 세포주, Daudi, RL, Ramos-RA, WSU-DLCL2, Granta 519, BJAB, DoHH-2, SU-DHL-4 및 Raji를, ATCC 또는 DSMZ 세포 은행으로부터 얻었다. 이들 세포를 벤더가 권장한 성장 배지에서 유지시켰다. 플레이팅하기 24시간 전에, 세포를 계대시켜서 대수상 성장을 보장하였다. 플레이팅 당일에, 5000개 세포/웰을 100㎕ 정상 성장 배지의 96-웰 플레이트 상에 파종하였다. 세포를 20 ㎕의 희석된 분석물로 다양한 농도에서 처리하고, 플레이트를 5% CO2의 위기에서 37℃에서 인큐베이션하였다. 5일 후에, 100 ㎕/웰의 Cell Titer-Glo 시약(Promega)을 첨가하고, Molecular Devices SpectraMax M5 플레이트 판독기를 사용해서 발광을 측정하였다. GraphPad Prism 소프트웨어를 데이터 분석에 사용하였다.
결과
항-CD37 HIPS-4AP-메이탄신 접합체는 시험된 9개의 세포주 중 8개에 대해서 강력한(서브나노몰) 시험관내 세포독성을 나타내었는데, 활성은 유리 메이탄신의 것과 견줄만 하였다.
도 4 내지 도 12는 Daudi, RL, Ramos-RA, WSU-DLCL2, Granta 519, BJAB, DoHH-2, SU-DHL-4 및 Raji 세포주 각각에 대한 결과를 도시한다.
이종이식 연구
DoHH-2 이종이식
방법: 암컷 CB17/SCID 마우스(8/군)에게 DoHH-2 세포를 피하 접종하였다. 종양이 평균 166㎣에 도달했을 때 치료를 시작하였는데, 그때 동물에게 1, 3 또는 10 ㎎/㎏으로 비히클 단독 또는 항-CD37 HIPS-4AP-메이탄신 접합체의 단일 용량으로 정맥내 투여하였다. 두 다른 치료군은 항-CD37 HIPS-4AP-메이탄신 접합체 또는 접합된 아이소타입 대조군 ADC 중 하나로 총 4회 용량(qwk×4) 동안 주마다 10 ㎎/㎏으로 투약하였다. 동물은 체중 및 종양 크기에 대해서 주 2회 모니터링하였다. 동물은 종양이 2000㎣에 도달했을 때 안락사시켰다.
결과: 비히클 대조군에서 동물에 대한 종점까지의 중위 시간은 33일이었고; 그러므로, 종양 성장 저해(TGI%)를 그 날에 계산하였다. TGI%는 다음 식으로 정의되었다:
TGI (%) = (TV대조군 - TV치료군)/TV대조×100.
항-CD37 HIPS-4AP-메이탄신 접합체를 공급받은 동물은 각각 1, 3 및 10 ㎎/㎏의 단일 용량에서 61%, 68% 및 95% TGI를 입증하였다. 후자의 투여군에 대해서, 8개 종양 중 6개가 완전한 퇴행을 나타내었고, 4개의 완전한 퇴행은 연구 종료(36일) 전체를 통해서 오래 지속된다. 데이터는 도 13에 나타낸다.
Granta 519 이종이식
방법: 암컷 NOD/SCID 마우스(6/군)에게 Granta 519 세포를 피하 접종하였다. 종양이 평균 175㎣에 도달했을 때 치료를 시작하였는데, 그때 동물에게 10 ㎎/㎏으로 비히클 단독 또는 단일 용량의 항-CD37(메이탄신 페이로드 무함유) 또는 3 또는 10 ㎎/㎏으로 항-CD37 HIPS-4AP-메이탄신 접합체를 투여하였다. 동물은 체중 및 종양 크기에 대해서 주 2회 모니터링하였다. 동물은 종양이 2000㎣에 도달했을 때 안락사시켰다.
결과: 비히클 대조군에서 동물에 대한 종점까지의 중위 시간은 24일이었고; 그러므로, 종양 성장 저해(TGI%)를 그 날에 계산하였다. TGI%는 다음 식으로 정의되었다:
TGI (%) = (TV대조군 - TV치료군)/TV대조×100.
항-CD37 HIPS-4AP-메이탄신 접합체를 공급받은 동물은 각각 3 및 10 ㎎/㎏의 단일 용량에서 69% 및 100% TGI를 입증하였다. 후자의 투여군에 대해서, 8개 종양 중 8개가 완전한 퇴행을 나타내었고, 모든 완전한 퇴행은 연구 종료(31일) 전체를 통해서 오래 지속된다. 데이터는 도 14에 나타낸다.
본 발명이 이의 구체적인 실시형태를 참조로 설명되었지만, 본 발명의 진정한 사상 및 범주로부터 벗어나는 일 없이 다양한 변화가 이루어질 수 있고 동등물이 대체될 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해되어야 한다. 또한, 본 발명의 목적, 사상 및 범주에 대해 특정 상황, 물질, 물질의 조성, 방법, 방법의 단계 또는 단계들을 적응시키기 위해 많은 변형이 이루어질 수 있다. 그러한 모든 변형은 첨부되는 청구범위의 범주 내인 것으로 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> Catalent Pharma Solutions Rabuka, David Drake, Penelope M. Barfield, Robyn M. Kim, Yun Cheol <120> ANTI-CD37 ANTIBODY-MAYTANSINE CONJUGATES AND METHODS OF USE THEREOF <130> RDWD-034WO <140> PCT/US2020/058191 <141> 2020-10-30 <150> US 62/928,939 <151> 2019-10-31 <160> 198 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 454 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Arg Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Val Gly Pro Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr 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sequence <400> 28 Ile Cys Thr Pro Ala Ala 1 5 <210> 29 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 29 Met Cys Thr Pro Ser Ala 1 5 <210> 30 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 30 Val Cys Thr Pro Ser Ala 1 5 <210> 31 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 31 Leu Cys Ser Pro Ser Ala 1 5 <210> 32 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 32 Leu Cys Ala Pro Ser Ala 1 5 <210> 33 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 33 Leu Cys Val Pro Ser Ala 1 5 <210> 34 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 34 Leu Cys Gly Pro Ser Ala 1 5 <210> 35 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is a modified amino acid residue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is a modified amino acid residue of the polypeptide (e.g., anti-CD37 antibody) that is coupled to the moiety of interest (e.g., a drug, such as a maytansine). <400> 35 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Leu Xaa Thr Pro Ser Arg Gly Ser 1 5 10 15 <210> 36 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 36 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 1 5 <210> 37 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 37 Lys Val Asp Asn Ala Leu 1 5 <210> 38 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 38 Gln Ser Gly Asn Ser Gln 1 5 <210> 39 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is a modified amino acid of the polypeptide (e.g., anti-CD37 antibody) that is coupled to the moiety of interest (e.g., a drug, such as a maytansine). <400> 39 Lys Val Asp Asn Ala Leu Xaa Thr Pro Ser Arg Gln Ser Gly Asn Ser 1 5 10 15 Gln <210> 40 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 40 Ser Trp Asn Ser Gly Ala 1 5 <210> 41 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 41 Gly Val His Thr Phe Pro 1 5 <210> 42 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is a modified amino acid of the polypeptide (e.g., anti-CD37 antibody) that is coupled to the moiety of interest (e.g., a drug, such as a maytansine). <400> 42 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Xaa Thr Pro Ser Arg Gly Val His Thr 1 5 10 15 Phe Pro <210> 43 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 44 <211> 326 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 45 <211> 377 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro 100 105 110 Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg 115 120 125 Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys 130 135 140 Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 145 150 155 160 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 165 170 175 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 180 185 190 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr 195 200 205 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 210 215 220 Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 225 230 235 240 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 245 250 255 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln 260 265 270 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 275 280 285 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 290 295 300 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn 305 310 315 320 Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 325 330 335 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile 340 345 350 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln 355 360 365 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 370 375 <210> 46 <211> 326 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser 1 5 10 15 Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 20 25 30 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 35 40 45 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 50 55 60 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr 65 70 75 80 Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg 85 90 95 Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu 100 105 110 Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 47 <211> 353 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 47 Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Cys Ser Thr 1 5 10 15 Gln Pro Asp Gly Asn Val Val Ile Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe 20 25 30 Pro Gln Glu Pro Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Gly Val 35 40 45 Thr Ala Arg Asn Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr 50 55 60 Thr Thr Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Leu Ala Gly 65 70 75 80 Lys Ser Val Thr Cys His Val Lys His Tyr Thr Asn Pro Ser Gln Asp 85 90 95 Val Thr Val Pro Cys Pro Val Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro 100 105 110 Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Cys Cys His Pro Arg Leu Ser 115 120 125 Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu Leu Leu Gly Ser Glu Ala Asn 130 135 140 Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg Asp Ala Ser Gly Val Thr Phe 145 150 155 160 Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser Ala Val Gln Gly Pro Pro Asp 165 170 175 Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val Ser Ser Val Leu Ser Gly Cys 180 185 190 Ala Glu Pro Trp Asn His Gly Lys Thr Phe Thr Cys Thr Ala Ala Tyr 195 200 205 Pro Glu Ser Lys Thr Pro Leu Thr Ala Thr Leu Ser Lys Ser Gly Asn 210 215 220 Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser Glu Glu Leu 225 230 235 240 Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg Gly Phe Ser 245 250 255 Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln Glu Leu Pro 260 265 270 Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro Ser Gln Gly 275 280 285 Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala Ala Glu Asp 290 295 300 Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His Glu Ala Leu 305 310 315 320 Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala Gly Lys Pro 325 330 335 Thr His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly Thr Cys 340 345 350 Tyr <210> 48 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 49 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Leu Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 50 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu 1 5 10 15 Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg 35 40 45 Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu 65 70 75 80 Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 51 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Met Glu 1 5 10 15 Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Thr Val Val Cys Phe Val Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Asp Ile Ser Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Gln 35 40 45 Arg Asp Gly Val Leu Asp Ser Val Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Ser Leu Thr Lys Val Glu Tyr Glu 65 70 75 80 Arg His Asn Leu Tyr Thr Cys Glu Val Val His Lys Thr Ser Ser Ser 85 90 95 Pro Val Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 100 105 <210> 52 <211> 105 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 1 5 10 15 Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe 20 25 30 Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val 35 40 45 Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser 65 70 75 80 His Lys Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu 85 90 95 Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 100 105 <210> 53 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 53 Ala Ser Thr Lys Gly Pro 1 5 <210> 54 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 54 Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 1 5 <210> 55 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 55 Pro Glu Pro Val 1 <210> 56 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 56 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 1 5 <210> 57 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 57 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 1 5 10 15 Gln Ser Ser Gly Leu 20 <210> 58 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 58 Gln Ser Ser Gly Leu 1 5 <210> 59 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 59 Thr Gln Thr Tyr 1 <210> 60 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 60 His Lys Pro Ser Asn 1 5 <210> 61 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 61 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly 20 <210> 62 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 62 Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 <210> 63 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 63 Ile Ser Arg Thr Pro 1 5 <210> 64 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 64 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 1 5 <210> 65 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 65 Ser His Glu Asp Pro Glu Val 1 5 <210> 66 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 66 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 1 5 <210> 67 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 67 Gln Tyr Asn Ser Thr 1 5 <210> 68 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 68 Val Leu Thr Val Leu 1 5 <210> 69 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 69 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 1 5 <210> 70 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 70 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 1 5 <210> 71 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 71 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 1 5 <210> 72 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 72 Pro Pro Ser Arg Lys Glu Leu Thr Lys Asn 1 5 10 <210> 73 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 73 Tyr Pro Ser Asp Ile 1 5 <210> 74 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 74 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 1 5 <210> 75 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 75 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 1 5 10 <210> 76 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 76 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 1 5 10 15 Pro Gly Lys <210> 77 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 77 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 1 5 <210> 78 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 78 Ala Ser Thr Lys Gly Pro 1 5 <210> 79 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 79 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 1 5 10 <210> 80 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 80 Phe Pro Glu Pro Val 1 5 <210> 81 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 81 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 1 5 10 <210> 82 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 82 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 1 5 <210> 83 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 83 Val Ala Gly Pro Ser 1 5 <210> 84 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 84 Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 <210> 85 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 85 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 1 5 <210> 86 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 86 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 1 5 <210> 87 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 87 Val Leu Thr Val Val 1 5 <210> 88 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 88 Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 1 5 <210> 89 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 89 Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 1 5 <210> 90 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 90 Met Thr Lys Asn Gln 1 5 <210> 91 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 91 Tyr Pro Ser Asp Ile 1 5 <210> 92 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 92 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 1 5 <210> 93 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 93 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser 1 5 10 <210> 94 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 94 Gly Asn Val Phe 1 <210> 95 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 95 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 1 5 10 15 Pro Gly Lys <210> 96 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 96 Ala Ser Thr Lys Gly Pro 1 5 <210> 97 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 97 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Gly Gly Thr 1 5 10 <210> 98 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 98 Phe Pro Glu Pro Val 1 5 <210> 99 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 99 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 1 5 10 15 Ser Ser Gly <210> 100 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 100 His Lys Pro Ser Asn 1 5 <210> 101 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 101 Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp 1 5 10 <210> 102 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 102 Cys Pro Arg Cys Pro Lys Pro 1 5 <210> 103 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 103 Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Ala Pro 1 5 10 15 Glu Leu Leu Gly Gly 20 <210> 104 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 104 Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 <210> 105 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 105 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 1 5 <210> 106 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 106 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 1 5 <210> 107 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 107 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 1 5 <210> 108 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 108 Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 1 5 <210> 109 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 109 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 1 5 10 <210> 110 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 110 Tyr Pro Ser Asp Ile 1 5 <210> 111 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 111 Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn 1 5 <210> 112 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 112 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser 1 5 10 <210> 113 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 113 His Glu Ala Leu His Asn Arg 1 5 <210> 114 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 114 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 1 5 <210> 115 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 115 Ser Thr Lys Gly Pro 1 5 <210> 116 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 116 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 1 5 10 <210> 117 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 117 Phe Pro Glu Pro Val 1 5 <210> 118 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 118 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 1 5 10 <210> 119 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 119 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 1 5 <210> 120 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 120 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser 1 5 10 <210> 121 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 121 Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 <210> 122 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 122 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val 1 5 <210> 123 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 123 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 1 5 <210> 124 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 124 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser 1 5 <210> 125 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 125 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 1 5 10 <210> 126 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 126 Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn 1 5 10 <210> 127 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 127 Tyr Pro Ser Asp Ile 1 5 <210> 128 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 128 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 1 5 10 <210> 129 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 129 Gly Asn Val Phe 1 <210> 130 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 130 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 1 5 10 15 Leu Gly Lys <210> 131 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 131 Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu 1 5 10 <210> 132 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 132 Gln Pro Asp Gly Asn 1 5 <210> 133 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 133 Val Gln Gly Phe Phe Pro Gln Glu Pro Leu 1 5 10 <210> 134 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 134 Ser Gly Gln Gly Val Thr Ala Arg Asn Phe Pro 1 5 10 <210> 135 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 135 Ser Gly Asp Leu Tyr Thr Thr 1 5 <210> 136 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 136 Pro Ala Thr Gln 1 <210> 137 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 137 His Arg Pro Ala 1 <210> 138 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 138 Leu Leu Gly Ser Glu 1 5 <210> 139 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 139 Gly Leu Arg Asp Ala Ser Gly Val 1 5 <210> 140 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 140 Ser Ser Gly Lys Ser Ala Val Gln Gly Pro 1 5 10 <210> 141 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 141 Gly Cys Tyr Ser 1 <210> 142 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 142 Cys Ala Glu Pro 1 <210> 143 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 143 Ser Gly Asn Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser 1 5 10 15 Glu Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu 20 <210> 144 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 144 Ala Arg Gly Phe Ser 1 5 <210> 145 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 145 Gln Gly Ser Gln Glu Leu Pro Arg Glu Lys Tyr 1 5 10 <210> 146 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 146 Ala Ala Glu Asp 1 <210> 147 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 147 His Glu Ala Leu 1 <210> 148 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 148 Ile Asp Arg Leu Ala Gly Lys Pro Thr His Val Asn Val Ser Val Val 1 5 10 15 Met Ala Glu Val Asp Gly Thr Cys Tyr 20 25 <210> 149 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 149 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 1 5 <210> 150 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 150 Asn Ser Gly Ala Leu Cys Thr Pro Ser Arg Gly 1 5 10 <210> 151 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 151 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 1 5 <210> 152 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 152 Cys Thr Pro Ser Arg 1 5 <210> 153 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 153 Leu Cys Thr Pro Ser Arg 1 5 <210> 154 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 154 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 1 5 <210> 155 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 155 Asn Leu Cys Thr Pro Ser Arg Ala Pro 1 5 <210> 156 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 156 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 1 5 <210> 157 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 157 Leu Cys Thr Pro Ser Arg 1 5 <210> 158 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 158 Leu Cys Thr Pro Ser Arg 1 5 <210> 159 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 159 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 1 5 <210> 160 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 160 Lys Ala Lys Gly Leu Cys Thr Pro Ser Arg 1 5 10 <210> 161 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 161 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 1 5 <210> 162 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 162 Leu Cys Thr Pro Ser 1 5 <210> 163 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 163 Leu Cys Thr Pro Ser Arg 1 5 <210> 164 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 164 Arg Thr Val Ala Ala Pro 1 5 <210> 165 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 165 Tyr Pro Arg Glu Ala 1 5 <210> 166 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 166 Pro Arg Glu Ala 1 <210> 167 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 167 Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn 1 5 <210> 168 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 168 Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 1 5 <210> 169 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 169 His Gln Gly Leu Ser Ser 1 5 <210> 170 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 170 Arg Gly Glu Cys 1 <210> 171 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 171 Gln Pro Lys Ala Ala Pro 1 5 <210> 172 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 172 Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val 1 5 <210> 173 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 173 Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly 1 5 <210> 174 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 174 Ala Pro Thr Glu Cys Ser 1 5 <210> 175 <211> 99 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 175 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu <210> 176 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 176 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 1 5 <210> 177 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 177 Gly Ala Leu Cys Thr Pro Ser Arg Gly Val His 1 5 10 <210> 178 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 178 Leu Cys Thr Pro Ser Arg 1 5 <210> 179 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 179 Ser Leu Cys Thr Pro Ser Arg Gly Ser 1 5 <210> 180 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 180 Lys Val Asp Asn Ala Leu 1 5 <210> 181 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 181 Gln Ser Gly Asn Ser Gln 1 5 <210> 182 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 182 Leu Cys Thr Pro Ser Arg 1 5 <210> 183 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 183 Lys Val Asp Asn Ala Leu Leu Cys Thr Pro Ser Arg Gln Ser Gly Asn 1 5 10 15 Ser Gln <210> 184 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa may be present or absent and, when present, can be any amino acid, with the proviso that when the sequence is at the N-terminus of the conjugate, X1 is present <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is the modified amino acid residue of formula (I) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is either a proline or alanine residue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is a basic amino acid or an aliphatic amino acid <400> 184 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 185 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa may be cys or ser <400> 185 Leu Xaa Thr Pro Ser Arg 1 5 <210> 186 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is formylglycine <400> 186 Leu Xaa Thr Pro Ser Arg 1 5 <210> 187 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is cys or ser <400> 187 Leu Xaa Thr Pro Ser Arg 1 5 <210> 188 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 188 Leu Cys Thr Pro Ser Arg 1 5 <210> 189 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is is present or absent and, when present, can be any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is cysteine or serine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is either a proline or alanine residue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is a basic amino acid (e.g., arginine (R), and may be lysine (K) or histidine (H), e.g., lysine), or an aliphatic amino acid (alanine (A), glycine (G), leucine (L), valine (V), isoleucine (I), or proline (P), e.g., A, G, L, V, or I <400> 189 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 190 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa may be present or absent and, when present, can be any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa may be any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa may be any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is a basic amino acid (e.g., arginine (R), and may be lysine (K) or histidine (H), e.g., lysine), or an aliphatic amino acid (alanine (A), glycine (G), leucine (L), valine (V), isoleucine (I), or proline (P), e.g., A, G, L, V, or I <400> 190 Xaa Cys Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 <210> 191 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa may be present or absent and, when present, can be any amino acid, with the proviso that when the sequence is at the N-terminus of the antibody, X1 is present <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is formylglycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa may be any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is either a proline or alanine residue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa may be any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is a basic amino acid or an aliphatic amino acid <400> 191 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 192 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is the modified amino acid residue of the polypeptide (e.g., anti-CD37 antibody) that is coupled to the moiety of interest (e.g., a drug, such as a maytansine). <400> 192 Leu Xaa Thr Pro Ser Arg 1 5 <210> 193 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 193 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 <210> 194 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is formylglycine <400> 194 Leu Xaa Thr Pro Ser Arg 1 5 <210> 195 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is formylglycine <400> 195 Ser Pro Gly Ser Leu Xaa Thr Pro Ser Arg Gly Ser 1 5 10 <210> 196 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is formylglycine <400> 196 Lys Val Asp Asn Ala Leu Xaa Thr Pro Ser Arg Gln Ser Gly Asn Ser 1 5 10 15 Gln <210> 197 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is formylglycine <400> 197 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Xaa Thr Pro Ser Arg Gly Val His Thr 1 5 10 15 Phe Pro <210> 198 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is serine, threonine, alanine, or glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is serine, threonine, alanine, or glycine <400> 198 Cys Xaa Pro Xaa Arg 1 5

Claims (65)

  1. 하기 화학식 (I)의 측쇄를 가진 적어도 1개의 변형된 아미노산 잔기를 포함하는 접합체:
    Figure pct00045

    식 중,
    Z는 CR4 또는 N이고;
    R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되고;
    R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되거나, 또는 R2와 R3은 선택적으로 고리상으로 연결되어 5 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고;
    각각의 R4는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되고;
    L은 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-를 포함하는 링커이되, a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, a, b, c 및 d의 합계는 1 내지 4이고;
    T1, T2, T3 및 T4는 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노 (4AP), 아세탈기, 하이드라진, 설파이드 및 에스터로부터 선택되되, EDA는 에틸렌 다이아민 모이어티이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜이고, 그리고 AA는 아미노산 잔기이고, w는 1 내지 20의 정수이고, n은 1 내지 30의 정수이고, p는 1 내지 20의 정수이고, 그리고 h는 1 내지 12의 정수이고;
    V1, V2, V3 및 V4는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 선택되되, q는 1 내지 6의 정수이고;
    각각의 R13은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택되고;
    각각의 R15는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되고;
    W1은 메이탄시노이드이고; 그리고
    W2는 항-CD37 항체이다.
  2. 제1항에 있어서,
    T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
    T2, T3 및 T4는 각각 독립적으로 (EDA)w, (PEG)n, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (AA)p, -(CR13OH)h-, 4-아미노-피페리딘(4AP), 아세탈기, 하이드라진 및 에스터로부터 선택되고; 그리고
    V1, V2, V3 및 V4는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    여기서:
    (PEG)n은
    Figure pct00046
    이되, n은 1 내지 30의 정수이고;
    EDA는 하기 구조:
    Figure pct00047
    를 갖는 에틸렌 다이아민 모이어티이되, y는 1 내지 6의 정수이고 r은 0 또는 1이고;
    4-아미노-피페리딘(4AP)은
    Figure pct00048
    이고;
    각각의 R12 및 R15는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택되되, 임의의 2개의 인접한 R12기는 환상으로 연결되어 피페라진일 고리를 형성하고; 그리고
    R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택된다.
  3. 제1항에 있어서, T1, T2, T3 및 T4, 및 V1, V2, V3 및 V4는 다음 표로부터 선택되는, 접합체:
    Figure pct00049

    Figure pct00050
    .
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커 L은 하기 구조들 중 하나로부터 선택되는, 접합체:
    Figure pct00051

    Figure pct00052

    Figure pct00053

    Figure pct00054

    식 중,
    각각의 f는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고;
    각각의 y는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고;
    각각의 n은 독립적으로 0 또는 1 내지 30의 정수이고;
    각각의 p는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고;
    각각의 h는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고;
    각각의 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴이고; 그리고
    각각의 R'은 독립적으로 H, 아미노산, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴의 측쇄기이다.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 메이탄시노이드는 하기 화학식의 것인, 접합체:
    Figure pct00055

    식 중,
    Figure pct00056
    는 상기 메이탄시노이드와 L 간의 부착점을 나타낸다.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 4AP이고, V2는 -CO-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고, 그리고 V4는 존재하지 않는, 접합체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커 L은 하기 구조를 포함하는, 접합체:
    Figure pct00057

    식 중,
    각각의 f는 독립적으로 1 내지 12의 정수이고; 그리고
    n은 1 내지 30의 정수이다.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD37 항체는 IgG1 항체인, 접합체.
  9. 제8항에 있어서, 상기 항-CD37 항체는 IgG1 카파 항체인, 접합체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD37 항체는 하기 화학식 (II)의 서열을 포함하는, 접합체:
    X1(FGly')X2Z20X3Z30 (II)
    식 중,
    FGly'은 화학식 (I)의 변형된 아미노산 잔기이고;
    Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고;
    Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
    X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 경우, X1은 존재하고; 그리고
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이다.
  11. 제10항에 있어서, 상기 서열은 L(FGly')TPSR인, 접합체.
  12. 제11항에 있어서,
    Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I 및 P로부터 선택되고;
    X1은 L, M, S 및 V로부터 선택되고; 그리고
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 및 C로부터 선택되는, 접합체.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 아미노산 잔기는 상기 항-CD37 항체의 중쇄 불변 영역의 C-말단에 위치되는, 접합체.
  14. 제13항에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역은 하기 화학식 (II)의 서열을 포함하는, 접합체:
    X1(FGly')X2Z20X3Z30 (II)
    식 중,
    FGly'은 화학식 (I)의 변형된 아미노산 잔기이고;
    Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고;
    Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
    X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 경우, X1은 존재하고; 그리고
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
    상기 서열은 아미노산 서열 SLSLSPG에 대한 C-말단이다.
  15. 제14항에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역은 서열 SPGSL(FGly')TPSRGS를 포함하는, 접합체.
  16. 제14항에 있어서,
    Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I 및 P로부터 선택되고;
    X1은 L, M, S 및 V로부터 선택되고; 그리고
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 및 C로부터 선택되는, 접합체.
  17. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 아미노산 잔기는 상기 항-CD37 항체의 경쇄 불변 영역에 위치되는, 접합체.
  18. 제17항에 있어서, 상기 경쇄 불변 영역은 하기 화학식 (II)의 서열을 포함하는, 접합체:
    X1(FGly')X2Z20X3Z30 (II)
    식 중,
    FGly'은 화학식 (I)의 변형된 아미노산 잔기이고;
    Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고;
    Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
    X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 경우, X1은 존재하고; 그리고
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
    상기 서열은 서열 KVDNAL에 대한 C-말단이고/이거나 서열 QSGNSQ에 대한 N-말단이다.
  19. 제18항에 있어서, 상기 경쇄 불변 영역은 서열 KVDNAL(FGly')TPSRQSGNSQ를 포함하는, 접합체.
  20. 제18항에 있어서,
    Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I 및 P로부터 선택되고;
    X1은 L, M, S 및 V로부터 선택되고; 그리고
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 및 C로부터 선택되는, 접합체.
  21. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 아미노산 잔기는 상기 항-CD37 항체의 중쇄 CH1 영역에 위치되는, 접합체.
  22. 제21항에 있어서, 상기 중쇄 CH1 영역은 하기 화학식 (II)의 서열을 포함하는, 접합체:
    X1(FGly')X2Z20X3Z30 (II)
    식 중,
    FGly'은 화학식 (I)의 변형된 아미노산 잔기이고;
    Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고;
    Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
    X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 경우, X1은 존재하고; 그리고
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
    상기 서열은 아미노산 서열 SWNSGA에 대한 C-말단이고/이거나 아미노산 서열 GVHTFP에 대한 N-말단이다.
  23. 제22항에 있어서, 상기 중쇄 CH1 영역은 서열 SWNSGAL(FGly')TPSRGVHTFP를 포함하는, 접합체.
  24. 제22항에 있어서,
    Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I 및 P로부터 선택되고;
    X1은 L, M, S 및 V로부터 선택되고; 그리고
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 및 C로부터 선택되는, 접합체.
  25. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 아미노산 잔기는 상기 항-CD37 항체의 중쇄 CH2 영역에 위치되는, 접합체.
  26. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 아미노산 잔기는 상기 항-CD37 항체의 중쇄 CH3 영역에 위치되는, 접합체.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD37 항체는 하기를 포함하는 항-CD37 항체와 CD37에 대한 결합에 대해서 경쟁하는, 접합체:
    아미노산 서열 GYNMN(서열번호 3)을 포함하는 VH CDR1,
    아미노산 서열 NIDPYYGGTTYNRKFKG(서열번호 4)를 포함하는 VH CDR2, 및
    아미노산 서열 SVGPFDS(서열번호 5)를 포함하는 VH CDR3
    을 포함하는 가변 중쇄(VH) 폴리펩타이드; 및
    아미노산 서열 RASENVYSYLA(서열번호 8)를 포함하는 VL CDR1,
    아미노산 서열 FAKTLAE(서열번호 9)를 포함하는 VL CDR2, 및
    아미노산 서열 QHHSDNPWT(서열번호 10)를 포함하는 VL CDR3
    을 포함하는 가변 경쇄(VL) 폴리펩타이드.
  28. 제27항에 있어서, 상기 항-CD37 항체는,
    아미노산 서열 GYNMN(서열번호 3)을 포함하는 VH CDR1,
    아미노산 서열 NIDPYYGGTTYNRKFKG(서열번호 4)를 포함하는 VH CDR2, 및
    아미노산 서열 SVGPFDS(서열번호 5)를 포함하는 VH CDR3
    을 포함하는 가변 중쇄(VH) 폴리펩타이드; 및
    아미노산 서열 RASENVYSYLA(서열번호 8)를 포함하는 VL CDR1,
    아미노산 서열 FAKTLAE(서열번호 9)를 포함하는 VL CDR2, 및
    아미노산 서열 QHHSDNPWT(서열번호 10)를 포함하는 VL CDR3
    을 포함하는 가변 경쇄(VL) 폴리펩타이드
    를 포함하는, 접합체.
  29. 제27항 또는 제28항에 있어서, 상기 항-CD37 항체는,
    서열번호 2에 제시된 아미노산 서열과 70% 이상 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 폴리펩타이드; 및
    서열번호 7에 제시된 아미노산 서열과 70% 이상 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 폴리펩타이드
    를 포함하는, 접합체.
  30. 약제학적 조성물로서,
    제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 접합체; 및
    약제학적으로 허용 가능한 부형제
    를 포함하는, 약제학적 조성물.
  31. 방법으로서,
    대상체에게 유효량의 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  32. 대상체의 암을 치료하는 방법으로서,
    상기 대상체에게 치료적 유효량의, 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 접합체를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하되, 상기 투여는 상기 대상체의 암을 치료하는데 효과적인, 방법.
  33. 제32항에 있어서, 상기 암은 혈액 악성종양인, 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 혈액 악성종양은 악성 B 세포를 특징으로 하는, 방법.
  35. 제34항에 있어서, 상기 혈액 악성종양은 백혈병인, 방법.
  36. 제35항에 있어서, 상기 백혈병은 만성 림프구성 백혈병(CLL)인, 방법.
  37. 제34항에 있어서, 상기 혈액 악성종양은 림프종인, 방법.
  38. 제37항에 있어서, 상기 림프종은 비호지킨 림프종(NHL)인, 방법.
  39. 대상체의 표적 부위에 약물을 전달하는 방법으로서,
    상기 대상체에게 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 접합체를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하되, 상기 투여는 상기 대상체의 표적 부위에 상기 접합체로부터 치료적 유효량의 약물을 방출하는데 효과적인, 방법.
  40. 폼일글리신(formylglycine: FGly) 잔기를 포함하는, 항-CD37 항체.
  41. 제40항에 있어서, 하기 서열을 포함하는, 항-CD37 항체:
    X1(FGly)X2Z20X3Z30
    식 중,
    Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고;
    Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
    X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 서열이 항체의 N-말단에 있을 경우, X1은 존재하고; 그리고
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이다.
  42. 제41항에 있어서, 상기 서열은 L(FGly)TPSR인, 항-CD37 항체.
  43. 제41항에 있어서,
    Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I 및 P로부터 선택되고;
    X1은 L, M, S 및 V로부터 선택되고; 그리고
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 및 C로부터 선택되는, 항-CD37 항체.
  44. 제41항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 서열은 상기 항-CD37 항체의 중쇄 불변 영역의 C-말단에 있는, 항-CD37 항체.
  45. 제44항에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역은 하기 서열을 포함하는, 항-CD37 항체:
    X1(FGly)X2Z20X3Z30
    식 중,
    Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고;
    Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
    X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 경우, X1은 존재하고; 그리고
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
    상기 서열은 아미노산 서열 SLSLSPG에 대한 C-말단이다.
  46. 제44항에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역은 서열 SPGSL(FGly)TPSRGS를 포함하는, 항-CD37 항체.
  47. 제44항에 있어서,
    Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I 및 P로부터 선택되고;
    X1은 L, M, S 및 V로부터 선택되고; 그리고
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 및 C로부터 선택되는, 항-CD37 항체.
  48. 제41항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 FGly 잔기는 상기 항-CD37 항체의 경쇄 불변 영역에 위치되는, 항-CD37 항체.
  49. 제48항에 있어서, 상기 경쇄 불변 영역은 하기 서열을 포함하는, 항-CD37 항체:
    X1(FGly)X2Z20X3Z30 (II)
    식 중,
    Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고;
    Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
    X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 경우, X1은 존재하고; 그리고
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
    상기 서열은 서열 KVDNAL에 대한 C-말단이고/이거나 서열 QSGNSQ에 대한 N-말단이다.
  50. 제49항에 있어서, 상기 경쇄 불변 영역은 서열 KVDNAL(FGly)TPSRQSGNSQ를 포함하는, 항-CD37 항체.
  51. 제49항에 있어서,
    Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I 및 P로부터 선택되고;
    X1은 L, M, S 및 V로부터 선택되고; 그리고
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 및 C로부터 선택되는, 항-CD37 항체.
  52. 제41항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 FGly 잔기는 상기 항-CD37 항체의 중쇄 CH1 영역에 위치되는, 항-CD37 항체.
  53. 제52항에 있어서, 상기 중쇄 CH1 영역은 하기 서열을 포함하는, 항-CD37 항체:
    X1(FGly)X2Z20X3Z30
    식 중,
    Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이고;
    Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
    X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있고, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있고, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 경우, X1은 존재하고; 그리고
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
    상기 서열은 아미노산 서열 SWNSGA에 대한 C-말단이고/이거나 아미노산 서열 GVHTFP에 대한 N-말단이다.
  54. 제53항에 있어서, 상기 중쇄 CH1 영역은 서열 SWNSGAL(FGly)TPSRGVHTFP를 포함하는, 항-CD37 항체.
  55. 제53항에 있어서,
    Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I 및 P로부터 선택되고;
    X1은 L, M, S 및 V로부터 선택되고; 그리고
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G 및 C로부터 선택되는, 항-CD37 항체.
  56. 제41항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 FGly 잔기는 상기 항-CD37 항체의 중쇄 CH2 영역에 위치되는, 항-CD37 항체.
  57. 제41항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 FGly 잔기는 상기 항-CD37 항체의 중쇄 CH3 영역에 위치되는, 항-CD37 항체.
  58. 제40항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD37 항체는 하기를 포함하는 항-CD37 항체와 CD37와 결합에 대해서 경쟁하는, 항-CD37 항체:
    아미노산 서열 GYNMN(서열번호 3)을 포함하는 VH CDR1,
    아미노산 서열 NIDPYYGGTTYNRKFKG(서열번호 4)를 포함하는 VH CDR2, 및
    아미노산 서열 SVGPFDS(서열번호 5)를 포함하는 VH CDR3
    을 포함하는 가변 중쇄(VH) 폴리펩타이드; 및
    아미노산 서열 RASENVYSYLA(서열번호 8)를 포함하는 VL CDR1,
    아미노산 서열 FAKTLAE(서열번호 9)를 포함하는 VL CDR2, 및
    아미노산 서열 QHHSDNPWT(서열번호 10)를 포함하는 VL CDR3
    을 포함하는 가변 경쇄(VL) 폴리펩타이드.
  59. 제58항에 있어서, 상기 항-CD37 항체는,
    아미노산 서열 GYNMN(서열번호 3)을 포함하는 VH CDR1,
    아미노산 서열 NIDPYYGGTTYNRKFKG(서열번호 4)를 포함하는 VH CDR2, 및
    아미노산 서열 SVGPFDS(서열번호 5)를 포함하는 VH CDR3
    을 포함하는 가변 중쇄(VH) 폴리펩타이드; 및
    아미노산 서열 RASENVYSYLA(서열번호 8)를 포함하는 VL CDR1,
    아미노산 서열 FAKTLAE(서열번호 9)를 포함하는 VL CDR2, 및
    아미노산 서열 QHHSDNPWT(서열번호 10)를 포함하는 VL CDR3
    을 포함하는 가변 경쇄(VL) 폴리펩타이드
    를 포함하는, 항-CD37 항체.
  60. 제58항 또는 제59항에 있어서, 상기 항체는,
    서열번호 2에 제시된 아미노산 서열과70% 이상 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 폴리펩타이드; 및
    서열번호 7에 제시된 아미노산 서열과70% 이상 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 폴리펩타이드
    를 포함하는, 항-CD37 항체.
  61. 제40항 내지 제60항 중 어느 한 항의 항-CD37 항체를 포함하는, 세포.
  62. 제40항 내지 제60항 중 어느 한 항의 항-CD37 항체를 암호화하는 핵산.
  63. 제62항의 핵산을 포함하는 발현 벡터.
  64. 제62항의 핵산 또는 제63항의 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  65. 제40항 내지 제60항 중 어느 한 항의 항체를 제조하는 방법으로서, 제63항의 발현 벡터를 포함하는 세포를, 상기 세포가 상기 항체를 발현하게 하는 적합한 조건 하에 배양하는 단계를 포함하되, 상기 항체가 생산되는, 방법.
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