JP6833226B2 - 大腸がんの予後バイオマーカー - Google Patents
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Description
[1]GALNT6タンパク質若しくはそのペプチド断片、又はGALNT6遺伝子の転写産物若しくはその核酸断片からなる、大腸がん患者の予後を予測するためのバイオマーカー。
[2]GALNT6タンパク質若しくはそのペプチド断片、又はGALNT6遺伝子の転写産物若しくはその核酸断片からなる、大腸がん患者に対する抗がん剤の有効性を判定するためのバイオマーカー。
[3]抗がん剤が5-FUである、[2]に記載のバイオマーカー。
[4]前記GALNT6タンパク質が、以下の(a)〜(c)のいずれかのタンパク質である、[1]〜[3]のいずれかに記載のバイオマーカー。
(a)配列番号1で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質、
(b)配列番号1で示されるアミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質、及び
(c)配列番号1で示されるアミノ酸配列に対して90%以上のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質
[5]前記GALNT6遺伝子が、[4]に示すタンパク質をコードする、[1]〜[3]のいずれかに記載のバイオマーカー。
[6]大腸がん患者の予後を予測するための、[1]及び[4]〜[5]のいずれかに記載のバイオマーカーの使用。
[7]大腸がん患者に対する抗がん剤の有効性を判定するための、[2]〜[5]のいずれかに記載のバイオマーカーの使用。
[8]前記大腸がんが、ステージI〜IVの大腸がんである、[6]又は[7]に記載の使用。
[9]前記大腸がんが、ステージIIIの大腸がんである、[8]に記載の使用。
[10]大腸がん患者の予後を予測する方法であって、
大腸がん患者から得た大腸がん細胞又は組織における、[1]及び[4]〜[5]のいずれかに記載のバイオマーカーの量を測定する測定工程、及び
前記測定工程で得られた測定結果に基づいて、大腸がん患者の予後を予測する予測工程を含み、
ここで、前記大腸がん細胞又は組織が前記バイオマーカーについて陰性である場合、前記大腸がん患者の予後は悪いと予測する、方法。
[11]大腸がん患者に対する抗がん剤の有効性を判定する方法であって、
大腸がん患者から得た大腸がん細胞又は組織における、[2]〜[5]のいずれかに記載のバイオマーカーの量を測定する測定工程、及び
前記測定工程で得られた測定結果に基づいて、大腸がん患者に対する抗がん剤の有効性を判定する判定工程を含み、
ここで、前記大腸がん細胞又は組織が前記バイオマーカーについて陰性である場合、大腸がん患者に対する抗がん剤の有効性は低いと判定する、方法。
[12][1]及び[4]〜[5]のいずれかに記載のバイオマーカーの量を測定するための試薬を含む、大腸がん患者の予後を予測するためのキット。
[13][2]〜[5]のいずれかに記載のバイオマーカーの量を測定するための試薬を含む、大腸がん患者に対する抗がん剤の有効性を判定するためのキット。
本発明は、大腸がん患者の予後を予測するためのバイオマーカーを提供する。本発明はまた、大腸がん患者に対する抗がん剤の有効性を判定するためのバイオマーカーを提供する。本発明に係るバイオマーカーは、GALNT6タンパク質若しくはそのペプチド断片、又はGALNT6遺伝子の転写産物若しくはその核酸断片からなる。
本発明は、大腸がん患者の予後を予測するための、上述の本発明に係るバイオマーカーの使用を提供する。本発明はまた、大腸がん患者に対する抗がん剤の有効性を判定するための、上述の本発明に係るバイオマーカーの使用を提供する。
以下に各工程について具体的に説明する。
大腸がんは、進行度の低い方からステージ0、I、II、III及びIVに分類される。本発明では、病期(ステージ)の決定は、国際対がん連合(UICC)のTNM分類(UICC第7版; Sobin LH, Gospodarowicz MK, Wittekind C, International Union against Cancer. TNM classification of malignant tumours, 7th edn. Wiley-Blackwell (2010))に基づいて行う。上記の国際対がん連合(UICC)のTNM分類を、UICC-TNM分類と本明細書で称する。UICC-TNM分類では、壁深達度(T分類)、リンパ節転移(N分類)及び遠隔転移(M分類)の3つの因子により、がん病変の進行度を分類する。UICC-TNM分類に基づく病期の決定は当業者の通常の知識に従って行うことができる。
本工程では、前記測定工程で得られた測定結果に基づいて、大腸がん患者の予後を予測する。本工程は、前記測定工程で得られた測定結果から、前記大腸がん細胞又は組織がバイオマーカーについて陽性であるか又は陰性であるかを判定することを包含し得る。
本発明はまた、上述の本発明に係るバイオマーカーの量を測定するための試薬を含む、大腸がん患者の予後を予測するためのキットも提供する。本発明はさらに、上述の本発明に係るバイオマーカーの量を測定するための試薬を含む、大腸がん患者に対する抗がん剤の有効性を判定するためのキットも提供する。
(大腸がん組織におけるGALNT6タンパク質の免疫組織化学染色)
GALNT6タンパク質発現のための免疫組織化学染色を行った。
福島県立医科大学附属病院で1990〜2010年の間に治癒的切除手術を受けた原発性大腸がん(primary colorectal cancer)患者368人を本研究に登録した。各患者からはインフォームドコンセントを得るか、又は患者の拒否機会を保障した(オプトアウト)。腫瘍のステージを、悪性腫瘍のTNM分類(UICC第7版; Sobin LH, Gospodarowicz MK, Wittekind C, International Union against Cancer. TNM classification of malignant tumours, 7th edn. Wiley-Blackwell (2010))に従って決定した。手術前に化学療法又は放射線療法を受けた患者を除外し、ステージ0〜IVの335人の患者から切除された大腸がん組織のホルマリン固定パラフィン包埋(formalin-fixed, paraffin-embedded; FFPE)切片を用いた。これらのうち304個の切片では、がん細胞に隣接する正常粘膜も評価のために利用可能であった。また、40例の大腸腺腫組織のFFPE切片も用いた。なお、本研究は、ヘルシンキ宣言に従って実施され、福島県立医科大学の施設内審査委員会の承認を受けた。
(大腸がん患者の切除手術後の予後評価)
福島県立医科大学附属病院で1990〜2010年の間に治癒的切除手術を受けたステージI〜IVの267人の原発性大腸がん患者の予後を評価した。腫瘍のステージを、実施例1に記載したように決定した。患者から切除した大腸がん組織について、実施例1に記載したように免疫組織化学染色の結果に基づいてGALNT6陰性又は陽性を決定した。患者の臨床情報は、医療記録を再調査することによって遡及的に得た。
また、全生存率でも、疾患特異的生存率と同様の傾向が示された。
(大腸がん患者における化学療法の有効性)
福島県立医科大学附属病院で1990〜2010年の間に治癒的切除手術を受けたステージII〜IIIの190人の原発性大腸がん患者の予後を評価した。腫瘍のステージを、実施例1に記載したように決定した。患者から切除した大腸がん組織について、実施例1に記載したように免疫組織化学染色の結果に基づいてGALNT6陰性又は陽性を決定した。患者の臨床情報は、医療記録を再調査することによって遡及的に得た。
(GALNT6発現と5-FUに対する抵抗性の関連)
<材料と方法>
SW480細胞は、American Typed Culture Collection(ATCC、マナサス、バージニア州、米国)から購入した。SW480は、10%ウシ胎児血清及びペニシリン/ストレプトマイシン(ThermoFisher Scientific、ウォルサム、マサチューセッツ州、米国)を含むRPMI-1640培地(Promega、マディソン、ウィスコンシン州、米国)において、5%CO2を含む加湿した雰囲気下で維持した。
5-FUの細胞毒性アッセイは以下の通り行った。GALNT6 siRNA及び対照siRNAをトランスフェクトしたSW480細胞を、96ウェルプレートに5×103/ウェルの密度で播種した。24時間インキュベーション後、細胞を様々な濃度の5-FU(Sigma-Aldrich)で処理し、5%CO2下で37℃にて72時間インキュベートした。細胞毒性は、CCK-8により上記の通り評価した。まず、0.1〜1000μg/mlの範囲の5-FU濃度又はビヒクル単独で予備的に処理し、用量応答曲線を作成した。続いて、1、5、10、50、及び100μg/mlの5-FUを実験に用いた。実験は各回3連で、少なくとも3回行った。
GALNT6の生物学的機能を明らかにするため、SW480細胞株を用いて以下の実験で用いた。なお、SW480細胞が比較亭高いGALNT6 mRNA発現及びタンパク質発現を示すことは事前に確認している(データ示さず)。
Claims (13)
- GALNT6タンパク質若しくはそのペプチド断片、又はGALNT6遺伝子の転写産物若しくはその核酸断片からなる、大腸がん患者の予後を予測するためのバイオマーカー。
- GALNT6タンパク質若しくはそのペプチド断片、又はGALNT6遺伝子の転写産物若しくはその核酸断片からなる、大腸がん患者に対する抗がん剤の有効性を判定するためのバイオマーカー。
- 抗がん剤が5-FUである、請求項2に記載のバイオマーカー。
- 前記GALNT6タンパク質が、以下の(a)〜(c)のいずれかのタンパク質である、請求項1〜3のいずれか一項に記載のバイオマーカー。
(a)配列番号1で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質、
(b)配列番号1で示されるアミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質、及び
(c)配列番号1で示されるアミノ酸配列に対して90%以上のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質 - 前記GALNT6遺伝子が、請求項4に示すタンパク質をコードする、請求項1〜4のいずれか一項に記載のバイオマーカー。
- 大腸がん患者の予後を予測するための、請求項1及び4〜5のいずれか一項に記載のバイオマーカーの使用。
- 大腸がん患者に対する抗がん剤の有効性を判定するための、請求項2〜5のいずれか一項に記載のバイオマーカーの使用。
- 前記大腸がんが、ステージI〜IVの大腸がんである、請求項6又は7に記載の使用。
- 前記大腸がんが、ステージIIIの大腸がんである、請求項8に記載の使用。
- 大腸がん患者の予後を予測するための方法であって、
大腸がん患者から得た大腸がん細胞又は組織における、請求項1及び4〜5のいずれか一項に記載のバイオマーカーの量を測定する測定工程
を含み、
ここで、前記大腸がん細胞又は組織が前記バイオマーカーについて陰性である場合、前記大腸がん患者の予後が悪いことを示す、方法。 - 大腸がん患者に対する抗がん剤の有効性を判定するための方法であって、
大腸がん患者から得た大腸がん細胞又は組織における、請求項2〜5のいずれか一項に記載のバイオマーカーの量を測定する測定工程
を含み、
ここで、前記大腸がん細胞又は組織が前記バイオマーカーについて陰性である場合、大腸がん患者に対する抗がん剤の有効性が低いことを示す、方法。 - 請求項1及び4〜5のいずれか一項に記載のバイオマーカーの量を測定するための試薬を含む、大腸がん患者の予後を予測するためのキット。
- 請求項2〜5のいずれか一項に記載のバイオマーカーの量を測定するための試薬を含む、大腸がん患者に対する抗がん剤の有効性を判定するためのキット。
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