JP6830118B2 - ワクチン組成物 - Google Patents
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Description
(i) 以下の(a)〜(e)からなる群から選択されるデング抗原:
(a) 弱毒化生デングウイルス;
(b) 不活化デングウイルス;
(c) 弱毒化生もしくは不活化キメラデングウイルス;
(d) デングウイルス様粒子 (VLP); および
(e) (a)〜(d)の2つ以上の組合せ;
または
(ii) デングVLPであるデング抗原をヒト細胞中で発現させることのできる核酸構築物またはウイルスベクター
を含む、組成物に関する。
本明細書中で用いる「デング病(Dengue disease)」という語は4つのデングウイルス血清型のいずれか1つの感染後の個体が示す臨床症候を指す。1970年以来、臨床的なデング病は、世界保健機関のガイドラインにしたがって、(i)デング熱または(ii)デング出血熱に分類される (World Health Organization. Dengue hemorrhagic fever: Diagnosis, treatment, prevention and control 2nd Ed. Geneva: WHO, 1997; ISBN 92 4 154500 3)。2009年、WHOは、臨床的なデング病を、 (i) 危険信号を伴うもしくは伴わないデング病または(ii) 重度のデング病に分類する新しいガイドラインを発行した。両方の分類が、Srikiatkachorn et al., Clin. Infect. Dis. (2011) 53(6): 563の図1および2に示されている。先の分類によれば、デング熱は、頭痛、関節痛、後眼窩痛、発疹、筋肉痛、出血性の症状および白血球減少症から選択される少なくとも2つの症候によって特徴づけられ、支持的な血清検査または確認された他のデング症例と同じ場所および時間での発症であることを伴う。デング出血熱への進行は、熱、出血性の症状、血小板減少症および血漿漏出の証拠が全て観察された場合に確認される。最近の分類によれば、デング病と診断するためには、発熱ならびに、悪心、嘔吐、発疹、疼痛(ache)および痛み(pain)、駆血帯試験陽性または、腹痛および圧痛、持続性の嘔吐、臨床的な体液貯留、粘膜出血、傾眠または不穏状態、2cmを超える肝臓の肥大または血小板数の急速な減少と同時発生する、ヘマトクリットの増加から選択されるいずれかの危険信号が必要とされる。以下のいずれかが発症した場合、重度のデング病と診断される:ショックまたは呼吸促迫を引き起こす血漿漏出、医師の評価による重度の出血または重度の臓器合併症。
(i) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされるウイルス学的に確認される症候性のデング病の、発症頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防;
(ii) 血清型1、3または4のいずれか1つのデングウイルスにより引き起こされるウイルス学的に確認される症候性のデング病の発症頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防;
(iii) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされる症候性のデング病の発症頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防;
(iv) 血清型1、3または4のいずれか1つのデングウイルスにより引き起こされる症候性のデング病の発症頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防;
(v) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされる重度のウイルス学的に確認されるデング病の発症頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防;
(vi) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされる重度のデング病の発症頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防;
(vii) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされる、グレードI〜IVのデング出血熱の発症頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防;
(viii) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされるグレードIのDHFの発症頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防;
(ix) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされるグレードIIのDHFの発症頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防;
(x) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされるグレードIIIのDHFの発症頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防;
(xi) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされるグレードIVのDHFの発症頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防;
(xii) 発熱頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防または発熱の平均の持続期間および/または程度の低下;
(xiii) ヘマトクリットの変化により規定される血漿漏出の発症頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防、またはヘマトクリットの変化により規定される血漿漏出の平均値の低下;
(xiv) 血小板減少症の発症頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防または血小板減少症の平均値の低下;
(xv) アラニンアミノ基転移酵素(ALT)およびアスパラギン酸アミノ基転移酵素(AST)を含む肝臓酵素のレベル上昇の発症頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防;
(xvi) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされるウイルス学的に確認されるデング病による入院の頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防;
(xvii) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされるデング病による入院の頻度または可能性の統計学的に有意な低下、例えば予防;
(xviii) ウイルス学的に確認されるデング病による病院滞在の長さの統計学的に有意な低下;
(xix) デング病による病院滞在の長さの統計学的に有意な低下。
本発明によって、ヒト対象のデング病に対する保護において、ワクチン組成物の有効性を初めて示したものである。
(i) 以下からなる群から選択されるデング抗原:
(a) 弱毒化生デングウイルス;
(b) 不活化デングウイルス;
(c) 弱毒化生または不活化キメラデングウイルス;
(d) デングウイルス様粒子 (VLP); および
(e) (a)〜(d)の2つ以上の組合せ;
または
(ii) デングVLPであるデング抗原をヒト細胞で発現させることのできる核酸構築物またはウイルスベクター
を含む。
i) 血清型1の該デング抗原は、YF/デングキメラデングウイルス (すなわち、YFウイルスの、prMおよびE蛋白質のコード配列が、デング血清型1ウイルスの相当する配列に置きかえられることによって、YFウイルスの遺伝子骨格が修飾を受けているレシピエント黄熱ウイルス)であり;
ii) 血清型2の該デング抗原が、配列番号24に示す配列と少なくとも90%の配列同一性を示す核酸配列を含む、血清型2の弱毒化生デングウイルスであり;
iii) 血清型3の該デング抗原が、YF/デングキメラデングウイルス(すなわち、YFウイルスのprMおよびE蛋白質のコード配列が、デング血清型3ウイルスの相当する配列に置きかえられることによって、YFウイルスの遺伝子骨格が修飾されているレシピエント黄熱ウイルス)であり、そして、
iv) 血清型4の該デング抗原が、YF/デングキメラデングウイルス(すなわち、YFウイルスのprMおよびE蛋白質のコード配列が、デング血清型4ウイルスの相当する配列に置きかえられることによって、YFウイルスの遺伝子骨格が修飾されているレシピエント黄熱ウイルス)である、
ワクチン組成物を有利に提供する。
i) 血清型1の該デング抗原がCYD−1以外のYF/デングキメラデングウイルスであるか、または血清型1の該デング抗原がCYD−1であり;
ii) 血清型2の該デング抗原が、配列番号24に示す配列と少なくとも90%の配列同一性を示す核酸配列を含む、血清型2の弱毒化生デングウイルスであり、ここで、血清型2の該デング抗原は、配列番号24に示す配列と100%の配列同一性を示す核酸配列を含む、血清型2の弱毒化生デングウイルスではないか、または、血清型2の該デング抗原が、配列番号24に示す配列と100%の配列同一性を示す核酸配列を含む、血清型2の弱毒化生デングウイルスであり;
iii) 血清型3の該デング抗原が、CYD−3以外のYF/デングキメラデングウイルスであるか、または、血清型3の該デング抗原がCYD−3であり;
iv) 血清型4の該デング抗原がCYD−4以外のYF/デングキメラデングウイルスであるか、または血清型4の該デング抗原がCYD−4である。
(i) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされる症候性のウイルス学的に確認されるデング症例のパーセンテージ;
(ii) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされる重度のウイルス学的に確認されるデング症例のパーセンテージ;
(iii) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされるグレードI〜IVのデング出血熱の症例のパーセンテージ;
(iv) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされるグレードIのDHF症例のパーセンテージ;
(v) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされるグレードIIのDHF症例のパーセンテージ;
(vi) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされるグレードIIIのDHF症例のパーセンテージ;
(vii) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされるグレードIVのDHF症例のパーセンテージ;
(viii) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされるウイルス学的に確認されるデングの年間の入院率; および/または
(ix) 任意の血清型のデングウイルスにより引き起こされる症候性のウイルス学的に確認されるデング症例についての、入院期間の長さ;
を決定し、該数値を、該ワクチン組成物の投与を受けていない対象の対照群の相当する数値と比較することにより算出でき、ここで、両方の群の対象はともに、デング流行地域に居住している。非ワクチン接種対照群の対象と比較した場合に、ワクチン接種群の対象の(i)〜(ix)のいずれか1つ以上が統計学的に有意に低下していれば、本発明のワクチン組成物が有効であることが示される。好ましい実施態様において、本発明のワクチン組成物の有効性は、上述の数値の1つ以上が統計学的に有意に低下していることによって示され、ここで、DHF症例またはデング症例は、血清型1、3または4のデングウイルスによって引き起こされる。
(i) 熱の平均持続期間および/または程度;
(iii) ヘマトクリットの変化により規定される血漿漏出の平均値;
(iii) 血小板減少(血小板数)の平均値;および/または
(iv) アラニンアミノ基転移酵素(ALT)およびアスパラギン酸アミノ基転移酵素(AST)を含む肝臓酵素レベルの平均値
を決定し、これらの数値を、該ワクチン組成物の投与を受けず、ウイルス学的に確認されるデング病を発症した対象の対照群における相当する数値と比較することにより算出し得る。ウイルス学的に確認されるデング病を発症した対象による対照群と比較した場合に、ウイルス学的に確認されるデング病を発症したワクチン接種対象群において、(i)〜(v)のいずれか1つ以上が統計学的に有意に低下していれば、本発明のワクチン組成物が、デング病の重症度または発症の可能性の低下に有効であることが示される。
[発明1]
デング病に対するヒト対象の保護方法に使用するためのワクチン組成物であって、以下:
(i) 以下からなる群から選択されるデング抗原:
(a) 弱毒化生デングウイルス;
(b) 不活化デングウイルス;
(c) 弱毒化生、または不活化キメラデングウイルス;
(d) デングウイルス様粒子 (VLP); および
(e) (a)〜(d)の2つ以上の組合せ;
または
(ii) ヒト細胞において、デングVLPであるデング抗原を発現させることのできる核酸構築物またはウイルスベクター
を含む、ワクチン組成物。
[発明2]
該ヒトが4〜11歳である、発明1記載の、使用するための組成物。
[発明3]
該対象がデング流行地域に居住している、発明1または2記載の、使用するための組成物。
[発明4]
該対象が、フラビウイルス免疫性である、発明1〜3のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明5]
該対象がフラビウイルスナイーブである、発明1〜4のいずれかに記載の、使用するための組成物。
[発明6]
該方法によって、デング病の発症頻度または可能性が低下する、発明1〜5のいずれか記載の方法に使用するための組成物。
[発明7]
デング病がウイルス学的に確認されるものである、発明1〜6のいずれか記載の方法に使用するための組成物。
[発明8]
該デング病が、血清型1、血清型3または血清型4のデングウイルスにより引き起こされる、発明1〜7のいずれか記載の方法に使用するための組成物。
[発明9]
該方法が該組成物を複数回投与することを含む、発明1〜8のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明10]
該方法が該組成物を3回以上投与することを含む、発明8記載の、使用するための組成物。
[発明11]
1回目の投与と3回目の投与が約12ヶ月の間隔をおいて投与される、発明8または9記載の、使用するための組成物。
[発明12]
該方法が、1回目、2回目および3回目に投与することを含み、2回目の投与を1回目の投与から約6ヶ月後に行い、3回目の投与を1回目の投与の約12ヶ月後に行う、発明8〜10のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明13]
該組成物が血清型1のデング抗原、血清型2のデング抗原、血清型3のデング抗原および血清型4のデング抗原を含む、発明1〜12のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明14]
該組成物が、弱毒化生デングウイルスまたは弱毒化生キメラデングウイルスを含む、発明1〜13のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明15]
血清型1、2、3および4の該デング抗原が、それぞれ、弱毒化生デングウイルスまたは弱毒化生キメラデングウイルスから独立して選択される、発明13記載の、使用するための組成物。
[発明16]
血清型1、3および4のデング抗原がそれぞれ、弱毒化生キメラデングウイルスであり、血清型2のデング抗原が、弱毒化生デングウイルスおよび弱毒化生キメラデングウイルスからなる群から選択され、好ましくは弱毒化生デングウイルスである、発明15記載の、使用するための組成物。
[発明17]
血清型2のデング抗原が、配列番号24で示す配列に、少なくとも90%の配列同一性を示す核酸配列を含む、弱毒化生デングウイルスである、発明16記載の、使用するための組成物。
[発明18]
血清型1、2、3および4のデング抗原がそれぞれ、弱毒化生キメラデングウイルスである、発明15記載の、使用するための組成物。
[発明19]
弱毒化生キメラデングウイルスを含む、発明1〜18のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明20]
該キメラデングウイルスが、デングウイルス由来の1つ以上の蛋白質と、異なるフラビウイルス由来の1つ以上の蛋白質とを含む、発明1〜19のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明21]
該キメラデングウイルスが、1つの血清型のデングウイルス由来の1つ以上の蛋白質と、他の血清型のデングウイルス由来の1つ以上の蛋白質とを含む、発明1〜19のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明22]
異なるフラビウイルスが、黄熱ウイルスである、発明19または20記載の、使用するための組成物。
[発明23]
黄熱ウイルスが、株YF17Dである、発明21または22記載の、使用するための組成物。
[発明24]
該キメラデングウイルスが、デングウイルスのprM−E配列を含む、発明13〜23のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明25]
該キメラデングウイルスが、prM−E配列がデングウイルスのprM−E配列で置換された、黄熱ウイルスのゲノムを含む、発明13〜20および22〜24のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明26]
CYD−1、CYD−2、CYD−3およびCYD−4のprM−E配列を含む、発明13〜25のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明27]
CYD−1、CYD−2、CYD−3およびCYD−4を含む、発明13〜20および22〜26のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明28]
CYD−1、VDV−2、CYD−3およびCYD−4を含む、発明13〜17、19〜20および22〜25および21〜25のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明29]
少なくとも1つの血清型デングウイルスが、約10 3 〜約10 6 CCID 50 の量で存在する、発明13〜28のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明30]
少なくとも1つの血清型のデングウイルスが、約10 3 〜約10 7 CCID 50 の量で存在する、発明13〜28のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明31]
4つ全ての血清型のデングウイルスを含み、各血清型が、約10 3 〜約10 6 CCID 50 の量で存在する、発明27または29記載の、使用するための組成物。
[発明32]
4つの血清型全てのデングウイルスを含み、各血清型それぞれが、約10 3 〜約10 7 CCID 50 の量で存在する、発明30記載の、使用するための組成物。
[発明33]
少なくとも1つの血清型のデングウイルスが、約10 5 CCID 50 の量で存在する、発明13〜32のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明34]
少なくとも1つの血清型のデングウイルスが、約10 6 CCID 50 の量で存在する、発明13〜32のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明35]
4つ全ての血清型のデングウイルスを含み、それぞれの血清型が約10 5 CCID 50 で存在する、発明31記載の、使用するための組成物。
[発明36]
該組成物が4つ全ての血清型のデングウイルスを含み、それぞれの血清型が約10 6 CCID 50 の量で存在する、発明32記載の、使用するための組成物。
[発明37]
該組成物が凍結乾燥されている、発明1〜36のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明38]
該方法が、ヒト対象に皮下経路を介して投与することを含む、発明1〜37のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明39]
薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、発明1〜38のいずれか記載の、使用するための組成物。
[発明40]
デング病に対してヒト対象を保護する方法であって、該ヒト対象に、発明1〜39のいずれか記載の組成物を有効量投与することを含む、方法。
[発明41]
発明1〜39のいずれか記載の組成物と、デング病に対してヒト対象を保護する方法において該組成物を用いるための使用説明書とを含むキット。
本明細書に記載する、本発明の種々の特徴および好ましい実施態様は、組み合わせてもよいことは理解される。
方法:
試験計画および参加者
ウイルス学的に確認されたデング病に対する、四価ChimerivaxTMワクチン (すなわち、DEN1 PU0359(TYP 1 140)のprMおよびE配列から作成した特定のCYD−1株、DEN2 PUO218のprMおよびE配列から作成した特定のCYD−2株、DEN3 PaH881/88のprMおよびE配列から作成した特定のCYD−3株ならびにDEN4 1228(TVP 980)のprMおよびE配列から作成した特定のCYD−4株を含む四価のワクチン、国際公開第03/101397号およびGuy et al., Vaccine (2011), 29(42): 7229-41参照) の有効性についての観察者盲検(observer-blind)、無作為化、対照、単一中心(monocentric)、フェーズIIb試験を行う。病歴および健康診断に基づいて、健康状態の良い4〜11歳の就学児童4002人を、該試験に登録する。該試験は、Ratchaburi Regional Hospital (RRH)(Ratchaburi province, Muang district, Thailand)にて行う。登録時に急性の熱性の疾病を発症した児童、先天性もしくは後天性の免疫不全を示す児童、および免疫抑制療法または他の禁止された処置もしくはワクチンの投与を受けている児童を除外する。参加者を、0、6および12ヶ月の時点で、デングワクチンの投与を3回受けるか、または対照調製物の投与を受けるように、無作為に2:1に割り当てる。
以下の文献に記載されているように、キメラウイルスをそれぞれ作成し、Vero細胞で培養する:国際公開第03/101397号, Guy et al, Hum. Vaccines (2010) 6 (9): 696; Guy et al, Vaccine (2010) 28: 632; Guirakhoo et al, J. Virol. (2000) 74 : 5477 ; Guirakhoo et al, J. Virol. (2001) 75 (16) : 7290 ; Guirakhoo et al, Virol. (June 20, 2002) 298: 146; およびGuirakhoo et al, J. Virol. (2004) 78 (9): 4761。
学期の間の欠席についての出席簿による毎日の調査(欠席者の電話および家庭訪問による追跡)ならびに、学校休暇中の2週間毎の家庭訪問、電話または携帯電話のテキストメッセージに基づいて、急性の熱性疾病を検出するために、全ての児童を積極的に監視する。熱性の疾病(少なくとも4時間間隔をあけて、37.5℃以上の体温が2回測定される疾病として定義される)のいずれの場合においても、診断および処置のために、児童をRRHで受診させるように親に依頼する。該調査システムはまた、RRHでの自発的な受診も捕捉する。14日間以上の無症候期間で分けられる連続的な発熱エピソードは、別々のエピソードと見なす。発症時 (すなわち、発熱から7日以内に採取した、急性期の試料) および7〜14日後(回復期の試料)で一対の血清試料として、Sanofi Pasteur’s Global Clinical Immunology (GCI) laboratory (Swiftwater, PA, USA) およびCentre for Vaccine Development (CVD, Mahidol University, Thailand)に送る。急性期の試料は、フラビウイルスの有無を検定するフラビウイルスの保存性の高い配列からなるプライマーを用いた初期RT−PCRアッセイによって、フラビウイルスの有無についてスクリーニングを行う。陽性の試料を、本明細書に記載する、血清型特異的な定量RT−PCRによって、野生型デングウイルスについて試験する。並行して、全ての急性期試料を、市販のELISAキット(PlateliaTM, Bio-Rad Laboratories, Marnes-La-Coquette, France)を用いて、デングNS1抗原の有無について試験する。ウイルス学的に確認されるデング病のエピソードは、血清型特異的なRT−PCRまたはNS1抗原ELISAの結果が陽性であることで定義する。
第一の目的は、登録し、計画通りにワクチン接種した児童のうち、3回目の接種後28日より後の時点で症候性のウイルス学的に確認されるデングを発症している例に対するワクチンの有効性(VE)を、以下の式によって決定することである:
VE =100*(1-IDCYD/ID対照)
[式中、IDは、各群における罹患密度(すなわち、ウイルス学的に確認されるデングを発症している児童数を、リスク人年の数で割った値)である。]。推定疾患発症率が1.3%、真(true)VEが70%、3回目のワクチン接種後の経過観察期間が最短で1年であり、PP対象の減少率が7.5%/年である場合、デングワクチン接種群または対照群に2:1で割り当てられた4002人の対象は、VEがヌルでないことを、82%より高い検出率および95%の信頼性で示す必要がある。解析は、VEの両側95%信頼区間(CI)に基づき、Exact method (Breslow NE, Day NE. Statistical Methods in Cancer Research, Volume II−The Design and Analysis of Cohort Studies. International Agency for Research on Cancer (IARC scientific publication No. 82), Lyon, France)を用いて算出する。第一の解析を、PP集団、すなわち、登録基準を満たす集団について行い、この集団は、0、6ヶ月(±15日)、12ヶ月(±30日)の時点で、割り当てられた3回のワクチン接種を正確に全て受け、該群への割り当ては知らされていない。この解析を、有効性について、最大の解析対象集団(FAS集団:Full Analysis Set)に対して繰り返し、この集団は3回の注射を受ける。第二の目的として、デングに対するVEを、3回のワクチン接種レジメンが完了する前に決定する。盲検解除後の解析において、各血清型に対するVEをそれぞれ調べる。安全性および免疫原性のエンドポイントについてのそれぞれの解析は、95%信頼区間を用いて表す。
登録した4002人の児童のうち、95.9%がワクチン接種を完了し、91.8%が、有効性についてのPP解析集団(per protocol analysis set)に含まれる。ワクチン接種群および対照群は、年齢および性別について同程度である。ベースラインにて試料採取したうちの90%より多くが、デングまたはJEVに対する抗体について陽性である。
試験の間の131のデング症例(131人の児童が136例の発症を示した) が、ウイルス学的に確認されるものである。これらのうちの77例は、PP集団の3回目の投与の28日目より後で発症し、第一の解析に含まれ:ワクチン接種群において、リスク人年2522の中で、45例が発症し、一方、対照群では、リスク人年1251の中で32例が発症した。相当するワクチン有効性は、30.2% (95%CI: −13.4〜56.6)である。このことは、FAS集団において確認される(以下の表1参照)。少なくとも1回注射を行った後の有効性は、33.4% (95%CI: 4.1〜53.5)であり、少なくとも2回注射を行った後では、35.3% (95%CI: 3.3〜56.5)である。
PP解析集団における、3回目の注射から28日目の、デング血清型1〜4に対する中和抗体の幾何平均力価(GMT) は、ワクチン接種群ではそれぞれ146 (95%CI: 98.5〜217)、310 (224〜431)、405 (307〜534)および155 (123〜196)である。対照群では、これらの値は、23.9 (14.0〜40.9)、52.2 (26.8〜102)、48.9 (25.5〜93.9)および19.4 (11.6〜32.2)である。1年後のGMTは、血清型1、2、3および4に対してそれぞれ76.5; 122; 94および153である。
該試験の間に、584のSAEが見られ: その中の366例は、ワクチン接種群の11.8% (315/2666)の参加者により報告されたものであり、218例は、対照群の13.2% (176/1331)の参加者により報告されたものである。デング群には、ワクチン関連性のSAEは全く見られず、対照群では1例が見られる。観察されるSAEは、年齢群と一致する医学的症状であり、ワクチン接種後7日または28日以内では、クラスタリングを示さない。
試験においてDEN−2症例を引き起こす野生型の血清型2のprM−E領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を決定する。これらを、以下にそれぞれ配列番号1および配列番号2として示す。試験においてDEN−2症例を引き起こす血清型2株のEおよびMのアミノ酸配列を、それぞれ配列番号18および23として示す。
>ヌクレオチド配列 (配列番号1)
ttccatctaaccacacgcaacggagaaccacacatgatcgtcggtatacaggagaaagggaaaagtcttctgttcaaaacagaggatggtgtgaacatgtgcaccctcatggctatggaccttggtgaattgtgtgaagacacaatcacgtacaagtgtcctcttctcaggcagaatgagccagaagacatagactgttggtgcaactccacgtccacgtgggtaacctatgggacctgtaccactacgggagaacataggagagaaaaaagatcagtggcactcgttccacatgtgggaatgggactggagacgcgaaccgaaacatggatgtcatcagaaggggcttggaaacatgcccagagaattgaaacttggatcctgagacatccaggcttcaccataatggcagcaatcctggcatacaccataggaacgacacatttccagagagtcctgattttcatcctactgacagctgtcgctccttcaatgacaatgcgttgcataggaatatcaaatagagactttgtagaaggggtttcaggaggaagttgggttgacatagtcttagaacatggaagctgtgtgacgacgatggcaaaaaacaaaccaacattggatttcgaactgataaaaacggaagccaaacagcctgccaccctaaggaagtactgcatagaagcaaaactaaccaacacaacaacagaatcccgttgcccaacacaaggggaacccagcctaaaagaagagcaggacaagaggttcgtctgcaaacactccatggtagacagaggatggggaaatggatgtggattatttggaaagggaggcattgtgacctgtgctatgttcacatgcaaaaagaacatggaagggaaaatcgtgcaaccagaaaacttggaatacaccattgtggtaacacctcactcaggggaagagcatgcggtcggaaatgacacaggaaaacacggcaaggaaatcaaagtaacaccacagagttccatcacagaagcagaactgacaggttatggcaccgtcacgatggagtgctccccgagaacaggcctcgacttcaatgagatggtgttgctgcagatggaaaataaagcttggctggtgcataggcaatggtttctagacctgccattaccatggctgcccggagcggataaacaagaatcaaattggatacagaaagaaacattggtcactttcaaaaatccccatgcgaagaaacaggatgttgttgttttaggatcccaagaaggggccatgcatacagcactcacaggagccacagaaatccaaatgtcgtcaggaaacttgctcttcactggacatctcaagtgcaggctgagaatggacaagctacagcttaaaggaatgtcatactctatgtgcacaggaaagtttaaagttgtgaaggaaatagcagaaacacaacatggaacgatagttatcagagtgcaatatgaaggggacggctctccatgtaaaattccttttgagataatggatttggaaaaaagatatgtcttaggccgcctgatcacagtcaacccaattgtaacagaaaaagacagcccagtcaacatagaagcagaacctccattcggagacagttacatcatcataggagtagagccgggacaactgaagctcaactggttcaagaaaggaagttctatcggccaaatgtttgagacaacgatgagaggggcgaagagaatggccattttgggtgacacagcctgggacttcggatccctgggaggagtgtttacatctataggaaaagctctccaccaagtctttggagcgatctatggggctgccttcagtggggtttcatggaccatgaaaatcctcataggagtcattatcacatggataggaatgaactcacgcagcacctcactgtctgtgtcactggtactggtgggaattgtgacactgtatttaggagtcatggtgcaggcc
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この試験で主に明らかにされたことは、キメラCYDウイルスに基づいた、デングウイルスに対する安全で有効なワクチンが可能であるということである。DENV1、3および4に対する推定有効性は、仮定の70%に相当する範囲であり、少なくとも1回のワクチン接種の後において統計学的に有意である。DENV2に対しては、仮定の70%に相当する範囲の有効性は観察されていない。DENV2は、この試験において流行している血清型であるため、この条件における、全体的なワクチン有効性が減少している。
本実施例の目的は、血清型2のデングウイルスに対して最適なデングワクチン組成物を作成するための基礎をもたらす、血清型2のデングウイルス株を特定することであり、ここで、該最適デングワクチン組成物は、本発明の方法で用いた場合に、ChimerivaxTM CYD−2と比較して、有効性を改善する。
データベース
配列は、NCBI(National Center for Biotechnology Information)デングウイルスバリエーションのデータベースより検索する
(www.ncbi.nlm.nih.gov/genomes/VirusVariation/Database/nph-select.cgi?tax_id=12637)。
配列比較は、MUSCLEアルゴリズム (Edgar, R. C. (2004) MUSCLE: multiple sequence alignment with high accuracy and high throughput. Nucleic Acids Res, 32(5):1792-1797)を用いて行う。
prM−E配列に含まれるサブ配列は、様々な方法で番号付けを行ってよい: (i) 全長のprM-E蛋白質配列は、1番〜661番まで番号を付け、preM蛋白質の配列を1番〜90/91番とし、M蛋白質の配列を91/92番〜166番ならびに、E蛋白質の配列を167番〜661番とする; (ii) prMおよびM蛋白質の配列は、まとめて番号を付け、すなわち、全配列の1番〜166番まで番号を付け、E蛋白質は別に1〜495番とする; (iii) prM、MおよびE配列に別々に番号を付ける、すなわち、prMを1番〜90/91番、Mを1番〜75/76番およびEを1番〜495番とする。
公知配列検索
入手可能な全ての血清型2のデングウイルスの全長のprMおよびE蛋白質の配列を、NCBIデングデータベースからダウンロードする。配列のダウンロードは、2回の別々の機会、2010年10月4日と2011年に行った。1回目には、669の配列をダウンロードし、2回目には約3200の配列をダウンロードした。
それぞれの場合に、検索した蛋白質の配列を全て並列比較して、血清型2のデングウイルスのprMおよびE蛋白質のグローバルコンセンサス配列を作成する。グローバルコンセンサス配列は、定義によれば、各位置に最も頻度の高いアミノ酸を含む、人工配列である。2010年の配列比較についてのグローバルコンセンサス配列と、2011年の配列比較についてのグローバルコンセンサス配列は、2つのアミノ酸においてのみ異なる。2010年の配列比較では、グローバルコンセンサス配列は、E蛋白質の第129番および第308番の位置にそれぞれイソロイシンおよびバリンを含み(E配列を1〜495番と番号付け)、対照的に、2011年の配列比較では、グローバルコンセンサス配列は、E蛋白質の第129番と第308番の位置にそれぞれバリンおよびイソロイシンを含む(E配列は、1〜495番と番号付け)。2010年と2011年のグローバルコンセンサス配列のかかる差異は、これらの位置に、バリンまたはイソロイシンを含む株のそれぞれのパーセンテージが50%に近いことにより説明がつく。したがって、prM−E配列のグローバルコンセンサス配列は以下の通りである:
可変アミノ酸の位置の一覧を、比較した配列において少なくとも5%で変異するアミノ酸の位置を全て含むグローバル配列比較から確立する。さらに、グローバルコンセンサス配列と一致しないChimerivaxTM CYD2のprMおよびE蛋白質の配列中の任意のアミノ酸の特定も行う。結果は表4に示す(注、表中、prMおよびM蛋白質配列はまとめて番号を付ける、すなわち全配列の第1番〜第166番であり、Eは、別に第1番〜第495番に番号を付ける)。
可変部位についてさらに洞察するために、免疫系による血清中和に最も重要なドメインである、E蛋白質外部ドメイン (アミノ酸1〜395)における変異をさらに解析する。
Gx Bx Mx DB
として算出する。スコアが0であれば、影響を及ぼさない、>0〜10であれば及ぼす影響が低い、>10〜25であれば、中程度の影響が予測される、>25であれば、高い影響が予測される、と分類される。
B= 100− [(Blosum95スコア + 6) x 10]
で算出され、種々のアミノ酸置換についてのBlosum95スコアは、以下の表5に示す通りである。
最適化血清型2株は、上述の選択基準に基づいて特定する。
>LAV−2 prMEヌクレオチド配列 (配列番号4)
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大文字: Eコード配列;小文字: prMコード配列
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>LAV2 prME蛋白質配列 (配列番号8)
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最適化血清型2株に相当するキメラデングウイルスの構築は、Chambers, et al. (1999, J.Virology 73(4):3095-3101)の記載に実質的にしたがって、ChimerivaxTM technologyを用いて達成する。CYD−1、CYD2、CYD−3およびCYD−4を構築する類似の方法について詳述している、国際公開第98/37911号、第03/101397号、第07/021672号、第08/007021号、第08/047023号および第08/065315号を参照してよい。端的には、最適化血清型2株に相当するキメラデングウイルスは以下のように構築する(注、最適化キメラデングウイルスは、YF株YF17D204 (YF−VAX(R), Sanofi-Pasteur, Swiftwater, PA, USA)の遺伝子骨格を用いて構築する)。
YF−VAX cDNAクローン−pJSY2284.1 (pACYC YF−Vax 5-3)の構築
YF−VAXの全長の感染性cDNAクローンを構築する。全長の感染性cDNAクローンは、YF−VAXの配列に基づく。全長のcDNAクローンを組み立てるために、低コピー数プラスミド(low copy number plasmid)pACYC177 (New England Biolabs, Inc., Ipswich, MA, USA)を用いる。
黄熱ワクチンYF−VAXをVero細胞で増殖させ、該ウイルス粒子を濃縮する。YF−VAXのウイルスRNAを、濃縮ウイルスから抽出し、cDNAコピーを逆転写により作成する。本明細書に記載する5種類のcDNA断片をPCRにより増幅し、TOPOクローニングを行い、配列を決定し、YF−VAX 2003の配列と比較する。各断片中に見られるPCRエラーは、部位特異的変異誘発もしくはフラグメントスイッチングにより修正する。TOPOクローニング後のNgo MI-Aat II断片は、非常に多くの配列の違いが見られるため、この断片はGeneArt(登録商標)により合成する。最終的に配列を確認した後、5つのDNA断片; Apa I-Mlu I、Mlu I-Sap I、Sap I-Ngo M1、Ngo MI-Aat II、およびAat II-Cla Iを単離し、プラスミドpJSY2284.1のユニーク部位であるApa I、Mlu I、Sap I、Ngo MI、Aat IIおよびCla Iサイトに段階的にクローニングしてプラスミドpJSY2374.5を得、これが正しい配列のYF−VAX全長cDNAを含んでいることを確認する。
戦略は、以前CYD−1、CYD−2、CYD−3およびCYD−4デングワクチンの構築を行ったように、ChimerivaxTM technologyを用いてYF−VAXゲノムを含むpJSY2374.5プラスミド中のYF−VAX(登録商標)ワクチン株のprMおよびE遺伝子を、LAV2株のものに置きかえることである。得られるプラスミドは、pSP1101である。
上述と同様の戦略を用いて、血清型2の株であるBID−V585、PR/DB023およびMD1280に相当するプラスミドを構築する。これらのプラスミドを、pSP1102 (BID−V585)、pSP1103 (PR/DB023) およびpSP1104 (MD1280)と称する。これらのプラスミドから作成したキメラウイルスを、CYD−BID、CYD−PRおよびCYD−MDと称する。作成したプラスミドについて配列決定解析を行うと、元の配列と比較して変異が全く見られない。
RNAの試験管内転写およびウイルスの作成は、以前記載したように行う (Guirakhoo F et al. J. Virol. 2001; 75:7290-304)。
本試験の目的は、CYD−1 (すなわち、DEN1 PU0359(TYP 1 140)のprMおよびE配列から作成した特定のCYD−1 (Chimerivax dengue serotype 1))、VDV2、CYD−3 (すなわち、DEN3 PaH881/88のprMおよびE配列から作成した特定のCYD−3(Chimerivax dengue serotype 3)株)およびCYD−4 (すなわち、DEN4 1228(TVP 980)のprMおよびE配列から作成した特定のCYD−4(Chimerivax dengue serotype 4)株)を含む混合四価デングワクチンの免疫原性およびウイルス血症を、CYD−1、CYD−2 (すなわち、DEN2 PUO218のprMおよびE配列から作成した特定のCYD−2(Chimerivax dengue serotype2)株)、CYD−3およびCYD−4を含む四価デングワクチンの免疫原性およびウイルス血症と比較することであった。この試験で用いた具体的なCYD−1、CYD−2、CYD−3およびCYD−4のさらなる詳細については実施例1を参照のこと。
>VDV2 ヌクレオチド配列 (配列番号24)
AGUUGUUAGUCUACGUGGACCGACAAAGACAGAUUCUUUGAGGGAGCUAAGCUCAAUGUAGUUCUAACAGUUUUUUAAUUAGAGAGCAGAUCUCUGAUGAAUAACCAACGGAAAAAGGCGAAAAACACGCCUUUCAAUAUGCUGAAACGCGAGAGAAACCGCGUGUCGACUGUGCAACAGCUGACAAAGAGAUUCUCACUUGGAAUGCUGCAGGGACGAGGACCAUUAAAACUGUUCAUGGCCCUGGUGGCGUUCCUUCGUUUCCUAACAAUCCCACCAACAGCAGGGAUAUUGAAGAGAUGGGGAACAAUUAAAAAAUCAAAAGCUAUUAAUGUUUUGAGAGGGUUCAGGAAAGAGAUUGGAAGGAUGCUGAACAUCUUGAAUAGGAGACGCAGAUCUGCAGGCAUGAUCAUUAUGCUGAUUCCAACAGUGAUGGCGUUCCAUUUAACCACACGUAACGGAGAACCACACAUGAUCGUCAGCAGACAAGAGAAAGGGAAAAGUCUUCUGUUUAAAACAGAGGUUGGCGUGAACAUGUGUACCCUCAUGGCCAUGGACCUUGGUGAAUUGUGUGAAGACACAAUCACGUACAAGUGUCCCCUUCUCAGGCAGAAUGAGCCAGAAGACAUAGACUGUUGGUGCAACUCUACGUCCACGUGGGUAACUUAUGGGACGUGUACCACCAUGGGAGAACAUAGAAGAGAAAAAAGAUCAGUGGCACUCGUUCCACAUGUGCGAAUGGGACUGGAGACACGAACUGAAACAUGGAUGUCAUCAGAAGGGGCCUGGAAACAUGUCCAGAGAAUUGAAACUUGGAUCUUGAGACAUCCAGGCUUCACCAUGAUGGCAGCAAUCCUGGCAUACACCAUAGGAACGACACAUUUCCAAAGAGCCCUGAUUUUCAUCUUACUGACAGCUGUCACUCCUUCAAUGACAAUGCGUUGCAUAGGAAUGUCAAAUAGAGACUUUGUGGAAGGGGUUUCAGGAGGAAGCUGGGUUGACAUAGUCUUAGAACAUGGAAGCUGUGUGACGACGAUGGCAAAAAACAAACCAACAUUGGAUUUUGAACUGAUAAAAACAGAAGCCAAACAGCCUGCCACCCUAAGGAAGUACUGUAUAGAGGCAAAGCUAACCAACACAACAACAGAAUCUCGCUGCCCAACACAAGGGGAACCCAGCCUAAAUGAAGAGCAGGACAAAAGGUUCGUCUGCAAACACUCCAUGGUAGACAGAGGAUGGGGAAAUGGAUGUGGACUAUUUGGAAAGGGAGGCAUUGUGACCUGUGCUAUGUUCAGAUGCAAAAAGAACAUGGAAGGAAAAGUUGUGCAACCAGAAAACUUGGAAUACACCAUUGUGAUAACACCUCACUCAGGGGAAGAGCAUGCAGUCGGAAAUGACACAGGAAAACAUGGCAAGGAAAUCAAAAUAACACCACAGAGUUCCAUCACAGAAGCAGAAUUGACAGGUUAUGGCACUGUCACAAUGGAGUGCUCUCCAAGAACGGGCCUCGACUUCAAUGAGAUGGUGUUGCUGCAGAUGGAAAAUAAAGCUUGGCUGGUGCACAGGCAAUGGUUCCUAGACCUGCCGUUACCAUGGUUGCCCGGAGCGGACACACAAGAGUCAAAUUGGAUACAGAAGGAGACAUUGGUCACUUUCAAAAAUCCCCAUGCGAAGAAACAGGAUGUUGUUGUUUUAGGAUCCCAAGAAGGGGCCAUGCACACAGCACUUACAGGGGCCACAGAAAUCCAAAUGUCAUCAGGAAACUUACUCUUCACAGGACAUCUCAAGUGCAGGCUGAGAAUGGACAAGCUACAGCUCAAAGGAAUGUCAUACUCUAUGUGCACAGGAAAGUUUAAAGUUGUGAAGGAAAUAGCAGAAACACAACAUGGAACAAUAGUUAUCAGAGUGCAAUAUGAAGGGGACGGCUCUCCAUGCAAGAUCCCUUUUGAGAUAAUGGAUUUGGAAAAAAGACAUGUCUUAGGUCGCCUGAUUACAGUCAACCCAAUUGUGACAGAAAAAGAUAGCCCAGUCAACAUAGAAGCAGAACCUCCAUUUGGAGACAGCUACAUCAUCAUAGGAGUAGAGCCGGGACAACUGAAGCUCAACUGGUUUAAGAAAGGAAGUUCUAUCGGCCAAAUGUUUGAGACAACAAUGAGGGGGGCGAAGAGAAUGGCCAUUUUAGGUGACACAGCCUGGGAUUUUGGAUCCUUGGGAGGAGUGUUUACAUCUAUAGGAAAGGCUCUCCACCAAGUCUUUGGAGCAAUCUAUGGAGCUGCCUUCAGUGGGGUUUCAUGGACUAUGAAAAUCCUCAUAGGAGUCAUUAUCACAUGGAUAGGAAUGAAUUCACGCAGCACCUCACUGUCUGUGACACUAGUAUUGGUGGGAAUUGUGACACUGUAUUUGGGAGUCAUGGUGCAGGCCGAUAGUGGUUGCGUUGUGAGCUGGAAAAACAAAGAACUGAAAUGUGGCAGUGGGAUUUUCAUCACAGACAACGUGCACACAUGGACAGAACAAUACAAAUUCCAACCAGAAUCCCCUUCAAAACUAGCUUCAGCUAUCCAGAAAGCCCAUGAAGAGGACAUUUGUGGAAUCCGCUCAGUAACAAGACUGGAGAAUCUGAUGUGGAAACAAAUAACACCAGAAUUGAAUCACAUUCUAUCAGAAAAUGAGGUGAAGUUAACUAUUAUGACAGGAGACAUCAAAGGAAUCAUGCAGGCAGGAAAACGAUCUCUGCGGCCUCAGCCCACUGAGCUGAAGUAUUCAUGGAAAACAUGGGGCAAAGCAAAAAUGCUCUCUACAGAGUCUCAUAACCAGACCUUUCUCAUUGAUGGCCCCGAAACAGCAGAAUGCCCCAACACAAAUAGAGCUUGGAAUUCGUUGGAAGUUGAAGACUAUGGCUUUGGAGUAUUCACCACCAAUAUAUGGCUAAAAUUGAAAGAAAAACAGGAUGUAUUCUGCGACUCAAAACUCAUGUCAGCGGCCAUAAAAGACAACAGAGCCGUCCAUGCCGAUAUGGGUUAUUGGAUAGAAAGUGCACUCAAUGACACAUGGAAGAUAGAGAAAGCCUCUUUCAUUGAAGUUAAAAACUGCCACUGGCCAAAAUCACACACCCUCUGGAGCAAUGGAGUGCUAGAAAGUGAGAUGAUAAUUCCAAAGAAUCUCGCUGGACCAGUGUCUCAACACAACUAUAGACCAGGCUACCAUACACAAAUAACAGGACCAUGGCAUCUAGGUAAGCUUGAGAUGGACUUUGAUUUCUGUGAUGGAACAACAGUGGUAGUGACUGAGGACUGCGGAAAUAGAGGACCCUCUUUGAGAACAACCACUGCCUCUGGAAAACUCAUAACAGAAUGGUGCUGCCGAUCUUGCACAUUACCACCGCUAAGAUACAGAGGUGAGGAUGGGUGCUGGUACGGGAUGGAAAUCAGACCAUUGAAGGAGAAAGAAGAGAAUUUGGUCAACUCCUUGGUCACAGCUGGACAUGGGCAGGUCGACAACUUUUCACUAGGAGUCUUGGGAAUGGCAUUGUUCCUGGAGGAAAUGCUUAGGACCCGAGUAGGAACGAAACAUGCAAUACUACUAGUUGCAGUUUCUUUUGUGACAUUGAUCACAGGGAACAUGUCCUUUAGAGACCUGGGAAGAGUGAUGGUUAUGGUAGGCGCCACUAUGACGGAUGACAUAGGUAUGGGCGUGACUUAUCUUGCCCUACUAGCAGCCUUCAAAGUCAGACCAACUUUUGCAGCUGGACUACUCUUGAGAAAGCUGACCUCCAAGGAAUUGAUGAUGACUACUAUAGGAAUUGUACUCCUCUCCCAGAGCACCAUACCAGAGACCAUUCUUGAGUUGACUGAUGCGUUAGCCUUAGGCAUGAUGGUCCUCAAAAUGGUGAGAAAUAUGGAAAAGUAUCAAUUGGCAGUGACUAUCAUGGCUAUCUUGUGCGUCCCAAACGCAGUGAUAUUACAAAACGCAUGGAAAGUGAGUUGCACAAUAUUGGCAGUGGUGUCCGUUUCCCCACUGUUCUUAACAUCCUCACAGCAAAAAACAGAUUGGAUACCAUUAGCAUUGACGAUCAAAGGUCUCAAUCCAACAGCUAUUUUUCUAACAACCCUCUCAAGAACCAGCAAGAAAAGGAGCUGGCCAUUAAAUGAGGCUAUCAUGGCAGUCGGGAUGGUGAGCAUUUUAGCCAGUUCUCUCCUAAAAAAUGAUAUUCCCAUGACAGGACCAUUAGUGGCUGGAGGGCUCCUCACUGUGUGCUACGUGCUCACUGGACGAUCGGCCGAUUUGGAACUGGAGAGAGCAGCCGAUGUCAAAUGGGAAGACCAGGCAGAGAUAUCAGGAAGCAGUCCAAUCCUGUCAAUAACAAUAUCAGAAGAUGGUAGCAUGUCGAUAAAAAAUGAAGAGGAAGAACAAACACUGACCAUACUCAUUAGAACAGGAUUGCUGGUGAUCUCAGGACUUUUUCCUGUAUCAAUACCAAUCACGGCAGCAGCAUGGUACCUGUGGGAAGUGAAGAAACAACGGGCCGGAGUAUUGUGGGAUGUUCCUUCACCCCCACCCAUGGGAAAGGCUGAACUGGAAGAUGGAGCCUAUAGAAUUAAGCAAAAAGGGAUUCUUGGAUAUUCCCAGAUCGGAGCCGGAGUUUACAAAGAAGGAACAUUCCAUACAAUGUGGCAUGUCACACGUGGCGCUGUUCUAAUGCAUAAAGGAAAGAGGAUUGAACCAACAUGGGCGGACGUCAAGAAAGACCUAAUAUCAUAUGGAGGAGGCUGGAAGUUAGAAGGAGAAUGGAAGGAAGGAGAAGAAGUCCAGGUAUUGGCACUGGAGCCUGGAAAAAAUCCAAGAGCCGUCCAAACGAAACCUGGUCUUUUCAAAACCAACGCCGGAACAAUAGGUGCUGUAUCUCUGGACUUUUCUCCUGGAACGUCAGGAUCUCCAAUUAUCGACAAAAAAGGAAAAGUUGUGGGUCUUUAUGGUAAUGGUGUUGUUACAAGGAGUGGAGC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非盲検、無作為化、比較対照、フェーズIIa試験において、18〜45歳の健康な成人150人が、デング非流行地域であるメキシコシティの2つの施設に登録した。主な除外基準は: 妊娠中または授乳中、ヒト免疫不全ウイルス、B型肝炎もしくはC型肝炎血清陽性、免疫不全または、結果に干渉し得る他の任意の慢性疾患、デング病の流行性が高い地域に以前住んでいた、もしくは2週間より長く滞在していた、フラビウイルス感染の病歴がある、もしくはフラビウイルス疾患に対するワクチン接種を受けたことがある、というものであった。妊娠可能な女性は、1回目の注射の少なくとも4週間前から、最後の注射の少なくとも4週間後まで、有効な避妊方法を用いるかもしくは禁欲することが必要であった。
群1: 混合CYD/VDV2四価製剤、すなわち、CYD−1、CYD−3、CYD4およびVDV2を含む製剤
群2: 対照四価製剤 (CYD−TDV)、すなわち、CYD−1、CYD−2、CYD−3およびCYD−4。
ワクチンの安全性を評価するために、各注射の7、14および21日後に、回収した血清中のCYD−1〜4またはVDV−2の有無を評価した。解析は、Global Clinical Immunology laboratory (Sanofi Pasteur, Swiftwater, PA, USA)により行った。
4つのデングウイルス血清型のそれぞれの抗体レベルを、それぞれの注射後28日目ならびに最初の注射の365日後に回収した血清についての50%プラーク減少中和試験によって決定した。端的には、熱で不活化した血清を倍数希釈し、一定の負荷用量の各デング血清型DEN−1、−2、−3または−4と混合した (プラーク形成ユニット [PFU]/mLとして表す)。該混合物を、24ウェルプレートの、単層Vero細胞がコンフルエントに播種されているウェルに播いた。数日間インキュベーションした後では、デングウイルスの感染が、プラークの形成により示される。中和抗体の力価を、ウイルスプラーク数の≧50%の減少が観察される血清の最も高い希釈率の逆数(1/希釈率) として算出する(PRNT50)。デングPRNT50の定量の下限は、10であり;力価が≧10である試料は、血清陽性とみなした。
製剤を、試験の0日目および105日目に、群1および2の参加者に投与した。1回目または2回目のワクチン接種後に、注射部位または全身の反応性について、2つの群の間で顕著な差異は見られなかった。ウイルス血症を、各注射後7、14および21日目に回収した血清中で評価した(表6)。中和抗体の力価を、各注射の28日後および1回目の注射後365日目に評価した(表7)。
Claims (13)
- デング病に対するヒト対象の保護方法に使用するためのワクチン組成物であって、該組成物が、血清型1のデング抗原、血清型2のデング抗原、血清型3のデング抗原および血清型4のデング抗原を含み;血清型1、2、3および4のデング抗原が、それぞれ、弱毒化生キメラデングウイルスであり;キメラデングウイルスが、prM−E配列がデングウイルスのprM−E配列で置換された、黄熱ウイルスのゲノムを含み;血清型1のデング抗原が、血清型1 PUO359株由来のprM−E配列を含み、血清型2のデング抗原が、血清型2 PUO218株由来のprM−E配列を含み、血清型3のデング抗原が、血清型3 PaH881/88株由来のprM−E配列を含み、血清型4のデング抗原が、血清型4 1228株由来のprM−E配列を含み;ヒト対象が、デング免疫対象であり;方法が、デングウイルスにより引き起こされる症候性のデング病の発症頻度または可能性の統計学的に有意な低下をもたらす、ワクチン組成物。
- ヒトが、9〜45歳である、請求項1記載の組成物。
- 対象が、デング流行地域に居住している、請求項1または2記載の組成物。
- デング病が、ウイルス学的に確認されるものである、請求項1〜3のいずれか一項記載の組成物。
- デング病が、血清型1、血清型3または血清型4のデングウイルスにより引き起こされる、請求項1〜4のいずれか一項記載の組成物。
- 方法が、組成物を複数回投与することを含む、請求項1〜5のいずれか一項記載の組成物。
- 方法が、組成物を3回以上投与することを含む、請求項6記載の組成物。
- 1回目の投与と3回目の投与が約12ヶ月の間隔をおいて投与される、請求項6または7記載の組成物。
- 方法が、組成物を1回目の投与、2回目の投与および3回目の投与で投与することを含み、2回目の投与を1回目の投与から約6ヶ月後に行い、3回目の投与を1回目の投与から約12ヶ月後に行う、請求項6〜8のいずれか一項記載の組成物。
- 各血清型が、約103〜約106 CCID50の量で存在する、請求項1〜9いずれか一項記載の組成物。
- 凍結乾燥されている、請求項1〜10のいずれか一項記載の組成物。
- 方法が、組成物をヒト対象に皮下経路により投与することを含む、請求項1〜11のいずれか一項記載の組成物。
- 薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、請求項1〜12のいずれか一項記載の組成物。
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