JP6829225B2 - モノアミン産生増加剤としての間葉系幹細胞を含む医薬組成物 - Google Patents
モノアミン産生増加剤としての間葉系幹細胞を含む医薬組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6829225B2 JP6829225B2 JP2018113184A JP2018113184A JP6829225B2 JP 6829225 B2 JP6829225 B2 JP 6829225B2 JP 2018113184 A JP2018113184 A JP 2018113184A JP 2018113184 A JP2018113184 A JP 2018113184A JP 6829225 B2 JP6829225 B2 JP 6829225B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mesenchymal stem
- cells
- stem cells
- pharmaceutical composition
- monoamine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 title claims description 48
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title description 39
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 title description 11
- DUUGKQCEGZLZNO-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxyindoleacetic acid Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 DUUGKQCEGZLZNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 50
- RVWZUOPFHTYIEO-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxyindoleacetic acid Natural products C1=C(O)C=C2C(C(=O)O)=CNC2=C1 RVWZUOPFHTYIEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 239000003310 5-hydroxyindoleacetic acid Substances 0.000 claims description 25
- FBWPWWWZWKPJFL-UHFFFAOYSA-N 3-Methoxy-4-hydroxyphenylethyleneglycol Chemical compound COC1=CC(C(O)CO)=CC=C1O FBWPWWWZWKPJFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 17
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 15
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 6
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 6
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 58
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 229940076279 serotonin Drugs 0.000 description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 15
- SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N (-)-norepinephrine Chemical compound NC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 11
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 10
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 10
- 229960002748 norepinephrine Drugs 0.000 description 10
- SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N norepinephrine Natural products NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 9
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 8
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 4
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 4
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 4
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 3
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 3
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000004003 subcutaneous fat Anatomy 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N adrenaline Chemical compound CNCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036592 analgesia Effects 0.000 description 2
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 2
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 2
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 2
- 230000037007 arousal Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 2
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 2
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 229940124834 selective serotonin reuptake inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000012896 selective serotonin reuptake inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000035037 5-HT3 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091005477 5-HT3 receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010001497 Agitation Diseases 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 206010007710 Cartilage injury Diseases 0.000 description 1
- 206010008874 Chronic Fatigue Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000000094 Chronic Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000020401 Depressive disease Diseases 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 1
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 1
- 206010062519 Poor quality sleep Diseases 0.000 description 1
- 102000019208 Serotonin Plasma Membrane Transport Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010012996 Serotonin Plasma Membrane Transport Proteins Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 description 1
- 230000001430 anti-depressive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000012223 aqueous fraction Substances 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical group OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000000994 depressogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 230000008451 emotion Effects 0.000 description 1
- 210000003890 endocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002322 enterochromaffin cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000004634 feeding behavior Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 1
- 208000013403 hyperactivity Diseases 0.000 description 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000027928 long-term synaptic potentiation Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000001767 medulla oblongata Anatomy 0.000 description 1
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 208000029766 myalgic encephalomeyelitis/chronic fatigue syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 1
- 239000002767 noradrenalin uptake inhibitor Substances 0.000 description 1
- 102000002574 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010068338 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 description 1
- -1 pH regulator Substances 0.000 description 1
- 210000005037 parasympathetic nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000002379 periodontal ligament Anatomy 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012113 quantitative test Methods 0.000 description 1
- 210000001609 raphe nuclei Anatomy 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 230000007958 sleep Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000012134 supernatant fraction Substances 0.000 description 1
- 230000002889 sympathetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 1
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002437 synoviocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000028016 temperature homeostasis Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 231100000732 tissue residue Toxicity 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/35—Fat tissue; Adipocytes; Stromal cells; Connective tissues
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/51—Umbilical cord; Umbilical cord blood; Umbilical stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Description
本発明は，セロトニン，ノルアドレナリン，それらの主要代謝産物のいずれかもしくは複数の濃度を，生体内で上昇させるための医薬組成物に関する。
特開2008-61569号公報には，セロトニン及びｐ３８ＭＡＰキナーゼ阻害剤を含む幹細胞増殖培地により間葉系幹細胞分化維持をはかる方法が記載されている。この公報では，セロトニンは，培地に添加される組成のひとつとして記載されている。
特許第5541845号公報には，間葉系幹細胞を含むアトピー性皮膚炎の治療剤が記載されている。
特許第6191694号公報には，間葉系幹細胞を含む軟骨損傷の治療剤が記載されている。
本発明は，血液および脳脊髄液を含む生体において，モノアミン系神経伝達物質の産生を促進する医薬組成物を提供することを目的とする。この組成物は，例えば，セロトニン，ノルアドレナリン，またはそれらの主要代謝産物のうちいずれかまたは複数の量を増加させる作用を有する。
上記の課題は，間葉系幹細胞を有効成分として含む医薬組成物が，血液および脳脊髄液などの生体内における，モノアミン系神経伝達物質やその主要代謝産物の産生を促進する作用を有するという実施例による知見に基づく。
本発明は，医薬組成物に関する。これを本発明の医薬組成物とよぶ。この医薬組成物は，医薬又は薬剤として機能する。この医薬組成物は，間葉系幹細胞を有効成分として含む。間葉系幹細胞の由来組織の例は，脂肪組織又は臍帯組織である。この医薬組成物は，治療や予防を含めた各種の目的（例えば筋肉増強，精神安定，鎮痛）を達成するために必要とされる有効量の間葉系幹細胞を含んでもよい。
本発明の医薬組成物は，神経伝達物質であるモノアミン，又はそのモノアミンの代謝産物の産生を促進するための医薬組成物である。この医薬組成物は，モノアミンが低下することによる諸症状や疾患の治療剤として利用できるほか，モノアミンが増加することによる生体機能の亢進剤としても利用できる。
神経伝達物質であるモノアミンの例は，セロトニン及びノルアドレナリンのいずれか又は両方である。そして，モノアミンの代謝産物の例は，５−ハイドロキシインドール酢酸（５−ＨＩＡＡ）及び３−メトキシ−４−ハイドロキシフェニルエチレングリコール（MHPG）のいずれか又は両方である。５−ハイドロキシインドール酢酸（５−ＨＩＡＡ）は，セロトニンの主要代謝産物である。一方，３−メトキシ−４−ハイドロキシフェニルエチレングリコール（MHPG）は，ノルアドレナリンの主要代謝産物である。
この医薬組成物は，モノアミンが低下することによる諸症状や疾患の治療剤として利用できるほか，モノアミンが増加することによる生体機能の亢進剤としても利用できる。具体的な用途例は，鎮痛剤及び筋肉増強剤である。
本発明の医薬組成物は，セロトニンおよびノルアドレナリン，またはそれらの主要代謝産物の量を増加させる作用を有する。このため，この医薬組成物は，モノアミン低下による諸症状や疾患の治療剤として，または，モノアミン増加による生体機能の亢進剤として，有用である。
本発明は，医薬組成物に関する。これを本発明の医薬組成物ともよぶ。この医薬組成物は，医薬，薬剤として機能する。この医薬組成物は，間葉系幹細胞を有効成分として含む。この医薬組成物は，治療や予防を含めた各種の目的（例えば筋肉増強，精神安定，鎮痛）を達成するために求められる有効量の間葉系幹細胞を含んでもよい。
間葉系幹細胞には，滑膜細胞，脂肪細胞，骨髄，歯髄，及び歯根膜等の成人の組織からだけでなく，胎盤，臍帯，臍帯血，及び胎児の種々の細胞等から単離されるものも含まれる。増殖工程において増殖させる間葉系幹細胞は，滑膜，臍帯，臍帯血，羊膜，骨髄，及び，脂肪組織からなる群より選択される組織由来であってもよい。間葉系幹細胞の由来組織が，脂肪組織又は臍帯組織であることが好ましい。
間葉系幹細胞は，医薬組成物を投与する患者の自家細胞であることが好ましいが，同種細胞であってもよい。また，間葉系幹細胞は，ヒト間葉系幹細胞であってもよいし，マウス，ラット，ネコ，イヌ等の非ヒト動物由来間葉系幹細胞であってもよい。各組織から間葉系幹細胞を単離する方法は，公知の方法を採用することが可能であり，例えば，コラゲナーゼ法によって組織から間葉系幹細胞を好適に分離することができる。
本発明の医薬組成物は，神経伝達物質であるモノアミン，又は前記モノアミンの代謝産物の産生を促進するための医薬組成物である。この医薬組成物は，モノアミンが低下することによる諸症状や疾患の治療剤として利用できるほか，モノアミンが増加することによる生体機能の亢進剤としても利用できる。
モノアミンの例は，セロトニン及びノルアドレナリンのいずれか又は両方である。そして，モノアミンの代謝産物の例は，５−ハイドロキシインドール酢酸（５−ＨＩＡＡ）及び３−メトキシ−４−ハイドロキシフェニルエチレングリコール（MHPG）のいずれか又は両方である。５−ハイドロキシインドール酢酸（５−ＨＩＡＡ）は，セロトニンの主要代謝産物である。一方，３−メトキシ−４−ハイドロキシフェニルエチレングリコール（MHPG）は，ノルアドレナリンの主要代謝産物である。
モノアミンと称される神経伝達物質は，構造にアミノ基を１つ有する物質であり，インドール骨格を有するセロトニン，そしてカテコール基を有するドーパミン，ノルアドレナリン，アドレナリンに代表される。一般的に，ドーパミンは快楽や喜びの感情に関連し，ノルアドレナリンは怒りや不安の感情に関連し，セロトニンはこれらのモノアミンの機能を制御する機能があるとされる。神経伝達物質として機能するこれらのモノアミンの受容体は，イオンチャネル型である５−ＨＴ３型受容体の他は，Gタンパク質共役型受容体である。
セロトニンは，必須アミノ酸のトリプトファンから合成され，消化管粘膜，血小板，及び脳にそれぞれ，90%，8%，2%程度存在する。腸においては，内分泌細胞の一種である，腸クロム親和性細胞がオータコイドとして分泌し，腸の蠕動運動を促進するため，腸におけるセロトニンの分泌低下は，便秘につながる。消化管で分泌されたセロトニンの一部は血小板に取り込まれる。一方で，脳内でセロトニンを合成するセロトニン神経の細胞体は，脳幹の縫線核に集中するが，その神経線維は中枢神経系に広く投射される。そのため，中枢神経系でセロトニンに制御される機能としては，体温調節，情動，認知機能，覚醒と睡眠，摂食行動など，多岐に渡る。
セロトニンをターゲットとした医薬品としては，選択的セロトニン再取込阻害薬（SSRI）や，セロトニン・ノルアドレナリン再取込阻害薬（SNRI）が存在する。これらは，セロトニントランスポーターを阻害することにより，シナプス間隙のセロトニン濃度を上昇させる抗鬱薬として使用される。鬱病患者の約３８％においては，セロトニン濃度の低下が認められ，これが鬱病の原因の１つとされている。これをモノアミン仮説という。
本発明の医薬組成物は，モノアミンが低下することによる諸症状や疾患の治療剤として利用できるほか，モノアミンが増加することによる生体機能の亢進剤としても利用できる。具体的な用途例は，鎮痛剤及び筋肉増強剤である。セロトニンは，覚醒作用，鎮痛作用，抗うつ作用などがあり，慢性疲労症候群や疼痛，抑うつなどに対して，本医薬組成物の有用性が考えられる。ノルアドレナリンは，心身の覚醒や興奮，交感神経を活性化する作用，昇圧作用，記憶を固定することに重要な，海馬におけるシナプス長期増強の正の制御，判断力や集中力の上昇，心筋の興奮性亢進，鎮痛作用，筋力増強作用などがあるため，疼痛，恐怖，不安，抑うつ，心不全，判断力低下，記憶力低下，筋力低下，副交感神経亢進などに対して，本医薬組成物の有用性が考えられる。
本発明の医薬組成物は，経口投与剤，ドリンク剤，錠剤，又は注射剤として投与できる。注射剤は，静脈内，筋肉内または皮下等に有効成分である医薬組成物を投与することができ，これらのうち静脈内投与がより好ましい。静脈内投与を行う場合，注射剤は，注射器から直接患者に投与してもよく，また点滴バッグ中で点滴液に先ず添加して患者に点滴静注を行ってもよい。
本発明の医薬組成物が注射剤又はドリンク剤の場合，間葉系幹細胞の他に，水，生理食塩水，溶媒，培養上清，ｐＨ調整剤，酸化防止剤（ビタミンＣ），及びトレハロースといった各種素材を含んでもよい。本発明の医薬組成物が錠剤の場合は，賦形剤，担体といった各種素材を含んでもよい。
本発明の医薬組成物の投与方式は，患者や投与対象の症状や目的の程度に応じて，単回投与でもよく，効果が現れるまで２回，又は３回以上の複数回投与を行ってもよい。
本発明の医薬組成物は，汎用の薬剤であることから，主成分として含有される間葉系幹細胞の起源に対して同種（allogeneic）である患者に投与されるのが一般であるが，同系である患者（例えば，間葉系幹細胞の採取源の一卵性双生児）に投与することを妨げるものではなく，また，培養による増殖を経て汎用のものとして製造された本発明の医薬組成物が，その間葉系幹細胞の採取源となったヒトに対して投与されることを妨げるものでもない。
上記投与時における，本発明の医薬組成物中のヒト間葉系幹細胞の密度は１×１０2〜１×１０9個／ｍＬとすることが好ましく，2×１０6〜2×１０7個／ｍＬとすることが更に好ましい。また，ヒトに対する同細胞の投与個数は，意図する投与回数にもよるが，通常，１回の投与につき１×１０5〜１×１０7個／ｋｇ体重の範囲であることが好ましい。但しこれに限られることなく，症状の程度に応じて適宜増減することができる。
本明細書は，間葉系幹細胞，又は間葉系幹細胞を有効成分として含む本発明の医薬組成物を対象に投与する工程を含む，対象の生体内において，神経伝達物質であるモノアミン，又はモノアミンの代謝産物の産生を促進する方法をも提供する。神経伝達物質であるモノアミン，又はモノアミンの代謝産物の産生が促進されたことは，例えば，医薬組成物を対象に投与する前後の対象の血液から分離した血漿，または脳脊髄液から，モノアミン，又はモノアミンの代謝産物の含有量（血中濃度）を測定して，比較することで確認すればよい。
１． 間葉系幹細胞移植によるラット生体中モノアミン濃度定量試験
１−１．間葉系幹細胞の調製：脂肪組織由来間葉系幹細胞（AD-MSC）
（１）初代培養（P0）
脂肪組織由来間葉系幹細胞を用いた再生医療を受ける患者より，投与用細胞の調製に必要な原料となる皮下脂肪組織を分取した後の余剰組織について，研究用利用用途の同意取得の後に皮下脂肪の提供を受け，初代培養に供した。皮下脂肪組織は遠心分離（４００×gで５分間）に供し，上から順に脂質画分，脂肪組織画分，および水性画分の３層に分離した。中層の脂肪組織画分を残して，上層と下層を破棄した。残した脂肪組織画分に対して，組織重量当たり４倍量の０．１５％コラゲナーゼ酵素溶液を添加し，３７℃で１時間浸透させ，酵素処理を行った。脂肪組織が分散された後, 遠心分離（４００×gで５分間）に供し，間葉系幹細胞を含む間質血管細胞画分として，沈殿画分を30 mLのPBS（-）溶液で懸濁した。その後，セルストレーナー（７０μm径）に懸濁液を通液し，通液画分を再度遠心分離（４００×gで５分間）に供し，セルストレーナーに捕捉された組織残渣等は破棄した。沈殿画分を６ mLの無血清培養液（Procul AD; ロート製薬）で懸濁し，T-25フラスコ（CellBIND（登録商標）; Corning）に全量を播種し，インキュベーター内（３７℃,５％ CO2）に静置して初代培養を開始した。
１−１．間葉系幹細胞の調製：脂肪組織由来間葉系幹細胞（AD-MSC）
（１）初代培養（P0）
脂肪組織由来間葉系幹細胞を用いた再生医療を受ける患者より，投与用細胞の調製に必要な原料となる皮下脂肪組織を分取した後の余剰組織について，研究用利用用途の同意取得の後に皮下脂肪の提供を受け，初代培養に供した。皮下脂肪組織は遠心分離（４００×gで５分間）に供し，上から順に脂質画分，脂肪組織画分，および水性画分の３層に分離した。中層の脂肪組織画分を残して，上層と下層を破棄した。残した脂肪組織画分に対して，組織重量当たり４倍量の０．１５％コラゲナーゼ酵素溶液を添加し，３７℃で１時間浸透させ，酵素処理を行った。脂肪組織が分散された後, 遠心分離（４００×gで５分間）に供し，間葉系幹細胞を含む間質血管細胞画分として，沈殿画分を30 mLのPBS（-）溶液で懸濁した。その後，セルストレーナー（７０μm径）に懸濁液を通液し，通液画分を再度遠心分離（４００×gで５分間）に供し，セルストレーナーに捕捉された組織残渣等は破棄した。沈殿画分を６ mLの無血清培養液（Procul AD; ロート製薬）で懸濁し，T-25フラスコ（CellBIND（登録商標）; Corning）に全量を播種し，インキュベーター内（３７℃,５％ CO2）に静置して初代培養を開始した。
（２）継代培養（P0→P1→P2→P3）
３日に１回の頻度で培地全交換を実施し，上澄みは破棄して，フラスコ底面上で増殖する細胞を選択的に増殖した。セミコンフルエントまで増殖したT-25フラスコの細胞に対して，2 mLの酵素溶液（TrypLE Secelt（登録商標）；Thermo Fisher Scientific）を添加し剥離した（３７℃，５分間静置）。細胞をPBS（-）で希釈し，遠心分離（４００×gで５分間）に供した。沈殿した細胞を培養液で懸濁し，トリパンブルー染色法による細胞数計測を行った結果，1.36×106個の生細胞が回収できたため，その全量をT-150フラスコ（CellBIND（登録商標）; Corning）２枚に等分して無血清培養液（Procul AD; ロート製薬）で全量を播種し，インキュベーター内（３７℃,５％ CO2）に静置して継代培養を行った（P0→P1）。
３日に１回の頻度で培地全交換を実施し，上澄みは破棄して，フラスコ底面上で増殖する細胞を選択的に増殖した。播種から3日目にセミコンフルエントまで増殖した細胞に対して，6 mLの酵素溶液（TrypLE Select（登録商標）；Thermo Fisher Scientific）を添加して剥離した（３７℃，５分間静置）。細胞をPBS（-）で希釈し，遠心分離（４００×gで５分間）に供した。沈殿した細胞を無血清培養液（Procul AD; ロート製薬）で懸濁し，トリパンブルー染色法による細胞数計測を行った結果，1.17×107個の生細胞を回収できたため，その一部を3.9×103/cm2細胞濃度でT-150フラスコ８枚に播種を行い継代した（P1→P2）。播種から3日目にセミコンフルエントまで増殖したことを確認後，同様の手順で細胞の回収を行った。その結果，生存率が95.2％であり，生細胞数を5.27×107個回収したことを確認し，凍結保存液（STEMCELL BANKER;日本全薬工業）に懸濁してラットへの投与日まで液体窒素タンクで保管した。
３日に１回の頻度で培地全交換を実施し，上澄みは破棄して，フラスコ底面上で増殖する細胞を選択的に増殖した。セミコンフルエントまで増殖したT-25フラスコの細胞に対して，2 mLの酵素溶液（TrypLE Secelt（登録商標）；Thermo Fisher Scientific）を添加し剥離した（３７℃，５分間静置）。細胞をPBS（-）で希釈し，遠心分離（４００×gで５分間）に供した。沈殿した細胞を培養液で懸濁し，トリパンブルー染色法による細胞数計測を行った結果，1.36×106個の生細胞が回収できたため，その全量をT-150フラスコ（CellBIND（登録商標）; Corning）２枚に等分して無血清培養液（Procul AD; ロート製薬）で全量を播種し，インキュベーター内（３７℃,５％ CO2）に静置して継代培養を行った（P0→P1）。
３日に１回の頻度で培地全交換を実施し，上澄みは破棄して，フラスコ底面上で増殖する細胞を選択的に増殖した。播種から3日目にセミコンフルエントまで増殖した細胞に対して，6 mLの酵素溶液（TrypLE Select（登録商標）；Thermo Fisher Scientific）を添加して剥離した（３７℃，５分間静置）。細胞をPBS（-）で希釈し，遠心分離（４００×gで５分間）に供した。沈殿した細胞を無血清培養液（Procul AD; ロート製薬）で懸濁し，トリパンブルー染色法による細胞数計測を行った結果，1.17×107個の生細胞を回収できたため，その一部を3.9×103/cm2細胞濃度でT-150フラスコ８枚に播種を行い継代した（P1→P2）。播種から3日目にセミコンフルエントまで増殖したことを確認後，同様の手順で細胞の回収を行った。その結果，生存率が95.2％であり，生細胞数を5.27×107個回収したことを確認し，凍結保存液（STEMCELL BANKER;日本全薬工業）に懸濁してラットへの投与日まで液体窒素タンクで保管した。
１−２．間葉系幹細胞の調製：臍帯組織由来間葉系幹細胞（UC-MSC）
（１）初代培養（P0）
通常分娩を行う産婦より同意を得て取得した臍帯組織を，採取の翌日に初代培養に供した。約10 cmの臍帯組織から臍帯血を除去した後，医療用メスで細断し，0.15 % Collagenase溶液に浸して37℃で16時間，シェーカーで緩やかに攪拌させながら酵素処理を行った。臍帯組織の分散を目視で確認した後，PBS(-)で10倍希釈を行った後，1,000×g, 5分の遠心分離に供し，沈殿画分を残して上層を破棄した。その後，沈殿画分をPBS(-)で懸濁した後，70μmのフィルターに供し，通液画分をコニカルチューブ２本に等分した後，400×g, 5分の遠心分離に供し，細胞を含む沈殿画分を，24 mLの無血清培養液（Procul AD; ロート製薬）培地で懸濁した。その後，T-150フラスコ（CellBIND（登録商標）; Corning）1枚に全量を播種し，インキュベーター内（３７℃,５％ CO2）に静置して初代培養を開始した。
（１）初代培養（P0）
通常分娩を行う産婦より同意を得て取得した臍帯組織を，採取の翌日に初代培養に供した。約10 cmの臍帯組織から臍帯血を除去した後，医療用メスで細断し，0.15 % Collagenase溶液に浸して37℃で16時間，シェーカーで緩やかに攪拌させながら酵素処理を行った。臍帯組織の分散を目視で確認した後，PBS(-)で10倍希釈を行った後，1,000×g, 5分の遠心分離に供し，沈殿画分を残して上層を破棄した。その後，沈殿画分をPBS(-)で懸濁した後，70μmのフィルターに供し，通液画分をコニカルチューブ２本に等分した後，400×g, 5分の遠心分離に供し，細胞を含む沈殿画分を，24 mLの無血清培養液（Procul AD; ロート製薬）培地で懸濁した。その後，T-150フラスコ（CellBIND（登録商標）; Corning）1枚に全量を播種し，インキュベーター内（３７℃,５％ CO2）に静置して初代培養を開始した。
（２）継代培養（P0→P1→P2）
2日に１回の頻度で培地全交換を実施し，上澄みは破棄して，フラスコ底面上で増殖する細胞を選択的に増殖した。セミコンフルエントまで増殖したT-150フラスコの細胞に対して，6mLの酵素溶液（TrypLE Select（登録商標）；Thermo Fisher Scientific）を添加し剥離した（３７℃，５分間静置）。細胞をPBS（-）で希釈し，遠心分離（４００×gで５分間）に供した。沈殿した細胞を培養液で懸濁し，トリパンブルー染色法による細胞数計測を行った結果，4.33×106個の生細胞が回収できたため，その全量をT-150フラスコ（CellBIND（登録商標）; Corning）5枚に等分して無血清培養液（Procul AD; ロート製薬）で全量を播種し，インキュベーター内（３７℃,５％ CO2）に静置して継代培養を行った（P0→P1）。2日に１回の頻度で培地全交換を実施し，播種から４日目にセミコンフルエントまで増殖したことを確認後，同様の手順で細胞の回収を行った。
P2において，2.83×107個の生細胞を回収できたため，その一部を6.7×103/cm2細胞濃度でT-150フラスコ10枚に播種を行い継代した（P1→P2）。2日に１回の頻度で培地全交換を実施し，播種から４日目にセミコンフルエントまで増殖したことを確認後，同様の手順で細胞の回収を行った。その結果，生存率が90.5％であり，生細胞数を4.43×107個回収したことを確認し，凍結保存液（STEMCELL BANKER;日本全薬工業）に懸濁して，ラットへの投与日まで液体窒素タンクで保管した。
2日に１回の頻度で培地全交換を実施し，上澄みは破棄して，フラスコ底面上で増殖する細胞を選択的に増殖した。セミコンフルエントまで増殖したT-150フラスコの細胞に対して，6mLの酵素溶液（TrypLE Select（登録商標）；Thermo Fisher Scientific）を添加し剥離した（３７℃，５分間静置）。細胞をPBS（-）で希釈し，遠心分離（４００×gで５分間）に供した。沈殿した細胞を培養液で懸濁し，トリパンブルー染色法による細胞数計測を行った結果，4.33×106個の生細胞が回収できたため，その全量をT-150フラスコ（CellBIND（登録商標）; Corning）5枚に等分して無血清培養液（Procul AD; ロート製薬）で全量を播種し，インキュベーター内（３７℃,５％ CO2）に静置して継代培養を行った（P0→P1）。2日に１回の頻度で培地全交換を実施し，播種から４日目にセミコンフルエントまで増殖したことを確認後，同様の手順で細胞の回収を行った。
P2において，2.83×107個の生細胞を回収できたため，その一部を6.7×103/cm2細胞濃度でT-150フラスコ10枚に播種を行い継代した（P1→P2）。2日に１回の頻度で培地全交換を実施し，播種から４日目にセミコンフルエントまで増殖したことを確認後，同様の手順で細胞の回収を行った。その結果，生存率が90.5％であり，生細胞数を4.43×107個回収したことを確認し，凍結保存液（STEMCELL BANKER;日本全薬工業）に懸濁して，ラットへの投与日まで液体窒素タンクで保管した。
１−３． 投与する細胞懸濁液の調製
ラットへの細胞投与日に，液体窒素タンクに保管された脂肪組織由来間葉系幹細胞，及び臍帯由来間葉系幹細胞を室温で解凍し，解凍後速やかにPBS（-）で希釈した後，400×g, 5分の遠心分離に供した。細胞を含む沈殿画分をPBS(-)で懸濁し，トリパンブルー染色法による計測を行ったところ，脂肪組織由来間葉系幹細胞及び臍帯由来間葉系幹細胞の生存率がそれぞれ91.5%と87.1％であった。これにより，投与に用いる細胞として十分な生存率を維持していることを確認した。次に，再度400×g, 5分の遠心分離に供し，上澄みを破棄して細胞を含む沈殿画分をPBS(-)で懸濁し，ラットへの投与に用いる細胞懸濁液の細胞濃度が5×106 cells/mLに調整した。
ラットへの細胞投与日に，液体窒素タンクに保管された脂肪組織由来間葉系幹細胞，及び臍帯由来間葉系幹細胞を室温で解凍し，解凍後速やかにPBS（-）で希釈した後，400×g, 5分の遠心分離に供した。細胞を含む沈殿画分をPBS(-)で懸濁し，トリパンブルー染色法による計測を行ったところ，脂肪組織由来間葉系幹細胞及び臍帯由来間葉系幹細胞の生存率がそれぞれ91.5%と87.1％であった。これにより，投与に用いる細胞として十分な生存率を維持していることを確認した。次に，再度400×g, 5分の遠心分離に供し，上澄みを破棄して細胞を含む沈殿画分をPBS(-)で懸濁し，ラットへの投与に用いる細胞懸濁液の細胞濃度が5×106 cells/mLに調整した。
１−４． ラットへの投与と測定検体の採取
（１）投与
SDラット（雄性，４週齢，体重180 g前後；日本クレア）に対して，脂肪組織由来間葉系幹細胞，及び臍帯由来間葉系幹細胞の懸濁液を，尾静脈より１匹あたり5×106 cells（1mL）の割合で単回投与した。投与には3０Gの注射針を使用した。また，コントロールとして，PBS(-)投与群も設定し，細胞と同様に尾静脈より1mLを単回投与した。なお，脂肪組織由来間葉系幹細胞投与群，臍帯由来間葉系幹細胞投与群，及びPBS(-)投与群はそれぞれラットの数を６匹と設定した（n=6／群）。細胞またはPBS(-)の投与直後から投与１時間後までの観察において，ラットの運動機能の低下や呼吸困難，振戦等の症状の他，一般状態に異常は確認されなかった。そのため，投与量として安全な範囲で投与されたことを確認した。
（１）投与
SDラット（雄性，４週齢，体重180 g前後；日本クレア）に対して，脂肪組織由来間葉系幹細胞，及び臍帯由来間葉系幹細胞の懸濁液を，尾静脈より１匹あたり5×106 cells（1mL）の割合で単回投与した。投与には3０Gの注射針を使用した。また，コントロールとして，PBS(-)投与群も設定し，細胞と同様に尾静脈より1mLを単回投与した。なお，脂肪組織由来間葉系幹細胞投与群，臍帯由来間葉系幹細胞投与群，及びPBS(-)投与群はそれぞれラットの数を６匹と設定した（n=6／群）。細胞またはPBS(-)の投与直後から投与１時間後までの観察において，ラットの運動機能の低下や呼吸困難，振戦等の症状の他，一般状態に異常は確認されなかった。そのため，投与量として安全な範囲で投与されたことを確認した。
（２）血漿の調整
細胞またはPBS(-)の投与から７日後に，各実験群３匹ずつから約3mLずつ採血を行い，末梢血に10μg／mLのヘパリンを添加して緩やかに混和した後，1,200×g/10分間の遠心分離により血漿画分を得た後，速やかに−８０℃で保管した。
細胞またはPBS(-)の投与から７日後に，各実験群３匹ずつから約3mLずつ採血を行い，末梢血に10μg／mLのヘパリンを添加して緩やかに混和した後，1,200×g/10分間の遠心分離により血漿画分を得た後，速やかに−８０℃で保管した。
（３）脳脊髄液の調整
細胞またはPBS(-)の投与から７日後に，小脳延髄槽に穿刺を行うことにより，各実験群３匹ずつから脳脊髄液を約70μLずつ採取した。採取後，速やかに−８０℃で保管した。
細胞またはPBS(-)の投与から７日後に，小脳延髄槽に穿刺を行うことにより，各実験群３匹ずつから脳脊髄液を約70μLずつ採取した。採取後，速やかに−８０℃で保管した。
１−５． モノアミン定量
採取後に保管した血漿及び脳脊髄液について，HPLC-MS/MSによるモノアミンの定量解析を行った。測定対象物質は，ノルアドレナリンの主要代謝産物の3-メトキシ-4-ハイドロキシフェニルエチレングリコール（MHPG）と，セロトニンの主要代謝産物である５−ハイドロキシインドール酢酸（5-HIAA）とした。これらを測定することにより，その前駆物質であるノルアドレナリンとセロトニンの量も把握することができるため，臨床検査にもMHPGと５−HIAAは活用される物質である。
採取後に保管した血漿及び脳脊髄液について，HPLC-MS/MSによるモノアミンの定量解析を行った。測定対象物質は，ノルアドレナリンの主要代謝産物の3-メトキシ-4-ハイドロキシフェニルエチレングリコール（MHPG）と，セロトニンの主要代謝産物である５−ハイドロキシインドール酢酸（5-HIAA）とした。これらを測定することにより，その前駆物質であるノルアドレナリンとセロトニンの量も把握することができるため，臨床検査にもMHPGと５−HIAAは活用される物質である。
（１）前処理
サンプルの前処理として，血漿サンプルの場合，各検体200μLに，0.4mol/L過塩素酸を200μL加え，攪拌後，遠心分離（17,500×g，4℃，5min）に供し，上澄み画分を固相抽出に供した（Oasis HLB uElution 96-wells Plate 30um；Waters）。固相抽出の手順として，メタノール（200μL），超純水（200μL），検体（200μL），5-HIAA測定時には内部標準物質として5-HIAA-d5（10μL）の順にカラムに供した。次に超純水（200μL）で洗浄し，メタノールで希釈した2% ギ酸（200μL）で溶出し，測定サンプルとした。脳脊髄液サンプルの場合，0.4mol/L過塩素酸を７０μLとして，それ以降は血漿サンプルと同様とした。
サンプルの前処理として，血漿サンプルの場合，各検体200μLに，0.4mol/L過塩素酸を200μL加え，攪拌後，遠心分離（17,500×g，4℃，5min）に供し，上澄み画分を固相抽出に供した（Oasis HLB uElution 96-wells Plate 30um；Waters）。固相抽出の手順として，メタノール（200μL），超純水（200μL），検体（200μL），5-HIAA測定時には内部標準物質として5-HIAA-d5（10μL）の順にカラムに供した。次に超純水（200μL）で洗浄し，メタノールで希釈した2% ギ酸（200μL）で溶出し，測定サンプルとした。脳脊髄液サンプルの場合，0.4mol/L過塩素酸を７０μLとして，それ以降は血漿サンプルと同様とした。
（２）定量解析
測定にはUltimate 3000 Rapid Separation with Q Exactiveシステム（Thermo Fisher Scientific）を用い，カラムはScherzo SS C18，100×3.0mm，3um（Imtakt）を用いた。液体クロマトグラフィーの測定条件として，カラム温度は30℃，グラジエントを掛けるための移動相Aとしてメタノール/水/ギ酸=35/65/0.5を，移動相Bとしてメタノール/100mM ギ酸アンモニウム=40/60を，グラジエントは表１の通りとし，測定サンプルのインジェクト量は５μLとした。質量分析は，イオン化モードはポジティブモード，分解能は17,500，キャピラリー温度は263℃，スプレー電圧は2.5V，定量における質量レンジは，5-HIAAは192.0655→146.055-146.065にて，内部標準物質の5-HIAA-d5は197.0969→151.085-151.095にて，MHPGは167.0703→135.043-135.045にて実施した。
測定にはUltimate 3000 Rapid Separation with Q Exactiveシステム（Thermo Fisher Scientific）を用い，カラムはScherzo SS C18，100×3.0mm，3um（Imtakt）を用いた。液体クロマトグラフィーの測定条件として，カラム温度は30℃，グラジエントを掛けるための移動相Aとしてメタノール/水/ギ酸=35/65/0.5を，移動相Bとしてメタノール/100mM ギ酸アンモニウム=40/60を，グラジエントは表１の通りとし，測定サンプルのインジェクト量は５μLとした。質量分析は，イオン化モードはポジティブモード，分解能は17,500，キャピラリー温度は263℃，スプレー電圧は2.5V，定量における質量レンジは，5-HIAAは192.0655→146.055-146.065にて，内部標準物質の5-HIAA-d5は197.0969→151.085-151.095にて，MHPGは167.0703→135.043-135.045にて実施した。
（３）定量結果
MHPGと5-HIAA定量の結果を図２に示す。
「血漿−MHPG」
図２（ａ）に示される通り，血漿サンプルにおけるMHPGは，コントロールのPBS(-)投与群が4.081 ng/mL，AD-MSC投与群が7.125 ng/mL，UC-MSC投与群が6.391 ng/mLであり，有意差検定の結果，PBS(-)投与群に対してAD-MSC投与群及びUC-MSC投与群は，MHPG濃度の上昇が確認された（p値＜0.05）。
MHPGと5-HIAA定量の結果を図２に示す。
「血漿−MHPG」
図２（ａ）に示される通り，血漿サンプルにおけるMHPGは，コントロールのPBS(-)投与群が4.081 ng/mL，AD-MSC投与群が7.125 ng/mL，UC-MSC投与群が6.391 ng/mLであり，有意差検定の結果，PBS(-)投与群に対してAD-MSC投与群及びUC-MSC投与群は，MHPG濃度の上昇が確認された（p値＜0.05）。
「脳脊髄液−MHPG」
図２（ｂ）に示される通り，血漿サンプルにおけるMHPGは，コントロールのPBS(-)投与群が7.352 ng/mL，AD-MSC投与群が11.602 ng/mL，UC-MSC投与群が19.678 ng/mLであり，有意差検定の結果，PBS(-)投与群に対してAD-MSC投与群及びUC-MSC投与群は，MHPG濃度の上昇が確認された（p値＜0.05）。
図２（ｂ）に示される通り，血漿サンプルにおけるMHPGは，コントロールのPBS(-)投与群が7.352 ng/mL，AD-MSC投与群が11.602 ng/mL，UC-MSC投与群が19.678 ng/mLであり，有意差検定の結果，PBS(-)投与群に対してAD-MSC投与群及びUC-MSC投与群は，MHPG濃度の上昇が確認された（p値＜0.05）。
「血漿−5-HIAA」
図２（c）に示される通り，血漿サンプルにおける５−ＨＩＡＡは，PBS(-)投与群が12.746 ng/mL，AD-MSC投与群が22.450 ng/mL，UC-MSC投与群が19.317 ng/mLであり，有意差検定の結果，PBS(-)投与群に対してAD-MSC投与群及びUC-MSC投与群は，５−ＨＩＡＡ濃度の上昇が確認された（p値＜0.05）
図２（c）に示される通り，血漿サンプルにおける５−ＨＩＡＡは，PBS(-)投与群が12.746 ng/mL，AD-MSC投与群が22.450 ng/mL，UC-MSC投与群が19.317 ng/mLであり，有意差検定の結果，PBS(-)投与群に対してAD-MSC投与群及びUC-MSC投与群は，５−ＨＩＡＡ濃度の上昇が確認された（p値＜0.05）
「脳脊髄液−5-HIAA」
図２（ｄ）に示される通り，血漿サンプルにおける５−ＨＩＡＡは，PBS(-)投与群が4.633 ng/mL，AD-MSC投与群が9.265 ng/mL，UC-MSC投与群が9.519 ng/mLであり，有意差検定の結果，PBS(-)投与群に対してAD-MSC投与群及びUC-MSC投与群は，５−ＨＩＡＡ濃度の上昇が確認された（p値＜0.05）
図２（ｄ）に示される通り，血漿サンプルにおける５−ＨＩＡＡは，PBS(-)投与群が4.633 ng/mL，AD-MSC投与群が9.265 ng/mL，UC-MSC投与群が9.519 ng/mLであり，有意差検定の結果，PBS(-)投与群に対してAD-MSC投与群及びUC-MSC投与群は，５−ＨＩＡＡ濃度の上昇が確認された（p値＜0.05）
以上の結果の通り，脂肪組織由来間葉系幹細胞または臍帯組織由来間葉系幹細胞の全身性投与により，末梢血中及び脳脊髄液中のMHPG及び5−HIAAが増加することが明らかとなり，生体におけるモノアミン産生促進作用を有する医薬組成物として，間葉系幹細胞を活用できることを見出した。
本発明の医薬組成物は，投与された対象の体内において，セロトニン又はノルアドレナリンといったモノアミンと称される神経伝達物質の産生量を増加させるため，精神疾患の治療剤，鎮痛剤，筋力増強剤などとして利用されうる。このため，本発明は，医薬産業において利用されうる。
Claims (5)
- 間葉系幹細胞を有効成分として含む，５−ハイドロキシインドール酢酸（５−ＨＩＡＡ）又は３−メトキシ−４−ハイドロキシフェニルエチレングリコール（MHPG）の産生促進剤。
- 請求項１に記載の剤であって，前記間葉系幹細胞の由来組織が，脂肪組織又は臍帯組織である，剤。
- 請求項１に記載の剤であって，静脈投与される剤である，剤。
- 請求項１に記載の剤であって，末梢血または脊髄液中の５−ハイドロキシインドール酢酸（５−ＨＩＡＡ）又は３−メトキシ−４−ハイドロキシフェニルエチレングリコール（MHPG）の産生を促進するための，剤。
- 間葉系幹細胞を投与された対象の血液から分離した血漿，又は脳脊髄液を用いて，５−ハイドロキシインドール酢酸（５−ＨＩＡＡ）又は３−メトキシ−４−ハイドロキシフェニルエチレングリコール（MHPG）の含有量又は濃度を測定する工程を含む，間葉系幹細胞が対象に有効か否かを確認する方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2018113184A JP6829225B2 (ja) | 2018-06-13 | 2018-06-13 | モノアミン産生増加剤としての間葉系幹細胞を含む医薬組成物 |
| CN201980006018.3A CN111479576A (zh) | 2018-06-13 | 2019-06-11 | 作为单胺产生促进剂的包含间充质干细胞的医药组合物 |
| PCT/JP2019/023079 WO2019240126A1 (ja) | 2018-06-13 | 2019-06-11 | モノアミン産生増加剤としての間葉系幹細胞を含む医薬組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2018113184A JP6829225B2 (ja) | 2018-06-13 | 2018-06-13 | モノアミン産生増加剤としての間葉系幹細胞を含む医薬組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2019214534A JP2019214534A (ja) | 2019-12-19 |
| JP6829225B2 true JP6829225B2 (ja) | 2021-02-10 |
Family
ID=68841976
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2018113184A Active JP6829225B2 (ja) | 2018-06-13 | 2018-06-13 | モノアミン産生増加剤としての間葉系幹細胞を含む医薬組成物 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6829225B2 (ja) |
| CN (1) | CN111479576A (ja) |
| WO (1) | WO2019240126A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6497827B1 (ja) * | 2018-07-17 | 2019-04-10 | 株式会社 バイオミメティクスシンパシーズ | エイコサノイド産生促進剤 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2001257030A1 (en) * | 2000-04-12 | 2001-10-30 | Children's Hospital Of Philadelphia | Therapeutic uses for mesenchymal stromal cells |
| JP5598864B2 (ja) * | 2011-12-05 | 2014-10-01 | 北海道公立大学法人 札幌医科大学 | 細胞増殖方法ならびに組織の修復および再生のための医薬 |
| CA2877022A1 (en) * | 2012-06-26 | 2014-01-03 | Rusty Property Holdings Pty Ltd | Compositions and methods for reducing frequency and/or severity of headache |
| WO2017165426A1 (en) * | 2016-03-22 | 2017-09-28 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods to promote wound healing |
| KR101816246B1 (ko) * | 2016-09-07 | 2018-01-08 | 에스씨엠생명과학 주식회사 | 염증 자극된 중간엽 줄기세포를 포함하는 면역질환 또는 염증 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
-
2018
- 2018-06-13 JP JP2018113184A patent/JP6829225B2/ja active Active
-
2019
- 2019-06-11 CN CN201980006018.3A patent/CN111479576A/zh active Pending
- 2019-06-11 WO PCT/JP2019/023079 patent/WO2019240126A1/ja active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111479576A (zh) | 2020-07-31 |
| WO2019240126A1 (ja) | 2019-12-19 |
| JP2019214534A (ja) | 2019-12-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10406180B2 (en) | Composition including stem cell-derived microvesicles for promoting neurogenesis | |
| Mao et al. | Endoplasmic reticulum stress contributes to nociception via neuroinflammation in a murine bone cancer pain model | |
| CA2688327A1 (en) | Methods and compositions for stimulating cells | |
| US11040072B2 (en) | Composition for inducing beige adipocyte differentiation containing exosome derived from stem cells | |
| CN109562129A (zh) | 含有从脂肪来源的干细胞提取的外排体作为活性成分的用于预防或治疗肺纤维化的组合物 | |
| EP2913059B1 (en) | Novel method for treating spinal cord injury using hmgb1 fragment | |
| KR20200098536A (ko) | Dux4 발현과 관련된 질병의 치료를 위한 화합물 | |
| US20150359849A1 (en) | Methods of increasing neuronal connectivity and/or treating a neurodegenerative condition | |
| CN101553565A (zh) | 从血液特别是外周血扩增成体干细胞的方法及在医药领域的相关应用 | |
| JP7246569B2 (ja) | 幹細胞由来エクソソーム生成促進及び幹細胞能増強用組成物 | |
| JP2009541303A (ja) | カテコールアミン受容体の調節 | |
| CA2672524A1 (en) | Treatment of disease or injury of the nervous system using agents that decrease the activity of the melanocortin 4 receptor | |
| KR20210018832A (ko) | 세포 조성물 및 이의 용도 | |
| Tang et al. | Intranasal delivery of bone marrow stromal cells preconditioned with Fasudil to treat a mouse model of Parkinson’s disease | |
| Fadeev et al. | Combination of epidural electrical stimulation with ex vivo triple gene therapy for spinal cord injury: a proof of principle study | |
| JP6829225B2 (ja) | モノアミン産生増加剤としての間葉系幹細胞を含む医薬組成物 | |
| JP2018534325A (ja) | イン・ビボ生着能増強用５−ヒドロキシトリプタミン１ｂ受容体刺激剤 | |
| WO2016041192A1 (zh) | 藁本内酯的应用 | |
| WO2022249535A1 (ja) | 癌悪液質の改善剤および癌悪液質の改善方法 | |
| JP6497827B1 (ja) | エイコサノイド産生促進剤 | |
| WO2023199829A1 (ja) | 微小粒子、うつ病の予防薬または治療薬およびうつ病の改善方法 | |
| WO2019070910A1 (en) | NEW POLYTHERAPY FOR ANXIETY, EPILEPSY AND PAIN DISORDERS | |
| JP7447803B2 (ja) | アドビリン機能促進剤としての環状アミン誘導体並びに新規環状アミン誘導体及びその医薬用途 | |
| WO2023190267A1 (ja) | 微小粒子、パーキンソン病の予防薬または治療薬およびパーキンソン病の改善方法 | |
| Yuan et al. | Differentiation of rat embryonic cerebral cortex neural stem cells cultured by erythropoietin in vitro |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190425 |
|
| A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20190425 |
|
| A975 | Report on accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971005 Effective date: 20190521 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190611 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190716 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20190806 |
|
| C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20191106 |
|
| C116 | Written invitation by the chief administrative judge to file amendments |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C116 Effective date: 20191126 |
|
| C22 | Notice of designation (change) of administrative judge |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22 Effective date: 20191126 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191219 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20191219 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200210 |
|
| C092 | Termination of reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C092 Effective date: 20200303 |
|
| C22 | Notice of designation (change) of administrative judge |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22 Effective date: 20200721 |
|
| C22 | Notice of designation (change) of administrative judge |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22 Effective date: 20200811 |
|
| C13 | Notice of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C13 Effective date: 20201027 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201028 |
|
| C23 | Notice of termination of proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C23 Effective date: 20201201 |
|
| C03 | Trial/appeal decision taken |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C03 Effective date: 20210112 |
|
| C30A | Notification sent |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C3012 Effective date: 20210112 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210121 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6829225 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |