JP6808706B2 - 油脂成分内包リポソーム - Google Patents

Description

本発明は、油脂成分を内包するリポソーム等に関する。

リポソームは生体膜の主要構成成分であるリン脂質等から構成された人工のカプセルである。リン脂質は両親媒性構造であり、脂質二重層（言い換えれば二分子膜）を形成する。二分子膜内には油溶性物質を取り込むことができ、作成手法によっては内水相に水溶性物質を取り込むことができる。

特開２０１５−１７４８６０号広報 国際公開第２００８／０９３８４８号

上記の通り、リポソームは、二分子膜内部に油溶性物質を取り込むことができることから、油脂成分を安定に水性組成物に含有させるために利用できる可能性が考えられる。また、近年植物性油脂成分の効能に注目が集まっており、特に化粧品等の外用組成物（特に外用水性組成物）に植物性油脂成分を配合する需要が高まっている。

また、このような水性組成物を特に化粧品に用いる場合には、見た目（透明性）が重視されることが多く、特に透明性が持続されることが重要である。消費者は経時的に濁る組成物（特に化粧品組成物）を忌避する傾向があるからである。通常、リポソーム粒子サイズが小さいほど水性組成物は透明になることから、この観点からリポソーム粒子サイズは比較的小さい方が好ましい。また、リポソーム粒子サイズが小さいほど、経皮吸収性が高い傾向があるため、この観点からも好ましい。

またさらに、各リポソーム粒子のサイズが揃っているほど（すなわち均一であるほど）リポソームの合一や崩壊が起きにくく、経時分散安定性が高い傾向がある。この観点から各リポソーム粒子のサイズができるだけ均一である方が好ましい。

そこで、本発明では、油脂成分が内包されたリポソームであって、当該リポソーム含有組成物において透明性及びリポソーム粒子サイズ均一性ができるだけ維持される、リポソームを提供することを目的とする。

本発明者らは、リポソームの調製に特定の界面活性剤を用いることにより、透明性及びリポソーム粒子サイズ均一性が維持されるリポソーム含有組成物を調製できる可能性を見出し、さらに改良を重ねて本発明を完成させるに至った。

本発明は例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１．
水素添加処理リン脂質、並びに、
酸化エチレンの平均付加モル数が４０〜９５のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ＰＰＧ−６デシルテトラデセス−３０、及びＰＥＧ−２０フィトステロールからなる群より選択される少なくとも１種の界面活性剤
を含み、
油脂成分を内包した、
リポソーム。
項２．
油脂成分が、米油、大豆油、オリーブ油、メドフォーム油、ヒマワリ油、ヘーゼルナッツ油、及びトコフェロールからなる群より選択される少なくとも１種である、項１に記載のリポソーム。
項３．
水素添加処理リン脂質が水素添加レシチンである、項１又は２に記載のリポソーム。
項４．
水素添加レシチン、並びに、
酸化エチレンの平均付加モル数が５５〜６５のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、
を含み、
米糠油を内包した、
リポソーム。
項５．
平均粒子径が８２ｎｍ以下である、項１〜４のいずれかに記載のリポソーム。
項６．
多分散指数（ＰｄＩ）が０．２６以下である、項１〜５のいずれかに記載のリポソーム。
項７．
項１〜６のいずれかに記載のリポソームを含有する組成物。
項８．
外用医薬品組成物、口腔用組成物、又は化粧品組成物である、項７に記載の組成物。
項９．
ｐＨが６〜７．５である、項１〜６のいずれかに記載のリポソーム、あるいは項７又は８に記載の組成物。
項１０．
水素添加処理リン脂質、
酸化エチレンの平均付加モル数が４０〜９５のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ＰＰＧ−６デシルテトラデセス−３０、及びＰＥＧ−２０フィトステロールからなる群より選択される少なくとも１種の界面活性剤、
油脂成分、並びに
水
を含有する組成物を、
撹拌すること、及び
撹拌済み組成物を１００〜４００ＭＰａで処理すること、
を含む、リポソーム製造方法。
項１１．
前記組成物のｐＨが６〜７．５である、項１０に記載の方法。

透明性及びリポソーム粒子サイズ均一性が維持されるリポソーム含有組成物、及び当該組成物に含有されるリポソーム、並びにこれらの製造方法等が提供される。当該リポソーム含有組成物は、特に化粧品組成物として利用するのに有利である。

異なる界面活性剤を用いて調製したリポソーム懸濁液について、調製直後及び３ヶ月保存後の状態を示す。 好適な組成において、異なる油脂成分（特に植物性油脂成分）を用いて調製したリポソーム懸濁液について、調製直後の状態を示す。

以下、本発明に包含される各実施形態について、さらに詳細に説明する。本発明は、リポソーム含有組成物、及び当該組成物に含有されるリポソーム、並びにこれらの製造方法等を好ましく包含するが、これらに限定されるわけではなく、本発明は本明細書に開示され当業者が認識できる全てを包含する。

本発明に包含されるリポソームは、（Ａ）水素添加処理リン脂質、並びに、（Ｂ）酸化エチレンの平均付加モル数が４０〜９５のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ＰＰＧ−６デシルテトラデセス−３０、及びＰＥＧ−２０フィトステロールからなる群より選択される少なくとも１種の界面活性剤を含み、（Ｃ）油脂成分を内包する。以下、本発明に包含される当該リポソームを「本発明のリポソーム」ということがある。なお、特に制限はされないが、本発明のリポソームには、さらに（Ｄ）コレステロールが含まれることが好ましい。

水素添加処理リン脂質のリン脂質としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジル酸などのグリセロリン脂質やスフィンゴミエリンなどのスフィンゴリン脂質が好ましく例示される。また、レシチン（例えば、大豆レシチン、コーンレシチン、綿実油レシチン、卵黄レシチン、卵白レシチン等）を用いることもできる。レシチンとしては、ホスファチジルコリン含有量が６０質量％以上のものが好ましく、６５、７０、７５、８０、８５、又は９０質量％以上のものがより好ましい。また、ポリエチレングリコールやアミノグリカン類が導入されたリン脂質誘導体や、水酸化ホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリンなども、ここでのリン脂質に包含される。

水素添加処理リン脂質としては、当該リン脂質に水素添加処理したものが好ましく挙げられる。中でも、例えば水素添加グリセロリン脂質、特に水素添加ホスファチジルエタノールアミン、水素添加ホスファチジルセリン、水素添加ホスファチジルイノシトール、水素添加ホスファチジルコリン等が好ましい。また、水素添加レシチン（例えば水素添加大豆レシチン、水素添加卵黄レシチン、水素添加コーンレシチン、水素添加綿実油レシチン等）を用いることもできる。

なお、水素添加処理リン脂質は、１種単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

本発明のリポソームには、界面活性剤として、酸化エチレンの平均付加モル数が４０〜９５のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ＰＰＧ−６デシルテトラデセス−３０、及びＰＥＧ−２０フィトステロールが用いられる。これらの成分は１種単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

本発明に用いるポリオキシエチレン硬化ヒマシ油は、酸化エチレンの平均付加モル数が４０〜９５（４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、又は９５）である。４５〜９０程度が好ましく、５０〜８０程度がより好ましく、５５〜７０程度がさらに好ましく、５５〜６５程度がよりさらに好ましい。

ＰＰＧ−６デシルテトラデセス−３０は、デシルテトラデカノールに酸化エチレン及び酸化プロピレンを付加重合した構造を有し、酸化エチレン付加モル数が平均６、酸化プロピレン付加モル数が平均３０である、化合物である。

ＰＥＧ−２０フィトステロールは、フィトステロールズのポリエチレングリコールエーテルであって、酸化エチレンの平均付加モル数が２０である化合物である。

油脂成分としては、特に動物性油脂成分及び植物性油脂成分が挙げられる。ここでの動物性油脂成分は動物由来の油脂成分のみならず、合成油脂成分であっても動物由来の油脂成分として知られているものをも含む。同様に、ここでの植物性油脂成分は植物由来の油脂成分のみならず、合成油脂成分であっても植物由来の油脂成分として知られているものをも含む。例えば、トコフェロールは、多くの植物油に含まれる成分であるため、合成されたトコフェロールであっても、ここでの植物性油脂成分に包含される。油脂成分としては、特に植物性油脂成分が好ましい。

植物性油脂成分としては、例えば米油、大豆油、オリーブ油、メドフォーム油、ヒマワリ油、ヘーゼルナッツ油、及びトコフェロール（α−トコフェロールが好ましく、例えばＤ−α−トコフェロール、ｄｌ−α−トコフェロール、酢酸ｄｌ−α−トコフェロール等を包含する）等を挙げることができる。なお、米油としては、米糠油が好ましい。米糠油としては、溶媒（例えばヘキサン、アセトンなど）抽出米糠油を用いることもできるが、米糠を搾って（好ましくは圧搾して）得られる米糠搾油が好ましい。また、その他の植物性油脂成分も、特に化粧品への配合が好適な公知の油を適宜選択して用いることができる。また、植物性油脂成分は、１種単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

（Ａ）水素添加処理リン脂質と（Ｂ）界面活性剤との含有割合は、本発明の効果を損なわないリポソームを得ることができる範囲において適宜設定できるが、例えば質量比で（Ｂ）：（Ａ）が１：１〜１０程度が好ましく、１：２〜８程度又は１：２．５〜６程度がより好ましく、１：３〜５程度がさらに好ましい。また、本発明のリポソームが（Ｄ）コレステロールを含む場合には、（Ａ）及び（Ｄ）の合計量（Ａ＋Ｄ）と（Ｂ）との含有割合は、適宜設定できるが、例えば質量比で（Ｂ）：（Ａ＋Ｄ）が１：１〜１０程度が好ましく、１：２〜８程度又は１：２．５〜６程度がより好ましく、１：３〜５程度又は１：４〜５程度がさらに好ましい。

なお、（Ａ）、（Ｂ）、及び（Ｄ）がリポソームに含まれる形態は特に制限されるわけではなく、例えば、リポソームの内部に構成される親水領域若しくは疎水領域に存在する場合、リポソーム構成体の最外膜の膜表面に付着して存在する場合等も包含されるが、リポソームの膜構成物質と共存する場合（特にリポソームの膜構成成分としてリポソームに含有されること）が好ましい。

本発明のリポソームに内包される（Ｃ）油脂成分の量としては、適宜設定できるが、例えば、質量比で（Ｃ）：（Ａ）が１：１〜１０程度が好ましく、１：２〜８程度又は１：２．５〜６程度がより好ましく、１：３〜５程度がさらに好ましい。また、（Ｄ）が含まれる場合には、前述した（Ｃ）及び（Ａ）の質量比であることが好ましく、質量比で（Ｃ）：（Ａ＋Ｄ）が１：１〜１０程度がより好ましく、１：２〜８程度又は１：２．５〜６程度がさらに好ましく、１：３〜５程度又は１：４〜５程度がよりさらに好ましい。

なお、リポソームは、脂質二重層の数に基づいて、多重膜リポソーム（ＭＬＶ）と一枚膜リポソームの２つに分類される。一枚膜リポソームは、そのサイズに応じて、更にＳＵＶ（small unilamella vesicle）、ＬＵＶ（large unilamella vesicle）、ＧＵＶ（giant unilamella vesicle）などに分類される。本発明のリポソームとしては、これらのいずれも好適に使用できる。また、本発明のリポソームの大きさ（粒子サイズ）としては、平均粒子径（該球状の粒子形状をしていない場合は平均外径のことをいう）が例えば８２ｎｍ以下のものが好ましく、８１、８０、７９、７８、７７、７６、７５、７４、又は７３ｎｍ以下のものがより好ましい。当該平均粒子径の下限は特に制限されない。例えば１０ｎｍ以上、１５ｎｍ以上、又は２０ｎｍ以上程度が例示できる。

また、本発明のリポソームは、その多分散指数（Ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ：ＰｄＩ）が０．２６以下であることが好ましく、０．２５、０．２４、０．２３、０．２２、０．２１、又は０．２０以下であることがより好ましく、０．１９、０．１８、又は０．１７以下でることがさらに好ましい。なお、多分散指数（ＰＤＩ）とは、粒径分布の幅を評価するための指数であり、０から１の範囲の値をとる。０に近いほど、分散が均一であるということができる。

当該平均粒子径及びＰｄＩは動的光散乱法により測定した値である。例えば動的光散乱による粒度分布計を用いて測定することができる。

また、本発明のリポソームは、ｐＨが６〜７．５程度であることが好ましい。このようなｐＨ範囲のリポソームであることで、より一層経時分散安定性が高くなり、好ましい。このようなｐＨ範囲のリポソームは、例えば、リポソーム調製に用いる組成物のｐＨを予め当該ｐＨ範囲に調整しておくことで調製することができる。ｐＨの調整には、ｐＨ調整剤を用いることができる。ｐＨ調整剤としては、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどが挙げられる。

本発明のリポソームを含有するリポソーム組成物も本発明は包含する。当該リポソーム組成物は水性組成物であることが好ましい。また、当該組成物は、例えば、外用医薬品組成物、口腔用組成物、及び化粧品組成物として用いることが好ましい。

本発明のリポソーム及び当該リポソームを含有する組成物は、例えば、リポソームの原料及び水を含有する組成物を撹拌し、さらに高圧処理することによって調製することができる。

リポソームの原料としては、上述した内容をそのまま好ましく適用することができる。例えば、上記の（Ａ）、（Ｂ）、及び（Ｃ）、さらに必要に応じて（Ｄ）やその他の成分（例えば多価アルコール、好ましくはプロピレングリコール）等を水と混合して得た組成物を調製して用いることができる。各成分の使用量等の各条件についても、リポソームの原料について述べた上の内容をそのまま好ましく適用することができる。また、当該組成物のｐＨを６〜７．５程度に予め調整しておくことも好ましい。ｐＨの調整には、上述したように、ｐＨ調整剤（例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなど）を用いることができる。

撹拌処理としては、リポソーム調製分野で用いられる公知の撹拌処理を好ましく用いることができる。例えば、ホモミキサーを用い、回転数３０００〜１００００ｒｐｍ、好ましくは４０００〜６０００ｒｐｍ程度で２〜１０分間程度撹拌することができる。当該撹拌処理により、通常、リポソームを調製することができる。

また、高圧処理としては、リポソーム調製分野で用いられる公知の撹拌処理を好ましく用いることができる。例えば、湿式微粒化装置を用いて、撹拌済み組成物を高圧処理する方法が挙げられる。このような湿式微粒化装置としては、ＳＴＡＲＢＵＲＳＴｍｉｎｉ（スギノマシン社)が例示される。高圧処理としては、例えば１００〜４００ＭＰａ（好ましくは１５０〜３００ＭＰａ）で処理することが挙げられる。高圧処理により、通常、リポソームの粒子サイズを小さくし、且つ各粒子サイズをより均一とすることができる。

なお、このようにして得られるリポソーム懸濁液は、そのまま本発明のリポソームを含有するリポソーム組成物として用いることができる。

本発明のリポソーム及びリポソーム組成物には、本発明の効果を損なわない範囲で、上述した成分以外の成分を含有してもよい。例えば、油性成分、脂質、水溶性物質、生理活性物質などが挙げられる。特に、外用医薬品又は化粧品に用いることが公知の成分を好ましく用いることができる。例えば、殺菌剤（特に、イソプロピルメチルフェノール等のフェノール系殺菌剤）；アスコルビン酸等の抗酸化剤；乳酸、クエン酸などの有機酸；水酸化カリウム、水酸化ナトリウム等のアルカリ性化合物；ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン等の脂質；キトサン、フコイダン、ヒアルロン酸等の天然高分子；ポリエチレングリコール、カルボキシビニルポリマー等の合成高分子；トレハロース、ラクチュロース、マルチトール等の糖質；グリセリンなどのポリオール等が挙げられる。

なお、これら本発明のリポソーム及びリポソーム組成物に用いる各成分は、いずれも公知の成分であり、例えば市販品を購入して用いることができる。

なお、本明細書において「含む」とは、「本質的にからなる」と、「からなる」をも包含する（The term "comprising" includes "consisting essentially of” and "consisting of."）。また、本発明は、本明細書に説明した構成要件を任意の組み合わせを全て包含する。

また、上述した本発明の各実施形態について説明した各種特性（性質、構造、機能等）は、本発明に包含される主題を特定するにあたり、どのように組み合わせられてもよい。すなわち、本発明には、本明細書に記載される組み合わせ可能な各特性のあらゆる組み合わせからなる主題が全て包含される。

以下、本発明をより具体的に説明するが、本発明は下記の例に限定されるものではない。

表１及び表２に示す組成に従って、実施例１〜３及び比較例１〜８のリポソーム懸濁液を調製した。より詳細には、表１に記載の組成に従い、プロピレングリコールに水素添加レシチン（水添レシチン）、米油（サンブラン米油（圧搾米糠油）：三和油脂株式会社）、各種界面活性剤（表２参照）、コレステロール、及びパラオキシ安息香酸メチルを溶解させ（８０℃加熱）、これに８０℃に加熱した水（水酸化カリウムが溶解している）を添加してｐＨを約７に調整し、５０００ｒｐｍで５分間撹拌し、さらに２００ＭＰａの高圧処理を行うことにより、各実施例及び比較例のリポソーム懸濁液を調製した。なお、当該撹拌処理はホモミキサー（ホモミキサーＭＡＲＫ ＩＩ：ＰＲＩＭＩＸ社）を用いて行った。当該高圧処理は、湿式微粒化装置（ＳＴＡＲＢＵＲＳＴｍｉｎｉ：スギノマシン社）を用いて行った。ただし、比較例８のリポソーム懸濁液の調製においては、界面活性剤及び水酸化カリウムは用いなかった。なお、比較例８では界面活性剤及び水酸化カリウムを加えなかった分、イオン交換水の量を増やした。また、比較例３、実施例２、比較例６で用いたポリオキシエチレン硬化ヒマシ油の酸化エチレンの平均付加モル数は、それぞれ、３０、６０、及び１００である。

また、得られた各例（但し比較例８は除く）のリポソーム懸濁液について、含まれるリポソームの平均粒子径及び多分散指数（ＰｄＩ）を、動的光散乱による粒度分布計（Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ ｎａｎｏ：Ｍａｌｖｅｒｎ）を用いて測定した。また、調製してから暗所にて常温（２５℃）で３ヶ月間静置した後に、同様の測定を行った。測定結果を表２にあわせて示す。また、調製直後（初期）及び３ヶ月静置後（３Ｍ）の各例のリポソーム懸濁液の写真を図１に示す。

当該結果から、水素添加処理リン脂質及び界面活性剤を含み、油脂成分（特に植物性油脂成分：本例においては米油）を内包するリポソームを調製するにあたり、界面活性剤として、酸化エチレンの平均付加モル数が４０〜９５のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ＰＰＧ−６デシルテトラデセス−３０、及びＰＥＧ−２０フィトステロールを用いた場合には、調製直後及び長期間（本例においては３ヶ月）保存後のいずれにおいても、平均粒子径が比較的小さく組成物の透明度も保たれ、またＰｄＩも比較的小さく安定性も高いと考えられることが、分かった。

また、水酸化カリウムを用いずその分イオン交換水量を増やした点、並びに、植物性油脂成分として米油ではなく、大豆油、オリーブ油、メドフォーム油、ヒマワリ油、ヘーゼルナッツ油、又はトコフェロールを用いた点、以外は、実施例２又は比較例８と同様にして、リポソーム懸濁液を調製し調製直後にリポソームの平均粒子径及び多分散指数（ＰｄＩ）を測定した。測定結果を表３及び表４に示す。また、調製直後（初期）の各例のリポソーム懸濁液の写真を図２に示す。

いずれの植物性油脂成分を用いた場合でも、得られたリポソーム懸濁液は、リポソームの平均粒子径が比較的小さく組成物の透明度も保たれ、またＰｄＩも比較的小さく安定性も高いと考えられることが、分かった。また、以上の結果から、特に植物性油脂成分として米油を用いた場合が好ましいと考えられた。

Claims (9)

1. 水素添加処理リン脂質、並びに、
   酸化エチレンの平均付加モル数が５５〜６５のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ＰＰＧ−６デシルテトラデセス−３０、及びＰＥＧ−２０フィトステロールからなる群より選択される少なくとも１種の界面活性剤
   を含み、
   米油、大豆油、オリーブ油、メドフォーム油、ヒマワリ油、及びヘーゼルナッツ油からなる群より選択される少なくとも１種の油脂成分を内包し、
   平均粒子径が８２ｎｍ以下である、
   リポソーム。
2. 水素添加処理リン脂質が水素添加レシチンである、請求項１に記載のリポソーム。
3. 水素添加レシチン、並びに、
   酸化エチレンの平均付加モル数が５５〜６５のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、
   を含み、
   米糠油を内包し、
   平均粒子径が８２ｎｍ以下である、
   リポソーム。
4. 多分散指数（ＰｄＩ）が０．２６以下である、請求項１〜３のいずれかに記載のリポソーム。
5. 請求項１〜４のいずれかに記載のリポソームを含有する組成物。
6. 外用医薬品組成物、口腔用組成物、又は化粧品組成物である、請求項５に記載の組成物。
7. ｐＨが６〜７．５である、請求項１〜４のいずれかに記載のリポソーム、あるいは請求項５又は６に記載の組成物。
8. 水素添加処理リン脂質、
   酸化エチレンの平均付加モル数が５５〜６５のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ＰＰＧ−６デシルテトラデセス−３０、及びＰＥＧ−２０フィトステロールからなる群より選択される少なくとも１種の界面活性剤、
   米油、大豆油、オリーブ油、メドフォーム油、ヒマワリ油、及びヘーゼルナッツ油からなる群より選択される少なくとも１種の油脂成分、並びに
   水
   を含有する組成物を、
   撹拌すること、及び
   撹拌済み組成物を１００〜４００ＭＰａで処理すること、
   を含む、リポソーム製造方法。
9. 前記組成物のｐＨが６〜７．５である、請求項８に記載の方法。