本発明の例証的な化合物を、以下のスキーム1及びスキーム2に従って調製した。
スキーム1.試薬及び条件:(i)ClCH2COR、DMF、70℃、16時間;(ii)BrCH2COR、MeOH、70℃、3〜42時間;(iii)NH4OH(20%)、80℃、3時間;(iv)(CF3CO)2O、ピリジン、室温、2時間。
スキーム2.試薬及び条件:(i)K2CO3、NMP、80℃、3日。
イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(13)。DMF(10mL)中シトシン1(500mg、4.50mmol)の撹拌溶液へ、クロロアセトアルデヒド2(H2O中50%)(0.686mL、5.40mmol)を加え、溶液を70℃にて16時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をエタノール及びエーテルで洗浄して化合物13を薄褐色の粉末として得た(320mg、53%):Rf=0.47 (EtOAc/MeOH 4:1); mp: 281-282℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=6.62 (d, 1H, 3J=7.6 Hz), 7.28 (d, 1H, 3J=7.6 Hz), 7.41 (d, 1H, 3J=1.2 Hz), 7.80 (d, 1H, 3J=1.2 Hz), 11.60 ppm (bs, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=97.7, 112.2, 129.4, 132.3, 145.9, 146.4 ppm; IR (KBr): ν=3451, 3121, 3096, 1718, 1630, 1547, 1290, 1252, 1111 cm-1; MS (ESI) m/z 135.8 [M+H]+.
2-メチルイミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(14)。DMF(10mL)中シトシン1(500mg、4.50mmol)の撹拌溶液へ、クロロアセトン3(0.430mL、5.40mmol)を加え、溶液を70℃にて16時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(塩化メチレン/エタノール97:3及び95:5)で精製して化合物14を薄褐色の粉末として得た(95mg、14%):Rf=0.07 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 299-300℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=2.27 (s, 3H), 6.51 (d, 1H, 3J=7.2 Hz), 7.22-7.25 (m, 1H), 7.51 (s, 1H), 11.51 ppm (bs, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.0, 97.2, 108.3, 129.2, 141.3, 145.5, 146.1 ppm; IR (KBr): ν=3447, 3142, 3091, 1708, 1630, 1404, 1371, 1346, 1300, 1266, 1208, 1176, 783 cm-1; MS (ESI) m/z 149.9 [M+H]+.
2-フェニルイミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(15)。MeOH(40mL)中シトシン1(500mg、4.50mmol)の撹拌溶液へ、2-ブロモアセトフェノン4(814mg、4.09mmol)を加え、溶液を70℃にて42時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(塩化メチレン/エタノール99:1及び95:5)で精製して化合物15を白色の粉末として得た(305mg、35%):Rf=0.18 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 256-257℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=6.65 (d, 1H, 3J=7.6 Hz), 7.31-7.37 (m, 2H), 7.46 (t, 2H, 3J=7.6 Hz), 8.01 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 8.33 (s, 1H), 11.63 ppm (bs, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=97.4, 107.9, 125.7 (2C), 128.0, 128.8 (2C), 130.0, 133.2, 143.6, 146.2, 146.3 ppm; IR (KBr): ν=3440, 3099, 1711, 1623, 1378, 1214, 1186 cm-1; MS (ESI) m/z 210.0 [M+H]+.
2-(4-フルオロフェニル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(16)。化合物15の合成に従い、シトシン1(500mg、4.50mmol)及び2-ブロモ-4'-フルオロアセトフェノン5(888mg、4.09mmol)から出発して化合物16を白色の粉末として得た(210mg、22%):Rf=0.15 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 310-311℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=6.65 (d, 1H, 3J=7.6 Hz), 7.27-7.34 (m, 3H), 8.04-8.08 (m, 2H), 8.35 (s, 1H), 11.66 ppm (bs, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=97.2, 107.6, 115.5 (2C), 127.4 (2C), 129.6, 129.9, 142.5, 146.0, 146.1, 160.8 ppm; IR (KBr): ν=3448, 3109, 1730, 1624, 1544, 1500, 1377, 1236, 1213, 836 cm-1; MS (ESI) m/z 230.0 [M+H]+.
2-(4-クロロフェニルl)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(17)。化合物15の合成に従い、シトシン1(500mg、4.50mmol)及び2-ブロモ-4'-クロロアセトフェノン6(955mg、4.09mmol)から出発して化合物17を白色の粉末として得た(375mg、37%):Rf=0.27 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 343-344℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=6.65 (d, 1H, 3J=7.6 Hz), 7.33 (m, 1H), 7.51 (d, 2H, 3J=8.4 Hz), 8.04 (d, 2H, 3J=8.4 Hz), 8.40 (s, 1H), 11.67 ppm (bs, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=97.2, 108.3, 127.2 (2C), 128.7 (2C), 130.0, 132.0, 132.2, 142.2, 146.0, 146.2 ppm; IR (KBr): ν=3447, 3208, 3051, 2952, 1696, 1619, 1548, 1481, 1407, 1379, 1191, 1090, 836, 784, 746, 712, 568 cm-1; MS (ESI) m/z 246.0-247.9 [M+H]+.
2-(4-ブロモフェニル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(18)。化合物15の合成に従い、シトシン1(500mg、4.50mmol)及び2,4'-ジブロモアセトフェノン7(1.137g、4.09mmol)から出発して化合物18を白色の粉末として得た(425mg、36%):Rf=0.28 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 337-338℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=6.64 (d, 1H, 3J=7.2 Hz), 7.32 (m, 1H), 7.64 (d, 2H, 3J=8.4 Hz), 7.97 (d, 2H, 3J=8.4 Hz), 8.41 (s, 1H), 11.66 ppm (bs, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=97.2, 108.3, 120.8, 127.5 (2C), 130.0, 131.6 (2C), 132.3, 142.3, 146.0, 146.2 ppm; IR (KBr): ν=3450, 3210, 3082, 2950, 1699, 1621, 1544, 1479, 1402, 1379, 1191, 1067, 832, 796, 747, 557 cm-1; MS (ESI) m/z 290.0-291.9 [M+H]+.
2-[(4-トリフルオロメチル)フェニル]イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(19)。化合物15の合成に従い、シトシン1(500mg、4.50mmol)及び2-ブロモ-1-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]エタノン8(1.093g、4.09mmol)から出発して化合物19を白色の粉末として得た(440mg、39%):Rf=0.24 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 294-295℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=6.67 (d, 1H, 3J=7.6 Hz), 7.35 (d, 1H, 3J=7.6 Hz), 7.80 (d, 2H, 3J=8.0 Hz), 8.24 (d, 2H, 3J=8.0 Hz), 8.54 (s, 1H), 11.67 ppm (bs, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=97.4, 109.8, 124.5 (q, 1C, 1JC-F=272 Hz), 125.7 (d, 2C, 3JC-F=4 Hz), 126.2 (2C), 128.0 (q, 1C, 2JC-F=32 Hz), 130.5, 137.3, 142.0, 146.2, 146.6 ppm; IR (KBr): ν=3403, 3223, 3076, 2958, 1706, 1627, 1547, 1493, 1416, 1400, 1380, 1320, 1192, 1170, 1132, 1106, 1061, 849, 803, 764, 730, 558 cm-1; MS (ESI) m/z 280.0 [M+H]+.
化合物8は、文献J. Med. Chem.、2001、44、3231〜3243頁に報告されている合成手順に従って合成した。
2-(4-シアノフェニル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(20)。化合物15の合成に従い、シトシン1(500mg、4.50mmol)及び4-(ブロモアセチル)ベンゾニトリル9(917mg、4.09mmol)から出発して化合物20を白色の粉末として得た(300mg、31%):Rf=0.20 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: >350℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=6.67 (d, 1H, 3J=7.6 Hz), 7.34-7.37 (m, 1H), 7.91 (d, 2H, 3J=8.4 Hz), 8.20 (d, 2H, 3J=8.4 Hz), 8.60 (s, 1H), 11.71 ppm (d, 1H, 3J=4.4 Hz); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=98.1, 110.8, 111.2, 119.9, 127.0 (2C), 131.3, 133.6 (2C), 138.5, 142.5, 146.9, 147.4 ppm; IR (KBr): ν=3419, 3254, 3143, 2230, 1715, 1626, 1609, 1372, 1191 cm-1; MS (ESI) m/z 237.0 [M+H]+.
2-(4-ニトロフェニル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(21)。化合物15の合成に従い、シトシン1(500mg、4.50mmol)及び2-ブロモ-4'-ニトロアセトフェノン10(998mg、4.09mmol)から出発して化合物21を白色の粉末として得た(210mg、22%):Rf=0.25 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: >350℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=6.67 (d, 1H, 3J=7.2 Hz), 7.35-7.38 (m, 1H), 8.29 (s, 4H), 8.64 (s, 1H), 11.73 ppm (bs, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=97.4, 111.1, 124.2 (2C), 126.5 (2C), 130.8, 139.8, 141.4, 146.2, 146.7, 146.8 ppm; IR (KBr): ν=3448, 3218, 3112, 1708, 1630, 1600, 1518, 1349, 1186, 776, 738 cm-1; MS (ESI) m/z 257.0 [M+H]+.
2-(トリアゾール-2-イル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(22)。化合物15の合成に従い、シトシン1(291mg、2.62mmol)及び2-ブロモアセチルチアゾール11(490mg、2.38mmol)から出発して化合物22を薄褐色の粉末として得た(85mg、16%):Rf=0.16 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 327-328℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=6.69 (d, 1H, 3J=7.6 Hz), 7.38-7.41 (m, 1H), 7.81 (d, 1H, 3J=3.2 Hz), 7.96 (d, 1H, 3J=3.2 Hz), 8.16 (s, 1H), 11.83 ppm (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=97.0, 108.1, 120.4, 130.9, 138.4, 143.9, 145.9, 146.4, 161.7 ppm; IR (KBr): ν=3412, 3074, 2825, 1710, 1621, 1540, 1479, 1370, 1182, 1144, 1079, 1048, 796, 754 cm-1; MS (ESI) m/z 219.0 [M+H]+.
化合物11は、文献PCT/IB2007/002000、WO2008/004117に報告されている合成手順に従って合成した。
エチル-5-オキソ-6H-イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-2-カルボキシレート(23)。MeOH(40mL)中シトシン1(500mg、4.50mmol)の撹拌溶液へ、エチル3-プロモプルベート12(80〜85%)(0.849mL、5.40mmol)を加え、溶液を70℃にて15時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(塩化メチレン/メタノール99:1及び95:5)で精製して化合物23を白色の粉末として得た(200mg、21%):Rf=0.18 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 313-314℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.34 (t, 3H, 3J=7.2 Hz), 4.32 (q, 2H, 3J=7.2 Hz), 6.64 (d, 1H, 3J=7.6 Hz), 7.37-7.40 (m, 1H), 8.27 (s, 1H), 11.83 ppm (bs, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.1, 60.3, 97.5, 117.0, 131.1, 135.1, 145.9, 146.2, 161.9 ppm; IR (KBr): ν=3101, 2908, 1820, 1730, 1628, 1553, 1377, 1352, 1340, 1212, 1140 cm-1; MS (ESI) m/z 208.0 [M+H]+.
5-オキソ-6H-イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-2-カルボキサミド(24)。圧力管中、エチル-5-オキソ-6H-イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-2-カルボキシレート(23)(500mg、2.41mmol)ヘ、アンモニア(20%)20mLを加えた。管を封止して80℃に3時間加熱した。冷却した後、管を開き、過剰なアンモニアを減圧下で除去した。沈殿物をろ過し、EtOH/Et2Oで洗浄して化合物24を白色の粉末として得た(315mg、73%):Rf=0.15 (CH2Cl2/EtOH 90:10); mp: >350℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=6.60 (d, 1H, 3J=7.6 Hz), 7.37 (d, 1H, 3J=7.6 Hz), 7.49 (bs, 1H), 7.72 (bs, 1H), 8.09 (s, 1H), 11.06 ppm (bs, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=97.3, 113.4, 130.9, 139.1, 145.5, 146.1, 163.2 ppm; IR (KBr): ν=3361, 1741, 1677, 1626, 1595, 1379, 1348, 1266 cm-1; MS (ESI) m/z 179.0 [M+H]+.
5-オキソ-6H-イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-2-カルボニトリル(25)。ピリジン(21.5mL)中5-オキソ-6H-イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-2-カルボキサミド(24)(540mg、3.03mmol)の撹拌溶液へ、トリフルオロ酢酸無水物(1.27mL、9.09mmol)を加え、溶液を室温にて2時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をCH2Cl2/Et2O中で粉砕し、ろ過後に化合物25を白色の粉末として得た(330mg、69%):Rf=0.23 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 335-336℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=6.66 (d, 1H, 3J=7.6 Hz), 7.46 (m, 1H), 8.79 (s, 1H), 11.98 ppm (bs, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=96.9, 114.8, 115.5, 121.9, 132.3, 145.3, 146.9 ppm; IR (KBr): ν=3430, 3145, 3084, 2246, 1720, 1622, 1560, 1386, 1374, 1207, 1161 cm-1; MS (ESI) m/z 160.9 [M+H]+.
6-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(27)。N-メチル-2-ピロリドン(3mL)中(2R,3S)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-メチル-2-[(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル]オキシラン26(279mg、1.11mmol)の撹拌溶液へ、K2CO3(113mg、0.81mmol)及びイミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン13(100mg、0.74mmol)を加えた。溶液を80℃にて3日間撹拌した。混合物を水で希釈し、生成物を酢酸エチルで抽出した。有機層を無水Na2SO4で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(塩化メチレン及び塩化メチレン/エタノール98:2)で精製して化合物27を白色の粉末として得た(235mg、82%):Rf=0.22 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 156-157℃; [α]20 D = 70.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.17 (d, 3H, 3J=7.2 Hz), 4.39 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.87 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.72 (q, 1H, 3J=7.2 Hz), 6.28 (s, 1H), 6.81 (d, 1H, 3J=7.6 Hz), 7.02 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 4JH-H=2.0 Hz), 7.29-7.36 (m, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.55 (d, 1H, 3J=7.6 Hz), 7.60 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 8.27 ppm (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=15.0, 54.1, 54.7, 77.8, 98.4, 104.4, 111.2, 113.2, 124.3, 129.9, 130.9, 132.5, 144.8, 145.0, 147.3, 150.6, 158.8, 162.3 ppm; IR (KBr): ν=3410, 3110, 1691, 1628, 1502, 1424, 1292, 1138 cm-1; MS (ESI) m/z 387.1 [M+H]+; UPLC純度99%.
6-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-2-メチルイミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(28)。化合物27の合成に従い、(2R,3S)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-メチル-2-[(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル]オキシラン26(202mg、0.81mmol)及び2-メチルイミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン14(80mg、0.54mmol)から出発して化合物28を白色の粉末として得た(160mg、75%):Rf=0.25 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 103-104℃; [α]20 D = 50.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.16 (d, 3H, 3J=7.2 Hz), 2.31 (s, 3H), 4.34 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.86 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.70 (q, 1H, 3J=7.2 Hz), 6.26 (s, 1H), 6.71 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 7.01 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 4JH-H=2.0 Hz), 7.28-7.35 (m, 2H), 7.52 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 7.60 (s, 2H), 8.26 ppm (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.0, 15.0, 53.9, 54.7, 77.8, 97.9, 104.2, 109.3, 111.2, 124.2, 129.9, 130.7, 141.8, 144.3, 145.0, 146.9, 150.6 ppm, (CFは見えない); IR (KBr): ν=3405, 1696, 1629, 1500, 1424, 1391, 1293, 1275, 1243, 1177, 1141 cm-1; MS (ESI) m/z 401.1 [M+H]+; UPLC純度98%.
6-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-2-フェニルイミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(29)。化合物27の合成に従い、(2R,3S)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-メチル-2-[(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル]オキシラン26(178mg、0.71mmol)及び2-フェニルイミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン15(100mg、0.47mmol)から出発して化合物29を白色の粉末として得た(105mg、48%):Rf=0.30 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 100-101℃; [α]20 D = 60.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.19 (d, 3H, 3J=7.1 Hz), 4.43 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.88 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.74 (q, 1H, 3J=7.4 Hz), 6.30 (s, 1H), 6.84 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 7.03 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 4JH-H=2.0 Hz), 7.31-7.39 (m, 3H), 7.48 (t, 2H, 3J=7.6 Hz), 7.58-7.61 (m, 2H), 8.05 (d, 2H, 3J=7.6 Hz), 8.28 (s, 1H), 8.42 ppm (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=15.0, 54.2, 54.8, 77.8, 98.1, 104.5, 108.8, 111.2, 124.3, 125.7 (2C), 128.1, 128.9 (2C), 130.0, 131.5, 133.2, 144.0, 145.0, 145.1, 147.2, 150.6 ppm, (CFは見えない); IR (KBr): ν=3448, 1701, 1629, 1420, 1274, 1247, 1141 cm-1; MS (ESI) m/z 463.2 [M+H]+; UPLC純度99%.
6-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-2-(4-フルオロフェニル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(30)。化合物27の合成に従い、(2R,3S)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-メチル-2-[(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル]オキシラン26(181mg、0.72mmol)及び2-(4-フルオロフェニル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン16(110mg、0.48mmol)から出発して化合物30を白色の粉末として得た(100mg、43%):Rf=0.30 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 114-115℃; [α]20 D = 50.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.19 (d, 3H, 3J=7.2 Hz), 4.43 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.88 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.74 (q, 1H, 3J=7.2 Hz), 6.29 (s, 1H), 6.83 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 7.03 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 4JH-H=2.0 Hz), 7.29-7.35 (m, 4H), 7.58 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 7.61 (s, 1H), 8.08-8.11 (m, 2H), 8.27 (s, 1H), 8.43 ppm (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.8, 53.9, 54.5, 77.6, 97.8, 104.5, 108.5, 111.2, 115.4 (2C), 115.7 (2C),124.3, 127.5, 127.6, 129.6, 131.4, 142.8, 144.8, 145.0, 146.9, 150.4 ppm, (CFは見えない); IR (KBr): ν=3424, 1701, 1628, 1498, 1426, 1274, 1247, 1141 cm-1; MS (ESI) m/z 481.2 [M+H]+; UPLC純度99%.
6-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-2-(4-クロロフェニル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(31)。化合物27の合成に従い、(2R,3S)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-メチル-2-[(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル]オキシラン26(153mg、0.61mmol)及び2-(4-クロロフェニル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン17(100mg、0.41mmol)から出発して化合物2'を白色の粉末として得た(120mg、59%):Rf=0.50 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 158-159℃; [α]20 D = 50.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.19 (d, 3H, 3J=6.8 Hz), 4.44 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.87 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.73 (q, 1H, 3J=6.8 Hz), 6.30 (s, 1H), 6.83 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 7.03 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 4JH-H=2.0 Hz), 7.30-7.36 (m, 2H), 7.53 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 7.58-7.61 (m, 3H), 8.07 (d, 2H, 3J=8.4 Hz), 8.27 (s, 1H), 8.49 ppm (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.8, 54.0, 54.5, 77.6, 97.9, 104.2, 109.2, 111.1, 124.1, 127.2 (2C), 128.7 (2C), 129.7, 131.5, 131.9, 132.3, 142.6, 144.8, 145.1, 146.9, 150.4 ppm, (CFは見えない); IR (KBr): ν=3422, 1702, 1629, 1499, 1480, 1420, 1272, 1247, 1141, 750 cm-1; MS (ESI) m/z 497.1-499.1 [M+H]+; UPLC純度100%.
6-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-2-(4-ブロモフェニル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(32)。化合物27の合成に従い、(2R,3S)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-メチル-2-[(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル]オキシラン26(156mg、0.62mmol)及び2-(4-ブロモメチルフェニル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン18(120mg、0.41mmol)から出発して化合物32を白色の粉末として得た(152mg、68%):Rf=0.44 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 161-162℃; [α]20 D = 70.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.19 (d, 3H, 3J=7.2 Hz), 4.44 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.88 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.74 (q, 1H, 3J=7.2 Hz), 6.30 (s, 1H), 6.83 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 7.03 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 4JH-H=2.0 Hz), 7.30-7.35 (m, 2H), 7.59 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 7.61 (s, 1H), 7.66 (d, 2H, 3J=8.8 Hz), 8.01 (d, 2H, 3J=8.8 Hz), 8.27 (s, 1H), 8.50 ppm (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.8, 54.0, 54.5, 77.6, 97.9, 104.2, 109.2, 111.1, 120.9, 124.1, 127.6 (2C), 129.7, 131.5, 131.6 (2C), 132.3, 142.6, 144.8, 145.1, 146.9, 150.4, 158.5, 162.0 ppm; IR (KBr): ν=3423, 3124, 1706, 1629, 1500, 1420, 1388, 1272, 1247, 1142, 747 cm-1; MS (ESI) m/z 541.0-543.0 [M+H]+; UPLC純度100%.
6-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-2-[(4-トリフルオロメチル)フェニル]イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(33)。化合物27の合成に従い、(2R,3S)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-メチル-2-[(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル]オキシラン26(155mg、0.62mmol)及び2-[(4-トリフルオロメチル)フェニル]イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン19(115mg、0.41mmol)から出発して化合物33を白色の粉末として得た(120mg、55%):Rf=0.41 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 196-197℃; [α]20 D = 50.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.19 (d, 3H, 3J=7.2 Hz), 4.46 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.88 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.74 (q, 1H, 3J=7.2 Hz), 6.31 (s, 1H), 6.86 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 7.03 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 4JH-H=2.0 Hz), 7.31-7.35 (m, 2H), 7.60-7.62 (m, 2H), 7.83 (d, 2H, 3J=8.0 Hz), 8.27-8.29 (m, 3H), 8.63 ppm (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.8, 54.0, 54.6, 77.6, 97.9, 104.2, 110.5, 111.1, 124.1, 124.3, 125.6 (2C), 126.1 (2C), 127.9, 129.7, 131.7, 137.0, 142.2, 144.8, 145.3, 147.0, 150.4, 158.5, 162.0 ppm; IR (KBr): ν=3430, 1708, 1630, 1500, 1423, 1325, 1249, 1123, 850 cm-1; MS (ESI) m/z 531.2 [M+H]+; UPLC純度99%.
6-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-2-(4-シアノフェニル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(34)。化合物27の合成に従い、(2R,3S)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-メチル-2-[(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル]オキシラン26(160mg、0.64mmol)及び2-(4-シアノフェニル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン20(100mg、0.42mmol)から出発して化合物34を白色の粉末として得た(130mg、58%):Rf=0.30 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 177-178℃; [α]20 D = 90.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.20 (d, 3H, 3J=7.2 Hz), 4.46 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.87 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.73 (q, 1H, 3J=7.2 Hz), 6.30 (s, 1H), 6.86 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 7.03 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 4JH-H=2.0 Hz), 7.31-7.38 (m, 2H), 7.60-7.62 (m, 2H), 7.93 (d, 2H, 3J=8.0 Hz), 8.25 (d, 2H, 3J=8.0 Hz), 8.27 (s, 1H), 8.69 ppm (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.9, 54.2, 54.7, 77.8, 98.1, 104.4, 111.1, 111.2, 111.4, 119.1, 124.3, 126.3 (2C), 129.9, 132.1, 132.9 (2C), 137.8, 142.1, 145.0, 145.6, 147.1, 150.6 ppm, (CFは見えない); IR (KBr): ν=3422, 2223, 1703, 1627, 1500, 1420, 1387, 1274, 1248 cm-1; MS (ESI) m/z 488.1 [M+H]+; UPLC純度100%.
6-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-2-(4-ニトロフェニル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(35)。化合物27の合成に従い、(2R,3S)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-メチル-2-[(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル]オキシラン26(147mg、0.59mmol)及び2-(4-ニトロフェニル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン21(100mg、0.39mmol)から出発して化合物35を黄色の粉末として得た(100mg、50%):Rf=0.35 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 209-210℃; [α]20 D = 70.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.20 (d, 3H, 3J=7.2 Hz), 4.47 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.87 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.73 (q, 1H, 3J=7.2 Hz), 6.31 (s, 1H), 6.86 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 7.03 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 2JH-H=2.0 Hz), 7.31-7.37 (m, 2H), 7.61-7.63 (m, 2H), 8.27-8.34 (m, 5H), 8.75 ppm (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.7, 54.1, 54.5, 77.6, 97.9, 104.3, 111.1, 111.8, 124.0, 124.1 (2C), 126.3 (2C), 129.7, 132.0, 139.6, 141.6, 144.8, 145.5, 146.6, 146.9, 150.4 ppm, (CFは見えない); IR (KBr): ν=3431, 1709, 1629, 1603, 1506, 1424, 1334, 1247 cm-1; MS (ESI) m/z 508.2 [M+H]+; UPLC純度100%.
6-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-2-(チアゾール-2-イル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン(36)。化合物27の合成に従い、(2R,3S)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-メチル-2-[(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル]オキシラン26(112mg、0.45mmol)及び2-(トリアゾール-2-イル)イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-5-オン22(65mg、0.30mmol)から出発して化合物36を黄色の粉末として得た(75mg、54%):Rf=0.25 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 175-176℃; [α]20 D = 70.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.19 (d, 3H, 3J=7.2 Hz), 4.48 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.86 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.72 (q, 1H, 3J=7.2 Hz), 6.32 (s, 1H), 6.86 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 7.03 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 4JH-H=2.0 Hz), 7.31-7.37 (m, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.63 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 7.83 (d, 1H, 3J=3.2 Hz), 7.98 (d, 1H, 3J=3.2 Hz), 8.26 (s, 1H), 8.27 ppm (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.7, 54.2, 54.5, 77.6, 97.7, 104.3, 109.1, 111.1, 120.5, 124.0, 129.7, 132.3, 138.7, 143.9, 144.8, 145.3, 146.9, 150.4, 161.6 ppm, (CFは見えない); IR (KBr): ν=3403, 3100, 2925, 1706, 1626, 1498, 1420, 1273, 1246, 1178, 1143,1050, 966, 851, 763 cm-1; MS (ESI) m/z 470.1 [M+H]+; UPLC純度100%.
エチル-6-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-5-オキソ-イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-2-カルボキシレート(37)。化合物27の合成に従い、(2R,3S)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-メチル-2-[(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル]オキシラン26 (182mg、0.72mmol)及びエチル-5-オキソ-6H-イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-2-カルボキシレート23(100mg、0.48mmol)から出発して化合物37を白色の粉末として得た(80mg、36%):Rf=0.28 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 148-149℃; [α]20 D = 70.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.18 (d, 3H, 3J=7.2 Hz), 1.36 (t, 3H, 3J=6.8 Hz), 4.35 (q, 2H, 3J=6.8 Hz), 4.48 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.83 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.39 (q, 1H, 3J=7.2 Hz), 6.32 (s, 1H), 6.81 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 7.04 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 4JH-H=2.0 Hz), 7.30-7.37 (m, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.62 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 8.26 (s, 1H), 8.66 ppm (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.3, 14.7, 54.2, 54.5, 60.4, 77.5, 98.2, 104.2, 111.1, 117.9, 124.2, 129.6, 132.6, 135.4, 144.8, 145.1, 146.9, 150.4, 158.7, 161.9, 162.1 ppm; IR (KBr): ν=3420, 2926, 1709, 1631, 1500, 1422, 1374, 1273, 1249, 1201, 1139 cm-1; MS (ESI) m/z 459.1 [M+H]+; UPLC純度98%.
6-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-5-オキソ-イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-2-カルボニトリル(38)。化合物27の合成に従い、(2R,3S)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-メチル-2-[(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル]オキシラン26(247mg、0.98mmol)及び5-オキソ-6H-イミダゾ[1,2-c]ピリミジン-2-カルボニトリル25(105mg、0.66mmol)から出発して化合物38を白色の粉末として得た(75mg、28%):Rf=0.33 (CH2Cl2/EtOH 95:5); mp: 132-133℃; [α]20 D = 80.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.17 (d, 3H, 3J=7.2 Hz), 4.51 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.79 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.67 (q, 1H, 3J=7.2 Hz), 6.33 (s, 1H), 6.84 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 7.04 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 4JH-H=2.0 Hz), 7.31-7.37 (m, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.67 (d, 1H, 3J=8.0 Hz), 8.25 (s, 1H), 8.90 ppm (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.6, 54.3, 54.4, 77.5, 97.5, 104.3, 111.1, 114.8, 115.8, 122.8, 124.1, 129.7, 133.7, 144.8, 145.8, 146.4, 150.4, 158.4, 162.2 ppm; IR (KBr): ν=3412, 3129, 2237, 1718, 1631, 1503, 1424, 1276, 1246, 1172, 1142, 968 cm-1; MS (ESI) m/z 412.1 [M+H]+; UPLC純度100%.
スキーム3.試薬及び条件:(i)POCl3、DMF、1,2-ジクロロエタン、AcONa、0℃にて還流、20分;(ii)NBS、CH3CN、0℃、15分;(iii) a)H2NNHCOOEt、DMF、90℃、24時間;b)NaH、DMF、90℃、24時間。
スキーム4.試薬及び条件:(i)K2CO3、NMP、80℃、3日;(ii)化合物45から出発:ZN(CN)2、Pd(PPh3)4、DMF、120℃(mW)、10分;(iii)化合物45から出発:Ar-B(OH)2、Pd(PPh3)4、ACN、Na2CO3、120℃(mW)、10分。
1H-ピロール-2-カルボキシアルデヒド(40)。0℃でのDMF 6.35mL(82.0mmol)へ、アルゴン下、オキシ塩化リン(82.0mmol)7.5mLを滴下で加えた。冷浴を除去し、撹拌を15分間続けた。溶液を1,2-ジクロロエタン(18mL)で希釈し、再度0℃へ冷却した。1,2-ジクロロエタン(18mL)中1H-ピロール(5.17mL、74.5mmol)溶液を滴下で加えた。混合物を加熱して15分間還流させ、0℃へ冷却した。次いで、水(90mL)中酢酸ナトリウム溶液(33.55g、409.8mmol)を激しく撹拌しながら加えた。混合物を還流にて20分間加熱し、室温まで冷却させた。混合物を飽和NaHCO3で希釈し、生成物を塩化メチレンで抽出した。有機層を無水Na2SO4で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(塩化メチレン)で精製して化合物40を橙色の結晶として得た(6.37g、90%):Rf=0.36 (CH2Cl2/EtOH 99:1); mp: 45-46℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=6.31 (m, 1H), 7.03 (m, 1H), 7.25 (m, 1H), 9.51 (s, 1H), 12.14 ppm (bs, 1H); IR (KBr): ν=3153, 2978, 2865, 1638, 1444, 1405, 1356, 1315, 1140, 1097, 1049, 863, 753, 605, 518 cm-1; MS (ESI) m/z 95.8 [M+H]+.
4-ブロモ-1H-ピロール-2-カルボキシアルデヒド(41)。CH3CN(10mL)中1H-ピロール-2-カルボキシアルデヒド40(1g、10.52mmol)の0℃での撹拌溶液へ、N-ブロモスクシンイミド(1.872g、10.52mmol)を加え、溶液を0℃にて15分間撹拌した。水を加え、得られた混合物をEt2Oで抽出した。有機層を無水Na2SO4で乾燥させ、真空中で濃縮した。シクロヘキサン/エタノールを用いた粗混合物の結晶化により化合物41を白色の結晶として得た(1.125g、61%):Rf=0.22 (CH2Cl2); mp: 121-122℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=7.12 (m, 1H), 7.41 (m, 1H), 9.48 (s, 1H), 12.51 ppm (bs, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=97.0, 120.8, 126.5, 132.9, 179.1 ppm; IR (KBr): ν=3238, 3108, 2926, 2860, 1655, 1380, 1357, 1147, 1104, 920, 827, 771, 744, 598 cm-1; MS (ESI) m/z 173.9-175.9 [M+H]+.
3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン(42)。DMF(5mL)中エチルカルバゼート(241mg、2.31mmol)の撹拌溶液へ、1H-ピロール-2-カルボキシアルデヒド(200mg、2.10mmol)を加え、溶液を90℃にて24時間撹拌した。溶液を0℃へ冷却し、水素化ナトリウム(鉱油中60%分散体)(42mg、1.05mmol)を加え、反応混合物を90℃にて24時間撹拌した。水を加え、得られた混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層をかん水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル/ジエチルエーテル7:3)で精製して化合物42を白色の粉末として得た(172mg、61%):Rf=0.31 (石油エーテル/Et2O 1:1); mp: 160-161℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=6.86 (m, 2H), 7.79 (m, 1H), 8.28 (s, 1H), 12.29 ppm (bs, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=109.1, 115.4, 116.2, 125.6, 132.4, 144.7 ppm; IR (KBr): ν=3238, 3200, 3147, 3100, 2996, 2935, 1718, 1602, 1438, 1421, 1352, 1313, 1260, 1215, 1163, 1081, 875, 762, 732, 626 cm-1; MS (ESI) m/z 135.8 [M+H]+.
7-ブロモ-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン(43)。3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン42の合成に従い、4-ブロモ-1H-ピロール-2-カルボキシアルデヒド41(1g、5.75mmol)及びエチルカルバゼート(658mg、6.32mmol)から出発して化合物43を白色の粉末として得た(600mg、49%):Rf=0.24 (CH2Cl2/EtOH 99:1); mp: 187-188℃; 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=6.99 (s, 1H), 7.96 (d, 1H, 4J=0.8 Hz), 8.24 (s, 1H), 12.48 ppm (bs, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=104.4, 110.6, 115.8, 126.3, 131.3, 143.3 ppm; IR (KBr): ν=3203, 3151, 3102, 1717, 1533, 1474, 1409, 1383, 1327, 1302, 1147, 891, 825, 727, 628 cm-1; MS (ESI) m/z 214.0-216.0 [M+H]+.
3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン(44)。N-メチル-2-ピロリドン(3mL)中(2R,3S)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-メチル-2-[(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル]オキシラン26(279mg、1.11mmol)へ、K2CO3(113mg、0.81mmol)及び3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン42(100mg、0.74mmol)を加えた。溶液を80℃で3日間撹拌した。混合物を水で希釈し、生成物を酢酸エチルで抽出した。有機層を無水Na2SO4で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(Et2O)で精製して化合物44を白色の粉末として得た(140mg、49%):Rf=0.10 (Et2O); mp: 131-132℃; [α]20 D = 30.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.22 (d, 3H, 3J=6.8 Hz), 4.48 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.91 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.64-5.69 (m, 2H), 6.91-6.99 (m, 3H), 7.25 (ddd, 1H, 3JH-F=3J’H-F=9.2 Hz, 4JH-H=2.0 Hz), 7.35 (ddd, 1H, 3JH-H =8.4 Hz, 4JH-F=4J’H-F=6.8 Hz), 7.59 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.48 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.1, 54.7, 55.5, 77.4, 103.9, 109.6, 110.9, 116.0, 117.5, 124.0, 125.0, 130.0, 132.7, 144.7, 145.0, 150.2, 158.7, 161.9 ppm; IR (KBr): ν=3398, 3126, 1706, 1676, 1617, 1598, 1499, 1448, 1424, 1344, 1272, 1164, 1139, 963, 732, 682 cm-1; MS (ESI) m/z 387.1 [M+H]+; UPLC純度99%.
7-ブロモ-3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン(45)。3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン44の合成に従い、(2R,3S)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-メチル-2-[(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)メチル]オキシラン26(880mg、3.51mmol)及び7-ブロモ-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン43(500mg、2.34mmol)から出発した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(ジエチルエーテル/酢酸エチル50:50)で、続いてC18逆相カラムクロマトグラフィー(アセトニトリル/水40:60)で精製して化合物45を薄褐色の粉末として得た(480mg、44%):Rf=0.27 (CH2Cl2/EtOH 98:2); mp: 142-143℃; [α]20 D = 20.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.22 (d, 3H, 3J=7.2 Hz), 4.50 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.89 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.60-5.62 (m, 2H), 6.96 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 4JH-H=2.6 Hz), 7.06 (d, 1H, 4J=1.2 Hz), 7.24 (ddd, 1H, 3JH-F=3J’H-F=9.2 Hz, 4JH-H=2.6 Hz), 7.34 (m, 1H), 7.60 (s, 1H), 8.05 (d, 1H, 4J=1.2 Hz), 8.27 (s, 1H), 8.43 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.1, 54.7, 55.9, 77.4, 103.9, 104.8, 111.0 (2C), 117.0, 124.0, 125.7, 130.0, 131.5, 143.7, 144.7, 150.2, 158.7, 161.9 ppm; IR (KBr): ν=3376, 3159, 1706, 1617, 1499, 1458, 1401, 1329, 1294, 1272, 1173, 1133, 1043, 961, 852, 727, 670 cm-1; MS (ESI) m/z 465.0-466.9 [M+H]+; UPLC純度100%.
3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-4-オキソ-3,4-ジヒドロ-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-7-カルボニトリル(46)。10mLのバイアルへ、アルゴン下、7-ブロモ-3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン45(200mg、0.43mmol)、シアン化亜鉛(50mg、0.43mmol)、Pd(PPh3)4(25mg、0.02mmol)及びDMF(2mL)を加えた。得られた混合物を、マイクロ波照射下、120℃にて10分間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、水で希釈した。生成物を酢酸エチルで抽出し、有機層を無水Na2SO4で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ジエチルエーテル/酢酸エチル80:20)で精製し、次いでジイソプロピルエーテル中で粉砕して、ろ過後に化合物46を白色の粉末として得た(92mg、52%):Rf=0.30 (CH2Cl2/EtOH 98:2); mp: 218-219℃; [α]20 D = 10.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.22 (d, 3H, 3J=6.8 Hz), 4.56 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.88 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.59 (d, 1H, 3J=6.8 Hz), 5.69 (s, 1H), 6.97 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.8 Hz, 4JH-H=2.2 Hz), 7.26 (ddd, 1H, 3JH-F=3J’H-F=9.2 Hz, 4JH-H=2.2 Hz), 7.31-7.37 (m, 2H), 7.60 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.71 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=13.8, 54.6, 56.2, 77.4, 99.1, 104.0, 111.0 (2C), 114.9,
124.0, 124.4, 125.7, 130.0, 132.3, 144.0, 144.7, 150.2, 158.7, 161.9 ppm; IR (KBr): ν=3335, 2233, 1718, 1612, 1508, 1431, 1407, 1310, 1167, 1136, 1042, 959, 890, 829, 730, 673 cm-1; MS (ESI) m/z 412.1 [M+H]+; UPLC純度94%.
3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-7-フェニル-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン(47)。10mLのバイアルへ、アルゴン下、7-ブロモ-3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン45(200mg、0.43mmol)、ベンゼンボロン酸(61mg、0.43mmol)、Pd(PPh3)4(25mg、0.02mmol)、2MのNa2CO3水性溶液(2mL)及びアセトニトリル(2mL)を加えた。得られた混合物をマイクロ波照射下、120℃にて10分間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、水で希釈した。生成物を塩化メチレンで抽出し、有機層を無水Na2SO4で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(CH2Cl2及びCH2Cl2/EtOH 99:1)で精製して化合物47を緑色の粉末として得た(119mg、60%):Rf=0.29 (CH2Cl2/EtOH 98:2); mp: 146-147℃; [α]20 D = 80.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.24 (d, 3H, 3J=6.8 Hz), 4.53 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.94 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.65-5.71 (m, 2H), 6.97 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 4JH-H=2.4 Hz), 7.26 (ddd, 1H, 3JH-F=3J’H-F=9.2 Hz, 4JH-H=2.4 Hz), 7.33-7.39 (m, 3H), 7.48 (d, 2H, 3JH-H=7.3 Hz), 7.60 (s, 1H), 7.89 (d, 2H, 3JH-H=7.3 Hz), 8.30 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.49 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.1, 54.8, 55.5, 77.4, 104.0, 106.7, 111.0, 113.9, 124.1, 125.9, 126.0 (2C), 127.6, 129.0 (2C), 130.1, 130.7, 132.5, 132.7, 144.7, 144.8, 157.5, 158.7, 161.9 ppm; IR (KBr): ν=3403, 1696, 1617, 1500, 1458, 1408, 1272, 1210, 1133, 1045, 964, 851, 758, 728, 677, 511 cm-1; MS (ESI) m/z 463.1 [M+H]+; UPLC純度100%.
7-(4-クロロフェニル)-3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン(48)。3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-7-フェニル-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン47の合成に従い、7-ブロモ-3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン45(200mg、0.43mmol)及び4-クロロベンゼンボロン酸(61mg、0.43mmol)から出発して化合物48を薄黄色の粉末として得た(98mg、46%):Rf=0.25 (CH2Cl2/EtOH 98:2); mp: 204-205℃; [α]20 D = 30.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.24 (d, 3H, 3J=6.8 Hz), 4.53 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.93 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.65-5.66 (m, 2H), 6.98 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.8 Hz, 4JH-H=2.2 Hz), 7.26 (ddd, 1H, 3JH-F=3J’H-F=9.2 Hz, 4JH-H=2.2 Hz), 7.33-7.38 (m, 2H), 7.53 (d, 2H, 3JH-H=8.4 Hz), 7.60 (s, 1H), 7.93 (d, 2H, 3JH-H=8.4 Hz), 8.29 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.48 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.1, 54.7, 55.8, 77.4, 103.9, 106.7, 111.0, 114.2, 124.1, 125.9, 126.6, 127.8 (2C), 128.9 (2C), 129.4, 130.1, 131.7, 132.1, 132.5, 144.7, 150.2, 158.7, 161.9 ppm; IR (KBr): ν=3386, 1707, 1599, 1500, 1386, 1293, 1269, 1179, 1138, 1091, 825, 677 cm-1; MS (ESI) m/z 497.0-499.1 [M+H]+; UPLC純度97%.
4-{3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-4-オキソ-3,4-ジヒドロ-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-7-イル}ベンゾニトリル(49)。3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-7-フェニル-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン47の合成に従い、7-ブロモ-3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン45(200mg、0.43mmol)及び4-シアノベンゼンボロン酸(63mg、0.43mmol)から出発した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(塩化メチレン/エタノール99:1及びジエチルエーテル/酢酸エチル80:20)で精製して化合物49を薄黄色の粉末として得た(105mg、50%):Rf=0.23 (CH2Cl2/EtOH 98:2); mp: 201-202℃; [α]20 D = 20.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.24 (d, 3H, 3J=6.4 Hz), 4.54 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.93 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.65-5.72 (m, 2H), 6.97 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 4JH-H=2.0 Hz), 7.25 (ddd, 1H, 3JH-F=3J’H-F=9.6 Hz, 4JH-H=2.0 Hz), 7.36 (m, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.93 (d, 2H, 3JH-H=8.4 Hz), 8.12 (d, 2H, 3JH-H=8.4 Hz), 8.29 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.58 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.1, 54.7, 54.9, 77.4, 103.9, 106.8, 109.7, 111.0, 115.5, 118.9, 124.0, 126.2, 126.7 (2C), 128.8, 130.1, 132.5, 132.9 (2C), 137.4, 144.7, 150.2, 157.4, 160.7 ppm; IR (KBr): ν=3447, 2221, 1699, 1500, 1388, 1293, 1138, 1047, 966, 804 cm-1; MS (ESI) m/z 488.1 [M+H]+; UPLC純度100%.
3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-7-(4-ニトロフェニル)-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン(50)。3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-7-フェニル-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン47の合成に従い、7-ブロモ-3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン45(100mg、0.21mmol)及び4-ニトロベンゼンボロン酸(43mg、0.25mmol)から出発した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル/酢酸エチル60:40)で、続いてC18逆相カラムクロマトグラフィー(アセトニトリル/水50:50)で精製して化合物50を褐色の粉末として得た(51mg、47%):Rf=0.25 (CH2Cl2/EtOH 98:2); mp: 130-131℃; [α]20 D = 50.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.25 (d, 3H, 3J=6.8 Hz), 4.55 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.93 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.65-5.71 (m, 2H), 6.97 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 4JH-H=2.4 Hz), 7.26 (ddd, 1H, 3JH-F=3J’H-F=9.2 Hz, 4JH-H=2.4 Hz), 7.36 (m, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 8.21 (d, 2H, 3JH-H=8.8 Hz), 8.29 (s, 1H), 8.32 (d, 2H, 3JH-H=8.8 Hz), 8.53 (s, 1H), 8.64 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.0, 54.7, 55.8, 77.4, 103.9, 107.0, 111.0, 115.9, 124.0, 124.2 (2C), 126.3, 126.9 (2C), 128.3, 130.1, 132.6, 139.4, 144.7 (2C), 146.4, 150.2, 158.6, 161.9 ppm; IR (KBr): ν=3448, 1701, 1509, 1342, 1212, 1132, 964, 852, 752 cm-1; MS (ESI) m/z 508.0 [M+H]+; UPLC純度98%.
3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-7-(4-メトキシフェニル)-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン(51)。3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-7-フェニル-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン47の合成に従い、7-ブロモ-3-[(1R,2R)-2-(2,4-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-メチル-3-(1,2,4-トリアゾール-1-イル)プロピル]-3H-ピロロ[1,2-d][1,2,4]トリアジン-4-オン45(200mg、0.43mmol)及び4-メトキシベンゼンボロン酸(65mg、0.43mmol)から出発した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ジエチルエーテル及びジエチルエーテル/酢酸エチル90:10)で精製し、次いでジイソプロピルエーテル中で粉砕して、ろ過後に化合物51を黄色の粉末として得た(160mg、76%):Rf=0.29 (CH2Cl2/EtOH 98:2); mp: 172-173℃; [α]20 D = 20.0 (c = MeOH中0.1); 1H NMR (400 MHz, [D6]DMSO): δ=1.24 (d, 3H, 3J=6.8 Hz), 3.83 (s, 3H), 4.52 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 4.93 (d, 1H, 2J=14.4 Hz), 5.67-5.70 (m, 2H), 6.97 (ddd, 1H, 3JH-F=3JH-H=8.4 Hz, 4JH-H=2.4 Hz), 7.04 (d, 2H, 3JH-H=8.8 Hz), 7.26 (ddd, 1H, 3JH-F=3J’H-F=9.2 Hz, 4JH-H=2.4 Hz), 7.31 (s, 1H), 7.36 (m, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.82 (d, 2H, 3JH-H=8.8 Hz), 8.28 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.46 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, [D6]DMSO): δ=14.1, 22.8, 54.8, 55.2, 67.3, 77.4, 103.9, 106.5, 111.0, 113.0, 114.4, 124.1, 125.2, 125.8 (2C), 127.3 (2C), 130.1, 130.6, 132.4, 144.7, 150.2, 158.9, 158.7, 161.9 ppm; IR (KBr): ν=3447, 1700, 1616, 1500, 1428, 1407, 1387, 1298, 1250, 1180, 1134, 1029, 959, 808, 723 cm-1; MS
(ESI) m/z 493.1 [M+H]+; UPLC純度100%.
A/抗真菌活性
I.インビトロ活性
I.1.カンジダ菌種(Candida spp)のフルコナゾール感受性株及びフルコナゾール耐性株
種々のアゾール感受性を有するカンジダ菌種の8種の株を使用した:
・1種のフルコナゾール感受性のカンジダアルビカンス株:CAAL93
・2種のフルコナゾール耐性のカンジダアルビカンス株:CAAL111(外向き流束ポンプ)及びCAAL117(erg11突然変異+ボリコナゾール耐性)
・5種のフルコナゾール耐性のカンジダ非アルビカンズ株:カンジダクルセイ(C.krusei)(CAKR7、CAKR8)、カンジダグラブラタ(C.glabrata)(CAGL2)、カンジダパラプシローシス(C.parapsilosis s.l.)(CAPA1、CAPA2)。
抗真菌感受性を、分光蛍光分析微量希釈法で評価した。MICを、対照のウェル中で測定した蛍光の50%を阻害できる濃度とした。
全体的に、これらの結果は、これらの化合物が、カンジダ菌種株(フルコナゾール感受性及びフルコナゾール耐性)に対してフルコナゾール(FLC)よりも活性であることを示している。それらは少なくともボリコナゾール(VOR)と同程度に活性である。
そのため、これらの化合物は、アゾール耐性の主要な既知の機序をバイパスすることができる(外向き流束、erg11突然変異)。
化合物47、48、49、50及び51は、CAAL117に対して、ボリコナゾールよりも100倍、活性であることが留意されるべきである。
I.2- イトラコナゾール感受性アスペルギルスフミガーツス(Aspergillus fumigatus)株及びイトラコナゾール耐性アスペルギルスフミガーツス株
種々のイトラコナゾール感受性を有する11種のアスペルギルスフミガーツス株を使用した:
・5種のイトラコナゾール感受性株:ASFU7、ASFU35A、ASFU38A、ASFU76及びASFU78
・6種のイトラコナゾール耐性株:ASFU77(erg11突然変異)、ASFU13、ASFU17、ASFU19、ASFU20、ASFU23。
抗真菌感受性を、分光蛍光分析微量希釈法で評価した。MICを、対照のウェル中で測定した蛍光の80%を阻害できる濃度とした。
全体的に、これらの分子は、全てのITRA感受性及びVOR感受性アスペルギルスフミガーツス単離株に対して確実な生物学的結果を提示し、それらのMIC値は、2種の参照物よりも約10倍、高い。
化合物27、31、48及び51は、M220T突然変異(ASFU77、MIC値はマイクロモル範囲)を保有するITRA耐性アスペルギルスフミガーツス単離株に対して、最も興味深い。特に化合物48及び51はまた、3種の他のITRA耐性アスペルギルスフミガーツス単離株(ASFU13、ASFU20、ASFU23)に対しても活性である。
I.3- Hela細胞に対する細胞毒性
Helaヒト細胞株を、細胞毒性を評価する観点で使用した。細胞毒性は、分光蛍光分析微量希釈法で評価した。IC50を、対照のウェル中で測定した蛍光の50%を阻害できる濃度とした。
化合物29及び34は、IC50が25μMである。
化合物35及び51は、より高い濃度(100μM)を使用しても細胞毒性効果を一切示さなかった。
II.インビボ活性
一過性に好中球減少性である雌性スイスマウスを、全身性カンジダ症及び侵襲性アスペルギルス症の実験のために使用した。
II.1- マウスの全身性カンジダ症
マウスに、カンジダアルビカンス株(CAAL93)を静脈内接種した。治療薬を、1日1回(経口で10mg/kg)5日間投与した。マウスの生存を、28日間(化合物51は14日間)観察した。腎臓の真菌負荷量を、実験の間に死んだ動物において又は実験の最後に屠殺した動物において、評価した。
結果(生存%)を図1及び図2に例証する。
生存曲線の分析により、化合物29、34、35及び51で治療した群が、非治療群と比べて有意に長く生存していることが示された(p<0.05)。その上、化合物34及び35は、FLCよりも効率が有意に良好である。
腎臓の真菌負荷量は、マウスを化合物29、34及び35で治療したときに有意に減少した(p<0.05)。活性は、FLCと比べたときに有意に高かった(p<0.05)。
化合物51が、最も活性である(p<0.001)。
結果を図3及び図4に例証する。
II.2- マウスの侵襲性アスペルギルス症
マウスに、アスペルギルスフミガーツス(ASFU7)芽胞を静脈内接種した。
治療薬を1日1回(経口で10mg/kg)5日間投与した。マウスの生存を14日間観察した。腎臓の真菌負荷量を、実験の間に死んだ動物において又は実験の最後に屠殺した動物において、評価した。
生存曲線の分析(図5)により、ITRA又は化合物34で治療した動物が有意に長く生存したことが示されている(p<0.01)。化合物34は、化合物29及び35よりも有意に活性である(p<0.05)(図6を参照されたい)。
化合物51は、評価しなかった。
腎臓の真菌負荷量は、マウスをITRA又は化合物34で治療したときに有意に減少した(p<0.05)。
II.3- ラットにおける急性経口毒性の研究
この研究は、CiToxLAB Hungary Ltd.社により、化合物51について実施した。
概要
化合物51の単回用量の経口毒性を、急性毒性分類法(OECD 423及び2008年5月30日のCommision Regulation(EC) No 440/2008、B.1.Tris)に従い、CRL:(WI)ラットにおいて実施した。
3匹の雌性CRL:(WI)ラットの2群を、試験品で、用量レベル300mg/kg体重(第1群及び第2群)にて治療した。
単回の経口治療を、一晩の断食後に、各動物の経管栄養によって実施した。食物を、治療3時間後に再び得られるようにした。試験品を、用量体積10mL/kg体重で、濃度30mg/mLでDSMO中に処方して、投与した。
最初に、3匹の雌(第1群)を、用量レベル300mg/kg体重で治療した。死亡を観察しなかったので、確認群(第2群)を同じ用量レベルで治療した。確認群において死亡を観察しなかった。
完全な分類のために、2000mg/kgでの治療が必要であるが、スポンサーからの試験品の入手ができなかったため、より高い用量レベルでの更なる試験は不可能であった。ゆえに、LD50>300mg/kgとしての分類が可能である。
臨床的観察を、投与後30分、1時間、2時間、3時間、4時間及び6時間に、且つその後14日間は毎日実施した。体重を、-1日目、0日目及び7日目に、並びに剖検前に、測定した。全ての動物を剖検及び肉眼で見る実験にかけた。
結果
死亡
化合物51は、用量レベル300mg/kg体重にて、死亡を引き起こさなかった。
臨床的観察
化合物51での治療は、用量レベル300mg/kg体重にて、全ての実験動物において、背中の湾曲を引き起こし、且つ活性がわずかに低下した。全ての動物が、治療の翌日から、その症状がなくなった。
体重及び体重増
この研究の間に化合物51で治療した動物の体重増は、試験品に関する効果の示唆を示さなかった。
巨視的知見
用量レベル300mg/kg体重にて、巨視的所見のエビデンスはなかった。
結論
この研究の条件下で、試験品化合物51の急性経口LD50値は、雌性CRL:(WI)ラットにおいて300mg/kg体重超であることを見出した。GHS基準によれば、化合物51は、急性経口曝露で「カテゴリー4」にランク付けされうる。
B/抗トリパノソーマ科活性
メキシコリーシュマニア(Leishmania Mexicana)株の前鞭毛期段階において、分光蛍光分析微量希釈法を用いて、化合物を評価した。阻害濃度50(IC50)は、対照の増殖の50%を阻害する濃度とした。
化合物29、30、34及び35は、メキシコリーシュマニアの前鞭毛期段階に対して効果的であった。