JP6795258B2

JP6795258B2 - 医薬化合物

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Publication number: JP6795258B2
Application number: JP2018507790A
Authority: JP
Inventors: フィリップウォルゲン，; ローランドカレンズ，
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Description

本発明は、化合物、使用のための化合物、製造のための化合物の使用、化合物を調製する方法、化合物を用いた治療により哺乳動物を処置する方法、及びα−ＭＳＨ類似体を調製する方法に関する。

メラノコルチンは、メラノコルチン−１−受容体（ＭＣ１Ｒ）との相互作用により表皮に色素沈着を誘起するペプチドホルモン系統群を含む。α−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）は、一部の非ヒト動物の下垂体中葉から、且つヒトの皮膚のＵＶ暴露されたケラチノサイトから放出される主要な色素性ホルモンである。この１３アミノ酸のペプチドは、式Ａｃ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＮＨ_２により表される。α−ＭＳＨはＭＣ１Ｒに結合し、サイクリックＡＭＰ介在性シグナル伝達を誘起し、ＤＯＰＡ前駆物質からメラニンポリマーの合成へと導く。様々なα−ＭＳＨ類似体が、国際公開第２００８０２５０９４号及び国際公開第２０１２１０７５９２号に記載されている。

ヒトにおいて、メラニン及びフェオメラニンの２種類のメラニンが発現し得る。茶色がかった黒色色素メラニンは、光分解に抵抗性であり、活性酸素ラジカルを失活させる能力を有するため、光防護特性を有すると考えられている。フェオメラニンは、赤みを帯び、含硫の色素であり、日光に対する日焼け応答の不十分さが報告されており且つメラノーマ及び非メラノーマの皮膚癌の両方が発生するリスクがより大きいと一般的には考えられている肌の白いヒト対象において発現することが多い。α−ＭＳＨとＭＣ１Ｒとの結合は、アデニル酸シクラーゼの活性化を通して、良好なメラニン形成を更に刺激する。

皮膚及び他の疾患における処置は進歩してきている一方、化合物及び医薬的処置に関する、当技術分野におけるより多くの及び／又は改善された選択肢に対する必要性が依然として存在する。

α−ＭＳＨ類似体に対する改変は、特定の利益を提供することを、我々は驚いたことに見出した。

本発明の一態様に基づいて、化合物Ａｃ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（式中、ＸはホモＡｒｇ又はノルＡｒｇである）又は薬学的に許容されるその塩は、製造費用の低減及び／又は効率的な調製、特に高収率及び／又は高純度レベル、活性の改善、有効性増大、及び／又は効力増大、及び／又は劣化の影響を受けにくいことを含み、１つ又は複数の利益を有することを、我々は驚いたことに見出した。本化合物は、ヘキサペプチド及びα−ＭＳＨ類似体であり、詳細には重量基準当たりの付加的な利益を提供する。

一態様では、本発明は、式Ａｃ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２を有する化合物又は薬学的に許容されるその塩に関する。別の態様では、本発明は、式Ａｃ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ノルＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２を有する化合物又は薬学的に許容されるその塩に関する。更なる実施形態では、本発明の化合物は、医薬として使用される。本発明の化合物は、皮膚障害の治療的処置に使用されることが好ましい。本発明の化合物は、色素沈着障害、光線性皮膚症、皮膚癌の予防、及び／又は皮膚細胞中のＤＮＡ修復の処置に使用されることが好ましい。本発明の化合物は、皮膚に局所的に適用されることが好ましい。

一態様では、本発明は、医薬製造のための本発明に基づいた化合物の使用に関する。

別の態様では、本発明は、化合物Ａｃ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（式中、ＸはホモＡｒｇ又はノルＡｒｇから選択される）又は薬学的に許容されるその塩を調製する方法に関し、この方法は、
トリペプチドＤ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ（４−６）を用意するステップと；
トリペプチド（４−６）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐとヒスチジン（３）とを連結するステップと；
ジペプチドＮｌｅ−Ｇｌｕ（１−２）とテトラペプチドＨｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ（３−６）とを連結するステップと
による。

別の態様では、本発明は、トリペプチドＤ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ（４−６）が、リジン側鎖の遊離アミノ官能基をグアニル化試薬ベンゾトリアゾール−１−カルボキサミジニウムトシレート（ＢＣＡＴ）を用いて変換することにより、トリペプチドＤ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐから調製される方法に関する。

別の態様では、本発明は、式Ａｃ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（式中、ＸはホモＡｒｇ又はノルＡｒｇから選択される）を有する化合物又は薬学的に許容されるその塩を投与することによる治療によって哺乳動物を処置する方法に関する。

別の態様では、本発明は、α−ＭＳＨ類似体の調製中に、最初にリジン基を導入し、続いてリジン側鎖の遊離アミノ官能基をグアニル化試薬ベンゾトリアゾール−１−カルボキサミジニウムトシレート（ＢＣＡＴ）を用いて変換してホモＡｒｇ基を生成することにより、ホモＡｒｇ基を含むα−ＭＳＨ類似体を調製する方法に関する。

本発明の化合物は、ＭＣ１Ｒ結合親和性、効力、及び／又は有効性に関する、特にＭＣ１Ｒに関連する疾患に対して、ｉｎ−ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ−ｖｉｖｏの医薬的試験において、有益な結果をもたらすことを、我々は驚いたことに見出した。更に、本発明の化合物は、安全に且つ効率的に合成され、詳細には高収率であり得ることを、我々は見出した。

[発明の詳細な説明]
本発明の目的のために、本明細書で表される用語「α−ＭＳＨ類似体」は、メラノコルチン−１受容体（ＭＣ１Ｒ）に対してアゴニスト活性を呈するα−ＭＳＨの誘導体と定義され、α−ＭＳＨが結合する上記受容体はメラノサイト内でメラニンの産生を開始する。

本明細書において、以下の略語が使用されている、Ａｒｇ−アルギニン、Ｄ−Ｐｈｅ−フェニルアラニンのＤ異性体；Ｇｌｕ−グルタミン酸；Ｇｌｙ−グリシン；Ｈｉｓ−ヒスチジン；ホモＡｒｇ−ホモアルギニン（Ａｒｇより、アルキル鎖中に１個の−ＣＨ_２−単位が付加されている）；ノルＡｒｇ−ノルアルギニン（Ａｒｇより、アルキル鎖中に１個の−ＣＨ_２単位が少ない）；Ｌｙｓ−リジン；Ｍｅｔ−メチオニン；Ｎｌｅ−ノルロイシン；Ｐｈｅ−フェニルアラニン；Ｓｅｒ−セリン；Ｔｒｐ−トリプトファン；及びＴｙｒ−チロシン。アミノ酸の前の接頭辞「Ｄ」は、Ｄ−異性体の立体配置を示す。他に詳細に明示しない限り、全てのアミノ酸は、Ｌ−異性体の立体配置である。

全てのペプチド及びペプチド誘導体は、アシル化アミノ末端を左側に、アミド化カルボキシル末端は右側に書かれる。理解されるように、アシル化アミノ末端は、本発明に基づいて他の基により置き換えることができるが、ペプチド及びペプチド誘導体の配向は同一のままである。一般的慣習に従って、左側の最初のアミノ酸は１位に位置し、例えば、Ｎｌｅ（１）はＮｌｅがＮ末端（左側）に位置することを表す。

本明細書では、ホモＡｒｇ及びノルＡｒｇは、厳密にはアミノ酸誘導体であるけれども、アミノ酸として表され得る。同じように、第４級アンモニウム基を含む化合物、ホモＡｒｇ、ノルＡｒｇ及び／又は他のアミノ酸誘導体は、厳密にはペプチド誘導体であるけれども、ペプチドとして表され得る。したがって、当業者は、本文書におけるペプチド分子への言及は（ヘキサペプチド及びα−ＭＳＨ類似体を含む）、それらの誘導体への言及を含むことを理解されたい。

本明細書の全体を通して、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」又は「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変化型は、明記された要素、整数若しくはステップ、又は要素群、整数（複数）又はステップ（複数）の包含を意味するが、いかなる他の要素、整数若しくはステップ、又は要素群、整数（複数）若しくはステップ（複数）も排除しないことを理解されたい。

本発明は、式Ａｃ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（式中、ＸはホモＡｒｇ又はノルＡｒｇから選択される）を有するヘキサペプチドα−ＭＳＨ類似体化合物又は薬学的に許容されるその塩に関する。本発明の一態様に基づいて、ホモＡｒｇ又はノルＡｒｇは、有効性増大を含む付加的利益のために、α−ＭＳＨ類似体の骨格中のＡｒｇを置き換えて、効率的な調製を提供する。

本発明の化合物はまた、薬学的に許容される塩として存在してもよい。

環境に応じて、特定のアミノ酸は塩基として作用し、プロトンを引き付け得て、当技術分野で周知のようにペプチドに電荷をもたらす。したがって、本発明の化合物は、薬学的に許容される塩の形態であってもよい。本化合物は、陽イオンであり得て、負電荷を帯びた対イオンと結合する。本発明の化合物に関連し得る薬学的に許容される陽イオンＸ^＋の例は、Ｈ^＋（水素イオン）、ナトリウム、カリウム、及びカルシウムのイオン、好ましくはＨ^＋である。対イオンは、負電荷を帯びた薬学的に許容される陰イオンＹ⁻であることが好ましい。Ｙ⁻はまた、複数の負電荷を有し得て、その場合、１個の陰イオンは複数の正電荷を帯びた化合物と結合し得ることが理解されよう。薬学的に許容される陰イオンＹ⁻の例は、ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＨＩ、Ｈ_２ＳＯ_４、Ｈ_３ＰＯ_４、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、マレイン酸、マロン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、及びアスコルビン酸などの有機酸又は無機酸から生じる。任意選択で、これらの化合物は、例えばトリフルオロ酢酸塩のようにハロゲン化される。Ｙ⁻は、アセテート、クロリド、又はスルフェートであることが好ましく、より好ましくはアセテートである。好ましい塩は酢酸塩である。本発明に基づいて、本化合物は塩として存在し得て；塩への変換は、当技術分野で標準的なステップであり、本発明において任意選択であるが、塩への変換は本化合物の調製中又は調製後に実行され得る。

本発明の化合物は、医薬として医療適用に使用され得る。本発明の医療適用は治療的性質のものであることが理解されよう。本発明の目的のために、疾患予防は処置という用語に包含されると考えられる。

本発明の化合物は、様々な医療適用の処置及び／又は予防用に、好ましくは排他的な治療的性質の医療適用に有益に使用され得る。本発明の化合物の使用への言及は、薬学的に許容される塩だけでなく、好ましくは本発明の化合物のプロドラッグ、立体異性体、互変異性体、水和物、水素化物及び／又は溶媒和物の使用も含むことが好ましい。

本発明の化合物は、本明細書に示される適用及び投与の処置のための医薬製造において使用され得る。

本発明の化合物は、疾患の処置のために使用されることが好ましく、本化合物は、結合を通して、疾患を標的とする薬物としてＭＣ１Ｒ発現を有益に増加させる。このような疾患の例は、色素沈着障害、光線性皮膚症、皮膚癌、及び／又は皮膚細胞中のＤＮＡ修復（ＵＶ暴露の後／ＵＶ暴露に起因する）である。

一態様では、本発明の化合物は、色素沈着（又は皮膚色素沈着）障害の処置用に使用される。このような障害は、色素沈着過剰でもあり得るが、この場合は詳細には色素沈着低下障害が重大である。本発明の化合物は、メラニン形成を誘起し得て、治療的メラニン形成の誘起に有用であることを我々は見出した。

一態様では、本発明は、本発明に基づいた化合物を用いた色素沈着障害の処置としての皮膚中のメラニン形成の誘起に関する。用語「メラニン形成」は、本明細書で使用されるとき、治療的目的で、メラノサイトと呼ばれるメラニン産生細胞によりメラニンを産生する対象の能力と定義される。治療的メラニン形成を生み出す例は、ＵＶ照射損傷から皮膚を保護すること、例えば、皮膚のしわ、日光皮膚炎及び／又は癌の発達などを防止することである。

色素沈着低下障害の重大な例は白斑である。白斑は、メラニンを含む色素の損失を特徴とする慢性の皮膚状態であり、周囲の無影響の有色素の、より暗色の皮膚組織とは異なる色及び外観を有し、それらと対照を成す不規則に蒼白の脱色性の皮膚をもたらす。一態様では、本発明は、白斑の処置、特にＵＶ光処置との組み合わせに関する。

本発明の化合物は、白斑の処置に、詳細には白斑部位の再色素沈着のために使用されることが好ましく、したがって、白斑の皮膚と周囲の皮膚組織との間の対照を減少させる。

光線性皮膚症は、ＵＶ照射に対する皮膚の光線過敏に関連する皮膚疾患であり、５種類の一般的部類に分類され得る：特発性光線性皮膚症（多形日光疹（ＰＬＥ）、光線痒疹、種痘様水疱症、慢性光線過敏性皮膚炎、及び日光じん麻疹−ＳＵを含む）；外因性の要因に続発する光線性皮膚症（光毒性反応及び光アレルギー反応を含む）；内因性の要因に続発する光線性皮膚症（骨髄性プロトポルフィリン症−ＥＰＰを含む主にポルフィリン症）；光線増悪性皮膚疾患（自己免疫疾患、感染状態、及び栄養障害を含む）；並びに遺伝性皮膚症。

一態様では、本発明は、光線性皮膚症の処置に関する。本発明の化合物は、光線性皮膚症の処置に、詳細にはＥＰＰ、ＰＬＥ、及びＳＵに対して、最も詳細にはＥＰＰに対して使用されることが好ましい。

皮膚癌は、メラノーマ及び非メラノーマの癌を含む。一般的には、より高い皮膚メラニンレベルは、皮膚癌予防の尺度と考えられる。一態様では、本発明は、癌予防のための本発明の化合物の使用に関する。本発明の化合物は、癌予防、詳細には、メラノーマ及び詳細には非メラノーマを含む皮膚癌の予防に使用されることが好ましい。一般の人々が本発明を通して皮膚癌予防から恩恵を受ける一方、免疫無防備状態の患者（詳細にはＨＩＶ−ＡＩＤＳ患者、同種移植片患者、すなわち、受給者が別の対象から移植片を受け取る、及び／又は免疫抑制薬処方を受けている患者）、受容体機能の損失又は減少に関連する１つ又は複数のＭＣ１Ｒ変異型対立遺伝子を有するヒト対象（好ましくはＶａｌ６０ＬＥＵ（Ｖ６０Ｌ）、Ａｓｐ８４Ｇｌｕ（Ｄ８４Ｅ）、Ｖａｌ９２Ｍｅｔ（Ｖ９２Ｍ）、Ａｒｇ１４２Ｈｉｓ（Ｒ１４２Ｈ）、Ａｒｇ１５１Ｃｙｓ（Ｒ１５１Ｃ）、Ａｒｇ１６０Ｔｒｐ（Ｒ１６０Ｗ）及びＡｓｐ２９４Ｈｉｓ（Ｄ２９４Ｈ）から選択される）を含む特定の患者群が、本発明の化合物の使用から特に恩恵を受ける。

ＵＶ照射が、ＤＮＡに、詳細には真皮（皮膚）細胞のＤＮＡに損傷を起こし得ることは理解される。一態様では、本発明はＤＮＡ修復に関する。したがって、本発明は、好ましくは皮膚内の、詳細には皮膚のＵＶ照射に続くＤＮＡの修復における使用のための本発明の化合物に関する。

本発明の化合物は対象に使用されることが好ましく、上記対象は好ましくは哺乳動物、好ましくはげっ歯類及び／又はヒト、より好ましくはヒトの対象である。

本発明の一態様では、本発明の化合物は、対象の処置用のＵＶ光と併用される。

本発明の化合物は、当技術分野で既知の様々な投与技術又は送達技術を使用して、対象に投与され得る。投与方式は、処置される対象及び選択された化合物に応じて変わる。様々な態様では、本化合物は、経口的に（又は経腸的に）、非経口的又は局所的に（好ましくは皮膚に対して）投与され得る。

用語「経口的」は、消化管を介した化合物の投与を包含して本明細書で使用される。

用語「非経口的」は、それにより化合物が体循環に導入される、経口投与以外の任意の投与経路を包含して本明細書で使用される。一般的には、非経口投与は、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、皮内、眼性、吸入、経鼻、直腸式、腟式、経皮的、バッカル、舌下、又は粘膜性の投与で達成され得る。

用語「粘膜性」は、本明細書で使用されるとき、ヒトの身体の粘膜（mucosa）（粘膜（mucous membranes））を利用する方法による化合物の投与を包含し、バッカル、鼻腔内、歯肉、腟式、舌下、肺性、又は直腸組織などであるが、これらに限定されない。

用語「経皮的」は、本明細書で使用されるとき、皮膚に適用され続いて皮膚を通過し体循環へと入る化合物の投与を包含し、経皮製剤、バッカルパッチ、皮膚パッチ、又は経皮的パッチなどであるが、これらに限定されない。

用語「局所的」は、本明細書で使用されるとき、皮膚への投与を包含し、局部効果のための、皮膚、目、又は粘膜領域へのクリーム、ゲル、又は溶液などの適用製剤を含み得る。本発明の化合物は、皮膚投与用の局所用組成物に組み込まれ得る。一態様では、局所用組成物は、皮膚内の適用位置において局部有効性を有し、したがって局部的に投与される。別の態様では、局所用組成物は、化合物が経皮的に（皮膚を通して）血流内へ移動することを必要とし、化合物への全身的暴露をもたらす全身的有効性を有し、したがって経皮的に投与される。

化合物への全身的暴露を達成し得る他の好ましい投与経路は、皮下（「皮膚の下」）及び筋肉内（「筋肉の中」）である。

一態様では、本発明の化合物は、皮膚に局所的に投与される。したがって、本発明は、本発明の化合物を対象の皮膚に投与することに関する。別の態様では、本発明の化合物は、皮膚に非経口的に投与される。したがって、本発明は、本発明の化合物を対象の皮膚を通して投与することに関する。

本発明の化合物は、組成物内に製剤化されることが好ましい。上記組成物は、好ましくは医薬組成物である。上記組成物は、本発明の化合物に加えて、少なくとも１つの薬学的に許容可能な原料を好ましくは含む。そのような薬学的に許容可能な原料の例は、担体、ポリマー、増粘剤、希釈剤、充填剤、緩衝剤、防腐剤及び界面活性剤である。

一態様では、上記組成物は、制御放出性の製剤であり、化合物への身体のより長い及び／又はより制御された暴露をもたらす。上記組成物は、インプラントであり得る。好ましい一実施形態では、上記化合物は、国際公開第２００６／０１２６６７号に記載されるものなどの長期放出性のインプラント製剤で投与される。

本発明の化合物は、以下に記載のように好ましくは調製されるが、当業者は本明細書を検討し、本方法を変更したものが利用され得て、また、本方法を変更したものが現在特許請求された発明によって包含されることを理解するであろう。好ましい方法に基づいて、液相又は固相のペプチド合成により、好ましくは続いてクロマトグラフィー精製により、且つ好ましくは凍結乾燥により、本発明の化合物を調製する。

一態様において、本発明は、Ａｃ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２の調製に関し：
ステップ１：トリペプチドＤ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ（４−６）（式中、ＸはホモＡｒｇ又はノルＡｒｇから選択される）を提供することと；
ステップ２：トリペプチド（４−６）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐとヒスチジン（３）とを連結することと；
ステップ３：ジペプチドＮｌｅ−Ｇｌｕ（１−２）とテトラペプチドＨｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ（３−６）とを連結することと、
による。

化合物を精製し（ステップ４）；好ましくは化合物を濃縮し（ステップ５）；且つ好ましくは化合物を凍結乾燥する（ステップ６）ことが好ましい。

詳細には、Ａｃ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（式中、ＸはホモＡｒｇ又はノルＡｒｇから選択される）を含む本発明の化合物の合成ステップは、以下の好ましいステップを含む：
ステップ１：エタノール中のＰｄ／Ｃ触媒を用いた水素化分解によるトリペプチド（４−６）の脱保護；
ステップ２ａ：ジクロロメタンとジメチルホルムアミドの混合物中のＨＢＴＵ／ＤＩＰＥＡを用いた、脱保護されたトリペプチド（４−６）と（Ｆｍｏｃ）及び（Ｔｒｔ）保護されたヒスチジン（３）との連結；
ステップ２ｂ：ＨＯＡｃ／Ｈ２０混合物中の保護された（３−６）ペプチドの脱トリチル化；
ステップ２ｃ：Ｈ２Ｏ／メタノール及びＮａＯＨと共にジオキサンの混合物中の（３−６）ペプチドのＦｍｏｃ保護基の開裂；
ステップ３：ジメチルホルムアミド中のＤＣＣ／ＨＯＯＢｔを用いた、（１−２）ジペプチドＮｌｅ−Ｇｌｕ（Ｏｔ．Ｂｕ）と、（３−６）ペプチドとの連結；
ステップ３ａ：８ＮＨＣｌ及びフェノールを用いた処置による、２（Ｇｌｕ）残基の側鎖からのＯｔ．Ｂｕ保護基の除去；
ステップ４：Ｃ−１８カラム及び精製水／アセトニトリル／ＴＦＡ溶離液を使用した予備ＲＰ−ＨＰＬＣによるペプチドの精製；
ステップ５：同一の成分から構成されているがアセトニトリル含有量がより高い溶離液を用いた、同一のクロマトグラフカラムを使用した濃縮ステップ。有機溶媒を蒸発により除去する；
ステップ６：有機溶媒の蒸発後に得られた水溶液の凍結乾燥
を含む。

これらのより特定の好ましい各合成ステップは、上述の一般的な調製方法に独立して及び別々に導入され、好ましいプロセスに到達し得る。したがって、好ましい各ステップは、本発明の化合物の調製のための好ましい条件を別々に表している。

好ましい態様では、以下に更に説明されるように、ホモＡｒｇ基の導入は、最初のＬｙｓ組み込み及びＬｙｓのホモＡｒｇへの変換により好ましくは起きる。任意選択で、ＬｙｓのホモＡｒｇへの変換は、調製のより後のステップにおいて行われ、Ｌｙｓ基は、例えばトリフルオロアセチル基などを用いて一時的に保護される。

本明細書で使用される略語は、当業者に容易に理解されるであろうが、以下のリストを便宜のためにのみ提供する：
Ａｃ：アセチル又はＣＨ_３−ＣＯ−
ＢＣＡＴ：ベンゾトリアゾール−１−カルボキサミジニウムトシレート
ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルビジイミド
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
Ｆｍｏｃ：フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＢＴＵ：ベンゾトリアゾリルテトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＯＢＴ：３−ヒドロキシ−３，４ジヒドロ−４オキソ−ベンゾトリアジン
ＯｔＢｕ−基：Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチル基
Ｔｒｔ−基：トリチル基
本発明の化合物は、上述の加工ステップ１のトリペプチドにホモＡｒｇ又はノルＡｒｇの単位として導入され得るホモＡｒｇ又はノルＡｒｇの単位を含む。しかしながら、ホモＡｒｇアミノ酸誘導体は、効率的な加工条件を使用して、経費低減のための高収率をもたらし、αＭＳＨ類似体に有益に導入され得ることを、我々は驚いたことに見出した。本態様は、一般に、α−ＭＳＨ類似体、すなわち、ホモＡｒｇ基を含む、上に提供した定義に基づいたＭＣ１Ｒアゴニストに関することに留意されたい。これは本発明の化合物を含むが、原則的に国際公開第２００８０２５０９４号に記載されるものも含み、ホモＡｒｇ基を含む上記類似体式構造は、本明細書に参照により組み込まれる。

したがって、本発明は、リジン基を使用して、リジン側鎖の遊離アミノ官能基とグアニル化試薬ベンゾトリアゾール−１−カルボキサミジニウムトシレート（ＢＣＡＴ）との反応により、リジン基をホモＡｒｇ基に変換することにより、ホモＡｒｇ基を含むα−ＭＳＨ類似体を調製するプロセスに一般に関する。

好ましい態様では、最初にトリペプチドＤ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐリジンを調製し、続いて、リジン側鎖の遊離アミノ官能基とグアニル化試薬ベンゾトリアゾール−１−カルボキサミジニウムトシレート（ＢＣＡＴ）との反応により、リジン基をホモＡｒｇに変換して、トリペプチドＤ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐを生成する。

したがって、好ましい態様では、本発明は、リジン側鎖の遊離アミノ官能基をグアニル化試薬ベンゾトリアゾール−１−カルボキサミジニウムトシレート（ＢＣＡＴ）を用いて変換することにより、上述のステップ１のトリペプチドＤ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−ＴｒｐをＤ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐから調製することにより、上に定義したようなＡｃ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２を調製するプロセスに関する。

上述のステップ１の前に、リジン基を導入してホモＡｒｇに変換することが好ましい。任意選択で、リジン基は上述のステップ１の前に導入されるが、本発明の化合物の調製のより後のステップにおいてホモＡｒｇに変換され得る。その場合には、リジン基の遊離アミノ官能基は好ましくは一時的に保護される。保護は、例えば、トリフルオロアセチル基などを用いて実行され得る。より後のステップで脱保護化の後に、Ｌｙｓはグアニル化試薬ベンゾトリアゾール−１−カルボキサミジニウムトシレート（ＢＣＡＴ）を用いてホモＡｒｇに変換される。

以下の実施例は、本発明に対して例証的なものであり、本発明の範囲を特定の実施例に限定することを望むものではなく提供される。

実施例１
詳細には、式Ａｃ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２を有する本発明の化合物は、上述の加工ステップ１〜６を使用して一般に調製された。ホモアルギニン単位は、以下のように：ステップ１の前に、保護されたリジン誘導体をトリペプチド４〜６のレベルで最初に組み込み、リジントリペプチドを部分的に脱保護し、グアニル化試薬ベンゾトリアゾール−１−カルボキサミジニウムトシレート（ＢＣＡＴ）を用いてリジン側鎖の遊離アミノ官能基をホモアルギニンに変換して、ステップ１の前にトリペプチドに導入された。

本化合物の同定及び純度をＭＳ（トリフルオロアセテート陰イオンを含まない）及びＨＰＬＣにより確認し、以下の結果を得た：

５００ＭＨｚ陽子スペクトルを用いて固有情報を更に提供した。

本発明のノルＡｒｇ化合物は、上述のように、例えばトリペプチド（４−６）出発単位中にノルＡｒｇを使用することにより調製され得る。

実施例２：ｃＡＭＰに対する効果
機能性ＭＣ１Ｒを発現しているヒトのメラノサイト培養物、コード１７５３を使用して、式Ａｃ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２を有する本発明の化合物の試験を行った。メラノサイトを０．３＊１０^６細胞／ウェルの密度で蒔いて培養した。４８時間後、異なる化合物濃度（１０^−１２〜１０^−７Ｍ）を用いて１時間、メラノサイトを処置した。化合物を用いない対照を試験に含めた。参照化合物ＮＤＰ−ＭＳＨもまた、比較として同一濃度で含めた。５０μｌの１ＮのＨＣｌの添加により反応を停止させ、各ウェルの上澄み液を使用して、Ｓｕｚｕｋｉ１９９６年（ＳｕｚｕｋｉＩ、ＣｏｎｅＲＤ、ＩｍＳ、ＮｏｒｄｌｕｎｄＪＪ、Ａｂｄｅｌ−ＭａｌｅｋＺ：「ＢｉｎｄｉｎｇｏｆｍｅｌａｎｏｔｒｏｐｉｃｈｏｒｍｏｎｅｓｔｏｔｈｅＭＣ１ｒｅｃｅｐｔｏｒｏｎｈｕｍａｎｍｅｌａｎｏｃｙｔｅｓｓｔｉｍｕｌａｔｅｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｅｌａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ」。Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１３７：１６２７−１６３３、１９９６年）に記載されるように、ラジオイムノアッセイを使用してｃＡＭＰを測定した。各群に含まれる３通りのウェルを用いて、各ウェルからの重複試料の検査を行った。群ごとの６ｃＡＭＰ測定手段を、対照群の％として表した。ＡＮＯＶＡを使用してニューマンコイルス検定に従って、統計解析を実行した。いくつかの場合では、独立ｔ検定を使用した。

結果は、本発明の化合物は、最高有効性を達成することにより（１０^−７Ｍで２１６％対１０^−７Ｍで２０２％）参照化合物ＮＤＰ−ＭＳＨより機能が優れ、結果は１０^−１０Ｍ〜１０^−７Ｍの濃度で、対照と比較して（ｐ＜０．０５）で統計的有意差があった。

化合物は、ＭＣ１Ｒ応答のセカンドメッセンジャーであるｃＡＭＰの測定試験に関して優れた有効性結果を示したと結論を下す。

実施例３：チロシナーゼ活性に対する効果
機能性ＭＣ１Ｒを発現しているヒトのメラノサイト培養物、コード１７５０を使用して、式Ａｃ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２を有する本発明の化合物の試験を行った。メラノサイトを０．３＊１０^６細胞の密度で６０ｍｍディッシュに蒔いて培養した（３通りのディッシュ／群）。４８時間後、メラノサイトを１日おきに合計６日間、本化合物の異なる投与量（１０^−１２Ｍ〜１０^−７Ｍ）を用いて処置した。化合物を用いない対照を試験に含めた。参照化合物ＮＤＰ−ＭＳＨ、アファメラノチドもまた、比較として同一濃度で含めた。処置５日目、^３Ｈ−ラベル付きの、チロシナーゼに対する基体であるチロシンを添加し、２４時間後、Ｓｕｚｕｋｉらによって記載されたように（実施例２を参照されたい）、上澄み液をチロシナーゼ活性に関する検査を行うために保存した。各群に含まれる３通りのディッシュを用いて、それぞれからの重複試料の検査を行った。各ディッシュ内の細胞数を計数し、チロシナーゼ活性をｄｐｍ／１０^６細胞数及び対照の％として表した。ＡＮＯＶＡを使用してニューマンコイルス検定に従って、統計解析を実行した。

このチロシナーゼ活性化試験は、上述のｃＡＭＰ試験の早期のセカンドメッセンジャー効果と比較して、ＭＣ１Ｒ活性化後の後期の現象に関連することが理解されよう。上に指摘したように、チロシナーゼ活性は処置日数を必要とする。

本化合物は、最高有効性を達成することにより（１０^−８Ｍで２２７％対１０^−９Ｍで１５６％；本化合物は１０^−９Ｍで１９８％の、より高い有効性も実際に有する）参照化合物ＮＤＰ−ＭＳＨ、アファメラノチドより機能が優れ、結果は１０^−１０Ｍ〜１０^−７Ｍの濃度で、対照と比較して（ｐ＜０．０５で）統計的有意差があったことを、我々は見出した。

本発明の化合物は、チロシナーゼの測定試験においても優れた有効性を示し、ＭＣ１Ｒに関するアゴニスト活性に続く後期の現象を表していると結論を下す。

広範に記載したように、本発明の趣旨又は範囲から逸脱することなく、特定の実施形態に示されるように、多数の変形及び／又は修正が本発明に対してなされ得ることが当業者には理解されよう。したがって、本実施形態は、全ての事項において例証的なものとして、限定的なものではないと考えられる。

Claims

式Ａｃ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２を有する化合物又は薬学的に許容されるその塩。
請求項１に記載の化合物又は薬学的に許容されるその塩を含む、医薬。
皮膚障害の治療用医薬である、請求項２に記載の医薬。
色素沈着障害の治療用医薬、光線性皮膚症の治療用医薬、皮膚癌の予防用医薬、及び／又は皮膚細胞中のＤＮＡ修復用医薬である、請求項２又は３に記載の医薬。
局所的に皮膚に適用するための医薬である、請求項２〜４のいずれか一項に記載の医薬。
医薬の製造のための、請求項１に記載の化合物又は薬学的に許容されるその塩の使用。
トリペプチドＤ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ（４−６）を用意するステップと；
トリペプチド（４−６）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐとヒスチジン（３）とを連結するステップと；
ジペプチドＮｌｅ−Ｇｌｕ（１−２）とテトラペプチドＨｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ（３−６）とを連結するステップと
により、化合物Ａｃ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（式中、ＸはホモＡｒｇである）又は薬学的に許容されるその塩を調製する方法であって、
トリペプチドＤ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ（４−６）が、リジン側鎖の遊離アミノ官能基をグアニル化試薬ベンゾトリアゾール−１−カルボキサミジニウムトシレート（ＢＣＡＴ）を用いて変換することにより、トリペプチドＤ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐから調製される、
方法。
式Ａｃ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２（式中、ＸはホモＡｒｇである）を有する化合物又は薬学的に許容されるその塩を含み、薬学的に許容可能な少なくとも１つの原料をさらに含む、医薬組成物。
α−ＭＳＨ類似体の調製中に、最初にトリペプチドＤ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐとしてリジン基を導入し、その後リジン側鎖の遊離アミノ官能基をグアニル化試薬ベンゾトリアゾール−１−カルボキサミジニウムトシレート（ＢＣＡＴ）を用いて変換してホモＡｒｇ基を生成し、続いてトリペプチドＤ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐを用いてα−ＭＳＨ類似体を調製することにより、トリペプチドＤ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐを含むα−ＭＳＨ類似体を調製する方法。
α−ＭＳＨ類似体が、請求項１に記載のα−ＭＳＨ類似体である、請求項９に記載の方法。