JP6765961B2 - 多能性間質細胞集団の免疫調節ポテンシャル - Google Patents
多能性間質細胞集団の免疫調節ポテンシャル Download PDFInfo
- Publication number
- JP6765961B2 JP6765961B2 JP2016526339A JP2016526339A JP6765961B2 JP 6765961 B2 JP6765961 B2 JP 6765961B2 JP 2016526339 A JP2016526339 A JP 2016526339A JP 2016526339 A JP2016526339 A JP 2016526339A JP 6765961 B2 JP6765961 B2 JP 6765961B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- msc
- sample
- population
- mscs
- msc population
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 title claims description 83
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 title claims description 14
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 claims description 176
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 106
- 101000599852 Homo sapiens Intercellular adhesion molecule 1 Proteins 0.000 claims description 89
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims description 89
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims description 89
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 89
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims description 30
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 claims description 19
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 claims description 19
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 18
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 15
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 15
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 12
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 12
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims description 5
- 101000958041 Homo sapiens Musculin Proteins 0.000 description 155
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 64
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 63
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 45
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 25
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 19
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 14
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 14
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 12
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 10
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 10
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 9
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 9
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 9
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 8
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 7
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 6
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 6
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 6
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 6
- -1 dPBS Substances 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 238000013500 data storage Methods 0.000 description 5
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 5
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 4
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 4
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N pyrene Chemical compound C1=CC=C2C=CC3=CC=CC4=CC=C1C2=C43 BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 3
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 3
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 3
- GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N coumarin 120 Chemical compound C1=C(N)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 3
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000046949 human MSC Human genes 0.000 description 3
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 3
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- PXBFMLJZNCDSMP-UHFFFAOYSA-N 2-Aminobenzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC=C1N PXBFMLJZNCDSMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LBCZOTMMGHGTPH-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(OCCOCCO)C=C1 LBCZOTMMGHGTPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 2-[3-(dimethylamino)-6-dimethylazaniumylidenexanthen-9-yl]-4-isothiocyanatobenzoate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC(N=C=S)=CC=C1C([O-])=O OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCKQPPQRFNHPRJ-UHFFFAOYSA-N 4-[[4-(dimethylamino)phenyl]diazenyl]benzoic acid Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1N=NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 WCKQPPQRFNHPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 2
- XPDXVDYUQZHFPV-UHFFFAOYSA-N Dansyl Chloride Chemical compound C1=CC=C2C(N(C)C)=CC=CC2=C1S(Cl)(=O)=O XPDXVDYUQZHFPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N Digitonin Natural products CC1CCC2(OC1)OC3C(O)C4C5CCC6CC(OC7OC(CO)C(OC8OC(CO)C(O)C(OC9OCC(O)C(O)C9OC%10OC(CO)C(O)C(OC%11OC(CO)C(O)C(O)C%11O)C%10O)C8O)C(O)C7O)C(O)CC6(C)C5CCC4(C)C3C2C QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100037241 Endoglin Human genes 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000725401 Homo sapiens Cytochrome c oxidase subunit 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000881679 Homo sapiens Endoglin Proteins 0.000 description 2
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 2
- 101000935040 Homo sapiens Integrin beta-2 Proteins 0.000 description 2
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 2
- 101000605127 Homo sapiens Prostaglandin G/H synthase 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 2
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 2
- 102100025390 Integrin beta-2 Human genes 0.000 description 2
- 229930191564 Monensin Natural products 0.000 description 2
- GAOZTHIDHYLHMS-UHFFFAOYSA-N Monensin A Natural products O1C(CC)(C2C(CC(O2)C2C(CC(C)C(O)(CO)O2)C)C)CCC1C(O1)(C)CCC21CC(O)C(C)C(C(C)C(OC)C(C)C(O)=O)O2 GAOZTHIDHYLHMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 102100038280 Prostaglandin G/H synthase 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 description 2
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N digitonin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO7)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@@H](CO)O5)O)C[C@@H]4CC[C@H]3[C@@H]2[C@@H]1O)C)[C@@H]1C)[C@]11CC[C@@H](C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N 0.000 description 2
- UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N digitonine Natural products CC1C(C2(CCC3C4(C)CC(O)C(OC5C(C(O)C(OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)CO7)O)C(O)C(CO)O6)OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)C(CO)O7)O)C(O)C(CO)O6)O)C(CO)O5)O)CC4CCC3C2C2O)C)C2OC11CCC(C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L erythrosin B Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(I)C(=O)C(I)=C2OC2=C(I)C([O-])=C(I)C=C21 IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- VYXSBFYARXAAKO-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-[3-(ethylamino)-6-ethylimino-2,7-dimethylxanthen-9-yl]benzoate;hydron;chloride Chemical compound [Cl-].C1=2C=C(C)C(NCC)=CC=2OC2=CC(=[NH+]CC)C(C)=CC2=C1C1=CC=CC=C1C(=O)OCC VYXSBFYARXAAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N fluoranthrene Natural products C1=CC(C2=CC=CC=C22)=C3C2=CC=CC3=C1 GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 2
- 229960005358 monensin Drugs 0.000 description 2
- GAOZTHIDHYLHMS-KEOBGNEYSA-N monensin A Chemical compound C([C@@](O1)(C)[C@H]2CC[C@@](O2)(CC)[C@H]2[C@H](C[C@@H](O2)[C@@H]2[C@H](C[C@@H](C)[C@](O)(CO)O2)C)C)C[C@@]21C[C@H](O)[C@@H](C)[C@@H]([C@@H](C)[C@@H](OC)[C@H](C)C(O)=O)O2 GAOZTHIDHYLHMS-KEOBGNEYSA-N 0.000 description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 2
- QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N o-cresol Chemical compound CC1=CC=CC=C1O QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 229940043267 rhodamine b Drugs 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- GIANIJCPTPUNBA-QMMMGPOBSA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-nitramidopropanoic acid Chemical compound [O-][N+](=O)N[C@H](C(=O)O)CC1=CC=C(O)C=C1 GIANIJCPTPUNBA-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- DUFUXAHBRPMOFG-UHFFFAOYSA-N 1-(4-anilinonaphthalen-1-yl)pyrrole-2,5-dione Chemical compound O=C1C=CC(=O)N1C(C1=CC=CC=C11)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 DUFUXAHBRPMOFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 2',7'-difluorofluorescein Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(F)C(=O)C=C2OC2=CC(O)=C(F)C=C21 VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LAXVMANLDGWYJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-5-(2-aminoethyl)naphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound NC1=CC=C2C(CCN)=CC=CC2=C1S(O)(=O)=O LAXVMANLDGWYJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-[4-(4-methoxyphenyl)-1,3-thiazol-2-yl]-n-(3-methoxypropyl)acetamide Chemical compound S1C(N(C(=O)CCl)CCCOC)=NC(C=2C=CC(OC)=CC=2)=C1 KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-benzimidazol-2-yl)-7-(diethylamino)chromen-2-one Chemical compound C1=CC=C2NC(C3=CC4=CC=C(C=C4OC3=O)N(CC)CC)=NC2=C1 GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YSCNMFDFYJUPEF-UHFFFAOYSA-N 4,4'-diisothiocyanostilbene-2,2'-disulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC(N=C=S)=CC=C1C=CC1=CC=C(N=C=S)C=C1S(O)(=O)=O YSCNMFDFYJUPEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWZKAVBSQAVFI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-isothiocyanatophenyl)diazenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1N=NC1=CC=C(N=C=S)C=C1 OSWZKAVBSQAVFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXYRRCOJHNZVDJ-UHFFFAOYSA-N 4-pyren-1-ylbutanoic acid Chemical compound C1=C2C(CCCC(=O)O)=CC=C(C=C3)C2=C2C3=CC=CC2=C1 QXYRRCOJHNZVDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SJQRQOKXQKVJGJ-UHFFFAOYSA-N 5-(2-aminoethylamino)naphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(NCCN)=CC=CC2=C1S(O)(=O)=O SJQRQOKXQKVJGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YJCCSLGGODRWKK-UHFFFAOYSA-N 5-acetamido-2-[2-(4-isothiocyanato-2-sulfophenyl)ethenyl]benzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC(NC(=O)C)=CC=C1C=CC1=CC=C(N=C=S)C=C1S(O)(=O)=O YJCCSLGGODRWKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWONWYNZSWOYQC-UHFFFAOYSA-N 5-benzamido-3-[[5-[[4-chloro-6-(4-sulfoanilino)-1,3,5-triazin-2-yl]amino]-2-sulfophenyl]diazenyl]-4-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound OC1=C(N=NC2=CC(NC3=NC(NC4=CC=C(C=C4)S(O)(=O)=O)=NC(Cl)=N3)=CC=C2S(O)(=O)=O)C(=CC2=C1C(NC(=O)C1=CC=CC=C1)=CC(=C2)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O ZWONWYNZSWOYQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 5-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C21OC(=O)C1=CC(C(=O)O)=CC=C21 NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HWQQCFPHXPNXHC-UHFFFAOYSA-N 6-[(4,6-dichloro-1,3,5-triazin-2-yl)amino]-3',6'-dihydroxyspiro[2-benzofuran-3,9'-xanthene]-1-one Chemical compound C=1C(O)=CC=C2C=1OC1=CC(O)=CC=C1C2(C1=CC=2)OC(=O)C1=CC=2NC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 HWQQCFPHXPNXHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TXSWURLNYUQATR-UHFFFAOYSA-N 6-amino-2-(3-ethenylsulfonylphenyl)-1,3-dioxobenzo[de]isoquinoline-5,8-disulfonic acid Chemical compound O=C1C(C2=3)=CC(S(O)(=O)=O)=CC=3C(N)=C(S(O)(=O)=O)C=C2C(=O)N1C1=CC=CC(S(=O)(=O)C=C)=C1 TXSWURLNYUQATR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZIDRAQTRIQDX-UHFFFAOYSA-N 6-carboxy-x-rhodamine Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(C([O-])=O)C=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 WQZIDRAQTRIQDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YALJZNKPECPZAS-UHFFFAOYSA-N 7-(diethylamino)-3-(4-isothiocyanatophenyl)-4-methylchromen-2-one Chemical compound O=C1OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C(C)=C1C1=CC=C(N=C=S)C=C1 YALJZNKPECPZAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JBNOVHJXQSHGRL-UHFFFAOYSA-N 7-amino-4-(trifluoromethyl)coumarin Chemical compound FC(F)(F)C1=CC(=O)OC2=CC(N)=CC=C21 JBNOVHJXQSHGRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SGAOZXGJGQEBHA-UHFFFAOYSA-N 82344-98-7 Chemical compound C1CCN2CCCC(C=C3C4(OC(C5=CC(=CC=C54)N=C=S)=O)C4=C5)=C2C1=C3OC4=C1CCCN2CCCC5=C12 SGAOZXGJGQEBHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthene Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3OC2=C1 GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYEHYMARPSSOBO-UHFFFAOYSA-N Aurin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C(C=1C=CC(O)=CC=1)=C1C=CC(=O)C=C1 FYEHYMARPSSOBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- PQMOXTJVIYEOQL-UHFFFAOYSA-N Cumarin Natural products CC(C)=CCC1=C(O)C(C(=O)C(C)CC)=C(O)C2=C1OC(=O)C=C2CCC PQMOXTJVIYEOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- QTANTQQOYSUMLC-UHFFFAOYSA-O Ethidium cation Chemical compound C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 QTANTQQOYSUMLC-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101001076408 Homo sapiens Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- FSOGIJPGPZWNGO-UHFFFAOYSA-N Meomammein Natural products CCC(C)C(=O)C1=C(O)C(CC=C(C)C)=C(O)C2=C1OC(=O)C=C2CCC FSOGIJPGPZWNGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXQIUDNVFVTQLJ-UHFFFAOYSA-N Naphthofluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C(C=CC=1C3=CC=C(O)C=1)=C3OC1=C2C=CC2=CC(O)=CC=C21 IXQIUDNVFVTQLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 206010031243 Osteogenesis imperfecta Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 229910052771 Terbium Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- AKOTUSVTEFJFAX-UHFFFAOYSA-N acridine;isothiocyanic acid Chemical compound N=C=S.C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 AKOTUSVTEFJFAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 102000008373 cell-cell adhesion mediator activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040002566 cell-cell adhesion mediator activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- KPBGWWXVWRSIAY-UHFFFAOYSA-L disodium;2',4',5',7'-tetraiodo-6-isothiocyanato-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-3',6'-diolate Chemical compound [Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=C(N=C=S)C=C2C21C1=CC(I)=C([O-])C(I)=C1OC1=C(I)C([O-])=C(I)C=C21 KPBGWWXVWRSIAY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- XHXYXYGSUXANME-UHFFFAOYSA-N eosin 5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC(Br)=C(O)C(Br)=C1OC1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 XHXYXYGSUXANME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000695 excitation spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000052611 human IL6 Human genes 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000002660 insulin-secreting cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N lichenxanthone Natural products COC1=CC(O)=C2C(=O)C3=C(C)C=C(OC)C=C3OC2=C1 QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L lucifer yellow dye Chemical compound [Li+].[Li+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC(C(N(C(=O)NN)C2=O)=O)=C3C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC3=C1N DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000207 lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 229940107698 malachite green Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000012083 mass cytometry Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000003887 myelocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 210000005155 neural progenitor cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N nile red Chemical compound C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=O)C2=C1 VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- AFAIELJLZYUNPW-UHFFFAOYSA-N pararosaniline free base Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C(C=1C=CC(N)=CC=1)=C1C=CC(=N)C=C1 AFAIELJLZYUNPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N phthalaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1C=O ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- MUSLHCJRTRQOSP-UHFFFAOYSA-N rhodamine 101 Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MUSLHCJRTRQOSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MYFATKRONKHHQL-UHFFFAOYSA-N rhodamine 123 Chemical compound [Cl-].COC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=CC(=[NH2+])C=C2OC2=CC(N)=CC=C21 MYFATKRONKHHQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 1
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 1
- 238000013374 right angle light scattering Methods 0.000 description 1
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001057 smooth muscle myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- GZCRRIHWUXGPOV-UHFFFAOYSA-N terbium atom Chemical compound [Tb] GZCRRIHWUXGPOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/1456—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry without spatial resolution of the texture or inner structure of the particle, e.g. processing of pulse signals
- G01N15/1459—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry without spatial resolution of the texture or inner structure of the particle, e.g. processing of pulse signals the analysis being performed on a sample stream
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5091—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
- G01N33/6869—Interleukin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/149—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry specially adapted for sorting particles, e.g. by their size or optical properties
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N2015/1006—Investigating individual particles for cytology
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N2015/1402—Data analysis by thresholding or gating operations performed on the acquired signals or stored data
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/52—Assays involving cytokines
- G01N2333/54—Interleukins [IL]
- G01N2333/5412—IL-6
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
- G01N2333/70525—ICAM molecules, e.g. CD50, CD54, CD102
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Virology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
上記に要約したとおり、本発明の実施形態は、多能性間質細胞(MSC)集団の免疫調節ポテンシャルを評価する方法に関する。MSCはプラスチック接着性であってよく、骨芽細胞、脂肪細胞、筋芽細胞及び軟骨芽細胞などの複数の間葉系譜への分化能を有する。ヒトMSCは表面マーカーCD73、CD90、及びCD105が陽性で、表面マーカーCD34、CD45、CD14、CD11b、及びCD19が陰性であり得る。加えて、CD271、COX2、IDO、CD274、CD44、CD166、STRO−1などの他のマーカーが、ヒトMSC若しくはそのサブセットの同定及び/又は特徴付けにおいて有用であり得る。MSC集団及びMSC表面マーカーの詳細な考察は、Hass R.et al.,Cell Commun Signal.(2011)14;9:12を参照することができる。
本発明の態様は、本方法の実施に用いられるシステムをさらに含む。本発明のシステムは、FSC、SSC、蛍光発光極大、光散乱、質量、分子質量等の信号を計測することにより粒子(例えば、ビーズ、MSCなどの細胞等)をアッセイするように構成されたフローサイトメーターを含み得る。本システムは、信号を受け取り、且つMSC集団の免疫調節ポテンシャルの評価を出力するように構成された信号処理モジュールをさらに含み得る。目的のフローサイトメーターとしては、限定されないが、米国特許第4,704,891号明細書;同第4,727,029号明細書;同第4,745,285号明細書;同第4,867,908号明細書;同第5,342,790号明細書;同第5,620,842号明細書;同第5,627,037号明細書;同第5,701,012号明細書;同第5,895,922号明細書;及び同第6,287,791号明細書(これらの開示は参照により本明細書に援用される)に記載される装置が挙げられる。場合によっては、フローサイトメーターは、フローチャネル、及び、フローチャネルのアッセイ領域から第1の信号を受け取るように構成された第1の検出器と、フローチャネルのアッセイ領域から第2の信号を受け取るように構成された第2の検出器とを含む検出器モジュールを含む。フローサイトメーターは、任意選択で、光をフローチャネルのアッセイ領域に当てるように構成された少なくとも第1の光源をさらに含み得る(ここで場合によりサイトメーターは2つ以上の光源を含む)。特定の態様では、第1の信号が、CD54に特異的に結合する検出可能標識によって生成されてもよく、及び第2の信号が、IL−6に特異的に結合する検出可能標識によって生成されてもよい。任意選択でさらに、フローサイトメーターは、1つ以上の追加の信号を検出するための1つ以上の追加の検出器及び/又は光源を含み得る。1つ以上の追加の信号は、MSC集団の免疫調節ポテンシャルの指標となるバイオマーカーに特異的に結合する1つ以上の追加の検出可能標識によって生成され得る。
本方法及びシステムは、MSC集団の免疫調節ポテンシャルの評価が所望される種々の異なる適用に用途が見出される。かかる適用としては、治療レジメンの品質管理及び研究、並びに予後診断適用が挙げられる。例えば、高度な(又は十分な)免疫調節ポテンシャルを予測する特定のシグネチャ(CD54+IL6+)をMSC集団が示すかどうかの評価は、MSC集団が細胞治療において有用であるかどうかの指針となり、従って品質管理を通じて標準治療を改良し得る。さらに、2つ以上のMSC集団を、評価された免疫調節ポテンシャルに基づき比較することができ、最も高い免疫調節ポテンシャルを有すると評価されたMSC集団を治療レジメンに使用し得る。研究適用では、本方法を用いることにより、MSC培養条件がMSC免疫調節ポテンシャルに及ぼす効果を調べ得る。MSCベースの細胞治療で治療される患者の予後の評価においては、細胞治療に用いられるMSC集団の免疫調節ポテンシャルの評価を使用して転帰を予測し得る。
本発明の態様は、コンピュータが関連する種々の実施形態をさらに含む。具体的には、前述して記載された方法の定量化及び評価ステップは、コンピュータを使用して実施され得る。従って、本発明は、第1、第2、及び/又は追加の検出可能標識の量を定量化し、且つMSC集団が高度な免疫調節ポテンシャルを有するかどうかの評価を提供するため、上記の方法を用いて生成されたデータを解析するためのコンピュータベースのシステムを提供する。
さらに別の態様において、本発明は、本方法を例えば上記に記載したとおり実施するためのキットを提供する。本キットは、第1及び第2の検出可能標識並びに任意選択で1つ以上の追加の検出可能標識を含み得る。第1の検出可能標識がCD54に特異的に結合してもよく、第2の検出可能標識がIL−6に特異的に結合してもよい。検出可能標識(例えば、第1、第2、及び/又は追加の検出可能標識)は、本方法の態様のいずれかに記載されるとおりであってよい。加えて、キットは1つ以上のタンパク質輸送阻害剤(例えば、ブレフェルジンA、モネンシン等)を含み得る。キットはまた、1つ以上の細胞固定試薬、例えば、パラホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、メタノール、アセトン、ホルマリン、若しくはこれらの任意の組み合わせ、又は緩衝液も含み得る。さらに、キットは、細胞透過処理試薬、例えば、メタノール、アセトン又はデタージェント(例えば、トリトン、NP−40、サポニン、tween 20、ジギトニン、leucoperm)、又はこれらの任意の組み合わせ若しくは緩衝液を含み得る。当業者に周知されている他のタンパク質輸送阻害剤、細胞固定試薬及び細胞透過処理試薬が、本キットの範囲内にある。
方法
刺激した末梢血単核細胞(PBMC)を単独で培養し、骨髄由来のMSC(BM MSC)と共培養し、及び脂肪組織由来のMSC(AT MSC)と共培養した。T細胞(CD3+PBMC)を、図1に概説する手法に従ってゲーティングした。T細胞によるIFN−γ発現及びviolet proliferation dye(VPD)のレベルをフローサイトメトリーによってアッセイした。静止PBMCを陰性対照として提供した。
刺激PBMCとBM MSC又はAT MSCのいずれかとの共培養では、IFN−γ発現及びT細胞増殖によって計測されるとおりのT細胞活性化が抑制される。AT MSCはT細胞のIFN−γ発現をBM MSCより強力に抑制する。AT MSCはT細胞増殖を完全に消失させ、一方、BM MSCの阻害は1世代遅れるように見える。
方法
BM MSC及びAT MSCを単独で、又は刺激したPBMCとの共培養で培養した。BM MSCを、図1に概説する手法に従ってゲーティングした。MSCのCD54、CD274、及びIL−6発現をフローサイトメトリーによってアッセイした。
静止AT MSCは静止BM MSCと比較してより高いレベルのCD54及びIL−6を発現する。刺激PBMCとの共培養によって活性化すると、BM MSC及びAT MSC集団は両方とも、それらの陰性対照と比較してより高いレベルのCD54、CD274、及びIL−6を発現する。
方法
静止BM MSC及び静止AT MSCのCD54及びIL−6発現をフローサイトメトリーによってアッセイした。BM MSC又はAT MSCと共培養した後のT細胞のIFN−γ発現及びVPDレベルをフローサイトメトリーによってアッセイした。
AT MSC集団におけるより高いCD54及びIL−6発現は、IFN−γ発現の阻害及びT細胞の増殖によって計測するときの免疫調節の亢進と相関する。
1.多能性間質細胞(MSC)集団の免疫調節ポテンシャルを評価する方法であって、
(a)前記MSC集団のMSCに関連するCD54/IL−6の量を評定するステップであって、それによりCD54/IL−6結果を得るステップと、
(b)CD54/IL−6結果に基づき前記MSC集団の前記免疫調節ポテンシャルの評価を提供するステップと
を含む方法。
2.前記評定するステップは、CD54に特異的に結合する第1の検出可能標識及びIL−6に特異的に結合する第2の検出可能標識に前記MSC集団の試料を接触させるステップであって、それにより標識された試料を作製するステップと、標識された試料中のMSCに関連する第1及び第2の標識の量を定量化するステップであって、それにより前記CD54/IL−6結果を得るステップとを含む付記1に記載の方法。
3.前記MSC集団を作製するステップをさらに含む付記1又は2に記載の方法。
4.前記MSC集団が、ヒト組織から幹細胞を得ること及びMSC作製に好適な培養条件下で幹細胞を培養することによって作製される付記3に記載の方法。
5.前記ヒト組織は骨髄である付記4に記載の方法。
6.前記ヒト組織は脂肪組織である付記4に記載の方法。
7.前記培養条件はヒト血小板溶解物を含む付記4〜6のいずれか一つに記載の方法。
8.前記培養条件はウシ胎仔血清を含む付記4〜6のいずれか一つに記載の方法。
9.試料を得る前に前記MSC集団を培養するステップをさらに含む付記1〜8のいずれか一つに記載の方法。
10.試料をタンパク質輸送阻害剤で処理するステップをさらに含む付記1〜9のいずれか一つに記載の方法。
11.IL−6に特異的に結合する第2の検出可能標識に試料を接触させる前に前記試料を固定試薬で処理するステップをさらに含む付記1〜10のいずれか一つに記載の方法。
12.IL−6に特異的に結合する第2の検出可能標識に試料を接触させる前に前記試料を透過処理試薬で処理するステップをさらに含む付記1〜11のいずれか一つに記載の方法。
13.MSC免疫調節ポテンシャルの指標となる1つ以上の追加のバイオマーカーに特異的に結合する1つ以上の追加の検出可能標識に試料を接触させるステップをさらに含む付記1〜12のいずれか一つに記載の方法。
14.第1及び第2の検出可能標識が各々、特異的結合ドメインと標識ドメインとを含む付記1〜13のいずれか一つに記載の方法。
15.前記特異的結合ドメインは抗体又はその結合断片を含む付記14に記載の方法。
16.前記標識ドメインは蛍光標識を含む付記14又は15に記載の方法。
17.前記標識ドメインは金属同位体を含む付記14又は15に記載の方法。
18.前記定量化するステップは、前記試料から蛍光発光極大データを得るステップを含む付記2〜16のいずれか一つに記載の方法。
19.前記試料から光散乱データを得るステップをさらに含む付記18に記載の方法。
20.前記定量化するステップは、フローサイトメトリーを含む付記2〜19のいずれか一つに記載の方法。
21.前記評価を提供するステップは、前記CD54/IL−6結果が閾値を上回るときに前記MSC集団を高度な免疫調節ポテンシャルを有すると同定するステップを含む付記1〜20のいずれか一つに記載の方法。
22.前記閾値を上回るCD54/IL−6結果は、MSC集団が所望の免疫調節ポテンシャルを有することを示す付記21に記載の方法。
23.標準化対照に基づき前記閾値を決定するステップをさらに含む付記21又は22に記載の方法。
24.前記標準化対照は対照粒子を含む付記23に記載の方法。
25.CD54発現に基づき高い免疫調節ポテンシャルを有するMSCサブセットをエンリッチするステップをさらに含む付記1〜24のいずれか一つに記載の方法。
26.試料であって、
多能性間質細胞(MSC)集団のアリコートと、
CD54に特異的に結合する検出可能標識と、
IL−6に特異的に結合する検出可能標識と
を含む試料。
27.前記アリコートはタンパク質輸送阻害剤で処理されている付記26に記載の試料。
28.前記アリコートは固定試薬で処理されている付記26又は27に記載の試料。
29.前記アリコートは透過処理試薬で処理されている付記26〜28のいずれか一つに記載の試料。
30.MSC免疫調節ポテンシャルの指標となる1つ以上の追加のバイオマーカーに特異的に結合する1つ以上の追加の検出可能標識と接触させた付記26〜29のいずれか一つに記載の試料。
31.第1及び第2の検出可能標識が各々、特異的結合ドメインと標識ドメインとを含む付記26〜30のいずれか一つに記載の試料。
32.前記特異的結合ドメインは抗体又はその結合断片を含む付記31に記載の試料。
33.前記標識ドメインは蛍光標識を含む付記31に記載の試料。
34.前記第1及び第2の検出可能標識は識別可能である付記33に記載の試料。
35.前記第1及び第2の検出可能標識は蛍光発光極大に基づき識別可能である付記34に記載の試料。
36.前記標識ドメインは金属同位体を含む付記31に記載の試料。
37.標準化対照をさらに含む付記26〜36のいずれか一つに記載の試料。
38.前記標準化対照は対照粒子を含む付記37に記載の試料。
39.前記MSC集団はヒトMSCを含む付記26〜38のいずれか一つに記載の試料。
40.システムであって、
フローチャネルと、
前記フローチャネルのアッセイ領域から光を受け取るように構成された検出器モジュールと、
前記検出器モジュールから第1及び第2の信号を受け取り、且つMSC集団の免疫調節ポテンシャルの評価を出力するように構成された信号処理モジュールと
を有するシステム。
41.前記フローチャネルのアッセイ領域に光を当てるように構成された光源をさらに有する付記40に記載のシステム。
42.前記フローチャネルにMSC集団の試料がロードされる付記40又は41に記載のシステム。
43.前記試料はタンパク質輸送阻害剤で処理されている付記42に記載のシステム。
44.前記試料は固定試薬で処理されている付記42又は43に記載のシステム。
45.前記試料は透過処理試薬で処理されている付記42〜44のいずれか一つに記載のシステム。
46.前記試料は、CD54に特異的に結合する第1の検出可能標識及びIL−6に特異的に結合する第2の検出可能標識を含む付記42〜45のいずれか一つに記載のシステム。
47.前記第1の検出可能標識は第1の信号を提供し、前記第2の検出可能標識は第2の信号を提供する付記46に記載のシステム。
48.前記試料は、MSC免疫調節ポテンシャルの指標となる1つ以上の追加のバイオマーカーに特異的に結合する1つ以上の追加の検出可能標識を含む付記46又は47に記載のシステム。
49.前記信号処理モジュールは、第1及び第2の信号を処理してCD54/IL−6結果を生成するように構成されている付記40〜48のいずれか一つに記載のシステム。
50.前記信号処理モジュールは、CD54/IL−6結果が閾値を上回るかどうかに基づきMSC集団の免疫調節ポテンシャルの評価を出力するように構成されている付記49に記載のシステム。
51.前記閾値を上回るCD54/IL−6結果は、MSC集団が所望の免疫調節ポテンシャルを有することを示す付記50に記載のシステム。
52.前記信号処理モジュールは、標準化対照に基づき閾値を決定するように構成されている付記50又は51に記載のシステム。
53.前記標準化対照は対照粒子を含む付記52に記載のシステム。
54.前記第1及び第2の信号は蛍光発光である付記40〜53のいずれか一つに記載のシステム。
55.前記第1及び第2の信号を蛍光発光極大に基づき互いに識別することができる付記54に記載のシステム。
56.前記第1及び第2の検出可能標識を光散乱に基づきさらに識別することができる付記55に記載のシステム。
57.多能性間質細胞(MSC)集団の免疫調節ポテンシャルの評価を提供するためのモジュールであって、
CD54に特異的に結合する第1の検出可能標識が生成する第1の信号と、IL−6に特異的に結合する第2の検出可能標識が生成する第2の信号とを受け取り、
前記第1及び第2の信号を処理してCD54/IL−6結果を求め、及び
CD54/IL−6結果に基づきMSC集団の免疫調節ポテンシャルの評価を出力する
ように構成されるモジュール。
58.前記第1及び第2の信号は、フローサイトメトリーシステムの検出器モジュールから受け取られる付記57に記載のモジュール。
59.前記CD54/IL−6結果が閾値を上回るかどうかに基づきMSC集団の免疫調節ポテンシャルの評価を出力するように構成される付記57又は58に記載のモジュール。
60.前記閾値を上回るCD54/IL−6結果は、MSC集団が所望の免疫調節ポテンシャルを有することを示す付記59に記載のモジュール。
61.標準化対照に基づき前記閾値を決定するように構成される付記59又は60に記載のモジュール。
62.前記標準化対照は対照粒子を含む付記61に記載のモジュール。
63.前記第1及び第2の信号は蛍光発光から得られる付記57に記載のモジュール。
64.蛍光発光極大に基づき前記第1及び第2の信号を互いに識別することができる付記63に記載のモジュール。
65.1つ以上の追加の信号を受け取るように構成される付記57に記載のモジュール。
66.前記1つ以上の追加の信号は、MSC免疫調節ポテンシャルの指標となる1つ以上の追加のバイオマーカーによって生成される付記65に記載のモジュール。
67.前記1つ以上の追加の信号を処理して追加の結果を生成するように構成される付記66に記載のモジュール。
68.前記CD54/IL−6結果及び前記追加の結果に基づきMSC集団の免疫調節ポテンシャルの評価を出力するように構成される付記67に記載のモジュール。
69.多能性間質細胞(MSC)集団の免疫調節ポテンシャルの評価に用いられるキットであって、
CD54に特異的に結合する第1の検出可能標識と、
IL−6に特異的に結合する第2の検出可能標識と
を含むキット。
70.タンパク質輸送阻害剤をさらに含む付記69に記載のキット。
71.固定試薬をさらに含む付記69又は70に記載のキット。
72.透過処理試薬をさらに含む付記69〜71のいずれか一つに記載のキット。
73.前記第1及び第2の検出可能標識は各々、特異的結合ドメインと標識ドメインとを含む付記69〜72のいずれか一つに記載のキット。
74.前記特異的結合ドメインは抗体又はその結合断片を含む付記73に記載のキット。
75.前記標識ドメインは蛍光標識を含む付記73又は74に記載のキット。
76.MSC免疫調節ポテンシャルの指標となる追加のバイオマーカーに特異的に結合する追加の検出可能標識をさらに含む付記69〜75のいずれか一つに記載のキット。
本願は、米国特許法第119条(e)に基づき、2013年11月4日に出願された米国仮特許出願第61/899,835号明細書の出願日に対する優先権を主張し、この仮特許出願の開示は参照により本明細書に援用される。
Claims (15)
- 多能性間質細胞(MSC)集団の免疫調節ポテンシャルを評価する方法であって、
(a)MSC集団を作製するステップと、
(b)前記MSC集団のMSCに関連するCD54の量及びIL−6の量を評定して、CD54/IL−6結果を得るステップと、
(c)前記CD54/IL−6結果に基づき前記MSC集団の前記免疫調節ポテンシャルの評価を提供するステップと
を含むことを特徴とする方法。 - 前記評定するステップは、
CD54に特異的に結合する第1の検出可能標識及びIL−6に特異的に結合する第2の検出可能標識に、前記MSC集団から得られるMSC集団の試料を接触させて、標識された試料を作製するステップと、
標識された試料中のMSCに関連する第1及び第2の標識の量を定量化して、前記CD54/IL−6結果を得るステップと
を含むことを特徴とする請求項1に記載の方法。 - 前記MSC集団の試料をタンパク質輸送阻害剤で処理するステップをさらに含むことを特徴とする請求項2に記載の方法。
- IL−6に特異的に結合する第2の検出可能標識に前記MSC集団の試料を接触させる前に前記MSC集団の試料を固定試薬で処理するステップをさらに含むことを特徴とする請求項2又は3に記載の方法。
- IL−6に特異的に結合する第2の検出可能標識に前記MSC集団の試料を接触させる前に前記MSC集団の試料を透過処理試薬で処理するステップをさらに含むことを特徴とする請求項2〜4のいずれか一項に記載の方法。
- MSC免疫調節ポテンシャルの指標となる1つ以上の追加のバイオマーカーに特異的に結合する1つ以上の追加の検出可能標識に前記MSC集団の試料を接触させるステップをさらに含むことを特徴とする請求項2〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 第1及び第2の検出可能標識が各々、特異的結合ドメインと標識ドメインとを含むことを特徴とする請求項2〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記定量化するステップは、前記標識された試料から蛍光発光極大データを得るステップを含むことを特徴とする請求項2に記載の方法。
- 前記標識された試料から光散乱データを得るステップをさらに含むことを特徴とする請求項8に記載の方法。
- 前記定量化するステップは、フローサイトメトリーを含むことを特徴とする請求項2に記載の方法。
- 前記評価を提供するステップは、前記CD54/IL−6結果が閾値を上回るときに前記MSC集団を高度な免疫調節ポテンシャルを有すると同定するステップを含むことを特徴とする請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- フローチャネルと、
前記フローチャネルのアッセイ領域から光を受け取るように構成された検出器モジュールと、
請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法に従って前記検出器モジュールから第1及び第2の信号を受け取り、且つMSC集団の免疫調節ポテンシャルの評価を出力するように構成された信号処理モジュールと
を有することを特徴とするシステム。 - 標識された試料であって、
請求項2〜11のいずれか一項に記載の方法によって作製されており、
CD54に特異的に結合する第1の検出可能標識と、IL−6に特異的に結合する第2の検出可能標識とによって標識された多能性間質細胞(MSC)集団を含む
ことを特徴とする標識された試料。 - 請求項1〜11のいずれか一項に記載の多能性間質細胞(MSC)集団の免疫調節ポテンシャルの評価に用いられるキットであって、
CD54に特異的に結合する第1の検出可能標識と、
IL−6に特異的に結合する第2の検出可能標識と
を含むことを特徴とするキット。 - 前記MSC集団のMSC表面のCD54の量と、前記MSC集団のMSC内部のIL−6の量とを評定する
ことを特徴とする請求項1に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361899835P | 2013-11-04 | 2013-11-04 | |
US61/899,835 | 2013-11-04 | ||
PCT/US2014/063578 WO2015066552A1 (en) | 2013-11-04 | 2014-10-31 | Immunomodulatory potential of a multipotent stromal cell (msc) population |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016540969A JP2016540969A (ja) | 2016-12-28 |
JP6765961B2 true JP6765961B2 (ja) | 2020-10-07 |
Family
ID=53005231
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016526339A Active JP6765961B2 (ja) | 2013-11-04 | 2014-10-31 | 多能性間質細胞集団の免疫調節ポテンシャル |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9632096B2 (ja) |
EP (1) | EP3065551A4 (ja) |
JP (1) | JP6765961B2 (ja) |
KR (1) | KR102301945B1 (ja) |
CN (2) | CN113959928A (ja) |
WO (1) | WO2015066552A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017187717A1 (ja) * | 2016-04-28 | 2017-11-02 | 国立大学法人名古屋大学 | 蛍光プローブ、蛍光検出方法及び蛍光プローブの使用方法 |
CN111448324A (zh) * | 2017-10-23 | 2020-07-24 | 西澳大学 | 细胞分析或与细胞分析有关的改进 |
JP7352340B2 (ja) * | 2018-09-28 | 2023-09-28 | シスメックス株式会社 | 測定装置及び精度管理方法 |
EP3867626A4 (en) * | 2019-03-22 | 2022-11-09 | Becton, Dickinson and Company | SPECTRAL SEGREGATION OF FLUORESCENCE IMAGING USING RADIO FREQUENCY MULTIPLEXED EXCITATION DATA |
CN116218770B (zh) * | 2022-12-30 | 2023-11-24 | 苏州科为康生物医药科技有限公司 | 一种间充质干细胞的制备方法和应用 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB0210535D0 (en) * | 2002-05-08 | 2002-06-19 | Novartis Ag | Organic compounds |
US20050239897A1 (en) * | 2004-03-22 | 2005-10-27 | Pittenger Mark F | Mesenchymal stem cells and uses therefor |
US20110305673A1 (en) * | 2008-11-12 | 2011-12-15 | The University Of Vermont And State Agriculture College | Compositions and methods for tissue repair |
US8647678B2 (en) * | 2009-08-24 | 2014-02-11 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Anti-inflammatory macrophages and uses thereof |
JP5878172B2 (ja) * | 2010-07-29 | 2016-03-08 | ラボラトワール フルニエ エスアーエス | 炎症性眼疾患の治療/予防用化合物 |
CN104204192A (zh) * | 2012-02-13 | 2014-12-10 | 加米达细胞有限公司 | 间充质干细胞调理的基质及其产生和使用方法 |
WO2014113704A2 (en) * | 2013-01-18 | 2014-07-24 | Escape Therapeutics, Inc. | Enhanced differentiation of mesenchymal stem cells |
-
2014
- 2014-10-31 US US14/530,584 patent/US9632096B2/en active Active
- 2014-10-31 WO PCT/US2014/063578 patent/WO2015066552A1/en active Application Filing
- 2014-10-31 JP JP2016526339A patent/JP6765961B2/ja active Active
- 2014-10-31 CN CN202111226532.3A patent/CN113959928A/zh active Pending
- 2014-10-31 EP EP14856814.0A patent/EP3065551A4/en not_active Ceased
- 2014-10-31 KR KR1020167008867A patent/KR102301945B1/ko active IP Right Grant
- 2014-10-31 CN CN201480051414.5A patent/CN105658069A/zh active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US9632096B2 (en) | 2017-04-25 |
EP3065551A4 (en) | 2017-08-09 |
US20150125881A1 (en) | 2015-05-07 |
WO2015066552A1 (en) | 2015-05-07 |
CN105658069A (zh) | 2016-06-08 |
CN113959928A (zh) | 2022-01-21 |
KR102301945B1 (ko) | 2021-09-14 |
EP3065551A1 (en) | 2016-09-14 |
KR20160079774A (ko) | 2016-07-06 |
JP2016540969A (ja) | 2016-12-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6765961B2 (ja) | 多能性間質細胞集団の免疫調節ポテンシャル | |
Perfetto et al. | Amine‐reactive dyes for dead cell discrimination in fixed samples | |
US20100248257A1 (en) | Compiled Methods for Analysing and Sorting Samples | |
US20140349313A1 (en) | Data analysis methods utilizing phenotypic properties | |
CN112639137A (zh) | 用于检测癌症相关细胞群体、进行转移性癌症筛查及治疗的方法 | |
Consentius et al. | In situ detection of CD73+ CD90+ CD105+ lineage: Mesenchymal stromal cells in human placenta and bone marrow specimens by chipcytometry | |
Wu et al. | Development and validation of flow cytometry methods for pharmacodynamic clinical biomarkers | |
Tario Jr et al. | Dextramer reagents are effective tools for quantifying CMV antigen‐specific T cells from peripheral blood samples | |
Schneider et al. | Assessment of suppressive capacity by human regulatory T cells using a reproducible, bi-directional CFSE-based in vitro assay | |
US20140154799A1 (en) | Method of obtaining circulating cancer cell populations, associated cellular compositions and methods of using same | |
Ducret et al. | Phenotypic identification of dental pulp mesenchymal stem/stromal cells subpopulations with multiparametric flow cytometry | |
US10144916B2 (en) | Cell surface signature for processing cardiomyocyte subsets from heterogeneous cell samples | |
Tran | In vitro suppression assay for functional assessment of human regulatory T cells | |
US10684275B2 (en) | Methods and compositions for obtaining a tuberculosis assessment in a subject | |
Liu et al. | A new method for high speed, sensitive detection of minimal residual disease | |
Sanchez-Pino | Detection of circulating and tissue myeloid-derived suppressor cells (MDSC) by flow cytometry | |
Jackson et al. | A flow cytometric crossmatch test using endothelial precursor cells isolated from peripheral blood | |
US20140302526A1 (en) | Zap-70 detection in chronic lymphocytic leukemia | |
Berezhnyy et al. | Fast multi-spectral imaging technique for detection of circulating endothelial cells in human blood samples | |
Proserpio et al. | Flow Cytometry for Beginners: Hints and Tips for Approaching the Very First Single-Cell Technique | |
US20240053250A1 (en) | Threshold gating for flow cytometry methods | |
Moshkelgosha et al. | Emergence of a senescent and inflammatory pulmonary CD4+ T cell population prior to lung allograft failure | |
JP2016506494A (ja) | アロ反応性t細胞のフローサイトメトリー検出を利用した、ドナーとレシピエントとの間の適合性の決定法 | |
US20230333105A1 (en) | High-throughput flow cytometry analysis of highly multiplexed samples using sample indexing with specific binding member-fluor conjugates | |
JP2013027370A (ja) | 赤血球が混在するデバイス上の目的細胞検出方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20171003 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20180530 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180626 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180912 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190226 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190513 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20191008 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191206 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200331 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200618 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20200908 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200916 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6765961 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |