JP6723924B2 - Pkd1遺伝子及びpkd2遺伝子のエクソンを増幅するためのプライマーセット及び方法 - Google Patents
Pkd1遺伝子及びpkd2遺伝子のエクソンを増幅するためのプライマーセット及び方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6723924B2 JP6723924B2 JP2016560183A JP2016560183A JP6723924B2 JP 6723924 B2 JP6723924 B2 JP 6723924B2 JP 2016560183 A JP2016560183 A JP 2016560183A JP 2016560183 A JP2016560183 A JP 2016560183A JP 6723924 B2 JP6723924 B2 JP 6723924B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- base sequence
- primer
- region
- base
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 101100029888 Homo sapiens PKD1 gene Proteins 0.000 title claims description 64
- 101150056230 PKD1 gene Proteins 0.000 title claims description 64
- 101150112863 pkd2 gene Proteins 0.000 title claims description 45
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 title claims description 44
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 42
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 33
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 28
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 28
- 238000000137 annealing Methods 0.000 claims description 16
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 3
- 101001117143 Homo sapiens [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 2, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 229
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 51
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 51
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 36
- 201000008519 polycystic kidney disease 1 Diseases 0.000 description 31
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 30
- 102000057361 Pseudogenes Human genes 0.000 description 23
- 108091008109 Pseudogenes Proteins 0.000 description 23
- 208000030761 polycystic kidney disease Diseases 0.000 description 23
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 22
- 238000007403 mPCR Methods 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 208000010061 Autosomal Dominant Polycystic Kidney Diseases 0.000 description 10
- 208000022185 autosomal dominant polycystic kidney disease Diseases 0.000 description 9
- 101001074439 Homo sapiens Polycystin-2 Proteins 0.000 description 8
- 101001026882 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase D2 Proteins 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 7
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 6
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 6
- 238000003505 heat denaturation Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 5
- 238000009004 PCR Kit Methods 0.000 description 4
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 4
- 208000002814 Autosomal Recessive Polycystic Kidney Diseases 0.000 description 3
- 208000017354 Autosomal recessive polycystic kidney disease Diseases 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100037312 Serine/threonine-protein kinase D2 Human genes 0.000 description 3
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 2
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007862 touchdown PCR Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150084750 1 gene Proteins 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 239000012807 PCR reagent Substances 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005859 cell recognition Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000001963 scanning near-field photolithography Methods 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
- C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
- C40B50/00—Methods of creating libraries, e.g. combinatorial synthesis
- C40B50/08—Liquid phase synthesis, i.e. wherein all library building blocks are in liquid phase or in solution during library creation; Particular methods of cleavage from the liquid support
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
- C12N15/1093—General methods of preparing gene libraries, not provided for in other subgroups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2537/00—Reactions characterised by the reaction format or use of a specific feature
- C12Q2537/10—Reactions characterised by the reaction format or use of a specific feature the purpose or use of
- C12Q2537/143—Multiplexing, i.e. use of multiple primers or probes in a single reaction, usually for simultaneously analyse of multiple analysis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/118—Prognosis of disease development
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Structural Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
項1.
単一のPCRサイクル条件でPKD1遺伝子及びPDK2遺伝子の全てのエクソンを増幅させるためのプライマーセット。
項2.
下記表1に示されるプライマー対1〜18を含む、項1に記載のプライマーセット。
各プライマーが15〜40塩基の長さを有する、項1又は2に記載のプライマーセット。
項4.
1Fプライマーが、配列番号1で示される塩基配列の少なくとも第15位〜第29位の塩基配列を有し、
1Rプライマーが、配列番号2で示される塩基配列の少なくとも第16位〜第30位の塩基配列を有し、
2Fプライマーが、配列番号3で示される塩基配列の少なくとも第14位〜第28位の塩基配列を有し、
2Rプライマーが、配列番号4で示される塩基配列の少なくとも第13位〜第27位の塩基配列を有し、
3Fプライマーが、配列番号5で示される塩基配列の少なくとも第14位〜第28位の塩基配列を有し、
3Rプライマーが、配列番号6で示される塩基配列の少なくとも第14位〜第28位の塩基配列を有し、
4Fプライマーが、配列番号7で示される塩基配列の少なくとも第6位〜第20位の塩基配列を有し、
4Rプライマーが、配列番号8で示される塩基配列の少なくとも第8位〜第22位の塩基配列を有し、
5Fプライマーが、配列番号9で示される塩基配列の少なくとも第14位〜第28位の塩基配列を有し、
5Rプライマーが、配列番号10で示される塩基配列の少なくとも第10位〜第24位の塩基配列を有し、
6Fプライマーが、配列番号11で示される塩基配列の少なくとも第12位〜第26位の塩基配列を有し、
6Rプライマーが、配列番号12で示される塩基配列の少なくとも第12位〜第26位の塩基配列を有し、
7Fプライマーが、配列番号13で示される塩基配列の少なくとも第21位〜第35位の塩基配列を有し、
7Rプライマーが、配列番号14で示される塩基配列の少なくとも第20位〜第34位の塩基配列を有し、
8Fプライマーが、配列番号15で示される塩基配列の少なくとも第16位〜第30位の塩基配列を有し、
8Rプライマーが、配列番号16で示される塩基配列の少なくとも第13位〜第27位の塩基配列を有し、
9Fプライマーが、配列番号17で示される塩基配列の少なくとも第21位〜第35位の塩基配列を有し、
9Rプライマーが、配列番号18で示される塩基配列の少なくとも第14位〜第28位の塩基配列を有し、
10Fプライマーが、配列番号19で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
10Rプライマーが、配列番号20で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
11Fプライマーが、配列番号21で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
11Rプライマーが、配列番号22で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
12Fプライマーが、配列番号23で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
12Rプライマーが、配列番号24で示される塩基配列の少なくとも第17位〜第31位の塩基配列を有し、
13Fプライマーが、配列番号25で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
13Rプライマーが、配列番号26で示される塩基配列の少なくとも第16位〜第30位の塩基配列を有し、
14Fプライマーが、配列番号27で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
14Rプライマーが、配列番号28で示される塩基配列の少なくとも第12位〜第26位の塩基配列を有し、
15Fプライマーが、配列番号29で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
15Rプライマーが、配列番号30で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
16Fプライマーが、配列番号31で示される塩基配列の少なくとも第14位〜第28位の塩基配列を有し、
16Rプライマーが、配列番号32で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
17Fプライマーが、配列番号33で示される塩基配列の少なくとも第16位〜第30位の塩基配列を有し、
17Rプライマーが、配列番号34で示される塩基配列の少なくとも第12位〜第26位の塩基配列を有し、
18Fプライマーが、配列番号35で示される塩基配列の少なくとも第12位〜第26位の塩基配列を有し、及び/又は
18Rプライマーが、配列番号36で示される塩基配列の少なくとも第13位〜第27位の塩基配列を有する、
項2又は3に記載のプライマーセット。
各プライマーが凍結乾燥されている、項1〜4のいずれかに記載のプライマーセット。
項6.
各プライマーがPCRでの使用に適した溶液含まれている、項1〜4のいずれかに記載のプライマーセット。
項7.
単一のPCRサイクル条件が、62〜80℃のアニーリング温度及び伸長反応温度を含む、項1〜6のいずれに記載のプライマーセット。
項8.
項1〜6のいずれかに記載のプライマーセットを含む、PKD1遺伝子及びPKD2遺伝子の全てのエクソンを単一のPCRサイクル条件で増幅させるためのキット。
項9.
項1〜7のいずれかに記載のプライマーセットを用いて、被検体から得られたゲノムDNAを鋳型として、PCRを行う工程を含む、PKD1遺伝子及びPKD2遺伝子の全てのエクソンを単一のPCRサイクル条件で増幅させる方法。
項10.
前記PCRが、複数の別個のPCRを含む、項9に記載の方法。
項11.
前記複数の別個のPCRの全てが同時に行われる、項10に記載の方法。
項12.
項9〜11のいずれかに記載の方法によって得られた増幅産物の塩基配列を決定する工程を含む、被検体のPKD1遺伝子及び/又はPKD2遺伝子における変異の有無を測定する方法。
項13.
項12に記載の方法によって測定されたPKD1遺伝子及び/又はPKD2遺伝子における変異の有無に基づいて、被検体が多発性嚢胞腎を発症するリスク又は多発性嚢胞腎の罹患の有無を判定する方法。
項E1.
単一のPCRサイクル条件で、PKD1遺伝子及びPKD2遺伝子の全てのエクソンを増幅させるための、項1〜6のいずれかに記載のプライマーセットの使用。
項E2.
PKD1遺伝子及びPKD2遺伝子の全てのエクソンを単一のPCRサイクル条件で増幅させるための、項1〜6のいずれかに記載のプライマーセットを含むキットの使用。
PKD1遺伝子及びPKD2遺伝子の全てのエクソンを単一のPCRサイクル条件で増幅することを可能にするプライマーセットが提供される。上記表1に示される18のプライマー対を組み合わせて使用することにより、PKD1遺伝子及びPKD2遺伝子の全てのエクソンを含む領域を、PKD1遺伝子の偽遺伝子を増幅することなく、増幅させることができる。好適な一実施形態において、18のプライマー対セットを用いることにより、単一のPCRサイクル条件でPKD1遺伝子及びPKD2遺伝子の全てのエクソンを含む領域を増幅させることができる。
プライマー対1〜18のいずれか又はその任意の組み合わせを用いてPCRを行うことにより、PKD1遺伝子及び/又はPKD2遺伝子の目的のエクソンを増幅することができる。PCRは、常法に準じて行うことができ、例えば、市販されているPCR装置及びロングレンジPCR用キット等を用いて、そのマニュアルに従って実施することができる。具体的に、PCRは、下記の工程(1)〜(5)のいずれか、任意の組み合わせ、又は全てを含むことができる。下記の工程(3)及び(4)は、同一の温度条件で行うことが可能であり、一実施形態において、工程(3)及び(4)は同一の温度条件で同時に(連続的に)行うことが好ましい。
(1)鋳型DNA、プライマー対、耐熱性DNAポリメラーゼ、並びに、アデニン、グアニン、チミン、及びシトシンを含むヌクレオチドを含む反応液を調製する工程;
(2)反応液を所定の温度に加熱し、2本鎖の鋳型DNAを2本の1本鎖に解離させる熱変性工程;
(3)反応液を所定の温度に冷却し、プライマー対を構成する各プライマーを、一本鎖の鋳型DNAにおける各々の特異的認識領域に結合させるアニーリング工程;
(4)反応液を所定の温度で維持し、耐熱性DNAポリメラーゼに、プライマーを起点として鋳型DNAに相補的なDNAを合成させる伸長工程;及び/又は
(5)所定量の増幅産物(目的とするエクソンに相当するDNA)が得られるまで、工程(2)〜(4)を繰り返す工程
鋳型DNAには、ヒトゲノムDNAを用いることが好ましい。ヒトゲノムDNAは、被検体から採取した血液又は他の任意の組織から市販されるDNA抽出キット等を用いて容易に取得することができる。被検体は、特に制限されないが、好ましくは、多発性嚢胞腎を発症していることが疑われるヒト、或いは遺伝的にPKD1遺伝子又はPKD2遺伝子に変異が存在する可能性が比較的高いと考えられるヒトを挙げることができる。
組み合わせ(A):プライマー対2及び12
組み合わせ(B):プライマー対4及び17
組み合わせ(C):プライマー対6及び15
組み合わせ(D):プライマー対1、5及び/又は9
組み合わせ(E):プライマー対3、8及び/又は18
組み合わせ(F):プライマー対7、13及び/又は16
組み合わせ(G):プライマー対10、11及び/又は14
組み合わせ(D)は、プライマー対1、5及び/又は9であるが、好ましくはプライマー対1、5、及び9である。組み合わせ(F)は、プライマー対7、13及び/又は17であるが、好ましくはプライマー対7、13及び17である。組み合わせ(G)は、プライマー対10、11及び/又は14であるが、好ましくはプライマー対10、11及び14である。
超音波検査にて腎臓に嚢胞が認められず、確実にPKDの素因が否定された35歳以上の健康成人(男女は問わない)から採取した140例の検体を用いて試験を行った。本書では、140例のうち6検体についての解析結果を代表例として示す。DNA検体は次の手順で採取した。健康成人より末梢血7mLを真空採血管に採取し、2〜3回静かに転倒混和した後、採血実施施設の冷凍庫内で冷凍保管した。冷凍保管された血液から、QIAamp DNA Blood Maxi キット(キアゲン社)を用いてゲノムDNAを抽出し、これを検体DNAとした。
下記表2及び3に示す塩基配列を有する、PKD1遺伝子増幅用プライマー(9ペア)及びPKD2遺伝子増幅用プライマー(9ペア)を設計して合成した。
表2及び3において、「Start」欄に示される数字は、各プライマーの5’末端塩基がハイブリダイズする染色体DNA(表2の場合は配列番号37に示される塩基配列、表3の場合は配列番号38に示される塩基配列)の塩基の位置を示す。同様に「End」の欄に示される数字は、各プライマーの3’末端の塩基がハイブリダイズする染色体DNAの塩基の位置示す。「Exon」の欄に示される数字は、各プライマーペアによって増幅される領域に含まれるエクソンの番号を示す。「Size」の欄に示される数字は、増幅される領域の大きさ(塩基数)を示す。「From」の欄に示される数字は、増幅される領域の5’末端の塩基が対応する染色体DNAの塩基の位置を示す。「To」の欄に示される数字は、増幅される領域の3’末端の塩基が対応する染色体DNAの塩基の位置を示す。
上記1において健康成人から採取した10種類の検体DNAについて、上記2で調製したプライマーミックス及びマルチプレックスPCR用の試薬(SequalPrep Long PCR Kit with dNTPs, Life Technologies社)を用い、サーマルサイクラー(Veriti 96Well Thermal Cycler, Life Technologies社)でマルチプレックスPCRを実施した。具体的には次の手順で行った。反応容器内に、緩衝液、DMSO、エンハンサー、DNA合成酵素、滅菌水、プライマーミックス、鋳型DNA(検体DNA)を加えた。プライマーミックスは7種類(A〜G)あるため、1検体当たり7ウェルを用い、各ウェルにいずれかのプライマーミックスを添加した。鋳型DNAは各ウェルに100ngを添加し、1ウェルあたりの反応液の総量は50μLとなるように調製した。反応液の組成を下記表5に示す。
上記3.のマルチプレックスPCRにより、1検体あたり7種類の増幅産物混合物が得られた。それぞれの増幅産物を3μLずつ分取し1本のチューブに纏めた。このように検体毎にまとめたサンプルでカラムを用いて増幅産物の精製を行った。その後濃度測定を行い、0.2ng/μLとなるように調製した。濃度調製済みサンプルについてDNAフラグメントライブラリ調製キット(Nextera XT DNA Sample Prep Kit,Illumina)を用いてサンプルの断片化及びバーコード配列の付加を行い、サンプル間の濃度の均一化を行った。
ライブラリ調製が完了したサンプルについて、シークエンシングキット(MiSeq Reagent Kit v2 2×150bp, Illumina)を用いて前処理し、次世代シークエンサー(MiSeq, Illumina)を用いてシークエンスを実施した。得られたシークエンスデータを基に変異の検出を行った。その結果、各検体について11個から25個の多型変異の存在が確認された。このように、上述のプライマーを用いたマルチプレックスPCR法で作製したライブラリを利用してPKD遺伝子における多型変異(SNP、InsertionおよびDeletion)を検出することが可能であることが確認された。
次世代シークエンサーにより出力された数百塩基の長さから成る約数十万個のDNA断片(リード)を参照配列に対してマッピングし、ビューワーソフト(Integrative Genomics Viewer:IGV)を用いて、全体の状況を可視化した。その結果、マッピングされている箇所はPKD1およびPKD2遺伝子のマルチプレックスPCRを行った領域だけであり、偽遺伝子の影響は受けていないことが明らかとなった。
上記3のマルチプレックスPCRで得られた増幅産物を精製し、サンガー法を用いてシークエンス解析を行った。偽遺伝子が6種類存在するPKD1遺伝子においては、PKD1に特異的であり、他の偽遺伝子は全て異なる塩基を有する箇所が複数存在する。偽遺伝子を増幅する可能性が存在する7領域の増幅産物についてそのような箇所を重点的に確認したところ、いずれの増幅産物の配列も真正なPKD1遺伝子の配列に一致することが判明した(図3)。以上から、上述のプライマーセットを用いることにより、偽遺伝子を増幅することなく、効率的にPKD1遺伝子及びPKD2遺伝子の全てのエクソン領域を増幅することができることが確認された。
Claims (10)
- 各プライマーが15〜40塩基の長さを有する、請求項1に記載のプライマーセット。
- 1Fプライマーが、配列番号1で示される塩基配列の少なくとも第15位〜第29位の塩基配列を有し、
1Rプライマーが、配列番号2で示される塩基配列の少なくとも第16位〜第30位の塩基配列を有し、
2Fプライマーが、配列番号3で示される塩基配列の少なくとも第14位〜第28位の塩基配列を有し、
2Rプライマーが、配列番号4で示される塩基配列の少なくとも第13位〜第27位の塩基配列を有し、
3Fプライマーが、配列番号5で示される塩基配列の少なくとも第14位〜第28位の塩基配列を有し、
3Rプライマーが、配列番号6で示される塩基配列の少なくとも第14位〜第28位の塩基配列を有し、
4Fプライマーが、配列番号7で示される塩基配列の少なくとも第6位〜第20位の塩基配列を有し、
4Rプライマーが、配列番号8で示される塩基配列の少なくとも第8位〜第22位の塩基配列を有し、
5Fプライマーが、配列番号9で示される塩基配列の少なくとも第14位〜第28位の塩基配列を有し、
5Rプライマーが、配列番号10で示される塩基配列の少なくとも第10位〜第24位の塩基配列を有し、
6Fプライマーが、配列番号11で示される塩基配列の少なくとも第12位〜第26位の塩基配列を有し、
6Rプライマーが、配列番号12で示される塩基配列の少なくとも第12位〜第26位の塩基配列を有し、
7Fプライマーが、配列番号13で示される塩基配列の少なくとも第21位〜第35位の塩基配列を有し、
7Rプライマーが、配列番号14で示される塩基配列の少なくとも第20位〜第34位の塩基配列を有し、
8Fプライマーが、配列番号15で示される塩基配列の少なくとも第16位〜第30位の塩基配列を有し、
8Rプライマーが、配列番号16で示される塩基配列の少なくとも第13位〜第27位の塩基配列を有し、
9Fプライマーが、配列番号17で示される塩基配列の少なくとも第21位〜第35位の塩基配列を有し、
9Rプライマーが、配列番号18で示される塩基配列の少なくとも第14位〜第28位の塩基配列を有し、
10Fプライマーが、配列番号19で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
10Rプライマーが、配列番号20で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
11Fプライマーが、配列番号21で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
11Rプライマーが、配列番号22で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
12Fプライマーが、配列番号23で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
12Rプライマーが、配列番号24で示される塩基配列の少なくとも第17位〜第31位の塩基配列を有し、
13Fプライマーが、配列番号25で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
13Rプライマーが、配列番号26で示される塩基配列の少なくとも第16位〜第30位の塩基配列を有し、
14Fプライマーが、配列番号27で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
14Rプライマーが、配列番号28で示される塩基配列の少なくとも第12位〜第26位の塩基配列を有し、
15Fプライマーが、配列番号29で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
15Rプライマーが、配列番号30で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
16Fプライマーが、配列番号31で示される塩基配列の少なくとも第14位〜第28位の塩基配列を有し、
16Rプライマーが、配列番号32で示される塩基配列の少なくとも第11位〜第25位の塩基配列を有し、
17Fプライマーが、配列番号33で示される塩基配列の少なくとも第16位〜第30位の塩基配列を有し、
17Rプライマーが、配列番号34で示される塩基配列の少なくとも第12位〜第26位の塩基配列を有し、
18Fプライマーが、配列番号35で示される塩基配列の少なくとも第12位〜第26位の塩基配列を有し、及び/又は
18Rプライマーが、配列番号36で示される塩基配列の少なくとも第13位〜第27位の塩基配列を有する、
請求項1又は2に記載のプライマーセット。 - 各プライマーが凍結乾燥されている、請求項1〜3のいずれかに記載のプライマーセット。
- 各プライマーがPCRでの使用に適した溶液含まれている、請求項1〜3のいずれかに記載のプライマーセット。
- 単一のPCRサイクル条件が、62〜80℃のアニーリング温度及び伸長反応温度を含む、請求項1〜5のいずれに記載のプライマーセット。
- 請求項1〜6のいずれかに記載のプライマーセットを含む、PKD1遺伝子及びPKD2遺伝子の全てのエクソンを単一のPCRサイクル条件で増幅させるためのキット。
- 請求項1〜6のいずれかに記載のプライマーセットを用いてPCRを行う工程を含む、単一のPCRサイクル条件でPKD1遺伝子及びPKD2遺伝子の全てのエクソンを増幅させる方法。
- 前記PCRが、複数の別個のPCRを含む、請求項8に記載の方法。
- 前記複数の別個のPCRの全てが同時に行われる、請求項9に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014235066 | 2014-11-19 | ||
JP2014235066 | 2014-11-19 | ||
PCT/JP2015/081941 WO2016080299A1 (ja) | 2014-11-19 | 2015-11-13 | Pkd1遺伝子及びpkd2遺伝子のエクソンを増幅するためのプライマーセット及び方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2016080299A1 JPWO2016080299A1 (ja) | 2017-08-24 |
JP6723924B2 true JP6723924B2 (ja) | 2020-07-15 |
Family
ID=56013840
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016560183A Expired - Fee Related JP6723924B2 (ja) | 2014-11-19 | 2015-11-13 | Pkd1遺伝子及びpkd2遺伝子のエクソンを増幅するためのプライマーセット及び方法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10538812B2 (ja) |
EP (1) | EP3225696B1 (ja) |
JP (1) | JP6723924B2 (ja) |
KR (1) | KR20170081266A (ja) |
CN (1) | CN107532200B (ja) |
CA (1) | CA2976411A1 (ja) |
ES (1) | ES2814284T3 (ja) |
WO (1) | WO2016080299A1 (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108707648A (zh) * | 2017-04-05 | 2018-10-26 | 张巍 | Pkd1基因和pkd2基因突变的检测方法和检测试剂盒 |
CN106995851B (zh) * | 2017-04-25 | 2020-07-03 | 郑州大学第一附属医院 | 扩增pkd1外显子超长片段的pcr引物、检测pkd1基因突变的试剂盒及应用 |
CN109971845B (zh) * | 2018-12-26 | 2023-12-08 | 阅尔基因技术(苏州)有限公司 | 一种扩增人类pkd1基因1-33号外显子的pcr引物组和扩增体系 |
CN112342289B (zh) * | 2020-11-04 | 2023-08-15 | 广州精科医学检验所有限公司 | 用于长片段pcr富集地中海贫血基因的引物组及其应用 |
CN115725716B (zh) * | 2022-09-20 | 2024-04-30 | 湖南家辉生物技术有限公司 | Pkd1致病突变基因及在制备多囊肾病诊断试剂盒中的应用 |
CN117143997B (zh) * | 2023-10-31 | 2024-02-23 | 北京中仪康卫医疗器械有限公司 | 一种用于pkd1基因突变检测的引物组、试剂盒及检测方法 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1997044457A1 (en) | 1996-05-24 | 1997-11-27 | Genzyme Corporation | Polycystic kidney disease gene |
US7553644B2 (en) * | 2000-07-13 | 2009-06-30 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Detection and treatment of polycystic kidney disease |
US6916619B2 (en) * | 2001-10-12 | 2005-07-12 | Athena Diagnostics, Inc. | Compositions and methods for genetic analysis of polycystic kidney disease |
US7273701B2 (en) | 2001-10-12 | 2007-09-25 | Athena Diagnostics, Inc. | Compositions and methods for genetic analysis of polycystic kidney disease |
CA2993381C (en) | 2006-07-24 | 2020-07-14 | Athena Diagnostics, Inc. | Method of detecting the occurrence of adpkd based on presence of nucleotide sequence alteration in pkd1 |
EP2155909B1 (en) * | 2007-06-01 | 2018-03-07 | Council Of Scientific & Industrial Research | Method for simultaneous detection and discrimination of bacterial, fungal, parasitic and viral infections of eye and central nervous system |
EP2113574A1 (en) * | 2008-04-28 | 2009-11-04 | Biotype AG | Substances and methods for a DNA based profiling assay |
EP3072977B1 (en) * | 2011-04-28 | 2018-09-19 | Life Technologies Corporation | Methods and compositions for multiplex pcr |
JP2014212711A (ja) * | 2013-04-23 | 2014-11-17 | 国立大学法人長崎大学 | 肺炎球菌血清型迅速分子診断法 |
-
2015
- 2015-11-13 CN CN201580073811.7A patent/CN107532200B/zh active Active
- 2015-11-13 WO PCT/JP2015/081941 patent/WO2016080299A1/ja active Application Filing
- 2015-11-13 US US15/534,853 patent/US10538812B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2015-11-13 KR KR1020177016547A patent/KR20170081266A/ko active IP Right Grant
- 2015-11-13 ES ES15861187T patent/ES2814284T3/es active Active
- 2015-11-13 JP JP2016560183A patent/JP6723924B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2015-11-13 CA CA2976411A patent/CA2976411A1/en active Pending
- 2015-11-13 EP EP15861187.1A patent/EP3225696B1/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3225696A4 (en) | 2018-06-20 |
CN107532200B (zh) | 2021-07-30 |
WO2016080299A1 (ja) | 2016-05-26 |
JPWO2016080299A1 (ja) | 2017-08-24 |
US10538812B2 (en) | 2020-01-21 |
US20180037955A1 (en) | 2018-02-08 |
ES2814284T3 (es) | 2021-03-26 |
EP3225696A1 (en) | 2017-10-04 |
KR20170081266A (ko) | 2017-07-11 |
CA2976411A1 (en) | 2016-05-26 |
CN107532200A (zh) | 2018-01-02 |
EP3225696B1 (en) | 2020-06-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6723924B2 (ja) | Pkd1遺伝子及びpkd2遺伝子のエクソンを増幅するためのプライマーセット及び方法 | |
US7749706B2 (en) | Detection of microsatellite instability and its use in diagnosis of tumors | |
JP2022002508A (ja) | 無細胞dnaを評価するための多重/最適化ミスマッチ増幅(moma)−リアルタイムpcr | |
US7902343B2 (en) | Detection of microsatellite instability and its use in diagnosis of tumors | |
JP2018512878A (ja) | 次世代シークエンシングの感度を高めるための方法 | |
EP1394272B1 (en) | Method for detection of Ki-ras mutations | |
CN101815789A (zh) | 靶序列的富集 | |
AU2001290868A1 (en) | Detection of microsatellite instability and its use in diagnosis of tumors | |
CN106995851B (zh) | 扩增pkd1外显子超长片段的pcr引物、检测pkd1基因突变的试剂盒及应用 | |
KR102112951B1 (ko) | 암의 진단을 위한 ngs 방법 | |
Zhu et al. | Advantages of single-stranded DNA over double-stranded DNA library preparation for capturing cell-free tumor DNA in plasma | |
CN115216533A (zh) | 一种用于诊断威尔逊病的生物标志物、扩增引物组、检测试剂及应用 | |
WO2023145754A1 (ja) | 膀胱癌の存在を検出するためのプライマー及びプローブ | |
KR101598328B1 (ko) | Dna 복제수 변이를 이용한 강직성 척추염 발병 저위험도 예측용 조성물 및 이를 이용한 예측 방법 | |
JP2005323565A (ja) | 標的dna配列において一塩基変異多型の存在を検出する方法及びキット | |
TW201319567A (zh) | 鑑定企鵝科鳥類性別的方法、鑑別企鵝科鳥類性別之核苷酸序列與鑑別企鵝科鳥類性別之核苷酸引子對 | |
WO2011068610A1 (en) | Methods for detecting risk of myelodysplastic syndrome by genotypic analysis | |
JP2024093463A (ja) | 膀胱癌に関連した変異dnaの分析方法、並びにそのためのデジタルpcr用プライマー及びプローブ | |
JP2021078432A (ja) | アンドロゲン受容体遺伝子スプライシングバリアント検出プローブおよび当該プローブを用いた前記バリアントの検出方法 | |
JP2021078434A (ja) | アンドロゲン受容体遺伝子スプライシングバリアント検出プローブおよび当該プローブを用いた前記バリアント検出方法 | |
JP2021078433A (ja) | アンドロゲン受容体遺伝子スプライシングバリアント検出用プローブおよび当該プローブを用いた前記バリアントの検出方法 | |
JP2021078435A (ja) | アンドロゲン受容体遺伝子スプライシングバリアント検出用プローブおよび当該プローブを用いた前記バリアント検出方法 | |
KR20170141054A (ko) | 세포-유리형 dna의 암 질환의 진단 용도 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20181016 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20191015 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191205 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20200526 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200624 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6723924 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |