JP6707222B2

JP6707222B2 - ドパミン過感受性精神病の判定方法

Info

Publication number: JP6707222B2
Application number: JP2015188048A
Authority: JP
Inventors: 信久金原; 正幸高瀬; 靖典小田; 渡邉　博幸; 博幸渡邉; 雅臣伊豫
Original assignee: Chiba University NUC
Current assignee: Chiba University NUC
Priority date: 2015-09-25
Filing date: 2015-09-25
Publication date: 2020-06-10
Anticipated expiration: 2035-09-25
Also published as: JP2017060432A

Description

本発明は、ドパミンＤ２受容体遺伝子プロモーター領域の遺伝子多型を検出することを含むドパミン過感受性精神病の罹患リスクの判定方法に関する。より詳しくは本発明は、ドパミンＤ２受容体遺伝子のプロモーター領域に存在する１塩基多型、具体的には、該遺伝子の−１４１位の塩基シトシンの挿入／欠失（−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ）多型（ｒｓ１７９９７３２）を検出することを含む、ドパミン過感受性精神病の罹患リスクの判定方法に関する。さらに詳しくは本発明は、前記遺伝子の−１４１位の塩基シトシンの欠失を検出することを含む、ドパミン過感受性精神病の罹患リスクの判定方法に関する。また、本発明は、ドパミン過感受性精神病の罹患リスクの判定用試薬キット、および該キットに含まれるオリゴヌクレオチドに関する。

統合失調症は思春期後半から青年期に発症し、慢性的な経過をたどる精神病性障害である。主症状は、幻覚および妄想などの陽性症状や、感情および意欲の減退や社会的ひきこもりなどの陰性症状、並びに注意や記憶の低下などの認知機能障害である。

統合失調症の治療は抗精神病薬による薬物療法が中心であるが、薬剤療法により寛解に至ることができる統合失調症患者は２０％程度であり、また、再発率が高い疾患であるのが特徴である。実際、初発エピソード後の再燃率は、２年で３５％、５年で７５％である。

抗精神病薬は広義の向精神薬の一種で、主に統合失調症や躁状態の治療に承認されている薬剤である。抗精神病薬は、定型抗精神病薬または第一世代抗精神病薬といわれる従来型抗精神病薬と、非定型抗精神病薬または第二世代の抗精神病薬といわれる新規抗精神病薬の２種類に大別される。定型抗精神病薬はドパミン拮抗薬であり、主に中脳辺縁系のドパミン作動性ニューロンのドパミンＤ２受容体（以下、ＤＲＤ２と略称することがある。）を遮断する作用を有する。定型抗精神病薬はドパミンの働きを強力に抑制するため、中脳辺縁系に作用することにより陽性症状の顕著な改善に効果を示す。定型抗精神病薬として、フェノチアジン系抗精神病薬であるクロルプロマジンやレボメプロマジン、ブチロフェノン系抗精神病薬であるハロペリドールやチミペロン、ベンザミド誘導体系抗精神病薬であるスルピリドなどが知られている。非定型抗精神病薬は、ＤＲＤ２受容体拮抗作用に加えてセロトニン５ＨＴ２Ａ受容体拮抗作用を有するといった特徴や、ＤＲＤ２受容体に対する親和性が定型抗精神病薬と比較して低いといった特徴をもつ薬剤である。非定型抗精神病薬は、陽性症状に対する効果を有するほか、陰性症状にも効果が認められる場合があり、錐体外路症状などの副作用の発現が少ないことが報告されている。非定型抗精神病薬として、セロトニン・ドパミン拮抗薬であるクロザピンやリスペリドンや、他受容体標的薬（ｍｕｌｔｉ−ａｃｔｉｎｇｒｅｃｐｔｏｒｔａｒｇｅｔｅｄａｇｅｎｔ）であるオランザピンやクエチアピン、並びにドパミンシステムスタビライザーであるアリピプラゾールなどが知られている。

統合失調症の患者には、通常の抗精神病薬治療に反応しない、または錐体外路系副作用のために抗精神病薬を使用できない患者が存在し、治療抵抗性統合失調症（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ）患者と定義されている。

治療抵抗性統合失調症患者のうち、およそ半数がドパミン過感受性精神病（ｄｏｐａｍｉｎｅｓｕｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｐｓｙｃｈｏｓｉｓ）であるとの報告（非特許文献１）があり、再発・再燃や長期予後への強い関与が示唆されている。以下、ドパミン過感受性精神病をＤＳＰと略称することがある。

ＤＳＰエピソード、すなわちＤＳＰで認められる一定期間の病相の評価は、通常、シュイナードの基準（非特許文献２）に基づいて行われる。例えば、離脱精神病、抗精神病薬に対する耐性、および遅発性ジスキネジアの存在のうち、いずれかを満たした症例をＤＳＰであると評価することができる。離脱精神病は、経口抗精神病薬の減量や中断から６週間以内、または抗精神病薬の持効性注射剤の減量や中断から３ヶ月以内に、精神症状の急激な再燃や増悪が認められた場合に、離脱精神病であると評価する。抗精神病薬に対する耐性とは、精神病症状が再燃または増悪したときに、病状コントロールを目的として抗精神病薬を２０％以上増加しても病状をコントロールできなかったこと、あるいは減薬や中断と関係なく再燃または増悪したときに、新たな統合失調症による症状若しくは著しく重篤な症状を示したことがある場合に、薬剤耐性があると評価する。遅発性ジスキネジアは反復的、不随意、かつ目的のない動作に特徴付けられる運動障害であり、抗精神病薬の長期間あるいは高用量使用の後に副作用としてしばしば生じる。過去または現在に遅発性ジスキネジアが認められたことがある場合に、遅発性ジスキネジアが存在すると評価する。

ＤＳＰ形成の機序として、高力価および／または高用量の抗精神病薬による過剰なドパミン神経伝達の遮断に対する、代償性のドパミンＤ２受容体密度の増加の関与が推定されている（非特許文献３）。

一方、統合失調症の薬理遺伝学的研究や画像研究では、ＤＲＤ２遺伝子および近接するザアンキリンリピートアンドキナーゼドメインコンテイニング１（ｔｈｅａｎｋｙｒｉｎｒｅｐｅａｔａｎｄｋｉｎａｓｅｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ１）遺伝子の１塩基多型と、ＤＲＤ２密度や抗精神病薬に対する反応性との関連を示唆する報告が多数存在する。以下、ザアンキリンリピートアンドキナーゼドメインコンテイニング１をＡＮＫＫ１と略称することがある。

ＤＲＤ２密度や抗精神病薬に対する反応性との関連を示唆されている１塩基多型として、具体的にはＤＲＤ２遺伝子の−１４１位の塩基シトシンの挿入／欠失（−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ）多型やＡＮＫＫ１遺伝子のＴａｑ１Ａ多型を挙げることができる。ＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型およびＡＮＫＫ１遺伝子のＴａｑ１Ａ多型は、米国国立バイオテクノロジー情報センターのＳＮＰデータベースにそれぞれｒｓ１７９９７３２およびｒｓ１８００４９７として登録された１塩基多型である（非特許文献４、５）。

ＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型に関し、−１４１Ｃの欠失アレル保有者はＤＲＤ２密度が高いこと（非特許文献６）、抗精神病薬への反応性が不良であること（非特許文献７、８）、および遅発性ジスキネジアのリスクが高いこと（非特許文献９）が報告されている。また、Ｔａｑ１Ａ多型に関し、Ａ１アレル保有者はＤＲＤ２密度が低いこと（非特許文献１０）および抗精神病薬への反応性が良好であること（非特許文献７、１１）、並びにＡ２アレル保有者は遅発性ジスキネジアのリスクが高いこと（非特許文献１２）が報告されている。

Chouinard G, Chouinard VA. Psychother Psychosom 2008; 77: 69-77. Chouinard G. Schizophr Res 1990; 5: 21-33. Iyo M, Tadokoro S, Kanahara N, et al. J Clin Psychopharmacology, 2013; 33: 398-404. 米国国立バイオテクノロジー情報センターＳＮＰデータベース、「Reference SNP (refSNP) Cluster Report: rs1799732」、インターネット＜URL:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref.cgi?rs=1799732＞米国国立バイオテクノロジー情報センターＳＮＰデータベース、「Reference SNP (refSNP) Cluster Report: rs1800497」、インターネット＜URL:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref.cgi?rs=1800497＞ Jonsson EG, Nothen MM, Grunhage F, et al. Mol Psychiatry 1999; May;4(3):290-6. Zhang JP, Lencz T, Malhotra AK. Am J Psychiatry 2010; 167(7):763-772. Sakumoto N, Kondo T, Mihara K, et al. Psychiatry Clin Neurosci. 2007 Apr;61(2):174-80. Koning J, Vehof J, Burger H, et al. Psychopharmacology 2012 Feb;219(3):727-36. Thompson JP, Thomas N, Singleton A, et al. Pharmacogenetics. 1997 Dec;7(6):479-84. Schafer M, Rujescu D, Giegling I , et al. Am J Psychiatry. 2001 May;158(5):802-4. Bakker PR, van Harten PN, van Os et al. J. Mol Psychiatry. 2008 May;13(5):544-56. Suzuki T, et al. Psychiatry Res. 2015 Jun 30;227(2-3):278-82.

ＤＳＰの患者は、服薬中断により再発や症状悪化が認められ、また、抗精神病薬に対する耐性を起こしやすく、退院後の予後が懸念されるため、長期入院を余儀なくされる。また、ＤＳＰの診断は困難であり、ＤＳＰへの適切な予防や治療がされていない。

このような現状において、ＤＳＰを的確に診断し、適切な予防や治療を行うことによって、長期入院患者の退院を促進し、退院後も安定した地域生活を維持することができる。

本発明では、ＤＳＰの罹患予測を補助することのできる、ＤＳＰの罹患リスクの判定方法を提供することを目的とする。

ＤＳＰ形成の機序として、高力価および／または高用量の抗精神病薬による過剰なドパミン神経伝達の遮断に対する、代償性のＤＲＤ２密度の増加の関与が推定されており、さらに、ＤＲＤ２密度や抗精神病薬に対する反応性とＤＲＤ２遺伝子およびＡＮＫＫ１遺伝子の１塩基多型との関連を示唆する報告がある。しかしながら、未だにＤＳＰ形成の機序を説明する確立された知見はない。

本発明者らは、ＤＳＰ形成の機序を説明する知見が確立されていない要因として、従来の報告では病期や病型が異なる群をまとめて検証している点が影響していると考えた。特に治療反応性に関する結果は短期的な優劣での検証であり、より長期的な治療経過や病態に注目することで、生物学的・症候学的に均一な病態を抽出することができ、より意義のある結果が得られる可能性があると考えた。

本発明者らは、ＤＳＰ形成にＤＲＤ２遺伝子またはＡＮＫＫ１遺伝子の多型が関与しているという仮説を立て、これら遺伝子を対象とした遺伝子相関研究を行った。その結果、ＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型がＤＳＰ形成に関与していることを明らかにした。具体的には、ＤＳＰであると評価された被験者でしかもクロルプロマジン換算量で６００ｍｇ以上の高用量の抗精神病薬によって治療を受けた者において、ＤＲＤ２遺伝子の−１４１Ｃの欠失アレル保有者が−１４１Ｃの挿入アレル保有者と比較して有意に多いことが判明した。

上記研究結果から、ＤＲＤ２遺伝子の−１４１Ｃの欠失アレルがＤＳＰ形成に関連する遺伝子多型であると特定し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、被験者の生物学的試料において、ＤＲＤ２遺伝子プロモーター領域に存在する多型であって、米国国立バイオテクノロジー情報センターのＳＮＰデータベースにｒｓ１７９９７３２として登録された１塩基多型を検出することを含む、ＤＳＰの罹患リスクの判定方法に関する。

また本発明は、前記１塩基多型が欠失多型であるときに、ＤＳＰの罹患リスクが高いと判定される、前記判定方法に関する。

さらに本発明は、配列番号２に記載の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドおよび配列番号３に記載の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドを含むプライマーセットを用いて前記塩１塩基多型を検出することを含む、前記いずれかの判定方法に関する。

さらにまた本発明は、前記被験者が統合失調症の患者である、前記いずれかの判定方法に関する。

また本発明は、前記生物学的試料が血液である、前記いずれかの判定方法に関する。

さらに本発明は、配列番号２に記載の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドおよび配列番号３に記載の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドを含む、ＤＳＰの罹患リスクの判定用試薬キットに関する。

さらにまた本発明は、統合失調症の患者の血液において、ＤＲＤ２遺伝子プロモーター領域に存在する多型であって、米国国立バイオテクノロジー情報センターのＳＮＰデータベースにｒｓ１７９９７３２として登録された１塩基多型を検出することを含む、統合失調症患者群からＤＳＰ患者群を選別する方法に関する。

本発明によれば、被験者から採取した生物学的試料において、ＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型（ｒｓ１７９９７３２）を検出することを含む、ＤＳＰの罹患リスクの判定方法を提供できる。

ＤＳＰは抗精神病薬の過剰投与により形成される可能性が高いため、急性期や維持期など症状に応じて抗精神病薬の用量を適切に調整してその形成を予防することが重要である。

本発明に係るＤＳＰの罹患リスクの判定方法は、客観的に簡便、迅速かつ高い精度でＤＳＰの罹患リスクを判定することができる。したがって、本発明に係るＤＳＰの罹患リスクの判定方法を実施することにより、ＤＳＰの罹患リスクがあると判定された被験者に対して、その治療においてＤＳＰを形成しないように、適用する抗精神病薬の種類や用量の選定、治療スケジュールの調整、療養指導の強化などを行うことができる。

このように、本発明はＤＳＰ形成の予防に寄与するものであり、患者にとって大きな生活の質（ＱｕａｌｉｔｙｏｆＬｉｆｅ；以下、ＱＯＬと略称する）の向上を図ることができ、かつ医療費の削減に貢献できる。

本発明は、ＤＲＤ２遺伝子プロモーター領域に存在する遺伝子多型を検出することを含む、ＤＳＰの罹患リスクの判定方法に関する。

本発明に係るＤＳＰの罹患リスクの判定方法で検出する遺伝子多型はＤＲＤ２遺伝子の−１４１位の塩基シトシンの挿入／欠失（−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ）多型である。

本明細書において、遺伝子の塩基配列における特定の位置に存在する塩基を、該位置と該塩基を表す記号との組み合わせで示すことがある。また、塩基の位置は、該遺伝子の転写開始点の塩基の位置を＋１として、そこから５´末端側の塩基を順に−１、−２、・・・と表示し、３´末端側の塩基を順に＋２、＋３、・・・と表示する。

ＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型とは、該遺伝子の転写開始点の上流に存在し、転写開始点の塩基（＋１）を起点として１４１番目（−１４１）に位置するシトシンの挿入／欠失多型を意味する。ＤＲＤ２遺伝子の−１４１番目に位置するシトシンは、配列表の配列番号１に記載したＤＲＤ２遺伝子の部分ゲノム配列において、第２５２番目の塩基に相当する。

ＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型は、米国国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩと略称される。）のＳＮＰデータベース（ｄｂＳＮＰと略称される。）にｒｓ１７９９７３２として登録された１塩基多型である（非特許文献４）。本明細書では、ＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型とｒｓ１７９９７３２とは互換可能に使用される。

本発明においては、ＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型を検出することによって、ＤＳＰの罹患リスクを判定することができる。また、当該多型を検出することによって、統合失調症患者群から、ＤＳＰ罹患リスクを有する患者群および／またはＤＳＰ患者群を選別することができる。

「ドパミン過感受性精神病（ＤＳＰ）」は、統合失調症のサブタイプであり、抗精神病薬による長期間の治療に対して治療抵抗性を示す。統合失調症は難治な疾患であるが、抗精神病薬に反応しない患者あるいは抗精神病薬による治療の過程で反応しなくなる患者を、特に治療抵抗性統合失調症患者と、臨床的および学術的に定義される。ＤＳＰは治療抵抗性統合失調症患者のうちのおよそ半数を占めるとの報告（非特許文献１）があり、その形成には高力価および／または高用量の抗精神病薬による過剰なドパミン神経伝達の遮断に対する、代償性のドパミンＤ２受容体密度の増加の関与が推定されている（非特許文献３）。本願発明者らが、治療抵抗性患者１５０名について、ＤＳＰエピソードの有無を検証したところ、約７０％がＤＳＰエピソード体験を有していた（非特許文献１３）。また、本願発明者らは治療抵抗性統合失調症患者８０名と非治療抵抗性の統合失調症患者１８５名について、ＤＳＰエピソードの有無を比較検討し、ロジスティック解析を行った結果、ＤＳＰエピソードを体験することが治療抵抗性に有意に関連することが明らかになった（Ｏｄｄｓ比：１４．９、９５％信頼区間：６．６５−３３．３）。すなわち、ＤＳＰエピソードを体験した患者では、該エピソードを体験していない患者と比較して、約１５倍の確率で治療抵抗性を示すようになると予測される。

「罹患リスク」は、ある疾患に罹るおおよその確率、またはある疾患に罹らないおおよその確率を意味する。「罹患リスクが高い」とは、他の被験者と比較して、ある疾患に罹るおおよその確率が高いことを意味し、感受性が高いと言い換えることができる。一方、「罹患リスクが低い」とは、他の被験者と比較して、ある疾患に罹るおおよその確率が低いことを意味し、感受性が低い、あるいは抵抗性が高いと言い換えることができる。

「罹患リスクの判定」とは、ある疾患に罹る可能性の判断を意味し、罹患危険性の予測と言い換えることができる。

本発明において、ＤＳＰエピソードの体験者であって抗精神病薬高用量者群では、ＤＳＰエピソードを体験していない抗精神病薬高用量者群と比較して、ＤＲＤ２遺伝子の−１４１Ｃの欠失アレル保有者の割合が有意に高いことを明らかにした（後述する実施例１を参照。）。したがって、ＤＲＤ２遺伝子の−１４１Ｃの欠失が検出された被験者は、抗精神病薬の高用量投与によりＤＳＰが形成される可能性が高い、すなわち、ＤＳＰの罹患リスクが相対的に高いと判定できる。

本発明に係るＤＳＰの罹患リスクの判定方法は、（ｉ）被験者から、ゲノムＤＮＡを含有する生体試料を採取する工程、（ｉｉ）前記工程（ｉ）において得られた生体試料中のゲノムＤＮＡ上のＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型が存在する位置の塩基の種類を決定する工程、および（ｉｉｉ）前記工程（ｉｉ）において決定された前記位置の塩基の種類に基づいて、当該被験者のＤＳＰの罹患リスクを判定する工程を含む方法であり得る。

また、本発明に係るＤＳＰの罹患リスクの判定方法は、（ｉ）被験者から、ゲノムＤＮＡを含有する生体試料を採取する工程、（ｉｉ）前記工程（ｉ）において得られた生体試料中のゲノムＤＮＡ上のＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型が存在する位置の塩基の種類を決定する工程、および（ｉｉｉ）前記工程（ｉｉ）において決定された前記位置の塩基が欠失しているときに、当該被験者のＤＳＰの罹患リスクが高いと判定する工程を含む方法であり得る。

本発明に係るＤＳＰの罹患リスクの判定方法は、ＤＳＰの罹患予測を補助する方法、あるいは、ＤＳＰの罹患リスクの検査方法として利用することができる。

本発明に係るＤＳＰの罹患リスクの判定方法の対象となる「被験者」は、特に限定されず、例えば精神病を罹患していると診断された患者、より好ましくは統合失調症と診断された患者を挙げることができる。ここで、統合失調症と診断された患者には、統合失調感情障害と診断された患者が含まれ得る。

本明細書において「生物学的試料」は、ゲノム遺伝子解析が可能であれば特に限定されず、例えば被験者から単離された組織、細胞、体液、尿およびそれらの混合物を挙げることができる。ここで体液とは、血液、リンパ液、組織液（組織間液、細胞間液、間質液）などを例示できる。好ましくは、被験者から単離された血液を例示できる。

「生物学的試料」は、被験者から単離された組織、細胞、体液、尿およびそれらの混合物から調製された核酸抽出液であってもよい。本発明において検出する遺伝子多型が、遺伝子のプロモータ領域に存在するものであるため、核酸抽出物はゲノムＤＮＡを含むものであることが好ましい。核酸抽出液の調製は、自体公知の核酸調製法に従い、核酸を抽出することにより実施できる。

被験者から採取した生物学的試料におけるＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型の検出は、自体公知の遺伝子多型の検出方法、好ましくは１塩基多型の検出方法に従って実施することができ、遺伝子多型の検出を実施できる限りにおいていずれの方法も使用することができる。

遺伝子多型の検出は、具体的には、例えば、遺伝子多型を含むＤＮＡ断片を増幅し、次いで該ＤＮＡ断片に存在する遺伝子多型を検出することにより実施できる。

遺伝子多型を含むＤＮＡ断片の増幅は、自体公知の核酸増幅法により実施することができる。核酸増幅法として、ポリメラーゼ連鎖反応（ｐｏｌｉｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ；以下、ＰＣＲと略称する。）、リアル−タイムＰＣＲ（ｒｅａｌ−ｔｉｍｅＰＣＲ）、ＬＣＲ（ｌｉｇａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）、ＬＡＭＰ（ｌｏｏｐ−ｍｅｄｉａｔｅｄｉｓｏｔｈｅｒｍａｌａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）法などを例示できる。

ＤＮＡ断片の増幅に使用されるプライマーは、例えば、検出する遺伝子多型が存在する部位を含む連続する少なくとも１０塩基以上、好ましくは１０〜１００塩基、より好ましくは１０〜５０塩基の配列を増幅することのできるオリゴヌクレオチドを、当該遺伝子の塩基配列情報に基づいて適宜設計し、自体公知の核酸合成法にしたがって合成することにより取得できる。また、市販されているプライマーやプローブから所望のものを選択して利用することもできる。プライマーは、検出する遺伝子多型が存在する部位を含む所定塩基数の配列を増幅するためのプライマーとして機能し得る限り、その配列において１またはそれ以上の置換、欠失、付加を含んでいてもよい。

増幅用プライマーは、１つの遺伝子多型のみを検出する場合には、該１つの遺伝子多型のみが増幅されるように、フォワードプライマーまたはリバースプライマーの一方がその遺伝子多型部位にハイブリダイズするように設計することができる。このようなプライマーは、増幅反応が起こったか否かを測定することにより遺伝子多型を検出することができる。プライマーは必要に応じて蛍光物質や放射性物質などにより標識することができる。

あるいは、遺伝子多型の種類や数に拘らずに、増幅産物中の遺伝子多型を検出することを目的として、遺伝子多型部位を含む所望の領域を挟むように２つのプライマーを設計することも可能である。このようなプライマーを使用して得られる増幅産物のサイズ、塩基配列、高次構造などの差異に基づいて、遺伝子多型を検出することができる。

本発明の判定方法において使用される好ましいプライマーとして、配列表の配列番号２に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドおよび配列表の配列番号３に記載の塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドを例示できる。これらオリゴヌクレオチドを組み合わせてプライマー対として使用することにより、ＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型が存在する位置の塩基を含むＤＮＡ断片を増幅することができる。

遺伝子多型の検出を得られた増幅産物のサイズの差異に基づいて行う場合には、例えばアガロースゲル電気泳動、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、キャピラリー電気泳動などにより、サイズの差異による移動度の違いを利用して、特定の遺伝子多型を検出することができる。また、制限酵素断片長多型（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ；ＲＦＬＰ）を利用して検出することもできる。この場合には、遺伝子多型を含む領域を増幅した後、得られた増幅産物を、所定の遺伝子多型に独特な長さの断片を生じることが知られている制限酵素で切断する。制限酵素により消化された増幅産物は、遺伝子多型の種類に応じてサイズが異なるため、上述と同様に電気泳動法などを利用して検出することができる。

遺伝子多型の検出を塩基配列の差異に基づいて遺行う場合には、得られた増幅産物を直接配列決定すること（ダイレクトシークエンシング法）により、特定の遺伝子多型を検出することができる。配列決定は、例えばジデオキシ法、マキサム−ギルバート法などの自体公知の方法により実施できる。

遺伝子多型の検出を立体構造の差異に基づいて遺伝子多型を検出する場合には、ＰＣＲ−単鎖高次構造多型（ｓｉｎｇｌｅｎｕｃｌｅｏｉｔｄｅｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ；ＳＳＣＰ）分析により、特定の遺伝子多型を検出することができる。ＰＣＲ−ＳＳＣＰ分析は、ＰＣＲにより得られた増幅産物を熱変性によって一本鎖ＤＮＡとした後、これを電気泳動により分離し、配列変化による移動度の変化を解析する方法であり、遺伝子多型の差異によって一本鎖ＤＮＡの高次構造が異なることにより移動度が異なることを利用するものである。

遺伝子多型の検出は、また、１つの遺伝子多型に特異的なプローブとのハイブリダイゼーションにより行うことができる。プローブは、必要に応じて、蛍光物質や放射性物質などの適当な手段により標識してもよい。プローブは、例えば、検出する遺伝子多型が存在する部位を含む連続する少なくとも１０塩基以上、好ましくは１０〜１００塩基の配列、より好ましくは１０〜５０塩基の配列にハイブリダイズすることのできるオリゴヌクレオチドを、当該遺伝子の塩基配列情報に基づいて適宜設計し、自体公知の核酸合成法にしたがって合成することにより取得できる。プローブを設計するとき、検出する遺伝子多型がプローブのほぼ中心部に存在するように設計することが好ましい。プローブは、検出する遺伝子多型部位を含み、試料から調製したＤＮＡなどとハイブリダイズして該遺伝子多型を特異的に検出可能なものである限りどのようなものであってもよく、その配列において１またはそれ以上の置換、欠失、付加を含んでいてもよい。プローブは、ガラスビーズ、ガラス基板、シリコンウエハ、または樹脂などの支持体に固定化して使用することもできる。すなわち、プローブは、検出する遺伝子多型について作製したプローブを支持体上に固定化したマイクロアレイまたはＤＮＡチップの形で用いることもできる。

ハイブリダイゼーション条件は、遺伝子多型の特異的な検出に十分な条件であり、例えば、試料から調製したＤＮＡなどに検出する遺伝子多型が存在するときにはハイブリダイズするが、遺伝子多型が存在しない、または他の遺伝子多型が存在するときにはハイブリダイズしないような条件、例えばストリンジェントな条件である。「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする」とは、例えば、４２℃で１×ＳＳＣ（０．１５ＭＮａＣｌ、０．０１５Ｍクエン酸ナトリウム）、０．１％の硫酸ドデシルナトリウムを含む緩衝液による４２℃での洗浄処理によってもハイブリダイズを維持することを意味する。なお、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに影響を与える要素としては、上記温度条件以外に種々の要素があり、当業者であれば種々の要素を組み合わせて、上記例示したハイブリダイゼーションのストリンジェンシーと同等のストリンジェンシーを実現することが可能である。

また、遺伝子多型の検出は、上記例示した方法以外にも、当業者に公知の方法によって検出することができる。そのような方法として、定量的リアルタイムＰＣＲ検出法（ＴａｑＭａｎ法）インベーダー（Ｉｎｖａｄｅｒ）法、変性勾配ゲル電気泳動法（ＤＧＧＥ：ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）などを例示できる。

本発明において、ＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型を検出し得るプライマーまたはプローブとして機能するオリゴヌクレオチドを含む、ＤＳＰの罹患リスクの判定用試薬キットを提供することができる。例えば、本発明において、配列番号２に記載の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドおよび配列番号３に記載の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドを含む、ＤＳＰの罹患リスクの判定用試薬キットを提供することができる。本発明に係る試薬キットは、上記オリゴヌクレオチド以外に、上記伝子多型の検出を実施するために必要な１種以上の成分を含むものであり得る。そのような成分としては、特に限定されるものではないが、制限酵素、ポリメラーゼ、緩衝液、ｄＮＴＰ、標識用および検出用試薬（蛍光色素など）などを挙げることができる。

本発明に係るＤＳＰの罹患リスクの判定方法および該リスクの判定用試薬キットにより、客観的、簡便、迅速かつ高い精度でＤＳＰの罹患リスクを判定することができる。したがって、本発明に係るＤＳＰの罹患リスクの判定方法を実施することにより、ＤＳＰの罹患リスクがあると判定された被験者に対して、その治療においてＤＳＰを形成しないように、適用する抗精神病薬の種類の選定、治療スケジュールの調整、療養指導の強化などを行うことができる。

すなわち、本発明は、統合失調症患者の治療を継続する上で、下記のような有用性がある。まず、ＤＳＰエピソードの一つである離脱精神病の発生の防止を目的として、患者が自己判断で服薬中断や通院中断などをしないように療養指導を強化すること、持効性注射剤を導入することで自己判断による中断に備えること、並びに薬剤切替えに際して同精神病が発生しないように、該当患者における薬物切替え戦略を確立すること、および薬物切替えを慎重に時間をかけて行うことなど、治療方法における対策を早期に立案できる。また、遅発性ジスキネジアの発生の防止を目的として、遅発性ジスキネジアの誘発因子である他の錐体外路症状の予防および管理を行うこと、および対症療法的な抗パーキンソン薬の使用を控えることなど、長期に渡る治療プランをＤＳＰ形成のリスクを念頭において早期に立案できる。また、ＤＳＰ患者に対する治療アルゴリズム、ガイドラインの作成、さらにはＤＳＰを予防できるような薬剤選択や開発が可能になる。

例えば、本発明に係るＤＳＰの罹患リスクの判定方法により、ＤＳＰの罹患リスクが高いと判定された被験者の治療において、処方される抗精神病薬の用量を低用量、例えばクロルプロマジン換算量（Ｃｈｌｏｒｐｒｏｍａｚｉｎｅｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ（以下、ＣＰＺｅｑと略称する。））にて６００ｍｇ／日未満に調整することができる。

すなわち、本発明において、本発明に係るＤＳＰの罹患リスクの判定方法を実施し、その結果、ＤＳＰの罹患リスクが高いと判定された被験者に抗精神病薬をＣＰＺｅｑにて６００ｍｇ／日を超えない用量で投与することを含む、統合失調症の治療方法を提供することができる。

以下、実施例を用いて本発明を詳細に説明するが、本発明に係る技術的範囲は以下の実施例に限定されるものではない。

本実施例は、千葉大学医学部の倫理審査委員会で承認を受け、また、世界医師会によるヘルシンキ宣言および日本精神神経学会の倫理規約に則し、十分なインフォームド・コンセントを得て、プライバシーに関する守秘義務を遵守し、匿名性の保持に十分な配慮をした上で実施した。

ＤＳＰの形成に関与する遺伝子の探索を行った。具体的には、ＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型（ｒｓ１７９９７３２）およびＡＮＫＫ１遺伝子のＴａｑ１Ａ多型（ｒｓ１８００４９７）について、ＤＳＰ形成との遺伝子相関研究を行った。

＜検討対象者＞
統合失調症（統合失調感情障害を含む）患者４２１名および健常者３４１名を検討の対象として比較検討を行った。統合失調症患者は，アメリカ精神医学会出版の精神障害の診断と統計マニュアル第４版テキスト改訂版（ＤＳＭ−４−ＴＲ；ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａｎｄｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｍａｎｕａｌｏｆｍｅｎｔａｌｄｉｓｏｒｄｅｒｓ−ＩＶ−ｔｅｘｔｒｅｖｉｓｉｏｎ）で診断基準を満たすものを選択した。また、健常者は、過去から採血時までにいかなる１軸診断も満たしていないもの、すなわち精神障害を有していないと診断されたものを選択した。

さらに、統合失調症患者をＤＳＰの有無で分類し、ＤＳＰエピソードを有する患者群（以下、ＤＳＰ群と称する。）とＤＳＰエピソードのない患者群（非ＤＳＰ（以下、Ｎｏｎ−ＤＳＰ）と称する。）の２群間で比較検討を行った。具体的には、ＤＳＰの有無は、統合失調症患者４２１名に対して、診療録などを用いて後方視的に評価した。分類要件に足る情報がある統合失調症患者３６２名を分類して以降の調査の対象として選択し、情報が足りない患者５９名は調査から除外した。ＤＳＰエピソードの評価はシュイナード（Ｃｈｏｕｉｎａｒｄ）の基準（非特許文献２）に基づいて行った。具体的には、ａ）離脱精神病、ｂ）抗精神病薬に対する耐性、およびｃ）遅発性ジスキネジアの存在の３項目のうちいずれかを満たした場合にＤＳＰエピソードを有すると評価した。その結果、統合失調症患者３６２名は、ＤＳＰ群１３１名と非ＤＳＰ群２３１名に分類された。

また、ＤＳＰ群および非ＤＳＰ群の両群をそれぞれ、処方されていた抗精神病薬の用量により低用量者群と高用量者群とに分類し、各群における上記１塩基多型について層別解析を行った。具体的には、ＣＰＺｅｑにて６００ｍｇ／日以上服薬している患者を高用量者群、６００ｍｇ／日未満の標準量を服薬している患者を低用量者群に分類した。高用量者群は１６０名であり、そのうちＤＳＰ群は７７名、非ＤＳＰ群は８３名であった。低用量者群１８１名であり、そのうちＤＳＰ群は４９名、非ＤＳＰ群は１３２名であった。抗精神病薬の用量に関する情報がない患者２１名は、層別解析の対象から除外した。

＜方法＞
遺伝子型の判定（ジェノタイピング（ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ）ともいう。）はアプライドバイオシステムズ３００リアル−タイムＰＣＲシステム（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ７３００Ｒｅａｌ−ＴｉｍｅＰＣＲＳｙｓｔｅｍ；ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用い、製造者提供のタックマン^{（登録商標）} アレリックディスクリミネーションプロトコル（Ｔａｑｍａｎ^（Ｒ）ａｌｌｅｌｉｃｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎｐｒｏｔｏｃｏｌ；ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）に従って、タックマン^{（登録商標）} アッセイにより実施した。

−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ（ｒｓ１７７９９７３２）の検出には下記オーダーメイドプライマー（カスタムタックマン^{（登録商標）} ＳＮＰジェノタイピングアッセイズ（ＣｕｓｔｏｍＴａｑＭａｎ^（Ｒ）ＳＮＰＧｅｎｏｔｙｐｉｎｇＡｓｓａｙｓ）；ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いた。また、Ｔａｑ１Ａ（ｒｓ１８００４９７）の検出には市販のプレデザインプライマーであるタックマン^{（登録商標）} ＳＮＰジェノタイピングアッセイズ（ＴａｑＭａｎ^（Ｒ）ＳＮＰＧｅｎｏｔｙｐｉｎｇＡｓｓａｙｓ；ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いた。

−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ（ｒｓ１７７９９７３２）の検出に使用したプライマーの配列は下記の通りである。
フォワードプライマー配列：ＣＡＡＡＡＣＡＡＧＧＧＡＴＧＧＣＧＧＡＡＴＣ（配列番号２）
リバースプライマー配列：ＣＣＡＣＣＡＡＡＧＧＡＧＣＴＧＴＡＣＣＴ（配列番号３）

統計解析は、次に示すように行った。統計処理に関しては、連続データの２群検定にはスチューデントのｔ検定、カテゴリカルデータの検定にはχ二乗検定（ｃｈｉ−ｓｑｕａｒｅｄｔｅｓｔ）を使用した。解析には解析ソフトＳＰＳＳ１９．０（ＩＢＭ社製）を使用し、有意閾値はα＝０．０５に設定した。

＜結果＞
健常者群と統合失調症（統合失調感情障害を含む）患者群との間で、−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型（ｒｓ１７９９７３２）およびＴａｑ１Ａ多型（ｒｓ１８００４９７）共に、遺伝子型およびアレル頻度に有意差を認めなかった。

ＤＳＰ群と非ＤＳＰ群との間で、−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型（ｒｓ１７９９７３２）およびＴａｑ１Ａ多型（ｒｓ１８００４９７）共に、遺伝子型およびアレル頻度に有意差を認めなかった。ＤＳＰ群１３１名と非ＤＳＰ群２３１名のプロフィール、すなわち性別、年齢、発症年齢、投薬期間、抗精神病薬の用量は表１に示すとおりである。

表１中、ｎ．ｓ．とは、有意差がないことを意味する。

これに対し層別解析では、高用量者群で、−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型（ｒｓ１７９９７３２）においてＤＳＰ群における欠失アレル保有者の割合が非ＤＳＰ群と比較して有意に高かった（χ^２＝５．０７、ｐ＝０．０３２）。結果を表２に示す。一方、低用量者群では有意差は認めなかった。また、Ｔａｑ１Ａ多型（ｒｓ１８００４９７）については高用量者群および低用量者群共に有意差を認めなかった。

このように、ＤＳＰは抗精神病薬によって惹起される二次性の病態であり、抗精神病薬の用量の違いが交絡因子として結果に影響したと考えられる。

上記結果は、ＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型（ｒｓ１７９９７３２）がＤＳＰ形成に関与していること、および高用量の抗精神病薬治療の暴露によりＤＳＰが惹起されることを示唆する。

すなわち、−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型（ｒｓ１７９９７３２）を保有する患者において、抗精神病薬の過剰投与によりＤＳＰが形成される可能性が高いと予測することができる。−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型（ｒｓ１７９９７３２）が検出された患者では、急性期や維持期など症状に応じて抗精神病薬の用量を適切に調整することにより、ＤＳＰの形成の予防を図ることができる。

本発明は、精神病、例えば統合失調症の患者がその治療過程においてＤＳＰを罹患するリスクの判定方法を提供するものであり、臨床検査薬産業、試薬産業、医療機器産業への利用が可能である。

配列番号１：ドパミンＤ２受容体遺伝子の部分ゲノム塩基配列。
配列番号２：ＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型の検出用フォワードプライマー。
配列番号３：ＤＲＤ２遺伝子の−１４１ＣＩｎｓ／Ｄｅｌ多型の検出用リバースプライマー。

Claims

抗精神病薬がクロルプロマジン換算量で６００ｍｇ以上投与された被験者の生物学的試料において、ドパミンＤ２受容体遺伝子プロモーター領域に存在する多型であって、米国国立バイオテクノロジー情報センターのＳＮＰデータベースにｒｓ１７９９７３２として登録された１塩基多型を検出することを含む、ドパミン過感受性精神病の罹患リスクの判定方法。
前記１塩基多型が欠失多型であるときに、ドパミン過感受性精神病の罹患リスクが高いと判定される、請求項１に記載の判定方法。
配列番号２に記載の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドおよび配列番号３に記載の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドを含むプライマーセットを用いて前記塩１塩基多型を検出することを含む、請求項１または２に記載の判定方法。
前記被験者が統合失調症の患者である、請求項１から３のいずれか１項に記載の判定方法。
前記生物学的試料が血液である、請求項１から４のいずれか１項に記載の判定方法。
配列番号２に記載の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドおよび配列番号３に記載の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドを含む、抗精神病薬がクロルプロマジン換算量で６００ｍｇ以上投与された統合失調症患者のドパミン過感受性精神病の罹患リスクの判定用試薬キット。
統合失調症の患者の血液において、ドパミンＤ２受容体遺伝子プロモーター領域に存在する多型であって、米国国立バイオテクノロジー情報センターのＳＮＰデータベースにｒｓ１７９９７３２として登録された１塩基多型を検出することを含む、抗精神病薬がクロルプロマジン換算量で６００ｍｇ以上投与された統合失調症患者群からドパミン過感受性精神病患者群を選別する方法。