JP6700374B2 - 前眼房/後眼房容積の変化、硝子体液の変化、および/または網膜剥離を予防、遅延、または治療するための組成物を製造するためのコルディセプス・シカダ菌糸体活性物質の使用 - Google Patents
前眼房/後眼房容積の変化、硝子体液の変化、および/または網膜剥離を予防、遅延、または治療するための組成物を製造するためのコルディセプス・シカダ菌糸体活性物質の使用 Download PDFInfo
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Description
説明および分布
コルディセプス・シカダは、子嚢菌類門、クラリシピヤレス(Claricipiyales)目、バッカクキン(Clavicipitaceae)科、コルディセプス真菌属である。コルディセプス種は、もっぱら、シカダ・フラマーテ(Cicada flammate)、プラティプレウラ・ケンペリ(Platypleura kaempferi)、クリプトティンパナ・プスツラータ(Cryptotympana pustulata)、プラティロミア・ピエリ(Platylomia pieli)、およびさらに多数の幼虫に寄生する昆虫−真菌複合体である。寄生した後、コルディセプス属は、幼虫の前方端部またはセミの頭部に花芽状の子座を形成する。C.シカダ、C.ソボリフェラ(C.sobolifera)、およびC.シカジコラ(C.cicadicola)が、最も一般的なタイプのコルディセプスであり、それらが生息する宿主に基づいて分類される。この属は、揚子江南部の亜熱帯および熱帯地方、つまり中国の福建、浙江、四川、雲南、および江蘇に主に分布している。野生C.シカダの子実体は、台湾のある山岳地方にも見出される。
ステロイドは、強力な抗炎症および免疫調節効果を発揮することができ、脈管炎などの炎症性疾患、喘息、アレルギー性疾患、慢性湿疹、アナフィラキシー、慢性閉塞性肺疾患、自己免疫疾患(エリテマトーデス、皮膚筋炎、多発性筋炎、糸球体腎炎、炎症性関節炎、および硬皮症など)、脳水腫、ある種の炎症性ニューロパシー、およびがん(リンパ腫など)の治療に非常に有益である。一般的なタイプのステロイドとしては、オキシメトロン、テストステロンウンデカン酸エステル、オキサンドロロン、デヒドロメチルテストステロン、メピチオスタン、およびスタノゾロールなどが挙げられる。多くのタイプのステロイド含有製剤が存在し、注射により、経口的に、経鼻的に、または局所的に投与することができる。
本発明で使用されるステロイドは、1961年に米国で医療用に承認されたコルチコステロイドの一種であるベタメタゾンである。ベタメタゾンは、関節リウマチおよび全身性エリトマトーデスなどのリウマチ性疾患、皮膚炎および乾癬などの皮膚疾患、ならびに喘息および血管浮腫などのアレルギー性疾患を含む広範な疾患の治療に有用である。また、ベタメタゾンは、クローン病、白血病、およびフルドロコルチゾンとの併用時には副腎不全を治療するだけでなく、早産児の肺発育を刺激するために使用することができる。ベタメタゾンは、経口で、筋肉内注射により、または軟膏の形態で局所的に投与することができる。WHO必須医薬品モデルリストに含まれているものの中でも、ベタメタゾン軟膏は、公衆衛生システムにとって不可欠である最も効果的で最も安全な薬物の1つであり、ジェネリック医薬品として使用することができる。
ステロイド誘導性副作用は、用量および使用期間に直接関連し、この薬物が長期間または高用量で使用される場合に生じる可能性がより高い。ステロイドの長期使用は、副腎不全をもたらす場合がある。その一方で、ステロイド過剰投与は、副腎皮質の機能停止および最終的には萎縮をもたらす視床下部−下垂体−副腎皮質(HPA)軸椎異常をもたらし、身体をステロイド依存性にする場合がある。重度副作用としては、以下のものが挙げられる:心血管障害、肝不全、糖尿病、皮膚障害、情緒不安、胃腸障害、感染症のリスク増加、筋無力症、月経周期の変化、男性の性機能低下、および重度アレルギー。
1つの実施形態では、ステップ(b)の培養は、振とうフラスコ培養であり、振とう速度は、10〜250rpmである。
1つの実施形態では、組成物は、食品添加物である。
本発明の上記および他の態様をさらに示すために、添付の図面を参照して、幾つかの例示的な実施形態を記載する。
コルディセプス・シカダ菌糸体の供給源
本発明のコルディセプス・シカダ(C.シカダ)菌糸体は、以下のステップにより得られる:天然台湾C.シカダ株を収集するステップ、その菌糸体を分離するステップ、および二次培養物をプレート培地で保存するステップ。菌株の遺伝子配列は、台湾食品工業発展研究所によりC.シカダと確認されている。しかしながら、本発明のC.シカダ菌糸体活性物質は、この属に由来するものに限定されないことが留意されるべきである。
C.シカダ菌糸体を、15〜35℃(好ましくは、25℃)で5日〜2週間、プレート培地に接種する。その後、菌糸体の菌株を、プレートからこすり落とし、フラスコに接種する。接種した菌糸体を、15〜35℃(好ましくは、25℃)、pH2〜8(好ましくはpH4〜7、より好ましくはpH4.5)、および10〜250rpmの振とう速度で3〜7日間、フラスコ中でインキュベートする。培養物を、さらに発酵槽(培養フラスコに類似したもの)に接種し、10〜150rpmで撹拌するかまたは気泡撹拌し、その際、環境温度は15〜35℃(好ましくは、25℃)に設定され、タンク圧力は0.5〜1.0kg(cm2)に設定され、pH値は2〜8に設定される。一方で、空気(空気、酸素、二酸化炭素、ヘリウム、またはそれらの組合せに置き換えてもよいが、好ましくは空気である)を、0.01〜1.5VVMの通気量でタンクに供給する。得られた培養物を、3〜5日間インキュベートし、C.シカダ菌糸体発酵液を得る。発酵液は、菌糸体および上清を含む。上記培養条件は、例示に過ぎず、ユーザの必要性に応じて調整することができる。
さらに、C.シカダ菌糸体の発酵液を、凍結乾燥粉末または他の剤形を得るための乾燥法に供する。乾燥法は、これらに限定されないが、噴霧乾燥、熱風乾燥、ドラム乾燥、および凍結乾燥などを含む。
乾燥法によりC.シカダ菌糸体の発酵液から製作した凍結乾燥粉末は、蒸留水に溶解することができる。得られた溶液を、90〜121℃で20〜120分間加熱し、冷却後に、減圧濃縮または上記乾燥法の1つを使用して乾燥して、C.シカダ菌糸体の水抽出物を得ることができる。
乾燥法によりC.シカダ菌糸体の発酵液から製作された凍結乾燥粉末は、アルコール溶媒(1〜100%メタノールまたはエタノールなど)に溶解してもよい。得られた溶液を、浸漬抽出、撹拌抽出、かき混ぜ抽出、または超音波抽出を含むが、これらに限定されない様々な方法を使用して抽出し、減圧濃縮または上記乾燥法の1つを使用して20〜120分間乾燥して、C.シカダ菌糸体のアルコール抽出物を得ることができる。
C.シカダ菌糸体の菌株:この例で使用したC.シカダ株は、現在、台湾食品工業発展研究所の生物資源保存及び研究センター(BCRC)に公的に寄託されている(BCRC番号:MU30106)。しかしながら、本発明のC.シカダ菌糸体活性物質は、そのような菌株から調製された物質に限定されない。
フラスコでの培養:C.シカダ菌糸体株を、プレートからこすり落とし、フラスコに接種した。培養物を、以下のレシピを使用して、3日間、25℃およびpH4.5で、120rpmの振とうインキュベーターで増殖させた。
1.水抽出:C.シカダ菌糸体の凍結乾燥粉末を、20倍容積の蒸留水に溶解した。溶液を、100℃で30分間加熱し、冷却した後で凍結乾燥して、C.シカダ菌糸体の水抽出物を得た。
目のステロイド誘導性病理学的変化を有するラット動物モデルの作製
1.1 実験動物および群分け
この例では、7〜8週齢のSD雄ラットを使用した。水および研究餌(LabDiet(登録商標)5001げっ歯動物餌、Purina Mills LLC社、セントルイス、ミズーリ州、米国)を自由に与えた。動物はすべて、22±2℃に管理された温度および12時間の明/暗サイクル下に置かれた。
実験中、ブランク対照群および陰性対照群には、C.シカダ菌糸体活性物質を投与しなかった。一方、水抽出物群およびアルコール抽出物群には、50mg/kg体重のこれら物質を、栄養管により4週間経口投与した。
目の種々の部分の損傷重症度の検査
2.1 染色組織切片の検査
ラットにCO2で麻酔をかけ、血液試料を、腹大動脈からの放血により採取した。その後、右眼球を採取し、デビットソン液(DF)に浸漬した。固定液で48時間固定した後、眼球を10%中性緩衝ホルマリンに入れて、1週間固定した。その後、病理組織学的検査のために、固定組織のパラフィン切片を調製した。固定組織を、パラフィン包埋機(Histoembedder、Leica社、ドイツ)を使用してパラフィン包埋組織塊に加工し、その後、ミクロトーム(Leica社、RM−2145、ドイツ)を使用して、5μm切片に切断した。切片をH&E染色で染色し、自動染色機(Sakuraモデル、DRS−60A)を使用して、アラビアゴムにマウントした。前眼房/後眼房容積および硝子体液の変化、水晶体変性、ならびに網膜剥離レベルを含む、組織病理学的変化を観察するために、マウントした切片を、光学顕微鏡検査(BX51、Olympus社、東京、日本)で検査した。検査の結果は、図1〜4に示されている。図中、A群はブランク対照群であり、B群は陰性対照群であり、C群は水抽出物群であり、D群はアルコール抽出物群である。
誘導性眼疾患の損傷重症度を5つの等級に分類する:等級1=最小限(<1%);等級2=軽度(<1〜25%);等級3=中程度(26〜50%);等級4=中程度/重度(51〜75%);および等級5=重度/高度(76〜100%)。眼球組織の各部分の病理組織学的検査の結果に基づいて、病理学的スコアの表を以下のように作成する。表中、眼球組織は、前眼房/後眼房、硝子体液、角膜、脈絡膜、強膜、網膜、および水晶体を含む。
Claims (9)
- 前眼房/後眼房容積の変化、硝子体液の変化、および網膜剥離の少なくともいずれかを予防、遅延、または治療するための組成物を製造するための、コルディセプス・シカダ(Cordyceps cicadae)菌糸体活性物質の使用であって、前記コルディセプス・シカダ菌糸体活性物質を調製するための方法が、
(a)コルディセプス・シカダ菌糸体を、15〜35℃で5〜14日間、プレート培地で培養するステップ;
(b)ステップ(a)のコルディセプス・シカダ菌糸体をフラスコに接種し、前記菌糸体を15〜35℃で3〜7日間、pH2〜8にて培養するステップ;および
(c)ステップ(b)のコルディセプス・シカダ菌糸体を発酵槽に接種し、前記菌糸体を、15〜35℃で3〜5日間、pH2〜8にて撹拌しながら培養して、前記コルディセプス・シカダ菌糸体活性物質を含むコルディセプス・シカダ菌糸体発酵液を得るステップを含み、
前記組成物は、経口投与または滴剤の形態で投与されるものである使用。 - 前記コルディセプス・シカダ菌糸体活性物質を調製するための方法が、
(d)前記コルディセプス・シカダ菌糸体発酵液を凍結乾燥し、その凍結乾燥産物を粉砕して、前記コルディセプス・シカダ菌糸体活性物質を含むコルディセプス・シカダ菌糸体粉末を得るステップ
をさらに含む、請求項1に記載の使用。 - 前記コルディセプス・シカダ菌糸体活性物質を調製するための方法が、
(e)前記コルディセプス・シカダ菌糸体粉末を溶媒で抽出して、前記コルディセプス・シカダ菌糸体活性物質を含むコルディセプス・シカダ菌糸体液体抽出物を得るステップ
をさらに含む、請求項2に記載の使用。 - 前記コルディセプス・シカダ菌糸体活性物質を調製するための方法が、
(f)前記コルディセプス・シカダ菌糸体液体抽出物を乾燥させて、前記コルディセプス・シカダ菌糸体活性物質を得るステップ
をさらに含む、請求項3に記載の使用。 - ステップ(e)の溶媒が水またはアルコールから選択される、請求項4に記載の使用。
- ステップ(b)の培養が振とうフラスコ培養であり、振とう速度が10〜250rpmである、請求項1に記載の使用。
- ステップ(c)の発酵槽に気体がさらに供給され、供給される気体が、空気、酸素、二酸化炭素、ヘリウム、またはそれらの組合せを含み、前記発酵槽の圧力が0.5〜1.0kg/cm2であり、通気量が0.01〜1.5VVMである、請求項1に記載の使用。
- 前記組成物が、薬学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤、またはアジュバントをさらに含む医薬組成物である、請求項1に記載の使用。
- 前記組成物が食品添加物である、請求項1に記載の使用。
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