JP6699832B2 - ステイグリーンキュウリ植物 - Google Patents
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Description
キュウリ(ククミスサティバス)ハイブリッドKuriosの2000個の種子を0.75%(W/V)のエチルメタンスルホネート(EMS)で16時間処理した。この種子を数回水洗した後、ピートブロックに種子を蒔いた。初生葉が出現した後、頂端分裂組織を除去して、側生分裂組織の発達を誘導した。この手順を繰り返して、側生分裂組織の第1サイドシュートの成長を誘導した。この発達しているシュートの頂部から試料を得て、さらなる分子解析、すなわち、EP1929039にVan Eijk及びVan Tunenによって記載されている、候補遺伝子の変異の検出を行った。
配列番号3を含むEMS処理由来植物を、未処理の種子(野生型/WT)に由来する植物及び参照品種のKuriosとともに温室で生育させた。本ステイグリーン遺伝子を保有する植物から、ヘテロ接合(Het)型及びホモ接合(Hom)型の両方を植えた。
ホモ接合型又はヘテロ接合型のいずれかで本ステイグリーン遺伝子を有する植物の種子を子葉段階まで生育させた。子葉を小植物から取り、ガラスプレートで覆ったプラスチック容器中に置いた。容器の内容物と環境の間で、起こり得る空気交換がなかったと考えられ得る。2週間の貯蔵の後、図6に示す写真が見られた。
植物の下部にあるキュウリ植物の葉は、上部の葉に覆われているときに、古くなり、黄色くなり、そして崩壊し始めることは周知の事柄である。葉の崩壊は、中でも、クロロフィルの不活性によって引き起こされる。クロロフィルは葉に緑色を与えている。
(本ステイグリーン遺伝子を欠く)野生型植物、ヘテロ接合型で本ステイグリーン遺伝子を有する植物及びホモ接合型で本ステイグリーン遺伝子を有する植物を温室に植えた。植物の成熟段階(すなわち10週後)で、下部の葉を摘み取り、並べて配置した。結果を図7に示す。
Claims (9)
- 貯蔵寿命が向上した果実をもたらす変異キュウリ植物(ククミスサティバス)であって、
果実の貯蔵寿命を向上させる変異ステイグリーン遺伝子を含み、前記変異ステイグリーン遺伝子がホモ接合型で存在し、
前記変異ステイグリーン遺伝子が、配列番号2に示すアミノ酸配列、又は配列番号2に示すアミノ酸配列と90%を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含むクロロフィルデカルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードする野生型ステイグリーン遺伝子の制御領域又は非コード領域における1つ又は複数の変異を有し、前記変異ステイグリーン遺伝子の発現が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物におけるステイグリーン遺伝子の発現と比べて低下しているか、又は、
前記変異ステイグリーン遺伝子が、配列番号2に示すアミノ酸配列、又は配列番号2に示すアミノ酸配列と90%を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含むクロロフィルデカルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードする野生型ステイグリーン遺伝子のコード配列で変異しており、前記変異ステイグリーン遺伝子によってコードされたタンパク質の酵素活性が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物におけるステイグリーン遺伝子によってコードされたタンパク質の酵素活性と比べて低下している、変異キュウリ植物(ククミスサティバス)。 - 前記酵素活性の低下が、トランケートされた又は非機能的なタンパク質をもたらす、前記野生型ステイグリーン遺伝子のコード配列における1つ又は複数の変異によって提供される、請求項1に記載の変異キュウリ植物(ククミスサティバス)。
- 前記変異ステイグリーン遺伝子が前記野生型ステイグリーン遺伝子のコード配列で変異しており、これによって、1つ又は複数のアミノ酸置換、フレームシフト又は未成熟終止コドンがもたらされる、請求項1又は請求項2に記載の変異キュウリ植物(ククミスサティバス)。
- 前記生じたアミノ酸置換が配列番号2の位置153に相当するロイシンの置換を含む、請求項3に記載の変異キュウリ植物(ククミスサティバス)。
- 果実の貯蔵寿命を向上させる変異ステイグリーン遺伝子を含む変異キュウリ植物(ククミスサティバス)であって、前記変異ステイグリーン遺伝子が配列番号4に示すアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有するタンパク質をコードし、前記変異ステイグリーン遺伝子がホモ接合型で存在する、変異キュウリ植物(ククミスサティバス)。
- 前記発現の低下が前記野生型ステイグリーン遺伝子の制御領域又は非コード配列における1つ又は複数の変異によって提供される、請求項1に記載の変異キュウリ植物(ククミスサティバス)。
- 果実の貯蔵寿命を向上させる変異ステイグリーン遺伝子を含む変異キュウリ植物(ククミスサティバス)の種子、植物組織、果実又は植物部分であって、前記変異ステイグリーン遺伝子がホモ接合型で存在し、
前記変異ステイグリーン遺伝子が、配列番号2に示すアミノ酸配列、又は配列番号2に示すアミノ酸配列と90%を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含むクロロフィルデカルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードする野生型ステイグリーン遺伝子の制御領域又は非コード領域における1つ又は複数の変異を有し、前記変異ステイグリーン遺伝子の発現が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物におけるステイグリーン遺伝子の発現と比べて低下しているか、又は、
前記変異ステイグリーン遺伝子が、配列番号2に示すアミノ酸配列、又は配列番号2に示すアミノ酸配列と90%を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含むクロロフィルデカルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードする野生型ステイグリーン遺伝子のコード配列で変異しており、前記変異ステイグリーン遺伝子によってコードされたタンパク質の酵素活性が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物におけるステイグリーン遺伝子によってコードされたタンパク質の酵素活性と比べて低下している、種子、植物組織、果実又は植物部分。 - 果実の貯蔵寿命を向上させる変異ステイグリーン遺伝子を含む、請求項1〜6のいずれか一項で定義された変異キュウリ植物から入手可能な、種子、植物組織、果実又は植物部分であって、前記変異ステイグリーン遺伝子がホモ接合型で存在し、
前記変異ステイグリーン遺伝子が、配列番号2に示すアミノ酸配列、又は配列番号2に示すアミノ酸配列と90%を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含むクロロフィルデカルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードする野生型ステイグリーン遺伝子の制御領域又は非コード領域における1つ又は複数の変異を有し、前記変異ステイグリーン遺伝子の発現が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物におけるステイグリーン遺伝子の発現と比べて低下しているか、又は、
前記変異ステイグリーン遺伝子が、配列番号2に示すアミノ酸配列、又は配列番号2に示すアミノ酸配列と90%を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含むクロロフィルデカルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードする野生型ステイグリーン遺伝子のコード配列で変異しており、前記変異ステイグリーン遺伝子によってコードされたタンパク質の酵素活性が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物におけるステイグリーン遺伝子によってコードされたタンパク質の酵素活性と比べて低下している、種子、植物組織、果実又は植物部分。 - 貯蔵寿命が向上した果実をもたらす変異キュウリ植物(ククミスサティバス)を提供する方法であって、変異ステイグリーン遺伝子をキュウリ植物(ククミスサティバス)に導入するステップを含み、前記変異ステイグリーン遺伝子がホモ接合型で存在し、
前記変異ステイグリーン遺伝子が、配列番号2に示すアミノ酸配列、又は配列番号2に示すアミノ酸配列と90%を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含むクロロフィルデカルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードする野生型ステイグリーン遺伝子の制御領域又は非コード領域における1つ又は複数の変異を有し、前記変異ステイグリーン遺伝子の発現が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物におけるステイグリーン遺伝子の発現と比べて低下しているか、又は、
前記変異ステイグリーン遺伝子が、配列番号2に示すアミノ酸配列、又は配列番号2に示すアミノ酸配列と90%を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含むクロロフィルデカルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードする野生型ステイグリーン遺伝子のコード配列で変異しており、前記変異ステイグリーン遺伝子によってコードされたタンパク質の酵素活性が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物におけるステイグリーン遺伝子によってコードされたタンパク質の酵素活性と比べて低下している、方法。
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