JP6666702B2 - 測定方法および測定装置 - Google Patents

Description

本発明は、測定方法および測定装置に関し、特に、ラマン分光法を用いる測定方法および測定装置に関する。

ラマン分光法を用いて生体試料を測定する装置が各種開発されている。このような生体試料を測定する技術の一例として、たとえば、特許文献１（特開２０１３−１２２４３７号公報）には、従来技術として以下のような技術が開示されている。すなわち、ラマン分光測定装置は、対象部分のラマンスペクトルから癌部分のラマンスペクトルを差し引くことにより得た差スペクトルであって、たんぱく質であるフェニルアラニンの残基に帰属される１００３毎センチメートルのピーク強度で規格化した差スペクトルを、対象部分が癌であるか否かに判定に用いることが示されている。

特開２０１３−１２２４３７号公報

たとえば、ラマン分光法を用いて生体試料に含まれる各成分の濃度測定を行う場合、ある成分を標準物質とし、当該標準物質のピーク強度を用いて、その他の成分のラマンスペクトルの強度の規格化を行った後に、濃度の算出が行われる。

しかしながら、生体試料に含まれる成分の濃度は、時間によって変化したり、個体によって異なったりする。また、共存物質から受ける影響も変化する。このため、生体試料に含まれる成分の濃度の測定値は、一定の値とはならない。そのため、標準物質の濃度が時間変化または試料ごともしくは個体ごとに変化した場合、標準物質のピーク強度が変化してしまうので、試料に含まれる各成分の濃度を正しく測定することが困難になることがある。

この発明は、上述の課題を解決するためになされたもので、その目的は、生体試料の成分を精度よく測定することが可能な測定方法および測定装置を提供することである。

（１）上記課題を解決するために、この発明のある局面に係わる測定方法は、たんぱく質を含む生体試料の測定方法であって、前記生体試料のスペクトルをラマン分光法により検出するステップと、検出した前記スペクトルを、前記生体試料に含まれるたんぱく質を前記スペクトルにおいて示すピークに基づいて規格化するステップと、規格化した前記スペクトル、および検量線を用いて前記生体試料における目的成分の暫定濃度を算出するステップと、前記生体試料に含まれるたんぱく質の濃度である第１濃度を、前記ラマン分光法とは異なる測定方法により取得するステップと、取得した前記第１濃度、および前記検量線に関連するたんぱく質の濃度である第２濃度に基づいて、前記暫定濃度を補正するステップとを含む。

（２）好ましくは、前記第２濃度は、前記検量線の基準となるたんぱく質の濃度である。

（３）好ましくは、前記第１濃度および前記第２濃度は、総たんぱくの濃度である。

（４）好ましくは、前記スペクトルを規格化するステップにおいては、ラマンシフトがフェニルアラニンに由来する波数のピークに基づいて、前記スペクトルを規格化する。

（５）好ましくは、前記スペクトルを規格化するステップにおいては、ラマンシフトが略１００２毎センチメートルのピーク、または略１００３毎センチメートルのピークに基づいて前記スペクトルを規格化する。

（６）好ましくは、前記目的成分は、グルコースである。

（７）好ましくは、前記第１濃度は、比色法により取得される。

（８）上記課題を解決するために、この発明のある局面に係わる測定装置は、測定装置であって、たんぱく質を含む生体試料のスペクトルをラマン分光法により検出する検出部と、前記検出部によって検出された前記スペクトルを、前記スペクトルにおいて前記生体試料に含まれるたんぱく質を示すピークに基づいて規格化するスペクトル処理部と、前記スペクトル処理部によって規格化された前記スペクトル、および検量線を用いて前記生体試料における目的成分の暫定濃度を算出する算出部と、前記生体試料に含まれるたんぱく質の濃度である第１濃度を、前記ラマン分光法とは異なる測定方法により取得する取得部と、前記取得部によって取得された前記第１濃度、および前記検量線に関連するたんぱく質の濃度である第２濃度に基づいて、前記暫定濃度を補正する補正部を備える。

（９）好ましくは、前記第２濃度は、前記検量線の基準となるたんぱく質の濃度である。

本発明によれば、生体試料の成分を精度よく測定することができる。

図１は、本発明の実施の形態に係る生体試料測定装置の構成を示す図である。 図２は、本発明の実施の形態に係る端末試料の構成を示す図である。 図３は、本発明の実施の形態に係る生体試料測定装置により測定された複数のラマンスペクトルの一例を示す図である。 図４は、本発明の実施の形態に係る生体試料測定装置により規格化処理が行われた複数のラマンスペクトルの一例を示す図である。 図５は、本発明の実施の形態に係る生体試料測定装置により測定されたグルコース濃度の検証結果の一例を示す図である。 図６は、本発明の実施の形態に係る生体試料の測定方法の手順を定めたフローチャートである。 図７は、本発明の実施の形態に係る生体試料の測定方法の手順を定めたフローチャートである。

以下、本発明の実施の形態について図面を用いて説明する。なお、図中同一または相当部分には同一符号を付してその説明は繰り返さない。また、以下に記載する実施の形態の少なくとも一部を任意に組み合わせてもよい。

［生体試料測定装置の構成］
図１は、本発明の実施の形態に係る生体試料測定装置の構成の一例を示す図である。

図１を参照して、生体試料測定装置１０１は、分光器１と、光学系２と、端末装置３と、検出器（検出部）４と、分注部７と、光源１０とを備える。分光器１は、スリット１ａと、回折格子１ｂとを含む。光学系２は、コリメートレンズ３１と、ハーフミラー３３と、集光レンズ３４と、バンドパスフィルタ３６と、集光レンズ３７とを含む。生体試料測定装置１０１には、たとえば試料６を格納するサンプルセル５が設けられる。

図２は、本発明の実施の形態に係る端末装置の構成の一例を示す図である。

図２を参照して、端末装置３は、制御部２１と、算出部（スペクトル処理部）２２と、補正部２３と、表示部２４と、受付部２５と、検量線作成部２６と、メモリ２７と、ＴＰ濃度取得部２８とを含む。受付部２５は、ユーザによる操作を受け付ける。

［生体試料の作成］
図１および図２を参照して、まず、測定者は、総たんぱく（以下、ＴＰ（Ｔｏｔａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ）とも称する。）濃度の異なる３種類の検体について、グルコース濃度の異なる試料６を準備する。具体的には、測定者は、試料６の一例として、たんぱく質を含む生体試料である検体Ａ，Ｂ，Ｃを準備する。

より詳細には、測定者は、３人の被験者の静脈から血液を採取し、採取した血液を１日放置することにより血液中のグルコースすなわちブドウ糖の濃度をゼロミリグラム／デシリットル（ｍｇ／ｄＬ）まで低下させる。

測定者は、グルコース濃度の低下を確認すると、３人分の血液３０ミリリットルそれぞれに対して、３０００回転毎分の遠心分離操作を１０分間行った後、上澄みの血漿を採取し、採取した血漿を混合する。

測定者は、混合した血漿を検体Ａ、検体Ｂおよび検体Ｃの３つに分け、これらの３つの検体Ａ〜Ｃのうちの２つの検体に牛血清アルブミン（Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ，ＢＳＡ）を添加することにより、ＴＰ濃度が異なる３種類の試料を作成した。検体Ａ、ＢおよびＣのＴＰ濃度は、それぞれ６．９ｇ／ｄＬ、７．３ｇ／ｄＬおよび７．５ｇ／ｄＬである。

そして、測定者は、検体Ａ、ＢおよびＣをそれぞれ１．２ミリリットルずつ５つの検体Ａ１〜Ａ５，Ｂ１〜Ｂ５，Ｃ１〜Ｃ５に分けることにより１５個の試料６を準備する。測定者は、たとえば、検体Ａ１〜Ａ５，Ｂ１〜Ｂ５，Ｃ１〜Ｃ５にグルコースをそれぞれ添加することにより、各検体につきグルコースの濃度の異なる５つの試料を作成した。

測定者は、検量線の作成に用いる生体試料（以下、検量線生体試料とも称する。）の目的成分の濃度を測定する。具体的には、測定者は、検体Ｂ１〜Ｂ５のグルコース濃度を測定する。より詳細には、測定者は、従来法、たとえばＧＯＤ（グルコースオキシダーゼ）固定化酵素膜および過酸化水素電極によるアンペロメロメトリー法を用いて検体Ｂ１〜Ｂ５のグルコース濃度を測定する。以下、従来法を用いて測定されたグルコース濃度を、グルコース濃度Ｃｒｅｆとも称する。

検体Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４およびＢ５の具体的なグルコース濃度Ｃｒｅｆは、それぞれ１３４．４ｍｇ／ｄＬ、２２１．４ｍｇ／ｄＬ、４０２．８ｍｇ／ｄＬ、６８４．０ｍｇ／ｄＬおよび８３１．１ｍｇ／ｄＬである。

［実験の概要］
本願発明者は、生体物質測定装置１０１を用いて検体Ａ、ＢおよびＣについて実験を行い、検体Ｂの実験結果に基づいて検量線ＣＣを作成した。本願発明者は、作成した検量線ＣＣを用いて検体Ａ，Ｃのグルコース濃度の暫定濃度を算出した。そして、本願発明者は、検体Ａ、ＢおよびＣのＴＰ濃度に基づいて、検体Ａ，Ｃのグルコース濃度の暫定濃度を補正した。

［検量線の作成］
測定者は、目的成分の濃度が未知の生体試料における当該濃度を測定するための検量線を作成するための操作を行う。この例では、グルコースが目的成分である。以下、検量線の作成処理について説明する。なお、測定者は、生体物質測定装置１０１におけるメモリ２７において検量線、および後述する第２濃度があらかじめ保存されている場合、検量線の作成処理を行わなくてもよい。

測定者は、検体Ｂ１〜Ｂ５のうちのたとえば検体Ｂ１を試料６としてサンプルセル５に格納する。

図２を参照して、測定者は、たとえば、検量線を作成するための試料であってグルコース濃度Ｃｒｅｆが既知の試料６の測定、および当該試料６のグルコース濃度Ｃｒｅｆの入力を行うための操作を端末装置３における受付部２５に対して行う。

受付部２５は、測定者による操作を受けると、受けた操作内容を制御部２１へ通知する。

制御部２１は、受付部２５から操作内容の通知を受けると、受けた操作内容に従って、ラマンスペクトル測定命令を光源１０および検出器４へ出力する。

図１を参照して、光源１０は、たとえば、自ら光を発する光源であり、具体的には単色光を出力するレーザーである。また、光源１０は、たとえば、出力する光（以下、出力光とも称する。）の波長を変更することが可能である。なお、光源１０は、ＬＥＤ（Ｌｉｇｈｔ‐Ｅｍｉｔｔｉｎｇ Ｄｉｏｄｅ）であってもよい。

光源１０は、端末装置３における制御部２１からラマンスペクトル測定命令を受けると、受けたラマンスペクトル測定命令に従って、たとえば波長が７８５ｎｍのレーザー光を光学系２におけるコリメートレンズ３１へ照射する。

光学系２は、光源１０からの出力光を試料６に照射し、試料６からのラマン散乱光を分光器１へ導く。

より詳細には、光学系２におけるコリメートレンズ３１は、光源１０から受ける出力光を略平行の光に変換する。

コリメートレンズ３１からの出力光は、ハーフミラー３３によって反射されて集光レンズ３４へ入射する。

集光レンズ３４は、ハーフミラー３３によって反射された出力光を試料６に集光する。

出力光の集光位置において、試料６におけるたんぱく質、脂質およびグルコース等は、当該出力光に基づく散乱光を生成する。この散乱光には、たとえばラマン散乱によるラマン散乱光が含まれる。

集光レンズ３４は、出力光の集光位置から広がる散乱光を略平行の光に変換する。

バンドパスフィルタ３６は、ハーフミラー３３を透過した散乱光の波長成分のうち、上記出力光のスペクトルにおけるピークの波長成分を減衰させる。

集光レンズ３７は、バンドパスフィルタ３６を透過した散乱光を分光器１におけるスリット１ａに集光する。

分光器１におけるスリット１ａを通過した散乱光は、回折格子１ｂによって回折されて検出器４に照射される。

検出器４は、たとえば、たんぱく質を含む検量線生体試料、具体的には検体Ｂのスペクトルをラマン分光法により検出する。

より詳細には、検出器４は、ラマンスペクトル測定命令を端末装置３における制御部２１から受けると、回折格子１ｂにより回折された散乱光の波長ごとの強度を所定の露光時間たとえば６０秒間蓄積することによりラマンスペクトルを測定する。この際、検出器４は、ラマンスペクトルの測定を所定回数行う。

この例では、検出器４は、ラマンスペクトルを３回測定したが、ラマンスペクトルの測定は２回以下でもよいし、４回以上でもよい。

検出器４は、測定した各ラマンスペクトルを示す情報ＲＳを端末装置３における制御部２１へ出力する。

図２を参照して、制御部２１は、たとえば、検出器４から情報ＲＳを受けると、吸収スペクトル測定命令を分注部７、光源１０、バンドパスフィルタ３６および検出器４へ出力する。

図１を参照して、バンドパスフィルタ３６は、制御部２１から吸収スペクトル測定命令を受けると、受けた吸収スペクトル測定命令に従って、試料６からの反射光の光路から退避した位置へ移動する。バンドパスフィルタ３６は、生体試料測定装置１０１において吸収スペクトルの測定が完了すると、退避する前の位置へ戻る。

分注部７は、制御部２１から吸収スペクトル測定命令を受けると、受けた吸収スペクトル測定命令に従って、ビウレット試薬を試料６に分注する。

光源１０は、制御部２１から吸収スペクトル測定命令を受けると、受けた吸収スペクトル測定命令に従って、たとえば波長が５４６ｎｍのレーザー光を光学系２におけるコリメートレンズ３１へ照射した後、波長が７００ｎｍのレーザー光を光学系２におけるコリメートレンズ３１へ照射する。

光学系２は、光源１０からの出力光を試料６に照射し、試料６からの反射光を分光器１へ導く。

検出器４は、制御部２１から吸収スペクトル測定命令を受けると、受けた吸収スペクトル測定命令に従って、たとえば５４６ｎｍにおける反射強度Ｓ５４６、および７００ｎｍにおける反射強度Ｓ７００を１または複数回測定し、測定結果を示す情報ＡＳを端末装置３における制御部２１へ出力する。

図２を参照して、制御部２１は、検出器４から情報ＡＳを受けると、受けた情報ＡＳをＴＰ濃度取得部２８へ出力する。

ＴＰ濃度取得部２８は、検量線ＣＣの基準となるたんぱく質濃度、たとえば検量線ＣＣの作成に用いた生体試料に含まれるたんぱく質の濃度である第２濃度を、ラマン分光法とは異なる測定方法により取得する。

具体的には、ＴＰ濃度取得部２８は、第２濃度として、たとえば検体Ｂ１のＴＰ濃度を比色法により取得する。

より詳細には、ＴＰ濃度取得部２８は、試料６が格納されていない空のサンプルセル５が生体試料測定装置１０１に設けられている場合における、５４６ｎｍにおける参照反射強度ＲＳ５４６、および７００ｎｍにおける参照反射強度ＲＳ７００を保持している。

ＴＰ濃度取得部２８は、情報ＡＳの示す反射強度Ｓ５４６、および参照反射強度ＲＳ５４６に基づいて５４６ｎｍにおける吸光度Ａ５４６を算出する。また、ＴＰ濃度取得部２８は、情報ＡＳの示す反射強度Ｓ７００、および参照反射強度ＲＳ７００に基づいて７００ｎｍにおける吸光度Ａ７００を算出する。

ＴＰ濃度取得部２８は、ビウレット法に従って、算出した吸光度Ａ５４６およびＡ７００の差分を算出し、算出した差分に基づいて検体Ｂ１のＴＰ濃度を算出する。ＴＰ濃度取得部２８は、算出したＴＰ濃度を制御部２１へ通知する。

制御部２１は、ＴＰ濃度取得部２８からＴＰ濃度の通知を受けると、情報ＲＳとグルコース濃度ＣｒｅｆおよびＴＰ濃度とを対応づけてメモリ２７に保存し、検体Ｂ１の測定が完了したことを表示部２４に表示させる制御を行う。

測定者は、表示部２４における表示を視認して検体Ｂ１の測定が完了したことを認識し、検体Ｂ２〜Ｂ４についても、検体Ｂ１と同様に生体試料測定装置１０１に測定させる。これにより、メモリ２７には、検体Ｂ１〜Ｂ５についての情報ＲＳ、ならびに情報ＲＳに対応するグルコース濃度ＣｒｅｆおよびＴＰ濃度が保存される。

測定者は、たとえば、検体Ｂ１〜Ｂ５の測定が完了すると、検量線を作成するための操作を受付部２５に対して行う。

受付部２５は、測定者による操作を受けると、受けた操作内容を制御部２１へ通知する。

制御部２１は、受付部２５から操作内容の通知を受けると、受けた操作内容に従って、検量線作成命令を検量線作成部２６へ出力する。

検量線作成部２６は、制御部２１から検量線作成命令を受けると、受けた検量線作成命令に従って、検量線ＣＣを作成する。

より詳細には、検量線作成部２６は、たとえば、メモリ２７から検体Ｂ１〜Ｂ５の情報ＲＳ、ならびに情報ＲＳに対応するグルコース濃度ＣｒｅｆおよびＴＰ濃度を取得する。

図３は、本発明の実施の形態に係る生体試料測定装置により測定された複数のラマンスペクトルの一例を示す図である。なお、図３において、横軸はラマンシフトの波数を示し、縦軸は強度を示す。図３では、検体Ａ１〜Ａ５，Ｂ１〜Ｂ５，Ｃ１〜Ｃ５のラマンスペクトルが示されている。

図４は、本発明の実施の形態に係る生体試料測定装置により規格化処理が行われた複数のラマンスペクトルの一例を示す図である。なお、図４において、横軸はラマンシフトの波数を示し、縦軸は規格化強度を示す。

図４では、フェニルアラニン由来のピークである略１００２毎センチメートルのピーク強度を基準に用いて強度が規格化された、検体Ａ１〜Ａ５，Ｂ１〜Ｂ５，Ｃ１〜Ｃ５のラマンスペクトル（以下、規格化ラマンスペクトルとも称する。）が示されている。

図３および図４を参照して、検量線作成部２６は、検出器４によって検出されたスペクトルを、当該スペクトルにおいて検量線生体試料に含まれるたんぱく質を示すピークに基づいて規格化する。

具体的には、検量線作成部２６は、たとえば、図３に示す各ラマンスペクトルの、図４に示す各規格化ラマンスペクトルへの変換と同様に、検体Ｂ１〜Ｂ５の情報ＲＳの示す各ラマンスペクトルの強度を、略１００２毎センチメートルのピーク強度を基準に用いて規格化する、より詳細には、当該ピーク強度で除することにより、規格化する。

検量線作成部２６は、たとえば、検体Ｂ１〜Ｂ５の規格化ラマンスペクトルおよび当該規格化ラマンスペクトルに対応するグルコース濃度Ｃｒｅｆを用いてＰＬＳ（Ｐａｒｔｉａｌ Ｌｅａｓｔ Ｓｑｕａｒｅｓ）解析を行うことにより検量線ＣＣを作成する。このようにして作成された検量線ＣＣにラマンスペクトルを入力することにより、暫定濃度である暫定グルコース濃度Ｃｐｒｅを出力値として得ることができる。

検量線作成部２６は、たとえば、検量線ＣＣに関連するたんぱく質の濃度である第２濃度の一例として、検量線ＣＣの作成に用いた各ＴＰ濃度の平均を算出し、算出した濃度（以下、検量線ＴＰ濃度とも称する。）、および作成した検量線ＣＣをメモリ２７に保存する。

［目的成分の濃度が未知の生体試料の測定］
測定者は、目的成分の濃度が未知の生体試料における当該濃度を測定するための操作を行う。以下、目的成分の濃度の測定処理について説明する。また、検量線ＣＣおよび検量線ＴＰ濃度がメモリ２７に保存されている状況を想定する。

再び図１および図２を参照して、測定者は、たとえば、検量線を用いて目的成分の濃度を測定する対象となる生体試料（以下、対象生体試料とも称する。）をサンプルセル５に格納する。具体的には、測定者は、検量線ＣＣを用いて暫定グルコース濃度Ｃｐｒｅを測定する対象となる検体Ａ１〜Ａ５，Ｃ１〜Ｃ５のうちのたとえば検体Ａ１を試料６としてサンプルセル５に格納する。

図２を参照して、測定者は、グルコース濃度Ｃｒｅｆが未知の試料６の測定を行うための操作を受付部２５に対して行う。

受付部２５は、測定者による操作を受けると、受けた操作内容を制御部２１へ通知する。

制御部２１は、受付部２５から操作内容の通知を受けると、受けた操作内容に従ってラマンスペクトル測定命令を光源１０および検出器４へ出力する。

図１を参照して、検出器４は、たんぱく質を含む対象生体試料のスペクトルをラマン分光法により検出する。具体的には、検出器４は、たとえば検体Ａ１のスペクトルをラマン分光法により検出する。

具体的には、検出器４は、ラマンスペクトル測定命令を端末装置３における制御部２１から受けると、回折格子１ｂにより回折された散乱光の波長ごとの強度を所定の露光時間蓄積することにより、たとえばラマンスペクトルを３回測定する。

検出器４は、測定した各ラマンスペクトルを示す情報ＲＳを端末装置３における制御部２１へ出力する。

図２を参照して、制御部２１は、ラマンスペクトル測定命令の応答として、検出器４から情報ＲＳを受けると、吸収スペクトル測定命令を分注部７、光源１０、バンドパスフィルタ３６および検出器４へ出力する。

制御部２１は、吸収スペクトル測定命令の応答として、検出器４から情報ＡＳを受けると、受けた情報ＡＳをＴＰ濃度取得部２８へ出力する。

ＴＰ濃度取得部２８は、対象生体試料に含まれるたんぱく質の濃度である第１濃度を、ラマン分光法とは異なる測定方法により取得する。

具体的には、ＴＰ濃度取得部２８は、たとえば、第１濃度として、検体Ａ１のＴＰ濃度を比色法により取得する。そして、ＴＰ濃度取得部２８は、取得したＴＰ濃度を制御部２１へ通知する。

制御部２１は、情報ＡＳの応答として、ＴＰ濃度取得部２８からＴＰ濃度の通知を受けると、情報ＲＳを算出部２２へ出力するとともに、通知されたＴＰ濃度を補正部２３へ通知する。

算出部２２は、スペクトル処理部として、検出器４によって検出されたスペクトルを、当該スペクトルにおいて対象生体試料に含まれるたんぱく質を示すピークに基づいて規格化する。

具体的には、算出部２２は、検体Ａ１の情報ＲＳの示すラマンスペクトルの強度を、たとえばラマンシフトが略１００２毎センチメートルのピーク強度を基準に用いて規格化する、より詳細には、当該ピーク強度で除することにより、規格化する。

また、算出部２２は、規格化したスペクトル、および検量線ＣＣを用いて対象生体試料における目的成分の暫定濃度を算出する。

具体的には、算出部２２は、たとえば、メモリ２７から検量線ＣＣを取得し、取得した検量線ＣＣに、規格化ラマンスペクトルの目的成分の強度を入力する。算出部２２は、たとえば、検量線ＣＣの出力値として得られる暫定グルコース濃度Ｃｐｒｅを算出し、算出した暫定グルコース濃度Ｃｐｒｅを補正部２３へ通知する。

補正部２３は、ＴＰ濃度取得部２８によって取得された第１濃度、および検量線ＣＣに関連するたんぱく質の濃度である第２濃度に基づいて、暫定濃度を補正する。ここで、第２濃度は、検量線の基準となるたんぱく質濃度、たとえば検量線の作成に用いた生体試料に含まれるたんぱく質の濃度である。

具体的には、補正部２３は、ＴＰ濃度取得部２８によって取得された対象生体試料のＴＰ濃度、および検量線ＴＰ濃度を用いて、検体Ａ１の暫定グルコース濃度Ｃｐｒｅを補正する。

より詳細には、補正部２３は、算出部２２から検体Ａ１の暫定グルコース濃度Ｃｐｒｅの通知を受けると、制御部２１から通知されたＴＰ濃度を、メモリ２７から取得した検量線ＴＰ濃度で除した値である補正係数を算出する。そして、補正部２３は、算出した補正係数を検体Ａ１の暫定グルコース濃度Ｃｐｒｅに乗じることにより当該暫定グルコース濃度Ｃｐｒｅを補正する。補正部２３は、補正後の暫定グルコース濃度Ｃｐｒｅである補正グルコース濃度Ｃｃａｌを表示部２４へ通知する。

表示部２４は、補正グルコース濃度Ｃｃａｌを補正部２３から通知されると、補正グルコース濃度Ｃｃａｌを表示する。

測定者は、表示部２４における表示を視認して検体Ａ１の補正グルコース濃度Ｃｃａｌを確認する。測定者は、検体Ａ２〜Ａ５，Ｃ１〜Ｃ５の補正グルコース濃度Ｃｃａｌについても、検体Ａ１と同様に生体試料測定装置１０１に測定させる。

［測定精度の検証］
図５は、本発明の実施の形態に係る生体試料測定装置により測定されたグルコース濃度の検証結果の一例を示す図である。なお、図５において、横軸は、従来法によって測定したグルコース濃度Ｃｒｅｆ（ｍｇ／ｄＬ）を示し、縦軸は、ラマン分光法によって測定した暫定グルコース濃度Ｃｐｒｅまたは補正グルコース濃度Ｃｃａｌ（ｍｇ／ｄＬ）を示す。また、直線Ｓｔは、Ｃｐｒｅ＝ＣｒｅｆおよびＣｃａｌ＝Ｃｒｅｆを示す。図５において、補正グルコース濃度Ｃｃａｌの値が、直線Ｓｔに近い位置にあれば、ラマン分光法によって精度の高い測定が行えたことが示される。

図５を参照して、測定者は、ラマン分光法により算出した検体Ａ，Ｃの暫定グルコース濃度Ｃｐｒｅおよび補正グルコース濃度Ｃｃａｌと、検体Ａ，Ｃのグルコース濃度Ｃｒｅｆとを比較することにより、グルコース濃度の測定精度の検証を行った。この結果、測定者は、対象生体試料のＴＰ濃度、および検量線ＴＰ濃度を用いて暫定濃度の補正を行うことで、ラマン分光法によるグルコース濃度の測定精度を向上させることが可能であることを発見した。以下、上記検証の詳細について説明する。

たとえば、測定者は、ラマン分光法により算出したグルコース濃度の測定精度の検証を行うために、従来法を用いて検体Ａ１〜Ａ５，Ｃ１〜Ｃ５のグルコース濃度Ｃｒｅｆを測定した。

検体Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４およびＡ５の具体的なグルコース濃度Ｃｒｅｆは、それぞれ１２８．４ｍｇ／ｄＬ、２５８．２ｍｇ／ｄＬ、４３８．３ｍｇ／ｄＬ、６５１．６ｍｇ／ｄＬおよび７９１．６ｍｇ／ｄＬである。

検体Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４およびＣ５の具体的なグルコース濃度Ｃｒｅｆは、それぞれ１１９．０ｍｇ／ｄＬ、２０７．０ｍｇ／ｄＬ、４１１．３ｍｇ／ｄＬ、５８３．０ｍｇ／ｄＬおよび８１８．７ｍｇ／ｄＬである。

図５には、ＴＰ濃度を用いた補正を行わない場合における、検体Ａ１〜Ａ５，Ｃ１〜Ｃ５のＣｒｅｆおよびＣｐｒｅの関係が○印により示される。

また、図５には、ＴＰ濃度を用いた補正を行った場合における、検体Ａ１〜Ａ５，Ｃ１〜Ｃ５のＣｃａｌおよびＣｐｒｅの関係が×印により示される。

より詳細には、○印により示される検体ＡおよびＣのＣｐｒｅに対して、補正係数として（６．９／７．３）および（７．５／７．３）をそれぞれ乗じた場合における、検体Ａ１〜Ａ５，Ｃ１〜Ｃ５のＣｃａｌおよびＣｐｒｅの関係が×印により示される。

図５において、×印は、○印より直線Ｓｔに近づいていることから、ラマンスペクトルから得られる暫定グルコース濃度Ｃｐｒｅの値を、従来法を用いて測定されたグルコース濃度Ｃｒｅｆに、補正によって近づけることができ、測定精度が向上したことが分かる。

上記実施形態では、総たんぱくが、一種の内部標準物質として用いられている。また、ラマン分光法以外の測定法で測定した検体の内部標準物質の濃度と、検量線の基準となっている内部標準物質濃度とを用いて目的成分の濃度を補正することにより、測定精度が向上する。

また、上述の通り、ラマン分光法で測定する目的成分と、ラマン分光法以外の測定法で測定する成分とは、異なるものである。

なお、本発明の実施の形態に係る生体試料測定装置は、ラマン分光法とは異なる測定として、サンプルセル５に格納された液体の検体にビウレット試薬を分注し、当該検体の総たんぱくの吸収スペクトルを測定する構成であるとしたが、これに限定するものではない。

生体試料測定装置１０１は、ラマン分光法とは異なる測定として、試薬を含浸させた試薬パッドに、検体を点着させ、当該試薬パッドの呈色反応を測定する構成であってもよい。

より詳細には、図１に示す生体試料測定装置１０１において、サンプルセル５の代わりに、上記試薬パッドが設けられた基材を載置するステージを設置し、上記試薬パッドに光源１０の光を照射し、ＴＰ濃度取得部２８において上記試薬パッドの呈色反応が測定されてもよい。

また、本発明の実施の形態に係る生体試料測定装置では、検量線の基準となるたんぱく質濃度、たとえば検量線の作成に用いた生体試料に含まれるたんぱく質の濃度を補正に用いたが、これに限定するものではない。検量線との直接的または間接的な対応関係が分かっているものであれば、検量線と関連性のあるたんぱく質濃度を補正に用いてもよい。

［方法］
生体試料測定装置１０１は、コンピュータを備え、当該コンピュータにおけるＣＰＵ等の演算処理部は、以下に示すフローチャートの各ステップの一部または全部を含むプログラムを図示しないメモリから読み出して実行する。この装置のプログラムは、外部からインストールすることができる。この装置のプログラムは、記録媒体に格納された状態で流通する。

図６は、本発明の実施の形態に係る生体試料の測定方法の手順を定めたフローチャートである。図６では、検量線ＣＣの作成方法の手順が示されている。

図６を参照して、検体Ｂ１〜Ｂ５が測定者により準備されている状況を想定する。

まず、測定者は、検体Ｂ１〜Ｂ５のグルコース濃度Ｃｒｅｆを測定する（ステップＳ１０２）。なお、グルコース濃度Ｃｒｅｆは、たとえば、ＧＯＤ（グルコースオキシダーゼ）固定化酵素膜および過酸化水素電極によるアンペロメロメトリー法等を用いて測定する。

次に、測定者は、検体Ｂ１〜Ｂ５のうちの未測定の検体を試料６としてサンプルセル５に格納する（ステップＳ１０４）。

次に、測定者は、検量線を作成するための試料であってグルコース濃度Ｃｒｅｆが既知の試料６の測定、および当該試料６のグルコース濃度Ｃｒｅｆの入力を行うための操作を生体試料測定装置１０１に対して行う（ステップＳ１０６）。

次に、生体試料測定装置１０１は、測定者の操作を受けて、ラマン分光法により試料６のラマンスペクトルを測定する（ステップＳ１０８）。

次に、生体試料測定装置１０１は、ビウレット試薬を試料６に分注する（ステップＳ１１０）。

次に、生体試料測定装置１０１は、検量線生体試料に含まれるたんぱく質の濃度である第２濃度を、ラマン分光法とは異なる測定方法により取得する。具体的には、生体試料測定装置１０１は、ビウレット法により、試料６の吸収スペクトルを測定し、測定結果に基づいて試料６のＴＰ濃度を算出する。そして、生体試料測定装置１０１は、試料６の測定が完了したことを表示部２４に表示する（ステップＳ１１２）。

次に、測定者は、表示部２４の表示を視認して試料６の測定が完了したことを認識し、検体Ｂ１〜Ｂ５のうち未測定の検体がある場合（ステップＳ１１４でＹＥＳ）、検体Ｂ１〜Ｂ５のうちの未測定の検体を試料６としてサンプルセル５に格納する（ステップＳ１０４）。

一方、測定者は、検体Ｂ１〜Ｂ５のうち未測定の検体がない場合（ステップＳ１１４でＮＯ）、検量線を作成するための操作を生体試料測定装置１０１に対して行う（ステップＳ１１６）。

次に、生体試料測定装置１０１は、測定者の操作を受けて、検出したスペクトルを、当該スペクトルにおいて検量線生体試料に含まれるたんぱく質を示すピークに基づいて規格化する。具体的には、生体物質測定装置１０１は、測定した各ラマンスペクトルの強度を、ラマンシフトが略１００２毎センチメートルのピーク強度を基準に用いて規格化する（ステップＳ１１８）。

次に、生体試料測定装置１０１は、検体Ｂ１〜Ｂ５の規格化ラマンスペクトルおよび対応のグルコース濃度Ｃｒｅｆを用いてＰＬＳ解析を行うことにより検量線ＣＣを作成する（ステップＳ１２０）。

次に、生体試料測定装置１０１は、検量線ＣＣの基準となるたんぱく質濃度、たとえば検量線ＣＣの作成に用いた検体Ｂ１〜Ｂ５のＴＰ濃度の平均を検量線ＴＰ濃度として算出する（ステップＳ１２２）。

なお、上記ステップＳ１１８，Ｓ１２０とステップＳ１２２との順番は、上記に限らず、順番を入れ替えてもよい。

また、当該試料６のグルコース濃度Ｃｒｅｆの入力を行うための操作は、上記ステップＳ１０６で行わずに、ラマン分光法とは異なる測定たとえば比色法による測定の終了後、または検量線の作成時において適宜行ってもよい。

また、生体試料測定装置１０１におけるメモリ２７において、検量線ＣＣおよび第２濃度等があらかじめ保存されている場合には、検量線ＣＣの作成作業は不要である。

図７は、本発明の実施の形態に係る生体試料の測定方法の手順を定めたフローチャートである。

図７を参照して、検体Ａ１〜Ａ５，Ｃ１〜Ｃ５が測定者により準備されている状況を想定する。また、生体物質測定装置１０１のメモリ２７において、検量線ＣＣおよび検量線ＴＰ濃度が保存されている状況を想定する。また、メモリ２７には、検量線ＣＣに関連するたんぱく質の濃度である検量線ＴＰ濃度が、第２濃度として保存されている。

まず、測定者は、検体Ａ１〜Ａ５，Ｃ１〜Ｃ５のうちのいずれか１つを試料６としてサンプルセル５に格納する（ステップＳ２０２）。

次に、測定者は、グルコース濃度Ｃｒｅｆが未知の試料６の測定を行うための操作を生体試料測定装置１０１に対して行う（ステップＳ２０４）。

次に、生体試料測定装置１０１は、対象生体試料のスペクトルをラマン分光法により検出する。具体的には、生体試料測定装置１０１は、測定者の操作を受けて、ラマン分光法により試料６のラマンスペクトルを測定する（ステップＳ２０６）。

次に、生体試料測定装置１０１は、検出したスペクトルを、対象生体試料に含まれるたんぱく質を当該スペクトルにおいて示すピークに基づいて規格化する。より詳細には、生体試料測定装置１０１は、ラマンシフトがフェニルアラニンに由来する波数のピークに基づいて、ラマンスペクトルを規格化する。具体的には、生体試料測定装置１０１は、ラマンシフトが略１００２毎センチメートルのピークに基づいてラマンスペクトルを規格化する（ステップＳ２０８）。総たんぱくを示すフェニルアラニン残基に帰属するラマンシフトは、略１００２〜１００５毎センチメートルであることが多い。なお、ラマンシフトがフェニルアラニン残基に由来する波数であれば、規格化に用いるピークの波数は、上記波数範囲以外の波数であってもよい。

次に、生体試料測定装置１０１は、規格化したスペクトル、および検量線を用いて対象生体試料における目的成分の暫定濃度を算出する。具体的には、生体試料測定装置１０１は、規格化ラマンスペクトルを検量線ＣＣに入力することにより暫定グルコース濃度Ｃｐｒｅを算出する（ステップＳ２１０）。

次に、生体試料測定装置１０１は、対象生体試料に含まれるたんぱく質の濃度である第１濃度を、ラマン分光法とは異なる測定方法により取得する。具体的には、生体試料測定装置１０１は、比色法の１種であるビウレット法による測定を行うため、ビウレット試薬を試料６に分注する（ステップＳ２１２）。

次に、生体試料測定装置１０１は、比色法により、試料６の吸収スペクトルを測定し、測定結果に基づいて試料６のＴＰ濃度を第１濃度として算出する（ステップＳ２１４）。

次に、生体試料測定装置１０１は、取得した第１濃度、および第２濃度に基づいて、暫定濃度を補正する。具体的には、生体試料測定装置１０１は、算出したＴＰ濃度と検量線ＴＰ濃度との比である補正係数を用いて、算出した暫定グルコース濃度Ｃｐｒｅを補正する（ステップＳ２１６）。

次に、生体試料測定装置１０１は、補正後の暫定グルコース濃度Ｃｐｒｅである補正グルコース濃度Ｃｃａｌを表示部２４に表示する（ステップＳ２１８）。

測定者は、検体Ａ１〜Ａ５，Ｃ１〜Ｃ５のうち、他の検体の測定を行う場合、当該他の検体を試料６としてサンプルセル５に格納する。

上記実施形態では、総たんぱくが、一種の内部標準物質として用いられている。また、ラマン分光法以外の測定法で測定した検体の内部標準物質の濃度と、検量線の基準となっている内部標準物質濃度とを用いて目的成分の濃度を補正することにより、測定精度が向上する。

なお、上記ステップＳ２０８，Ｓ２１０とステップＳ２１２，Ｓ２１４との順番は、上記に限らず、順番を入れ替え、ラマンスペクトルの規格化および暫定グルコース濃度Ｃｐｒｅの算出を行う前に、第１濃度の測定を行ってもよい。

また、生体試料測定装置１０１は、上記ステップＳ２０６〜Ｓ２１０において、ラマンスペクトルの測定、ビウレット試薬の分注および吸収スペクトルの測定を時間的に連続して行う構成であるとしたが、これに限定するものではない。生体試料測定装置１０１は、ラマンスペクトルの測定を行った後、しばらく間を空けてからビウレット試薬の分注および吸収スペクトルの測定を行う構成であってもよい。しかしながら、検体におけるたんぱく質は、時間の経過とともに変性するため、ラマンスペクトルの測定、ビウレット試薬の分注および吸収スペクトルの測定を時間的に連続して行う構成が好ましい。

また、本発明に実施の形態に係る測定方法では、ラマンシフトが略１００２毎センチメートルのピークに基づいてラマンスペクトルを規格化するとしたが、これに限定するものではない。測定方法は、ラマンシフトが略１００３毎センチメートルのピークに基づいてラマンスペクトルを規格化してもよい。

また、本発明の実施の形態に係る測定方法では、総たんぱくに帰属する、略１００２毎センチメートルのピークに基づいてラマンスペクトルを規格化するとしたが、これに限定するものではない。測定方法は、略１４６０毎センチメートルのピーク、または略１６６０毎センチメートルのピークに基づいてラマンスペクトルを規格化してもよい。しかしながら、これらのピークでは、たんぱく以外の物質由来のピーク成分たとえば脂質由来のピーク成分が含まれること、およびピークのバンド幅が大きいことから、ラマンシフトが略１００２毎センチメートルもしくは略１００３毎センチメートルのピーク、またはラマンシフトがフェニルアラニンに由来する波数のピークに基づいて、ラマンスペクトルを規格化することが好ましい。

また、本発明の実施の形態に係る測定方法では、第１濃度および第２濃度は、総たんぱく濃度であるとしたが、これに限定するものではない。この測定方法では、第１濃度および第２濃度は、総たんぱく以外の物質たとえばアルブミンの濃度であってもよい。

また、本発明の実施の形態に係る測定方法では、第１濃度は、比色法により取得されるとしたが、これに限定するものではない。この測定方法において、第１濃度は、比色法以外の方法、たとえば屈折系の原理を用いる方法により取得されてもよい。この場合、ビウレット試薬を用いることなく第１濃度を取得することができる。

また、本発明の実施の形態に係る測定方法では、検体として血漿を用いるとしたが、これに限定するものではない。検体は、血液、尿等の体外排出物、細胞または微生物といったたんぱく質を含む生体試料であればよい。

また、本発明の実施の形態に係る測定方法では、目的成分の濃度として補正グルコース濃度Ｃｃａｌを算出するとしたが、これに限定するものではない。ラマン分光法では、様々な成分の測定が可能であるので、この測定方法では、グルコースに限らず、たとえば、ＴＰ、コレステロール、アルブミン、アミラーゼもしくはトータルビリルビン等、または微生物における各成分の濃度を算出してもよい。

また、本発明の実施の形態に係る測定方法では、目的成分が１種類であるとしたが、これに限定するものではない。ラマン分光法では、様々な成分の測定を一度に行うことが可能であるので、この測定方法では、目的成分が複数種類であってもよい。

また、本発明の実施の形態に係る測定方法では、対象生体試料が複数であるとしたが、これに限定するものではない。この測定方法では、対象生体試料が１つであってもよい。

また、本発明の実施の形態に係る測定方法では、フェニルアラニン等に由来するピークの波数を略Ａ毎センチメートルと記載した。ここで、Ａは数値である。具体的には、当該ピークの波数は、好ましくはＡ±Ａ×０．０１であり、また、より好ましくはＡ±Ａ×０．００５である。

また、本発明の実施の形態に係る生体物質測定装置は、検量線作成部２６を備える構成であるとしたが、これに限定するものではない。生体物質測定装置１０１は、メモリ２７において検量線および当該検量線に関連するたんぱく質の濃度である第２濃度が保存されている場合、検量線作成部２６を備えない構成であってもよい。

ところで、たとえば、ラマン分光法を用いて生体試料に含まれる各成分の濃度測定を行う場合、ある成分を標準物質とし、当該標準物質のピーク強度を用いて、その他の成分のラマンスペクトルの強度の規格化を行った後に、濃度の算出が行われる。

しかしながら、生体試料に含まれる成分の濃度は、時間によって変化したり、個体によって異なったりする。また、共存物質から受ける影響も変化する、このため、生体試料に含まれる成分の濃度の測定値は、一定の値とはならない。そのため、標準物質の濃度が時間変化または試料ごともしくは個体ごとに変化した場合、標準物質のピーク強度が変化してしまうので、試料に含まれる各成分の濃度を正しく測定することが困難になることがある。

また、たとえば比色法を用いて各種成分の濃度測定を行う場合、ある成分の濃度の測定を行うたびに、当該成分に適合する試薬を個別に準備する必要がある。

これに対して、本発明の実施の形態に係る測定方法では、まず、たんぱく質を含む生体試料の測定方法であって、生体試料のスペクトルをラマン分光法により検出する。次に、検出したスペクトルを、生体試料に含まれるたんぱく質を当該スペクトルにおいて示すピークに基づいて規格化する。次に、規格化したスペクトル、および検量線を用いて生体試料における目的成分の暫定濃度を算出する。次に、生体試料に含まれるたんぱく質の濃度である第１濃度を、ラマン分光法とは異なる測定方法により取得する。次に、取得した第１濃度、および検量線に関連するたんぱく質の濃度である第２濃度に基づいて、暫定濃度を補正する。

このような方法により、ラマン分光法および検量線を用いて算出した暫定濃度が、規格化に用いるピークの示す物質の濃度変化によって正しい値から外れてしまう場合においても、暫定濃度は、第１濃度および第２濃度により補正されるので、より正しい結果を得ることができる。したがって、生体試料の成分を精度よく測定することができる。また、ラマン分光法を用いることによりスペクトルにおいて各種成分に由来するピークを一度に測定することができるので、各種成分についての検量線を作成しておけば、目的成分に適合する試薬を個別に準備することなく、第１濃度を測定するための１つの試薬を準備しておき、ラマン分光法とは異なる測定方法により第１濃度を測定するだけで、各種成分の濃度測定を精度よく行うことができる。これにより、利便性を高めることができる。

また、本発明の実施の形態に係る測定方法では、第２濃度は、検量線の基準となるたんぱく質の濃度である。

このような第２濃度に基づいて暫定濃度を補正する方法により、暫定濃度をより正しく補正することができる。

また、本発明の実施の形態に係る測定方法では、第１濃度および第２濃度は、総たんぱくの濃度である。

このような方法により、規格化に用いるピークの示すたんぱく質の濃度と、第１濃度および第２濃度とを関連づけることができるので、規格化したスペクトル、および検量線の作成に用いた規格化スペクトルにおいて、各ピーク強度を適切に比較することができる。これにより、暫定濃度の補正をより適切に行うことができる。

また、本発明の実施の形態に係る測定方法では、スペクトルを規格化するステップにおいては、ラマンシフトがフェニルアラニンに由来する波数のピーク、たとえばラマンシフトが略１００２毎センチメートルのピーク、または略１００３毎センチメートルのピークに基づいて、スペクトルを規格化する。

このように、バンド幅が小さく、かつたんぱく質以外の物質由来のピーク成分をほとんど含まないフェニルアラニン由来のピークに基づいてスペクトルを規格化する方法により、スペクトルの強度の規格化を適切に行うことができ、また、規格化に用いるピークの示すたんぱく質の濃度と第１濃度との関連が低下することを防ぐことができるので、暫定濃度を適切に補正することができる。

また、本発明の実施の形態に係る測定方法では、目的成分は、グルコースである。

このような方法により、規格化に用いるピークの示すたんぱく質の濃度がばらつく場合においても、ラマン分光法を用いて血糖値をより正しく測定することが可能な測定方法を提供することができる。

また、本発明の実施の形態に係る測定方法では、第１濃度は、比色法により取得される。

このように、技術的に確立された測定方法である比色法を用いる方法により、第１濃度を容易かつ精度よく取得することができる。

また、本発明の実施の形態に係る測定装置では、検出器４は、たんぱく質を含む生体試料のスペクトルをラマン分光法により検出する。算出部２２は、検出器４によって検出されたスペクトルを、当該スペクトルにおいて生体試料に含まれるたんぱく質を示すピークに基づいて規格化し、規格化したスペクトル、および検量線を用いて生体試料における目的成分の暫定濃度を算出する。ＴＰ濃度取得部２８は、生体試料に含まれるたんぱく質の濃度である第１濃度を、ラマン分光法とは異なる測定方法により取得する。そして、２３は、ＴＰ濃度取得部２８によって取得された第１濃度、および検量線に関連するたんぱく質の濃度である第２濃度に基づいて、暫定濃度を補正する。

このような構成により、ラマン分光法および検量線を用いて算出した暫定濃度が、規格化に用いるピークの示す物質の濃度変化によって正しい値から外れてしまう場合においても、暫定濃度は、第１濃度および第２濃度により補正されるので、より正しい結果を得ることができる。したがって、生体試料の成分を精度よく測定することができる。また、ラマン分光法を用いることによりスペクトルにおいて各種成分に由来するピークを一度に測定することができるので、各種成分についての検量線を作成しておけば、目的成分に適合する試薬を個別に準備することなく、第１濃度を測定するための試薬を準備しておき、ラマン分光法とは異なる測定方法により第１濃度を測定するだけで、各種成分の濃度測定を精度よく行うことができる。これにより、利便性を高めることができる。

また、本発明の実施の形態に係る測定装置では、第２濃度は、検量線の基準となるたんぱく質の濃度である。

このような第２濃度に基づいて暫定濃度を補正する構成により、暫定濃度をより正しく補正することができる。

上記実施の形態は、すべての点で例示であって制限的なものではないと考えられるべきである。本発明の範囲は、上記説明ではなく特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲と均等の意味および範囲内でのすべての変更が含まれることが意図される。

１ 分光器
１ａ スリット
１ｂ 回折格子
２ 光学系
３ 端末装置
４ 検出器（検出部）
５ サンプルセル
６ 試料
７ 分注部
１０ 光源
２１ 制御部
２２ 算出部（スペクトル処理部）
２３ 補正部
２４ 表示部
２５ 受付部
２６ 検量線作成部
２７ メモリ
２８ ＴＰ濃度取得部
３１ コリメートレンズ
３３ ハーフミラー
３４ 集光レンズ
３６ バンドパスフィルタ
３７ 集光レンズ
１０１ 生体試料測定装置

Claims (8)

1. たんぱく質を含む生体試料の測定方法であって、
   前記生体試料のスペクトルをラマン分光法により検出するステップと、
   検出した前記スペクトルを、前記生体試料に含まれる総たんぱく質に由来するスペクトルのピークに基づいて規格化するステップと、
   規格化した前記スペクトル、および検量線を用いて前記生体試料における目的成分の暫定濃度を算出するステップと、
   前記生体試料に含まれる総たんぱく質の濃度である第１濃度を、前記ラマン分光法とは異なる測定方法により取得するステップと、
   取得した前記第１濃度、および前記検量線の作成に用いた生体試料に含まれる総たんぱく質の濃度である第２濃度に基づいて、前記暫定濃度を補正するステップとを含む、測定方法。
2. 前記スペクトルを規格化するステップにおいては、ラマンシフトがフェニルアラニンに由来する波数のピークに基づいて、前記スペクトルを規格化する、請求項１に記載の測定方法。
3. 前記スペクトルを規格化するステップにおいては、ラマンシフトが略１００２毎センチメートルのピーク、または略１００３毎センチメートルのピークに基づいて前記スペクトルを規格化する、請求項１または請求項２に記載の測定方法。
4. 前記目的成分は、グルコースである、請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の測定方法。
5. 前記第１濃度は、比色法により取得される、請求項１から請求項４のいずれか１項に記載の測定方法。
6. 前記第１濃度はビウレット法により取得される、請求項１から請求項５のいずれか1項に記載の測定方法。
7. 測定装置であって、
   たんぱく質を含む生体試料のスペクトルをラマン分光法により検出する検出部と、
   前記検出部によって検出された前記スペクトルを、前記スペクトルにおいて前記生体試料に含まれる総たんぱく質に由来するピークに基づいて規格化するスペクトル処理部と、
   前記スペクトル処理部によって規格化された前記スペクトル、および検量線を用いて前記生体試料における目的成分の暫定濃度を算出する算出部と、
   前記生体試料に含まれる総たんぱく質の濃度である第１濃度を、前記ラマン分光法とは異なる測定方法により取得する取得部と、
   前記取得部によって取得された前記総たんぱく質の第１濃度、および前記検量線の作成に用いた生体試料に含まれる総たんぱく質の濃度である第２濃度に基づいて、前記暫定濃度を補正する補正部を備える、測定装置。
8. 前記第１濃度は、ビウレット法により取得される、請求項７に記載の測定装置。

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