JP6637034B2 - 放射標識カンナビノイド受容体２リガンド - Google Patents
放射標識カンナビノイド受容体２リガンド Download PDFInfo
- Publication number
- JP6637034B2 JP6637034B2 JP2017514901A JP2017514901A JP6637034B2 JP 6637034 B2 JP6637034 B2 JP 6637034B2 JP 2017514901 A JP2017514901 A JP 2017514901A JP 2017514901 A JP2017514901 A JP 2017514901A JP 6637034 B2 JP6637034 B2 JP 6637034B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- receptor
- compound
- composition
- sample
- compound according
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
- C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
- C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D231/14—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D231/38—Nitrogen atoms
- C07D231/40—Acylated on said nitrogen atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/041—Heterocyclic compounds
- A61K51/044—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins
- A61K51/0453—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
- A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B59/00—Introduction of isotopes of elements into organic compounds ; Labelled organic compounds per se
- C07B59/002—Heterocyclic compounds
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/566—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/60—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances involving radioactive labelled substances
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
- G01N33/948—Sedatives, e.g. cannabinoids, barbiturates
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/72—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for hormones
- G01N2333/726—G protein coupled receptor, e.g. TSHR-thyrotropin-receptor, LH/hCG receptor, FSH
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
- G01N2500/20—Screening for compounds of potential therapeutic value cell-free systems
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Anesthesiology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Neurology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
Description
本発明は、放射標識カンナビノイド受容体２リガンドに関する。
本発明は、特に、式（Ｉ）の化合物（式中、Ｒ１はメチル基であり、該メチル基は少なくとも一つの放射性核種を含む）に関する。
カンナビノイド受容体は、Ｇタンパク質共役受容体スーパーファミリーに属する細胞膜受容体のクラスの１つである。現在のところ、カンナビノイド受容体１（ＣＢ１）及びカンナビノイド受容体２（ＣＢ２）と呼ばれる２つの既知のサブタイプがある。ＣＢ１受容体は広範に発現がある。それは、主に中枢神経（すなわち、扁桃体、小脳、海馬）系で発現しており、末梢においては、その量はより少ない。ＣＮＲ２遺伝子によりコードされるＣＢ２は、大部分がマクロファージ、Ｂ及びＴ細胞等の免疫系の細胞（Ashton, J. C. et al. Curr Neuropharmacol 2007, 5(2), 73-80; Miller, A. M. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 299-308; Centonze, D., et al. Curr Pharm Des 2008, 14(23), 2370-42）及び消化管系（Wright, K. L. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 263-70）の末梢で発現している。ＣＢ２受容体は、また、脳内に存在し、主に小膠細胞に見出され、神経細胞には見出されない（Cabral, G. A. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2): 240-51）。
ここ十年間、ＣＢ２受容体アゴニストへの関心が着実に高まっているが（現在、３０〜４０件の特許出願／年）、その理由は、いくつかの開発初期化合物が、慢性疼痛（Beltramo, M. Mini Rev Med Chem 2009, 9(1), 11-25）、アテローム性動脈硬化症（Mach, F. et al. J Neuroendocrinol 2008, 20 Suppl 1, 53-7）、骨量の制御（Bab, I. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 182-8）、神経炎症（Cabral, G. A. et al. J Leukoc Biol 2005, 78(6), 1192-7）、虚血／再灌流傷害（Pacher, P. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 252-62）、全身性線維症（Akhmetshina, A. et al. Arthritis Rheum 2009, 60(4), 1129-36; Garcia-Gonzalez, E. et al. Rheumatology (Oxford) 2009, 48(9), 1050-6）、肝線維症（Julien, B. et al. Gastroenterology 2005, 128(3), 742-55; Munoz-Luque, J. et al. J Pharmacol Exp Ther 2008, 324(2), 475-83）を含む、多数のヒトの疾患の前臨床モデルにおいて有益な効果を有することが示されたという事実によるものである。
虚血／再灌流（Ｉ／Ｒ）傷害は、卒中、心筋梗塞、心肺バイパス法及びその他の血管手術、並びに臓器移植等の状態において生じる、組織損傷の主要な原因であって、様々な病因の循環性ショックの過程を悪化させる末期臓器障害の主要機序でもある。これらの状態は全て、結果として不十分な組織の酸素化を生じさせる、正常な血液供給の途絶を特徴とする。再酸素化、例えば、再灌流は、正常な組織の酸素化を回復するための最終的な処置である。しかし、血液からの酸素及び栄養の欠乏は、血液循環の回復が更なる組織損傷を生じる状態をもたらす。再灌流傷害の損傷は、損傷した組織の炎症反応に一部起因する。新たに回復した血液によってその領域に運ばれた白血球は、組織損傷に応答して、多くの炎症性因子、例えば、インターロイキン並びにフリーラジカルを放出する。回復した血流は、細胞内に酸素を再導入し、これが、細胞タンパク質、ＤＮＡ及び細胞膜に損傷を与える。
遠隔虚血プレコンディショニング（ＲＩＰＣ）は、虚血及び再灌流により生じる傷害に対して身体の内因性の防御能力を利用する戦略を表す。それは、１つの臓器又は組織の一過性の非致死的虚血及び再灌流によって、遠隔臓器又は組織において、その後の「致死的」な虚血再灌流傷害のエピソードに対する耐性が付与されるという興味深い現象である。１つの臓器又は組織の一過性の虚血及び再灌流によって防御が付与されるその実際の機序は現在のところ分かっていないが、いくつかの仮説が提唱されている。
体液性仮説は、遠隔臓器又は組織において生成された内因性物質（例えば、アデノシン、ブラジキニン、オピオイド、ＣＧＲＰ、内在性カンナビノイド、アンギオテンシンＩ、又はまだ同定されていないその他の体液性因子）が血流に侵入して、標的組織においてその各受容体を活性化し、それによって、虚血プレコンディショニングに関わる心臓保護の様々な細胞内経路を回復すると提唱している。
最近のデータは、内在性カンナビノイド及びその受容体、特に、ＣＢ２がプレコンディショニングに関与し、炎症反応のダウンレギュレーションによる再灌流傷害の防止に寄与し得ることを示している（Pacher, P. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 252-62）。具体的には、ＣＢ２ツールアゴニストを使用する最近の研究から、心臓（Defer, N. et al. Faseb J 2009, 23(7), 2120-30）、脳（Zhang, M. et al. J Cereb Blood Flow Metab 2007, 27(7), 1387-96）、肝臓（Batkai, S. et al. Faseb J 2007, 21(8), 1788-800）及び腎臓（Feizi, A. et al. Exp Toxicol Pathol 2008, 60(4-5), 405-10）におけるＩ／Ｒ傷害を低下させるこの概念の有効性が実証された。
更に、ここ数年にわたり、ＣＢ２が亜慢性及び慢性の状況においても関心事となり得ることを示す文献が増えている。ＣＢ１及びＣＢ２の特定のアップレギュレーションが、線維症に関連する慢性疾患の動物モデル（Garcia-Gonzalez, E. et al. Rheumatology (Oxford) 2009, 48(9), 1050-6; Yang, Y. Y. et al. Liver Int 2009, 29(5), 678-85）において、線維症の進行の原因となる細胞である筋線維芽細胞におけるＣＢ２の適切な発現と関係していることが示された。
選択的ＣＢ２アゴニストによるＣＢ２受容体の活性化は、実際に、びまん性全身性硬化症において抗線維化効果をもたらすことが示され（Garcia-Gonzalez, E. et al. Rheumatology (Oxford) 2009, 48(9), 1050-6）、ＣＢ２受容体は、実験的な皮膚線維症（Akhmetshina, A. et al. Arthritis Rheum 2009, 60(4), 1129-36）及び肝臓の病態生理学（慢性肝疾患と関連する線維形成を含む）（Lotersztajn, S. et al. Gastroenterol Clin Biol 2007, 31(3), 255-8; Mallat, A. et al. Expert Opin Ther Targets 2007, 11(3), 403-9; Lotersztajn, S. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 286-9）において重要な標的として浮上した。
明白に組織中のＣＢ２を検出する必要性は、この受容体への関心の高まりに従って生じた。患者又はサンプル中のＣＢ２発現及び受容体占有率の適切なツールを用いての評価は、発現している標的細胞の検証を可能にし、ヒト研究における任意のＣＢ２リガンドの用量設定を可能にし、又は診断目的のために使用することができよう。
組織中のＣＢ２受容体タンパク質の検出のための有効なツールが現在まで不足しており、これは、ＣＢ２受容体の低発現レベルの結果である。ＣＢ２の検出ツールとしての特定抗体を欠く別の原因は、ＣＢ２をイムノゲンとして使用することの明らかな困難さが理由となり得るであろう。
この問題へのアプローチをするために、我々はＣＢ２に選択的に結合する放射標識リガンドを用いる可能性を検討した。我々の知見では、［３Ｈ］−ＣＰ５５９４０(Priller, J. et al Molecular Pharmacology 1995, 48, 288-292)と呼ばれる放射標識ＣＢ２リガンドが唯一存在する。しかしながら、［３Ｈ］−ＣＰ５５９４０は、ＣＢ１及びＣＢ２受容体に対する非選択的アゴニストであり、いくつかの試験を行った哺乳類においては二つの受容体を区別しない。それゆえ、ＣＢ１もまた発現し得る組織中のＣＢ２を検出するために、競合アッセイ用に汎用同位体である３Ｈで放射標識された選択的ＣＢ２リガンドが、オートラジオグラフィー用に１４Ｃで放射標識された選択的ＣＢ２リガンドが、又はＰＥＴトレーシング技法用に１１Ｃで放射標識された選択的ＣＢ２リガンドが必要とされている。
最初の戦略は、ＣＢ１に対するよりもＣＢ２に対する選択性が高く、かつ天然に存在するカンナビノイドに対し構造的相同性を持つリガンドを同定することであった。ＣＢ２アゴニストであるＨＵ−９１０（ＷＯ２０１１／０６１７４４号に記載）は、その高い選択性及び植物に見出されるカンナビノイドタイプの化合物に構造的に関連したその性質から選択された。ＨＵ−９１０は選択的にかつ競合的に［３Ｈ］−ＣＰ５５９４０で標識されたＣＢ２受容体に結合するが、［３Ｈ］−ＨＵ−９１０は高い非特異的結合を示し、それによって、全体の結合部位のごく一部を表すと期待されるＣＢ２受容体への特異的結合部位をマスキングしてしまう。この理論に拘束されることを望まないが、我々はこの現象が［３Ｈ］−ＨＵ−９１０の高い親油性に起因し、これが膜への高い隔壁を生じ、それによって非標識ＨＵ−９１０の過剰によっても競合除去（compete off）できない高い非特異的結合を引き起こしているとみなした。
それゆえ、効力及び選択性に加えて高い親水性を持つＣＢ２リガンドを発見すること、加えて、化学合成の最終工程で放射標識を導入することが望まれていた。
上に定義される式（Ｉ）の化合物は、驚くべきことに望ましい性質を持つと同定され、かつ、その非特異的結合は大きく減少した。
式（Ｉ）の化合物は、ＣＢ２受容体を組換えにより発現する細胞から調製された膜に特異的にかつ選択的に結合することが証明された。更に、式（Ｉ）の化合物は、ＣＢ１及びＣＢ２受容体両方を高く発現する臓器である脾臓組織中においてＣＢ２受容体を特異的に標識することが分かった。更に、ＣＢ２受容体欠損マウスから単離された脾臓組織において、式（Ｉ）の化合物による結合は非存在であった。この特定の場合には、全結合シグナルは、非標識（Ｒ１＝ＣＨ３）の式（Ｉ）の化合物の過剰によっても減少しなかった。
よって、式（Ｉ）の化合物は、例えば、組織オートラジオグラフィー及びＰＥＴイメージングにおいて、例えば、受容体発現及び受容体占有率の評価、ヒト研究における任意のＣＢ２リガンドの用量設定、又は診断目的のために使用することができる。
本明細書において、用語「放射性核種」は、不安定な核を持ち、放射性崩壊を受ける原子の同位体を規定する。本発明の特定の放射性核種は、［３Ｈ］、［１１Ｃ］及び［１４Ｃ］である。
用語「結合定数」は、リガンドの受容体への結合反応に関係する平衡定数を指す。
用語「選択的結合」は、非常に限定されたタイプの受容体へのリガンドの結合を特徴とする。
したがって、本発明は、以下に関する：
式（Ｉ）の化合物（式中、少なくとも一つの放射性核種は、［３Ｈ］、［１１Ｃ］及び［１４Ｃ］から独立して選択される）；
式（Ｉ）の化合物（式中、Ｒ１は、Ｃ［３Ｈ］３、［１１Ｃ］Ｈ３又は［１４Ｃ］Ｈ３である）；
（ＮＥ）−Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）−１−（トリトリチオ（tritio）メチル）ピラゾール−３−イリデン］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド；
（ＮＥ）−Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）−１−（［１４Ｃ］メチル）ピラゾール−３−イリデン］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド；及び
（ＮＥ）−Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）−１−（［１１Ｃ］メチル）ピラゾール−３−イリデン］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド；
から選択される式（Ｉ）の化合物；
患者又はサンプルのＣＢ２受容体の位置を特定するための式（Ｉ）の化合物の使用；
患者又はサンプルのＣＢ２受容体をイメージングするための式（Ｉ）の化合物の使用；
ＣＢ２受容体に別の化合物が結合するかどうかを決定するための式（Ｉ）の化合物の使用；
前記別の化合物とＣＢ２受容体との結合定数を測定することを更に含む、ＣＢ２受容体に別の化合物が結合するかどうかを決定するための式（Ｉ）の化合物の使用；
ＣＢ１受容体の存在下における、上に定義される使用；
ある疾患がＣＢ２受容体の発現における変化を特徴とするかどうかを決定するための式（Ｉ）の化合物の使用；
疼痛、アテローム性動脈硬化症、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、緑内障、糖尿病、炎症、炎症性腸疾患、虚血−再灌流傷害、急性肝不全、肝線維症、肺線維症、腎線維症、全身性線維症、急性移植拒絶反応、慢性移植腎症、糖尿病性腎症、糸球体腎症、心筋症、心不全、心筋虚血、心筋梗塞、全身性硬化症、熱傷、火傷、肥厚性瘢痕、ケロイド、歯肉炎による発熱、肝硬変若しくは肝腫瘍、骨量の制御、神経変性、卒中、一過性脳虚血発作又はブドウ膜炎である疾患が、ＣＢ２受容体の発現における変化を特徴とするかどうかを決定するための式（Ｉ）の化合物の使用；
疾患の患者又は組織の診断における使用のための式（Ｉ）の化合物；
疾患が、健康な被験者又は組織中でのＣＢ２受容体の発現と比較して、前記患者又は組織中でのＣＢ２受容体の発現における変化を特徴とする、上に定義される疾患の患者又は組織の診断における使用のための式（Ｉ）の化合物；
診断が患者又は組織中でのＣＢ２受容体の発現と健康な被験者又は組織中でのＣＢ２受容体の発現とを比較する工程を含む、上に定義される使用のための化合物；
疾患に罹患している患者がＣＢ２リガンドの投与を伴う処置に応答する見込みがあるかどうかを予測するための式（Ｉ）の化合物の使用；
患者のＣＢ２受容体の発現と健康な被験者又は組織中でのＣＢ２受容体の発現とを比較することを含む、疾患に罹患している患者がＣＢ２リガンドの投与を伴う処置に応答する見込みがあるかどうかを予測するための式（Ｉ）の化合物の使用；並びに
それを必要とする患者に投与する必要があるＣＢ２リガンドの用量を決定するための式（Ｉ）の化合物の使用。
式（Ｉ）の化合物（式中、少なくとも一つの放射性核種は、［３Ｈ］、［１１Ｃ］及び［１４Ｃ］から独立して選択される）；
式（Ｉ）の化合物（式中、Ｒ１は、Ｃ［３Ｈ］３、［１１Ｃ］Ｈ３又は［１４Ｃ］Ｈ３である）；
（ＮＥ）−Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）−１−（トリトリチオ（tritio）メチル）ピラゾール−３−イリデン］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド；
（ＮＥ）−Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）−１−（［１４Ｃ］メチル）ピラゾール−３−イリデン］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド；及び
（ＮＥ）−Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）−１−（［１１Ｃ］メチル）ピラゾール−３−イリデン］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド；
から選択される式（Ｉ）の化合物；
患者又はサンプルのＣＢ２受容体の位置を特定するための式（Ｉ）の化合物の使用；
患者又はサンプルのＣＢ２受容体をイメージングするための式（Ｉ）の化合物の使用；
ＣＢ２受容体に別の化合物が結合するかどうかを決定するための式（Ｉ）の化合物の使用；
前記別の化合物とＣＢ２受容体との結合定数を測定することを更に含む、ＣＢ２受容体に別の化合物が結合するかどうかを決定するための式（Ｉ）の化合物の使用；
ＣＢ１受容体の存在下における、上に定義される使用；
ある疾患がＣＢ２受容体の発現における変化を特徴とするかどうかを決定するための式（Ｉ）の化合物の使用；
疼痛、アテローム性動脈硬化症、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、緑内障、糖尿病、炎症、炎症性腸疾患、虚血−再灌流傷害、急性肝不全、肝線維症、肺線維症、腎線維症、全身性線維症、急性移植拒絶反応、慢性移植腎症、糖尿病性腎症、糸球体腎症、心筋症、心不全、心筋虚血、心筋梗塞、全身性硬化症、熱傷、火傷、肥厚性瘢痕、ケロイド、歯肉炎による発熱、肝硬変若しくは肝腫瘍、骨量の制御、神経変性、卒中、一過性脳虚血発作又はブドウ膜炎である疾患が、ＣＢ２受容体の発現における変化を特徴とするかどうかを決定するための式（Ｉ）の化合物の使用；
疾患の患者又は組織の診断における使用のための式（Ｉ）の化合物；
疾患が、健康な被験者又は組織中でのＣＢ２受容体の発現と比較して、前記患者又は組織中でのＣＢ２受容体の発現における変化を特徴とする、上に定義される疾患の患者又は組織の診断における使用のための式（Ｉ）の化合物；
診断が患者又は組織中でのＣＢ２受容体の発現と健康な被験者又は組織中でのＣＢ２受容体の発現とを比較する工程を含む、上に定義される使用のための化合物；
疾患に罹患している患者がＣＢ２リガンドの投与を伴う処置に応答する見込みがあるかどうかを予測するための式（Ｉ）の化合物の使用；
患者のＣＢ２受容体の発現と健康な被験者又は組織中でのＣＢ２受容体の発現とを比較することを含む、疾患に罹患している患者がＣＢ２リガンドの投与を伴う処置に応答する見込みがあるかどうかを予測するための式（Ｉ）の化合物の使用；並びに
それを必要とする患者に投与する必要があるＣＢ２リガンドの用量を決定するための式（Ｉ）の化合物の使用。
本発明は更に、以下の工程：
（ａ）ＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物を、ＣＢ２受容体及び式（Ｉ）の化合物を含むサンプルに接触させる工程；並びに
（ｂ）ＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物が式（Ｉ）の化合物のＣＢ２受容体への結合に影響するかどうかをモニタリングする工程
を含む、ＣＢ２受容体に結合する化合物を同定するための方法に関する。
（ａ）ＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物を、ＣＢ２受容体及び式（Ｉ）の化合物を含むサンプルに接触させる工程；並びに
（ｂ）ＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物が式（Ｉ）の化合物のＣＢ２受容体への結合に影響するかどうかをモニタリングする工程
を含む、ＣＢ２受容体に結合する化合物を同定するための方法に関する。
本発明はまた、ＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物のＣＢ２受容体への結合力を測定する工程を更に含む、上に定義される方法に関する。
本発明はまた、以下の工程：
（ａ）ＣＢ２受容体に選択的に結合すると推定される化合物を、ＣＢ１受容体、ＣＢ２受容体及び式（Ｉ）の化合物を含むサンプルに接触させる工程；並びに
（ｂ）ＣＢ２受容体に選択的に結合すると推定される化合物が式（Ｉ）の化合物のＣＢ２受容体への結合に影響するかどうかをモニタリングする工程
を含む、化合物がＣＢ１受容体に対するよりもＣＢ２受容体に選択的に結合するかどうかを決定するための方法に関する。
（ａ）ＣＢ２受容体に選択的に結合すると推定される化合物を、ＣＢ１受容体、ＣＢ２受容体及び式（Ｉ）の化合物を含むサンプルに接触させる工程；並びに
（ｂ）ＣＢ２受容体に選択的に結合すると推定される化合物が式（Ｉ）の化合物のＣＢ２受容体への結合に影響するかどうかをモニタリングする工程
を含む、化合物がＣＢ１受容体に対するよりもＣＢ２受容体に選択的に結合するかどうかを決定するための方法に関する。
本発明は更に、ＣＢ２受容体に選択的に結合すると推定される化合物のＣＢ２受容体への結合定数を測定することを更に含む、上に定義される、化合物がＣＢ１受容体に対するよりもＣＢ２受容体に選択的に結合するかどうかを決定するための方法に関する。
本発明はまた、以下の工程：
（ａ）ＣＢ２受容体を含むと推定されるサンプルを式（Ｉ）の化合物に接触させる工程；及び
（ｂ）式（Ｉ）の化合物の結合が生じたかどうかをモニタリングする工程；及び
（ｃ）場合により更に、前記サンプルを別の既知のＣＢ２リガンドに接触させ、前記既知のＣＢ２リガンドが式（Ｉ）の化合物をその結合部位から置換したかどうかをモニタリングする工程
を含む、ＣＢ２受容体としての細胞受容体を同定するための方法に関する。
（ａ）ＣＢ２受容体を含むと推定されるサンプルを式（Ｉ）の化合物に接触させる工程；及び
（ｂ）式（Ｉ）の化合物の結合が生じたかどうかをモニタリングする工程；及び
（ｃ）場合により更に、前記サンプルを別の既知のＣＢ２リガンドに接触させ、前記既知のＣＢ２リガンドが式（Ｉ）の化合物をその結合部位から置換したかどうかをモニタリングする工程
を含む、ＣＢ２受容体としての細胞受容体を同定するための方法に関する。
本発明はまた、以下の工程：
（ａ）動物、患者又はサンプルのＣＢ２受容体の１００％を占めるのに十分な量で、前記動物若しくは患者に式（Ｉ）の化合物を投与するか、又は少なくとも一つのＣＢ２受容体を含むサンプルを式（Ｉ）の化合物に接触させる工程；
（ｂ）前記動物若しくは患者にＣＢ２受容体に結合すると推定される前記化合物の用量を投与するか、又は前記サンプルを前記化合物の用量に接触させる工程；
（ｃ）式（Ｉ）の化合物のＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物による置換をモニタリングする工程；及び
（ｄ）ＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物によって占められる、少なくとも一つのＣＢ２受容体の割合を計算する工程
を含む、前記化合物の用量が前記動物若しくは患者に投与されるか、又は前記サンプルに接触するときの、前記動物、患者又はサンプル中の、ＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物によって占められるＣＢ２受容体の割合を測定するための方法に関する。
（ａ）動物、患者又はサンプルのＣＢ２受容体の１００％を占めるのに十分な量で、前記動物若しくは患者に式（Ｉ）の化合物を投与するか、又は少なくとも一つのＣＢ２受容体を含むサンプルを式（Ｉ）の化合物に接触させる工程；
（ｂ）前記動物若しくは患者にＣＢ２受容体に結合すると推定される前記化合物の用量を投与するか、又は前記サンプルを前記化合物の用量に接触させる工程；
（ｃ）式（Ｉ）の化合物のＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物による置換をモニタリングする工程；及び
（ｄ）ＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物によって占められる、少なくとも一つのＣＢ２受容体の割合を計算する工程
を含む、前記化合物の用量が前記動物若しくは患者に投与されるか、又は前記サンプルに接触するときの、前記動物、患者又はサンプル中の、ＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物によって占められるＣＢ２受容体の割合を測定するための方法に関する。
本発明はまた、以下の工程：
（ａ）動物又はサンプルに薬理反応を与えることが知られているＣＢ２リガンドの用量が前記動物に投与されたか、又は前記サンプルに接触した後に、前記動物又はサンプル中の、ＣＢ２リガンドによって占められるＣＢ２受容体の割合を決定する工程であって、以下を含む工程：
（ａ１）前記動物又はサンプルのＣＢ２受容体の１００％を占めるのに十分な量で、前記動物に式（Ｉ）の化合物を投与するか、又は前記サンプルを式（Ｉ）の化合物に接触させる工程；
（ａ２）前記動物又はサンプルに薬理反応を与えることが知られている用量を前記動物に投与するか、又は前記サンプルを前記用量に接触させる工程；
（ａ３）式（Ｉ）の化合物のＣＢ２リガンドによる置換をモニタリングする工程；及び
（ａ４）ＣＢ２リガンドによって占められるＣＢ２受容体の割合を計算する工程；
（ｂ）ヒト被験者又はサンプル中のＣＢ２リガンドによって占められるＣＢ２受容体と同じ割合を与えるＣＢ２リガンドの用量を決定する工程であって、以下を含む工程：
（ｂ１）前記ヒト被験者のＣＢ２受容体の１００％を占めるのに十分な量で、前記ヒト被験者に式（Ｉ）の化合物を投与するか、又は前記サンプルを式（Ｉ）の化合物に接触させる工程；
（ｂ２）前記ヒト被験者にＣＢ２リガンドの用量を投与するか、又は前記サンプルを前記用量に接触させる工程；
（ｂ３）式（Ｉ）の化合物のＣＢ２リガンドによる置換をモニタリングする工程；及び
（ｂ４）ＣＢ２リガンドによって占められるＣＢ２受容体の割合を計算する工程；
（ｂ５）工程（ａ４）で計算されたＣＢ２受容体の割合が工程（ｂ４）でもまた得られるまで工程（ｂ２）〜（ｂ４）を繰り返す工程；及び
（ｂ６）患者に投与する必要があるＣＢ２リガンドの用量を得るために、工程（ｂ２）で投与された用量の追加を計算する工程；
を含む、それを必要とする患者に投与する必要があるＣＢ２リガンドの用量を決定するための方法に関する。
（ａ）動物又はサンプルに薬理反応を与えることが知られているＣＢ２リガンドの用量が前記動物に投与されたか、又は前記サンプルに接触した後に、前記動物又はサンプル中の、ＣＢ２リガンドによって占められるＣＢ２受容体の割合を決定する工程であって、以下を含む工程：
（ａ１）前記動物又はサンプルのＣＢ２受容体の１００％を占めるのに十分な量で、前記動物に式（Ｉ）の化合物を投与するか、又は前記サンプルを式（Ｉ）の化合物に接触させる工程；
（ａ２）前記動物又はサンプルに薬理反応を与えることが知られている用量を前記動物に投与するか、又は前記サンプルを前記用量に接触させる工程；
（ａ３）式（Ｉ）の化合物のＣＢ２リガンドによる置換をモニタリングする工程；及び
（ａ４）ＣＢ２リガンドによって占められるＣＢ２受容体の割合を計算する工程；
（ｂ）ヒト被験者又はサンプル中のＣＢ２リガンドによって占められるＣＢ２受容体と同じ割合を与えるＣＢ２リガンドの用量を決定する工程であって、以下を含む工程：
（ｂ１）前記ヒト被験者のＣＢ２受容体の１００％を占めるのに十分な量で、前記ヒト被験者に式（Ｉ）の化合物を投与するか、又は前記サンプルを式（Ｉ）の化合物に接触させる工程；
（ｂ２）前記ヒト被験者にＣＢ２リガンドの用量を投与するか、又は前記サンプルを前記用量に接触させる工程；
（ｂ３）式（Ｉ）の化合物のＣＢ２リガンドによる置換をモニタリングする工程；及び
（ｂ４）ＣＢ２リガンドによって占められるＣＢ２受容体の割合を計算する工程；
（ｂ５）工程（ａ４）で計算されたＣＢ２受容体の割合が工程（ｂ４）でもまた得られるまで工程（ｂ２）〜（ｂ４）を繰り返す工程；及び
（ｂ６）患者に投与する必要があるＣＢ２リガンドの用量を得るために、工程（ｂ２）で投与された用量の追加を計算する工程；
を含む、それを必要とする患者に投与する必要があるＣＢ２リガンドの用量を決定するための方法に関する。
本発明はまた、以下の工程：
（ａ）サンプル及び健康なサンプルを式（Ｉ）の化合物に接触させるか、又は前記疾患に罹患している被験者及び健康な被験者に式（Ｉ）の化合物を投与する工程；
（ｂ）両サンプルにおいて、式（Ｉ）の化合物の結合が生じたかどうかをモニタリングする工程；並びに
（ｃ）両サンプルにおいて、ＣＢ２受容体に結合する式（Ｉ）の化合物の量を比較する工程
を含む、疾患がＣＢ２受容体の発現における変化を特徴とするかどうかを決定するための方法に関する。
（ａ）サンプル及び健康なサンプルを式（Ｉ）の化合物に接触させるか、又は前記疾患に罹患している被験者及び健康な被験者に式（Ｉ）の化合物を投与する工程；
（ｂ）両サンプルにおいて、式（Ｉ）の化合物の結合が生じたかどうかをモニタリングする工程；並びに
（ｃ）両サンプルにおいて、ＣＢ２受容体に結合する式（Ｉ）の化合物の量を比較する工程
を含む、疾患がＣＢ２受容体の発現における変化を特徴とするかどうかを決定するための方法に関する。
本発明はまた、オートラジオグラフィー又は陽電子射出断層撮影をモニタリング中に使用する、本発明の方法に関する。
本発明は更に、式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物に関する。
本発明はまた、診断薬としての使用のための、すなわち、疾患の診断における使用のための式（Ｉ）の化合物に関する。
本発明はまた、疼痛、アテローム性動脈硬化症、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、緑内障、糖尿病、炎症、炎症性腸疾患、虚血−再灌流傷害、急性肝不全、肝線維症、肺線維症、腎線維症、全身性線維症、急性移植拒絶反応、慢性移植腎症、糖尿病性腎症、糸球体腎症、心筋症、心不全、心筋虚血、心筋梗塞、全身性硬化症、熱傷、火傷、肥厚性瘢痕、ケロイド、歯肉炎による発熱、肝硬変若しくは肝腫瘍、骨量の制御、神経変性、卒中、一過性脳虚血発作又はブドウ膜炎の診断における使用のための、式（Ｉ）の化合物に関する。
式（Ｉ）の化合物の合成は、例えば、以下のスキームによって達成することができる。
標的化合物は、スルホン酸［３Ｈ］メチル（例えば、４−ニトロベンゼンスルホン酸［３Ｈ］メチル）又はヨウ化［３Ｈ］メチル等の十分に確立したトリチオ−メチル化剤を用いて、脱メチル前駆体であるＮ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）ピラゾール−３−イル］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミドから１工程のトリチオ−メチル化反応を介して容易に得ることができる。この合成概念の主な利点は、放射性核種の取り込みを合成経路の最後の工程で達成することができることであり、これは通常、ＡＬＡＲＡ(as low as reasonably achieveable；合理的に達成できる限り低く)として知られる放射線防護の基本原則を達成するために最も実行可能な方法である。
放射性物質の使用を更に最小限にするために、脱メチル前駆体は、典型的には放射性メチル化剤に対して２〜３倍量過剰に使用される。
この同じ合成概念を適用し、既知の［１４Ｃ／１１Ｃ］−標識メチル基転移試薬、例えば、［１４Ｃ／１１Ｃ］ＭｅＩ又はスルホン酸［１４Ｃ／１１Ｃ］メチル（例えば、［１４Ｃ／１１Ｃ］メチルトリフラート、４−ニトロベンゼンスルホン酸［１４Ｃ／１１Ｃ］メチル）を用いることによって、対応する［１４Ｃ］−及び［１１Ｃ］−標識誘導体を同じ前駆体分子から出発して調製することができる。
特に、［１１Ｃ］−標識方法においては、陽電子放出体である炭素−１１の半減期は２０分と短いため、短時間、迅速、及び効果的な合成方法を確立することが大変重要になる。
かくして、本発明はまた、４−ニトロベンゼンスルホン酸［３Ｈ］−メチル、ヨウ化［３Ｈ］−メチル、［１１Ｃ］−メチルトリフラート、ヨウ化［１１Ｃ］−メチル、４−ニトロベンゼンスルホン酸［１１Ｃ］−メチル、［１４Ｃ］−メチルトリフラート、ヨウ化［１４Ｃ］−メチル又は４−ニトロベンゼンスルホン酸［１４Ｃ］−メチルの存在下で、式（Ａ）の化合物を反応させることを含む、式（Ｉ）の化合物の製造方法に関する。
本発明の方法において、式（Ａ）の化合物は、有利には４−ニトロベンゼンスルホン酸［３Ｈ］−メチル、［１１Ｃ］−メチルトリフラート又は４−ニトロベンゼンスルホン酸［１４Ｃ］−メチルの存在下で反応させられる。
本発明の方法は、有利にはトルエン中で実施される。
本発明の方法は、有利にはおよそ１００℃〜１５０℃の温度、特におよそ１２０℃で実施される。
本発明は更に、本発明の方法によって製造される化合物に関する。
本発明は、以下の実施例により説明されるが、これらは限定性を持つものではない。
略語
ＣＡＮ＝ＣＡＳ登録番号； ＬＣ＝液体クロマトグラフィー；ＭＳ＝質量分析法；ＮＭＲ＝核磁気共鳴；ＳＥＭ＝標準誤差；ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン；ＷＴ＝野性型。
ＣＡＮ＝ＣＡＳ登録番号； ＬＣ＝液体クロマトグラフィー；ＭＳ＝質量分析法；ＮＭＲ＝核磁気共鳴；ＳＥＭ＝標準誤差；ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン；ＷＴ＝野性型。
実験
全ての反応は、火炎乾燥したガラス製品中アルゴン雰囲気下で実施した。反応に際し分析用溶媒を使用し、必要に応じて乾燥溶媒を更に精製することなく使用した。試薬は信頼のおける商用供給会社より購入し、特に明記しない限り、更に精製することなく使用した。すべての１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、Bruker Advance Ultra Shield 300 MHz分光計に記録した。化学シフトは、記載の重溶媒に関連付けて報告する。質量スペクトルは、PE Sciex API 150EX LC/MS Turbo Spray Systemに記録した。フラッシュクロマトグラフィーは、種々の商用供給会社製の種々のサイズのプレパックシリカカラム（２３０−４００メッシュ、４０−６３μm）を装填したIsco Combi Flash companionを用いて行った。薄層クロマトグラフィーは、Merck KgaAより購入したプレコートプレート（２０ｘ２０cm、シリカゲルF254）を用いて実施し、CAMAG社ＵＶランプ（２５４nm）又は塩基性過マンガン酸カリウム溶液を用いて可視化した。すべての反応は、薄層クロマトグラフィー、ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲを組み合わせてモニタリングした。
全ての反応は、火炎乾燥したガラス製品中アルゴン雰囲気下で実施した。反応に際し分析用溶媒を使用し、必要に応じて乾燥溶媒を更に精製することなく使用した。試薬は信頼のおける商用供給会社より購入し、特に明記しない限り、更に精製することなく使用した。すべての１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、Bruker Advance Ultra Shield 300 MHz分光計に記録した。化学シフトは、記載の重溶媒に関連付けて報告する。質量スペクトルは、PE Sciex API 150EX LC/MS Turbo Spray Systemに記録した。フラッシュクロマトグラフィーは、種々の商用供給会社製の種々のサイズのプレパックシリカカラム（２３０−４００メッシュ、４０−６３μm）を装填したIsco Combi Flash companionを用いて行った。薄層クロマトグラフィーは、Merck KgaAより購入したプレコートプレート（２０ｘ２０cm、シリカゲルF254）を用いて実施し、CAMAG社ＵＶランプ（２５４nm）又は塩基性過マンガン酸カリウム溶液を用いて可視化した。すべての反応は、薄層クロマトグラフィー、ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲを組み合わせてモニタリングした。
実施例１
（ＮＥ）−Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）−１−（トリトリチオメチル）ピラゾール−３−イリデン］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド
（ＮＥ）−Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）−１−（トリトリチオメチル）ピラゾール−３−イリデン］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド
ａ）Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）ピラゾール−３−イル］−２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド
３−tert−ブチル−１−（シクロブチルメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（４５８mg、２．２１mmol、ＣＡＮ１０１８６７９−７４−７）及びトリエチルアミン（６７０mg、９２３μL、６．６２mmol）の乾燥ＴＨＦ（９mL）溶液に、２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）ベンゾイルクロリド（５００mg、３３３μL、２．２１mmol、ＣＡＮ２０７９８１−４６−２）の乾燥ＴＨＦ（９mL）溶液を滴下した。桃色の懸濁液を周囲温度で３０分間撹拌し、１Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液（７０mL）で抽出した。水層を酢酸エチル（３ｘ７０mL）で抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムを用いて乾燥した後、真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン中１０％〜２０％酢酸エチル）により精製し、標題化合物７９４．４mg（２．０mmol、収率９１％）を橙色の粉末として与えた。
1H NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.32 (s, 9 H), 1.72 - 2.20 (m, 6 H), 2.81 (dt, J=14.73, 7.37 Hz, 1 H), 4.04 (d, J=7.06 Hz, 2 H), 6.37 (s, 1 H) 7.38 (dd, J=11.61, 8.58 Hz, 1 H), 7.80 - 7.91 (m, 1 H), 8.27 (d, J=15.95 Hz, 1 H), 8.53 (dd, J=6.96, 2.32 Hz, 1 H)。MS m/z 398.2 [M+H]+。
３−tert−ブチル−１−（シクロブチルメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（４５８mg、２．２１mmol、ＣＡＮ１０１８６７９−７４−７）及びトリエチルアミン（６７０mg、９２３μL、６．６２mmol）の乾燥ＴＨＦ（９mL）溶液に、２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）ベンゾイルクロリド（５００mg、３３３μL、２．２１mmol、ＣＡＮ２０７９８１−４６−２）の乾燥ＴＨＦ（９mL）溶液を滴下した。桃色の懸濁液を周囲温度で３０分間撹拌し、１Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液（７０mL）で抽出した。水層を酢酸エチル（３ｘ７０mL）で抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムを用いて乾燥した後、真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン中１０％〜２０％酢酸エチル）により精製し、標題化合物７９４．４mg（２．０mmol、収率９１％）を橙色の粉末として与えた。
1H NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.32 (s, 9 H), 1.72 - 2.20 (m, 6 H), 2.81 (dt, J=14.73, 7.37 Hz, 1 H), 4.04 (d, J=7.06 Hz, 2 H), 6.37 (s, 1 H) 7.38 (dd, J=11.61, 8.58 Hz, 1 H), 7.80 - 7.91 (m, 1 H), 8.27 (d, J=15.95 Hz, 1 H), 8.53 (dd, J=6.96, 2.32 Hz, 1 H)。MS m/z 398.2 [M+H]+。
ｂ）Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）ピラゾール−３−イル］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド
カリウム tert−ブトキシド（２０３mg、１．８１mmol）を２−メチルプロパン−１，２−ジオール（１３６mg、１３８μL、１．５１mmol、ＣＡＮ５５８−４３−０）の乾燥ＴＨＦ（７mL）の氷冷溶液に添加した。無色の懸濁液を０℃で５分間撹拌し、室温まで温め１時間撹拌した。０℃で（Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）ピラゾール−３−イル］−２−フルオロ−５−トリフルオロメチル）ベンズアミド（４００mg、１．０１mmol）を添加した。得られた黄色の懸濁液を室温で７２時間撹拌した。カリウム tert−ブトキシド（２０３mg、１．８１mmol）を添加し、７０℃で２時間撹拌を続けた。１M炭酸水素ナトリウム水溶液（５０mL）及び酢酸エチル（５０mL）を添加し、層を分離した。水層を酢酸エチル（２ｘ５０mL）で抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムを用いて乾燥した後、真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン中３０〜５０％酢酸エチル）により精製し、標題化合物３３４mg（０．７１４mmol、収率７１％）を白色の粉末として与えた。
1H NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.30 (s, 9 H), 1.43 (s, 6 H), 1.69 - 2.05 (m, 6 H), 2.77 (dt, J=14.63, 7.22 Hz, 1 H), 4.02 - 4.19 (m, 4 H), 6.19 (s, 1 H), 7.13 (d, J=8.88 Hz, 1 H), 7.75 (dd, J=8.68, 2.42 Hz, 1 H), 8.55 (d, J=2.22 Hz, 1 H), 9.69 (s, 1 H)。MS m/z 468.3 [M+H]+。
カリウム tert−ブトキシド（２０３mg、１．８１mmol）を２−メチルプロパン−１，２−ジオール（１３６mg、１３８μL、１．５１mmol、ＣＡＮ５５８−４３−０）の乾燥ＴＨＦ（７mL）の氷冷溶液に添加した。無色の懸濁液を０℃で５分間撹拌し、室温まで温め１時間撹拌した。０℃で（Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）ピラゾール−３−イル］−２−フルオロ−５−トリフルオロメチル）ベンズアミド（４００mg、１．０１mmol）を添加した。得られた黄色の懸濁液を室温で７２時間撹拌した。カリウム tert−ブトキシド（２０３mg、１．８１mmol）を添加し、７０℃で２時間撹拌を続けた。１M炭酸水素ナトリウム水溶液（５０mL）及び酢酸エチル（５０mL）を添加し、層を分離した。水層を酢酸エチル（２ｘ５０mL）で抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムを用いて乾燥した後、真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン中３０〜５０％酢酸エチル）により精製し、標題化合物３３４mg（０．７１４mmol、収率７１％）を白色の粉末として与えた。
1H NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.30 (s, 9 H), 1.43 (s, 6 H), 1.69 - 2.05 (m, 6 H), 2.77 (dt, J=14.63, 7.22 Hz, 1 H), 4.02 - 4.19 (m, 4 H), 6.19 (s, 1 H), 7.13 (d, J=8.88 Hz, 1 H), 7.75 (dd, J=8.68, 2.42 Hz, 1 H), 8.55 (d, J=2.22 Hz, 1 H), 9.69 (s, 1 H)。MS m/z 468.3 [M+H]+。
ｃ）（ＮＥ）−Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）−１−（トリトリチオメチル）ピラゾール−３−イリデン］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド
１mLスクリューキャップ付きバイアル中で、Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）ピラゾール−３−イル］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１．０mg、２．１４μmmol）を４−ニトロベンゼンスルホン酸［３Ｈ］メチル（５０mCi、０．１６mg、０．７１μmmol）の乾燥トルエン（５０μL）溶液に添加した。バイアルを密閉し、反応混合物を１２０℃で２時間撹拌した。その後、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ジクロロメタン／メタノール ９５：５）により精製し、２１．４mCi（４３％）の標題化合物を＞９９％の放射化学的純度（ＨＰＬＣ：X-Bridge C18、アセトニトリル／ギ酸塩緩衝液 ｐＨ３．０）及び８５Ci/mmolの比放射能で与えた。
１mLスクリューキャップ付きバイアル中で、Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）ピラゾール−３−イル］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１．０mg、２．１４μmmol）を４−ニトロベンゼンスルホン酸［３Ｈ］メチル（５０mCi、０．１６mg、０．７１μmmol）の乾燥トルエン（５０μL）溶液に添加した。バイアルを密閉し、反応混合物を１２０℃で２時間撹拌した。その後、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ジクロロメタン／メタノール ９５：５）により精製し、２１．４mCi（４３％）の標題化合物を＞９９％の放射化学的純度（ＨＰＬＣ：X-Bridge C18、アセトニトリル／ギ酸塩緩衝液 ｐＨ３．０）及び８５Ci/mmolの比放射能で与えた。
実施例２
（ＮＥ）−Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）−１−（［１４Ｃ］メチル）ピラゾール−３−イリデン］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド
２mLスクリューキャップ付きバイアル中で、Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）ピラゾール−３−イル］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（２０９mg、０．４５mmol）を４−ニトロベンゼンスルホン酸［１４Ｃ］メチル（２５mCi、９８mg、０．４５mmol）の乾燥トルエン（１．５ｍL）溶液に添加した。バイアルを密閉し、反応混合物を１２０℃で２０時間撹拌した。溶媒を除去した後、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ジクロロメタン／メタノール／トリエチルアミン ９７：３：０．５)により精製し、８．７mCi（３５％）の標題化合物を＞９９％の放射化学的純度（ＨＰＬＣ：X-Bridge C18、水／０．０５％トリエチルアミン含有アセトニトリル）及び５６mCi/mmolの比放射能で与えた。
（ＮＥ）−Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）−１−（［１４Ｃ］メチル）ピラゾール−３−イリデン］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド
２mLスクリューキャップ付きバイアル中で、Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）ピラゾール−３−イル］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（２０９mg、０．４５mmol）を４−ニトロベンゼンスルホン酸［１４Ｃ］メチル（２５mCi、９８mg、０．４５mmol）の乾燥トルエン（１．５ｍL）溶液に添加した。バイアルを密閉し、反応混合物を１２０℃で２０時間撹拌した。溶媒を除去した後、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ジクロロメタン／メタノール／トリエチルアミン ９７：３：０．５)により精製し、８．７mCi（３５％）の標題化合物を＞９９％の放射化学的純度（ＨＰＬＣ：X-Bridge C18、水／０．０５％トリエチルアミン含有アセトニトリル）及び５６mCi/mmolの比放射能で与えた。
実施例３
（ＮＥ）−Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）−１−（［１１Ｃ］メチル）ピラゾール−３−イリデン］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド
炭素−１１を、Cyclone 18/9 サイクロトロン（18-MeV, IBA, Belgium）での１４Ｎ（ｐ，α）１１Ｃ核反応を介して［１１Ｃ］ＣＯ２の形で製造した。ヨウ化［１１Ｃ］メチル（［１１Ｃ］ＭｅＩ）を、ニッケル触媒上での［１１Ｃ］ＣＯ２の［１１Ｃ］メタンへの還元及び引き続いての気相ヨウ素化を伴う２段階反応シーケンスで生成した。AgOTf/Cカラムを１９０℃で通過させた後、より反応性の高い［１１Ｃ］メチルトリフラート（約３０GBq）を形成し、これをＮ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）ピラゾール−３−イル］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（３mg、６．４６μmol）及び乾燥トルエン（０．２５mL）を含む３mL反応器バイアルでバブリングした。混合物を１５０℃まで５分間加熱した。水（１．５mL）中３０％アセトニトリルで希釈した後、粗生成物をセミ分取ＨＰＬＣ（カラム：Sunfire C18 ５μm；１０ｘ１５０mm；生成物ピーク約１０分）を用いて精製した。回収した生成物を水（１０mL）で希釈し、C18カートリッジ（Waters社製、ＥｔＯＨ ５mL及び水１０mLでプレコンディショニング）にトラップし、水（５mL）で洗浄し、ＥｔＯＨ（０．５mL）で溶離した。最終生成物の形成のために、注射用水（９．５mL）を添加し、エタノール濃度５％に調整した。品質管理のために、製剤化溶液の一定分量を、分析ＨＰＬＣシステム（カラム：ACEカラム C18、３μm）に注入した。１１Ｃ−標識生成物の同一性は、非放射性対照化合物の保持時間との比較及び同時注入により確認した。生成物の比放射能は、ＵＶピーク強度と非放射性対照化合物の検量線との比較により計算した。典型的な実験では、比放射能は≧５００GBq／μmolであり、合成の最後における全活性は２±1．００GBqであった（ｎ＝３０）。衝撃（bombardment）終了時からの全合成時間は、およそ４０分であった。
（ＮＥ）−Ｎ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）−１−（［１１Ｃ］メチル）ピラゾール−３−イリデン］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド
炭素−１１を、Cyclone 18/9 サイクロトロン（18-MeV, IBA, Belgium）での１４Ｎ（ｐ，α）１１Ｃ核反応を介して［１１Ｃ］ＣＯ２の形で製造した。ヨウ化［１１Ｃ］メチル（［１１Ｃ］ＭｅＩ）を、ニッケル触媒上での［１１Ｃ］ＣＯ２の［１１Ｃ］メタンへの還元及び引き続いての気相ヨウ素化を伴う２段階反応シーケンスで生成した。AgOTf/Cカラムを１９０℃で通過させた後、より反応性の高い［１１Ｃ］メチルトリフラート（約３０GBq）を形成し、これをＮ−［５−tert−ブチル−２−（シクロブチルメチル）ピラゾール−３−イル］−２−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（３mg、６．４６μmol）及び乾燥トルエン（０．２５mL）を含む３mL反応器バイアルでバブリングした。混合物を１５０℃まで５分間加熱した。水（１．５mL）中３０％アセトニトリルで希釈した後、粗生成物をセミ分取ＨＰＬＣ（カラム：Sunfire C18 ５μm；１０ｘ１５０mm；生成物ピーク約１０分）を用いて精製した。回収した生成物を水（１０mL）で希釈し、C18カートリッジ（Waters社製、ＥｔＯＨ ５mL及び水１０mLでプレコンディショニング）にトラップし、水（５mL）で洗浄し、ＥｔＯＨ（０．５mL）で溶離した。最終生成物の形成のために、注射用水（９．５mL）を添加し、エタノール濃度５％に調整した。品質管理のために、製剤化溶液の一定分量を、分析ＨＰＬＣシステム（カラム：ACEカラム C18、３μm）に注入した。１１Ｃ−標識生成物の同一性は、非放射性対照化合物の保持時間との比較及び同時注入により確認した。生成物の比放射能は、ＵＶピーク強度と非放射性対照化合物の検量線との比較により計算した。典型的な実験では、比放射能は≧５００GBq／μmolであり、合成の最後における全活性は２±1．００GBqであった（ｎ＝３０）。衝撃（bombardment）終了時からの全合成時間は、およそ４０分であった。
実施例４
マウス中の放射性リガンド結合
細胞培養
ヒトＣＢ１及びヒトＣＢ２を発現するＣＨＯ−Ｋ１ β−アレスチン細胞（DiscoveRx Inc., Fremont, CA）をＦＢＳ １０％、ハイグロマイシン３００μg mL-1及びジェネテシン（Ｇ４１８）８００μg mL-1を補充したF-12 Nutrient Mixture（HAM）中で培養した。細胞を３７℃で５％ ＣＯ２を含む加湿雰囲気でインキュベートした。
マウス中の放射性リガンド結合
細胞培養
ヒトＣＢ１及びヒトＣＢ２を発現するＣＨＯ−Ｋ１ β−アレスチン細胞（DiscoveRx Inc., Fremont, CA）をＦＢＳ １０％、ハイグロマイシン３００μg mL-1及びジェネテシン（Ｇ４１８）８００μg mL-1を補充したF-12 Nutrient Mixture（HAM）中で培養した。細胞を３７℃で５％ ＣＯ２を含む加湿雰囲気でインキュベートした。
放射性リガンド結合アッセイ
安定にトランスフェクトされた細胞又は脾臓組織を、Ｈｅｐｅｓ １５mmol L-1、ＥＤＴＡ ０．３mmol L-1、ＥＧＴＡ １mmol L-1、ＭｇＣｌ２ ２mmol L-1、完全ＥＤＴＡ不含プロテアーゼインヒビター（Roche Applied Science, Rotkreuz, Switzerland）、ｐＨ７．４中にガラスポッターを用いてホモジナイズし、４７，８００ｇ、４℃で３０分間遠心分離した。次に、ペレットを同じ緩衝液に２度再ホモジナイズし、遠心分離した（４７，８００ｇ、４℃、３０分）。次に、最終ペレットを、Ｔｒｉｓ ７５mmol L-1、ＥＤＴＡ ０．３mmol L-1、ＥＧＴＡ 1mmol L-1、ＭｇＣｌ２ １２．５mmol L-1、スクロース２５０mmol L-1、ｐＨ７．４中にタンパク質濃度１〜３mg mL-1で再懸濁し、分取し、ドライアイス上で凍結し、−８０℃で貯蔵した。
安定にトランスフェクトされた細胞又は脾臓組織を、Ｈｅｐｅｓ １５mmol L-1、ＥＤＴＡ ０．３mmol L-1、ＥＧＴＡ １mmol L-1、ＭｇＣｌ２ ２mmol L-1、完全ＥＤＴＡ不含プロテアーゼインヒビター（Roche Applied Science, Rotkreuz, Switzerland）、ｐＨ７．４中にガラスポッターを用いてホモジナイズし、４７，８００ｇ、４℃で３０分間遠心分離した。次に、ペレットを同じ緩衝液に２度再ホモジナイズし、遠心分離した（４７，８００ｇ、４℃、３０分）。次に、最終ペレットを、Ｔｒｉｓ ７５mmol L-1、ＥＤＴＡ ０．３mmol L-1、ＥＧＴＡ 1mmol L-1、ＭｇＣｌ２ １２．５mmol L-1、スクロース２５０mmol L-1、ｐＨ７．４中にタンパク質濃度１〜３mg mL-1で再懸濁し、分取し、ドライアイス上で凍結し、−８０℃で貯蔵した。
飽和結合
飽和結合を式（Ｉ）の化合物０．０５〜２．４nM及び膜タンパク質４０μgを用いて行った。ＣＰ５５９４０（１０μM）を非特異的結合の定義のために用いた。アッセイ緩衝液は、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ５０mmol.L-1、ＭｇＣｌ２５mmol L-1、ＥＧＴＡ ２．５mmol L-1、及び脂肪酸不含ＢＳＡ ０．１％、ｐＨ７．４から構成された。アッセイを最終容量２５０μL／ウェルの膜添加により開始した。アッセイを室温で２時間インキュベートし、次に真空ろ過し、０．３％ポリエチレンイミンに予備浸漬したPackard GF/Bフィルターを通してFilterMate細胞収集装置上で洗浄緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ５０mmol L-1、ＭｇＣｌ２ ５mmol L-1、ＥＧＴＡ ２．５mmol L-1、及び脂肪酸不含ＢＳＡ ０．５％、ｐＨ７．４）を用いてすすいだ。
飽和結合を式（Ｉ）の化合物０．０５〜２．４nM及び膜タンパク質４０μgを用いて行った。ＣＰ５５９４０（１０μM）を非特異的結合の定義のために用いた。アッセイ緩衝液は、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ５０mmol.L-1、ＭｇＣｌ２５mmol L-1、ＥＧＴＡ ２．５mmol L-1、及び脂肪酸不含ＢＳＡ ０．１％、ｐＨ７．４から構成された。アッセイを最終容量２５０μL／ウェルの膜添加により開始した。アッセイを室温で２時間インキュベートし、次に真空ろ過し、０．３％ポリエチレンイミンに予備浸漬したPackard GF/Bフィルターを通してFilterMate細胞収集装置上で洗浄緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ５０mmol L-1、ＭｇＣｌ２ ５mmol L-1、ＥＧＴＡ ２．５mmol L-1、及び脂肪酸不含ＢＳＡ ０．５％、ｐＨ７．４）を用いてすすいだ。
競合結合
競合結合においては、膜調製物を、増加する濃度の非標識（Ｒ１＝ＣＨ３）の式（Ｉ）の化合物の存在下若しくは非存在下での［３Ｈ］−ＣＰ５５９４０（０．３nM）、又はＣＰ５５９４０（１０μM）の存在下若しくは非存在下での式（Ｉ）の化合物１．５nM及び増加する量の膜（２．５〜８０μg）のいずれかで、３０℃で６０分間、最終容量０．２mLの緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ５０mmol L-1、ＭｇＣｌ２５mmol L-1、ＥＧＴＡ ２．５mmol L-1、脂肪酸不含ＢＳＡ ０．１％、及びＤＭＳＯ １％、ｐＨ７．４）中で、穏やかな振盪しながらインキュベートした。すべての結合反応を０．５％ポリエチレンイミンに予備浸漬したGF/Bフィルタープレート（Packard）上で真空ろ過することにより終了させ、続いて脂肪酸不含ＢＳＡ ０．５%を含む氷冷結合緩衝液２mLを用いて簡潔な洗浄を７回行った。プレートを５０℃で１時間乾燥し、液体シンチレーション計数法を使用して結合した放射標識を決定した。ＩＣ５０値及びヒル（Hill）勾配をActivityBase（ID Business Solution, Ltd.）を使用して４パラメータロジスティックモデルにより決定した。
競合結合においては、膜調製物を、増加する濃度の非標識（Ｒ１＝ＣＨ３）の式（Ｉ）の化合物の存在下若しくは非存在下での［３Ｈ］−ＣＰ５５９４０（０．３nM）、又はＣＰ５５９４０（１０μM）の存在下若しくは非存在下での式（Ｉ）の化合物１．５nM及び増加する量の膜（２．５〜８０μg）のいずれかで、３０℃で６０分間、最終容量０．２mLの緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ５０mmol L-1、ＭｇＣｌ２５mmol L-1、ＥＧＴＡ ２．５mmol L-1、脂肪酸不含ＢＳＡ ０．１％、及びＤＭＳＯ １％、ｐＨ７．４）中で、穏やかな振盪しながらインキュベートした。すべての結合反応を０．５％ポリエチレンイミンに予備浸漬したGF/Bフィルタープレート（Packard）上で真空ろ過することにより終了させ、続いて脂肪酸不含ＢＳＡ ０．５%を含む氷冷結合緩衝液２mLを用いて簡潔な洗浄を７回行った。プレートを５０℃で１時間乾燥し、液体シンチレーション計数法を使用して結合した放射標識を決定した。ＩＣ５０値及びヒル（Hill）勾配をActivityBase（ID Business Solution, Ltd.）を使用して４パラメータロジスティックモデルにより決定した。
結果を以下の表１及び図１〜３に示す。
表１は、非標識（Ｒ１＝ＣＨ３）の式（Ｉ）の化合物が、ＣＢ１及びＣＢ２受容体を組換えにより発現する細胞中で、ヒトＣＢ１受容体（ｐＫｉ ５．４１）と比較し、ヒトＣＢ２受容体（ｐＫｉ ８．９７）に対して高い結合選択性を有することを示し、そして、非選択的ＣＢ１／ＣＢ２放射性リガンド［３Ｈ］−ＣＰ５５９４０を使用する。
Claims (29)
- 式（Ｉ）：
（式中、Ｒ １ は、メチル基であり、該メチル基は、少なくとも一つの放射性核種を含む）
の化合物。 - 少なくとも一つの放射性核種が、［３Ｈ］、［１１Ｃ］及び［１４Ｃ］から独立して選択される、請求項１記載の化合物。
- Ｒ１が、Ｃ［３Ｈ］３、［１１Ｃ］Ｈ３又は［１４Ｃ］Ｈ３である、請求項１又は２記載の化合物。
- 患者又はサンプルにおけるＣＢ２受容体の位置を特定するための、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含む組成物。
- 患者又はサンプルにおけるＣＢ２受容体をイメージングするための、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含む組成物。
- ＣＢ２受容体に別の化合物が結合するかどうかを決定するための、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含む組成物。
- 前記別の化合物とＣＢ２受容体との結合定数を測定するための、請求項６記載の組成物。
- ＣＢ１受容体の存在下において使用される、請求項６又は７記載の組成物。
- ある疾患がＣＢ２受容体の発現における変化を特徴とするかどうかを決定するための、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含む組成物。
- 疾患が、疼痛、アテローム性動脈硬化症、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、緑内障、糖尿病、炎症、炎症性腸疾患、虚血−再灌流傷害、急性肝不全、肝線維症、肺線維症、腎線維症、全身性線維症、急性移植拒絶反応、慢性移植腎症、糖尿病性腎症、糸球体腎症、心筋症、心不全、心筋虚血、心筋梗塞、全身性硬化症、熱傷、火傷、肥厚性瘢痕、ケロイド、歯肉炎による発熱、肝硬変若しくは肝腫瘍、骨量の制御、神経変性、卒中、一過性脳虚血発作又はブドウ膜炎である、請求項９記載の組成物。
- 疾患の患者又は組織を診断するための、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含む組成物。
- 疾患が、健康な被験者又は組織中でのＣＢ２受容体の発現と比較して、前記患者又は組織中でのＣＢ２受容体の発現における変化を特徴とする、請求項１１記載の組成物。
- 前記診断が、患者又は組織中でのＣＢ２受容体の発現と健康な被験者又は組織中でのＣＢ２受容体の発現とを比較する工程を含む、請求項１１又は１２記載の組成物。
- 疾患に罹患している患者がＣＢ２リガンドの投与を伴う処置に応答する見込みがあるかどうかの予測をするための、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含む組成物。
- 前記予測が、患者のＣＢ２受容体の発現と健康な被験者又は組織中でのＣＢ２受容体の発現とを比較する工程を含む、請求項１４記載の組成物。
- それを必要とする患者に投与する必要があるＣＢ２リガンドの用量を決定するための、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含む組成物。
- ＣＢ２受容体に結合する化合物の同定をするための、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含む組成物であって、該同定が、以下の工程：
（ａ）ＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物を、ＣＢ２受容体及び請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含むサンプルに接触させる工程；並びに
（ｂ）ＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物が、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物のＣＢ２受容体への結合に影響するかどうかのモニタリングをする工程
を含む、組成物。 - 前記同定が、ＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物のＣＢ２受容体への結合力を測定する工程を更に含む、請求項１７記載の組成物。
- 化合物がＣＢ１受容体に対するよりもＣＢ２受容体に選択的に結合するかどうかの決定をするための、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含む組成物であって、該決定が、以下の工程：
（ａ）ＣＢ２受容体に選択的に結合すると推定される化合物を、ＣＢ１受容体、ＣＢ２受容体及び請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含むサンプルに接触させる工程；並びに
（ｂ）ＣＢ２受容体に選択的に結合すると推定される化合物が、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物のＣＢ２受容体への結合に影響するかどうかのモニタリングをする工程
を含む、組成物。 - 前記決定が、ＣＢ２受容体に選択的に結合すると推定される化合物のＣＢ２受容体への結合定数を測定する工程を更に含む、請求項１９記載の組成物。
- ＣＢ２受容体としての細胞受容体の同定をするための、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含む組成物であって、該同定が、以下の工程：
（ａ）ＣＢ２受容体を含むと推定されるサンプルを請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物に接触させる工程；及び
（ｂ）請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物の結合が生じたかどうかのモニタリングをする工程；並びに
（ｃ）場合により更に、該サンプルを別の既知のＣＢ２リガンドに接触させ、該既知のＣＢ２リガンドが請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物をその結合部位から置換したかどうかのモニタリングをする工程
を含む、組成物。 - ＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物の用量が動物若しくは患者に投与されるか又はサンプルに接触するときの、該動物、患者又はサンプル中の該化合物によって占められるＣＢ２受容体の割合の測定をするための、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含む組成物であって、該測定が、以下の工程：
（ａ）動物、患者又はサンプルのＣＢ２受容体の１００％を占めるのに十分な量で、該動物若しくは患者に請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を投与するか、又は少なくとも一つのＣＢ２受容体を含むサンプルを請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物に接触させる工程；
（ｂ）該動物若しくは患者にＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物の用量を投与するか、又は該サンプルを該化合物の用量に接触させる工程；
（ｃ）請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物のＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物による置換のモニタリングをする工程；及び
（ｄ）ＣＢ２受容体に結合すると推定される化合物によって占められる、少なくとも一つのＣＢ２受容体の割合を計算する工程
を含む、組成物。 - それを必要とする患者に投与する必要があるＣＢ２リガンドの用量の決定をするための、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含む組成物であって、該決定が、以下の工程：
（ａ）動物又はサンプルに薬理反応を与えることが知られているＣＢ２リガンドの用量が該動物に投与されたか又は該サンプルに接触した後に、該動物又はサンプル中の、ＣＢ２リガンドによって占められるＣＢ２受容体の割合を決定する工程であって、以下を含む工程：
（ａ１）該動物又はサンプルのＣＢ２受容体の１００％を占めるのに十分な量で、該動物に請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を投与するか、又は該サンプルを請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物に接触させる工程；
（ａ２）該動物又はサンプルに薬理反応を与えることが知られている用量を該動物に投与するか、又は該サンプルを該用量に接触させる工程；
（ａ３）請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物のＣＢ２リガンドによる置換のモニタリングをする工程；及び
（ａ４）ＣＢ２リガンドによって占められるＣＢ２受容体の割合を計算する工程；
（ｂ）ヒト被験者又はサンプル中のＣＢ２リガンドによって占められるＣＢ２受容体と同じ割合を与えるＣＢ２リガンドの用量を決定する工程であって、以下を含む工程：
（ｂ１）該ヒト被験者のＣＢ２受容体の１００％を占めるのに十分な量で、該ヒト被験者に請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を投与するか、又は該サンプルを請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物に接触させる工程；
（ｂ２）該ヒト被験者にＣＢ２リガンドの用量を投与するか、又は該サンプルをＣＢ２リガンドの用量に接触させる工程；
（ｂ３）請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物のＣＢ２リガンドによる置換のモニタリングをする工程；
（ｂ４）ＣＢ２リガンドによって占められるＣＢ２受容体の割合を計算する工程；
（ｂ５）工程（ａ４）で計算されたＣＢ２受容体の割合が工程（ｂ４）でもまた得られるまで、工程（ｂ２）〜（ｂ４）を繰り返す工程；及び
（ｂ６）患者に投与する必要があるＣＢ２リガンドの用量を得るために、工程（ｂ２）で投与された用量の追加を計算する工程；
を含む、組成物。 - ある疾患がＣＢ２受容体の発現における変化を特徴とするかどうかの決定をするための、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含む組成物であって、該決定が、以下の工程：
（ａ）サンプル及び健康なサンプルを請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物に接触させるか、又は該疾患に罹患している被験者及び健康な被験者に請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を投与する工程；
（ｂ）両サンプルにおいて、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物の結合が生じたかどうかのモニタリングをする工程；並びに
（ｃ）両サンプルにおいて、ＣＢ２受容体に結合する請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物の量を比較する工程
を含む、組成物。 - 前記モニタリング中にオートラジオグラフィー又は陽電子射出断層撮影が使用される、請求項１７〜２４のいずれか一項記載の組成物。
- 請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含む医薬組成物。
- 請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含む診断用組成物。
- 疼痛、アテローム性動脈硬化症、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、緑内障、糖尿病、炎症、炎症性腸疾患、虚血−再灌流傷害、急性肝不全、肝線維症、肺線維症、腎線維症、全身性線維症、急性移植拒絶反応、慢性移植腎症、糖尿病性腎症、糸球体腎症、心筋症、心不全、心筋虚血、心筋梗塞、全身性硬化症、熱傷、火傷、肥厚性瘢痕、ケロイド、歯肉炎による発熱、肝硬変若しくは肝腫瘍、骨量の制御、神経変性、卒中、一過性脳虚血発作又はブドウ膜炎を診断するための、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を含む診断用組成物。
- 請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物を製造するための方法であって、４−ニトロベンゼンスルホン酸［３Ｈ］−メチル、ヨウ化［３Ｈ］−メチル、［１１Ｃ］−メチルトリフラート、ヨウ化［１１Ｃ］−メチル、４−ニトロベンゼンスルホン酸［１１Ｃ］−メチル、［１４Ｃ］−メチルトリフラート、ヨウ化［１４Ｃ］−メチル又は４−ニトロベンゼンスルホン酸［１４Ｃ］−メチルの存在下で、式（Ａ）：
の化合物を反応させることを含む、方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP14190523 | 2014-10-27 | ||
| EP14190523.2 | 2014-10-27 | ||
| PCT/EP2015/074557 WO2016066534A1 (en) | 2014-10-27 | 2015-10-23 | Radiolabeled cannabinoid receptor 2 ligand |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2017534580A JP2017534580A (ja) | 2017-11-24 |
| JP6637034B2 true JP6637034B2 (ja) | 2020-01-29 |
Family
ID=51870829
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2017514901A Expired - Fee Related JP6637034B2 (ja) | 2014-10-27 | 2015-10-23 | 放射標識カンナビノイド受容体２リガンド |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10227308B2 (ja) |
| EP (1) | EP3212241B1 (ja) |
| JP (1) | JP6637034B2 (ja) |
| KR (1) | KR20170072876A (ja) |
| CN (1) | CN106795121A (ja) |
| BR (1) | BR112017008664A2 (ja) |
| CA (1) | CA2956056A1 (ja) |
| MX (1) | MX2017002015A (ja) |
| RU (1) | RU2017116665A (ja) |
| WO (1) | WO2016066534A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2956056A1 (en) | 2014-10-27 | 2016-05-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Radiolabeled cannabinoid receptor 2 ligand |
| EP3995155A1 (en) | 2018-06-27 | 2022-05-11 | F. Hoffmann-La Roche AG | Radiolabeled cannabinoid receptor 2 ligand |
| CN109091681B (zh) * | 2018-08-09 | 2021-08-03 | 中山大学附属第一医院 | [18f]三氟甲基含硫氨基酸类pet显像剂及其制备方法和应用 |
| EP4016069A1 (en) * | 2020-12-21 | 2022-06-22 | F. Hoffmann-La Roche AG | Sensor device and method of its use |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2395583T3 (es) * | 2007-05-10 | 2013-02-13 | Ge Healthcare Limited | IMIDAZOL (1,2-A)PIRIDINAS y compuestos relacionados con actividad frente a los receptores cannabinoides CB2 |
| ES2556752T3 (es) * | 2008-09-16 | 2016-01-20 | Abbvie Bahamas Ltd. | Ligandos de receptores cannabinoides |
| NZ599106A (en) | 2009-11-19 | 2013-07-26 | Yissum Res Dev Co | Novel arylated camphenes, processes for their preparation and uses thereof |
| CA2956056A1 (en) | 2014-10-27 | 2016-05-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Radiolabeled cannabinoid receptor 2 ligand |
-
2015
- 2015-10-23 CA CA2956056A patent/CA2956056A1/en not_active Abandoned
- 2015-10-23 RU RU2017116665A patent/RU2017116665A/ru not_active Application Discontinuation
- 2015-10-23 JP JP2017514901A patent/JP6637034B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2015-10-23 MX MX2017002015A patent/MX2017002015A/es unknown
- 2015-10-23 KR KR1020177008551A patent/KR20170072876A/ko unknown
- 2015-10-23 BR BR112017008664A patent/BR112017008664A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2015-10-23 WO PCT/EP2015/074557 patent/WO2016066534A1/en active Application Filing
- 2015-10-23 CN CN201580046629.2A patent/CN106795121A/zh active Pending
- 2015-10-23 EP EP15784679.1A patent/EP3212241B1/en not_active Not-in-force
-
2017
- 2017-02-27 US US15/443,894 patent/US10227308B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3212241A1 (en) | 2017-09-06 |
| JP2017534580A (ja) | 2017-11-24 |
| BR112017008664A2 (pt) | 2018-01-30 |
| US10227308B2 (en) | 2019-03-12 |
| CA2956056A1 (en) | 2016-05-06 |
| EP3212241B1 (en) | 2019-05-08 |
| US20170166534A1 (en) | 2017-06-15 |
| KR20170072876A (ko) | 2017-06-27 |
| RU2017116665A3 (ja) | 2019-04-23 |
| MX2017002015A (es) | 2017-09-01 |
| WO2016066534A1 (en) | 2016-05-06 |
| CN106795121A (zh) | 2017-05-31 |
| RU2017116665A (ru) | 2018-11-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6637034B2 (ja) | 放射標識カンナビノイド受容体２リガンド | |
| CA2606477C (en) | In situ click chemistry method for screening high affinity molecular imaging probes | |
| CN103739605B (zh) | 用于检测神经障碍的显像剂 | |
| US8858911B2 (en) | Phosphodiesterase 1-targeting tracers and methods | |
| Li et al. | In vivo imaging of the metabotropic glutamate receptor 1 (mGluR1) with positron emission tomography: recent advance and perspective | |
| Woodard et al. | Bridged cyclams as imaging agents for chemokine receptor 4 (CXCR4) | |
| BRPI0808503B1 (pt) | Composto, uso de um composto, e, composição farmacêutica | |
| Burai et al. | Synthesis and characterization of tricarbonyl-Re/Tc (I) chelate probes targeting the G protein-coupled estrogen receptor GPER/GPR30 | |
| Wang et al. | Synthesis and biological evaluation of 18F labeled fluoro-oligo-ethoxylated 4-benzylpiperazine derivatives for sigma-1 receptor imaging | |
| Pretze et al. | Synthesis, radiolabelling and initial biological characterisation of 18 F-labelled xanthine derivatives for PET imaging of Eph receptors | |
| JP7456948B2 (ja) | 放射性標識カンナビノイド受容体２リガンド | |
| Hassan et al. | Fluorinated CRA13 analogues: Synthesis, in vitro evaluation, radiosynthesis, in silico and in vivo PET study | |
| Modemann et al. | Development of high-affinity fluorinated ligands for cannabinoid subtype 2 receptor, and in vitro evaluation of a radioactive tracer for imaging | |
| WO2008108729A1 (en) | Novel 2-heteroaryl substituted indoles 695 | |
| Fresneau et al. | Design of a serotonin 4 receptor radiotracer with decreased lipophilicity for single photon emission computed tomography | |
| EP3247706B1 (en) | Pet imaging agents | |
| US11999710B2 (en) | Radiolabeled cannabinoid receptor 2 ligand | |
| JP2024073563A (ja) | 放射性標識カンナビノイド受容体２リガンド | |
| Khan et al. | Development and bioevaluation of 99m Tc (CO) 3-labeled (1-azido-1-deoxy-β-D-glucopyranoside) complex as a potential tumor-seeking agent. | |
| JP2586411B2 (ja) | 放射性ベンゾジアゼピン誘導体およびその製造法 | |
| Mao | Design and synthesis of small molecule ligands targeting protease-activated receptor 2 as potential diagnostic and therapeutic agents | |
| JP2013256491A (ja) | 不安定プラークへの選択的集積性に優れる化合物 | |
| Lien et al. | Synthesis and preclinical evaluation of [18F] PF04217903, a selective MET PET tracer |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20181016 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20190627 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190709 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190926 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20191126 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20191219 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6637034 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |