JP6614673B2 - Compost using Biobalance (registered trademark) Y and manufacturing method thereof - Google Patents
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Description
本出願は、２０１４年９月１９日に日本国において出願された特願２０１４−１９０９０４号に基づく優先権を主張するものであり、当該出願に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。また、本願において引用した全ての特許、特許出願及び文献に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。 This application claims the priority based on Japanese Patent Application No. 2014-190904 for which it applied in Japan on September 19, 2014, and all the content described in the said application is referred as it is by this specification. Incorporated. In addition, all the contents described in all patents, patent applications, and documents cited in the present application are incorporated herein by reference in their entirety.
本発明は、動物（特に家畜動物）の糞尿を原料として製造される堆肥の分野に関する。また、本発明は、前記堆肥を含有する、戻し堆肥、植物（特には野菜や米等の食用植物）育成用の肥料、培養土、又は土壌改良剤の分野に関する。 The present invention relates to the field of compost manufactured using animal (especially livestock) manure as raw material. The present invention also relates to the fields of return compost, fertilizer for growing plants (especially edible plants such as vegetables and rice), culture soil, or soil conditioner containing the compost.
伝統的な動物（特に家畜動物）の糞尿を原料とした堆肥の製造は、糞尿と稲藁などを混合して野積みし、長時間かけて堆肥化されていた。しかし、この方法では悪臭等の問題が生じることが問題となっていた。また、堆肥化の過程では、枯草菌などの好気性微生物による発酵を利用することから、従来、複数回の堆積切り返しを行うか、攪拌を行うことにより、悪臭を除くと共に空気との接触面や接触時間を増やす必要があった（特許文献１〜３）。 Manufacture of compost using manure of traditional animals (especially livestock animals) has been composted over a long period of time by mixing manure and rice straw. However, this method has a problem that problems such as bad odor occur. In addition, in the process of composting, fermentation by aerobic microorganisms such as Bacillus subtilis is used. Conventionally, by performing repeated stacking or stirring, the bad odor is removed and the contact surface with air and It was necessary to increase the contact time (Patent Documents 1 to 3).
悪臭の発生を抑制し、短期間で堆肥化させる別の手段として、有機物の分解作用を示す微生物を添加する堆肥化方法が報告されている（特許文献４〜８）。また、堆肥化過程における悪臭を抑制するための別の手段として、微生物を含む飼料を与えた家畜の糞尿から堆肥を製造することが報告されている（特許文献９〜１３）。そのほとんどは、得られた糞尿の堆肥化には従来どおりの複数回の堆積切り返しや攪拌を必要としている（特許文献９〜１２）が、特許文献１３は、バチルス属に属する微生物及びクロストリジウム属に属する微生物を含む混合微生物と、多孔質担体を組み合わせて飼料に添加することにより、１回の切り返しでも悪臭も少なく堆肥化可能であることが開示されている。 As another means for suppressing the generation of malodor and composting in a short period of time, a composting method in which microorganisms exhibiting the decomposition action of organic substances are added has been reported (Patent Documents 4 to 8). In addition, as another means for suppressing malodor in the composting process, it has been reported that compost is produced from livestock manure fed with feed containing microorganisms (Patent Documents 9 to 13). In most cases, composting of the obtained excreta requires a plurality of times of conventional stacking and stirring (Patent Documents 9 to 12). However, Patent Document 13 refers to microorganisms belonging to the genus Bacillus and genus Clostridium. It has been disclosed that composting can be performed with few bad odors even by single turnover by combining a mixed microorganism containing microorganisms belonging to it and a porous carrier and adding them to the feed.
一方、本発明者は、ラクトバチルス属デルブリッキー種に属する乳酸菌を添加した飼料を摂取した家畜の糞尿は、悪臭が抑制されることを報告している（特許文献１４）。 On the other hand, the present inventor has reported that malodours are suppressed in livestock manure ingested feed supplemented with lactic acid bacteria belonging to Lactobacillus delbricki species (Patent Document 14).
既に報告されている堆肥の製造方法、特には、特開２００８−２５３２２６号（前記特許文献１３）に記載された堆肥の製造方法においては、有用菌のほかに本来食用ではない多孔質担体を家畜に摂取させる必要があり、家畜の品質維持・健康管理上の問題が考えられていた。また、当該文献において得られた堆肥（有機肥料）の水分含有率は４４．２％と低く、水分を必要とする堆肥中の有用菌数も減少していると思われた。 In the method for producing compost that has already been reported, in particular, in the method for producing compost described in JP-A-2008-253226 (Patent Document 13), a porous carrier that is not originally edible is used in addition to useful bacteria. It was necessary to ingest the animal, and there were thought to be problems in maintaining the quality and health management of livestock. In addition, the water content of the compost (organic fertilizer) obtained in this document was as low as 44.2%, and the number of useful bacteria in the compost requiring water was thought to be reduced.
本発明者は、家畜にとってより安全で、かつ、簡便な手法で質のよい堆肥を製造する方法について鋭意検討した結果、ラクトバチルス属デルブリッキー種に属する乳酸菌を摂取した動物由来の糞尿を原料として用いることにより、切り返しの数が１回程度でも悪臭を発することなく堆肥化が短期間で進み、かつ、堆肥中の水分含有量も豊富となる堆肥が製造できることを見出した。また、本発明者は、このような堆肥の特徴を与える堆肥中の要因を特定すべく鋭意研究を行った。その結果、好気条件下、このような堆肥においては、低温域から中温域（２０〜４０℃）において高い増殖活性を示す放線菌の数が際立って多いことを見出した。更に、本発明者らは、このような放線菌の中から特徴的であると思われる株を単離することに成功し、本発明を完成させた。 As a result of intensive studies on a method for producing high-quality compost that is safer and easier for livestock, the present inventor uses manure derived from an animal ingesting a lactic acid bacterium belonging to the Lactobacillus delbrikkii species as a raw material. Thus, it was found that composting can proceed in a short period of time without causing malodor even when the number of turnovers is about once, and compost having abundant water content in the compost can be produced. In addition, the present inventor has conducted intensive studies to identify factors in compost that give such characteristics of compost. As a result, it was found that the number of actinomycetes exhibiting a high proliferation activity in a low temperature region to a medium temperature region (20 to 40 ° C.) is markedly large in such compost under aerobic conditions. Furthermore, the present inventors have succeeded in isolating a strain that seems to be characteristic among such actinomycetes, and completed the present invention.
すなわち、本発明は、好気条件下、中温域において高い増殖活性を示す放線菌の数が際立って多いことを特徴とする堆肥、特には、ラクトバチルス属デルブリッキー種に属する乳酸菌を摂取した動物由来の糞尿を原料として用いることにより得られた堆肥に関し、具体的には以下の発明に関する。
（１） 家畜動物の糞便から製造した堆肥であって、中温域の温度範囲内の好気条件下で生育する放線菌数が、低温域又は高温域の好気条件下で生育する放線菌数よりも多いことを特徴とする堆肥。
（２） 家畜動物の糞便から製造した堆肥であって、中温域の好気条件下で生育する放線菌数が、好気堆肥中の同条件で生育する放線菌数よりも多いことを特徴とする堆肥。
（３） 前記家畜動物が、ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物であることを特徴とする、（１）〜（２）のいずれか１項に記載の堆肥。
（４） 前記ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料が、バイオバランス（登録商標）Ｙであることを特徴とする、（３）に記載の堆肥。
（５） 大腸菌陰性である、（１）〜（４）のいずれか１項に記載の堆肥。
（６） ｐＨが６．０〜９．０であることを特徴とする、（１）〜（５）のいずれか１項に記載の堆肥。
（７） 水分含量が４５％以上であるであることを特徴とする、（１）〜（６）のいずれか１項に記載の堆肥。
（８） 放線菌又は放線菌を含有する資材が添加されていないことを特徴とする、（１）〜（７）のいずれか１項に記載の堆肥。
（９） ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物から得た糞便を堆積することを備える、堆肥の製造方法。
（１０） ａ）ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物から得た糞便の水分を調製するステップ、
ｂ）前記糞便を堆積して静置するステップ、
ｃ）前記工程により得られた堆肥を反転させるステップ、及び、
ｄ）前記堆肥を静置するステップ、
を備える、（９）に記載の製造方法。
（１１） 前記ステップａ）の期間中、放線菌数が少ないことを特徴とする、（１０）に記載の製造方法。
（１２） 前記ステップｂ）及びステップｄ）の期間中の前記糞便又は前記堆肥堆積物の内部温度が３０〜６０℃であることを特徴とする、（１０）又は（１１）に記載の製造方法。
（１３） 前記ステップａ）における水分調製が、乾材を添加することにより行われることを特徴とする、（１０）〜（１２）に記載の製造方法。
（１４） ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料が、バイオバランス（登録商標）Ｙであることを特徴とする、（９）〜（１３）のいずれか１項に記載の製造方法。
（１５） 放線菌又は放線菌を含有する資材を添加しないことを特徴とする、（９）〜（１４）のいずれか１項に記載の製造方法。
（１６） ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物から得た糞便を堆積することを備える、堆肥中の中温域の好気条件下で生育する放線菌数を増加させる方法。
（１７） ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料が、バイオバランス（登録商標）であることを特徴とする、（１６）に記載の方法。
（１８） 放線菌又は放線菌を含有する資材を添加しないことを特徴とする、（１６）又は（１７）に記載の方法。
（１９） 以下の、ｉ）〜ｉｉ）のいずれか一つに記載の放線菌
ｉ）Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４４株
ｉｉ）Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ５１株
（２０） 前記中温域の好気条件下で生育する放線菌が、請求項１９に記載の放線菌の少なくとも１つを含む、（１）〜（８）のいずれか１項に記載の堆肥。
（２１） （１）〜（８）、及び（２０）のいずれか１項に記載の堆肥と乾材とを含有する、戻し堆肥。
（２２） 少なくとも１つの（１９）に記載の放線菌を添加することを含む、（９）〜（１４）のいずれか１項に記載の製造方法。
（２３） （９）〜（１４）、及び、（２０）のいずれか１項に記載の製造方法により得られた堆肥と乾材とを混合するステップを備える、戻し堆肥の製造方法。
（２４） 少なくとも１つの請求項１９に記載の放線菌を添加することを含む、（１６）〜（１７）のいずれか１項に記載の方法。
（２５） （１）〜（８）、及び（２０）のいずれか１項に記載の堆肥を含有することを特徴とする、培養土、肥料、又は土壌改良剤。
（２６） （１９）に記載の放線菌を含有する有害菌を排除するための組成物。
（２７） （１９）に記載の放線菌を添加することを含む、土壌、堆肥又は糞尿中の有害菌の排除方法。
（２８） 有害菌が大腸菌、及び／又はストレプトコッカス属の菌である、（２６）に記載の組成物又は（２７）に記載の方法。
（２９） 有害菌が、大腸菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｕｂｅｒｉｓ、及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅから選択される１以上の菌である、（２６）に記載の組成物又は（２７）に記載の方法。That is, the present invention is derived from an animal that ingests a compost characterized by a markedly large number of actinomycetes exhibiting high growth activity in the middle temperature range under aerobic conditions, in particular, a lactic acid bacterium belonging to the Lactobacillus delbricki species Specifically, the present invention relates to the following invention.
(1) Compost produced from feces of livestock animals, and the number of actinomycetes growing under aerobic conditions in the middle temperature range is the number of actinomycetes growing under low temperature or high temperature aerobic conditions Compost characterized by more than.
(2) Compost manufactured from feces of livestock animals, characterized in that the number of actinomycetes growing under aerobic conditions in the middle temperature range is greater than the number of actinomycetes growing under the same conditions in aerobic composts Compost.
(3) The livestock animal is a livestock animal that has ingested a feed containing Lactobacillus delbrueckii ANTI MUFFA (FERM BP-10663), any of (1) to (2) The compost according to item 1.
(4) The compost according to (3), wherein the feed containing Lactobacillus delbrueckii (ANTI MUFFA (FERM BP-10663)) is Biobalance (registered trademark) Y.
(5) The compost according to any one of (1) to (4), which is negative for E. coli.
(6) The compost according to any one of (1) to (5), wherein the pH is 6.0 to 9.0.
(7) The compost according to any one of (1) to (6), wherein the water content is 45% or more.
(8) Compost according to any one of (1) to (7), wherein actinomycetes or materials containing actinomycetes are not added.
(9) A method for producing compost, comprising depositing feces obtained from a livestock animal ingesting a feed containing Lactobacillus delbrueckii (ANTI MUFFA (FERM BP-10663)).
(10) a) preparing stool moisture obtained from a livestock animal fed a feed containing Lactobacillus delbrueckii ANTI MUFFA (FERM BP-10663),
b) depositing the stool and standing still;
c) reversing the compost obtained by the process, and
d) settling the compost;
(9) The manufacturing method as described in (9).
(11) The method according to (10), wherein the number of actinomycetes is small during the period of step a).
(12) The manufacturing method according to (10) or (11), wherein an internal temperature of the stool or the compost deposit during the period of step b) and step d) is 30 to 60 ° C. .
(13) The manufacturing method according to any one of (10) to (12), wherein the water preparation in step a) is performed by adding a dry material.
(14) feed containing Lactobacillus delbrueckii (Lactobacillus delbrueckii) ANTI MUFFA (FERM BP-10663) , characterized in that a bio-balance (R) Y, either (9) - (13) 2. The production method according to item 1.
(15) The production method according to any one of (9) to (14), wherein no actinomycetes or materials containing actinomycetes are added.
(16) comprises depositing a stool obtained from Lactobacillus delbrueckii (Lactobacillus delbrueckii) ANTI MUFFA (FERM BP-10663) ingested livestock animals feed containing, under aerobic conditions intermediate temperature in compost A method of increasing the number of actinomycetes growing.
(17) The method according to (16), wherein the feed containing Lactobacillus delbrueckii (ANTI MUFFA (FERM BP-10663)) is Biobalance (registered trademark).
(18) The method according to (16) or (17), wherein no actinomycetes or a material containing actinomycetes is added.
(19) Actinomycetes according to any one of i) to ii) below: i) Streptomyces sp. A44 stock
ii) Streptomyces sp. A51 strain | stump | stock (20) The actinomycetes which grow under the aerobic condition of the said mesophilic range contain at least 1 of the actinomycetes of Claim 19, Comprising: Any one of (1)-(8) compost.
(21) Back compost containing the compost according to any one of (1) to (8) and (20) and a dry material.
(22) The production method according to any one of (9) to (14), comprising adding at least one actinomycete according to (19).
(23) A method for producing back compost, comprising a step of mixing the compost obtained by the production method according to any one of (9) to (14) and (20) and a dry material.
(24) The method according to any one of (16) to (17), comprising adding at least one actinomycete according to claim 19.
(25) Culture soil, fertilizer, or soil conditioner characterized by containing the compost according to any one of (1) to (8) and (20).
(26) A composition for eliminating harmful bacteria containing actinomycetes according to (19).
(27) A method for eliminating harmful bacteria in soil, compost or manure, comprising adding the actinomycetes according to (19).
(28) The composition according to (26) or the method according to (27), wherein the harmful bacteria are Escherichia coli and / or Streptococcus bacteria.
(29) The composition according to (26) or the method according to (27), wherein the harmful bacteria is one or more bacteria selected from Escherichia coli, Streptococcus dysgalactiae , Streptococcus uberis , and Streptococcus agalactiae .
よって、一態様において、本発明は、家畜動物の糞便から製造した堆肥であって、中温域の好気条件下で生育する放線菌数が多いことを特徴とする堆肥に関する。本明細書において、家畜動物とは、主にその生産物（乳、肉、卵、毛、皮、毛皮、労働力など）の利用を目的として飼育される動物を意味し、例えば、牛、馬、水牛、鹿、羊、山羊、アルパカ、豚、猪、ウサギ、鶏、鶉、ダチョウ、七面鳥、ガチョウ、アヒル、キジ、ホロホロ鳥を含む。 Therefore, in one aspect, the present invention relates to a compost that is produced from feces of livestock animals and has a large number of actinomycetes that grow under aerobic conditions in a medium temperature range. In this specification, livestock animals mean animals that are raised mainly for the purpose of using their products (milk, meat, eggs, hair, skin, fur, labor force, etc.). Including, buffalo, deer, sheep, goat, alpaca, pig, eagle, rabbit, chicken, moth, ostrich, turkey, goose, duck, pheasant, guinea fowl.
好ましくは、家畜動物は、ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ） ＡＮＴＩ ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料（以下、本段落において「本飼料」という）を摂取した家畜動物である。ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ） ＡＮＴＩ ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３）は、２００４年２月２７日付にて、産業技術総合研究所つくばセンター 特許生物寄託センター（日本国茨城県つくば市東１−１−１中央第６）（現在の独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許生物寄託センター（千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８））に受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３として寄託されている。本飼料、並びに、その製造方法及び摂取方法については、特開２００５−２４５２９９号公報に記載されている。また、本飼料として、好ましくは、バイオバランス（登録商標）Ｙ（株式会社バイオバランス、日本国愛知県名古屋市）である。本明細書において、バイオバランス（登録商標）Ｙは、株式会社バイオバランス（日本国愛知県名古屋市）が販売しているラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ） ＡＮＴＩ ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３）を含有する家畜用飼料のことである。Preferably, the livestock animal is a livestock animal ingesting a feed containing Lactobacillus delbrueckii ANTI MUFFA (FERM BP-10663) (hereinafter referred to as “main feed” in this paragraph). Lactobacillus delbrueckii (Lactobacillus delbrueckii) ANTI MUFFA (FERM BP-10663) , at February 27, 2004, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Tsukuba Center Patent Organism Depositary Center (Higashi, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, Japan 1-1-1 Center No. 6) is deposited under the deposit number FERM BP-10663 at the current patent administration depository center for product evaluation technology (2-5-8, Kazusa Kamashi, Kisarazu City, Chiba Prefecture). About this feed, its manufacturing method, and ingestion method, it describes in Unexamined-Japanese-Patent No. 2005-245299. The feed is preferably Biobalance (registered trademark) Y (Biobalance Inc., Nagoya, Aichi, Japan). In this specification, Biobalance (registered trademark) Y contains Lactobacillus delbruecki (ANTI MUFFA (FERM BP-10663)) sold by Biobalance Co., Ltd. (Nagoya, Aichi, Japan). Livestock feed.
本明細書において、「中温域の好気条件下で生育する放線菌」とは、好気条件下、中温域に属する温度範囲で一定期間（例えば、１週間〜１ヶ月）培養した際の増殖率が高い放線菌を意味する。本発明の堆肥化方法を利用することにより、攪拌や強制通気、高温条件を利用しないことから、このような放線菌が十分に生育することが可能である。 In the present specification, “actinomycetes that grow under aerobic conditions in the middle temperature range” means proliferation when cultured for a certain period (for example, one week to one month) in the temperature range belonging to the middle temperature range under aerobic conditions. It means actinomycetes with a high rate. By utilizing the composting method of the present invention, such actinomycetes can be sufficiently grown because stirring, forced aeration, and high temperature conditions are not used.
本明細書において、「中温域」とは、例えば、１５℃〜４５℃の温度範囲を意味し、好ましくは、２０℃〜４０℃の温度範囲とすることができ、最も好ましくは３７℃である。また、本明細書において、「低温域」とは、中温域の下限値よりも低い温度を意味し、例えば、１５℃未満、２０℃未満、３７℃未満を意味しても良い。また、本明細書において、「高温域」とは、中温域の上限値よりも高い温度を意味し、例えば、４５℃よりも高い温度、４０℃よりも高い温度、又は３７℃よりも高い温度を意味しても良い。 In the present specification, the “medium temperature range” means, for example, a temperature range of 15 ° C. to 45 ° C., preferably 20 ° C. to 40 ° C., and most preferably 37 ° C. . In the present specification, the “low temperature range” means a temperature lower than the lower limit value of the intermediate temperature range, and may mean, for example, less than 15 ° C., less than 20 ° C., or less than 37 ° C. In the present specification, the “high temperature range” means a temperature higher than the upper limit value of the middle temperature range, for example, a temperature higher than 45 ° C., a temperature higher than 40 ° C., or a temperature higher than 37 ° C. May mean.
本明細書において、中温域の好気条件下で生育する放線菌数が「多い」とは、例えば、同じ堆肥中に含まれる他の温度範囲（低温域、又は高温域）で生育する放線菌と比較して、中温域で生育する放線菌の数が多いことを意味する。あるいは、当該放線菌数が「多い」とは、好気堆肥と比較して、堆肥質量（例えば、１ｇ）当たりに含まれる中温域で生育する放線菌の数が多いことを意味しても良い。ここで、「好気堆肥」とは、上述のとおり空気との接触面や接触時間を人工的に増やすことにより醸成された堆肥を意味する。空気との接触面や接触時間の増加は、機械的に行われたものであっても良いし、人力で行われたものでも良い。堆肥の製造過程において、人力により空気との接触面や接触時間が増加される場合、通常は堆肥の反転（切り返しとも呼ばれる）により行われるが、本明細書における好気堆肥は、このような反転が少なくとも２回行われることにより製造された堆肥を意味する。このような好ましくは、好気堆肥は高温条件下（例えば、７０℃以上）で醸成させたものであってもよい。なお、本明細書において、特にそのように解することが不整合である場合を除き、放線菌の「数」とは、単位体積（例えば、１ｃｍ３）又は単位重量（例えば、１ｇ）当たりの数を意味する。In this specification, the number of actinomycetes that grow under aerobic conditions in the middle temperature range is, for example, that the actinomycetes grow in other temperature ranges (low temperature range or high temperature range) included in the same compost. This means that the number of actinomycetes growing in the middle temperature range is large. Alternatively, “the number of actinomycetes” is “large” may mean that the number of actinomycetes growing in the middle temperature range contained per compost mass (eg, 1 g) is larger than that of aerobic compost. . Here, “aerobic compost” means compost cultivated by artificially increasing the contact surface and contact time with air as described above. The increase in contact surface and contact time with air may be performed mechanically or may be performed manually. In the compost production process, when the contact surface with air and the contact time are increased by human power, it is usually done by reversing compost (also called turning back). Means compost produced by being performed at least twice. Such aerobic compost may preferably be brewed under high temperature conditions (for example, 70 ° C. or higher). In the present specification, unless otherwise specifically understood, the “number” of actinomycetes means the unit volume (for example, 1 cm 3 ) or the unit weight (for example, 1 g). Means number.
本明細書において、放線菌とは、放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）に分類される菌であれば特に限定されないが、例えば、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に分類される菌であってもよい。好ましくは、本発明における中温域の好気条件下で生育する放線菌はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４４株、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ５１株である。これらの放線菌は、日本国北海道帯広市において静置発酵型堆肥より分離されたものである。これらの微生物は、２０１４年９月９日付にて、独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に受領番号ＮＩＴＥ ＢＰ−０１９３４（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４４株）、及びＮＩＴＥ ＢＰ−０１９３５（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ５１株）として寄託されている。In the present specification, the actinomycete is not particularly limited as long as it is a fungus classified into actinomycetes, but may be a fungus classified into the genus Streptomyces, for example. Preferably, the actinomycetes that grow under aerobic conditions in the middle temperature range in the present invention are Streptomyces sp. A44 strain, Streptomyces sp. A51 strain. These actinomycetes have been isolated from stationary fermentation type compost in Obihiro City, Hokkaido, Japan. As of September 9, 2014, these microorganisms were registered with the Patent Microorganism Depositary Center for Product Evaluation Technology (2-5-8 Kazusa-Kamashita, Kisarazu City, Chiba Prefecture) with the receipt number NITE BP-01934 ( Streptomycins sp. A44), and NITE BP-01935 ( Streptomyces sp. A51 strain).
特に、本発明の堆肥は、作物又はそれを食するものにとって有害な微生物となりうる大腸菌が陰性である特徴を備えていても良い。ここで、大腸菌が陰性とは、大腸菌がまったく存在しないことを意味するものではなく、堆肥１ｇ当たりの大腸菌数が１００個以下であることを意味する。堆肥１ｇ当たりの大腸菌数は、例えば、堆肥１ｇを滅菌生理食塩水に懸濁させた後、段階希釈して寒天培地に播種し、３７℃で２４時間培養後、コロニー数を計数し、希釈倍率とコロニー数を掛け合わせることにより、計算することができる。 In particular, the compost of the present invention may have a feature that is negative for Escherichia coli, which can be harmful microorganisms for crops or those that eat them. Here, “negative for E. coli” does not mean that E. coli does not exist at all, but means that the number of E. coli per 1 g of compost is 100 or less. The number of E. coli per gram of compost can be determined by, for example, suspending 1 gram of compost in sterilized physiological saline, serially diluting it, seeding it on an agar medium, culturing at 37 ° C. for 24 hours, counting the number of colonies, And can be calculated by multiplying the number of colonies.
また、本発明の堆肥は、弱酸性〜弱アルカリ性を示すことが特徴であっても良く、好ましくは、ｐＨ６．０〜９．０であり、より好ましくは、ｐＨ６．５〜８．０である。 Further, the compost of the present invention may be characterized by showing weak acidity to weak alkalinity, preferably pH 6.0 to 9.0, and more preferably pH 6.5 to 8.0. .
更に、本発明の堆肥は、水分含量が高いことが特徴であってもよく、例えば、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上であってよい。特に、水分量が５５％以上であれば、有用菌の生存・増殖が妨げられないことから好ましい。よって、本発明の堆肥は、水分含量が、４５〜９０％、５５〜９０％、５０〜８５％、５５〜８５％、５５〜８０％などであっても良い。 Further, the compost of the present invention may be characterized by a high water content, for example, 45% or more, 50% or more, 55% or more, 60% or more. In particular, if the water content is 55% or more, it is preferable because the survival and growth of useful bacteria are not hindered. Therefore, the compost of the present invention may have a moisture content of 45 to 90%, 55 to 90%, 50 to 85%, 55 to 85%, 55 to 80%, and the like.
後述のとおり、本発明によれば、堆肥化過程において放線菌やバチルス属の微生物などを添加しなくとも、比較的嫌気的な条件下（切り替えし１回）でも既に述べたような質の高い堆肥を得ることができる。即ち、本発明の堆肥は、その製造工程において有用微生物（放線菌、バチルス属の微生物を含む）、又は有用微生物を含有する資材が添加されていないことを特徴としても良い。天然には多数の微生物が存在するため、ここで、「添加されていない」とは、少なくとも菌培養物（培養液、培養培地を含む）として添加されていないことを意味し、例えば、糞尿又は糞尿と乾材との混合物に対するＣＦＵ／ｇ−ＤＭ（乾燥重量）値として、１０３以上、１０４以上、１０５以上、１０６以上、１０７以上、１０８以上、１０９以上、１０１０以上、又は１０１１以上の有用微生物を添加しないことを意味しても良い。As will be described later, according to the present invention, the quality as described above is high even under relatively anaerobic conditions (switching once) without adding actinomycetes or Bacillus microorganisms in the composting process. Compost can be obtained. That is, the compost of the present invention may be characterized in that no useful microorganisms (including actinomycetes and Bacillus microorganisms) or materials containing useful microorganisms are added in the production process. Since there are a large number of microorganisms in nature, the term “not added” means that it is not added at least as a fungal culture (including a culture solution and a culture medium). as CFU / g-DM (dry weight) value for a mixture of manure and Inuizai, 10 3 or more, 10 4 or more, 10 5 or more, 10 6 or more, 107 or more, 108 or more, 109 or more, 10 10 It may mean that the above or 10 11 or more useful microorganisms are not added.
別の態様において、本発明は、本発明の堆肥を含有する戻し堆肥に関する。本発明の戻し堆肥は、本発明の堆肥と乾材との混合物であってもよく、又は当該混合物を主成分として含んでいてもよい。例えば、本発明の堆肥と乾材との混合割合は、堆肥：乾材＝７：３〜８：２とすることができる。 In another aspect, the present invention relates to back compost containing the compost of the present invention. The return compost of the present invention may be a mixture of the compost of the present invention and a dry material, or may contain the mixture as a main component. For example, the mixing ratio of the compost and dry material of the present invention can be compost: dry material = 7: 3 to 8: 2.
更に別の態様において、本発明は、本発明の堆肥を含有する培養土、肥料、又は土壌改良剤に関する。培養土、肥料、又は土壌改良剤における本発明の堆肥の含有割合は、目的に応じて任意の量とすることができるが、例えば、１００％、１０％〜９０％、２０〜８０％、３０％〜７０％とすることができる。特に、本発明の堆肥はそのまま（１００％）でも培養土として使用することができる点で優れている。 In still another aspect, the present invention relates to a culture soil, a fertilizer, or a soil conditioner containing the compost of the present invention. The content ratio of the compost of the present invention in the culture soil, fertilizer, or soil conditioner can be any amount depending on the purpose, but for example, 100%, 10% to 90%, 20 to 80%, 30 % To 70%. In particular, the compost of the present invention is excellent in that it can be used as it is (100%) as culture soil.
別の態様において、本発明は、本発明の放線菌を含有する有害菌を排除するための組成物に関する。本発明の組成物は、例えば、放線菌培養物又はその加工物であってもよく、ここで加工物とは濃縮又は乾燥させて放線菌培養物を含む。本明細書において、有害菌とは、人体、家畜、農産物等に悪影響を与える菌であれば特に限定されないが、好ましくは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はストレプトコッカス属の菌である。ストレプトコッカス属の菌としては、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅなどのｐｙｏｇｅｎｉｃグループ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｇｉｎｏｓｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓなどのａｎｇｉｎｏｓｕｓグループ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｉｓなどのｍｉｔｉｓグループ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｕｂｅｒｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｉｓｔａｔｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｏｒａｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐａｒａｓａｎｇｕｉｎｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｂａｒｉｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓを挙げることができる。有害菌として好ましくは、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ、及びＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅである。例えば、有害菌としては、Ｅ．ｃｏｌｉ ＩＩＤ５６２、Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ ＮＲＩＣ１９８６、Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ ＮＲＩＣ１１５３、及びＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ ＮＲＩＣ１１３７であってもよい。In another aspect, the present invention relates to a composition for eliminating harmful bacteria containing the actinomycetes of the present invention. The composition of the present invention may be, for example, an actinomycete culture or a processed product thereof, and the processed product includes an actinomycete culture after being concentrated or dried. In the present specification, harmful bacteria are not particularly limited as long as they are harmful to human bodies, livestock, agricultural products, etc., but are preferably E. coli or Streptococcus spp. The bacteria Streptococcus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, pyogenic group such as Streptococcus dysgalactiae; Streptococcus anginosus, Streptococcus constellatus , anginosus group such as Streptococcus intermedius; Streptococcus pneumoniae, Streptococcus mitis , mitis group such as Streptococcus sanguinis; Streptococcus uberis, Streptococcus spp. , Streptococcus cristatus, Streptococcus gordonii, Streptococcus oralis, Streptococcus parasanguinis, Streptococcus salibarius, Streptococcus bovis, mention may be made of Streptococcus mutans. As the harmful bacteria, E. coli , S. et al . dysgalactiae , S. et al . uberis , and S. agalactiae . For example, as the harmful bacteria, E. coli IID562, S. coli . dysgalactiae NRIC 1986, S. dysgalactiae . uberis NRIC 1153, and S. cerevisiae . agalactiae NRIC1137 may be used.
本発明は、家畜にとってより安全で、かつ、簡便な手法で質のよい堆肥を提供することができる。また、本発明の堆肥は、非常に簡単な方法で製造することができるため、堆肥化に要する費用、時間等を節約することができる。特に、本発明の堆肥は、堆肥中の水分含有量が豊富で、大腸菌数が非常に少なく、戻し堆肥や植物の育成用の肥料として非常に有用である。また、本発明の放線菌は、このような優れた堆肥の性質を維持する上で非常に有用である。 INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention can provide compost of good quality that is safer for livestock and simple. Moreover, since the compost of this invention can be manufactured by a very simple method, the cost, time, etc. which are required for composting can be saved. In particular, the compost of the present invention has abundant moisture content in the compost, has a very small number of E. coli, and is very useful as a fertilizer for back compost and plant cultivation. The actinomycetes of the present invention are very useful in maintaining such excellent compost properties.
１．堆肥の製造方法
一態様において本発明は、ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物から得た糞便を堆積することを備える堆肥の製造方法に関する。上述のとおり、ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ） ＡＮＴＩ ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３）は、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３として寄託されている。ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料は、当該乳酸菌を含有している飼料であれば、その形態、組成が限定されるものではなく、固形飼料の他、粉体、液体、ゲル状、グミ状などのあらゆる形態の動物が経口摂取可能な飼料を含む。また、ここで言う飼料とは、家畜動物の成育に必要な成分を含んでいるか否かは問わない。よって、例えば、無栄養であっても、家畜動物が経口摂取可能であれば飼料に含まれる。このような飼料として好ましくは、バイオバランス（登録商標）Ｙ（株式会社バイオバランス、日本国愛知県名古屋市）である。1. The present invention In the method aspect of the compost production method of composting comprising depositing a stool obtained from Lactobacillus delbrueckii (Lactobacillus delbrueckii) ANTI MUFFA (FERM BP-10663) to food containing the livestock animals About. As mentioned above, Lactobacillus delbrueckii ANTI MUFFA (FERM BP-10663) has been deposited under the accession number FERM BP-10663. A feed containing Lactobacillus delbrueckii ANTI MUFFA (FERM BP-10663) is not limited in form and composition as long as the feed contains the lactic acid bacteria. , Including feeds that can be taken orally by animals in all forms, such as powder, liquid, gel and gummi. Moreover, it does not ask | require whether the feed said here contains the component required for growth of a domestic animal. Therefore, for example, even if it is non-nutrition, if a domestic animal can be ingested orally, it will be included in the feed. Such feed is preferably Biobalance (registered trademark) Y (Biobalance Co., Ltd., Nagoya, Aichi, Japan).
より具体的には、本発明の堆肥の製造方法は、以下のステップを備えることができる：
ａ）ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物から得た糞便の水分を調製するステップ、
ｂ）前記糞便を堆積して静置するステップ、
ｃ）前記工程により得られた堆肥を反転させるステップ、及び、
ｄ）前記堆肥を静置するステップ、
を備える、堆肥の製造方法。More specifically, the method for producing compost of the present invention may comprise the following steps:
a) preparing stool water from a livestock animal fed a feed containing Lactobacillus delbrueckii ANTI MUFFA (FERM BP-10663);
b) depositing the stool and standing still;
c) reversing the compost obtained by the process, and
d) settling the compost;
A method for producing compost, comprising:
前記ａ）のステップの水分調製は、例えば、乾材を添加することにより行うことができる。このような乾材としては、オガクズ、カンナクズ、又はモミガラ等を挙げることができる。含有させる水分量は、堆肥の熟成が可能な水分量であり、例えば、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上であってよい。特に、水分量が５５％以上であれば、有用菌の生存・増殖が妨げられないことから好ましい。よって、本発明の方法において含有させる水分量は、４５〜９０％、５５〜９０％、５０〜８５％、５５〜８５％、５５〜８０％などであっても良い。また、本発明の方法では、堆肥化の初期過程（堆積化されたばかりの糞便）では放線菌数が少ないが、（その後、放線菌を外部から添加しなくとも）最終的に製造された堆肥には放線菌が豊富に存在する。よって、前記ステップａ）における糞便中の放線菌数は少なくてもよい。ここで、放線菌数が少ないとは、好ましくは、糞便又は堆肥１ｇ当たりの放線菌数が６．０ ｌｏｇ ＣＦＵ未満、又は、２．０〜５．０ ｌｏｇ ＣＦＵであることを意味しても良い。 The water preparation in the step a) can be performed by adding a dry material, for example. Examples of such a dry material include sawdust, cannabis, or chaff. The amount of water to be contained is the amount of water that allows the compost to mature, and may be, for example, 45% or more, 50% or more, 55% or more, or 60% or more. In particular, if the water content is 55% or more, it is preferable because the survival and growth of useful bacteria are not hindered. Therefore, the amount of water contained in the method of the present invention may be 45 to 90%, 55 to 90%, 50 to 85%, 55 to 85%, 55 to 80%, or the like. In the method of the present invention, the number of actinomycetes is small in the initial process of composting (sedimented feces), but the compost finally produced (without adding actinomycetes from the outside). Is rich in actinomycetes. Therefore, the number of actinomycetes in stool in step a) may be small. Here, the small number of actinomycetes preferably means that the number of actinomycetes per gram of feces or compost is less than 6.0 log CFU or 2.0 to 5.0 log CFU. good.
前記ステップｂ）及びステップｄ）の静置（堆積）は、任意の場所で行うことができ、コンクリート等の人口地面や土等の天然の地面の上でよい。好ましくは、これらのステップは、風雨にさらされない場所で行われ、例えば、屋根等の雨除けの下、小屋等の室内、表面を水不透性のシート（例えば、ビニールシート）で覆われて行われる。また、これらのステップの間の糞便又は堆肥の堆積物の内部温度としては、例えば、３０〜６０℃、３０〜５５℃であってもよく、好ましくは、有用菌を死滅させないために、高温になりすぎない温度（例えば、５５℃以下）が選択される。静置の期間は、ステップｂ）については、１〜３ヶ月とすることができ、好ましくは、１〜２ヶ月である。ステップｄ）の静置の期間は既に熟成が進んでいることから、より短くい時間で堆肥化させることができ、例えば、２週間〜１ヶ月とすることができる。堆積する高さは、任意の高さとすることができるが、堆積・切り返しが容易な高さ、または適切な内部温度を与える高さとして、１〜５ｍとすることができ、好ましくは、２〜３ｍである。 The standing (deposition) of step b) and step d) can be performed at any place, and may be on artificial ground such as concrete or natural ground such as soil. Preferably, these steps are performed in a place not exposed to wind and rain, for example, under a rain guard such as a roof, inside a hut or the like, and the surface is covered with a water-impermeable sheet (eg, a vinyl sheet). Done. In addition, the internal temperature of the stool or compost deposit during these steps may be, for example, 30 to 60 ° C. or 30 to 55 ° C., and preferably the temperature is high in order not to kill useful bacteria. A temperature that is not too low (for example, 55 ° C. or lower) is selected. The standing period can be 1 to 3 months, preferably 1 to 2 months for step b). Since the aging has already progressed during the standing period of step d), it can be composted in a shorter time, for example, 2 weeks to 1 month. The height to be deposited can be any height, but can be 1 to 5 m as the height at which deposition and turning can be easily performed, or the height that provides an appropriate internal temperature. 3m.
ステップｃ）の堆肥の反転は、本技術分野では切り返しと呼ばれる方法であり、堆肥の内側と外側を入れ替えたり、内側と外側の堆肥を混合したりすることによって、堆肥全体の熟成度を均一にするために行われる。本発明の堆肥の製造方法は、堆肥の反転ステップ（ステップｃ））の回数が少ないにもかかわらず良質な堆肥を製造可能である。本発明の堆肥の製造方法においては、通常、堆肥の反転は１回のみでよい。 The inversion of the compost in step c) is a method called turning back in this technical field. By changing the inside and outside of the compost or mixing the inside and outside compost, the maturity of the whole compost is made uniform. To be done. The compost manufacturing method of the present invention can manufacture high-quality compost despite the small number of compost reversal steps (step c)). In the method for producing compost of the present invention, inversion of compost is usually required only once.
好ましくは、本発明の堆肥の製造方法は、本発明の家畜動物の糞便から製造した堆肥であって、中温域の好気条件下で生育する放線菌数が多いことあるいは、低温域又は高温域の好気条件下で生育する放線菌数よりも多いことを特徴とする堆肥の製造方法である。 Preferably, the method for producing compost of the present invention is compost manufactured from the feces of the livestock animals of the present invention, and has a large number of actinomycetes growing under aerobic conditions in a medium temperature range, or a low temperature range or a high temperature range. It is a manufacturing method of compost characterized by being more than the number of actinomycetes growing under aerobic conditions.
また、本発明の堆肥の製造方法は、堆肥化開始時には放線菌数が少ない。それにもかかわらず、外部から放線菌を添加しなくとも、堆肥化が完了した時点では非常に多くの放線菌を含有させることができる。即ち、従来は、堆肥中の放線菌数を増やすために放線菌又は放線菌を含有する資材を堆肥の製造途中で人工的に添加していたが、本発明の方法においてはそのような添加は不要である。よって、一態様において本発明の製造方法は、その製造工程において、人工的に放線菌又は放線菌を含有する資材を添加しないことを特徴としてもよい。ここで、放線菌を含有する資材とは、放線菌を増殖させ又は付着させた植物、植物加工品（発酵物など）、土壌、又は培地等を意味する。 Moreover, the method for producing compost of the present invention has a small number of actinomycetes at the start of composting. Nevertheless, even if no actinomycetes are added from the outside, a very large number of actinomycetes can be contained when composting is completed. That is, conventionally, in order to increase the number of actinomycetes in compost, actinomycetes or materials containing actinomycetes were artificially added during the production of compost, but in the method of the present invention, such addition is not It is unnecessary. Therefore, in one aspect, the production method of the present invention may be characterized in that, in the production process, no actinomycetes or materials containing actinomycetes are artificially added. Here, the material containing actinomycetes means a plant, plant processed product (fermented product, etc.), soil, culture medium or the like on which actinomycetes are grown or adhered.
あるいは、本発明においては、堆肥の性質を向上させるために有用である、放線菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４４株、及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ５１株を見出したことから、別の態様において、本発明の方法は、これらの放線菌株の少なくとも１つの菌株を堆肥化工程において添加することを備えていても良い。Alternatively, in the present invention, Streptomyces sp., Which is useful for improving the properties of compost, is used. A44 strain, and Streptomyces sp. Since the A51 strain was found, in another embodiment, the method of the present invention may comprise adding at least one of these actinomycetes in the composting step.
２．放線菌数を増加させる方法
別の態様において、本発明は、ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料を摂取した家畜動物から得た糞便を堆積することを備える、堆肥中の中温域の好気条件下で生育する放線菌数を増加させる方法に関する。ラクトバチルス・デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）ＡＮＴＩ ＭＵＦＦＡ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６６３）を含有する飼料については、上述の製造方法と同様である。2. Methods for Increasing Actinomycetes In another aspect, the present invention comprises depositing stool obtained from a livestock animal fed a diet containing Lactobacillus delbrueckii ANTI MUFFA (FERM BP-10663). The present invention relates to a method for increasing the number of actinomycetes that grow under aerobic conditions in the middle temperature range of compost. The feed containing Lactobacillus delbrueckii ANTI MUFFA (FERM BP-10663) is the same as the production method described above.
また、特に本発明の方法は、堆肥化開始時には放線菌数が少ないにもかかわらず、外から放線菌を添加しなくとも、堆肥化が完了した時点では非常に多くの放線菌を含有させることができる。よって、一態様において本発明の方法は、放線菌又は放線菌を含有する資材を添加しないことを特徴としてもよい。ここで、放線菌を含有する資材とは、放線菌を増殖させ又は付着させた植物、植物加工品（発酵物など）、土壌、又は培地等を意味する。 In particular, the method of the present invention contains a large amount of actinomycetes at the time composting is completed without adding actinomycetes from the outside even though the number of actinomycetes is small at the start of composting. Can do. Therefore, in one aspect, the method of the present invention may be characterized in that actinomycetes or materials containing actinomycetes are not added. Here, the material containing actinomycetes means plants, plant products (fermented products, etc.), soil, or culture medium on which actinomycets are grown or adhered.
あるいは、本発明の方法は、本発明において特に有用であることが見出された放線菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４４株、及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ５１株の少なくとも１つの菌株を堆肥化工程において添加することを備えていても良い。Alternatively, the methods of the present invention can be applied to the actinomycetes Streptomyces sp. That has been found to be particularly useful in the present invention. A44 strain, and Streptomyces sp. You may provide adding at least 1 strain of A51 stock | strain in a composting process.
３．戻し堆肥の製造方法
本発明の堆肥は、戻し堆肥とすることができる。よって、一態様において本発明は、前記堆肥の製造方法により得られた堆肥と乾材とを混合するステップを備える、戻し堆肥の製造方法に関する。ここで、乾材としては、オガクズ、カンナクズ、又はモミガラ等を挙げることができる。3. Method for Producing Back Compost The compost of the present invention can be made back compost. Therefore, in one aspect, the present invention relates to a method for producing back compost, comprising the step of mixing the compost obtained by the method for producing compost and a dry material. Here, examples of the dry material include sawdust, cannabis, and rice crackers.
４．本発明の堆肥を含有する各種プロダクトの製造方法
本発明の堆肥を含有する培養土、肥料、又は土壌改良剤は、堆肥からこれらのプロダクトを製造するための当業者周知の方法を適宜利用して、製造することができる。4). Method for Producing Various Products Containing Compost of the Present Invention The culture soil, fertilizer, or soil conditioner containing the compost of the present invention is appropriately utilized by methods well known to those skilled in the art for producing these products from compost. Can be manufactured.
５．本発明の堆肥、戻し堆肥、本発明の堆肥を含有する各種プロダクトの使用方法
本発明の堆肥、戻し堆肥、本発明の堆肥を含有する各種プロダクトは、それぞれの用途に応じて、当業者が通常使用する方法に準じて使用することができる。5. Method for using various products containing the compost of the present invention, compost of the present invention, compost of the present invention Compost of the present invention, compost of the back, various products containing the compost of the present invention are usually used by those skilled in the art according to their respective applications. It can be used according to the method used.
６．本発明の放線菌を含有する有害菌を排除するための組成物の製造
本発明の放線菌を含有する有害菌を排除するための組成物は、例えば、放線菌培養物又はその加工物として製造することができる。放線菌の培養は放線菌に適した培地中で行うことができ、例えば、ブドウ糖と酵母エキスを水に溶解した液体培地に土壌（例えば、バーミキュライト）を混合した培地を用いることができる。Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．Ａ４４株及び／又はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．Ａ５１株の種菌を生理食塩水に懸濁して放線菌培地に接種し、１０日間〜２月間培養を行うことにより、放線菌培養物を得ることができる。放線菌培養物は、必要に応じて、濃縮又は乾燥させて放線菌培養物の加工物としてもよい。6). Production of composition for eliminating harmful bacteria containing actinomycetes of the present invention A composition for eliminating harmful bacteria containing actinomycetes of the present invention is produced, for example, as an actinomycete culture or a processed product thereof. can do. Cultivation of actinomycetes can be performed in a medium suitable for actinomycetes. For example, a medium obtained by mixing soil (for example, vermiculite) in a liquid medium in which glucose and yeast extract are dissolved in water can be used. Streptomyces sp. A44 strain and / or Streptomyces sp. An actinomycete culture can be obtained by suspending the inoculum of the A51 strain in physiological saline and inoculating the actinomycetes medium and culturing for 10 days to 2 months. If necessary, the actinomycete culture may be concentrated or dried to obtain a processed product of the actinomycete culture.
７．本発明の放線菌を添加することを含む、土壌、堆肥又は糞尿中の有害菌の排除方法
本発明の放線菌は、土壌、堆肥又は糞尿中の有害菌を排除することができることから、このような有害菌の排除方法に用いることができる。本発明の有害菌の排除方法においては、目的の土壌、堆肥又は糞尿に前記放線菌組成物を直接添加することにより行うことができ、必要に応じて添加後に混合しても良い。あるいは、牛舎、豚舎又は鶏舎等の家畜の収容施設内の糞尿が接触する箇所や戻し堆肥に予め前記放線菌組成物を散布又は混合しておいてもよい。7). Method for eliminating harmful bacteria in soil, compost or manure, including adding actinomycetes of the present invention Since actinomycetes of the present invention can eliminate harmful bacteria in soil, compost or manure, It can be used in a method for eliminating harmful harmful bacteria. In the method for eliminating harmful bacteria according to the present invention, the actinomycete composition can be directly added to the target soil, compost or manure, and may be mixed after the addition, if necessary. Alternatively, the actinomycetes composition may be sprayed or mixed in advance on a place where manure in a livestock housing facility such as a cowshed, a piggery, or a poultry house comes into contact or in return compost.
以下、本発明をより詳細に説明するため実施例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。なお、本願全体を通して引用される全文献は参照によりそのまま本願に組み込まれる。 Hereinafter, examples will be shown to describe the present invention in more detail, but the present invention is not limited to these examples. It should be noted that all documents cited throughout this application are incorporated herein by reference in their entirety.
（実施例１）ＢＢ堆肥の製造方法
バイオバランス（登録商標）Ｙ（株式会社バイオバランス、日本国愛知県名古屋市）を給与した牛の除糞物に、オガクズ加えて水分７０％に調整し、雨除けの下で２〜３ｍの高さに堆積し、１月静置した。この期間の中心温度を測定したところ、４０〜５５℃であった。その後、反転してさらに１ケ月間静置堆積を行ない堆肥化を完了した。（以下、得られた堆肥を「ＢＢ堆肥」という）(Example 1) BB compost production method Biobalance (registered trademark) Y (Biobalance Co., Ltd., Nagoya City, Aichi, Japan) fed cow dung, added sawdust and adjusted to 70% moisture, It was deposited at a height of 2 to 3 m under rain protection and left to stand for 1 month. When the center temperature of this period was measured, it was 40-55 degreeC. After that, the mixture was inverted and allowed to stand still for another month to complete composting. (Hereafter, the obtained compost is called “BB compost”)
（実施例２）好気堆肥とバイオバランス（登録商標）Ｙにおける放線菌数の差異
実施例１で得られたＢＢ堆肥を１０５℃で６時間乾燥したものと好気堆肥各１ｇをＳＤＳ−酵母エキス（Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ）を含む前処理液９ｇに分散し、４０℃、２０分間前処理した。その後、滅菌生理食塩水で１００００倍まで段階希釈ものを５０μｌＨＶ平板（Ｈｕｍｉｃ ａｃｉｄ−ｖｉｔａｍｉｎ ａｇａｒ、ＨＶ ａｇａｒ）に塗抹した。塗抹した平板を好気条件で５５℃、３７℃、２５℃に設定したインキュベーターにて２週間培養した。出現したコロニーを放線菌として計数した。(Example 2) Difference in the number of actinomycetes between aerobic compost and Biobalance (registered trademark) Y The BB compost obtained in Example 1 was dried at 105 ° C for 6 hours and 1 g each of aerobic compost was SDS-yeast. It was dispersed in 9 g of a pretreatment liquid containing an extract (Yeast extract) and pretreated at 40 ° C. for 20 minutes. Thereafter, serially diluted products up to 10000 times with sterile physiological saline were smeared on 50 μl HV plate (Humic acid-vitamin agar, HV agar). The smeared plate was cultured for 2 weeks in an incubator set at 55 ° C., 37 ° C., and 25 ° C. under aerobic conditions. Appearing colonies were counted as actinomycetes.
ＳＤＳ−酵母エキス（Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ）を含む前処理液は、０．５ｇのＳｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ（関東化学）及び６０ｇのＹｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ（ＯＸＯＩＤ）を５０ｍＭ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ ７．０）に溶解し、１２１℃で１５分間オートクレーブして作製した。
また、放線菌分離培地であるＨＶ平板（Ｈｕｍｉｃ ａｃｉｄ−ｖｉｔａｍｉｎ ａｇａｒ、ＨＶ ａｇａｒ）は、以下の組成をｐＨ７．２に調整後、１２１℃１５分オートクレーブし、常法に従い平板を作製した。
Ｈｕｍｉｃ ａｃｉｄ＊１（和光純薬） １．０ｇ
Ｎａ２ＨＰＯ４（関東化学） ０．５ｇ
ＫＣｌ（関東化学） １．７ｇ
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ（関東化学） ０．０５ｇ
ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ（関東化学） ０．０１ｇ
ＣａＣＯ３（関東化学） ０．０２ｇ
Ｂ−ｖｉｔａｍｉｎｓ＊２ ５ｍＬ
Ｃｙｃｌｏｈｅｘｉｍｉｄｅ＊３（和光純薬） ５０ｍｇ
Ｎａｌｉｄｉｘｉｃ ａｃｉｄ＊４（和光純薬） ２０ｍｇ
Ａｇａｒ（極東化学） ２０ｇ
Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ １Ｌ
＊１ Ｈｕｍｉｃ ａｃｉｄ溶液
５ｇ／１００ｍｌ ０．２Ｎ ＮａＯＨ溶液として１１０℃、１０分間加熱溶解したものを培地１Ｌに対して２０ｍｌ添加した。
＊２ Ｂ−Ｖｉｔａｍｉｎｓ
下記試薬（全て、和光純薬）を溶解して調製後、フィルターで濾過滅菌した。
Ｔｈｉａｍｉｎｅ−ＨＣｌ １００ｍｇ
Ｒｉｖｏｆｌａｖｉｎ １００ｍｇ
Ｎｉａｃｉｎ １００ｍｇ
Ｐｙｒｉｄｏｘｉｎ−ＨＣｌ １００ｍｇ
Ｉｎｏｓｉｔｏｌ １００ｍｇ
Ｃａ−ｐａｎｔｏｔｈｅｎａｔｅ １００ｍｇ
ｐ−ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ １００ｍｇ
ｂｉｏｔｉｎ ５０ｍｇ
＊３ Ｃｙｃｌｏｈｅｘｉｍｉｄｅ溶液（終濃度５０ｐｐｍ）
１０００ｍｇ／１００ｍｌのＥｔＯＨ溶液として調製し、培地１Ｌに対して５ｍｌを添加した。
＊４ Ｎａｌｉｄｉｘｉｃ ａｃｉｄ溶液（終濃度５００ｐｐｍ）
２０００ｍｇ／１００ｍｌ、０．２Ｎ ＮａＯＨ溶液として調製し、培地１Ｌに対して１ｍｌ添加した。A pretreatment solution containing SDS-yeast extract (Yeast extract) was prepared by dissolving 0.5 g of sodium dodecyl sulfate (Kanto Chemical) and 60 g of yeast extract (OXOID) in 50 mM Phosphate buffer (pH 7.0). And then autoclaved for 15 minutes.
Moreover, the HV flat plate (Humic acid-vitamin agar, HV agar) which is an actinomycete isolation medium was autoclaved at 121 ° C. for 15 minutes after adjusting the following composition to pH 7.2, and a flat plate was prepared according to a conventional method.
Humic acid * 1 (Wako Pure Chemical Industries) 1.0g
Na 2 HPO 4 (Kanto Chemical) 0.5g
KCl (Kanto Chemical) 1.7g
MgSO 4 · 7H 2 O (Kanto Chemical) 0.05g
FeSO 4 · 7H 2 O (Kanto Chemical Co., Inc.) 0.01g
CaCO 3 (Kanto Chemical) 0.02g
B-vitamins * 2 5mL
Cycloheximide * 3 (Wako Pure Chemical Industries) 50mg
Nalidixic acid * 4 (Wako Pure Chemical Industries) 20mg
Agar (Far East Chemical) 20g
Distributed water 1L
* 1 Humic acid solution 5 g / 100 ml 20 N of 0.2 N NaOH solution dissolved at 110 ° C. for 10 minutes was added to 1 L of medium.
* 2 B-Vitamins
The following reagents (all Wako Pure Chemical Industries) were dissolved and prepared, and then sterilized by filtration with a filter.
Thiamine-HCl 100mg
Rivoflavin 100mg
Niacin 100mg
Pyridoxin-HCl 100mg
Inositol 100mg
Ca-pantothenate 100mg
p-aminobenzoic acid 100mg
biotin 50mg
* 3 Cycloheximide solution (final concentration 50ppm)
It was prepared as a 1000 mg / 100 ml EtOH solution, and 5 ml was added to 1 L of the medium.
* 4 Nalidixic acid solution (final concentration 500 ppm)
It was prepared as a 2000 mg / 100 ml, 0.2N NaOH solution, and 1 ml was added to 1 L of the medium.
結果を図１に示す。２５〜３７℃で培養することにより出現した放線菌のコロニー数は好気堆肥よりもＢＢ堆肥の方が１００倍以上多かった。また、同じＢＢ堆肥内での比較においても、２５〜３７℃で培養することにより出現した放線菌のコロニー数は他の温度で培養することにより出現した放線菌のコロニー数より多かった。したがって、ＢＢ堆肥は好気堆肥よりも、放線菌による有機物分解が活用しやすい堆肥であることが示された。 The results are shown in FIG. The number of actinomycete colonies that emerged by culturing at 25-37 ° C. was 100 times greater in BB compost than in aerobic compost. Moreover, also in the comparison in the same BB compost, the number of colonies of actinomycetes that appeared by culturing at 25 to 37 ° C. was larger than the number of colonies of actinomycetes that appeared by culturing at other temperatures. Therefore, it was shown that BB compost is easier to utilize organic matter decomposition by actinomycetes than aerobic compost.
（実施例３）抗菌活性を有する放線菌の単離
実施例２で培養したＨＶ培地から放線菌を釣菌し、ＹＭ培地で画線単離した。単離した放線菌２株（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４４株、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ５１株）をＹＭ培地、ＨＶ培地で再度培養して生育条件を検討した。あらかじめＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＩＩＤ５６２株を塗抹したＮＢ培地に、放線菌が生育したＹＭ培地片を乗せ、２４時間後における阻止円の形成を確認した。(Example 3) Isolation of actinomycetes having antibacterial activity Actinomycetes were caught from the HV medium cultured in Example 2, and streak-isolated with YM medium. Two isolated actinomycetes strains ( Streptomyces sp. A44 strain, Streptomyces sp. A51 strain) were cultured again in YM medium and HV medium, and the growth conditions were examined. A piece of YM medium on which actinomycetes were grown was placed on an NB medium smeared with Escherichia coli IID562 in advance, and formation of inhibition circles was confirmed after 24 hours.
結果を表１及び図２に示す。単離放線菌は、２５℃と３７℃で生育を示したが、５５℃では生育しなかった。なお、単離放線菌は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＩＩＤ５６２株に対して抗菌性を示した。したがって、単離放線菌は、堆積期間中に病原菌の増殖を抑制すると考えられる。The results are shown in Table 1 and FIG. The isolated actinomycetes grew at 25 ° C. and 37 ° C., but did not grow at 55 ° C. The isolated actinomycetes showed antibacterial activity against Escherichia coli IID562 strain. Thus, isolated actinomycetes are thought to suppress the growth of pathogenic bacteria during the deposition period.
（実施例４）放線菌株の特定
得られた放線菌株は、ＩＳＰ培地Ｎｏ．２（ＩＳＰ２）寒天培地（「ダイゴ」（日本製薬））にて３０℃、１週間好気培養を行い、光学顕微鏡（ＢＸ５０Ｆ４（オリンパス））と実体顕微鏡（ＳＺＨ１０（オリンパス））を用いて簡易形態観察を行った。また、１６Ｓ ｒＤＮＡ塩基配列については、ＢＬＡＳＴ相同性検索、及び分子系統解析はアポロンＤＢ−ＢＡ１０．０（テクノスルガ・ラボ）、国際塩基配列データベース（ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ）を基に解析を行った。Ａ４４株及びＡ５１株から得られた塩基配列を、それぞれ、配列番号１及び配列番号２に示す。これらの配列と、データベース上位３０株の相同率を比較した。ソフトウェアはアポロン３．０（テクノスルガ・ラボ）を使用した。比較結果を基に分子系統解析を行い、Ａ４４株、Ａ５１株の分子系統学的位置を確認した。(Example 4) Identification of actinomycete The obtained actinomycete was obtained from ISP medium No. 2 (ISP2) aerobic culture at 30 ° C. for 1 week on an agar medium (“Digo” (Nippon Pharmaceutical Co., Ltd.)) and simplified form using an optical microscope (BX50F4 (Olympus)) and a stereomicroscope (SZH10 (Olympus)) Observations were made. The 16S rDNA nucleotide sequence was analyzed based on BLAST homology search and molecular phylogenetic analysis based on Apollon DB-BA10.0 (Techno Suruga Lab) and international nucleotide sequence database (GenBank / DDBJ / EMBL). . The base sequences obtained from the A44 strain and the A51 strain are shown in SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2, respectively. These sequences were compared with the homology rates of the top 30 database strains. The software used was Apollon 3.0 (Techno Suruga Lab). Molecular phylogenetic analysis was performed based on the comparison results, and the molecular phylogenetic positions of the A44 strain and A51 strain were confirmed.
得られた放線菌株を特定した結果を表２（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４４株）及び表３（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ５１株）に示す。また、その結果、相同率の比較においてＡ４４株、Ａ５１株はデータベース上の既知種と完全に一致する相同率を示さず、分子系統学的位置においても何れの既知種とも異なる分子系統学的位置を示した。Ａ４４株及びＡ５１株分子系統解析図をそれぞれ図３及び図４に示す。これらの解析結果からＡ４４株、Ａ５１株をそれぞれＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．と同定した。この結果から、いずれもストレプトマイセスの新株であることが確認された。The results of specifying the obtained actinomycetes are shown in Table 2 ( Streptomyces sp. A44 strain) and Table 3 ( Streptomyces sp. A51 strain). As a result, in comparison of homology rates, the A44 strain and A51 strain do not show a homology rate that completely matches the known species in the database, and the molecular phylogenetic position is different from any known species in the molecular phylogenetic position. showed that. The A44 strain and A51 strain molecular phylogeny analysis diagrams are shown in FIGS. 3 and 4, respectively. From these analysis results, the A44 strain and the A51 strain were identified as Streptomyces sp. Was identified. From these results, it was confirmed that both were new strains of Streptomyces.
（実施例５）堆肥の微生物叢
バイオバランス（登録商標）Ｙ（株式会社バイオバランス、日本国愛知県名古屋市）を給与した牛の除糞物に、オガクズ加えて水分７０％に調整して堆積した。５０〜６０℃で１ケ月間静置堆積を行なった後、反転してさらに１ケ月間静置堆積を行ない肥化を完了した。完成した堆肥について、大腸菌群はＸＭＧ培地を、放線菌はＨＡ培地を用いて検査した。(Example 5) Microflora of compost Bio-balance (registered trademark) Y (Bio-balance Co., Ltd., Nagoya City, Aichi Prefecture, Japan) did. After performing static deposition at 50 to 60 ° C. for one month, it was inverted and further static deposition was performed for one month to complete the fertilization. The completed compost was examined using the XMG medium for coliform bacteria and the HA medium for actinomycetes.
その結果、大腸菌群は陰性であった。放線菌は２．０×１０５ＣＦＵ／ｇとなった。これにより、乳房炎や細菌性下痢の原因となる大腸菌群を含まない衛生的堆肥であることが示された。As a result, the coliform group was negative. Actinomycetes became 2.0 × 10 5 CFU / g. This indicated that the compost was hygienic and free of coliforms that caused mastitis and bacterial diarrhea.
（実施例６）放線菌培養物の有害菌排除作用
（１）放線菌培養物の調製
ブドウ糖４ｇ、酵母エキス４ｇを水１Ｌに溶解し液体培地とした。バーミキュライト１ｋｇに対し、水１０ｍｌを添加し固体培地とした。液体培地と固体培地はそれぞれ１２１℃、１５分間高圧蒸気滅菌を行った後、１：１に混合し放線菌培地とした。トリプチケースソイ寒天培地に塗抹し、十分に生育させたＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．Ａ４４株とＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．Ａ５１株のコロニーを採取したものを生理食塩水に懸濁して種菌とした。種菌を放線菌培地に接種し、２８日間培養を行い、培養後の放線菌培養物に含まれる放線菌数を測定した。２８日間の培養で得られた放線菌培養物に含まれる放線菌数は８．９×１０６ＣＦＵ／ｇであった。(Example 6) Exclusion of harmful bacteria by actinomycete culture (1) Preparation of actinomycete culture 4 g of glucose and 4 g of yeast extract were dissolved in 1 L of water to prepare a liquid medium. To 1 kg of vermiculite, 10 ml of water was added to obtain a solid medium. The liquid medium and the solid medium were each autoclaved at 121 ° C. for 15 minutes and then mixed 1: 1 to obtain an actinomycete medium. Streptomycins sp., Which has been smeared on Trypticase Soy Agar and fully grown. A44 strain and Streptomyces sp. What collected the colony of A51 stock | strain was suspended in the physiological saline, and was used as an inoculum. The inoculum was inoculated into the actinomycete medium, cultured for 28 days, and the number of actinomycetes contained in the cultured actinomycete culture was measured. The number of actinomycetes contained in the actinomycete culture obtained by culturing for 28 days was 8.9 × 10 6 CFU / g.
（２）放線菌培養物の有害菌排除作用試験
前記（１）で得られた放線菌培養物を堆肥の重量に対して０．２％、又は１．０％混合し、有害菌としてＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＩＩＤ５６２株を１ｇ当り１０６〜１０７ＣＦＵとなるように接種した。対照群として、放線菌を添加していない堆肥に同様にＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＩＩＤ５６２株を１ｇ当り１０６〜１０７ＣＦＵとなるように接種した。その後、全ての堆肥を５０〜６０℃で２８日間静置し、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＩＩＤ５６２株についてＸＭＧ培地を用いて検査した。(2) Test for elimination of harmful fungi by actinomycete cultures 0.2% or 1.0% of the actinomycete culture obtained in (1) above was mixed with Escherichia coli as harmful bacteria. The IID562 strain was inoculated at 10 6 to 10 7 CFU per gram. As a control group, compost not containing actinomycetes was similarly inoculated with Escherichia coli IID562 strain at 10 6 to 10 7 CFU per gram. Thereafter, all the compost was allowed to stand at 50 to 60 ° C. for 28 days, and Escherichia coli IID562 strain was examined using XMG medium.
結果を図５に示す。放線菌培養物を添加した堆肥はいずれも対照群と比べて大腸菌数が速やかに減少した。従って、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．Ａ４４株及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．Ａ５１株は、堆肥中に含まれる大腸菌を速やかに排除する効果を有することが示された。The results are shown in FIG. The compost added with actinomycete cultures rapidly decreased the number of E. coli compared to the control group. Therefore, Streptomyces sp. Strain A44 and Streptomyces sp. The A51 strain was shown to have an effect of quickly eliminating E. coli contained in compost.
（実施例７）放線菌の諸性質の検討
「放線菌の分類と同定」（日本放線菌学会編、日本学会事務センター）に記載の内容に基づき、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４４株とＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ５１株の形態的性質、培養的性質、生理学的性質について検討した。Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４４株及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ５１株の結果を、それぞれ、以下の表４及び表５に示す。(Example 7) Examination of various properties of actinomycetes Based on the contents described in “Classification and identification of actinomycetes” (edited by the Japanese Society for Actinomycetes, Japan Society for Business Administration), Streptomyces sp. A44 strain and Streptomyces sp. The morphological properties, culture properties, and physiological properties of the A51 strain were examined. Streptomyces sp. Strain A44 and Streptomyces sp. The results of the A51 strain are shown in Table 4 and Table 5 below, respectively.
（実施例８）放線菌が有する抗菌活性の検討
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４４株又はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ５１株をＴＳ寒天培地又はＹＭ寒天培地で２５℃又は３７℃で生育させた。それぞれの生育培地を５ｍｍストローで打ち抜き、寒天片を採取した。抗菌活性を測定する対象の菌（供試菌）としては、Ｅ．ｃｏｌｉ ＩＩＤ５６２、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ＮＲＩＣ０２０１、Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ ＮＲＩＣ１９８６、Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ ＮＲＩＣ１１５３、及びＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ ＮＲＩＣ１１３７を使用した。供試菌を予め塗抹したＬＢ培地に、前記寒天片を乗せ、３６〜４８時間培養後に生育阻止部分の長さを計測した。(Example 8) Examination of antibacterial activity of actinomycetes
Streptomyces sp. A44 strain or Streptomyces sp. The A51 strain was grown at 25 ° C. or 37 ° C. on TS agar medium or YM agar medium. Each growth medium was punched with a 5 mm straw, and agar pieces were collected. The bacteria of the subject for measuring the antibacterial activity (test bacteria), E. coli IID562, P. aeruginosa NRIC0201, S. aeruginosa . dysgalactiae NRIC 1986, S. dysgalactiae . uberis NRIC 1153, and S. cerevisiae . agalactiae NRIC1137 was used. The agar pieces were placed on the LB medium smeared with the test bacteria in advance, and the length of the growth inhibition portion was measured after 36 to 48 hours of culture.
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４４株及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ５１株の阻止円を測定した結果を、それぞれ表６及び表７に示す。この結果から、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４４株及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ５１株はいずれも中温域（２５℃）で３〜７日培養することにより、より強い抗菌活性を発揮することが示された。また、培養温度と培養培地の違により、抗菌スペクトルと抗菌活性の強さが異なっていたことから、二種類以上の抗菌活性物質を生産していることが推測された。Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４４株は、Ｅ．ｃｏｌｉ ＩＩＤ５６２、Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ ＮＲＩＣ１９８６、Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ ＮＲＩＣ１１５３、及びＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ ＮＲＩＣ１１３７に対して抗菌活性を示し、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ５１株は、Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ ＮＲＩＣ１１５３、及びＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ ＮＲＩＣ１１３７に対して抗菌活性を示すことが明らかとなった。
Claims (19)
ｂ）前記糞便を堆積して静置するステップ、
ｃ）前記工程により得られた堆肥を反転させるステップ、及び、
ｄ）前記堆肥を静置するステップ、
を備える、請求項７に記載の製造方法。 a) preparing stool water obtained from a livestock animal fed a feed containing Lactobacillus delbrueckii ANTI MUFFA (FERM BP-10663);
b) depositing the stool and standing still;
c) reversing the compost obtained by the process, and
d) settling the compost;
The manufacturing method of Claim 7 provided with these.
ｂ）前記糞便を堆積して静置するステップ、
ｃ）前記工程により得られた堆肥を１回反転させるステップ、及び、
ｄ）前記堆肥を静置するステップ、
を備える、堆肥中の２０℃〜４０℃の好気条件下で生育する放線菌数を増加させる方法であって、放線菌又は放線菌を含有する資材を添加しないことを特徴とする、方法。 a) preparing stool water obtained from a livestock animal fed a feed containing Lactobacillus delbrueckii ANTI MUFFA (FERM BP-10663);
b) depositing the stool and standing still;
c) reversing the compost obtained by the process once, and
d) settling the compost;
A method for increasing the number of actinomycetes grown under aerobic conditions in compost at 20 ° C. to 40 ° C., wherein no actinomycetes or materials containing actinomycetes are added .
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