JP6613399B2 - Hbvに対する免疫応答を生じさせるために用いられるウイルス様粒子 - Google Patents
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Description
本発明のウイルス様粒子は、数種類の遺伝子型のHBVに対して免疫反応を惹起させるために用いることができる。HBVの遺伝子型とは、HBVの変異体に伴って区別された群であり、HBV遺伝子配列の相違が8%を超える場合には異なる遺伝子型と定義されている。今後、更に遺伝子型の分類が増える場合もあり、確認されているHBVの遺伝子型である限り、特に限定はされない。このように区別される各遺伝子型のHBVが有するアミノ酸配列間の同一性は、約92%以上である。具体的なHBVの遺伝子型として、例えば、A、B、C、D、E、F、G、H、I及びJを挙げることができる。本明細書において「遺伝子型AのHBs-L抗原タンパク質」との表記は、「遺伝子型AのHBVに由来するHBs-L抗原タンパク質」であることを意味する。他の遺伝子型B〜JのHBs-L抗原タンパク質との記載も同様である。
第一の態様のウイルス様粒子は、これに含有されるHBs-L抗原タンパク質が単一種類の遺伝子型であるウイルス様粒子である。第一の態様のウイルス様粒子に含有されるHBs-L抗原タンパク質の個数は、1個又は2個以上である。第一の態様のウイルス様粒子とは、1個又は2個以上の膜貫通ドメインを有するタンパク質であるHBs-L抗原タンパク質及び脂質二重膜を主成分とする粒子であり、斯かる粒子内部に遺伝情報を司るDNA又はRNA等の核酸を有さない粒子である。
第二の態様のウイルス様粒子は、2種以上の遺伝子型のHBs-L抗原タンパク質を含有する、ウイルス様粒子である。第二の態様のウイルス様粒子に含有されるHBs-L抗原タンパク質の個数は、1個又は2個以上である。第二の態様のウイルス粒子も、1個又は2個以上の膜貫通ドメインを有するタンパク質であるHBs-L抗原タンパク質及び脂質二重膜を主成分とする粒子であり、斯かる粒子内部に遺伝情報を司るDNA又はRNA等の核酸を有さない粒子である。
本発明には、上記する二種類以上の遺伝子型のHBVに対して免疫反応を惹起させるために用いることができるウイルス様粒子の組み合わせを含有する、ウイルス様粒子組成物も包含される。このようなウイルス様粒子組成物も、数種類の遺伝子型のHBVに対して免疫反応を惹起させるために用いることができる。このようなウイルス様粒子組成物として、下記に示す4つの態様を挙げることができる。
本発明の第一の態様のウイルス様粒子組成物は、第一の態様のウイルス様粒子の何れか1種及びHBs-L抗原タンパク質として遺伝子型CのHBs-L抗原タンパク質若しくはその変異体のみを含有するウイルス様粒子(本明細書において、これを「C粒子」と呼ぶことがある。)を含有するウイルス様粒子組成物である。
本発明の第二の態様のウイルス様粒子組成物は、第一の態様のウイルス様粒子の複数の混合物を含有するウイルス様粒子組成物である。第二の態様のウイルス様粒子組成物に含有される、第一の態様の各ウイルス様粒子が有するHBs-L抗原タンパク質の遺伝子型は、異なる種類とすることができる。
本発明の第三の態様のウイルス様粒子組成物は、第二の態様のウイルス様粒子の複数の混合物を含有するウイルス様粒子組成物である。第二の態様のウイルス様粒子組成物に含有される、各ウイルス様粒子が有するHBs-L抗原タンパク質の遺伝子型は、異なる種類の遺伝子型となっていてもよい。
本発明のウイルス様粒子組成物の第四の態様は、第一の態様のウイルス様粒子及び上記する第二の態様のウイルス様粒子を含有するウイルス様粒子組成物である。第四の態様のウイルス様粒子組成物に含有される、各ウイルス様粒子が有するHBs-L抗原タンパク質の遺伝子型は、同一の遺伝子型のものが含まれていてもよい。
本発明のHBVの予防用及び/又は治療用ワクチンは、上記するウイルス様粒子又はウイルス様粒子組成物を含有する。本発明のHBVの予防用及び/又は治療用ワクチンに含有されるウイルス様粒子又はウイルス様粒子組成物の量は、特に限定されない。例えば、HBVの予防用及び/又は治療用ワクチン当たり、通常は0.0001〜100質量%程度とすることができる。
<実施例1>
遺伝子型A、B、C及びDのPre-S1の融合タンパク質及びそれらのペプチドの作製
(1)ベクターの構築
各遺伝子型のPre-S1ペプチドをコードするDNA配列は、以下の表2に示すテンプレートを基に、PCR法にて作製した。
上記(1)で作製したベクターを用いて、大腸菌株BL21(DE3)pLysSを形質転換し、それらの発現株を得た。各発現株をIPTG誘導下で培養し、その破砕液からChelating Sepharose Fast Flow(GE Healthcare)カラムを使用して、各遺伝子型のPre-S1-TRX融合タンパク質を得た。これらにヒトライノウイルス3Cプロテアーゼを添加して、各遺伝子型のPre-S1ペプチドとTRXタンパク質とを分離後、上記カラムに添加し、その溶出液を精製Pre-S1ペプチドとした。
得られた各遺伝子型のPre-S1-TRX融合タンパク質をSDS-PAGEに供した後、CBB染色を行った結果、分子量が約31kDaの位置にバンドを認めた(図3A)。Pre-S1-TRX融合タンパク質を抗Pre-S1抗体(マウスモノクローナル抗体、ビークル社;BCL-AB-001)と2次抗体として抗マウスIgG-HRP(Rockland, 210-4302)とを用いたウェスタンブロット(本明細書において、これを「WB」と呼ぶことがある。)解析に供した結果、分子量約31kDaの位置にバンドが検出された(図3B)。これらの結果から、各遺伝子型のPre-S1-TRX融合タンパク質の精製を確認することができた。また、上記する精製後のPre-S1ペプチドをSDS電気泳動に供した結果、分子量が約11kDaとなる位置にバンドを認めた(図3C)。この結果から、目的とする各遺伝子型のPre-S1-ペプチドの精製を確認することができた。
(1)プラスミド型発現ベクターを用いた、遺伝子型CのL抗原及びM抗原粒子の作製
遺伝子型CのHBsAg-L抗原タンパク質(これを、本明細書において「Lcタンパク質」呼ぶことがある。)からなる抗原粒子は、特許第4085231号に示したベクターを用いて、特許第4936272号に示した精製法によって調製した。このようにして得られた粒子に含有される抗原タンパク質は、Lcタンパク質のみからなり、この粒子を本明細書において「Lc抗原」と呼ぶことがある。また、LC遺伝子のPre-S1領域を欠いた、図4に示す発現ベクターpGLD-MCを作製し、Lc抗原と同じ手法で発現株を調製して、これを培養した菌体からMc抗原タンパク質からなるMc抗原(M抗原粒子)を精製した。
(1)にて得られたLc抗原をSDS-PAGEに供した後、銀染色を行った結果を図5Aに示す。Lcタンパク質(分子量約42kDa)は糖鎖修飾の影響を受けて45kDaよりやや大きい所にモノマーに該当するバンドが認められ、97kDa付近にダイマーに該当するバンドが認められた。Mc抗原も同様に解析した結果、図5Cに示すように、Mc抗原は、分子量約32kDa付近にモノマーに該当するバンドが認められた。
プラスミド型発現ベクターpGLD-His4の作製
Lc抗原発現用プラスミドpGLD-LIIP39-RcT(特許第4085231号)を基に、図7に示すpGLD-His4ベクターを作製した。His4遺伝子断片は、出芽酵母のNA87-11A株のゲノムDNAから調製したものである。
(1)プラスミド型発現ベクターを用いた遺伝子型A、B及びDのL抗原粒子の作製
遺伝子型A、B及びDのLタンパク質(本明細書において、これらを、それぞれ「Laタンパク質」、「Lbタンパク質」及び「Ldタンパク質」と呼ぶことがある。)をコードする遺伝子(本明細書において、これらを、それぞれ「LA遺伝子」、「LB遺伝子」及び「LD遺伝子」と呼ぶことがある。)を、上記する表2に記載のテンプレートを用いてPCRを行い、これらを増幅した。
(1)にて調製した抗原粒子をSDS-PAGEに供した後、銀染色を行った結果を図9Aに示す。La、Lb及びLdタンパク質の分子量は、それぞれ約42kDaであるが、糖鎖修飾により、それより大きい位置にモノマーバンドが認められ、その倍の位置に僅かにダイマーバンドが認められた。
Lc抗原発現用ゲノム組込型ベクターpRS-Ura3-LC3及びpRS-Leu2-LC2の作製
実施例2で使用したLc抗原発現用ベクターから調製したLC遺伝子、プロモーター及びターミネーターを含むLcタンパク質発現カセットを、pRS406(Stratagene)に段階的に挿入し、図10に示すLC遺伝子を3つ含むpRS-Ura3-LC3を作製した。
(1)ゲノム組み込み型ベクターpRS-Ura3-LC3及びpRS-Leu2-LC2を用いたLc抗原発現株の作製及びLc抗原粒子の精製
直鎖化したpRS-Ura3-LC3を用いて、酵母株AH22R-U(Ura3、Leu2、及びHis4変異株)を形質転換した。これを定法に従ってスクリーニングし、Lc抗原発現株(AH22R-U/Ura3株)を得た。続いて、直鎖化したpRS-Leu2-LC2を用いて、AH22R-U/Ura3株を形質転換し、これを定法に従ってスクリーニングしてLc抗原発現株(AH22R-U/Ura3/Leu2株)を得た。この発現株を液体培養して得られた発現菌体から、実施例2と同様の方法でLc抗原粒子を精製した。
(1)にて得られた抗原粒子をSDS-PAGEに供した後、銀染色を行った結果を図12Aに示す。ゲノム組込型のLc抗原も、図5に示すプラスミド発現型のLc抗原と同じ位置に、モノマーが認められ、その倍の位置にダイマーバンドが認められた。なお、上記実施例2及び4と同様に(1)で得られたLc抗原粒子の粒子径は、60.1nm程度であった。
L抗原投与時の抗体産生
実施例2にて作製したLc抗原粒子及びMc抗原粒子と、アラムアジュバントとを混合させて投与製剤を調製した。遺伝子型CのS抗原粒子として、アラムアジュバントを用いて調製された市販のビームゲン(化血研)を利用した。これらをICR系統マウス(3個体を一群とする)に、1匹当り各抗原の5μgを、2週間間隔で3回投与し、最終投与から4週間後に採血して、抗血清を調製した。
各種遺伝子型のPre-S1ペプチドで調製した抗血清及び各遺伝子型のPre-S1の認識
実施例1で得られた4種の遺伝子型のPre-S1ペプチドとフロイントアジュバントとを混合させて投与製剤を調製した。これらを用いて実施例7と同様に、抗血清を調製した。実施例1で調製した4種のPre-S1-TRX融合タンパク質を固相化させたELISAプレートに、希釈した各抗血清を添加し、HRP標識抗マウス抗体を検出抗体として用い(基質はTMB)、各抗血清と各Pre-S1との結合の程度を測定した結果を図14に示す。
各種遺伝子型L抗原投与による抗体産生
実施例2及び4で調製した各遺伝子型(A〜D型)のL抗原(各5μg)とフロイントアジュバントとを混合させて投与製剤を調製した。これらを、実施例7の方法でICR系統のマウスに免疫して抗血清を調製し、抗S抗体、抗Pre-S2抗体及び抗Pre-S1抗体の産生量を、実施例7と同様に測定した結果を図15に示す。各遺伝子型のL抗原粒子の免疫により、抗S抗体、抗Pre-S2抗体及び抗Pre-S1抗体が産生された。いずれの遺伝子型でも抗Pre-S1抗体の産生量が最も高く、抗S抗体又は抗Pre-S2抗体の4倍〜数100倍であった。
異なる遺伝子型のL抗原を混合投与した抗血清による各種遺伝子型Pre-S1の認識
下記の表3(各種遺伝子型のL抗原を混合投与した時の各遺伝子型のPre-S1に対する結合)に示すように、実施例2及び実施例4で調製した2種又は3種の遺伝子型のL抗原を等量混合し、L抗原の総量として5μgを、実施例9と同様の方法で3個体のICR系統マウスに免疫し、抗血清を得た。
抗原として、Lc及びLdタンパク質からなるハイブリッド型L抗原発現株(Lh1抗原)
(1)プラスミド型によるLh1発現株の作製
実施例4で調製したLd抗原発現用プラスミドpGLD-His4-LDを用いて、実施例6で調製したゲノム組込型Lc抗原発現株(AH22R-U/Ura3/Leu2株)を形質転換し、これを定法に従ってスクリーニングして、1つの粒子内にLcタンパク質及びLdタンパク質を含むハイブリッドL抗原(本明細書において、これを「Lh1抗原」と呼ぶことがある。)の発現株を得た。
pRS406のURA3をHIS4に置き換えたpRS-His4を作製し、これに実施例4で調製したLd抗原発現用ベクターから調製したLD遺伝子、プロモーター及びターミネーターを含むLd抗原発現カセットを挿入し、図19に示す2つのLD遺伝子を含むpRS-His4-LD2を作製した。
酵母株(AH22R-U)を、実施例5で作製したLc抗原発現ベクターpRS-Leu2-LC2で形質転換し、これを定法に従ってスクリーニングして、Lc発現株を得た。このLc発現株を、実施例5と同様の方法で作製した、図20に示すLd抗原発現ベクターpRS-Ura3-LD2で形質転換し、これを定法に従ってスクリーニングして、Lh1発現株を取得した。
Lh1抗原の製造と確認
(1)Lh1抗原の培養と精製
実施例11の(1)から(3)で得たLh1発現株を液体培地で培養して得られた菌体から、実施例2と同様にLh1抗原粒子を精製した。
遺伝子型CのPre-S1-TRX抗原をウサギに免疫して得られた抗血清からIgGを精製した。このIgGを遺伝子型D型のPre-S1-TRX固定カラムに2回通して、遺伝子型DのPre-S1に結合するIgGを除去し、遺伝子型CのPre-S1を特異的に検出する抗Pre-S1c抗体とした。また、遺伝子型DのPre-S1-TRX抗原をウサギに免疫して得られた抗血清からIgGを精製し、これを遺伝子型CのPre-S1-TRX固定カラムに2回通して、遺伝子型DのPre-S1を特異的に検出する抗Pre-S1d抗体とした。
実施例11(2)の発現株から精製したLh1抗原をSDS-PAGEに供した後、銀染色を行った結果を図21Aに示す。Lタンパク質は、糖鎖修飾により分子量の42 kDaよりやや大きい位置に認められた。
抗原として、Lc及びLd2抗原からなるハイブリッド型L抗原粒子(Lh1b抗原)
(1)プラスミド型Ld2抗原発現ベクターの作製
遺伝子型DのPre-S1領域と遺伝子型CのPre-S2及びS領域とからなるLd2タンパク質の発現ベクターを下記の様に作製した。実施例4で作製したLd発現ベクターpGLD-His4-LDをテンプレートとして、Pre-S2及びS領域以外の領域(Pre-S1及びベクター部分)をインバースPCR法で増幅した。別途、表2に記載する遺伝子型Cをテンプレートとして、遺伝子型CのPre-S2領域及びS領域の断片を作製した。これを、上記Pre-S1領域を有するベクター断片に組み込んで、図23に示すpGLD-His4-LD2を作製した。なお、Ld2タンパク質のみからなる粒子を、本明細書において「Ld2抗原」と呼ぶことがある。
実施例4と同様に、酵母(AH22R-株)をpGLD-His4-LD2で形質転換し、Ld2抗原発現株を取得した。また、実施例6で作製したLc抗原発現株をpGLD-His4-LD2で形質転換し、これを定法に従ってスクリーニングして、Lh1b抗原発現株を取得した。これを培養して得られた菌体から、実施例2と同様の方法でLd2抗原とLh1b抗原とを精製した。精製したLd2抗原と、精製Lh1b抗原とをSDS-PAGEに供した後、銀染色を行った結果、図24に示すように、モノマー及びダイマー付近の位置にバンドが認められた。また両者をWBに供した結果、抗Pre-S1d抗体ではいずれの抗原も所定の位置に検出され、抗Pre-S1c抗体ではLd抗原では検出されなかったが、Lh1d抗原では検出された。なお、WBで利用した抗体は、実施例12で用いたものと同じである。
実施例2で作製したLc抗原と精製したLd2抗原とのそれぞれ5μgを実施例7と同様の方法で、各3個体のマウスに免疫し、抗血清を得た。得られた抗血清を用いて、実施例8と同様の方法で、4種の遺伝子型のPre-S1に対する結合を観察した。各群で得られた結果の平均値を表5に示す。
抗原として、La及びLd抗原からなるハイブリッド型L抗原(Lh2抗原)
実施例5と同様の方法で、図25に示すゲノム組込型La発現ベクターpRS-Leu2-LA2を作製した。これを用いて酵母株AH22R-U株を形質転換し、これを定法に従ってスクリーニングして、La抗原発現株を得た。次いで、得られたLa抗原発現株を、実施例11で作製したLd発現ベクターpRS-His4-LD2で形質転換し、これを定法に従ってスクリーニングして、Laタンパク質及びLdタンパク質を発現する酵母株を取得した。この株を培養して得られた菌体から、実施例2と同様の方法でLh2抗原を精製した。得られた精製Lh2抗原をSDS-PAGEに供した後、銀染色を行った結果、図26に示すように、モノマー及びダイマー付近の分子量の位置にバンドが認められた。
抗原として、Lb及びLc抗原からなるハイブリッド型L抗原(Lh3抗原)
実施例5と同様の方法で、図27に示すゲノム組込型Lb発現ベクターpRS-Leu2-LB2を作製した。これを用いて、実施例6で作製したLc抗原発現株(AH22R-U/Ura3株)を形質転換し、これを定法に従ってスクリーニングして、Lbタンパク質及びLcタンパク質を発現する酵母株を取得した。この株を培養して得られた菌体から、実施例2と同様の方法でLh3抗原を精製した。得られた精製Lh3抗原をSDS-PAGEに供した後、銀染色を行った結果、図28に示すように、モノマー及びダイマー付近の位置にバンドが認められた。
抗原として、Lb、Lc及びLdタンパク質からなるハイブリッド型L抗原(Lh4抗原)
実施例11(2)で作製したゲノム組込型Ld発現ベクターpRS-His4-LD2を用いて、実施例15で作製したLh3抗原(Lb及びLcタンパク質)発現株を形質転換し、これを定法に従ってスクリーニングして、Lb、Lc及びLdタンパク質を発現する酵母株を取得した(Method1)。また、実施例11(3)で作製したLh1発現株(Lc及びLdタンパク質)を、実施例4で作製したpGLD-His4-LBで形質転換し、これを定法に従ってスクリーニングして、Lb、Lc及びLdタンパク質を発現する酵母株を取得した(Method2)。得られた2種のLh4抗原発現株を培養して得られた菌体から、実施例2と同様の方法でLh4抗原を精製した。得られた精製Lh4抗原をSDS-PAGEに供した後、銀染色を行った結果、図29に示すように、いずれの発現株から得られたLh4抗原も、モノマー及びダイマー付近の位置にバンドが認められた。
Lh1抗原投与時の抗体産生及びLa、Lb、Lc及びLd抗原に対する結合
実施例12で製造したLh1抗原及びS抗原粒子(Fitzgerald社)で、実施例9と同じ方法により、各群4個体のマウスを免疫して抗血清を調製し、実施例7と同様の方法で抗Pre-S1抗体、抗Pre-S2抗体及び抗S抗体の産生量を測定した。この結果を図30に示す。コントロールであるS抗原による免疫では、抗S抗体のみを産生したが、Lh1抗原による免疫では、抗S抗体、抗Pre-S2抗体及び抗Pre-S1抗体を産生した。この場合の抗S抗体の産生量は、S抗原の免疫による産生量とほぼ同等であり、抗Pre-S2抗体の産生量は、抗S抗体の産生量より僅かに低かった。また、抗Pre-S1抗体は、他の2種の抗体より著しく多く産生され、その産生量は、抗S抗体の4倍以上、そして抗Pre-S2抗体の10倍程度であった。
Lh1抗原投与時の抗体産生のタイムコース
20μgのLh1抗原及びアラムアジュバントの混合物を、ICR系統マウスに1回、皮下投与で免疫し、免疫したマウスから得られる抗血清中の抗Pre-S1抗体、抗Pre-S2抗体及び抗S抗体が産生されるタイムコースを検討した。各抗体の測定は、実施例7と同様に行った。この結果を図32に示す。
抗Lh1抗体によるエスケープ変異抗原の検出
Lc抗原のS領域の129及び145位にアルギニンを導入しエスケープ変異体とした抗原であるHBs-L-ST抗原(ビークル社製:BCL-AGS-02)を固相化し、実施例7で使用した抗S抗体の結合を観察した結果を図33に示す。HBs-L-ST抗原は殆ど検出できなかったが、対照のS抗原及びLh1抗原は検出された。即ち、HBs-L-ST抗原は通常の抗S抗体では検出できないエスケープ変異体の性質を持つことを示す。
Lh1b、Lh2、Lh3及びLh4による抗体産生
実施例13〜16で調製したLh1b、Lh2、Lh3及びLh4抗原を、実施例9と同じ方法でICR系統マウスに免疫して抗血清を得た。得られた各抗血清の、遺伝子型A、B、C及びDのPre-S1に対する結合の程度を、実施例8に示す方法で測定した。なお、結果は、Lh1b抗血清では遺伝子型CのPre-S1、Lh2抗血清では遺伝子型AのPre-S1、Lh3抗血清では遺伝子型BのPre-S1、及びLh4抗血清では遺伝子型CのPre-S1への結合の程度を100%として、その他の遺伝子型のPre-S1に対する結合の程度の相対値で示した。なお、全ての値は、3個体から得られた抗血清の測定値の平均である。結果を表6(各種ハイブリッド型L抗原による免疫で得られた抗血清の各種遺伝子型Pre-S1に対する結合)に示す。
Lh1及びLh4抗原で得られた抗血清によるHBV感染中和活性
実施例9で調製したLa、Lb、Lc及びLd抗原に対する抗血清、実施例17で調製したLh1抗原に対する抗血清、実施例20で調製したLh4抗原に対する抗血清及び正常マウスから調製した血清(陰性コントロール)の、HepG2-hNTCP-C4細胞(非特許文献2)を用いたHBV感染中和活性を観察した。
コア抗原の製造
B型肝炎ウイルスのコア抗原(C抗原)遺伝子を accesion No: LC090200 のアミノ酸配列(配列番号66)を基に人工合成し、これをpET19b(Novagen)に挿入して、図34に示すC抗原発現ベクターpET19b-HBcAgを作製した。このベクターで大腸菌株BL21(DE3)pLysSを形質転換し、C抗原発現株を得た。これを培養して得られた菌体から、Palenzuela等の報告(Palenzuela PO et al, Biotecnologia Aplicada, 2002, 19: 138-142)と同様の方法でC抗原を精製した。
Lh抗原及びC抗原投与時の細胞性免疫
実施例12で調製したLh1抗原及び実施例22で調製したC抗原を、各々単独で各5μgで又はそれらの両者の等量の混合物(各5μg)と、フロイントアジュバントとを混合した投与製剤を、ICR系統マウスに10日間隔で3回皮下投与により免疫した。最終投与の1週間後に、その脾臓細胞を採取し、定法に従ってこれを培養した。採取の翌日にLh1抗原、C抗原又はその混合物を終濃度10μg/mLで培養細胞を刺激し、刺激後4日目の培養上清中のインターフェロンγ(INFγ)量を、ELISA(Murine INFγ ELISA kit, Diaclone社)にて測定して細胞性免疫の活性化を検討した。脾臓細胞のINFγの放出能を確認するための陽性対照刺激としてコンカナバリンA(10μg/mL)の刺激も行った。その結果を図36に示す。
Lh1抗原及びC抗原又はS抗原及びC抗原の混合物で免疫した場合の細胞性免疫の活性化
Lh1抗原及びC抗原の混合物又はS抗原及びC抗原の混合物(各5μg)を実施例23と同様に、マウスに免疫し、脾臓細胞を採取し培養した。採取の翌日に培養細胞を各種抗原で刺激(終濃度10μg/ml)し、INFγの放出量を測定した結果を表8(Lh1抗原及びC抗原またはS抗原及びC抗原の混合物で免疫した場合の細胞性免疫の活性化)に示す。表8の各数値は、INFγの放出量(pg/ml)を示す。
Claims (5)
- 2種類以上のHBs−L抗原タンパク質を含有するウイルス様粒子であって、前記HBs−L抗原タンパク質の遺伝子型がA型、B型、C型、及びD型からなる群より選択され、2種類以上の遺伝子型のHBVに対する体液性免疫又は細胞性免疫を生じさせるために用いられる、ウイルス様粒子であって、当該ウイルス様粒子に含有されるHBs−L抗原タンパク質は、
[1]
(a)A型のHBs−L抗原タンパク質及び
(b)B型のHBs−L抗原タンパク質
からなるか、
[2]
(a)A型のHBs−L抗原タンパク質及び
(b)D型のHBs−L抗原タンパク質
からなるか、
[3]
(a)B型のHBs−L抗原タンパク質及び
(b)C型のHBs−L抗原タンパク質
からなるか、
[4]
(a)B型のHBs−L抗原タンパク質及び
(b)D型のHBs−L抗原タンパク質
からなるか、
[5]
(a)C型のHBs−L抗原タンパク質及び
(b)D型のHBs−L抗原タンパク質
からなるか、
[6]
(a)B型のHBs−L抗原タンパク質、
(b)C型のHBs−L抗原タンパク質、及び
(c)D型のHBs−L抗原タンパク質
からなる、ウイルス様粒子であって、
該A型のHBs−L抗原タンパク質は、配列番号1〜9の何れかに示すアミノ酸配列を有するか、又は配列番号1〜9の何れかに示すアミノ酸配列をコードする塩基配列に対し、8%を超えない変異が導入された塩基配列から翻訳されるアミノ酸配列を有し、
該B型のHBs−L抗原タンパク質は、配列番号10〜18の何れかに示すアミノ酸配列を有するか、又は配列番号10〜18の何れかに示すアミノ酸配列をコードする塩基配列に対し、8%を超えない変異が導入された塩基配列から翻訳されるアミノ酸配列を有し、
該C型のHBs−L抗原タンパク質は、配列番号19〜28の何れかに示すアミノ酸配列を有するか、又は配列番号19〜28の何れかに示すアミノ酸配列をコードする塩基配列に対し、8%を超えない変異が導入された塩基配列から翻訳されるアミノ酸配列を有し、及び
該D型のHBs−L抗原タンパク質は、配列番号29〜38の何れかに示すアミノ酸配列を有するか、又は配列番号29〜38の何れかに示すアミノ酸配列をコードする塩基配列に対し、8%を超えない変異が導入された塩基配列から翻訳されるアミノ酸配列を有する、
ウイルス様粒子。 - 請求項1に記載するウイルス様粒子及び単一種類のHBs−L抗原タンパク質を含有するウイルス様粒子であって、前記単一種類のHBs−L抗原タンパク質の遺伝子型がA、B、C、又はDの何れかであって、
該A型のHBs−L抗原タンパク質は、配列番号1〜9の何れかに示すアミノ酸配列を有するか、又は配列番号1〜9の何れかに示すアミノ酸配列をコードする塩基配列に対し、8%を超えない変異が導入された塩基配列から翻訳されるアミノ酸配列を有し、
該B型のHBs−L抗原タンパク質は、配列番号10〜18の何れかに示すアミノ酸配列を有するか、又は配列番号10〜18の何れかに示すアミノ酸配列をコードする塩基配列に対し、8%を超えない変異が導入された塩基配列から翻訳されるアミノ酸配列を有し、
該C型のHBs−L抗原タンパク質は、配列番号19〜28の何れかに示すアミノ酸配列を有するか、又は配列番号19〜28の何れかに示すアミノ酸配列をコードする塩基配列に対し、8%を超えない変異が導入された塩基配列から翻訳されるアミノ酸配列を有し、及び
該D型のHBs−L抗原タンパク質は、配列番号29〜38の何れかに示すアミノ酸配列を有するか、又は配列番号29〜38の何れかに示すアミノ酸配列をコードする塩基配列に対し、8%を超えない変異が導入された塩基配列から翻訳されるアミノ酸配列を有する、
2種類以上の遺伝子型のHBVに対する体液性免疫又は細胞性免疫反応を生じさせるために用いられる、ウイルス様粒子の少なくとも2種類以上を含有する、ウイルス様粒子組成物。 - 2種類以上の遺伝子型のHBVに対する体液性免疫又は細胞性免疫を生じさせるために用いられるウイルス様粒子組成物であって、
該ウイルス様粒子組成物は、
単一種類のHBs−L抗原タンパク質を含有するウイルス様粒子の2種類以上の組み合わせを含有し;
該組み合わせは、
[1]
(a)A型のHBs−L抗原タンパク質を含有するウイルス様粒子、及び
(b)B型のHBs−L抗原タンパク質を含有するウイルス様粒子
の組み合わせ、
[2]
(a)A型のHBs−L抗原タンパク質を含有するウイルス様粒子、及び
(b)D型のHBs−L抗原タンパク質を含有するウイルス様粒子
の組み合わせ、
[3]
(a)B型のHBs−L抗原タンパク質を含有するウイルス様粒子、及び
(b)C型のHBs−L抗原タンパク質を含有するウイルス様粒子
の組み合わせ、
[4]
(a)B型のHBs−L抗原タンパク質を含有するウイルス様粒子、及び
(b)D型のHBs−L抗原タンパク質を含有するウイルス様粒子
の組み合わせ、
[5]
(a)C型のHBs−L抗原タンパク質を含有するウイルス様粒子、及び
(b)D型のHBs−L抗原タンパク質を含有するウイルス様粒子
の組み合わせ、又は、
[6]
(a)B型のHBs−L抗原タンパク質を含有するウイルス様粒子、
(b)C型のHBs−L抗原タンパク質を含有するウイルス様粒子、及び
(c)D型のHBs−L抗原タンパク質を含有するウイルス様粒子
の組み合わせ、
であり;且つ
前記A型のHBs−L抗原タンパク質は、配列番号1〜9の何れかに示すアミノ酸配列を有するか、又は配列番号1〜9の何れかに示すアミノ酸配列をコードする塩基配列に対し、8%を超えない変異が導入された塩基配列から翻訳されるアミノ酸配列を有し、
前記B型のHBs−L抗原タンパク質は、配列番号10〜18の何れかに示すアミノ酸配列を有するか、又は配列番号10〜18の何れかに示すアミノ酸配列をコードする塩基配列に対し、8%を超えない変異が導入された塩基配列から翻訳されるアミノ酸配列を有し、
前記C型のHBs−L抗原タンパク質は、配列番号19〜28の何れかに示すアミノ酸配列を有するか、又は配列番号19〜28の何れかに示すアミノ酸配列をコードする塩基配列に対し、8%を超えない変異が導入された塩基配列から翻訳されるアミノ酸配列を有し、及び
前記D型のHBs−L抗原タンパク質は、配列番号29〜38の何れかに示すアミノ酸配列を有するか、又は配列番号29〜38の何れかに示すアミノ酸配列をコードする塩基配列に対し、8%を超えない変異が導入された塩基配列から翻訳されるアミノ酸配列を有する、
ウイルス様粒子組成物。 - 請求項1〜3の何れか1項に記載するウイルス様粒子又はウイルス様粒子組成物と、HBVのコア抗原を含有するウイルス様粒子とを含有する、ウイルス様粒子組成物であって、2種類以上の遺伝子型のHBVに対する体液性免疫又は細胞性免疫反応を生じさせるために用いられる、ウイルス様粒子の少なくとも2種類以上を含有する、ウイルス様粒子組成物。
- 請求項1〜4の何れか1項に記載するウイルス様粒子又はウイルス様粒子組成物を含む、B型肝炎の治療用及び/又は予防用ワクチン。
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