JP6605706B2

JP6605706B2 - 保存安定性が向上した医薬組成物及びその製造方法

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Publication number: JP6605706B2
Application number: JP2018504184A
Authority: JP
Inventors: キム・ボンオ; ミン・ポムチャン; キム・ジヨン; キム・ヘリム; ソ・ミンヒョ; イ・サウォン; イ・イルウン; チョ・ジュンウン; チェ・インジャ
Original assignee: Samyang Biopharmaceuticals Corp
Current assignee: Samyang Biopharmaceuticals Corp
Priority date: 2015-07-28
Filing date: 2016-07-28
Publication date: 2019-11-13
Anticipated expiration: 2036-07-28
Also published as: EP3328434A4; KR20170015198A; CN111574702A; KR101748191B1; MX2018001219A; RU2018107052A3; IL257185A; AU2016299544A1; RU2018107052A; CN106559983A; ZA201801189B; HK1249439A1; EP3328434A1; CA2993920A1; WO2017018816A1; BR112018001736A2; JP2018521094A

Description

本発明は、保存安定性が向上した医薬組成物及びその製造方法に関するものであり、より詳しくは、両親媒性ブロック共重合体を含む難水溶性薬物の医薬組成物であって、特定の類縁物質の含有量が規定限度内で保たれる医薬組成物、及びその製造方法に関するものである。

難水溶性薬物の可溶化は、薬物を経口又は非経腸投与により体内に送達するための重要な技術である。このような可溶化法は、水溶液に界面活性剤を加えてミセルを形成させ、その後難溶性薬物をそれに封入させる方法を含む。界面活性剤として用いられる両親媒性ブロック共重合体は、親水性高分子ブロック及び疎水性高分子ブロックを含む。親水性高分子ブロックは、インビボで血中タンパク質及び細胞膜と直接接触するため、生体適合性を有するポリエチレングリコール又はモノメトキシポリエチレングリコールなどが使用されてきた。疎水性高分子ブロックは、疎水性薬物との親和性を向上させ、生分解性を有するポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ（ラクチック−グリコリド）、ポリカプロラクトン、ポリアミノ酸又はポリオルトエステルなどが使用されてきた。特に、ポリラクチド誘導体は、優れた生体適合性を有し、インビボで無害な乳酸に加水分解されるため、様々な形態で薬物キャリアーに応用されている。ポリラクチド誘導体は、その分子量によって様々な物理的特性を有し、マイクロスフェア（microsphere）、ナノ粒子（nanoparticle）、高分子ゲル（polymeric gel）及びインプラント剤（implant agent）等の形態に開発されている。

特許文献１は、高分子ミセル型薬物キャリアー及び難水溶性薬物からなる、難水溶性薬物を送達するための組成物であって、該高分子ミセル型薬物キャリアーは、架橋剤により架橋されていないジブロック又はトリブロック共重合体から形成され、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ（ラクチド−ポリグリコリド）、ポリカプロラクトン及びこれらの誘導体からなる群より選ばれる少なくとも１つの生分解性疎水性ポリマー及び親水性ポリマーとしてのポリ（アルキレンオキシド）からなり、前記難水溶性薬物は、薬物キャリアーに封入されて、可溶化され、前記高分子ミセル型薬物キャリアーは、澄明な水溶液を形成し、体内へ難水溶性薬物を効果的に送達する、組成物を開示している。上記特許文献１によれば、モノメトキシポリエチレングリコールから水分を除去し、トルエンに溶解させたオクタン酸第１スズ（stannous octoate）をそれに加え、減圧下トルエンを除去し、得られた混合物にＤ，Ｌ−ラクチドを加え、重合反応させ、クロロホルムを加えて、生成したブロック共重合体を溶解させ、撹拌しながら過量のジエチルエーテルを少量ずつ滴下して、沈殿物を形成させ、形成した沈殿物をろ過し、それをジエチルエーテルで数回洗浄することにより、ポリエチレングリコール−ポリラクチドジブロック共重合体を合成する。しかしながら、この方法は大量生産に用いることが困難であり、それ故に、商業的に利用可能でない。また、精製に用いられるエーテルは、最終高分子ミセル組成物に残り得る。

特許文献２は、（ａ）両親媒性ブロック共重合体を水混和性有機溶媒に溶解させる工程；（ｂ）工程（ａ）で得られた高分子溶液に、アルカリ金属塩（重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、炭酸カリウム又は炭酸リチウム）の水溶液を添加して、混合する工程；（ｃ）工程（ｂ）で得られた溶液を塩析することによって有機層と水層を分離する工程；及び（ｄ）工程（ｃ）で得られた有機層を単離し、有機溶媒をそれから除去して、高分子を回収する工程を含む、両親媒性ブロック共重合体の製造方法を開示している。しかしながら、この方法は、複雑な工程を含み、アルカリ金属塩及び塩析用いられる塩（炭酸ナトリウム又は塩化カリウム）を除去するために更なる工程が必要とされ、そして除去後であっても残留金属塩を有し得る。

医薬品の不純物は、様々な側面で厳格に管理されなければならない。特に、活性医薬成分（ＡＰＩ）（active pharmaceutical ingredient）から由来した不純物の場合、各国は、医薬品承認指針において医薬品中のＡＰＩ由来の既知又は未知の不純物（類縁物質；related compound）の量の上限を定めている。また、国際的に用いられる基準がいくつかあり、ＩＣＨガイドラインＱ３Ａが代表的なものである。このガイドラインでは、医薬品承認時に医薬品中の各類縁物質の量を０．１％又は０．２％等までに制限しており、毒性関連データ等の提供しなければならない情報は、制限を超える類縁物質に対し区別して適用される。これは、医薬品の類縁物質がインビボでどのように作用するかが不明であるため、医薬品製造過程で類縁物質の量を低減させなければならないということを示唆する。従って、類縁物質を低減させるための製造方法、及び各類縁物質の特性（構造及び毒性）によって量に上限を設定することは、医薬品の品質管理に必須の要素である。

米国特許第６，３２２，８０５号米国特許第８，８５３，３５１号

本発明の一の目的は、両親媒性ブロック共重合体を含む難水溶性薬物の高分子ミセル型医薬組成物であって、特定の類縁物質を規定限度内の量で含む医薬組成物を提供することである。

本発明の別の目的は、前記医薬組成物を製造する方法を提供することである。

本発明の一態様は、親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）とを含む精製された両親媒性ブロック共重合体；及びパクリタキセル及びドセタキセルからなる群より選ばれる１種以上の難水溶性薬物を含む高分子ミセル医薬組成物であって、該医薬組成物が、４０℃で６カ月間保存したとき、難水溶性薬物の初期量１００重量部に対して、下記一般式（１）
（１）
（式中、Ｒ_１は、Ｈ又はＣＯＣＨ_３であり、Ｒ_２は、フェニル又はＯＣ（ＣＨ_３）_３である。）
で示される類縁物質を０．５８重量部未満の量で含む、医薬組成物を提供する。

本発明の別の一態様は、（ａ）親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）とを含む両親媒性ブロック共重合体を精製する工程；（ｂ）パクリタキセル及びドセタキセルからなる群より選ばれる１種以上の難水溶性薬物と前記精製された両親媒性ブロック共重合体を有機溶媒に溶解させる工程；及び（ｃ）工程（ｂ）で得られた溶液に水性溶媒を加えて、高分子ミセルを形成させる工程を含む、高分子ミセル医薬組成物の製造方法であって、該医薬組成物が、４０℃で６カ月間保存したとき、難水溶性薬物の初期量１００重量部に対して、前記一般式（１）で示される類縁物質を０．５８重量部未満の量で含む、製造方法を提供する。

本発明によれば、類縁物質を低減させ、保存安定性を向上させた難水溶性薬物の医薬組成物を得ることができる。

図１は、６カ月の加速試験に付した、実験例１−１において用いられたパクリタキセル含有高分子ミセル組成物についてのＨＰＬＣ分析の結果クロマトグラムである。図２は、実験例１−１で単離した類縁物質に対して、実験例１−２で行ったＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析の結果クロマトグラム及びスペクトルである：（ａ）ＲＲＴ１．１０±０．０２（１．０８〜１．１２）（以下、ＲＲＴ１．１０は、ＲＲＴ１．１０±０．０２と相互交換可能に用いられる）（ｂ）ＲＲＴ１．１２±０．０２（１．１０〜１．１４）（以下、ＲＲＴ１．１２は、ＲＲＴ１．１２±０．０２と相互交換可能に用いられる）図３は、実験例２で得られた、誘導された反応生成物に対するＨＰＬＣ分析の結果クロマトグラムである：（ａ）パクリタキセル含有高分子ミセル医薬組成物（ｂ）パクリタキセル（ｃ）パクリタキセルとＬ−ラクチドの反応生成物（ｄ）パクリタキセルとＤ−ラクチドの反応生成物図４は、実験例３で得られた、誘導された反応生成物に対するＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析の結果スペクトルである：（ａ）パクリタキセル（ｂ）パクリタキセルとＬ−ラクチドの反応生成物（ｃ）パクリタキセルとＤ−ラクチドの反応生成物図５は、実験例４において行ったＨＰＬＣ分析の結果クロマトグラムである。

以下、本発明をより詳細に説明する。

本発明の一実施態様の医薬組成物は、親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）とを含む精製された両親媒性ブロック共重合体を含む。

本発明の一実施態様によれば、両親媒性ブロック共重合体は、親水性ブロック（Ａ）および疎水性ブロック（Ｂ）からなるＡ−Ｂ型ジブロック共重合体、又はＢ−Ａ−Ｂ型トリブロック共重合体を含む。

本発明の一実施態様によれば、両親媒性ブロック共重合体は、共重合体の総重量に対して、２０〜９５重量％、より具体的には４０〜９５重量％の量の親水性ブロックを含んでもよい。また、両親媒性ブロック共重合体は、共重合体の総重量に対して、５〜８０重量％、より具体的には５〜６０重量％の量の疎水性ブロックを含んでもよい。

本発明の一実施態様によれば、両親媒性ブロック共重合体は、１，０００〜５０，０００ダルトン、より具体的には１，５００〜２０，０００ダルトンの数平均分子量を有してもよい。

本発明の一実施態様によれば、親水性ブロックは、生体適合性を有する高分子であり、ポリエチレングリコール又はその誘導体、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアミド及びこれらの組み合わせからなる群より選ばれる１種以上を含んでもよく、より具体的には、ポリエチレングリコール、モノメトキシポリエチレングリコール及びこれらの組み合わせからなる群より選ばれる１種以上を含んでもよい。親水性ブロックは、２００〜２０，０００ダルトン、より具体的には２００〜１０，０００ダルトンの数平均分子量を有してもよい。

本発明の一実施態様によれば、疎水性ブロックは、生分解性を有する高分子であり、アルファ（α）−ヒドロキシ酸由来単量体の高分子であってもよく、具体的には、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリマンデル酸、ポリカプロラクトン、ポリジオキサン−２−オン、ポリアミノ酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカーボネート及びこれらの組み合わせからなる群より選ばれる１種以上を含んでもよく、より具体的には、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、ポリジオキサン−２−オン及びこれらの組み合わせからなる群より選ばれる１種以上を含んでもよい。疎水性ブロックは、２００〜２０，０００ダルトン、より具体的には２００〜１０，０００ダルトンの数平均分子量を有してもよい。

本発明の一実施態様によれば、ポリ（アルファ（α）−ヒドロキシ酸）の疎水性高分子ブロックを含む両親媒性ブロック共重合体を、公知の開環重合法により、開始剤としてヒドロキシル基を有する親水性高分子、及びアルファ（α）−ヒドロキシ酸のラクトン単量体を用いて合成してもよい。例えば、Ｌ−ラクチド又はＤ，Ｌ−ラクチドを、開始剤としてヒドロキシル基を有する親水性ポリエチレングリコール又はモノメトキシポリエチレングリコールを用いて開環重合してもよい。開始剤である親水性ブロックに存在するヒドロキシル基の数に応じて、ジブロック又はトリブロック共重合体の合成が可能である。開環重合において、酸化第１スズ（tin oxide）、酸化鉛（lead oxide）、オクタン酸第１スズ（tin octoate）、オクタン酸アンチモン（antimony octoate）等の有機金属触媒を用いてもよく、生体適合性を有するオクタン酸第１スズが、好ましくは医療用途の高分子の製造において用いられる。

本発明の一実施態様において、両親媒性ブロック共重合体として、精製されたものを用いる。本発明の好ましい実施態様によれば、両親媒性ブロック共重合体は、昇華によって精製されたものである。

昇華による精製は、好ましくは８０℃以上１２０℃未満、より好ましくは８０〜１００℃の温度にて、及び好ましく１０ｔｏｒｒ以下、より好ましくは５ｔｏｒｒ以下、さらに好ましくは１ｔｏｒｒ以下の真空度の圧力下で、好ましくは１０〜７４時間、より好ましくは１０〜４８時間、さらに好ましくは２４〜４８時間行われてもよい。このような条件下で昇華による精製を行うことで、共重合体の分子量変化を最小化し、それらから不純物を除去することができる。

本発明の一実施態様の医薬組成物は、活性成分として、パクリタキセル（paclitaxel）及びドセタキセル（docetaxel）からなる群より選ばれる１種以上の難水溶性薬物を含む。

本発明の一実施態様によれば、医薬組成物は、更なる活性成分として、パクリタキセル及びドセタキセル以外の１種以上の難水溶性薬物をさらに含んでもよい。このような更なる活性成分として、７−エピパクリタキセル（7-epipaclitaxel）、ｔ−アセチルパクリタキセル（t-acetylpaclitaxel）、１０−デスアセチルパクリタキセル（10-desacetylpaclitaxel）、１０−デスアセチル−７−エピパクリタキセル（10-desacetyl-7-epipaclitaxel）、７−キシロシルパクリタキセル（７-xylosylpaclitaxel）、１０−デスアセチル−７−グルタリルパクリタキセル（10-desacetyl-7-glutarylpaclitaxel）、７−Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシルパクリタキセル（7-N,N-dimethylglycylpaclitaxel）、７−Ｌ−アラニルパクリタキセル（7-L-alanylpaclitaxel）及びカバジタキセル（cabazitaxel）からなる群より選ばれる１種以上のタキサン抗癌剤を用いることができる。

本発明の一実施態様の医薬組成物は、両親媒性ブロック共重合体１００重量部に対して、０．１〜５０重量部、より具体的には０．５〜３０重量部の量の難水溶性薬物を含んでもよい。難水溶性薬物の量が両親媒性ブロック共重合体と比較して少な過ぎると、薬物当たりに用いられる両親媒性共重合体の重量比率が高いため、再構成（Reconstitution）の時間が増大し得る。一方、難水溶性薬物の量が多すぎると、難溶性薬物が急速に析出する問題があり得る。

本明細書において用いられる難水溶性薬物の「初期」量は、医薬組成物が製造されるときに組み入れられる難水溶性薬物の重量を意味する。

本発明の一実施態様において、医薬組成物は、加速条件（４０℃）で６カ月間保存したとき、難水溶性薬物の初期量１００重量部に対して、下記一般式（１）
（１）
（式中、Ｒ_１は、Ｈ又はＣＯＣＨ_３であり、Ｒ_２は、フェニル又はＯＣ（ＣＨ_３）_３である。）
で示される類縁物質を０．５８重量部未満の量で含む。

一般式（１）の化合物は、下記一般式（１ａ）
（１ａ）
（式中、Ｒ_１及びＲ_２は、一般式（１）に記載の定義と同義である。）
の化合物、下記一般式（１ｂ）
（１ｂ）
（式中、Ｒ_１及びＲ_２は、一般式（１）に記載の定義と同義である。）
の化合物、又はこれらの両方を含んでもよい。

本発明の一実施態様によれば、難水溶性薬物は、パクリタキセルであり、類縁物質は下記一般式（１ｃ）
（１ｃ）
で示される化合物を含んでもよい。

一般式（１ｃ）の化合物は、下記一般式（１ｄ）
（１ｄ）
の化合物、下記一般式（１ｅ）
（１ｅ）
の化合物、又はこれらの両方を含んでもよい。

本発明の一実施態様の医薬組成物は、加速条件（４０℃）で６カ月間保存したとき、難水溶性薬物の初期量１００重量部に対して、一般式（１）（特に、一般式（１ｃ））の類縁物質を０．５８重量部未満、例えば、０．５重量部以下、好ましくは０．３５重量部以下、より好ましくは０．２重量部以下、さらに好ましくは０．１重量部以下、最も好ましくは０．０７重量部以下の量で含んでもよい。

本発明の一実施態様の医薬組成物は、加速条件（４０℃）で６カ月間保存したとき、難水溶性薬物の初期量１００重量部に対して、一般式（１ａ）（特に、一般式（１ｄ））の類縁物質を０．２２重量部未満、例えば、０．２重量部以下、好ましくは０．１５重量部以下、より好ましくは０．１重量部以下、さらに好ましくは０．０６重量部以下、最も好ましくは０．０５重量部以下の量で含んでもよい。

本発明の一実施態様の医薬組成物は、加速条件（４０℃）で６カ月間保存したとき、難水溶性薬物の初期量１００重量部に対して、一般式（１ｂ）（特に、一般式（１ｅ））の類縁物質を０．３６重量部未満、例えば、０．３重量部以下、好ましくは０．２重量部以下、より好ましくは０．１重量部以下、さらに好ましくは０．０４重量部以下、最も好ましくは０．０２重量部以下の量で含んでもよい。

本発明の一実施態様の医薬組成物は、苛酷条件（８０℃）で３週間保存したとき、難水溶性薬物の初期量１００重量部に対して、一般式（１）（特に、一般式（１ｃ））の類縁物質を０．４５重量部未満、好ましくは０．４重量部以下、より好ましくは０．２重量部以下、最も好ましくは０．１６重量部以下の量で含んでもよい。

本発明の一実施態様の医薬組成物は、苛酷条件（８０℃）で３週間保存したとき、難水溶性薬物の初期量１００重量部に対して、一般式（１ａ）（特に、一般式（１ｄ））の類縁物質を０．１８重量部未満、好ましくは０．１５重量部以下、より好ましくは０．１重量部以下、最も好ましくは０．０８重量部以下の量で含んでもよい。

本発明の一実施態様の医薬組成物は、苛酷条件（８０℃）で３週間保存したとき、難水溶性薬物の初期量１００重量部に対して、一般式（１ｂ）（特に、一般式（１ｅ））の類縁物質を０．２７重量部未満、好ましくは０．２重量部以下、より好ましくは０．１重量部以下、最も好ましくは０．０８重量部以下の量で含んでもよい。

本発明の一実施態様において、特定の類縁物質を規定限度内の量で含む医薬組成物は、大規模で生産され得るため商業的に利用可能である。

一実施態様において、本発明の医薬組成物は、エーテル、例えば、ジエチルエーテルを全く有しない。

一実施態様において、本発明の医薬組成物は、金属塩、例えばアルカリ金属塩及び／又は塩析のための塩、例えばＮａＣｌ又はＫＣｌを全く有しない。

本発明の一実施態様の医薬組成物を、（ａ）親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）とを含む両親媒性ブロック共重合体を精製する工程；（ｂ）パクリタキセル及びドセタキセルからなる群より選ばれる１種以上の難水溶性薬物と前記精製された両親媒性ブロック共重合体を有機溶媒に溶解させる工程；及び（ｃ）工程（ｂ）で得られた溶液に水性溶媒を加えて、高分子ミセルを形成させる工程を含む方法によって製造することができる。

両親媒性ブロック共重合体の精製は、上記で説明されており、高分子ミセルの形成には従来法を使用することができる。

本発明の一実施態様の医薬組成物の製造方法において、有機溶媒として、例えばアルコール（例えば、エタノール）、アセトン、テトラヒドロフラン、酢酸、アセトニトリル及びジオキサン及びこれらの組み合わせからなる群より選ばれる水混和性有機溶媒を使用し得るが、これらに限定されない。また、水性溶媒として、通常の水、蒸溜水、注射用蒸溜水、生理食塩水、５％ブドウ糖、緩衝液及びこれらの組み合わせからなる群より選ばれるものを使用し得るが、これらに限定されない。

本発明の一実施態様の医薬組成物の製造方法は、前記工程（ａ）の後に、有機溶媒を除去する工程をさらに含んでもよい。

一実施態様において、前記方法は、凍結乾燥補助剤を加えてミセル組成物を凍結乾燥する工程をさらに含んでもよい。凍結乾燥補助剤は、凍結乾燥組成物がケーキ形状を保持するために加えられてもよい。また、別の一実施態様において、凍結乾燥補助剤は、糖及び糖アルコールからなる群より選ばれる一つ又は複数であってもよい。糖は、ラクトース、マルトース、スクロース及びトレハロースから選ばれる一つ又は複数であってもよい。糖アルコールは、マンニトール、ソルビトール、マルチトール、キシリトール及びラクチトールから選ばれる一つ又は複数であってもよい。凍結乾燥補助剤はまた、再構成（reconstitution）時の凍結乾燥高分子ミセル組成物の均一な溶解を促進する働きをし得る。凍結乾燥補助剤は、凍結乾燥組成物の総重量に対して、１〜９０重量％、具体的には１〜６０重量％、より具体的には１０〜６０重量％の量で含んでもよい。

以下の実施例により本発明を詳細に説明する。しかしながらこれらの実施例は、本発明を例示することのみを目的とするものであり、本発明の範囲は、実施例により何ら限定されない。

製造例１：モノメトキシポリエチレングリコール及びＤ，Ｌ−ラクチドからなるジブロック共重合体（ｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ）の合成及び昇華法による精製
撹拌機を備えた５００ｍＬの丸底フラスコにモノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ、数平均分子量＝２，０００）１５０ｇを入れ、真空条件下１２０℃にて２時間撹拌して、水分を除去した。反応フラスコにトルエン２００μＬに溶解させたオクタン酸第１スズ（Ｓｎ（Ｏｃｔ）_２）０．１５ｇを加え、真空条件下１時間さらに撹拌して、トルエンを蒸留除去した。次いで、Ｄ，Ｌ−ラクチド１５０ｇを加え、窒素雰囲気下撹拌して溶解させた。Ｄ，Ｌ−ラクチドを完全に溶解させた後、反応器を密封し、１２０℃で１０時間重合反応させた。反応終了後、マグネチックバーで撹拌下、反応器を真空ポンプに接続し、生成物を１ｔｏｒｒ以下の圧力下昇華法により７時間精製して、溶融状態のｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ２６２ｇを得た。モノメトキシポリエチレングリコールの末端基である−ＯＣＨ_３を基準にして適切なピークの相対強度（intensity）を得る^１Ｈ−ＮＭＲで分析することにより、分子量（Ｍｎ：約３７４０）を計算した。

製造例２：昇華法によるジブロック共重合体（ｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ）の精製
精製工程を行う前の製造例１の重合反応工程で得られたｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ３０ｇを１口フラスコに入れ、８０℃で溶解させた。マグネチックバーで撹拌下、反応器を真空ポンプに接続し、生成物を１ｔｏｒｒ以下の圧力下昇華法により２４時間及び４８時間精製した。

製造例３：昇華法によるジブロック共重合体（ｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ）の精製
精製温度を１００℃にしたことを除いて、製造例２と同じ方法により精製を行った。

製造例４：昇華法によるジブロック共重合体（ｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ）の精製
精製温度を１２０℃にしたことを除いて、製造例２と同じ方法により精製を行った。

製造例５：酸化アルミニウム（Ａｌ_２Ｏ_３）を用いる吸着法によるジブロック共重合体（ｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ）の精製
精製工程を行う前の製造例１の重合反応工程で得られたｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ３０ｇを１口フラスコに入れ、アセトン（６０ｍＬ）を加えることにより溶解させた。酸化アルミニウム（１５ｇ）をそこに加え、完全に混合した。１口フラスコをロータリーエバポレーターに接続し、５０℃、６０ｒｐｍで２時間混合した。その後溶液を室温にてＰＴＦＥろ過紙（１μｍ）でろ過して、酸化アルミニウムを除去した。ろ過したアセトン溶液は、真空下６０℃にてロータリーエバポレーターを用いて蒸留して、アセトンを除去し、これにより、精製されたｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡを得た。モノメトキシポリエチレングリコールの末端基である−ＯＣＨ_３を基準にして適切なピークの相対強度（intensity）を得る^１Ｈ−ＮＭＲで分析することにより、分子量（Ｍｎ：約３６９０）を計算した。

上記製造例２〜５における精製条件に伴うｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡの分子量変化を下記表１に示す。

表１の結果から、精製温度が高くなるほどｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡの分子量の減少量が増加することが分かる。８０〜１００℃２４〜４８時間、特に１００℃２４時間の精製条件が効率的と考えられる。

比較例１：パクリタキセル含有高分子ミセル組成物の製造
パクリタキセル１ｇと製造例１で得られたｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ５ｇを秤量し、エタノール４ｍＬをそこに加え、混合物が完全に溶解して澄明な溶液を形成するまで６０℃で撹拌した。次いで、エタノールを、丸底フラスコを備えたロータリーエバポレーターを用いて減圧下６０℃で３時間除去した。その後、温度を５０℃に下げ、室温の蒸留水１４０ｍＬを加え、溶液が青色の透明な溶液になるまで反応させて、高分子ミセルを形成させた。凍結乾燥補助剤として、無水ラクトース２．５ｇをそこに加え、完全に溶解させ、孔径２００ｎｍのフィルターを用いてろ過し、凍結乾燥して、粉末状のパクリタキセル含有高分子ミセル組成物を得た。

実施例１：パクリタキセル含有高分子ミセル組成物の製造
製造例３において２４時間精製されたｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡを用いたことを除いて、比較例１と同じ方法によりパクリタキセル含有高分子ミセル組成物を製造した。

実施例２：パクリタキセル含有高分子ミセル組成物の製造
製造例５において精製されたｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡを用いたことを除いて、比較例１と同じ方法によりパクリタキセル含有高分子ミセル組成物を製造した。

実験例１−１：液体クロマトグラフィーによる類縁物質の単離
６カ月の加速試験（温度：４０℃）に付したパクリタキセル含有高分子ミセル組成物１００ｍｇを含むバイアルに、脱イオン水（ＤＷ）１６．７ｍＬを加え、完全に溶解させ、この液体全量を取り、２０ｍＬメスフラスコに移し、標線を合わせて、全量を２０ｍＬにした（５．０ｍｇ／ｍＬ）。この液体２ｍＬを取り、１０ｍＬメスフラスコに移し、アセトニトリルで標線を合わせて、全量を１０ｍＬにした（１ｍｇ／ｍＬ）。上記組成物に対して、下記の液体クロマトグラフィーを用いて類縁物質を単離及び分取した。

液体クロマトグラフィーの条件
1) カラム：Poroshell 120 PFP（4.6×150 mm, 2.7 μm, Agilent）
2) 移動相：A：DW/ B：アセトニトリル
3) 流速：0.6 ml/min
4) 注入量：10μL
5) 検出器：UV吸光光度計（測定波長：227 nm）

ＨＰＬＣ分析の結果クロマトグラムを図１に示す。

実験例１−２：ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いる類縁物質の定性分析
実験例１−１において単離された類縁物質（ＲＲＴ：１．１０±０．０２（１．０８〜１．１２）及び１．１２±０．０２（１．１０〜１．１４））を液体クロマトグラフィー−質量分析計（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）のＭＳスキャンにより定性分析した。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳとして、液体クロマトグラフィー１２００シリーズ及びエレクトロスプレーイオン化質量分析計６４００シリーズ（Agilent, 米国）を用いた。分析条件は、以下の通りである。

液体クロマトグラフィー条件
1) カラム：Cadenza HS-C18（3.0×150 mm, 3μm, Imtakt）
2) 移動相：A：0.03％酢酸を含む0.5 mM酢酸アンモニウム/ B：アセトニトリル
3) 流速：0.4 ml/min
4) 注入量：2μL
5) 検出器：UV吸光光度計（測定波長：227 nm）

エレクトロスプレーイオン化質量分析計条件
1) イオン化：エレクトロスプレーイオン化、ポジティブ（ESI+）
2) MS法：MS2スキャン/ プロダクトイオンスキャン
3) イオン源：Agilent Jet Stream ESI
4) ネブライザーガス（圧力）：窒素（35 psi）
5) イオンスプレー電圧：3500 V
6) 乾燥ガス温度（流速）：350℃（7 L/min）
7) シースガス温度（流速）：400℃（10 L/min）
8) フラグメンター：135 V
9) ノズル電圧：500 V
10) セル加速電圧：7 V
11) EMV：0 V
12) 衝突エネルギー：22 V
13) 前駆イオン：m/z 1020.2
14) 質量スキャン範囲：m/z 100〜1500

単離されて検出段階から現れた分析物質は、質量分析計に流入するように設定されており、このとき、類縁物質の検出イオンは、質量スペクトルの特徴的イオン［Ｍ＋Ｎａ］を選択して定性分析した。

ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析の結果スペクトルを図２に示す。

実験例２：パクリタキセルとラクチドの反応の誘導及び反応生成物のＨＰＬＣ分析
実験例１−１においてパクリタキセル含有高分子ミセル組成物から分取した類縁物質中に、多くの高分子が一緒に存在しているので、直接的な実験が極めて困難であった。実験例１−２による定性分析の結果、ＲＲＴ１．１０及び１．１２の位置の類縁物質は、パクリタキセルとラクチドの結合から生成した化合物と推定された。従って、パクリタキセルにラクチドを直接加えることにより反応を誘導して反応生成物を分析する実験を、推定した類縁物質が生成されるかを確認するために行った。

まず、パクリタキセル５ｍｇとＬ−ラクチド／Ｄ−ラクチド３ｍｇを、それぞれアセトニトリル（ＡＣＮ）：ＤＷ＝７０：３０（ｖ／ｖ）溶液１ｍＬに溶解させ、その後溶液を混合した。この溶液をＬＣバイアルに移した後、ＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ分析の結果スペクトルを図３に示す。

分析の結果、Ｌ−ラクチド／Ｄ−ラクチドとパクリタキセルの反応生成物から新たに出現したピークは、高分子ミセル医薬組成物の６カ月の加速試験後ＨＰＬＣ分析においてＲＲＴ１．１０及び１．１２に示される不純物のピークと全く同一であった。また、これと共に、パクリタキセルとＬ−ラクチドの結合体の化合物がＨＰＬＣ上で最初に溶出され、その後パクリタキセルとＤ−ラクチドの結合体が溶出されることが確認された。さらに、同量を用いる実験の場合、パクリタキセルとＤ−ラクチドの結合体がパクリタキセルとＬ−ラクチドの結合体より多く形成されることが確認された。これから、６カ月の加速試験に付したパクリタキセル含有高分子ミセル組成物からのＲＲＴ１．１０及び１．１２の位置に出現する不純物は、それぞれパクリタキセルをＬ−ラクチド又はＤ−ラクチドと反応させた結果形成される物質であることが分かった。

実験例３：ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いるパクリタキセルとラクチドの反応生成物の分析
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いて、最初に、パクリタキセルのみを含有する試料をＭＳスキャンし、その結果、［Ｍ＋Ｈ］^＋であるｍ／ｚ８５４．２ａｍｕ、［Ｍ＋Ｎａ］^＋であるｍ／ｚ８７６．２ａｍｕが現れた。その後、Ｌ−ラクチドとＤ−ラクチドをパクリタキセルに加えたとき、パクリタキセルのみを含有する試料において示されなかったｍ／ｚ１０２０．０ａｍｕが現れ、経時的にその強度が連続して増加することが確認された。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析の結果スペクトルを図４に示す。

これから、実験例１−１により得られた類縁物質の構造が、パクリタキセルとラクチド異性体の結合により生成される［Ｍ＋Ｎａ］^＋である１０２０．０ａｍｕ化合物であることが再度確認された。

実験例２及び３の結果並びに有機化学の反応についての従来知識から、高分子ミセル組成物のＲＲＴ１．１０及び１．１２の類縁物質は、パクリタキセルと（Ｌ／Ｄ−）ラクチドの結合により生成された下記化合物であることが分かった。
パクリタキセルとラクチドの結合形態：Ｃ_５３Ｈ_５９ＮＯ_１８（９９８．０３ｇ／ｍｏｌ）

実験例４：苛酷条件（８０℃）における薬物含有高分子ミセルの保存安定性の比較試験
比較例１並びに実施例１及び２において製造されるパクリタキセルの高分子ミセル組成物を、８０℃のオーブン中に３週間保存し、その後、組成物をＨＰＬＣで分析して、類縁物質の量を比較した。試験溶液を、ミセル組成物を８０％アセトニトリル水溶液に溶解させ、パクリタキセル濃度６００ｐｐｍに希釈することにより、調製した。ＨＰＬＣ分析の結果スペクトルを図５に示しており、苛酷試験時間による類縁物質の量（％）の変化を下記表２に示す。

ＨＰＬＣ条件
カラム：径2.7 μm, poroshell 120PFP（4.6×150 mm, 2.7 μm）（Agilent製カラム）
移動相
検出器：UV吸光光度計（227 nm）
流速：0.6 mL/min
各類縁物質の量（％）＝100（Ri/Ru）
Ri：試験溶液分析で検出された各類縁物質の面積
Ru：試験溶液分析で検出された全てのピーク面積の合計

*RRT 0.87±0.02：パクリタキセル、オキセタン環開環化合物
RRT 0.96±0.02：パクリタキセル、オキセタン環開環化合物
RRT 1.00: パクリタキセル
RRT 1.10±0.02：パクリタキセル、L-ラクチド反応化合物
RRT 1.12±0.02：パクリタキセル、D-ラクチド反応化合物
RRT 1.44±0.05：パクリタキセル、水除去化合物

表２及び図５から、実施例１又は２の高分子ミセル医薬組成物の安定性が、比較例１の組成物に比べて向上し、パクリタキセル量の減少が相対的に小さく、これにより組成物中に含まれる薬物の効果をより安定的に保持し得ることが分かった。

実験例５：加速条件（４０℃）における薬物含有高分子ミセルの保存安定性の比較試験
比較例１及び実施例１において製造されるパクリタキセルの高分子ミセル組成物をそれぞれ４０℃の安定性試験機中に６カ月間保存することを除いて、実験例４と同様の方法により試験を行った。加速試験時間による類縁物質の量（％）の変化を下記表３に示す。

上記試験結果は、異なるバッチの３個以上の高分子ミセル組成物について行った試験における各類縁物質及びパクリタキセル量の平均値を示す。

実験例５より、実施例１の組成物は、加速保存温度（４０℃）で６カ月間保存したとき、比較例１の組成物より類縁物質の量が低いことが立証された。

Claims

４０〜９５重量％の量の親水性ブロック（Ａ）と５〜６０重量％の量の疎水性ブロック（Ｂ）とを含む精製された両親媒性ブロック共重合体；及び
パクリタキセル及びドセタキセルからなる群より選ばれる１種以上の難水溶性薬物
を含む、高分子ミセル医薬組成物であって、
該医薬組成物が、４０℃で６カ月間保存したとき、難水溶性薬物の初期量１００重量部に対して、下記一般式（１）
（１）
（式中、Ｒ_１は、Ｈ又はＣＯＣＨ_３であり、Ｒ_２は、フェニル又はＯＣ（ＣＨ_３）_３である。）
で示される類縁物質を０．５８重量部未満の量で含み、
親水性ブロック（Ａ）が、ポリエチレングリコール、モノメトキシポリエチレングリコール又はこれらの組み合わせであり、
疎水性ブロック（Ｂ）が、ポリラクチド、ポリグリコリド又はこれらの組み合わせであり、
高分子ミセル医薬組成物が、エーテル溶媒を有しない、医薬組成物。
一般式（１）の化合物が、下記一般式（１ａ）
（１ａ）
（式中、Ｒ_１及びＲ_２は、請求項１に記載の定義と同義である。）
の化合物、下記一般式（１ｂ）
（１ｂ）
（式中、Ｒ_１及びＲ_２は、請求項１に記載の定義と同義である。）
の化合物、又はこれらの両方を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
難水溶性薬物の初期量１００重量部に対して、一般式（１ａ）の化合物を０．２２重量部未満の量で含む、請求項２に記載の医薬組成物。
難水溶性薬物の初期量１００重量部に対して、一般式（１ｂ）の化合物を０．３６重量部未満の量で含む、請求項２に記載の医薬組成物。
一般式（１）の化合物が、下記一般式（１ｃ）
（１ｃ）
の化合物である、請求項１に記載の医薬組成物。
一般式（１ｃ）の化合物が、下記一般式（１ｄ）
（１ｄ）
の化合物、下記一般式（１ｅ）
（１ｅ）
の化合物、又はこれらの両方を含む、請求項５に記載の医薬組成物。
難水溶性薬物の初期量１００重量部に対して、一般式（１）の類縁物質を０．５重量部以下の量で含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
難水溶性薬物の初期量１００重量部に対して、一般式（１）の類縁物質を０．２重量部以下の量で含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
難水溶性薬物の初期量１００重量部に対して、一般式（１）の類縁物質を０．１重量部以下の量で含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
８０℃で３週間保存したとき、難水溶性薬物の初期量１００重量部に対して、一般式（１）の類縁物質を０．４５重量部未満の量で含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
親水性ブロック（Ａ）が、ポリエチレングリコール又はモノメトキシポリエチレングリコールであり、疎水性ブロック（Ｂ）が、ポリラクチドである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
親水性ブロック（Ａ）の数平均分子量が、２００〜２０，０００ダルトンであり、疎水性ブロック（Ｂ）の数平均分子量が、２００〜２０，０００ダルトンである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
両親媒性ブロック共重合体を、８０℃以上１２０℃未満の温度、真空度１０ｔｏｒｒ以下の圧力下、１０〜７４時間の昇華によって精製する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の医薬組成物の製造方法。