JP6534098B2 - 成人ｔ細胞白血病治療薬 - Google Patents

Description

本発明は、成人Ｔ細胞白血病を治療するために用いられる薬剤に関する。

成人Ｔ細胞白血病（adult T-cell leukemia，ＡＴＬ）は、ヒトレトロウイルスの一種であるヒトＴ細胞指向性ウイルスＩ型（human T-cell leukemia virus type Ｉ，ＨＴＬＶ−Ｉ）が感染することによって引き起こされる難治性の白血病である。例えば、日本臨床腫瘍学グループ（ＪＣＯＧ）により、VEPA-B（VEPA + bleomycin）、M-FEPA（methotrexate, vindesine, cyclophosphamide, prednisolone, doxorubicin）、及びVEPP-B（vincristine, etoposide, procarbazine, prednisolone, bleomycin）からなるレジメＬＳＧ４を用いて行われた臨床試験（ＪＣＯＧ８７０１）において、ＡＴＬ以外の非ホジキン白血病の生存期間中央値が４４ヶ月であったのに対し、ＡＴＬは８ヶ月であった（非特許文献１）。ＡＴＬの平均発症年齢は約６０歳で、ＨＴＬＶ−Ｉ感染者の２〜５％に発症する。

ＨＴＬＶ−Ｉ感染症及びＡＴＬに対する有効な治療法はまだ確立されていない。ＡＴＬに対する主な治療法は多剤化学療法であるが、治療成績はよくなく、急性型ＡＴＬの５０％生存期間は約１年間である。最近、同種幹細胞移植による治療が有効であった症例が出始めているが、ＡＴＬの大部分である高齢患者は適応外である。このような現状から、ＡＴＬに対する新規治療法の確立は大変重要になっている。

ＡＴＬに対する化学療法が困難となる原因の一つとして、ＡＴＬ細胞は既存の抗がん剤に対して耐性を獲得しやすいことが挙げられる。そのため、新規抗ＡＴＬ薬の開発が急務である。

一方、ＧＳＫ−３（グリコーゲン合成酵素３）阻害剤としては、種々の物質が知られている。
例えば、３−［６−（３−アミノフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ］フェノール（ＴＷＳ−１１９）は、ＧＳＫ−３β阻害活性を有し、ＥＳ細胞の神経細胞への分化を誘導することが報告されている（非特許文献２）。

４−ベンジル−２−メチル−１，２，４−チアジアゾリジン−３，５−ジオン（ＴＤＺＤ−８）等の２，４−二置換チアジアゾリジノン誘導体は、ＧＳＫ−３β阻害剤であり、アルツハイマー病、インスリン非依存性糖尿病、癌、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）等の白血病などのＧＳＫ−３が関与する疾患の治療に有用であることが報告されている（例えば、特許文献１及び２）。

インジルビン誘導体の一種である６−ブロモインジルビン−３’−オキシム（ＢＩＯ）及びそのアシル化体である６−ブロモインジルビン−３’−アセトキシム等は、ＧＳＫ−３阻害剤であることが知られ（非特許文献３）、これまでに、インジルビンは、慢性骨髄性白血病及び慢性顆粒球性白血病の治験で有効であったことが報告されている（非特許文献４）。

１−（７−メトキシキノリン−４−イル）−３−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］ウレア（Ａ１０７０７２２）はＧＳＫ−３α及びＧＳＫ−３βの阻害剤であり、神経変性疾患及び精神疾患に用いられている。

ＧＳＫ３阻害剤ＸＶは、細胞膜透過性のpyridocarbazolo-cyclopentadienyl Ruthenium 複合体のラセミ混合物であり、ＧＳＫ−３α及びＧＳＫ−３βの阻害剤である。

しかしながら、ＧＳＫ３阻害剤のＡＴＬに対する有効性は報告されていない。また、特許文献２には、ＴＤＺＤ−８はＡＭＬに対して細胞毒性を示すが、ＴＤＺＤ−８と同様ＧＳＫ−３阻害剤である６−ブロモインジルビン−３’−オキシム（ＢＩＯ）はＡＭＬに対して細胞毒性を示さないことが報告されている（段落０１５８、表２）。

特表２００３−５３２７０８号公報 特表２００９−５４３８７４号公報（段落０１５８、表２）

Marcais, A., et al., Curr. Oncol. Rep., 15, 457-464 (2013) Ding, S., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 100, 7632-7637 (2003) Meijer, L., et al., Chem. Biol., 10, 1255-1266 (2003) Gan WJ, et al., Chin. Acad. Med. Sci. Beijing, 6, 611-613 (1985)

本発明は、ＡＴＬ細胞特異的な抗腫瘍効果を有する、新規な成人Ｔ細胞白血病治療薬を提供することを目的とする。

前記課題を解決するため、本発明者らは、ＡＴＬ患者から樹立された細胞株Ｓ１Ｔ及びＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞を用いて、薬剤ライブラリのスクリーニングを行い、ＡＴＬ細胞特異的な抗腫瘍効果を有する薬剤の同定を試みたところ、基本骨格が全く異なる多数のＧＳＫ３阻害剤がＡＴＬ細胞及びＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞に細胞死を誘導することを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明の要旨は次のとおりである。

（１）ＧＳＫ３阻害剤を含有する成人Ｔ細胞白血病治療薬。
（２）ＧＳＫ３阻害剤が、下記式（Ｉ）：

で示される化合物、
下記式（II）：

（式中、Ａｒは置換又は無置換のフェニル基であり、Ｒ^１は炭素数１〜３のアルキル基である。）
で示される化合物、
下記式（III）：

（式中、Ｒ^２は水素原子又は炭素数２〜６の脂肪族アシル基であり、当該脂肪族アシル基はカルボキシル基で置換されていてもよい。）
で示される化合物、
下記式（IV）：

で示される化合物、
下記式（Ｖ）：

で示される化合物、それらの塩又はそれらの溶媒和物から選ばれる前記（１）に記載の成人Ｔ細胞白血病治療薬。

（３）ＧＳＫ３阻害剤が前記式（Ｉ）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物から選ばれる前記（２）に記載の成人Ｔ細胞白血病治療薬。
（４）ＧＳＫ３阻害剤が前記式（II）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物から選ばれる前記（２）に記載の成人Ｔ細胞白血病治療薬。

（５）前記式（II）で示される化合物が、下記式（IIａ）：

で示される化合物である前記（４）に記載の成人Ｔ細胞白血病治療薬。

（６）ＧＳＫ３阻害剤が前記式（III）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物から選ばれる前記（２）に記載の成人Ｔ細胞白血病治療薬。

（７）前記式（III）で示される化合物が、下記式（IIIａ）：

で示される化合物である前記（６）に記載の成人Ｔ細胞白血病治療薬。

（８）ＧＳＫ３阻害剤が前記式（IV）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物から選ばれる前記（２）に記載の成人Ｔ細胞白血病治療薬。
（９）ＧＳＫ３阻害剤が前記式（Ｖ）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物から選ばれる前記（２）に記載の成人Ｔ細胞白血病治療薬。
（１０）ＧＳＫ３阻害剤と、ＴＮＦ−αとを含有する成人Ｔ細胞白血病治療薬。
（１１）成人Ｔ細胞白血病治療において同時に、別々に、又は順次に投与するための組み合わせ製剤であって、２つの別個の製剤：
（ａ）ＧＳＫ３阻害剤を含有する製剤、及び
（ｂ）ＴＮＦ−αを含有する製剤
を含む組み合わせ製剤。
（１２）前記（２）に記載の前記式（IV）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物を含有する白血病治療薬。

本発明の成人Ｔ細胞白血病治療薬は、選択的にＡＴＬ細胞に細胞死を誘導することができ、成人Ｔ細胞白血病の治療に有用である。

ＴＤＺＤ−８のＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞及びＡＴＬ細胞への影響を示すグラフである。 ＴＤＺＤ−８とＴＮＦ−αとの併用試験の結果を示すグラフである。 ＢＩＯのＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞及びＡＴＬ細胞への影響を示すグラフである。 ＢＩＯとＴＮＦ−αとの併用試験の結果を示すグラフである。 ＢＩＯのカスパーゼ−３／７及びカスパーゼ−９への影響を示すグラフである。 ＢＩＯのＧＳＫ−３への影響を示すグラフである。 ＴＷＳ１１９（GSK-3β inhibitor XII）の各細胞への影響を示すグラフである。 ＴＷＳ１１９（GSK-3β inhibitor XII）のＡＴＬ患者由来細胞株Ｓ１ＴにおけるＧＳＫ−３，リン酸化型ＧＳＫ−３発現への影響を示す図である。 ＴＷＳ１１９（GSK-3β inhibitor XII）のＡＴＬ患者由来細胞株Ｓｕ９Ｔ０１におけるＧＳＫ−３，リン酸化型ＧＳＫ−３発現への影響を示す図である。 ＴＷＳ１１９（GSK-3β inhibitor XII）の急性リンパ芽球性白血病細胞株ＭＯＬＴ−４におけるＧＳＫ−３，リン酸化型ＧＳＫ−３発現への影響を示す図である。 ＴＷＳ１１９（GSK-3β inhibitor XII）の白血病細胞株（ＨＴＬＶ−Ｉ非感染）であるＪｕｒｋａｔにおけるＧＳＫ−３，リン酸化型ＧＳＫ−３発現への影響を示す図である。 ＴＷＳ１１９（GSK-3β inhibitor XII）のＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞株ＭＴ−２におけるＧＳＫ−３，リン酸化型ＧＳＫ−３発現への影響を示す図である。 ＴＷＳ１１９（GSK-3β inhibitor XII）のＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞株ＨＵＴ１０２におけるＧＳＫ−３，リン酸化型ＧＳＫ−３発現への影響を示す図である。 ＴＷＳ１１９（GSK-3β inhibitor XII）のＰＢＭＣ（健常人由来末梢リンパ球）におけるＧＳＫ−３，リン酸化型ＧＳＫ−３発現への影響を示す図である。

以下、本発明を詳細に説明する。
本発明に用いるＧＳＫ３阻害剤としては、ＧＳＫ−３β阻害作用を有するものが好ましく、ＧＳＫ−３α阻害作用の有無は問わない。

ＧＳＫ−３β阻害作用を有し、ＧＳＫ−３α阻害作用を有しないＧＳＫ３阻害剤としては、例えば、前記式（Ｉ）で示される３−［６−（３−アミノフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ］フェノール（ＴＷＳ−１１９）、前記式（IIａ）で示される４−ベンジル−２−メチル−１，２，４−チアジアゾリジン−３，５−ジオン（ＴＤＺＤ−８）、前記式（IIIａ）で示される６−ブロモインジルビン−３’−オキシム（ＢＩＯ）及びそのアシル化体である６−ブロモインジルビン−３’−アセトキシムが挙げられ、ＧＳＫ−３β阻害作用及びＧＳＫ−３α阻害作用を有するＧＳＫ３阻害剤としては、例えば、前記式（IV）で示される１−（７−メトキシキノリン−４−イル）−３−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］ウレア（Ａ１０７０７２２）、前記式（Ｖ）で示されるＧＳＫ３阻害剤ＸＶが挙げられる。

ＧＳＫ３阻害剤のうち、例えば、３−［６−（３−アミノフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ］フェノール（ＴＷＳ−１１９）、４−ベンジル−２−メチル−１，２，４−チアジアゾリジン−３，５−ジオン（ＴＤＺＤ−８）、６−ブロモインジルビン−３’−オキシム（ＢＩＯ）、１−（７−メトキシキノリン−４−イル）−３−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］ウレア（Ａ１０７０７２２）、ＧＳＫ３阻害剤ＸＶ等のように市販されているものがあり、これらについては市販品を用いることができる。

前記式（II）においてＡｒで表されるフェニル基における置換基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ヘキシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等のＣ_１−６−アルキル基；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、ヘキシルオキシ基、シクロプロピルオキシ基、シクロブチルオキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基等のＣ_１−６−アルコキシ基；メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ブトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基、ｓｅｃ−ブトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、ペンチルオキシカルボニル基、イソペンチルオキシカルボニル基、シクロプロピルオキシカルボニル基、シクロブチルオキシカルボニル基、シクロペンチルオキシカルボニル基等のＣ_１−６−アルコキシ−カルボニル基；水酸基；フェニル基、トリル基、ナフチル基等の芳香族炭化水素基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等のハロゲン原子；ベンジル基、フェネチル基等のアラルキル基；ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基（プロパノイル基）、ブチリル基（ブタノイル基）、バレリル基（ペンタノイル基）、ヘキサノイル基等のＣ_１−６−脂肪族アシル基；ベンゾイル基、トルオイル基等の芳香族アシル基（アロイル基）；アラルキルオキシ基、カルボキシル基、Ｃ_１−６−アルキルアミノ基、ジＣ_１−６−アルキルアミノ基が挙げられる。

置換されたフェニル基としては、例えば４−メチルフェニル基（ｐ−トリル基）、３−メチルフェニル基（ｍ−トリル基）、２−メチルフェニル基（ｏ−トリル基）、４−エチルフェニル基、３−エチルフェニル基、２−エチルフェニル基、４−ｎ−プロピルフェニル基、４−イソプロピルフェニル基、２−イソプロピルフェニル基、４−ｎ−ブチルフェニル基、４−イソブチルフェニル基、４−ｓｅｃ−ブチルフェニル基、２−ｓｅｃ−ブチルフェニル基、４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、３−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、２−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、４−ｎ−ペンチルフェニル基、４−イソペンチルフェニル基、２−ネオペンチルフェニル基、４−ｔｅｒｔ−ペンチルフェニル基、４−ｎ−ヘキシルフェニル基、４−（２−エチルブチル）フェニル基、４−ｎ−ヘプチルフェニル基、４−ｎ−オクチルフェニル基、４−（２−エチルヘキシル）フェニル基、４−ｔｅｒｔ−オクチルフェニル基、４−ｎ−デシルフェニル基、４−ｎ−ドデシルフェニル基、４−ｎ−テトラデシルフェニル基、４−シクロペンチルフェニル基、４−シクロヘキシルフェニル基、４−（４−メチルシクロヘキシル）フェニル基、４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキシル）フェニル基、３−シクロヘキシルフェニル基、２−シクロヘキシルフェニル基、２，４−ジメチルフェニル基、２，５−ジメチルフェニル基、３，４−ジメチルフェニル基、３，５−ジメチルフェニル基、２，６−ジメチルフェニル基、２，４−ジエチルフェニル基、２，３，５−トリメチルフェニル基、２，３，６−トリメチルフェニル基、３，４，５−トリメチルフェニル基、２，６−ジエチルフェニル基、２，５−ジイソプロピルフェニル基、２，６−ジイソブチルフェニル基、２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、２，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、４，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−メチルフェニル基、５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−メチルフェニル基、４−ｔｅｒｔ−ブチル−２，６−ジメチルフェニル基、４−メトキシフェニル基、３−メトキシフェニル基、２−メトキシフェニル基、４−エトキシフェニル基、３−エトキシフェニル基、２−エトキシフェニル基、４−ｎ−プロポキシフェニル基、３−ｎ−プロポキシフェニル基、４−イソプロポキシフェニル基、２−イソプロポキシフェニル基、４−ｎ−ブトキシフェニル基、４−イソブトキシフェニル基、２−ｓｅｃ−ブトキシフェニル基、４−ｎ−ペンチルオキシフェニル基、４−イソペンチルオキシフェニル基、２−イソペンチルオキシフェニル基、４−ネオペンチルオキシフェニル基、２−ネオペンチルオキシフェニル基、４−ｎ−ヘキシルオキシフェニル基、２−（２−エチルブチル）オキシフェニル基、４−ｎ−オクチルオキシフェニル基、４−ｎ−デシルオキシフェニル基、４−ｎ−ドデシルオキシフェニル基、４−ｎ−テトラデシルオキシフェニル基、４−シクロヘキシルオキシフェニル基、２−シクロヘキシルオキシフェニル基、２−メチル−４−メトキシフェニル基、２−メチル−５−メトキシフェニル基、３−メチル−４−メトキシフェニル基、３−メチル−５−メトキシフェニル基、３−エチル−５−メトキシフェニル基、２−メトキシ−４−メチルフェニル基、３−メトキシ−４−メチルフェニル基、２，４−ジメトキシフェニル基、２，５−ジメトキシフェニル基、２，６−ジメトキシフェニル基、３，４−ジメトキシフェニル基、３，５−ジメトキシフェニル基、３，５−ジエトキシフェニル基、３，５−ジ−ｎ−ブトキシフェニル基、２−メトキシ−４−エトキシフェニル基、２−メトキシ−６−エトキシフェニル基、３，４，５−トリメトキシフェニル基、４−ヒドロキシフェニル基、３−ヒドロキシフェニル基、２−ヒドロキシフェニル基、４−メトキシカルボニルフェニル基、３−メトキシカルボニルフェニル基、２−メトキシカルボニルフェニル基、４−ビフェニリル基、３−ビフェニリル基、２−ビフェニリル基、４−（４−メチルフェニル）フェニル基、４−（３−メチルフェニル）フェニル基、４−（４−メトキシフェニル）フェニル基、４−（４−ｎ−ブトキシフェニル）フェニル基、２−（２−メトキシフェニル）フェニル基、４−（４−クロロフェニル）フェニル基、３−メチル−４−フェニルフェニル基、３−メトキシ−４−フェニルフェニル基、ターフェニル基、３，５−ジフェニルフェニル基、４−フルオロフェニル基、３−フルオロフェニル基、２−フルオロフェニル基、４−クロロフェニル基、３−クロロフェニル基、２−クロロフェニル基、４−ブロモフェニル基、２−ブロモフェニル基、２，３−ジフルオロフェニル基、２，４−ジフルオロフェニル基、２，５−ジフルオロフェニル基、２，６−ジフルオロフェニル基、３，４−ジフルオロフェニル基、３，５−ジフルオロフェニル基、２，３−ジクロロフェニル基、２，４−ジクロロフェニル基、２，５−ジクロロフェニル基、３，４−ジクロロフェニル基、３，５−ジクロロフェニル基、２，５−ジブロモフェニル基、２，４，６−トリクロロフェニル基、２−フルオロ−４−メチルフェニル基、２−フルオロ−５−メチルフェニル基、３−フルオロ−２−メチルフェニル基、３−フルオロ−４−メチルフェニル基、２−メチル−４−フルオロフェニル基、２−メチル−５−フルオロフェニル基、３−メチル−４−フルオロフェニル基、２−クロロ−４−メチルフェニル基、２−クロロ−５−メチルフェニル基、２−クロロ−６−メチルフェニル基、２−メチル−３−クロロフェニル基、２−メチル−４−クロロフェニル基、３−クロロ−４−メチルフェニル基、３−メチル−４−クロロフェニル基、２−クロロ−４，６−ジメチルフェニル基、２−メトキシ−４−フルオロフェニル基、２−フルオロ−４−メトキシフェニル基、２−フルオロ−４−エトキシフェニル基、２−フルオロ−６−メトキシフェニル基、３−フルオロ−４−エトキシフェニル基、３−クロロ−４−メトキシフェニル基、２−メトキシ−５−クロロフェニル基、３−メトキシ−６−クロロフェニル基、５−クロロ−２，４−ジメトキシフェニル基等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。

前記式（II）において、Ｒ^１で表される炭素数１〜３のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基が挙げられる。

前記式（II）で示される化合物は、公知の方法、例えば、特表２００３−５３２７０８号公報（特許文献１）、特表２００９−５４３８７４号公報（特許文献２）、Martinez, A.; Castro, A.; Cardelus, I.; Llenas, J.; Palacios, J. M.: Bioorg. Med. Chem., 1997, 5, 1275-1283に記載の方法に従って、以下に示すようにして製造することができる。

（式中、Ａｒ及びＲ^１は前記と同義である。）

例えば、対応するイソチオシアネート（Ａｒ−ＣＨ_２−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ）のヘキサン溶液に、等モル量の塩素を−１５℃にて添加することによってイソチオシアネートの塩素処理を行い、次いで、不活性雰囲気下において対応するアルキルイソシアネート（Ｒ^１−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ）を用いてイミノクロロアルキルスルフェニルクロライドを形成させた後、加水分解を行うことにより、前記式（II）で示される化合物を得ることができる。

前記式（III）においてＲ^２で表される炭素数２〜６の脂肪族アシル基としては、例えばアセチル基、プロピオニル基（プロパノイル基）、ブチリル基（ブタノイル基）、バレリル基（ペンタノイル基）、イソバレリル基、ヘキサノイル基等が挙げられる。これらの脂肪族アシル基はカルボキシル基で置換されていてもよい。

前記式（III）で示される化合物は、例えば、Meijer, L., et al., Chem. Biol., 10, 1255-1266 (2003)（非特許文献３）に記載された公知の化合物であり、そのうち、６−ブロモインジルビン−３’−オキシム（ＢＩＯ）は市販されている。６−ブロモインジルビン−３’−オキシム（ＢＩＯ）を酸無水物、例えば無水酢酸と反応させることにより、前記式（III）においてＲ^２が炭素数２〜６の脂肪族アシル基である化合物を得ることができ、この際、酸無水物として、無水コハク酸、無水グルタル酸、無水アジピン酸等の二塩基性酸無水物を用いれば、前記炭素数２〜６の脂肪族アシル基がカルボキシル基で置換された化合物を製造することができる。

本発明に用いるＧＳＫ３阻害剤がアミノ基等の塩基性置換基、又はフェノール性水酸基、カルボキシル基等の酸性置換基を有する場合には、塩、好ましくは薬学的に許容される塩、例えば、塩酸、硫酸、リン酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、ピロ硫酸、メタリン酸等の無機酸、又はクエン酸、安息香酸、酢酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、スルホン酸（例えば、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸）等の有機酸との塩；又はナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩として用いることもできる。

前記式（Ｉ）〜（Ｖ）で示される化合物の溶媒和物としては、例えば水和物が挙げられる。

合成により得られる生成物を精製するには、通常用いられる手法、例えばシリカゲル等を担体として用いたカラムクロマトグラフィーやメタノール、エタノール、クロロホルム、ジメチルスルホキシド、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル、水等を用いた再結晶法によればよい。カラムクロマトグラフィーの溶出溶媒としては、メタノール、エタノール、クロロホルム、アセトン、ヘキサン、ジクロロメタン、酢酸エチル、及びこれらの混合溶媒等が挙げられる。

本発明に用いるＧＳＫ３阻害剤は、成人Ｔ細胞白血病治療薬として、また、前記式（IV）で示される１−（７−メトキシキノリン−４−イル）−３−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］ウレア（Ａ１０７０７２２）は、成人Ｔ細胞白血病に限らず、広く白血病の治療薬として、慣用の製剤担体と組み合わせて製剤化することができる。

投与形態としては、特に限定はなく、必要に応じ適宜選択して使用され、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、徐放性製剤、液剤、懸濁剤、エマルジョン剤、シロップ剤、エリキシル剤等の経口剤、注射剤、坐剤等の非経口剤が挙げられる。

経口剤は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、無機塩類等を用いて常法に従って製造される。また、これらに加えて、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を適宜添加することができる。

結合剤としては、例えばデンプン、デキストリン、アラビアゴム、ゼラチン、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等が挙げられる。

崩壊剤としては、例えばデンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。

界面活性剤としては、例えばラウリル硫酸ナトリウム、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ポリソルベート８０等が挙げられる。

滑沢剤としては、例えばタルク、ロウ類、水素添加植物油、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム、ポリエチレングリコール等が挙げられる。

流動性促進剤としては、例えば軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム等が挙げられる。

注射剤は、常法に従って製造され、希釈剤として一般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、オリーブ油、ゴマ油、ラッカセイ油、ダイズ油、トウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等を用いることができる。更に必要に応じて、殺菌剤、防腐剤、安定剤、等張化剤、無痛化剤等を加えてもよい。また、注射剤は、安定性の観点から、バイアル等に充填後冷凍し、通常の凍結乾燥技術により水分を除去し、使用直前に凍結乾燥物から液剤を再調製することもできる。有効成分であるＧＳＫ３阻害剤の注射剤中における割合は、５〜５０重量％の間で変動させ得るが、これに限定されるものではない。

その他の非経口剤としては、直腸内投与のための坐剤等が挙げられ、常法に従って製造される。

製剤化した治療薬は、剤形、投与経路等により異なるが、例えば、１日１〜４回を１週間から３ヶ月の期間、投与することが可能である。

経口剤として所期の効果を発揮するためには、患者の年令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人の場合、有効成分であるＧＳＫ３阻害剤の重量として、例えば０．１〜１０００ｍｇ、好ましくは１〜５００ｍｇを、１日数回に分けて服用することが適当である。

非経口剤として所期の効果を発揮するためには、患者の年令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人の場合、有効成分であるＧＳＫ３阻害剤の重量として、例えば０．１〜１０００ｍｇ、好ましくは１〜５００ｍｇを、静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射により投与することが適当である。

また、有効成分であるＧＳＫ３阻害剤は、成人Ｔ細胞白血病に対して有効な他の薬剤と組み合わせて使用してもよい。これらは、治療の過程において別々に投与されるか、例えば錠剤、静脈用溶液、又はカプセルのような単一の剤形において、ＧＳＫ３阻害剤と組み合わせられる。

このような他の薬剤としては、好ましくは腫瘍壊死因子α（tumor necrosis factor-α，ＴＮＦ−α）が挙げられる。
ＧＳＫ３阻害剤とＴＮＦ−αとの組み合わせにより相乗効果が得られる。
ＴＮＦ−αの投与量は、通常成人の場合、ＴＮＦ−αの重量として、１日当たり５０μｇ〜５０ｍｇ程度が適当である。

以下、実施例に基づき本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。

以下の実施例において、前記式（II）で示される化合物としては、市販されており、入手しやすいことから、４−ベンジル−２−メチル−１，２，４−チアジアゾリジン−３，５−ジオン（ＴＤＺＤ−８）を用いた。
同様に、前記式（III）で示される化合物としては、市販されており、入手しやすいことから、６−ブロモインジルビン−３’−オキシム（ＢＩＯ）を用いた。

（実施例１）ＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞及びＡＴＬ細胞への影響（ＴＤＺＤ−８）
０〜１０μＭのＴＤＺＤ−８存在下で、Ｓ１Ｔ（ＡＴＬ患者由来細胞株）、ＭＴ−２（ＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞株）を１ウェル当たり２０，０００個、その対照としてＰＢＭＣ（健常人由来末梢リンパ球）を１ウェル当たり１００，０００個、それぞれ９６ｗｅｌｌプレートに播種し、３日間培養後、ＭＴＴ法によりＴＤＺＤ−８の各細胞に対する増殖阻害効果を評価した。結果を図１に示す。
ＴＤＺＤ−８は濃度依存性に、ＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞及びＡＴＬ細胞に細胞死を誘導させた。４μＭの濃度において、ＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞及びＡＴＬ細胞の生存率が約６０％であったのに対して、正常リンパ球の生存率は約８０％と、選択的な効果が認められた。

（実施例２）ＴＤＺＤ−８とＴＮＦ−αとの併用効果
０〜５μＭのＴＤＺＤ−８及び０〜１００ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−α存在下で、Ｓ１Ｔ（ＡＴＬ患者由来細胞株）を９６ｗｅｌｌプレートに１ウェル当たり２０，０００個播種し、３日間培養後、ＭＴＴ法によりＴＤＺＤ−８とＴＮＦ−αとの併用のＡＴＬ細胞に対する増殖阻害効果を評価した。結果を図２に示す。
ＴＤＺＤ−８はＴＮＦ−αとの併用により、より効果的にＡＴＬ細胞に細胞死を誘導することが分かった。

（実施例３）ＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞及びＡＴＬ細胞への影響（ＢＩＯ）
０〜５μＭのＢＩＯ存在下で、Ｓ１Ｔ（ＡＴＬ患者由来細胞株）、ＭＴ−２（ＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞株）を１ウェル当たり２０，０００個、その対照としてＭＯＬＴ−４（急性リンパ芽球性白血病細胞株）、ＰＢＭＣ（健常人由来末梢リンパ球）を１ウェル当たり１００，０００個、それぞれ９６ｗｅｌｌプレートに播種し、３日間培養後、ＭＴＴ法によりＢＩＯの各細胞に対する増殖阻害効果を評価した。結果を図３に示す。
ＢＩＯは選択的にＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞及びＡＴＬ細胞に細胞死を誘導させた。１μＭの濃度において、ＡＴＬ細胞の生存率が約５０％であったのに対して、正常リンパ球の生存率は約１００％と、選択的な効果が認められた。

（実施例４）ＢＩＯとＴＮＦ−αとの併用効果
０〜５μＭのＢＩＯ及び０〜１００ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−α存在下で、Ｓ１Ｔ（ＡＴＬ患者由来細胞株）を９６ｗｅｌｌプレートに１ウェル当たり２０，０００個播種し、３日間培養後、ＭＴＴ法によりＢＩＯとＴＮＦ−αとの併用のＡＴＬ細胞に対する増殖阻害効果を評価した。結果を図４に示す。
ＢＩＯはＴＮＦ−αとの併用により、より効果的にＡＴＬ細胞に細胞死を誘導することが分かった。

（実施例５）カスパーゼ−３／７及びカスパーゼ−９への影響
０〜５μＭのＢＩＯ存在下で、Ｓ１Ｔ（ＡＴＬ患者由来細胞株）を９６ｗｅｌｌプレートに１ウェル当たり２０，０００個播種し、２４時間培養後、アポトーシスアッセイを行い、カスパーゼ−３／７及びカスパーゼ−９の活性を測定した。結果を図５に示す。
ＢＩＯは濃度依存性にカスパーゼ−３／７及びカスパーゼ−９活性を増大させた。
したがって、ＢＩＯはミトコンドリア傷害を介するアポトーシスによりＡＴＬ細胞に細胞死を誘導すると考えられる。

（実施例６）ＧＳＫ−３への影響
各濃度のＢＩＯで各時間処理したＳ１Ｔ（ＡＴＬ患者由来細胞株）のライセートをそれぞれの抗体を用いてウェスタンブロット検出を行った。結果を図６に示す。
ＢＩＯは時間依存性、濃度依存性にリン酸化型ＧＳＫ−３（不活性型ＧＳＫ−３）を増加させたが、ＧＳＫ−３総量は変えなかった。
したがって、ＢＩＯはリン酸化型ＧＳＫ−３（不活性型ＧＳＫ−３）を増加させることでＡＴＬ細胞に細胞死を誘導することが示唆された。

（実施例７）
（１）ＴＷＳ１１９の細胞死誘導効果
ＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞株であるＭＴ−２及びＨＵＴ１０２、ＡＴＬ患者由来細胞株であるＳ１Ｔ及びＳｕ９Ｔ０１、白血病細胞株（ＨＴＬＶ−Ｉ非感染）であるＪｕｒｋａｔ、急性リンパ芽球性白血病細胞株であるＭＯＬＴ−４を１ウェル当たり２０，０００個、その対照としてＰＢＭＣ（健常人由来末梢リンパ球）を１ウェル当たり１００，０００個、それぞれ９６ｗｅｌｌプレートに播種し、０〜２０μＭのＴＷＳ１１９存在下で、ＣＯ_２インキュベーターで３日間培養後、生細胞数をＭＴＴ法によりＴＷＳ１１９の各細胞に対する増殖阻害効果を評価した。結果を図７に示す。
ＴＷＳ１１９は４μＭの濃度で、ＡＴＬ患者由来細胞株であるＳ１Ｔ及びＳｕ９Ｔ０１の生細胞率をそれぞれ約６０％、約２０％に減少させた。
白血病細胞株（ＨＴＬＶ−Ｉ非感染）であるＪｕｒｋａｔ、急性リンパ芽球性白血病細胞株であるＭＯＬＴ−４の生細胞率もそれぞれ約３０％、約５％に減少させた。
一方、ＰＢＭＣ（健常人由来末梢リンパ球）の生細胞率は９０％であった。

（２）ＧＳＫ−３，リン酸化型ＧＳＫ−３発現への影響
各濃度のＴＷＳ１１９で２４時間処理した細胞のライセートを用いてウェスタンブロット法でＧＳＫ−３及びリン酸化型ＧＳＫ−３（不活性型ＧＳＫ−３）発現を解析した。結果を図８〜１４に示す。
ＴＷＳ１１９はＡＴＬ患者由来細胞株及び白血病細胞株において濃度依存性にＧＳＫ−３発現総量は減少させ、リン酸化型ＧＳＫ−３発現は増加させた。
しかし、ＰＢＭＣ（健常人由来末梢リンパ球）においては濃度依存性にＧＳＫ−３発現総量、リン酸化型ＧＳＫ−３発現のいずれも減少させた。
ＧＳＫ−３β阻害剤であるＴＷＳ１１９は、数μＭの濃度において、強力かつ選択的にＡＴＬ細胞及び白血病細胞に細胞死を誘導することから、ＡＴＬ及び白血病の治療薬として有用であることが示唆された。
その作用メカニズムとして、ＴＷＳ１１９はＡＴＬ細胞及び白血病細胞においてＧＳＫ−３発現総量を減少させるとともに、不活性型であるリン酸化型ＧＳＫ−３を増加させることにより、細胞内におけるＧＳＫ−３の機能を更に減弱させ、その結果、ＡＴＬ細胞及び白血病細胞により強く細胞死を誘導していると考えられる。

（実施例８）１−（７−メトキシキノリン−４−イル）−３−［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］ウレア（Ａ１０７０７２２）の細胞死誘導効果
ＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞株であるＭＴ−２及びＨＵＴ１０２、ＡＴＬ患者由来細胞株であるＳ１Ｔ、Ｓｕ９Ｔ０１及びＯｈ１３Ｔ、白血病細胞株（ＨＴＬＶ−Ｉ非感染）であるＪｕｒｋａｔを１ウェル当たり２０，０００個、その対照としてＰＢＭＣ（健常人由来末梢リンパ球）を１ウェル当たり１００，０００個、それぞれ９６ｗｅｌｌプレートに播種し、０〜２０μＭのＡ１０７０７２２存在下で、ＣＯ_２インキュベーターで３日間培養後、生細胞数をＭＴＴ法によりＡ１０７０７２２の各細胞に対する増殖阻害効果を評価した。
Ａ１０７０７２２は４μＭの濃度で、ＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞株であるＭＴ−２及びＨＵＴ１０２、ＡＴＬ患者由来細胞株であるＳ１Ｔ及びＯｈ１３Ｔの生細胞率を約８０％に、ＡＴＬ患者由来細胞株であるＳｕ９Ｔ０１及び白血病細胞株（ＨＴＬＶ−Ｉ非感染）であるＪｕｒｋａｔの生細胞率を約６０％にそれぞれ減少させた。
一方、ＰＢＭＣ（健常人由来末梢リンパ球）の生細胞率は１００％であった。
ＧＳＫ−３α及びＧＳＫ−３βの阻害剤であるＡ１０７０７２２は、数μＭの濃度において、選択的にＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞、ＡＴＬ細胞及び白血病細胞に細胞死を誘導することから、ＡＴＬ及び白血病の治療薬として有用であることが示唆された。

（実施例９）
（１）ＧＳＫ３阻害剤ＸＶ（GSK-3 inhibitor XV）の細胞死誘導効果
ＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞株であるＭＴ−２及びＨＵＴ１０２、ＡＴＬ患者由来細胞株であるＳ１Ｔ、Ｓｕ９Ｔ０１及びＯｈ１３Ｔ、白血病細胞株（ＨＴＬＶ−Ｉ非感染）であるＪｕｒｋａｔを１ウェル当たり２０，０００個、その対照としてＰＢＭＣ（健常人由来末梢リンパ球）を１ウェル当たり１００，０００個、それぞれ９６ｗｅｌｌプレートに播種し、０〜２０μＭのＧＳＫ３阻害剤ＸＶ存在下で、ＣＯ_２インキュベーターで３日間培養後、生細胞数をＭＴＴ法によりＧＳＫ３阻害剤ＸＶの各細胞に対する増殖阻害効果を評価した。
ＧＳＫ３阻害剤ＸＶは、正常リンパ球に対しても強い毒性を示すものの、数μＭの濃度で、ＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞、ＡＴＬ細胞及び白血病細胞株に対して、強力に細胞死を誘導した。

（２）ＧＳＫ−３，リン酸化型ＧＳＫ−３発現への影響
各濃度のＧＳＫ３阻害剤ＸＶで２４時間処理した細胞のライセートを用いてウェスタンブロット法でＧＳＫ−３及びリン酸化型ＧＳＫ−３（不活性型ＧＳＫ−３）発現を解析した。
ＧＳＫ３阻害剤ＸＶは、ＢＩＯ及びＴＷＳ１１９と同様に、濃度依存性に不活性型であるリン酸化型ＧＳＫ−３発現を増加させることが明らかとなった。

以上の結果から、ＧＳＫ−３阻害剤はＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞及びＡＴＬ細胞に対して、濃度依存性にリン酸化型ＧＳＫ−３発現を増加させることにより細胞死を誘導すると考えられた。

Claims (9)

1. 下記式（Ｉ）：
   

   

   で示される化合物、
   下記式（II）：
   

   

   （式中、Ａｒは置換又は無置換のフェニル基であり、Ｒ ^１ は炭素数１〜３のアルキル基である。）
   で示される化合物、
   下記式（III）：
   

   

   （式中、Ｒ ^２ は水素原子又は炭素数２〜６の脂肪族アシル基であり、当該脂肪族アシル基はカルボキシル基で置換されていてもよい。）
   で示される化合物、
   下記式（IV）：
   

   

   で示される化合物、
   下記式（Ｖ）：
   

   

   で示される化合物、それらの塩又はそれらの溶媒和物から選ばれるＧＳＫ３阻害剤と、ＴＮＦ−αとを含有する成人Ｔ細胞白血病治療薬。
2. ＧＳＫ３阻害剤が前記式（Ｉ）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物から選ばれる請求項１に記載の成人Ｔ細胞白血病治療薬。
3. ＧＳＫ３阻害剤が前記式（II）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物から選ばれる請求項１に記載の成人Ｔ細胞白血病治療薬。
4. 前記式（II）で示される化合物が、下記式（IIａ）：
   

   

   で示される化合物である請求項３に記載の成人Ｔ細胞白血病治療薬。
5. ＧＳＫ３阻害剤が前記式（III）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物から選ばれる請求項１に記載の成人Ｔ細胞白血病治療薬。
6. 前記式（III）で示される化合物が、下記式（IIIａ）：
   

   

   で示される化合物である請求項５に記載の成人Ｔ細胞白血病治療薬。
7. ＧＳＫ３阻害剤が前記式（IV）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物から選ばれる請求項１に記載の成人Ｔ細胞白血病治療薬。
8. ＧＳＫ３阻害剤が前記式（Ｖ）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物から選ばれる請求項１に記載の成人Ｔ細胞白血病治療薬。
9. 成人Ｔ細胞白血病治療において同時に、別々に、又は順次に投与するための組み合わせ製剤であって、２つの別個の製剤：
   （ａ）下記式（Ｉ）：
   

   

   で示される化合物、
   下記式（II）：
   

   

   （式中、Ａｒは置換又は無置換のフェニル基であり、Ｒ ^１ は炭素数１〜３のアルキル基である。）
   で示される化合物、
   下記式（III）：
   

   

   （式中、Ｒ ^２ は水素原子又は炭素数２〜６の脂肪族アシル基であり、当該脂肪族アシル基はカルボキシル基で置換されていてもよい。）
   で示される化合物、
   下記式（IV）：
   

   

   で示される化合物、
   下記式（Ｖ）：
   

   

   で示される化合物、それらの塩又はそれらの溶媒和物から選ばれるＧＳＫ３阻害剤を含有する製剤、及び
   （ｂ）ＴＮＦ−αを含有する製剤
   を含む組み合わせ製剤。

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