JP6510493B2 - 腎毒性活性物質からの保護のための接合体 - Google Patents

Description

本発明は、少なくとも１つの腎臓選択的担体分子と、腎毒性活性化合物に対する腎臓の保護作用を有する少なくとも１つの活性化合物とを含む接合体、該接合体の調製のためのプロセス、腎毒性活性化合物に対する腎臓の保護のためのその使用、および該接合体を含む医薬に関する。

腎臓は、特に、種々の物質の輸送および排泄のために、ならびにホルモンの生成において、重要なものである。腎臓の１つの機能は、尿路を介して身体から最終的に排泄される尿の形成を介した、代謝の最終生成物、いわゆる尿中出現性(urophanic)物質および毒素の、身体からの排泄である。腎臓は、水分バランスを調節し、従って、血圧の長期調節に役立つ。腎臓は、尿の組成の制御によって、電解質バランスおよび酸−塩基バランスを調節する。さらに、腎臓は、身体における中間代謝のための重要な臓器である（これは、糖新生をもたらす）。腎臓は、例えば、血液形成のためのエリスロポエチンなどのホルモンを生成し、ペプチドホルモンの分解の部位である。しかし、腎臓自体の多くの機能もまた、ホルモンによって制御される。

今日、約２億８千万の人々が慢性腎臓疾患に罹患している。多くの診断方法および治療方法が既に開発されている。例えば、免疫抑制剤、細胞分裂阻害剤、免疫療法剤、消炎剤、抗生物質、静ウイルス剤（virostatic）、降圧剤、尿酸排泄剤または利尿剤が、腎臓の処置のためまたは腎臓機能に影響を与えるために使用される。

いくつかの承認された活性化合物、特に細胞分裂阻害剤は、用量制限的な望ましくない副作用として、腎毒性を示す。腎毒性作用を有する物質の例は、シスプラチン、カルボプラチン、ゲンタマイシンまたはシクロホスファミドである。例えば、広く普及した細胞分裂阻害剤シスプラチンは、腎臓の近位尿細管細胞（ＰＴＣ）を損傷し、その結果、単一投与の場合の用量および治療サイクルの数が制限される。ＰＴＣに対する損傷は、細胞内酸化ストレスによって引き起こされる（Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ Ｈら、１９９８、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１３１：５１８〜５２６）。

アミホスチンは、化学物質保護作用および放射線保護作用が多数のモデル動物およびヒトにおいて実証された細胞保護的医薬である。

アミホスチン自体は、内皮細胞の膜中に位置するアルカリホスファターゼによって切断されて、実際の活性化合物２−（（アミノプロピル）アミノ）エタンチオールを生じるプロドラッグである。

アルカリホスファターゼは、健康な組織よりも、悪性腫瘍組織において顕著に低い程度まで発現される。その結果として、アミホスチンは、健康な細胞によって主に取り込まれる。この選択性−これは、１００：１の領域にある−は、腫瘍細胞においても化学物質保護作用および放射線保護作用を発達させることを回避するために必要である。活性種は、２−（（アミノプロピル）アミノ）エタンチオールの抗酸化チオール基である。

アミホスチンは、経口形態では利用可能でない。アミホスチンは通常、放射線療法または化学療法剤の注入の３０分前に注入される。本明細書の用量は、体表面積１ｍ^２当たり７４０〜９００ｍｇの範囲である。患者の半分よりも多くにおいて、重症の副作用として動脈性低血圧が観察される。

従って、活性化合物の副作用を予防するために、処置（例えば、放射線療法または化学療法剤の注入）の間に腎臓をより良く保護する必要性、およびより具体的には、腎毒性活性化合物に対して腎臓をより良く保護する必要性が存在した。

国際公開第２０１１／００９５３９パンフレット

Ｆｒａｎｓｓｅｎら：Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３５、７、１９９２、１２４６〜１２５９

構造ＭＡＧ３−ＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫおよびＭＡＧ３−ＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥ（活性化合物のＮ末端連結−図１、上）ならびにＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥ−ｙおよびＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥ−ｙ（活性化合物のＣ末端連結−図１、下）について、活性化合物の放出に対する鎖長の影響を示す図である。 構造ｙ−ＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫ（活性化合物のＮ末端連結−図２、下）ならびに構造ＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥ−ｙおよびＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥ−ｙ（活性化合物のＣ末端連結−図２、上）について、活性化合物の放出に対する鎖長の影響を示す図である。 投与経路に依存した、１２５ヨウ素標識接合体ｙ（ＫＫＥＥＥ）_３Ｋの臓器分布を比較する図である。 ＮＭＲＩマウスにおける静脈内投与後のＮ末端に結合したジアセチルコーヒー酸（ＫＫＥＥＥ）_３Ｋ活性化合物接合体のシンチグラフィー分布を示す。 ＮＭＲＩマウスにおける静脈内投与後のジコンジュゲート化分子ｙＫＫＫ（ＤＣＡ）ＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＫ（ＤＣＡ）ＥＥＥＫ（ＣＤＡ＝ジアセチルコーヒー酸）のシンチグラフィー分布を示す図である。 ＮＭＲＩマウスにおける静脈内投与後の^１２５Ｉ−ｙ（ＫＫＫε（リポ酸）ＥＥＥ）_３Ｋのシンチグラフィー分布を示す図である。

従って、本発明の目的は、特に腎毒性活性化合物に対して腎臓を保護するための溶液の提供であった。

驚くべきことに、腎臓選択的担体分子と腎臓保護性活性化合物との接合体は、この目的を達成するために非常に適切であることが見出されている。

従って、本発明は、少なくとも１つの腎臓選択的担体分子と、腎毒性活性化合物に対する腎臓の保護作用を有する少なくとも１つの活性化合物とを含む接合体に関する。

本発明によれば、腎臓選択的担体分子は、活性化合物のための担体（または輸送体）として機能することができ、腎臓中への標的化された輸送を可能にする分子を意味すると解釈される。本発明に従って使用され得る担体分子は、活性化合物との接合体化の後に十分に高い腎臓選択性を有する任意の化合物である。

先行技術は、例えば、腎臓の標的化、即ち、腎臓中への標的化された輸送に適切な以下の物質を開示する：
比較的小さい内因性タンパク質、例えばリゾチーム（１４．３ｋＤａ）は、腎臓の糸球体を通過することができ、活性化合物による腎臓のアドレス指定のための輸送体として適切である（Ｆｒａｎｓｓｅｎら：Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３５、７、１９９２、１２４６〜１２５９（非特許文献１）；Ｚｈａｎｇら：Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ３０、２００９、１３７２〜１３８１頁）。

腎臓によって選択的に取り込まれる約５〜２０アミノ酸を有する種々のペプチドが、本発明に従ってさらに適切である。これらは、例えば、ＡＰＡＳＬＹＮおよびＨＩＴＳＬＬＳ（Ｄｅｎｂｙら：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １５、９、２００７、１６４７〜１６５４）またはＡＮＴＰＣＧＰＹＴＨＤＣＰＶＫＲ（ＫｕｍａｒおよびＤｅｕｔｓｃｈｅｒ：Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４９、５、２００８、７９６〜８０３；Ｇｅｎｇら：Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２３、２０１２、１２００〜１２１０）である。

この腎臓選択的担体分子は、好ましくは５０％（アミノ酸単位の数に基づく）を超える式（１）の配列セクション
−（Ｂｍ−Ａｎ−Ｃｏ）− （１）
を含むペプチドであり、
式中、
Ａは、酸性側基を有するアミノ酸を示し、
Ｂは、塩基性側基を有するアミノ酸を示し、
Ｃは、任意の所望のアミノ酸を示し、
ｎ、ｍは、互いに独立して、１〜１０の整数を示し、ここで、ｎ：ｍ＝１：３〜３：１
であり、
ｏは、０と１０との間の整数を示し、
−このペプチド全体は、５〜１００アミノ酸単位の鎖長を有し、
−このペプチドは、少なくとも５０％（アミノ酸単位の数に基づく）のアミノ酸ＡおよびＢからなる。

本発明によれば、ペプチドは、アミド結合を介した２つ以上のアミノ酸を連結することで形成される化合物を意味すると解釈される。本明細書の個々のアミノ酸は、鎖を形成するために、規定された配列で接続される。

本発明によれば、アミノ酸は、少なくとも１つのアミノ基および少なくとも１つのカルボキシル基を有する化合物である。例は、天然のタンパク新生アミノ酸、または生物中に存在するもしくは合成により調製される非タンパク新生アミノ酸である。

アミノ酸単位は、ペプチド中にＤ形態またはＬ形態で存在し得る。

本発明によれば、このペプチドは５〜１００アミノ酸を含む。好ましい一実施形態では、このペプチドは、５〜４０アミノ酸単位の鎖長、特に好ましくは１０〜３０アミノ酸単位の鎖長を有する。

本発明によれば、このペプチドは、５０％（アミノ酸単位の数に基づく）を超える式（
１）の配列セクション
−（Ｂｍ−Ａｎ−Ｃｏ）− （１）
からなる。

このペプチドは、好ましくは、７０％を超える式（１）の配列セクション、特に好ましくは、９０％を超える式（１）の配列セクションからなる。

式（１）中、Ａは、酸性側基を有するアミノ酸を示す。これは、例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニノスクシネート(argininosuccinate)および／またはシステイン酸であり得る。カルボキシル官能基を有するアミノ酸、即ち、グルタミン酸および／またはアスパラギン酸、特に好ましくはグルタミン酸が好ましい。

ペプチド内で、Ａは、酸性側基を有する異なるアミノ酸を示し得、即ち、例えば、グルタミン酸ならびにまたアスパラギン酸、アルギニノスクシネートおよび／またはシステイン酸残基の両方が、このペプチド中に同時に存在し得る。

代替的な一実施形態では、このペプチドの配列セクション内の酸性側基を有するアミノ酸Ａは、同一である；この場合、例えば、このペプチドの１つの配列セクション中の式（１）の全てのアミノ酸Ａは、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニノスクシネートまたはシステイン酸を示し、このペプチドのさらなる配列セクション中の式（１）の全てのアミノ酸Ａは、上記配列セクションとは独立して、アスパラギン酸、グルタミン酸またはシステイン酸を示す。

さらなる代替的な一実施形態では、このペプチド内の酸性側基を有するアミノ酸Ａは、同一である；この場合、このペプチドの全てのアミノ酸Ａは、例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニノスクシネートまたはシステイン酸を示す。

好ましい一実施形態では、このペプチド内の全てのアミノ酸Ａはグルタミン酸を示す。

式（１）中のｎは、アミノ酸単位Ａの数を規定する。ｎは、本明細書で、１〜１０の整数を示す。ｎは、好ましくは１〜５の整数、特に好ましくは２または３を示す。

式（１）中、Ｂは、塩基性側基を有するアミノ酸を示す。これは、例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジンおよび／またはオルニチンであり得る。リジンが好ましい。

ペプチド内で、Ｂは、塩基性側基を有する異なるアミノ酸を示し得る、即ち、例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジンおよび／またはオルニチン残基の両方が、このペプチド中に同時に存在し得る。

代替的な一実施形態では、このペプチドの配列セクション内の塩基性側基を有するアミノ酸Ｂは、同一である；この場合、例えば、このペプチドの１つの配列セクション中の式（１）の全てのアミノ酸Ｂは、リジン、アルギニン、ヒスチジンまたはオルニチンを示し、このペプチドのさらなる配列セクション中の式（１）の全てのアミノ酸Ｂは、上記配列セクションとは独立して、リジン、アルギニン、ヒスチジンまたはオルニチンを示す。

さらなる代替的な一実施形態では、このペプチド内の塩基性側基を有するアミノ酸Ｂは、同一である；この場合、このペプチドの全てのアミノ酸Ｂは、例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジンまたはオルニチンを示す。

好ましい一実施形態では、このペプチド内の全てのアミノ酸Ｂは、リジンを示す。

式（１）中のｍは、アミノ酸単位Ｂの数を規定する。ｍは、本明細書で、１〜１０の整数を示す。ｍは、好ましくは１〜５の整数、特に好ましくは２または３を示す。

式（１）中、Ｃは、任意の所望のアミノ酸を示す。これは、例えば、アラニン、アルギニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンおよび／またはシトルリンであり得る。

天然の様式で連結されたタンパク新生アミノ酸が好ましい。これは、毒物学的に完全に良性の代謝物を生じる、腎臓の近位尿細管細胞におけるこのペプチドの分解を確実にする。

ペプチド内で、Ｃは、異なるアミノ酸を示し得る。

式（１）中のｏは、アミノ酸単位Ｃの数を規定する。ｏは、本明細書で、０〜１０の整数を示す。ｏは、好ましくは０、１または２、特に好ましくは０または１を示す。非常に特に好ましい一実施形態では、ｏは０を示す、即ち、この場合アミノ酸単位Ｃはこのペプチド中に存在しない。

好ましい一実施形態では、ｎおよびｍは、互いに独立して２または３を示す。

本発明によれば、式（１）中のｎ：ｍの比は、１：３〜３：１である。式（１）の配列セクションの例示的実施形態は、以下である：
−（Ｂ３−Ａ１−Ｃｏ）−、−（Ｂ２−Ａ１−Ｃｏ）−、−（Ｂ１−Ａ１−Ｃｏ）−、
−（Ｂ６−Ａ２−Ｃｏ）−、−（Ｂ５−Ａ２−Ｃｏ）−、−（Ｂ４−Ａ２−Ｃｏ）−、
−（Ｂ３−Ａ２−Ｃｏ）−、−（Ｂ２−Ａ２−Ｃｏ）−、−（Ｂ１−Ａ２−Ｃｏ）−、
−（Ｂ９−Ａ３−Ｃｏ）−、−（Ｂ８−Ａ３−Ｃｏ）−、−（Ｂ７−Ａ３−Ｃｏ）−、
−（Ｂ６−Ａ３−Ｃｏ）−、−（Ｂ５−Ａ３−Ｃｏ）−、−（Ｂ４−Ａ３−Ｃｏ）−、
−（Ｂ３−Ａ３−Ｃｏ）−、−（Ｂ２−Ａ３−Ｃｏ）−、−（Ｂ１−Ａ３−Ｃｏ）−、
−（Ｂ１０−Ａ４−Ｃｏ）−、−（Ｂ９−Ａ４−Ｃｏ）−、−（Ｂ８−Ａ４−Ｃｏ）−、
−（Ｂ７−Ａ４−Ｃｏ）−、−（Ｂ６−Ａ４−Ｃｏ）−、−（Ｂ５−Ａ４−Ｃｏ）−、
−（Ｂ４−Ａ４−Ｃｏ）−、−（Ｂ３−Ａ４−Ｃｏ）−、−（Ｂ２−Ａ４−Ｃｏ）−、
−（Ｂ１０−Ａ５−Ｃｏ）−、−（Ｂ９−Ａ５−Ｃｏ）−、−（Ｂ８−Ａ５−Ｃｏ）−、
−（Ｂ７−Ａ５−Ｃｏ）−、−（Ｂ６−Ａ５−Ｃｏ）−、−（Ｂ５−Ａ５−Ｃｏ）−、
−（Ｂ４−Ａ５−Ｃｏ）−、−（Ｂ３−Ａ５−Ｃｏ）−、−（Ｂ２−Ａ５−Ｃｏ）−、
−（Ｂ１０−Ａ６−Ｃｏ）−、−（Ｂ９−Ａ６−Ｃｏ）−、−（Ｂ８−Ａ６−Ｃｏ）−、
−（Ｂ７−Ａ６−Ｃｏ）−、−（Ｂ６−Ａ６−Ｃｏ）−、−（Ｂ５−Ａ６−Ｃｏ）−、
−（Ｂ５−Ａ６−Ｃｏ）−、−（Ｂ３−Ａ６−Ｃｏ）−、−（Ｂ２−Ａ６−Ｃｏ）−、
−（Ｂ１０−Ａ７−Ｃｏ）−、−（Ｂ９−Ａ７−Ｃｏ）−、−（Ｂ８−Ａ７−Ｃｏ）−、
−（Ｂ７−Ａ７−Ｃｏ）−、−（Ｂ６−Ａ７−Ｃｏ）−、−（Ｂ５−Ａ７−Ｃｏ）−、
−（Ｂ４−Ａ７−Ｃｏ）−、−（Ｂ３−Ａ７−Ｃｏ）−、
−（Ｂ１０−Ａ８−Ｃｏ）−、−（Ｂ９−Ａ８−Ｃｏ）−、−（Ｂ８−Ａ８−Ｃｏ）−、
−（Ｂ７−Ａ８−Ｃｏ）−、−（Ｂ６−Ａ８−Ｃｏ）−、−（Ｂ５−Ａ８−Ｃｏ）−、
−（Ｂ４−Ａ８−Ｃｏ）−、−（Ｂ３−Ａ８−Ｃｏ）−、
−（Ｂ１０−Ａ９−Ｃｏ）−、−（Ｂ９−Ａ９−Ｃｏ）−、−（Ｂ８−Ａ９−Ｃｏ）−、
−（Ｂ７−Ａ９−Ｃｏ）−、−（Ｂ６−Ａ９−Ｃｏ）−、−（Ｂ５−Ａ９−Ｃｏ）−、
−（Ｂ４−Ａ９−Ｃｏ）−、−（Ｂ３−Ａ９−Ｃｏ）−、
−（Ｂ１０−Ａ１０−Ｃｏ）−、−（Ｂ９−Ａ１０−Ｃｏ）−、
−（Ｂ８−Ａ１０−Ｃｏ）−、−（Ｂ７−Ａ１０−Ｃｏ）−、−（Ｂ６−Ａ１０−Ｃｏ）−、
−（Ｂ５−Ａ１０−Ｃｏ）−または−（Ｂ４−Ａ１０−Ｃｏ）−、
式中、Ａ、Ｂ、Ｃおよびｏは、上記のように規定される。

本発明によれば、式（１）の配列は、例えば、
−（ＫＫＫＥ）−、−（ＫＫＥ）−、−（ＫＥ）−、
−（ＫＫＫＫＫＥＥ）−、−（ＫＫＫＫＥＥ）−、−（ＫＫＫＥＥ）−、−（ＫＫＥＥ）−、−（ＫＥＥ）−、
−（ＫＫＫＫＫＥＥＥ）−、−（ＫＫＫＫＥＥＥ）−、−（ＫＫＫＥＥＥ）−、
−（ＫＫＥＥＥ）−、−（ＫＥＥＥ）−、
−（ＫＫＫＫＫＥＥＥＥ）−、−（ＫＫＫＫＥＥＥＥ）−、−（ＫＫＫＥＥＥＥ）−、
−（ＫＫＥＥＥＥ）−、
−（ＫＫＫＫＫＥＥＥＥＥ）−、−（ＫＫＫＫＥＥＥＥＥ）−、−（ＫＫＫＥＥＥＥＥ）−、−（ＫＫＥＥＥＥＥＥ）−、
−（ＫＫＫＤ）−、−（ＫＫＤ）−、−（ＫＤ）−、
−（ＫＫＫＫＫＤＤ）−、−（ＫＫＫＫＤＤ）−、−（ＫＫＫＤＤ）−、−（ＫＫＤＤ）−、−（ＫＤＤ）−、
−（ＫＫＫＫＫＤＤＤ）−、−（ＫＫＫＫＤＤＤ）−、−（ＫＫＫＤＤＤ）−、
−（ＫＫＤＤＤ）−、−（ＫＤＤＤ）−、
−（ＫＫＫＫＫＤＤＤＤ）−、−（ＫＫＫＫＤＤＤＤ）−、−（ＫＫＫＤＤＤＤ）−、
−（ＫＫＤＤＤＤ）−、
−（ＫＫＫＫＫＤＤＤＤＤ）−、−（ＫＫＫＫＤＤＤＤＤ）−、−（ＫＫＫＤＤＤＤＤ）−、
−（ＫＫＤＤＤＤＤＤ）−、
−（ＲＲＲＥ）−、−（ＲＲＥ）−、−（ＲＥ）−、
−（ＲＲＲＲＲＥＥ）−、−（ＲＲＲＲＥＥ）−、−（ＲＲＲＥＥ）−、−（ＲＲＥＥ）−、−（ＲＥＥ）−、
−（ＲＲＲＲＲＥＥＥ）−、−（ＲＲＲＲＥＥＥ）−、−（ＲＲＲＥＥＥ）−、
−（ＲＲＥＥＥ）−、−（ＲＥＥＥ）−、
−（ＲＲＲＲＲＥＥＥＥ）−、−（ＲＲＲＲＥＥＥＥ）−、−（ＲＲＲＥＥＥＥ）−、
−（ＲＲＥＥＥＥ）−、
−（ＲＲＲＲＲＥＥＥＥＥ）−、−（ＲＲＲＲＥＥＥＥＥ）−、−（ＲＲＲＥＥＥＥＥ）−、
−（ＲＲＥＥＥＥＥＥ）−、
−（ＫＲＫＥ）−、−（ＲＫＥ）−、
−（ＫＫＲＲＫＥＤ）−、−（ＫＫＫＫＥＤ）−、−（ＫＫＨＥＣ）−、
−（ＫＫＥＤ）−、
−（ＫＫＫＨＫＤＥＥ）−、−（ＫＫＫＫＥＤＤ）−、−（ＲＲＲＥＤＥ）−、
−（ＫＨＤＣＥ）−、−（ＫＤＥＥ）−、
−（ＲＫＲＫＲＤＥＤＥ）−、−（ＫＫＫＨＤＥＥＤ）−、−（ＫＲＨＥＤＣＥ）−、
−（ＫＫＥＤＤＥ）−、
−（ＫＫＲＲＫＥＥＥＥＥ）−、−（ＫＫＲＫＥＥＥＥＤ）−、−（ＫＫＲＥＤＤＥＥ）−、
−（ＫＫＤＤＥＥＥＥ）−
から選択される配列を示すことが可能であり、これらの各々において、アミノ酸の１文字
コードが使用される：Ｅ（グルタミン酸）、Ｄ（アスパラギン酸）、Ｃ（システイン酸）、
Ｋ（リジン）、Ｒ（アルギニン）、Ｈ（ヒスチジン）。

式（１）の配列は、好ましくは、−（ＫＫＥＥＥ）−、−（ＲＲＥＥＥ）−、−（ＫＫＥＥ）−、−（ＫＫＫＥＥＥ）および−（ＫＫＫＥＥ）−を含む群から選択される配列を示す。

式（１）の配列は、特に好ましくは配列−（ＫＫＥＥＥ）−：

を示す。

本発明によれば、このペプチドは、少なくとも５０％（アミノ酸単位の数に基づく）のアミノ酸ＡおよびＢからなる。このペプチドは、好ましくは少なくとも７０％（アミノ酸単位の数に基づく）のアミノ酸ＡおよびＢ、特に好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸ＡおよびＢからなる。

本発明によれば、式（１）の配列セクションは、合計で１〜５０回、好ましくは１〜３０回、特に好ましくは１〜１０回、特に好ましくは２〜５回、このペプチド中に存在し得る。

可能な一実施形態では、このペプチドは、複数の直接連続する式（１）の配列セクションを含む。このペプチドは、好ましくは３〜５個連続する式（１）の配列セクションを含む。

例えば、このペプチドは、３〜５個連続する式（１）の配列セクションと、Ｃ末端および／またはＮ末端における１または複数のさらなるアミノ酸とからなり得る。これは、式（２）中に示される：
Ｘｐ（ＢｍＡｎＣｏ）ｘＹｑ （２）
式中、
Ａ、Ｂ、Ｃ、ｎ、ｍおよびｏは、上で規定したとおりであり、
ｘは、３、４または５を示し、
ＸおよびＹは、互いに独立して、任意の所望のアミノ酸、好ましくはＢを示し、
ｐおよびｑは、互いに独立して、０と３との間の整数、好ましくは０または１を示す。

本発明に従う接合体中の可能なペプチドの例は、（ＲＲＥＥＥ）_３Ｒ、（ＫＫＥＥ）_５Ｋ、（ＫＫＫＥＥ）_３Ｋ、（ＫＫＫＥＥＥ）_３Ｋおよび（ＫＫＥＥＥ）_３Ｋを含む群から選択されるペプチドである。

本発明の代替的な一実施形態では、この腎臓選択的担体分子は、ＷＯ２０１１／００９５３９Ａ１に記載されるようなε−ポリリジン接合体である。この担体分子は、同様に、腎臓における高度に選択的な濃縮を可能にする。ポリマー中のリジン単位は、ε−アミノ基を介して連結される。

従って、本発明はさらに、少なくとも１つの腎臓選択的担体分子が、カルボキシル基を有する少なくとも１つの化合物と、ペプチド結合したモノマー単位からなり、５０％（モノマー単位の数に基づく）を超えるリジンモノマー単位から構築される、または少なくとも７０％（モノマー単位の数に基づく）のリジンモノマー単位から構築される少なくとも１０個連続するモノマー単位を含むオリゴマーとを含む接合体（２）であることを特徴とし、ここで、オリゴマー中の上記リジンモノマー単位は、各場合において、側鎖のε−アミノ基を介して連結され、カルボキシル基を有する化合物の分子量におけるカルボキシル基を有する化合物のカルボキシル基の割合が、３０％を超えることを特徴とする、上記のような接合体に関する。

本発明の目的のために、以下で使用される用語「ε−リジンモノマー単位」および「ε−リジン単位」は、各場合においてその側鎖のε−アミノ基を介してこのオリゴマー中で連結されるリジンモノマー単位を示す。

ε−リジン単位は、以下の化学構造を有する：

これらのε−リジンモノマー単位は、オリゴマー中にＤ形態またはＬ形態で存在し得る。

好ましい一実施形態では、このオリゴマーは１０〜５０モノマー単位の鎖長を有する。

好ましい一実施形態では、カルボキシル基を有する少なくとも１つの化合物は、ε−リジンモノマー単位のアミノ基を介して結合される、即ち、１つまたは複数のε−リジンモノマー単位は、そのアミノ基上に、直接またはスペーサーを介してコンジュゲート化されるカルボキシル基を有する化合物を有する。

一実施形態では、このカルボキシル基を有する化合物は、錯化剤、特に好ましくは、ＤＯＴＡ（＝１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，−Ｎ’’，Ｎ’’’−四酢酸）またはＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）である。

カルボキシル基を有する化合物は、少なくとも１つのカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）と、接合体（２）のオリゴマーへの結合のための少なくとも１つの基または官能基とを含む化学化合物である。オリゴマーへの結合は、オリゴマーとカルボキシル基を有する化合物との共有結合を生じる任意の公知の様式で起こり得る。結合がそれを介して起こり得る官能基の例は、−ＮＨ_２、−ＳＨ、−ＯＨ、Ｈａｌ（例えば、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ）、−アルキン、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、−ＳＯ_２Ｃｌ、−アジド、−カーボネート、−アルデヒド、−エポキシド、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲであり、式中、Ｒは、この場合、好ましくはハロゲンであり、または好ましくは、アクチベーター、即ち、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ペンタフルオロフェニルまたはパラ−ニトロフェニルなどの良好な脱離基である。可能な共有結合型のカップリングの概説は、例えば、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｇｒｅｇ Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９９６、１３７〜１６５頁に見出される。

カルボキシル基を有する化合物は、好ましくは２つ以上のカルボキシル基を含む。これらは、オリゴマーのカルボキシル末端および／もしくはアミノ末端に、ならびに／または接合体化に適切なモノマー単位の官能基（例えば、ＮＨ、−ＮＨ_２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＳＨ、−Ｈａｌ（例えば、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ）、−アルキン、−アジド、−アルデヒド）に、直接またはスペーサーを介して結合され得る。本発明に従って適切なカルボキシル基を有する化合物の例は、以下である：クエン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、グルタミン酸、アジピン酸、酒石酸、シュウ酸、マロン酸、グルタル酸、アジピン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、対応する分岐鎖脂肪酸、マレイン酸、フマル酸、シクロヘキサンジカルボン酸および対応する位置異性体ならびに類似の脂肪族二塩基酸；テトラヒドロフタル酸、５−ノルボルネン−２，３−ジカルボン酸および類似の脂環式二塩基酸；トリカルバリル酸、アコニット酸、トリメシン酸および類似の三塩基酸；アダマンタンテトラカルボン酸、ブタンテトラカルボン酸、シクロペンタンテトラカルボン酸、テトラヒドロフランテトラカルボン酸および類似の四塩基酸；糖酸、特にアルダル酸、例えば、グルカル酸、ガラクタル酸など；リンゴ酸、酒石酸、クエン酸および類似のヒドロキシ脂肪酸；トリメリット酸、ピロメリット酸、ビフェニルテトラカルボン酸、ベンゾフェノンテトラカルボン酸、ジフェニルスルホンテトラカルボン酸および類似の芳香族ポリカルボン酸。

本発明によれば、カルボキシル基を有する化合物は、少なくとも１つのカルボキシル基、好ましくは２つ以上のカルボキシル基と、本発明に従う接合体のオリゴマーへの結合のための少なくとも１つの基または官能基とを含む錯化剤でもあり得る。その例は、ＮＯＴＡ、ＴＥＴＡ、ＥＤＴＡ、または好ましくはＤＯＴＡもしくはＤＴＰＡである。

カルボキシル基を有するこれらの化合物は、典型的には、モノマー単位のアミノ基、例えば、ε−リジンの遊離アミノ基を介して結合される。

カルボキシル基を有する好ましい化合物は、オリゴマーへの接合体化後に２つ以上の遊離カルボキシル基を含む化合物である。

腎臓の標的化において達成される特異性は、カルボキシル基を有する化合物のカルボキシル基が、カルボキシル基を有する化合物のモル質量の大きい割合を構成する場合に、特に高いことが見出されている。従って、モル質量におけるカルボキシル基の割合が３０％を超える、好ましくは４０％を超える、カルボキシル基を有する化合物が好ましい。

従って、本発明に従って特に好ましいカルボキシル基を有する化合物は、オリゴマーへの接合体化後に２つ以上の遊離カルボキシル基を含み、モル質量におけるカルボキシル基の割合が３０％を超える、好ましくは４０％を超える、カルボキシル基を有する化合物、例えば、ＤＯＴＡ、ＤＴＰＡおよびクエン酸などである。

これらの接合体は、カルボキシル基を有する化合物がモノマー単位の１０〜８０％に共有結合される場合、腎臓において特に特異的に蓄積することが見出されている。

この接合体（２）は、好ましくは１０モノマー単位当たりカルボキシル基を有する化合物を少なくとも１つ、特に好ましくは１０モノマー単位当たりカルボキシル基を有する化合物を３個と６個との間、含むべきである。しかし、同様に、カルボキシル基を有する１つの化合物が、１０のモノマー単位のうち９を超えるモノマー単位、または全てのモノマー単位に結合されることも可能である。１０モノマー単位当たりのカルボキシル基を有する化合物の最適な数は、カルボキシル基を有する化合物のタイプおよびモノマー単位のタイプに依存する。モノマー単位当たりのカルボキシル基を有する化合物の上記好ましい数は、特に、完全にε−リジンモノマー単位から構築されるオリゴマーに適用される。接合体（２）中のカルボキシル基を有する化合物の分布は、ランダムであり得、これは、例えば第１のモノマー単位が−ＮＨ_２を含み、その後カルボキシル基を有する化合物を有するモノマー単位が続き、次いで、再度−ＮＨ_２を含むモノマー単位が続き、次いで、カルボキシル基を有する化合物を有するモノマー単位が２回続き、次いで、再度−ＮＨ_２を含むモノマー単位が２回続く、などであることを意味する。

用語オリゴマーは、ペプチド結合したモノマー単位からなるオリゴマーからなる接合体（２）の部分を意味する。このオリゴマーは、典型的には、５〜１０００、好ましくは８〜１００、特に好ましくは１０〜５０のモノマー単位からなる。特に好ましい一実施形態では、このオリゴマーは、８と１００との間のモノマー単位、特に好ましくは１０と５０との間のモノマー単位を有するε−ポリリジンからなる。

しかし、他の実施形態では、最大５０％のε−リジンモノマー単位が、他のモノマー単位によって置き換えられ得、および／または最大５０％のε−リジンモノマー単位が、さらなる官能基の導入によって誘導体化または改変され得る。同様に、ペプチド結合したモノマー単位からなるオリゴマーは、少なくとも７０％（モノマー単位の数に基づく）、好ましくは少なくとも８０％のε−リジン単位からなる少なくとも１０個連続するモノマー単位を含む場合、ε−リジンモノマー単位ではない複数個連続するモノマー単位を含み得る。これは、例えば、ε−リジンモノマー単位が存在しない１０〜２０個のモノマー単位（例えば、アミノ酸を含む）、および引き続いて、例えば、そのうち８つがε−リジンモノマー単位であり２つが他のアミノ酸からなる１０個のモノマー単位の鎖が、このオリゴマーの一方の末端に位置する場合に、当てはまる。

本発明によれば、用語モノマー単位は、オリゴマーの少なくとも１つのさらなる部分にペプチド結合したオリゴマーの任意の部分を意味する。本明細書で、末端モノマー単位は、一般に、１つのさらなるモノマー単位にペプチド結合されるだけである。オリゴマーの中央部のモノマー単位は、２つのさらなるモノマー単位にペプチド結合される。３つのさらなるモノマーにペプチド結合されるモノマー単位は、分岐点に位置する。オリゴマーの中央部のモノマー単位の場合、このモノマー単位は、典型的には、一方でペプチド結合の−ＮＨ部分を、他方で−ＣＯ部分を提供する。

本発明に従うオリゴマーがε−リジンモノマー単位に加えて含み得る典型的な他のモノマー単位は、天然または合成のアミノ酸、例えば、特に、アラニン、β−アラニン、グリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸またはアルギニンである。

さらなる典型的なモノマー単位は、式
−ＮＨ−ＳＰ−ＣＯ− Ｉ
のスペーサー機能を有するモノマー単位であり、
式中、ＳＰは、Ｃ１〜Ｃ２０アルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン基であり得、ここで、１または複数の非隣接メチレン基は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ_２−、−ＳＯ_２Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＣＨ_２−、−ＣＨＲ’−、−ＣＲ’_２−、−ＣＲ’＝ＣＨ−、−ＣＨ−ＣＲ’−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＲ’＝ＣＲ’−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｎ^＋Ｒ’_２−、−Ｐ（Ｏ）Ｒ’Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’−、−ＳＯ_２ＮＲ’−、−ＯＰ（Ｏ）Ｒ’Ｏ−、Ｐ（Ｏ）（ＮＲ’_２）ＮＲ’−、−ＰＲ’_２＝Ｎ−またはＰ（Ｏ）Ｒ’−によって置き換えられ得、式中、Ｒ’＝Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_７−シクロアルキル、未置換または置換フェニルである。

ＳＰは、好ましくは、直鎖Ｃ３〜Ｃ１０−アルキル鎖、１もしくは複数のアルキレン基を有する直鎖Ｃ３〜Ｃ１０鎖、２〜１０のエチレングリコール単位を有するエチレングリコール鎖、またはオリゴペプチド鎖を示す。

さらなる典型的なモノマー単位は、スペーサー、活性化合物、ペプチド、色素、可溶化剤、保護基、固相もしくは類似の構成成分の連結のための官能基、または構成成分、例えば活性化合物、錯化剤、ペプチド、可溶化剤、保護基、固相もしくは色素が既に直接もしくはスペーサーを介して結合された官能基を含むモノマー単位である。このタイプのモノマー単位は、好ましくは、以下の官能基−ＮＨ_２、−ＳＨ、−ＯＨ、−Ｈａｌ（例えば、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ）、−アルキン、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、−ＳＯ_２Ｃｌ、−アジド、−カーボネート、−アルデヒド、−エポキシド、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲのうちの少なくとも１つを有し、式中、Ｒは、この場合、好ましくはハロゲン、または好ましくはアクチベーター、即ち、例えば、Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド、ペンタフルオロフェニルもしくはパラ−ニトロフェニルなど良好な脱離基であり、または、この型の官能基を介して、活性化合物、錯化剤、ペプチド、色素もしくは類似の構成成分に連結される。

さらに、本発明に従うオリゴマーは、誘導体化されたε−リジンモノマー単位を含み得る。これらは、さらなる官能基（Ｆ１／Ｆ２）が、ＮＨ基および／またはアミノ基に、対応して結合したモノマー単位である。

好ましい一実施形態では、接合体（２）中のオリゴマーは、アミノ酸システインを含む。この実施形態は、活性化合物が、腎臓の保護のために、システインのＳＨ基に直接結合され得るという利点を有する。この結合は、細胞内で容易に破壊され得、一方では、活性化合物が放出されるのを可能にし、他方では、それ自体が抗酸化作用を有し得るシステイン残基上のＳＨ基が再度遊離になるのを可能にする。

上に示した式が、オリゴマー鎖の中央部におけるモノマー単位を示すこと、および末端モノマー単位が、Ｃ末端に位置するかＮ末端に位置するかに応じて、各場合において、−ＣＯ−の代わりにＣＯＯＨもしくはＣＯＯＲ基を有する、または−ＮＨ−もしくは−ＮＦ１−の代わりにＮＨ_２、ＮＦ１Ｈ、ＮＦ１Ｒ、ＮＨＲもしくはＮＲ_２基を有することが、当業者に明らかであり、式中、Ｒは、典型的には、Ｈ、直鎖もしくは分岐鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル、活性化合物、錯化剤、ペプチド、色素、可溶化剤、保護基、固相もしくは類似の構成成分の結合のためのスペーサー機能、または直接もしくはスペーサーを介して結合した活性化合物、錯化剤、ペプチド、色素、可溶化剤、保護基、固相もしくは類似の構成成分である。

本発明によれば、腎毒性活性化合物に対する腎臓の保護作用を有する活性化合物は、近位尿細管細胞に対する損傷を低減させる活性化合物を意味すると解釈される。例えば、これは、抗酸化剤、アポトーシス阻害剤、細胞周期に対する影響を有する活性化合物、細胞の修復機構を活性化する活性化合物、およびそれらの組み合わせから選択される活性化合物である。

原則として、近位尿細管細胞に対する損傷は、これらの活性化合物の助けにより、いくつかのレベルで低減され得る：
第１のステップでは、細胞の内部中への細胞傷害性化合物の取り込みは、近位尿細管細胞の輸送機構の遮断によって防止され得る。この遮断は、特異的インヒビターを介して、またはあるいは、近位尿細管細胞の受容体を一時的に遮断する十分な量の輸送分子自体を介して、起き得る。類似の作用は、近位尿細管細胞の代謝活性を低減させる物質、またはこれらの細胞を細胞周期のＧ_０期にとどまらせる物質によって示される。

第２のステップでは、細胞中に輸送または拡散された腎毒性化合物は、腎毒性活性化合物の投与前に活性化合物輸送体を介して細胞内部中に導かれた「解毒剤」によって、無害にされ得る。

第３のステップの目的は、損傷した近位尿細管細胞のアポトーシスを抑制することである。例えばシスプラチンなどの細胞傷害性物質は、細胞核中のＤＮＡに対する損傷を引き起こす。損傷レベルが特定の閾値を超える場合、プログラム細胞死、アポトーシスが、この細胞において誘発される。腫瘍細胞の場合このプロセスは望ましいが、腎臓の近位腫瘍細胞の場合には致死的である。プログラム細胞死を防止することが可能な、または細胞におけるアポトーシスの開始のための閾値を増加させることが可能な一部の物質（アポトーシス阻害剤）が、公知である。

第４のステップでは、細胞の天然の修復機構を活性化し、従ってＤＮＡ損傷を修復する物質が細胞中に導かれ得る。

輸送機構の遮断（ステップ１）：
近位尿細管細胞の輸送機構に対する影響を有する活性化合物が、腎臓選択的担体分子上にコンジュゲート化され得る。管腔中である側であって糸球体限外濾過液と接触する近位尿細管細胞の頂端側上、およびまた血管に面する側である側底側上の両方の細胞性輸送体が、特異的に選択された活性化合物分子を介して遮断され得る。近位尿細管細胞の側底側の輸送体は、内因性物質および例えば医薬などの外来物質の近位尿細管分泌にとって特に重要なものである。アニオン性物質は、有機アニオン輸送体１（ＯＡＴ１）を介して近位尿細管細胞によって取り込まれる。対照的に、カチオン性物質は、有機カチオン輸送体２（ＯＣＴ２）を介して取り込まれる。両方の輸送体が、特定の活性化合物によって阻害され得る。ＯＡＴ１のインヒビターの一例は、薬物プロベネシドである（Ｋｕｒｔｚ Ａら、２００９、Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｅ、ＩＳＢＮ ３−１３１−５１４９６−５、３６５頁）。プロベネシドは、本発明に従うペプチド上にコンジュゲート化され得、糸球体濾過後に、近位尿細管細胞の頂端側を介して取り込まれる。それを介してプロベネシドのカルボキシル基が担体分子とコンジュゲート化されるエステル基などの不安定性リンカーを介して、近位尿細管細のエンドソーム中の化学的に変化していない活性化合物が、エステラーゼによって遊離され得る。この遊離活性化合物は、拡散または輸送体を介して側底側に到達し得、その場所で有機アニオン輸送体１を遮断し得る。

有機カチオン輸送体２のインヒビターの一例は、薬物タクリンである（Ｓｕｎｇ ＪＨら、２００５、Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓｐｏｓ、３３（３）：４４０〜４４８ ＰＭＩＤ １５５４７０４９）。タクリンはまた、本発明に従うペプチドに、例えばシッフ塩基として、またはアミド的に（amidically）、コンジュゲート化し得る。従って、この有機カチオン輸送体２は、コンジュゲート化されたプロベネシドの例において記載される経路によって遮断され得る。例えば、腎臓毒性細胞分裂阻害剤シスプラチンは、側底側でＯＣＴ２を介して近位尿細管細胞によって取り込みおよび蓄積される。次いで、このシスプラチンは、近位尿細管細胞においてその腎臓損傷性作用を発生させる（Ｆｒｅｉｓｓｍｕｔｈ Ｍら、２０１２、Ｐｈａｒｍａｋｏｌｏｇｉｅ ＆ Ｔｏｘｉｋｏｌｏｇｉｅ、ＩＳＢＮ ３−６４２−１２３５３−８、７３５頁）。

抗酸化剤（ステップ２）：
抗酸化作用を有するいくつかの物質は、腎臓選択的担体分子上にコンジュゲート化され得る。適切なクラスの活性化合物は、とりわけ、ポリフェノール類（レスベラトロール、コーヒー酸、ルテオリン、ケルセチン、ルチン、シアニジン、キサントフモール（xanthohumol）、…）、リポ酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、アミホスチン、アリイン、チオール類（例えば、２−メルカプトエタンスルホン酸ナトリウム(メスナ)）、トコフェロール類、カロテノイド類（carotinoids）および／もしくはブチルヒドロキシトルエン(ＢＨＴ)、またはそれらの組み合わせである。

使用される腎臓選択的担体分子が、ＷＯ２０１１／００９５３９Ａ１（特許文献１）に開示されるようなε−ポリリジン接合体である場合、オリゴマーの分子構造は、オリゴマー中にアミノ酸システインの基本単位を取り込むことによって変動され得る。システインは、抗酸化作用を有する遊離チオール基を有する。この構造が存在する場合、担体は、抗酸化作用を有する活性医薬を与えるために改変され得る。それとは独立して、いくつかの保護的活性化合物が、上記のように、その代わりに、またはそれに加えて、ペプチド性担体上にコンジュゲート化され得る。

アポトーシス阻害剤（ステップ３）：
抗アポトーシス物質が、腎活性化合物輸送体上にコンジュゲート化され得る。この群の活性化合物の例は、ピフィスリン−μ（Ｎｉｊｂｏｅｒら ２０１１、Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ．：ｄｏｉ：１０．１００２／ａｎａ．２２４１３）およびピフィスリン−α（Ｋｏｍａｒｏｖａら ２０００、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃ）６５（１）：４１〜４８）ならびにＭＤＬ ２８１７０（Ｋａｗａｍｕｒａら ２００５、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．１０３７（１−２）：５９〜６９）およびＮＳ３６９４（Ｚｈａｏら ２０１０、Ａｇｅ（Ｄｏｒｄｒ）３２（２）：１６１〜１７７）である。ｐ５３インヒビターであるピフィスリン−αは、処置された細胞およびモデル生物において、アポトーシスの誘発のための閾値を顕著に上昇させることができる。

アポトーシス阻害剤の利点は、それらが、細胞に対する損傷の後にも投与できることである。増加した癌のリスクの結果を有し得るアポトーシス阻害剤の全身性投与の不利益は、本発明に従う担体分子を用いた臓器特異的投与によって有利に予防され得る。

細胞周期または代謝に対する影響を有する活性化合物：
抗酸化剤およびアポトーシス阻害剤に加えて、近位尿細管細胞の細胞周期の（一時的）停止を引き起こす化合物も同様に、腎毒性医薬による腎臓に対する損傷が低減され得る潜在的な活性化合物である。その一例は、化合物アピゲニンである（Ｒｕｅｌａ−ｄｅ−Ｓｏｕｓａら ２０１０、Ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ＆ ｄｉｓｅａｓｅ．１、ｅ１９）。

細胞の修復機構を活性化する活性化合物（ステップ４）：
例えばＳｐ１またはＭＤＣ１などの特定の転写因子の活性化によって（Ｌｕｏら ２０１２、Ｔｈｅ ＥＭＢＯ ｊｏｕｒｎａｌ、３１（１３）：３００８〜３０１９）、細胞は、（二本）鎖破壊の増加した修復のために刺激され得る（Ｂｅｉｓｈｌｉｎｅら ２０１２、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ、ＤＯＩ：１０．１１２８／ＭＣＢ．０００４９−１２．ＰＭＩＤ ２２８２６４３２）。フラボノイドバイカレイン（５，６，７−トリヒドロキシフラボン）は、細胞においてＤＮＡ修復を活性化することが可能な化合物の一例である（Ｋｉｍら ２０１２、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ、ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１０５６５−０１２−９２３３−ｙ．ＰＭＩＤ ２３０１１６３６）。

さらに、細胞周期停止（ステップ１）は、本質的に「修復作業」が損傷したＤＮＡに対して実施される状態に細胞を置く（Ｓａｌｅｈら ２０１２、Ｃａｎｃｅｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ＆ ｔｈｅｒａｐｙ １１、ＰＭＩＤ ２２８９５０６６）。

いくつかのクラスの活性化合物の(同時)投与（上述の例のステップ１〜４）は、近位尿細管細胞に対する損傷を可能な限り低く維持するために特に有利である。本明細書の個々の活性化合物が、別々の輸送体分子上にコンジュゲート化され得るか、または複数の異なる活性化合物が、１つの輸送体分子上にコンジュゲート化され得る。

従って、接合体中の可能な活性化合物は、抗酸化剤、アポトーシス阻害剤、細胞周期に対する影響を有する活性化合物、細胞の修復機構を活性化する活性化合物、受容体インヒビターおよびそれらの組み合わせを含む群から選択され得る。

好ましい一実施形態では、腎毒性活性化合物に対する腎臓の保護作用を有する活性化合物は、抗酸化剤および／またはアポトーシス阻害剤である。

好ましい抗酸化剤は、リポ酸、レスベラトロール、コーヒー酸、ルテオリン、ケルセチン、ルチン、シアニジン、キサントフモール、アスコルビン酸、ニコチン酸、アミホスチン、アリイン、チオール類、メスナ、トコフェロール類、カロテノイド類およびブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）である。

好ましいアポトーシス阻害剤は、ピフィスリン−μ（Ｎｉｊｂｏｅｒら ２０１１、Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ．：ｄｏｉ：１０．１００２／ａｎａ．２２４１３）、ピフィスリン−α（Ｋｏｍａｒｏｖａら ２０００、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃ）６５（１）：４１〜４８）、ＭＤＬ ２８１７０（Ｋａｗａｍｕｒａら ２００５、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．１０３７（１−２）：５９〜６９）およびＮＳ３６９４（Ｚｈａｏら ２０１０、Ａｇｅ（Ｄｏｒｄｒ）．３２（２）：１６１〜１７７）である。

従って、本発明の特に好ましい一実施形態では、腎毒性活性化合物に対する腎臓の保護作用を有する活性化合物は、レスベラトロール、コーヒー酸、ルテオリン、ケルセチン、ルチン、シアニジン、キサントフモール、アスコルビン酸、ニコチン酸、アミホスチン、アリイン、チオール類、トコフェロール類、カロテノイド類、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ピフィスリン−μ、ピフィスリン−α、ＭＤＬ ２８１７０および／もしくはＮＳ３６９４、またはそれらの混合物である。

本発明によれば、この接合体は、上に規定したような少なくとも１つの腎臓選択的担体分子と、上に規定したような腎毒性活性化合物に対する腎臓の保護作用を有する少なくとも１つの活性化合物とを含む。

担体分子への活性化合物の結合は、好ましくは、共有結合であり、任意選択でスペーサーを介して起こり得る。

本発明によれば、本発明に従う接合体１つ当たり、１または複数の同一または異なる活性化合物分子が結合され得る。

同様に、本発明に従う接合体は、特に、比較的大きい活性化合物分子、例えばタンパク質などの高分子の場合、活性化合物の腎臓特異的濃縮を促進するために、１つの活性化合物分子に結合された２つ以上の担体分子もまた含み得る。これらの担体分子は、典型的には、再度、本明細書では高分子に共有結合される。本発明によれば、高分子は、タンパク質などの大きい分子だけでなく、その代わり、活性化合物がそれによって輸送または活性化合物に結合され得る、任意の形態の粒子（例えば、ナノ粒子）、リポソームまたは他の系もまた意味すると解釈される。

さらに、細胞特異的標的化のための官能基、例えば、抗体、抗体断片またはアプタマーなどが、本発明に従う接合体に結合され得る。蛍光色素またはインターロイキン、例えばＩＬ−２もまた結合され得る。

活性化合物または他の官能基は、直接、またはスペーサーによって、ペプチドに共有結合され得る。

しばしばリンカーとも呼ばれるスペーサーは、１つの分子の２つの部分の間、本発明の場合には、例えばペプチドと活性化合物との間での共有結合をもたらす。例えば、２つの部分間の接続が直接的化学結合を介して起こらないだけでなく、その代わりに２つの部分間で特定の分離が生成される場合に、スペーサーが導入される。同様に、スペーサーは、他の方法では互いに反応しない１つの分子の２つの部分を接続するために必要な化学官能基を提供し得る。担体分子または活性化合物上へのスペーサーのコンジュゲート化は、好ましくは、アミド結合またはエステル結合を介して起こる。スペーサーは、例えば、脂肪族炭化水素、ポリエーテル（例えばポリエチレングリコール）、ペプチド、または鎖構造を有する類似の要素であり得る。このスペーサーは、安定であり得る、即ち、このスペーサーは、生理学的条件下で僅かな程度までしか切断され得ないもしくは全く切断され得ない、またはこのスペーサーは、不安定であり得る、即ち、このスペーサーは、少なくとも特定の生理学的条件下で切断され得る。

直接的結合が起こり得る官能基の例は、−ＮＨ_２、−ＳＨ、−ＯＨ、−Ｈａｌ（例えば、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ）、−アルキン、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、ＳＯ_２Ｃｌ、−アジド、−カーボネート、−アルデヒド、−エポキシド、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ、式中、Ｒは、この場合、好ましくはハロゲンであり、または好ましくは、アクチベーター、即ち、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ペンタフルオロフェニルまたはパラ−ニトロフェニルなどの良好な脱離基である。可能な共有結合型のカップリングの概説は、例えば、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｇｒｅｇ Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９９６、１３７〜１６５頁に見出され得る。

例えば、活性化合物は、本発明に従う接合体において、切断可能なリンカーを介して結合され得る。次いで、このリンカーは、特定の条件下でｉｎ ｖｉｖｏで、例えば酵素的または化学的に切断され、活性化合物を放出する。この目的のために、適切なリンカーは、カルボキシレートおよびジスルフィド結合を含むリンカーであり、ここで、前者の基は、酵素的または化学的に加水分解され、後者は、例えば、グルタチオンの存在下でのジスルフィド交換によって分離される。

切断可能なスペーサーの一例は、特異的内因性酵素の助けによって特異的に切断され得るペプチド、またはあるいは身体に添加されるペプチドでもある。従って、例えば、ペプチド配列ＤＥＶＤ（Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ）は、カスパーゼ−３によるアポトーシス誘導後に切断される。従って、例えば、このタイプのスペーサーを介して結合される活性化合物は、腎臓の中での特定の滞留時間後に腎臓から除去され得るか、またはあるいは、腎臓の対応する機能性（特定の酵素の存在または非存在）がチェックされ得る。さらなる例は、マトリクスメタロプロテアーゼ−１３によって切断され得る、ペプチド配列ＣＰＥＮ↓ＦＦＷＧＧＧＧ（Ｓａｌｉｎａｓら ２００８、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２９、２３７０〜２３７７）またはＰＥＮＦＦである。

切断可能なスペーサーの単純な一実施形態は、エステラーゼによって容易に切断され得るカルボキシレートの形成である。

従って、本発明の好ましい一実施形態では、この活性化合物は、エステル結合を介して結合される。これは、腎臓における活性化合物分子の正確な切断を可能にする。しかし、同時に、この結合は、未熟な切断を防止するために、腎臓中への輸送のために予め十分に安定である。

さらに、活性化合物の活性化合物輸送体への容易に切断可能なエステル結合は、標的部位におけるこの活性化合物の比較的迅速な放出を可能にする。エステル結合の切断は、プロテアーゼによる活性化合物輸送体の分解よりも、時間的により迅速に起こる。

あるいは、このスペーサーは、酸不安定性構造、例えば、ヒドラゾン、イミン、カルボキシルヒドラゾン、アセタールまたはケタールを含み得る（例えば、Ｈａａｇ−Ｒ、Ｋｒａｔｚ−Ｆ、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ １２１８頁（２００６）を参照）。

本発明によれば、この少なくとも１つの活性化合物は、担体分子のＮ末端および／またはＣ末端に結合され得る。

代替的な一実施形態では、この活性化合物は、鎖中のアミノ酸に結合され得る。

さらなる代替的な一実施形態では、この活性化合物は、アミノ酸間の鎖中に結合され得る。

本発明に従う接合体は、腎臓によって高度に選択的に取り込まれ、比較的迅速に分解される。

担体分子上の活性化合物の連結部位の適切な選択、ならびに担体分子の鎖長および分子構造の適切な選択は、所望の薬物速度論、即ち、標的部位、即ち腎臓における所望の活性化合物放出が本明細書で確立されるのを可能にする。

典型的には、より長い担体分子は、より短い担体分子と比較して、遅延された放出を生じる。より長い担体分子は、例えば、２０〜４０アミノ酸、好ましくは３０アミノ酸の鎖長を有するが、より短い担体分子は、典型的には、３〜１０アミノ酸、好ましくは５アミノ酸の鎖長を意味すると解釈される。

Ｃ末端において連結された活性化合物の放出は、Ｎ末端において連結された活性化合物の放出よりも顕著に迅速に起こる。この理論に束縛されないが、ペプチド分解における律速段階は、特に、Ｃ末端から出発してペプチドを分解するカルボキシペプチダーゼによって影響されると推測される。

本発明によれば、分岐鎖様式で鎖中に取り込まれた活性化合物もまた、直鎖様式で連結されたものよりも顕著に緩徐に放出される。分岐鎖ペプチド構造の酵素的分解は、基本的には、直鎖ペプチドの分解よりも顕著に困難である。

さらに、活性化合物の放出速度は、本発明によれば、オリゴマーへのその連結の型によっても制御され得る。容易に切断可能なエステル結合は、標的部位における活性化合物の比較的迅速な放出を可能にする（上を参照のこと）。

本発明は、上記のような接合体の調製のためのプロセスであって、腎毒性物質に対する腎臓の保護作用を有する、任意選択で活性化された活性化合物が、担体分子上にコンジュゲート化されることを特徴とするプロセスにも関する。

本発明に従う接合体の調製は、典型的には、少なくとも以下のプロセスステップを有する：
ａ）少なくとも１つの反応性基を含む、上で規定したような担体分子の提供、
ｂ）ステップａ）からの担体分子への、上で規定したような少なくとも１つの任意選択で活性化された活性化合物のコンジュゲート化。

本発明に従う接合体の担体分子は、特に、ペプチド合成の分野の当業者に公知の種々のプロセスによって、調製され得る。

この調製は、典型的には、固相合成を介して実施される。

本発明によれば、固相は、固相合成において樹脂または支持体として使用され得る、有機、無機または有機／無機複合材料である。さらに、成形品、例えば、マイクロタイタープレートまたは粒状材料、例えば、有機もしくは無機ナノ粒子、金属粒子などの表面もまた、本発明に従って固相とみなされる。

固相合成は、従来のペプチド合成（例えば、Ｆｍｏｃ／ｔＢｕペプチド合成またはＢｏｃ／ベンジルペプチド合成）と対応する様式で実施される。この型の固相合成は、当業者に公知である。ペプチド合成のための適切な教科書は、「Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」：２８９（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）、Ｓｉｄｎｅｙ Ｐ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ(著者)、Ｇｒｅｇｇ Ｂ．Ｆｉｅｌｄｓ(発行元)、Ｍｅｌｖｉｎ Ｉ．Ｓｉｍｏｎ(発行元)Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ（１９９７年１１月）または「Ｆｍｏｃ Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」、Ｗ．Ｃｈａｎ(著者)、Ｗ．Ｃ．Ｃｈａｎ(発行元)、Ｐｅｔｅｒ Ｄ．Ｗｈｉｔｅ(発行元)「Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ Ｐｒ（２０００年３月２日）である。各場合において使用されるモノマーは、本明細書で、本発明に対応するペプチドが形成されるような方法で選択される。アミノ酸単位の型に応じて、合成は、誘導体化されたアミノ酸単位を直接使用して、または誘導体化のために意図した部位において最初に保護されたアミノ酸単位を使用して、実施され得る。ペプチドの合成が完了したところで、活性化合物による最終的な誘導体化が、固相において、または固相からの切断後に溶液において、実施され得る。

この場合における活性化合物の結合は、好ましくは、完了したペプチド、即ち、ペプチドの固相合成が完了したときになお固相上に存在するペプチド、または後者が切断された後に溶液中に存在するペプチドのいずれかに対して起こる。

活性化合物が、例えばペプチドのＮ末端に結合される場合、これらのペプチドは、典型的には、例えばＦｍｏｃなどのアミノ末端保護基を用いて生成される。この活性化合物が、一方では合成樹脂からペプチドを切断するために使用され、他方では側鎖を脱保護するために使用される条件に抵抗できる場合、このＦｍｏｃ基は、完全な樹脂結合ペプチドのＮ末端から切断され得、活性化合物を遊離Ｎ末端アミンに結合させることを可能にする。かかる場合、この活性化合物は、典型的には、オリゴマーアミノ基へのアミド結合またはカルバメート結合を形成するのに有効な活性エステルまたは活性カーボネート基を生成するための、当該分野で一般に公知のプロセスによって活性化される。当然、異なる連結化学を使用することも可能である。

本明細書で副反応を最小化するために、グアニジノ基およびアミジノ基は、従来の保護基、例えば、カルボベンジルオキシ基（ＣＢＺ）、ジ−ｔ−ＢＯＣ、ＰＭＣ、Ｐｂｆ、Ｎ−ＮＯ_２などを使用して、遮断され得る。

カップリング反応は、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）および／または水などの溶媒中で、公知のカップリングプロセスによって実施される。例示的なカップリング試薬には、Ｏ−ベンゾトリアゾリルオキシテトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ブロモ−ｔｒｉｓ（ピロリジノ）ホスホニウムブロミド（ＰｙＢｒｏＰ）などが含まれる。他の試薬、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、４−ピロリジノピリジン、Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミドまたはＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）などが存在し得る。

ＷＯ２０１１／００９５３９Ａ１に記載されるようなε−ポリリジン接合体に基づく担体分子は、ε−ポリリジンから出発しても調製され得る。典型的には、均一または異なる鎖長の合成または天然のε−ポリリジンが、本明細書では、溶液中で、カルボキシル基を有する対応する化合物と反応される。この目的のために、例えば、最初に、カルボキシル基を有する化合物が活性化され得る。これは、例えば、それらを活性エステルまたは酸塩化物に変換することによる、それらのカルボキシル基のうちの１つまたは複数の活性化によって、実施され得る。この後に、ε−ポリリジンとの反応が続き、好ましくは、遊離アミノ基上へのコンジュゲート化が起きる。あるいは、例えば、カルボキシル基を有する化合物の１つまたは複数のカルボキシル基は、カップリング試薬、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）またはＨＡＴＵによって活性化され得、ε−ポリリジンと反応され得、好ましくは、遊離アミノ基上へのコンジュゲート化が起きる。この型の反応のための反応条件は、当業者に公知である。適切な溶媒は、例えば、水、アセトニトリル、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ジオキサン、ＴＨＦ、メタノール、または前記溶媒のうちの２つ以上の混合物である。

本発明に従う接合体は、腎臓の処置または画像化のための活性化合物の全身性副作用が実質的に抑制され得るという利点を有するが、これは、これらの接合体が、腎臓中への腎臓保護性物質の標的化された輸送を可能にするからである。これらの腎臓損傷性活性化合物には、例えば、シスプラチン、カルボプラチン、ゲンタマイシンおよびシクロホスファミドが含まれる。これらの物質の場合、腎毒性は、用量または治療サイクルの数を制限する。

腎臓損傷性物質による腎臓の処置と併せて、治療の前、その間またはその後の本発明に従う接合体の投与（例えば、血流中へのまたは皮下注射後の注射による）は、腎臓における保護性活性化合物の標的化された濃縮を可能にする。

腎臓損傷性物質、例えばシスプラチンで処置した患者には、治療の開始の約３０分前に、腎臓保護性接合体の注射が与えられる。この腎臓保護性接合体は、単回注射によって、または通常１〜２時間の期間に及ぶシスプラチン投与の全期間にわたる連続注入によって、本明細書で起こり得る。

従って、本発明は、特に、特に腎毒性活性化合物に対する腎臓の保護のための、治療組成物などの医薬としての、上記のような本発明に従う接合体にも関する。

本発明は、腎毒性活性化合物に対する腎臓の保護のための、上記のような本発明に従う接合体の使用にも関する。

これに関して、上に規定されるような式（１）の担体分子の使用は、特に有利であるが、それは、これが、他の公知の低分子量構造と比較して、腎臓の標的化に非常に良好に適しており、活性化合物とのコンジュゲート化において、腎臓において非常に良好な濃縮もまた示すからである。腎臓によって選択的に取り込まれる文献中に記載されたペプチド（ＡＰＡＳＬＹＮおよびＨＩＴＳＬＬＳ、アミノ酸は一文字コードで示される（Ｄｅｎｂｙら：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １５、９、２００７、１６４７〜１６５４））との比較は、ほとんどのペプチドが、静脈内投与の後に、程度の差はあるが高度に顕著な腎臓選択性を有するが、これが、活性化合物とのコンジュゲート化においては当てはまらないことを示している。しかし、腎毒性物質に対する腎臓の標的化された保護のための輸送系としてのペプチド構造の薬理学的有用性は、これらのペプチドが、コンジュゲート化された活性化合物と一緒に、腎臓、即ち近位尿細管細胞によって事実上排他的に取り込まれる場合にのみ、生じる。この場合にのみ、活性化合物の全身性投与を上回る顕著な利点が生じる。

さらに、本発明に従う接合体は、腎臓中への活性化合物輸送について文献中に記載されたペプチド／タンパク質の静脈内投与に加えて、腎臓に首尾よく対処するための、本発明に従うペプチド／活性化合物接合体の皮下投与および腹腔内投与を可能にする。

腹腔内投与経路、および具体的には皮下投与経路が、医師および患者にとって、静脈内経路と比較して、潜在的な活性化合物の投与に有利である。

本発明は、上記のような少なくとも１つの本発明に従う接合体を含む医薬または医薬組成物、特に治療組成物または画像増強組成物にも関する。

本発明によれば、この接合体は、全ての比率でのそれらの混合物を含む、その医薬的に使用可能な塩および立体異性体の形態でもあり得る。

医薬組成物または医薬、特に治療組成物の調製のための本発明に従う接合体の使用もまた、本発明に従う。

本発明によれば、本発明は、少なくとも１つの本発明に従う接合体を含む医薬または医薬組成物、特に治療組成物の調製のためのキットにも関し得る。次いで、この接合体は、治療組成物の調製のために、適用に応じて、例えば、適切な活性化合物と反応させ得る。

本発明はさらに、
−医薬としての、
−医薬としての使用のための、
−医薬における活性化合物または活性構成成分としての、
−腎毒性活性化合物に対する腎臓の保護のための使用のための、および
−特に、腎臓の疾患の処置のための医薬としての、
本発明に従う接合体、ならびに／または全ての比率でのそれらの混合物を含む、その医薬的に使用可能な塩および立体異性体、ならびに任意選択で賦形剤および／またはアジュバントに関する。

治療組成物、医薬組成物または医薬は一般に、少なくとも、活性化合物−この場合、活性化合物が結合した本発明に従う接合体−と、治療組成物の適用を可能にする１または複数の適切な溶媒および／または賦形剤とからなる。

医薬組成物または医薬は、任意の所望の適切な方法を介する投与、例えば、経口（頬側または舌下を含む）、直腸、経鼻、外用（頬側、舌下または経皮を含む）、膣内または非経口（皮下、筋内、静脈内または皮内を含む）の方法による投与のために適合され得る。かかる製剤は、例えば、活性成分を賦形剤（複数可）またはアジュバント（複数可）と組み合わせることによって、医薬品分野において公知の全てのプロセスを使用して調製され得る。

経口投与のために適合された医薬製剤は、例えば、カプセル剤もしくは錠剤；粉末もしくは顆粒；水性液体もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁物；食用発泡体もしくは発泡体食品；または水中油液体乳濁物もしくは油中水液体乳濁物などの別々の単位として投与され得る。

従って、例えば、錠剤またはカプセル剤の形態での経口投与の場合、この活性成分構成成分は、経口の非毒性で医薬的に許容される不活性賦形剤、例えば、エタノール、グリセロール、水などと組み合わされ得る。粉末は、適切な微細サイズまで化合物を粉末状にし、これを、類似の様式で粉末状にされた医薬品賦形剤、例えば、食用炭水化物、例えば、デンプンまたはマンニトールなどと混合することによって、調製される。香料、防腐剤、分散剤および色素も同様に存在し得る。

カプセル剤は、上記のように粉末混合物を調製し、成形ゼラチンシェルに粉末混合物を充填することによって生成される。固体形態の、流動促進剤(glidant)および滑沢剤、例えば、高度分散ケイ酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムまたはポリエチレングリコールなどが、充填操作の前に、粉末混合物に添加され得る。崩壊剤または可溶化剤、例えば、寒天（アガー）、炭酸カルシウムまたは炭酸ナトリウムなども同様に、カプセル剤が摂取された後の医薬のアベイラビリティを改善するために、添加され得る。

さらに、所望または必要な場合、適切な結合剤、滑沢剤および崩壊剤ならびに色素も同様に、混合物中に取り込まれ得る。適切な結合剤には、デンプン、ゼラチン、天然の糖、例えば、グルコースまたはβ−ラクトースなど、トウモロコシから製造された甘味料、天然ゴムおよび合成ゴム、例えば、アカシア、トラガントまたはアルギン酸ナトリウムなど、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックスなどが含まれる。これらの投薬形態において使用される滑沢剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。崩壊剤には、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンゴムなどが含まれるが、これらに限定されない。錠剤は、例えば、粉末混合物を調製し、この混合物を顆粒化もしくは乾式プレスし、滑沢剤および崩壊剤を添加し、混合物全体をプレスして錠剤を得ることによって、製剤化される。粉末混合物は、上記のように、適切な様式で粉末状にされた化合物を、希釈剤または塩基と混合し、任意選択で、結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチンもしくはポリビニルピロリドンなど、溶解遅延剤、例えばパラフィンなど、吸収促進剤、例えば第四級塩など、および／または吸収剤、例えばベントナイト、カオリンもしくはリン酸二カルシウムなどと混合することによって、調製される。粉末混合物は、この粉末混合物を、結合剤、例えば、シロップ、デンプンペースト、アカディア(acadia)粘液、またはセルロースもしくはポリマー材料の溶液などで湿らせ、篩を通してプレスすることによって、顆粒化され得る。顆粒化の代替法として、粉末混合物は、錠剤化機械を通されて、顆粒を形成するために破壊される非均一形状の塊を生じ得る。顆粒は、錠剤鋳型への粘着を防止するために、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルクまたは鉱油の添加によって滑沢化され得る。次いで、滑沢化された混合物は、プレスされて錠剤を生じる。本発明に従う化合物はまた、自由流動性不活性賦形剤と組み合わされ得、次いで、顆粒化ステップも乾式プレスステップも実施することなく、直接プレスされて錠剤を生じ得る。セラック密封層、糖またはポリマー材料の層、およびワックスの光沢層からなる透明または不透明な保護層もまた、存在し得る。色素が、異なる投薬単位間の識別を可能にするために、これらのコーティングに添加され得る。

経口液体、例えば、溶液、シロップおよびエリキシル剤などは、投薬単位の形態で調製され得、その結果、所与の量は、予め特定された量の化合物を含む。シロップは、化合物を適切な香料を含む水性溶液中に溶解させることによって調製され得るが、エリキシル剤は、非毒性アルコール性ビヒクルを使用して調製される。懸濁物は、非毒性ビヒクル中での化合物の分散によって製剤化され得る。可溶化剤および乳化剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコールおよびポリオキシエチレンソルビトールエーテルなど、防腐剤、香料添加剤、例えば、ペパーミント油など、あるいは天然甘味料またはサッカリンもしくは他の人工甘味料なども、同様に添加され得る。

経口投与のための投薬単位製剤は、所望の場合、マイクロカプセル剤中にカプセル化され得る。製剤は、放出が延長または遅延されるような方法で、例えば、ポリマー、ワックスなどにおける粒状材料のコーティングまたは包埋などによっても、調製され得る。

本発明に従う接合体は、リポソーム送達系、例えば、小単層膜小胞、大単層膜小胞および多重層膜小胞などの形態でも投与され得る。リポソームは、種々のリン脂質、例えば、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンなどから形成され得る。

本発明に従う接合体は、接合体がカップリングされる個々の担体としてモノクローナル抗体を使用しても送達され得る。これらの接合体はまた、標的化された医薬担体としての可溶性ポリマーにカップリングされ得る。かかるポリマーは、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミドフェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタミドフェノールまたはパルミトイルラジカルで置換されたポリエチレンオキシドポリリジンを包含し得る。さらに、これらの化合物は、医薬の制御された放出を達成するのに適切な生分解性ポリマーのクラス、例えば、ポリ乳酸、ポリ−ε−カプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル類、ポリアセタール類、ポリジヒドロキシピラン類、ポリシアノアクリレート類およびヒドロゲルの架橋されたまたは両親媒性のブロックコポリマーに、カップリングされ得る。

経皮投与のために適合された医薬製剤は、レシピエントの表皮との、延長された密接な接触のための独立したプラスターとして投与され得る。従って、例えば、この活性成分は、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３（６）、３１８（１９８６）において一般的な用語で記載されるように、イオントフォレシスによってプラスターから送達され得る。

外用投与のために適合された医薬化合物は、軟膏、クリーム、懸濁物、ローション、粉末、溶液、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾルまたは油として製剤化され得る。

直腸投与のために適合された医薬製剤は、坐剤または浣腸の形態で投与され得る。

担体物質が固体である、経鼻投与のために適合された医薬製剤は、例えば、２０〜５００ミクロンの範囲の粒子サイズを有する粗い粉末を含み、この粉末は、吸い込みが起こる様式で、即ち、鼻に近づけられた粉末を含むコンテナからの鼻孔を介した迅速な吸入によって、投与される。担体物質として液体を用いる、経鼻スプレーまたは点鼻剤としての投与に適切な製剤は、水または油中の活性成分溶液を包含する。

吸入による投与のために適合された医薬製剤は、エアロゾル、ネブライザーまたは吸入器を備えた種々の型の加圧ディスペンサーによって生成され得る、微細な粒状の粉塵または霧を包含する。

非経口投与のために適合された医薬製剤には、製剤を処置されるレシピエントの血液と等張にする抗酸化剤、緩衝液、静菌剤および溶質を含む、水性および非水性の無菌注射溶液；ならびに懸濁媒および増粘剤を含み得る水性および非水性の無菌懸濁物が含まれる。これらの製剤は、単一用量または多用量のコンテナ、例えば密封アンプルおよびバイアル中で投与され得、フリーズドライ（凍結乾燥）状態で貯蔵され得、その結果、使用直前の、注射目的のための水などの無菌担体液体の添加のみが必要である。レシピに従って調製された注射溶液および注射懸濁物は、無菌の粉末、顆粒および錠剤から調製され得る。

本発明に従う接合体は、好ましくは、非経口投与される。

言うまでもないが、上で特に言及された構成要素に加えて、これらの製剤は、特定の型の製剤に関して当該分野で一般的な他の薬剤もまた含み得る；従って、例えば、経口投与のために適切な製剤は、香料を含み得る。

本発明に従う接合体の治療有効量は、カップリングされた活性化合物の型、患者の年齢および体重、処置を必要とする正確な状態およびその重症度、製剤の性質、ならびに投与の方法を含むいくつかの因子に依存する。

本発明は、本発明に従う接合体を少なくとも含む医薬組成物、特に、画像増強組成物または治療組成物の調製のためのキットにも関する。本発明に従う接合体は、溶媒（例えば水性緩衝液）中に溶解された形態で、または好ましくは、凍結乾燥物の形態で、キット中に存在し得る。

本発明に従う接合体は、適用後短時間で、腎臓中に特異的に、即ち、排他的にまたは事実上排他的に既に蓄積されていたことが見出されている。本発明に従う接合体の好ましい静脈内投与の場合、腎臓における濃縮は、僅か５分後に観察される。１時間後、注射された用量のうち、３０％を超える、好ましくは５０％を超える、特に好ましくは７０％を超える、非常に特に好ましくは８０％を超えるものが、腎臓中に位置する（放射活性の測定値に基づく％データ）。

放射能標識された本発明に従う接合体を用いた臓器分布において（例えば、ＰＥＴ測定または他の非侵襲性画像化）、本発明に従う接合体は、典型的には、適用の１時間後に、身体の残部（血液、心臓、肺、脾臓、肝臓、筋肉、脳）と比較して、腎臓において少なくとも２倍、好ましくは少なくとも５倍、特に好ましくは少なくとも１０倍の濃度を示す。これは、腎臓中の放射能標識された化合物の量と直接相関するシグナルが、血液、心臓、肺、脾臓、肝臓、筋肉および脳から一緒に得られたシグナルの合計の少なくとも２倍の強さであることを意味している。

本発明によれば、腎臓の標的化とは、身体の残部と比較して、腎臓における適用された物質の増加した取り込みの達成を意味する。本発明に従う接合体を用いた腎臓の標的化の場合、身体の残部（血液、心臓、肺、脾臓、肝臓、筋肉、脳）と比較して、少なくとも２倍、好ましくは少なくとも５倍、特に好ましくは少なくとも１０倍の濃縮が、本発明に従う接合体の投与によって、腎臓において好ましくは達成される。これらの値は、放射能標識された本発明に従う接合体を用いた臓器分布研究（例えば、ＰＥＴ測定または他の非侵襲性画像化）によって決定される。腎臓中での濃縮は、典型的には、適用の型に応じて、３０分後〜８時間後に起こる。

図面：
図１は、構造ＭＡＧ３−ＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫおよびＭＡＧ３−ＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥ（活性化合物のＮ末端連結−図１、上）ならびにＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥ−ｙおよびＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥ−ｙ（活性化合物のＣ末端連結−図１、下）について、活性化合物の放出に対する鎖長の影響を示す。

図２は、構造ｙ−ＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫ（活性化合物のＮ末端連結−図２、下）ならびに構造ＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥ−ｙおよびＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥ−ｙ（活性化合物のＣ末端連結−図２、上）について、活性化合物の放出に対する鎖長の影響を示す。

図３は、投与経路に依存した、１２５ヨウ素標識接合体ｙ（ＫＫＥＥＥ）_３Ｋの臓器分布を比較する。

図４は、ＮＭＲＩマウスにおける静脈内投与後のＮ末端に結合したジアセチルコーヒー酸（ＫＫＥＥＥ）_３Ｋ活性化合物接合体のシンチグラフィー分布を示す。

図５は、ＮＭＲＩマウスにおける静脈内投与後のジコンジュゲート化分子ｙＫＫＫ（ＤＣＡ）ＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＫ（ＤＣＡ）ＥＥＥＫ（ＣＤＡ＝ジアセチルコーヒー酸）のシンチグラフィー分布を示す。

図６は、ＮＭＲＩマウスにおける静脈内投与後の^１２５Ｉ−ｙ（ＫＫＫε（リポ酸）ＥＥＥ）_３Ｋのシンチグラフィー分布を示す。

さらなるコメントがなくても、当業者は、最も広い範囲で上記記載を利用できるとみなされる。従って、好ましい実施形態および例は、絶対的に決して限定ではない記述的開示としてのみ、みなすべきである。

１．材料合成
１．１．酸性側基および塩基性側基を含むペプチドの合成
固相ペプチド合成
これらのペプチドを、ポリマー性支持体としてＴｅｎｔａｇｅｌ Ｓ ＲＡＭ樹脂（ローディングの度合い：０．２４ｍｍｏｌ／ｇ；Ｒａｐｐ Ｐｏｌｙｍｅｒｅ、Ｔｕｂｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用するＦｍｏｃ／ｔＢｕ戦略に従って、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＧｍｂＨ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）のＡＢＩ ４３３Ａ完全自動ペプチド合成機上で調製する。酸不安定性側鎖保護基を含むＦｍｏｃ−アミノ酸（Ｆｍｏｃ−ＡＡ−ＯＨ；Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）（例えば、Ａｒｇ（Ｐｂｆ）、Ａｓｎ（Ｔｒｔ）、Ａｓｐ（ｔＢｕ）、Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）、Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｇｌｕ（ｔＢｕ）、Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）、Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ｓｅｒ（ｔＢｕ）、Ｔｈｒ（ｔＢｕ）、Ｔｙｒ（ｔＢｕ））を、出発材料として使用する。合成サイクルは、ａ）ＮＭＰ中２０％のピペリジンを使用するＦｍｏｃ保護基の切断、ｂ）ＮＭＰによる洗浄ステップ、ｃ）カップリング：Ｆｍｏｃ−ＡＡ−ＯＨ／ＨＢＴＵ／ＤＩＰＥＡ／ペプチド樹脂 １０／１０／２０／１、８分、ｄ）ＮＭＰによる洗浄ステップ、からなる。Ｆｍｏｃの切断の有効性を、自動伝導率測定によってモニタリングする。これらのペプチドを、ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ／トリイソプロピルシラン（９５：２．５：２．５）（室温で２時間）を使用して樹脂から切断し、冷メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル中で沈殿させ、遠心分離（４０００ｒｐｍ、５分）によって分離し、減圧中で乾燥させ、ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１：１）から凍結乾燥させる。

ペプチドの精製および特徴付け
樹脂から切断されたペプチドの精製を、ＬａＰｒｅｐユニット（ＶＷＲ ＧｍｂＨ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用するセミ分取ＨＰＬＣによって実施する。使用するカラムは、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ ＢＥＨ１３０ ＰＲＥＰ Ｃ１８（５μｍ、１９×１５０ｍｍ）カラム（流速：９〜２０ｍｌ／分；溶媒：水中０．１％のＴＦＡからアセトニトリル中０．１％のＴＦＡ）である。分離を、対応するペプチドの物理化学的特性と一致する、水からアセトニトリルまでの勾配を使用して実施する。精製されたペプチドが、凍結乾燥後に得られる。

特徴付けのために、調製したペプチドを、分析的ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ １１００）およびＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｅｘａｃｔｉｖｅ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって分析する。標準的な条件下でのＨＰＬＣ分析を、水中０．１％のＴＦＡからアセトニトリル中０．１％のＴＦＡまで５分間の直線勾配に基づいて実施する（条件：ＣｈｒｏｍｏｌｉｔｈＲ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ＲＰ−１８ｅカラム、１００×３ｍｍ；流速：２ｍｌ／分、波長＝２１４ｎｍ）。質量分析のために、Ａｇｉｌｅｎｔ １２００がＨＰＬＣシステムとして機能する（条件：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ Ｇｏｌｄ Ｃ１８カラム、０．２１×２００ｍｍ、勾配：水中０．０５％のＴＦＡからアセトニトリル中０．０５％のＴＦＡまで３０分間、流速：２００μｌ／分、カラムオーブン：６０℃、波長＝２１４ｎｍ）。

ペプチドの放射活性ヨウ素化
標識化を、水中の、標識されるペプチドの１ｍＭストック溶液を使用して実施する（ＤＭＳＯが、より良い溶解度のために添加されていてもよい）。チロシン含有ペプチドを、クロラミン−Ｔ法（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）によって、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２５またはヨウ素−１３１で標識する。この目的を達成するために、２０μｌのリン酸塩緩衝液（０．２５Ｍ、ｐＨ７．４）を、１０μｌのストック溶液に添加し、所望の量の放射活性ヨウ素を添加する。標識化のために、５μｌのクロラミン−Ｔ（Ｈ_２Ｏ １ｍｌ当たり２ｍｇ）を添加する。この反応を３０秒間実施し、引き続いて、１０μｌの飽和メチオニン溶液を使用して終了させる。遊離ヨウ素と副生成物とを分離するために、この反応混合物を、セミ分取ＨＰＬＣ（Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ ＲＰ−１８ｅ、１００×４．６ｍｍ）によって精製する。分離を、水中０．１％のＴＦＡからアセトニトリル中０．１％のＴＦＡまで１０分間の直線勾配を使用して実施する（流速：２ｍｌ／分、２１４ｎｍにおけるＵＶ吸収、γ検出）。引き続いて、溶媒を、ロータリーエバポレーターにおいて除去し、標識されたペプチドを、所望の緩衝液中に取る。

１．２．ε−Ｌ−ポリリジン接合体の合成
ε−Ｌ−ポリリジン−ＤＯＴＡ：
ＤＯＴＡ ２，６−ジフルオロフェニルエステル：ＤＣＣを用いて、ＤＯＴＡおよび２，６−ジフルオロフェノールから（Ｍｉｅｒら Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２００５、１６、２３７）
ε−Ｌ−ポリリジン、平均モル質量約４０００（主に２９〜３４個のリジン単位からなる）を、Ｃｈｉｓｓｏ Ｃｏｒｐ．（Ｊａｐａｎ）から２５％水性溶液として購入し、凍結乾燥する。ε−ポリリジン（３０ｍｇ）を水（２００μｌ）中に溶解させ、メタノール（１ｍｌ）中ＤＯＴＡ ２，６−ジフルオロフェニルエステル（１００ｍｇ）の溶液を添加し、１００μｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加し、この混合物を室温で２日間撹拌する。次いで、ＤＯＴＡ ２，６−ジフルオロフェニルエステル（１００ｍｇ）を再度添加し、この混合物を室温で一晩撹拌する。次いで、この混合物を水で希釈し、ＨＰＬＣによって分取精製する。きれいな画分を、一緒に凍結乾燥する。ＤＯＴＡ−ε−ポリリジン（９８ｍｇ）は、無色固体物質として得られる。ε−ポリリジン１分子当たりのＤＯＴＡ単位の数は、ＧｄによるローディングとＭＳとにより、ε−ポリリジン１分子当たり約１０のＤＯＴＡ単位であると決定される；即ち、ε−ポリリジンのアミノ基の約３０％が反応している。

ε−Ｌ−ポリリジン−ＤＴＰＡ
７５ｍｇのε−Ｌ−ポリリジンおよび３１０ｍｇのＤＴＰＡジフルオロフェニルエステルテトラ−ｔ−ブチルエステルを、４ｍｌのメタノール中に溶解させ、室温で２０時間撹拌する。この反応溶液を蒸発させ、４ｍｌのＴＦＡ＋１００μｌの水を残渣に添加し、２０時間静置する。生成物を、ジエチルエーテルを使用して沈殿させる。ＨＰＬＣによる精製および凍結乾燥により、無色固体として１５０ｍｇが生じる。

１．３．リポ酸−ｙ（ＫＫＥＥＥ）_３Ｋの調製
ペプチドｙ（ＫＫＥＥＥ）_３Ｋを、アミノ酸Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用するＦｍｏｃ／ｔＢｕ戦略の固相合成によって、１．１の下に記載したように、ペプチド合成機において調製する。最初、このペプチドは、樹脂から切断されないが、その代わり、最終的なＦｍｏｃ脱保護の後にＮＭＰ中に懸濁される（１ｍｌのＮＭＰを、１００ｍｇのペプチド樹脂当たり使用する）。（ＲＳ）−リポ酸（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ；その間、樹脂ローディングに基づいて４当量）を、ＮＭＰ（１００ｍｇ当たり１ｍｌ）中に溶解させ、ＨＢＴＵ（４当量）を添加し、この混合物を、室温で約１０分間撹拌する。この反応混合物をペプチド樹脂に添加し、ＤＩＰＥＡ（１０当量）を添加し、この混合物を、室温で約４時間振盪する。樹脂を、ＮＭＰで５回洗浄し、ＤＣＭで５回洗浄し、減圧中で約４時間乾燥させる。リポ酸／ペプチド接合体を、ＴＦＡ／チオアニソール／ＥＤＴ／アニソール（９０／５／３／２）を使用して室温で約１時間樹脂から切断し、冷メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル中で沈殿させ、遠心分離（４０００ｒｐｍ、５分）によって分離し、減圧中で乾燥させ、ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１：１）から凍結乾燥させ、１．１のペプチドの精製および特徴付けの下に記載したように精製する。

他の活性化合物との接合体もまた、同様に調製され得る。

１．４ ｙＫＫＫ（ジアセチルコーヒー酸）（ＥＥＥＫＫ）_２Ｋ（ジアセチルコーヒー酸）ＥＥＥＫの調製
リジン側鎖上へのジアセチルコーヒー酸の消化性コンジュゲート化のために、アミノ酸Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｍｔ）−ＯＨを、ペプチド骨格の配列中に取り込む。切断前に、ジクロロメタン（ＤＣＭ）／トリイソプロピルシラン／ＴＦＡ（９４：５：１）を、１．１の下で調製したペプチド樹脂に３分間添加し、この混合物を、ＤＣＭで５回洗浄する。この操作を３回繰り返す。リジンの直交性に脱保護された側鎖へのカップリングのために、４当量のジアセチルコーヒー酸を、ＮＭＰ中に溶解させ、４当量の１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、４当量のエチルシアノ（ヒドロキシイミノ）アセテート（Ｏｘｙｍａ Ｐｕｒｅ）および１０当量のジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を添加し、この混合物を、室温で約１０分間撹拌し、引き続いて、ペプチド樹脂に添加する。この反応混合物を、室温で約１時間振盪し、ＮＭＰで５回洗浄し、ＤＣＭで５回洗浄し、減圧中で乾燥させる。官能化ペプチドを、１．１の下に記載したように、樹脂から切断し、精製する。

他の活性化合物との接合体もまた、同様に調製され得る。

１．５ ｙ（ＫＫＫε（リポ酸）ＥＥＥ）_３Ｋの調製

１．５．１ Ｆｍｏｃ−リジン（ε−リポ酸）−ＯＨ基本単位の合成
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１．１５ｇ、１０ｍｍｏｌ）、α−リポ酸（２．０２ｇ、９．８ｍｍｏｌ）および（１．９２ｇ、１０ｍｍｏｌ）の１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＡＣ）を、５０ｍｌのＤＭＦ中に溶解させ、室温で約４時間撹拌する。次いで、６０ｍｌの酢酸エチルを、バッチに添加する。有機相を、６０ｍｌの蒸留水で３回洗浄し、６０ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回洗浄し、飽和塩化ナトリウム溶液で１回洗浄する。酢酸エチル相を、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、乾燥するまで蒸発させる
収量：２．２３ｇ（７３．５％）。

Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨ（２．６５ｇ、７．２ｍｍｏｌ）を、１１０ｍｌのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ＝７．４）中に懸濁し、（２．１４ｇ、７．０５ｍｍｏｌ）のリポ酸活性エステル（１３０ｍｌのアセトン中に溶解させた）を添加し、この混合物を、室温で撹拌する。約３時間の反応時間後、この溶液を、０．１Ｎ ＮａＯＨ溶液によってｐＨ７に調整し、室温で約２０時間撹拌する。次いで、このバッチを、０．１Ｎ ＮａＯＨを使用してｐＨ９にし、約３０ｍｌの酢酸エチルで２回洗浄し、引き続いて、１Ｎ ＨＣｌを使用してｐＨ３に調整し、約４０ｍｌの酢酸エチルで３回抽出する。合わせた有機相を、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、乾燥するまで蒸発させる
粗製生成物の重量：４．１４ｇ（１０３．２５％）。

粗製生成物の精製を、フラッシュクロマトグラフィーによって実施する（固定相：シリカゲル６０、粒子サイズ：１５〜４０μｍ、Ｇｏｔｅｃ−Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ ＧｍｂＨによって予めパックされたもの、移動相：クロロホルム、メタノール（０．１％のＨＯＡｃを含む）、流速：６０ｍｌ／分、ローディング：約２ｇ、勾配：１００％から７５％のクロロホルム、１８分）。生成物画分（Ｒｔ＝９．１分）を合わせ、乾燥するまで蒸発させる
生成物重量：３．１８ｇ（７７％）。

１．５．２ 固相ペプチド合成
ペプチドを、Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ戦略を使用して、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＧｍｂＨ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）の合成機、モデル４３３Ａを使用して調製する。アミノ酸の反応性側鎖を、以下のように保護する：Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ｇｌｕ（ｔＢｕ）およびＴｙｒ（ｔＢｕ）。Ｒａｐｐ−Ｐｏｌｙｍｅｒｅ ＧｍｂＨのＲｉｎｋアミド樹脂（ローディングの度合い：０．２４ｍｍｏｌ／ｇ）が固相として機能する。対応するアミノ酸、Ｆｍｏｃ−リジン（ε−リポ酸）−ＯＨ基本単位およびＨＢＴＵを、４倍過剰で使用する。使用する溶媒はＮＭＰであり、ピペリジン（ＮＭＰ中２０％）を、それぞれのＦｍｏｃ切断に使用する。

保護されたペプチドを、ＴＦＡ：チオアニソール：アニソール＝９０：８：２（１００ｍｇ当たり１ｍｌ）を使用して樹脂から切断し（１〜２時間）、ＭＴＢＥ中で沈殿させ、遠心分離し、乾燥させる。

１．５．３ ペプチドの放射活性ヨウ素化
チロシン含有ペプチドを、クロラミン−Ｔ法によって、^１２５ヨウ素で標識する。標識化のために、水中の１ｍＭストック溶液を使用する。必要に応じて、ＤＭＳＯを、より良い溶解度のために添加する。この目的を達成するために、２０μｌのリン酸塩緩衝液（０．２５Ｍ、ｐＨ７．４）を、１０μｌのストック溶液に添加し、所望の量の放射活性ヨウ素を添加する。標識化を、５μｌのクロラミン−Ｔ（Ｈ_２Ｏ １ｍｌ当たり２ｍｇ）を使用して実施する。この反応を３０秒間実施し、引き続いて１０μｌの飽和メチオニン溶液を使用して終了させる。

標識化後、このペプチドを、過剰の遊離ヨウ素および他の副生成物を除去するために、セミ分取ＨＰＬＣによって精製する。１００μｌの０．１ｍＭストック溶液を、注射のために各場合において使用する。注射前に、放射活性を、Ｇｅｉｇｅｒカウンターによって記録する。

他の活性化合物との接合体もまた、同様に調製され得る。

２．使用例
２．１．臓器分布研究
薬物速度論を決定するために、例１．１からの放射活性により標識した調査すべき分子を、尾部静脈を介して雌性ＮＭＲＩマウス中に注射する（動物１匹当たり約１００μｌ）。これらの動物（１つの時点当たりｎ＝３）を、引き続いて、対応する時点において屠殺し、解剖し、単離した臓器（肝臓、腎臓、肺、脾臓、腸、脳、心臓、血液、…）における放射活性の分布を、γカウンター（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ ＬＢ９５１Ｇ）によって定量する。注射用量（ＩＤ）に基づいて臓器／組織１グラム当たりの測定された放射活性を決定し、ＩＤ／ｇの％とした。

活性化合物の放出に対する鎖長の影響を調査する。構造ＭＡＧ３−ＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫ、ＭＡＧ３−ＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥおよびｙ−ＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫ（活性化合物のＮ末端連結−図１、上および図２下）ならびに構造ＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥ−ｙおよびＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＥＥＥ−ｙ（活性化合物のＣ末端連結−図１、下および図２、上）を調査し、ここで、ｙは、チロシンを示し；ＭＡＧ３は、^９９ｍＴｃを錯体化するペプチド断片を示す。

結果は、図１および２に示される（本明細書で、ＩＤ／ｇは、組織１グラム当たりの注射用量を示す）：放射能標識されたチロシン（「活性化合物」として）の放出は、一方では鎖長を介して、他方では「活性化合物」の連結部位（Ｃ末端またはＮ末端）を介して、強く影響される。基本的に、より長いペプチドは、遅延した放出を生じる。さらに、Ｃ末端において連結されたトレーサー（ヨードチロシンまたは^９９ｍＴｃを有するＭＡＧ３もまた）の放出は、Ｎ末端連結の場合よりも顕著に迅速に進行する。ペプチド分解における律速段階は、特に、Ｃ末端から出発してペプチドを分解するカルボキシペプチダーゼによって、見かけ上影響される。

活性化合物の放出速度論は、ペプチドの分子構造および活性化合物の連結部位（Ｃ末端またはＮ末端）を介して、故意に調整され得る。

２．２．投与経路
さらなる実験において、投与経路を調査する。この目的を達成するために、９匹のＮＭＲＩマウスを、３つの群に分ける。全ての動物は、体重１ｋｇ当たり、Ｎ末端において（ＫＫＥＥＥ）_３Ｋに結合したＤ−チロシンの接合体１０ｍｇを受ける。接合体の一部を、クロラミン−Ｔ法によって、Ｄ−チロシン上で１３１ヨウ素で標識する。標識した接合体を、群１には静脈内で、群２には皮下で、群３には腹腔内で投与する。本明細書の接合体を、１００μｌのＰＢＳ緩衝液中に溶解させる。次いで、それぞれの群由来の動物のＳＰＥＣＴスキャンを、種々の時間において実施する（４０分、６０分、１２０分および２４０分）。この実験シリーズの結果を図３に示す。腎臓中への活性化合物の輸送について文献中に記載されたペプチド／タンパク質の静脈内投与に加えて、ペプチドまたは本発明に従うペプチド／活性化合物接合体の皮下投与および腹腔内投与もまた、腎臓に首尾よく対処できる。

２．３．ジアセチルコーヒー酸接合体のシンチグラフィー分布
さらなる実験において、潜在的な活性化合物ジアセチルコーヒー酸（ＤＣＡ）は、Ｎ末端において両方結合され、ペプチド骨格のリジン側鎖まで増加する。ｙ（ＫＫＥＥＥ）_３ＫとのＮ末端接合体の調製を、１．３．の下に記載したのと同様に実施する；ジ接合体化分子（構造：ｙＫＫＫ（ＤＣＡ）−ＥＥＥＫＫＥＥＥＫＫＫ（ＤＣＡ）ＥＥＥＫ）の調製を、１．４の下に記載したのと同様に実施する。この方法で得られたペプチド／活性化合物接合体を、ヨウ素−１２５による標識化および動物モデルマウスにおける静脈内投与の後にその腎臓選択性について調査する。

結果（図４および５を参照のこと）：調製されたペプチド／活性化合物接合体は、ジアセチルコーヒー酸のＮ末端結合後に両方ともその高い腎臓特異性を保持し（図４）、ペプチド骨格のリジンの異なる側鎖へのジアセチルコーヒー酸の二重の結合の場合にも、高い腎臓特異性を保持する（図５）。

２．４．腎臓の保護
前臨床研究において、ＢＡＬＢ／ｃマウスをドキソルビシンで処置する。各実験動物は、体重１ｋｇ当たり１１ｍｇの用量を受ける。コントロール群には、等張生理食塩水溶液のみを投与する。ドキソルビシンで処置した動物を、種々の群に分ける。群Ｂは、注射されたドキソルビシンに加えて、そのカリウム塩の形態での遊離リポ酸の注射を受ける。群Ｃの場合、リポ酸／ペプチド接合体ＬＡ−（ＫＫＥＥＥ）_３（（Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ）_３のＮ末端上のリポ酸）を、遊離リポ酸の代わりに注射によって投与する。

２．５ 例１．５に従うリポ酸接合体のシンチグラフィー分布
さらなる実験において、潜在的な活性化合物リポ酸を、ペプチド骨格のリジン側鎖を介して結合させる。接合体ｙ（ＫＫＫε（リポ酸）ＥＥＥ）_３Ｋの調製を、例１．５に記載したように実施する。この方法で得られたペプチド／活性化合物接合体を、ヨウ素−１２５による標識化および動物モデルマウスにおける静脈内投与の後にその腎臓選択性について調査する。

結果（図６を参照のこと）：調製されたペプチド／活性化合物接合体は、高い腎臓特異性を有する。

Claims (13)

1. 少なくとも１つの腎臓選択的担体分子と、該少なくとも１つの腎臓選択的担体分子と結合している、腎毒性活性化合物に対する腎臓の保護作用を有する少なくとも１つの活性化合物とを含む接合体であって、
   前記少なくとも１つの腎臓選択的担体分子は、３〜５個の配列セクションを含むペプチドであり、
   前記配列セクションが、−（ＫＫＥＥＥ）−、−（ＲＲＥＥＥ）−、−（ＫＫＥＥ）−、−（ＫＫＫＥＥＥ）−および−（ＫＫＫＥＥ）−からなる群から選択される少なくとも１つであり、
   前記配列セクションの前記ペプチド全体に対する割合が５０％（アミノ酸単位の数に基づく）を超え、かつ
   前記ペプチド全体の少なくとも８０％（アミノ酸単位の数に基づく）が、Ｋ及びＥ、あるいはＲ及びＥからなる、
   （但し、Ｅはグルタミン酸を、Ｋはリジンを、Ｒはアルギニンをそれぞれ示す）、
   ことを特徴とする、接合体。
2. 前記少なくとも１つの活性化合物は、前記少なくとも１つの腎臓選択的担体分子と、共有結合されている
   ことを特徴とする、請求項１に記載の接合体。
3. 前記少なくとも１つの活性化合物は、前記少なくとも１つの腎臓選択的担体分子と、スペーサを介して共有結合されている
   ことを特徴とする、請求項２に記載の接合体。
4. 前記配列セクションの３〜５個が連続している、
   ことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の接合体。
5. 前記ペプチドが、（ＲＲＥＥＥ）_３Ｒ、（ＫＫＥＥ）_５Ｋ、（ＫＫＫＥＥ）_３Ｋ、（ＫＫＫＥＥＥ）_３Ｋおよび（ＫＫＥＥＥ）_３Ｋを含む群から選択される
   ことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の接合体。
6. 前記ペプチドの全体は、４０アミノ酸単位までの鎖長を有する、
   ことを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の接合体。
7. 少なくとも１つの活性化合物が、抗酸化剤、アポトーシスインヒビター、細胞周期に対する影響を有する活性化合物、細胞の修復機構を活性化する活性化合物、受容体インヒビターおよびそれらの組み合わせから選択される
   ことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の接合体。
8. 少なくとも１つの活性化合物が、抗酸化剤および／またはアポトーシスインヒビターである
   ことを特徴とする、請求項７に記載の接合体。
9. 前記活性化合物が、リポ酸、レスベラトロール、コーヒー酸、ルテオリン、ケルセチン、ルチン、シアニジン、キサントフモール、アスコルビン酸、ニコチン酸、アミホスチン、アリイン、チオール類、トコフェロール類、カロテノイド類、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ピフィスリン−μ、ピフィスリン−α、ＭＤＬ ２８１７０およびＮＳ３６９４からなる群から選択される少なくとも１つである、
   ことを特徴とする、請求項８に記載の接合体。
10. 請求項１〜９のいずれか一項に記載の接合体の調製のためのプロセスであって、
    腎毒性活性化合物に対する腎臓の保護作用を有する、少なくとも一つの活性化合物が、少なくとも一つの腎臓選択的担体分子にコンジュゲート化される
    ことを特徴とするプロセス。
11. 腎毒性活性化合物に対する腎臓の保護のための医薬用としての、請求項１〜９のいずれか一項に記載の接合体。
12. 腎毒性活性化合物に対する腎臓の保護のための医薬の調製における、請求項１〜９のいずれか一項に記載の接合体の、腎毒性活性化合物に対する腎臓の保護のための有効成分としての使用。
13. 請求項１〜９のいずれか一項に記載の接合体の少なくとも１つを、腎毒性活性化合物に対する腎臓の保護のための有効成分として含む医薬。