JP6510004B2 - イミダゾールジペプチドを含有するエクソソーム調節剤、およびエクソソームを含有する神経細胞活性化剤 - Google Patents
イミダゾールジペプチドを含有するエクソソーム調節剤、およびエクソソームを含有する神経細胞活性化剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6510004B2 JP6510004B2 JP2017220238A JP2017220238A JP6510004B2 JP 6510004 B2 JP6510004 B2 JP 6510004B2 JP 2017220238 A JP2017220238 A JP 2017220238A JP 2017220238 A JP2017220238 A JP 2017220238A JP 6510004 B2 JP6510004 B2 JP 6510004B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hsa
- mir
- exosome
- exosomes
- epithelial cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 327
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 title claims description 244
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 title claims description 114
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 title claims description 109
- 239000012190 activator Substances 0.000 title description 5
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 claims description 106
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims description 105
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 100
- CQOVPNPJLQNMDC-ZETCQYMHSA-N carnosine Chemical compound [NH3+]CCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CNC=N1 CQOVPNPJLQNMDC-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims description 97
- 108010087806 Carnosine Proteins 0.000 claims description 96
- CQOVPNPJLQNMDC-UHFFFAOYSA-N N-beta-alanyl-L-histidine Natural products NCCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CN=CN1 CQOVPNPJLQNMDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 96
- 229940044199 carnosine Drugs 0.000 claims description 92
- QRYRORQUOLYVBU-VBKZILBWSA-N Carnosic acid Natural products CC([C@@H]1CC2)(C)CCC[C@]1(C(O)=O)C1=C2C=C(C(C)C)C(O)=C1O QRYRORQUOLYVBU-VBKZILBWSA-N 0.000 claims description 91
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 65
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 45
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 43
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 43
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 26
- SLRNWACWRVGMKD-UHFFFAOYSA-N L-anserine Natural products CN1C=NC(CC(NC(=O)CCN)C(O)=O)=C1 SLRNWACWRVGMKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 108010085443 Anserine Proteins 0.000 claims description 22
- MYYIAHXIVFADCU-QMMMGPOBSA-N anserine Chemical compound CN1C=NC=C1C[C@H](NC(=O)CC[NH3+])C([O-])=O MYYIAHXIVFADCU-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 22
- 241000210053 Potentilla elegans Species 0.000 claims description 21
- -1 hsa-miR-92-5p Proteins 0.000 claims description 20
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 19
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 claims description 16
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 15
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 15
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims description 14
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 13
- 108091072956 Homo sapiens miR-3162 stem-loop Proteins 0.000 claims description 11
- 108091024388 Homo sapiens miR-6769b stem-loop Proteins 0.000 claims description 11
- 108091068941 Homo sapiens miR-106a stem-loop Proteins 0.000 claims description 10
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 claims description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 10
- 108091068855 Homo sapiens miR-103a-1 stem-loop Proteins 0.000 claims description 9
- 108091068838 Homo sapiens miR-103a-2 stem-loop Proteins 0.000 claims description 9
- 108091061646 Homo sapiens miR-619 stem-loop Proteins 0.000 claims description 9
- 108091024615 Homo sapiens miR-6771 stem-loop Proteins 0.000 claims description 9
- 108091024441 Homo sapiens miR-6775 stem-loop Proteins 0.000 claims description 9
- CCLQKVKJOGVQLU-QMMMGPOBSA-N L-homocarnosine Chemical compound NCCCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 CCLQKVKJOGVQLU-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 9
- 108700002498 homocarnosine Proteins 0.000 claims description 9
- 108091068957 Homo sapiens miR-194-1 stem-loop Proteins 0.000 claims description 8
- 108091065167 Homo sapiens miR-194-2 stem-loop Proteins 0.000 claims description 8
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 8
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 108091044803 Homo sapiens miR-1207 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091093160 Homo sapiens miR-1343 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091070496 Homo sapiens miR-20a stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091070373 Homo sapiens miR-24-1 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091070374 Homo sapiens miR-24-2 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091072943 Homo sapiens miR-3141 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091072632 Homo sapiens miR-3196 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091060457 Homo sapiens miR-320b-1 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091062096 Homo sapiens miR-320b-2 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091056757 Homo sapiens miR-3613 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091035051 Homo sapiens miR-4281 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091055361 Homo sapiens miR-4487 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091055173 Homo sapiens miR-4507 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091023136 Homo sapiens miR-4674 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091093166 Homo sapiens miR-4741 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091024607 Homo sapiens miR-6794 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091070380 Homo sapiens miR-92a-1 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108091070381 Homo sapiens miR-92a-2 stem-loop Proteins 0.000 claims description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 6
- 108091044926 Homo sapiens miR-1227 stem-loop Proteins 0.000 claims description 5
- 108091070372 Homo sapiens miR-26a-1 stem-loop Proteins 0.000 claims description 5
- 108091065428 Homo sapiens miR-26a-2 stem-loop Proteins 0.000 claims description 5
- 108091060471 Homo sapiens miR-320c-1 stem-loop Proteins 0.000 claims description 5
- 108091078079 Homo sapiens miR-320c-2 stem-loop Proteins 0.000 claims description 5
- 108091055359 Homo sapiens miR-4485 stem-loop Proteins 0.000 claims description 5
- 108091023224 Homo sapiens miR-4668 stem-loop Proteins 0.000 claims description 5
- 108091024436 Homo sapiens miR-6779 stem-loop Proteins 0.000 claims description 5
- 108091024605 Homo sapiens miR-6798 stem-loop Proteins 0.000 claims description 5
- 108091024509 Homo sapiens miR-6821 stem-loop Proteins 0.000 claims description 5
- 108091087082 Homo sapiens miR-937 stem-loop Proteins 0.000 claims description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 2
- 108091027973 miR-8075 stem-loop Proteins 0.000 claims description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 80
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 60
- 230000009471 action Effects 0.000 description 36
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 32
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 23
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 15
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 15
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 14
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 14
- 108091024752 Homo sapiens miR-6732 stem-loop Proteins 0.000 description 13
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 12
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 11
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 10
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 10
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 10
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 8
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 8
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 8
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 7
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 6
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 6
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 6
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 6
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 6
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 6
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 5
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 5
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 5
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 5
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 5
- 102000007372 Ataxin-1 Human genes 0.000 description 4
- 108010032963 Ataxin-1 Proteins 0.000 description 4
- 101000979321 Homo sapiens Neurofilament medium polypeptide Proteins 0.000 description 4
- 101000835982 Homo sapiens SLIT and NTRK-like protein 5 Proteins 0.000 description 4
- 108091080240 Homo sapiens miR-8075 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 4
- 102000008730 Nestin Human genes 0.000 description 4
- 108010088225 Nestin Proteins 0.000 description 4
- 102100023055 Neurofilament medium polypeptide Human genes 0.000 description 4
- 102100025501 SLIT and NTRK-like protein 5 Human genes 0.000 description 4
- 102000013127 Vimentin Human genes 0.000 description 4
- 108010065472 Vimentin Proteins 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 4
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000000306 component Substances 0.000 description 4
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 4
- 210000005055 nestin Anatomy 0.000 description 4
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 4
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 210000005048 vimentin Anatomy 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 3
- 230000003925 brain function Effects 0.000 description 3
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 210000001787 dendrite Anatomy 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 3
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 150000002611 lead compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 3
- 230000014511 neuron projection development Effects 0.000 description 3
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 238000003068 pathway analysis Methods 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 2
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 102100025222 CD63 antigen Human genes 0.000 description 2
- 102100027221 CD81 antigen Human genes 0.000 description 2
- 102100037904 CD9 antigen Human genes 0.000 description 2
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000004547 Hallucinations Diseases 0.000 description 2
- 101000934368 Homo sapiens CD63 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000914479 Homo sapiens CD81 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000738354 Homo sapiens CD9 antigen Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000001668 ameliorated effect Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 2
- XWAIAVWHZJNZQQ-UHFFFAOYSA-N donepezil hydrochloride Chemical compound [H+].[Cl-].O=C1C=2C=C(OC)C(OC)=CC=2CC1CC(CC1)CCN1CC1=CC=CC=C1 XWAIAVWHZJNZQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 238000003255 drug test Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000003631 expected effect Effects 0.000 description 2
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 2
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 2
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LUTLAXLNPLZCOF-UHFFFAOYSA-N 1-Methylhistidine Natural products OC(=O)C(N)(C)CC1=NC=CN1 LUTLAXLNPLZCOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 3-Methylhistidine Natural products CN1C=NC(CC(N)C(O)=O)=C1 BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 208000000044 Amnesia Diseases 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- SLRNWACWRVGMKD-QMMMGPOBSA-N Balenine Chemical compound CN1C=NC(C[C@H](N=C(O)CCN)C(O)=O)=C1 SLRNWACWRVGMKD-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 1
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000283153 Cetacea Species 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 229920002567 Chondroitin Polymers 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 206010012239 Delusion Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 239000004278 EU approved seasoning Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000699694 Gerbillinae Species 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108091032861 Homo sapiens miR-448 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091024546 Homo sapiens miR-6752 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026139 Memory disease Diseases 0.000 description 1
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000282339 Mustela Species 0.000 description 1
- JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N N(pros)-methyl-L-histidine Chemical compound CN1C=NC=C1C[C@H](N)C(O)=O JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- BRMWTNUJHUMWMS-LURJTMIESA-N N(tele)-methyl-L-histidine Chemical compound CN1C=NC(C[C@H](N)C(O)=O)=C1 BRMWTNUJHUMWMS-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000015623 Polynucleotide Adenylyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010024055 Polynucleotide adenylyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 208000028017 Psychotic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000269851 Sarda sarda Species 0.000 description 1
- 108050003978 Semaphorin Proteins 0.000 description 1
- 102000014105 Semaphorin Human genes 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 101710202239 Tubulin beta-3 chain Proteins 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000003647 acryloyl group Chemical group O=C([*])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 238000012197 amplification kit Methods 0.000 description 1
- 230000000049 anti-anxiety effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000164 antipsychotic agent Substances 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 239000002249 anxiolytic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039856 aricept Drugs 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 150000005693 branched-chain amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 210000002309 caveolated cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N chondroitin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1OC1[C@H](O)[C@H](O)C=C(C(O)=O)O1 DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 1
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 238000005314 correlation function Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 231100000868 delusion Toxicity 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- ADEBPBSSDYVVLD-UHFFFAOYSA-N donepezil Natural products O=C1C=2C=C(OC)C(OC)=CC=2CC1CC(CC1)CCN1CC1=CC=CC=C1 ADEBPBSSDYVVLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003135 donepezil hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 210000003158 enteroendocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013332 fish product Nutrition 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 239000005428 food component Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 210000002175 goblet cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 1
- 230000027984 hippocampus development Effects 0.000 description 1
- 150000002410 histidine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000007602 hot air drying Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000006984 memory degeneration Effects 0.000 description 1
- 208000023060 memory loss Diseases 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 108091069563 miR-1227 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092825 miR-24 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091048857 miR-24-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091047483 miR-24-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091065173 miR-6769b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091080655 miR-6821 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091036381 miR-937 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 244000309715 mini pig Species 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003757 neuroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000008555 neuronal activation Effects 0.000 description 1
- 230000007979 neuropsychological functioning Effects 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 235000020991 processed meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 125000001501 propionyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000003956 synaptic plasticity Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
[項1]
イミダゾールジペプチドを含有する、神経細胞活性化作用を有するエクソソームを腸管上皮細胞から分泌させるための剤。
[項2]
イミダゾールジペプチドで処理された腸管上皮細胞から分泌されるエクソソームを含有する、神経細胞を活性化するための剤。
[項3]
前記エクソソーム内のmiRNAの含有量が、通常のエクソソーム内のmiRNAの含有量を基準としたときに変動しており、
前記miRNAは、hsa−miR−20a−5p、hsa−miR−24−3p、hsa−miR−26a−5p、hsa−miR−92−5p、hsa−miR−92a−3p、hsa−miR−103a−3p、hsa−miR−106a−5p、hsa−miR−194−5p、hsa−miR−320b、hsa−miR−320c、hsa−miR−619−5p、hsa−miR−937−5p、hsa−miR−1207−5p、hsa−miR−1227−5p、hsa−miR−1343−5p、hsa−miR−3141、hsa−miR−3162−5p、hsa−miR−3196、hsa−miR−3613−3p、hsa−miR−4281、hsa−miR−4485、hsa−miR−4487、hsa−miR−4507、hsa−miR−4532、hsa−miR−4668−5p、hsa−miR−4674、hsa−miR−4741、hsa−6732−5p、hsa−6752−5p、hsa−miR−6769b−5p、hsa−miR−6771−5p、hsa−miR−6775−5p、hsa−miR−6779−5p、hsa−miR−6794−5p、hsa−miR−6798−5p、hsa−miR−6821−5pおよびhsa−miR−8075からなる群より選択される少なくとも1種である、
項1または2に記載の剤。
[項4]
前記エクソソーム内のhsa−miR−6769−5pの含有量が、通常のエクソソーム内のmiRNAの含有量を基準としたときに増加している、項3に記載の剤。
[項5]
前記イミダゾールジペプチドが鶏肉または鶏肉抽出物に含まれた状態のカルノシンおよび/またはアンセリンを含有する、項1〜4のいずれか一項に記載の剤。
[項6]
前記イミダゾールジペプチドがカルノシンを含有する、項1〜5のいずれか一項に記載の剤。
[項7]
培養された腸管上皮細胞を対象とするin vitroの環境下で、または実験動物の体内にある腸管上皮細胞を対象とするin vivoの環境下で、腸管上皮細胞をイミダゾールジペプチドで処理する工程、および前記処理された腸管上皮細胞から分泌されるエクソソームを回収する工程を含む方法。
[項8]
さらに、前記回収されたエクソソーム内のmiRNAと、必要に応じて前記処理された腸管上皮細胞で発現したmiRNA、mRNAまたはタンパク質の一つ以上とを、定量する工程を含む、項7に記載の方法。
[項9]
さらに、培養された神経細胞を対象とするin vitroの環境下で、または実験動物の体内にある神経細胞を対象とするin vivoの環境下で、神経細胞を前記回収されたエクソソームまたはそこに含まれるmiRNAもしくはそのミミックで処理する工程を含む、項7または8に記載の方法。
[項10]
さらに、前記処理された神経細胞内のmiRNA、mRNAまたはタンパク質の一つ以上を定量する工程を含む、項9に記載の方法。
[項11]
前記イミダゾールジペプチドとして、項1、3〜6のいずれか一項に記載の剤に含有されているイミダゾールジペプチドを用いる、項7〜10のいずれか一項に記載の方法。
イミダゾールジペプチドは、イミダゾール基を有するアミノ酸と他のアミノ酸とからなるジペプチドであって、下記の式Iまたは式IIで表すことができる。
本発明で神経細胞活性化剤として用いるエクソソームは、イミダゾールジペプチドで処理した腸管上皮細胞から分泌されるものである。そのようなエクソソームは、イミダゾールジペプチドを添加した培地で腸管上皮細胞を培養し、その培養後の培地から、必要に応じて遠心分離や限外濾過等による前処理を行った上で、市販されている一般的なキットを用いて、またはそれと同等の原理に基づく手段を用いて、例えば、ホスファチジルセリンアフィニティ法を用いて、単離、精製することができる。
本発明のエクソソーム調節剤としてのイミダゾールジペプチドによって処理されたときに、腸管上皮細胞から放出されるエクソソーム内の含有量が変動するmiRNA、換言すれば、本発明のmiRNA調節剤としてのイミダゾールジペプチドによって、エクソソーム中の含有量および/または腸管上皮細胞内の発現量が調節されるmiRNAは、下記のようなものである:hsa−miR−20a−5p、hsa−miR−24−3p、hsa−miR−26a−5p、hsa−miR−92−5p、hsa−miR−92a−3p、hsa−miR−103a−3p、hsa−miR−106a−5p、hsa−miR−194−5p、hsa−miR−320b、hsa−miR−320c、hsa−miR−619−5p、hsa−miR−937−5p、hsa−miR−1207−5p、hsa−miR−1227−5p、hsa−miR−1343−5p、hsa−miR−3141、hsa−miR−3162−5p、hsa−miR−3196、hsa−miR−3613−3p、hsa−miR−4281、hsa−miR−4485、hsa−miR−4487、hsa−miR−4507、hsa−miR−4532、hsa−miR−4668−5p、hsa−miR−4674、hsa−miR−4741、hsa−6732−5p、hsa−6752−5p、hsa−miR−6769b−5p、hsa−miR−6771−5p、hsa−miR−6775−5p、hsa−miR−6779−5p、hsa−miR−6794−5p、hsa−miR−6798−5p、hsa−miR−6821−5pおよびhsa−miR−8075。
・シナプス関連
・神経管の形成、発達
・神経伝達物質の分泌、輸送
・ニューロンの発達、分化
・軸索の誘導、形成
・カドヘリン(細胞接着を司る糖タンパクの一種で、シナプス形成、シナプス可塑性の機能を持つ)
・セマフォリン(軸索伸長、樹状突起の形態・機能の制御に関与する)
・海馬の発達
腸管上皮細胞は、小腸、大腸等の消化管の表層の粘膜を構成している細胞の総称である。このような腸管上皮細胞には、吸収上皮細胞、杯細胞、パネート(Paneth)細胞、腸内分泌細胞、タフト細胞、M細胞などが包含される。なお、実施例で用いているCaco−2は、腸管上皮細胞のモデルとして慣用されている、ヒト大腸癌由来の細胞株であり、培養すると自然に単層を形成し、2〜3週間培養を継続すると分化してさまざまな小腸様の機能を発現する。
本発明のエクソソーム調節剤および神経細胞活性化剤の用途は、それぞれ、神経細胞活性化作用を有するエクソソームを腸管上皮細胞から分泌させる作用、および神経細胞を活性化させる作用を利用する限り特に限定されるものではない。
食品組成物は、エクソソーム調節剤としてのイミダゾールジペプチドまたはこれを含有する抽出物等と、食品として許容される種々の添加剤等やその他の成分とを、所定の配合比で混合するなど、公知の技術を用いて製造することができる。なお、イミダゾールジペプチドを含有するが、組成物として製造されていない天然の素材またはその調理・加工品、例えば鶏肉自体は、食品組成物には該当しない。
医薬組成物は、エクソソーム調節剤としてのイミダゾールジペプチドまたは神経細胞活性化剤としてのエクソソーム(それぞれ、通常は医薬品としての水準を満たす精製物)と、医薬品として許容される種々の添加剤等やその他の成分とを、所定の配合比で混合するなど、公知の技術を用いて製造することができる。
本発明におけるカルノシンは全てL-カルノシン(和光純薬工業(株) Cat. 032-11031)であり、DPBS(Dulbecco's phophate buffered saline)(サーモフィッシャーサイエンティフィック Cat. 14190-144)に1Mとなるように溶液を調製した後、それぞれの終濃度に合わせて希釈して使用した。
[2−1]ExoQuick-TCを用いたエクソソームの精製工程
Caco-2細胞を1×106 cells/dishになるように、100 mm dish に播種した。24時間後、PBS(コントロール)、カルノシン1 mMまたはカルノシン10 mMを添加した。その24時間後、培養上清10 mLを回収し、3000 g で15分間遠心分離し、上清中の細胞を取り除いた。滅菌した15 mLチューブに上清を移し、2 mLの「ExoQuick-TC」(SBI社、エクソソーム濃縮試薬)を加え、転倒混和によりしっかりと混合させた。4℃下で一晩静置させたのち、1500 g で30分間遠心分離した。上清を除去し、残りの液を1500 gで5分間遠心分離した。このとき、チューブの底に白っぽいペレットを確認した。1×RIPA bufferを加えてこのペレットを懸濁した。15秒間ボルテックスしたのち、室温で15分間静置し、完全にエクソソームを溶解させた。
エクソソームの抽出は、ウェスタンブロッティングにより、エクソソームのマーカータンパク質(CD9, CD81およびCD63)を検出することで確認した。確認後、miRNA解析用のマイクロアレイ(アジレント社, GeneChip miRNA4.0 Array)を用いて、PBS(コントロール)、カルノシン1 mM、またはカルノシン10 mMで処理されたCaco-2細胞から放出された、エクソソームに内包されているmiRNAの解析を行った。解析は、セルイノベーター社に依頼し行った。
上記[2]のマイクロアレイを用いた解析において、カルノシン処理(1 mMおよび10 mM)によるエクソソーム内の発現量の増加が認められたmiRNAのうちの一つ、hsa-miR-6732-5pについて、以下の手順で、Caco-2細胞内およびエクソソーム内の発現量を定量リアルタイムPCRによって測定した。
Caco-2細胞を3×105 cells/dish になるように60 mm dishに播種した。24時間後、PBS(コントロール)、カルノシン1 mMまたはカルノシン10 mMを添加した。その24時間後、Caco-2細胞内のTotal RNAを、ISOSPIN Cell & Tissue RNA(NIPPON GENE社)を用いて、規定の手順に従い抽出した。抽出したTotal RNA溶液はNanoDrop2000(Thermo Fisher Scientic 社)により、260 nmでの吸光値をもとにRNA濃度を測定した。
[2−1]で記載したとおりにCaco-2細胞由来のエクソソームを抽出し、SeraMir Exosome RNA Amplification Kit(SBI社)を用いて、規定の手順のとおりエクソソーム内RNAを抽出した。その後はCaco-2細胞内の発現定量解析と同様の手順で実験を進めた。
上記[2]のマイクロアレイを用いた解析において、カルノシン処理(1 mMおよび10 mM)によるエクソソーム内の発現量の増加が認められたmiRNAのうちの一つ、hsa-miR-6769-5pについて、以下の手順で、Caco-2細胞内およびエクソソーム内の発現量を定量リアルタイムPCRによって測定した。
[3−1]と同様の手順で、Caco-2細胞の培地にカルノシン10 mMを添加し、24時間培養後、Caco-2細胞内のhsa-miR-6769-5pの発現量を測定した。結果を図7に示す。PBS処理(コントロール)よりもカルノシン処理(10 mM)の方が発現量が有意に高かった。
[3−2]と同様の手順で、カルノシン10 mMを添加した培地で培養したCaco-2細胞由来のエクソソームを抽出し、そのエクソソーム内のhsa-miR-6769-5pの含有量を測定した。結果を図8に示す。エクソソーム内のhsa-miR-6769-5pも、PBS処理(コントロール)よりもカルノシン処理(10 mM)の方が含有量が有意に高かった。
[5−1]神経細胞へ添加するCaco-2細胞分泌エクソソームの精製
神経細胞へ添加するCaco-2細胞分泌エクソソームは、最も高純度にエクソソームを精製することのできるMagCapture Exosome Isolation PS Kit(Wako社)を用いて精製した。
神経モデル細胞であるSH-SY5Y細胞(ヒト神経芽細胞腫)を用いた。6×103 cells/wellになるように96 well black plateに播種した。1日後、レチノイン酸を終濃度10 μMで処理することで細胞の分化誘導を行った。5日後、上記のとおり精製したエクソソームを1μLずつ添加した。ポジティブコントロールとして、BDNFを50 ng/mlで処理した。6日間培養したのち、免疫染色の工程に進んだ。4%パラホルムアルデヒドで15分間細胞固定処理を行い、PBSで3回洗浄したのち4℃で1時間ブロッキングを行った。その後、1/200に希釈した1次抗体β3-Tubulin(Cell Signaling Technology)を一晩反応させた。1次抗体反応終了後、PBSで3回洗浄し、1/1000に希釈した蛍光標識二次抗体Alexa 555(Molecular Probe)を1時間半反応させ、再度PBSで3回洗浄した。その後DMEM培地で1/500希釈したHoechst33342(同仁化学研究所)を15分間処理し細胞核を染色し、PBSと入れ替えた後、共焦点レーザー顕微鏡で神経突起伸長の様子を観察および写真撮影を行った。
[5−2]と同様、SH-SY5Y細胞を6×103 cells/wellになるように96 well plateに播種した。1日後、上記のとおり精製したエクソソームを10 μLずつ添加した。ポジティブコントロールとして、レチノイン酸を終濃度10 μMで処理した。5日間培養したのち、免疫染色の工程に進んだ。免疫染色は[5−2]と同様に行ったが、一次抗体には1/200に希釈したPan Neuronal Marker(Merck Millipore)を用いた。その後の処理は[5−2]と同様に行った。
[5−1]と同様の手順で、Caco-2細胞にカルノシン10 mM(Exo-Car)またはコントロールとしてPBS(Exo-ctrl)を添加し、24時間後に培養上清を回収し、それらの中に含まれるエクソソームを単離・精製した(ホスファチジルセリンアフィニティ法)。回収されたエクソソームは、Exo-Car、Exo-ctrlどちらも、エクソソームマーカーとして知られているCD9, CD63およびCD81を発現していることを確認した(図示せず)。またそれらのエクソソームの直径はおよそ100 nmであることを確認した(図示せず)。
Claims (11)
- カルノシン、アンセリン、バレニンおよびホモカルノシンからなる群より選択される少なくとも1種のイミダゾールジペプチドを含有する、神経細胞活性化作用を有するエクソソームを腸管上皮細胞から分泌させるための剤。
- カルノシン、アンセリン、バレニンおよびホモカルノシンからなる群より選択される少なくとも1種のイミダゾールジペプチドで処理された腸管上皮細胞から分泌されるエクソソームを含有する、神経細胞を活性化するための剤。
- 前記エクソソーム内のmiRNAの含有量が、通常のエクソソーム内のmiRNAの含有量を基準としたときに変動しており、
前記miRNAは、hsa−miR−20a−5p、hsa−miR−24−3p、hsa−miR−26a−5p、hsa−miR−92−5p、hsa−miR−92a−3p、hsa−miR−103a−3p、hsa−miR−106a−5p、hsa−miR−194−5p、hsa−miR−320b、hsa−miR−320c、hsa−miR−619−5p、hsa−miR−937−5p、hsa−miR−1207−5p、hsa−miR−1227−5p、hsa−miR−1343−5p、hsa−miR−3141、hsa−miR−3162−5p、hsa−miR−3196、hsa−miR−3613−3p、hsa−miR−4281、hsa−miR−4485、hsa−miR−4487、hsa−miR−4507、hsa−miR−4532、hsa−miR−4668−5p、hsa−miR−4674、hsa−miR−4741、hsa−6732−5p、hsa−6752−5p、hsa−miR−6769b−5p、hsa−miR−6771−5p、hsa−miR−6775−5p、hsa−miR−6779−5p、hsa−miR−6794−5p、hsa−miR−6798−5p、hsa−miR−6821−5pおよびhsa−miR−8075からなる群より選択される少なくとも1種である、
請求項1または2に記載の剤。 - 前記エクソソーム内のhsa−miR−6769−5pの含有量が、通常のエクソソーム内のmiRNAの含有量を基準としたときに増加している、請求項3に記載の剤。
- 前記イミダゾールジペプチドが鶏肉または鶏肉抽出物に含まれた状態のカルノシンおよび/またはアンセリンを含有する、請求項1〜4のいずれか一項に記載の剤。
- ヒトまたはヒト以外の哺乳動物に、有効量の、カルノシン、アンセリン、バレニンおよびホモカルノシンからなる群より選ばれる少なくとも1種のイミダゾールジペプチドを含有する食品組成物を摂取させることにより、前記ヒトまたはヒト以外の哺乳動物の体内の腸管上皮細胞から神経細胞活性化作用を有するエクソソームを分泌させる工程を含む、in vivoでの腸管上皮細胞からのエクソソーム分泌方法(但し、ヒトに対する医療的行為を除く。)。
- ヒトまたはヒト以外の哺乳動物に、有効量の、カルノシン、アンセリン、バレニンおよびホモカルノシンからなる群より選ばれる少なくとも1種のイミダゾールジペプチドを含有する食品組成物を摂取させる工程を含む、in vivoでの神経細胞活性化方法(但し、ヒトに対する医療的行為を除く。)。
- 腸管上皮細胞を対象とするin vitroの環境下で、有効量の、カルノシン、アンセリン、バレニンおよびホモカルノシンからなる群より選ばれる少なくとも1種のイミダゾールジペプチドを細胞培養液中に添加することにより、腸管上皮細胞から神経細胞活性化作用を有するエクソソームを分泌させる工程を含む、in vitroでの腸管上皮細胞からのエクソソーム分泌方法。
- さらに、前記処理された腸管上皮細胞から分泌されるエクソソームを回収する工程と、前記回収されたエクソソーム内のmiRNA、および必要に応じて前記処理された腸管上皮細胞で発現したmiRNA、mRNAまたはタンパク質の一つ以上を定量する工程とを含む、請求項8に記載の方法。
- 有効量の、カルノシン、アンセリン、バレニンおよびホモカルノシンからなる群より選ばれる少なくとも1種のイミダゾールジペプチドを添加した細胞培養液中で腸管上皮細胞を培養する工程と、
前記細胞培養液の上清に含まれる前記腸管上皮細胞から分泌されるエクソソームまたはそこに含まれるmiRNAを神経細胞の細胞培養液中に添加し、神経細胞を培養する工程と
を含む、in vitroでの神経細胞活性化方法。 - さらに、前記処理された神経細胞内のmiRNA、mRNAまたはタンパク質の一つ以上を定量する工程を含む、請求項10に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2016222530 | 2016-11-15 | ||
JP2016222530 | 2016-11-15 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019005613A Division JP2019056011A (ja) | 2016-11-15 | 2019-01-17 | イミダゾールジペプチドを含有するエクソソーム調節剤、およびエクソソームを含有する神経細胞活性化剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018083808A JP2018083808A (ja) | 2018-05-31 |
JP6510004B2 true JP6510004B2 (ja) | 2019-05-08 |
Family
ID=62238106
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017220238A Active JP6510004B2 (ja) | 2016-11-15 | 2017-11-15 | イミダゾールジペプチドを含有するエクソソーム調節剤、およびエクソソームを含有する神経細胞活性化剤 |
JP2019005613A Pending JP2019056011A (ja) | 2016-11-15 | 2019-01-17 | イミダゾールジペプチドを含有するエクソソーム調節剤、およびエクソソームを含有する神経細胞活性化剤 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019005613A Pending JP2019056011A (ja) | 2016-11-15 | 2019-01-17 | イミダゾールジペプチドを含有するエクソソーム調節剤、およびエクソソームを含有する神経細胞活性化剤 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (2) | JP6510004B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR102285380B1 (ko) * | 2019-12-26 | 2021-08-02 | 한양대학교 산학협력단 | 마이크로RNA-24-3p의 억제제를 포함하는 신경아세포에서 신경세포로의 분화 유도용 조성물 및 방법 |
JP7406059B1 (ja) | 2022-10-20 | 2023-12-27 | 防衛装備庁長官 | 急性ストレス評価用データの生成方法 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0920661A (ja) * | 1995-07-04 | 1997-01-21 | Suntory Ltd | 学習能力向上組成物 |
WO2007116987A1 (ja) * | 2006-03-31 | 2007-10-18 | Nippon Meat Packers, Inc. | 学習機能向上効果及び抗不安効果を有する機能性食品及び薬剤 |
JP2015193582A (ja) * | 2014-03-28 | 2015-11-05 | 国立大学法人 東京大学 | イミダゾールジペプチドを含む剤 |
-
2017
- 2017-11-15 JP JP2017220238A patent/JP6510004B2/ja active Active
-
2019
- 2019-01-17 JP JP2019005613A patent/JP2019056011A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2019056011A (ja) | 2019-04-11 |
JP2018083808A (ja) | 2018-05-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Lozano-Pérez et al. | Silk fibroin nanoparticles constitute a vector for controlled release of resveratrol in an experimental model of inflammatory bowel disease in rats | |
US11419890B2 (en) | Compositions prepared from poultry and methods of their use | |
EP3124034B1 (en) | Imidazole dipeptide for treating dementia due to aging or cerebral atrophy | |
JP6403039B2 (ja) | Sirt3およびsirt6の活性化剤 | |
JP6510004B2 (ja) | イミダゾールジペプチドを含有するエクソソーム調節剤、およびエクソソームを含有する神経細胞活性化剤 | |
He et al. | Oral L-theanine administration promotes fat browning and prevents obesity in mice fed high-fat diet associated with the modulation of gut microbiota | |
Ahmed et al. | Gum Arabic modifies anti-inflammatory cytokine in mice fed with high fat diet induced obesity | |
Sim et al. | The effect of apple-derived nanovesicles on the osteoblastogenesis of osteoblastic MC3T3-E1 cells | |
JP6550357B2 (ja) | イミダゾールジペプチドを含有する、グリア細胞における神経栄養因子等の遺伝子の発現誘導剤 | |
Deb et al. | Natural products and their therapeutic effect on autism spectrum disorder | |
WO2018066676A1 (ja) | 有機セレン化合物含有組成物 | |
US20090099259A1 (en) | Method for regulating gene expression | |
Veronica et al. | A preliminary study of the effect of PPAR-γ agonist from Myristica fragrans houtt seed extract on the biogenesis of rat infant’ s brain mitochondria and D1 dopamine receptor | |
RU2749950C2 (ru) | Применение композиции, состоящей из аминокислот глицина, аргинина, цистеина и ресвератрола, для снижения тяжести диабета и высокого содержания жира в организме, холестерина, мочевой кислоты, глюкозы в крови и ускоренного старения у животных и человека | |
JP2019104745A (ja) | イミダゾールジペプチドを含有する、グリア細胞における神経栄養因子等の遺伝子の発現誘導剤 | |
Wu et al. | Extracellular vesicles derived from Pinctada martensii mucus regulate skin inflammation via the NF-κB/NLRP3/MAPK pathway | |
JP6588666B2 (ja) | イミダゾールジペプチドを含む剤 | |
JP2016044172A (ja) | ポリペプチドを含有する生体内で多くの効果を有する医薬組成物及びその用途 | |
Satriano et al. | Neuroprotective Effect of a Nutritional Supplement Containing Spearmint Extract, Forskolin, Homotaurine and Group B Vitamins in a Mouse Model of Transient Ocular Hypertension | |
WO2021085496A1 (ja) | 組成物、抗酸化剤、抗糖化剤、神経突起伸長促進剤及び認知機能改善剤 | |
Lv et al. | Positive Effects of Walnut Meal Extracts on Memory Impairment of Alzheimer's Disease Mice Induced by D-Galactose | |
Liao et al. | Buffalo Milk Can Rescue Fatigue in Young Mice, Alleviate Oxidative Stress and Boost Learning and Memory in Aging Mice | |
Liao et al. | Background: An advanced age associated pathology is decreasing cognitive ability and impeding antioxidant system integrity. Adverse drug reactions have prompted the need for complementary and alternative medicine dietary therapy. Buffalo milk is reported to have high levels of various nutrients which makes it an ideal candidate for complementary dietary therapy. However, its effects on oxidation, fatigue, learning and memory potential remains to be explored. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180320 |
|
A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20180320 |
|
A975 | Report on accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971005 Effective date: 20180412 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180515 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180709 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180911 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20181023 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190403 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6510004 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |