JP6476181B2 - ペプチド - Google Patents
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Description
[ここで、
aa1は、アミノ酸無し、I、K又はTであり、
RNB-5Dペプチドは、YVSIDVTLQQLE、又は1つ以上のアミノ酸がKによって置換されているその変異体であり、
aa2は、アミノ酸無し、S又はKであり、
aa3は、アミノ酸無し、H又はKである]
を含み、in vitroでMHC分子に結合し、抗原処理無しにT細胞に提示されることが可能な、ペプチドを提供する。
第1の態様では、本発明は、ペプチドに関する。
適応免疫応答では、Tリンパ球は、タンパク質抗原の内部エピトープを認識することができる。抗原提示細胞(APC)は、タンパク質抗原を取り込み、それらを短いペプチド断片に分解する。ペプチドは、細胞内部の主要組織適合遺伝子複合体(MHC)クラスI又はII分子に結合し、細胞表面に運ばれ得る。MHC分子と共に細胞表面に提示された場合、ペプチドは、T細胞によって(T細胞受容体(TCR)を介して)認識され得、その場合、ペプチドは、T細胞エピトープである。
本発明のペプチドは、配列番号1〜3として示されるTSHR由来ペプチドのすべて又は部分を含み得る。
GDは、一次自己抗原、甲状腺刺激ホルモン受容体(TSHR)を標的とする自己反応性T及びBリンパ球によって引き起こされる自己免疫疾患である。
[ここで、
aa1は、アミノ酸無し、I、K又はTであり、
RNB-5Dペプチドは、YVSIDVTLQQLE、又は1つ以上のアミノ酸がKによって置換されているその変異体であり、
aa2は、アミノ酸無し、S又はKであり、
aa3は、アミノ酸無し、H又はKである]
を含み、in vitroでMHC分子に結合し、抗原処理無しにT細胞に提示されることが可能な、ペプチドを提供する。
T細胞エピトープは、自己であれ又は外来であれ、任意の抗原に対する適応免疫応答において中心的役割を果たす。過敏性疾患(アレルギー、自己免疫疾患及び移植拒絶を含む)におけるT細胞エピトープによって果たされる中心的役割は、実験モデルの使用によって実証されている。アジュバントと組み合わせた合成ペプチド(T細胞エピトープの構造に基づく)の注射によって、炎症又はアレルギー疾患を誘発することが可能である。
(i)TSHR自己抗体、
(ii)TSHRに特異的なCD4+ T細胞、及び/又は
(iii)TSHR自己抗体を分泌することが可能なB細胞。
(a)CD4+ T細胞におけるアネルギーの誘導(in vitroでの続く抗原投与によって検出され得る)、
(b)以下を含む、CD4+ T細胞集団の変化
(i)増殖の低下、
(ii)IL-2、IFN-γ及びIL-4の産生の下方調節、並びに
(iii)IL-10の産生の増加。
本発明また、本発明の第一又は第二の態様に従う1つ以上のペプチドを含む医薬組成物などの組成物に関する。
(i)TSHR自己抗体
(ii)TSHRに特異的なCD4+ T細胞
(iii)TSHR自己抗体を分泌するB細胞。
組成物は、液体溶液又は懸濁液のいずれかとして、注射剤として調製され得る; 注射前の液体における溶液又は懸濁液に好適な固体形態も調製され得る。調製物はまた、乳化されてよく、又はペプチドは、リポソームに封入されてもよい。活性成分は、薬学的に許容され、かつ活性成分と相溶性のある添加剤と混合されてよい。好適な添加剤は、例えば、水、生理食塩水(例えば、リン酸緩衝生理食塩水)、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、及びそれらの組合せである。
好都合に、組成物が複数のペプチドを含む場合、それらは、混合組成物又はカクテルの形態で、一緒に投与されてよい。しかし、同時、別々、連続又は併用投与のために、ペプチドをキットの形態で別個に提供することが好ましい状況があり得る。
HLA-DR3 TSHRペプチドの選択
TSHRにおける重要なエピトープ領域を同定するために、TSHRのECD(AA20-418)を、以下に示すように、15アミノ酸によって重複する、28〜30アミノ酸(28〜30マー)の28個の重複ペプチドに分けた。
RNB-5内のアピトープの同定
RNB-5内の正確なエピトープ位置を決定するために、RNB-5にわたる、一連の15マーの重複ペプチドを、標準的なF-moc化学を用いて合成した。各ペプチドを、以下に示すように、1アミノ酸によって表示する:
Ex vivo寛容アッセイ
RNB-5アピトープの、寛容を誘導する能力を評価するために、これらのアピトープの、免疫応答を阻害する能力を、最初に、ex vivoで健康なHLA-DRB1*0301又はHLA-DRB1*0401マウスにおいて調べた。方法の項に記載するように、マウスを、高用量又は用量漸増スケジュールに従って、異なるRNB-5アピトープで前処理した。研究は、RNB-5アピトープでの前処理が、DR3及びDR4マウスの両方において、TSHR誘導性T細胞増殖を有意に低減することを示した(図6A〜D)。RNB-5DEFネステッドペプチドを、C末端及びN末端の両方にアミノ酸「GKK」を付加することによって改変した。これらの改変アピトープによる前処理も、TSHR誘導性T細胞増殖を有意に低減した(図6E〜F)。
GDについての動物モデル
RNB-5アピトープの、マウスにおいてGD様症状を低減する能力を調べるために、GDについての2つの異なる動物モデルを開発した。
RNB12領域におけるアピトープの同定
RNB12及びネステッドペプチドは、マウスにおいて免疫原性ではない。したがって、領域を、グレーブス病患者から生成されたT細胞株の応答性により同定した。図17は、このようなT細胞株から得られた結果を示す。
マウス
HLA-DRB1*0301トランスジェニックマウス(DR3マウス)を、メイヨークリニック(Mayo Clinic)の免疫遺伝学マウスコロニー(Immunogenetics mouse colony)で飼育し、維持した。HLA DR3-tgの創始マウス(founder mice)を、Gunter Hammerling(German Cancer Research Center, Heidelberg, Germany)から入手した。簡単に述べると、pUCにおけるHLA DRAゲノムクローンの6-kb NdeI断片及びB遺伝子を含有するcos 4.1の24-kb ClaIxSalI断片を、C57BL/6の雄と交配させた(C57BL/6xDBA/2)-F1ドナーに由来する受精卵に同時注入した。トランスジェニックマウスを、I-Abノックアウトマウスに交配させた。DR3マウスを、10世代にわたってC57BL/10背景に交配させた。これらのDR3マウスは、HLA-DRB1*0301分子を発現するが、マウスMHC-II分子を発現しない。
ペプチドを、GL Biochem Ltd(Shangai, China)によって合成し、-80℃にてジメチルスルホキシド(DMSO; Sigma-Aldrich, Bornem, Belgium)中で保存した。
NetMHCII 2.2サーバ
NetMHCII 2.2サーバは、人工ニューロンネットワークを使用して、ペプチドの、HLA-DRB1*0301への結合を予測する。予測値は、nM IC50値で与えられる。強い及び弱い結合ペプチドは、出力に示される。高い親和性結合ペプチドは、50 nM未満のIC50値を有し、弱い結合ペプチドは、500 nM未満のIC50値を有する。結果は、以下のように計算される予測スコアとして提示される: 1-log50000(aff)。ウェブサイトのアドレス: http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHCII。
各ペプチドについて、ペプチドのスコアを、SWISSPROTデータベースから選択された500万のランダムな15マーのスコアに対して比較することによって、4つの方法(ARB、コンビナトリアルライブラリー、SMM_align及びSturniolo)のそれぞれについて、パーセンタイルランクを生成した。小さな番号を付けたパーセンタイルランクは、高い親和性を示す。次いで、4つの方法の中央値パーセンタイルランクを、コンセンサス法についてのランクを生成するために使用した。ウェブサイトのアドレス: http://tools.immuneepitope.org/analyze/html/mhc_II_binding.html。
プライミング
DR3マウスに、完全フロイントアジュバント((CFA; BD Benelux, Erembodegem, Belgium)4mg/mlの結核菌(Mycobacterium tuberculosis)(MTb, BD Benelux)を含有する)と共に乳化した、PBS(Lonza, Verviers, Belgium)中の100μgの抗原を、尾の基部に皮下注射した(100μl/注射)。実験に応じて、RNBペプチド又は完全長TSHR-289タンパク質を抗原として用いた。対照動物には、PBS/CFAのみを同じ時に注射した。
免疫化10日後に、排出リンパ節(draining lymph node)(LN)及び脾臓を回収した。LN細胞及び脾細胞を単離し、96ウェル平底プレート中のX-vivo 15培地(グルタミン、ペニシリン及びストレプトマイシンを補充した; Lonza)中で培養した。抗原誘導性細胞増殖を調べるため、0.5×106細胞/ウェルを、異なる抗原濃度(0〜25μg/ml)又は12.5μg/mlの精製タンパク質誘導体(PPD; プライミング対照; Statens serum institut, Copenhagen, Denmark)と共に72時間培養した(200μL/ウェル)。
72時間後、60μLの細胞上清を回収し、凍結させた。次いで、20μL/ウェルのトリチウム化チミジン(PerkinElmer, Zaventem, Belgium)を、1μCi/ウェルの最終濃度を得るために細胞に添加した。細胞を37℃でインキュベートし、16時間後に、プレートを凍結させた。解凍したプレートを回収し、細胞増殖を評価するために、βカウンター(Wallac 1450 Microbeta Trilux液体シンチレーションカウンター)を用いて読み取った。解凍した上清を、抗原誘導性サイトカイン産生を測定するために、マウスTh1/Th2 10plex FlowCytomix Multiplex(Bender MedSystems, Vienna, Austria)を用いて分析した。
プライミング及びT細胞株の確立
0日目に、マウスに、100μgの抗原/CFAを尾の基部に皮下注射した(DR3マウスについてRNB-5; DR4マウスについてTSHR)。対照マウスは、PBS/CFAで免疫化した。10日目に、排出LN及び脾臓を取り出し、単一細胞懸濁液を作製した。細胞のいくつかを、上述のように、抗原誘導性細胞増殖を測定するために使用した。残りの脾細胞及びLN細胞を混合し、CD4+ T細胞を陰性精製キット(アンタッチド(untouched)CD4+ T細胞; Miltenyi, Leiden, The Netherlands)を用いて単離した。次いで、CD4+ T細胞を、抗原(25μg/mlのRNB-5若しくは0.5μg/mlのTSHR-289タンパク質)及びDR3マウス由来の照射された脾細胞(3000 rad)と一緒に培養した(APC:CD4+ T細胞比1:1; 5×106細胞/ml)。ウシ胎児血清(FCS)誘導性細胞活性化を避けるために、細胞を、X-vivo 15培地中で培養した。4日目に、20 U/mlの組換えヒトIL-2(R&D, Abingdon, United Kingdom)を細胞に添加した。7日目に、生細胞を、Ficoll密度勾配分離(Histopaque 1083, Sigma-Aldrich)を用いて死細胞を除去することにより回収した。次いで、細胞を上記のように再刺激し、APC:CD4+ T細胞比を2:1に変えた。9日目に、生細胞を回収し、それらのいくつかを、融合のために使用した。残りのCD4+T細胞を培養中に残し、IL-2を10日目に添加した。14日目に、生細胞を回収し、APCの存在下で抗原で再刺激し(3:1でのAPC:CD4+ T細胞の比)、16日目に第二の融合に使用した。
1×107個のBW5147細胞(Health Protection Agency Culture Collections, Salisbury, UK)及び5×106個のCD4+ T細胞を、50mlチューブ中で混合し、37℃の無血清培地で洗浄した。遠心分離後、細胞ペレットを穏やかに再懸濁した。1mlの37℃ポリエチレングリコール(PEG; 40〜50%溶液、Sigma-Aldrich)を45秒かけて添加し、細胞を小さな37℃の水浴中に維持した。細胞を、45秒間37℃でインキュベートした。次いで、旋回させながら、1mlの37℃無血清培地を30秒かけて添加し、連続して2、3、4、10及び30mlが続いた。チューブを非常にゆっくりと反転させ、4分間37℃でインキュベートした。細胞を、ブレーキなしで室温(RT)で1300rpmで5分間遠心分離した。上清を除去し、50mlのRT無血清培地を、細胞ペレットを取り除くことを避けるためにゆっくりと添加した。洗浄工程を、完全培地を用いて繰り返した。最後に、細胞を、10%-FCSを有するRT完全培地に再懸濁し、96ウェル平底プレートに、異なる細胞濃度で播種した(100μl/ウェル)。48時間後、細胞を1×ヒポキサンチン-アミノプテリン-チミジン(HAT、Sigma-Aldrich)培地中で培養し、ハイブリドーマ細胞増殖を、約6日後に検出した。クローンをそれらが安定になるまでHAT培地中で維持し、次いでヒポキサンチン-チミジン(HT、Sigma-Aldrich)培地を介して完全RPMI培地へと断ち切らせた。定期的なベースで、クローンを、凍結培地(90%FCS+10%DMSO)中で凍結させた。
ハイブリドーマ細胞を、5×104個のVAVY若しくはBM14細胞(それぞれHLA-DRB1*0301又はHLA-DRB1*0401を発現するヒト細胞株; International Histocompatibility Working group, Seattle, USA)及び抗原(10〜25μg/ml)と共に培養した。48時間後、抗原誘導性IL-2産生を、酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)によって測定した。
96ウェルプレート(Immunosorb 96ウェル, Fisher Scientific, Erembodegem, Belgium)を、炭酸バッファー中に1:250希釈した、50μl/ウェルの精製ラット抗マウスIL-2捕捉Ab(BD Biosciences, Oxford, UK)を用いて4℃で一晩コーティングした。PBS-0.05%Tweenで2回洗浄した後、ウェルを、10%FCS/PBSで室温にて1時間ブロッキングした。次いで、ウェルを、50μlの細胞培養上清又はIL-2標準(BD Biosciences, Belgium, Erembodegem)と共に室温で2時間インキュベートした。ウェルを、10%FCS/PBS中に1:1000希釈した、50μl/ウェルのビオチンラット抗マウスIL-2(BD Biosciences)と共に室温で1時間インキュベートし、その後、PBS中に1:1000希釈した50μl/ウェルのエクストラアビジンペルオキシダーゼ(Sigma-Aldrich)との室温にて30分間のインキュベーションが続いた。抗体結合を検出するために、50μl/ウェルのTMB基質溶液(Perbio Science, Erembodegem, Belgium)を添加した。11分後、発色反応を、50μl/ウェルの2M H2SO4を用いて停止した。光学密度(OD)を450nm(630nm ref)で測定した(Tecan Benelux, Mechelen, Belgium)。
抗原特異的クローンを、固定された又は固定されていないVAVY又はBM14細胞(=APC)によって提示される、15マーのペプチド(RNB-5A〜5O)に対するそれらの応答性について試験した。個々のクローンからの5×104個の細胞を、25μg/mlのペプチド及び5×104個の固定された又は新鮮なAPCと共に培養した。APCを固定するために、細胞を、0.5%パラホルムアルデヒド(Merck, Darmstadt, Germany)(pH7)と共に室温で5分間インキュベートした。固定反応を、0.4Mグリシン(Sigma-Aldrich)を添加し、RPMI-10%FCS中で細胞を洗浄することにより停止させた。さらに、ヒトTSHR-289タンパク質(Chesapeake-PERL, Savage, Maryland, USA)に対する応答性を、潜在性エピトープを同定するために測定した。48時間後、抗原誘導性IL-2産生を、ELISAによって測定した。
ペプチドの溶解性を、Anabiotec(Zwijnaarde, Belgium)によって分析した。要するに、ペプチドサンプルを、PBS pH7.0±0.1を添加することによって、2つの異なる標的濃度(1mg/ml及び4mg/ml)で溶解した。ペプチド溶液を、少なくとも16時間室温でインキュベートした。濁度を、遠心分離の前及び後に、320及び360nmで測定した。ペプチド濃度を、280及び205nmの吸光度を用いて、かつHPLC-UVによって決定した。
DR3マウスに、-8、-6、-4日目に、RNB-5 15マーペプチド(100μg/注射)又はPBSを首の後ろに皮下注射した(高用量スケジュール)(図5)。あるいは、マウスに、-15、-13及び-11日目に、それぞれ0.1μg、1μg及び10μgペプチドを注射し、その後、-8、-6及び-4日目に100μgのペプチドの3回の注射が続いた(用量漸増スケジュール)。0日目に、マウスに、100μgの抗原/CFA(RNB-5ペプチド又はTSHR-289タンパク質)を尾の基部に皮下注射した。免疫化の10日後、排出LN及び脾臓を回収した。増殖アッセイ及びサイトカイン測定を、上記のように行った。
TSHR Aサブユニットアデノウイルスによるマウスの免疫化
ヒトTSHR Aサブユニット(アミノ酸残基1〜289、AサブユニットAd)を発現するアデノウイルス及びβガラクトシダーゼを発現する対照アデノウイルス(LacZ-Ad)を、Viraquest(North Liberty, IA, USA)から購入した。6週齢の雌Balb/cJOlaHsdマウス(Harlan Laboratories, Venray, The Netherlands)に、TSHR-Ad(1010又は1011個の粒子)又はLacZ-Ad(1010個の粒子)を大腿筋に筋肉内注射した。すべてのマウスを、アデノウイルスの同じバッチを使用して同時に免疫化した。マウスに、3週間間隔(0、21及び42日目)で3回注射し、血液を、初回免疫の前、及び二次免疫の1週後に採取した。すべてのマウスを、血液及び甲状腺を得るために、3回目の注射(10週)の4週後に安楽死させた。
雌の6週齢C57/Bl6JOlaHsdマウス(Harlan Laboratories)(1群あたり8匹のマウス)に、4 mg/mlのMTb(50μl)と共にCFA中で乳化させた50μgのTSHR-289タンパク質を尾の基部で皮下に投与した。マウスは、0(免疫前)、7、21、35、49、63日目(群A)、0、14、28、42、56日目(群B)又は0、21、28、42、56日目(群C)に尾から採血した。群Cのマウスは、不完全フロイントアジュバント(IFA)中に乳化させた50μgのTSHR-289タンパク質で4週に追加免疫を受けた。初回免疫の10週後、すべてのマウスを安楽死させ、血液を心臓穿刺によって採取した。
精製したTSHR-289タンパク質(Chesapeake-Perl)に対する抗TSHR抗体(IgGクラス)を、ELISAを用いて測定した。96ウェルプレート(ハーフエリア(half area)96ウェル, Fisher Scientific)を、PBS中の50μL/ウェルのTSHR-289タンパク質(0.5μg/ml)で室温で一晩コーティングした。PBS-0.05%Tweenで洗浄した後、ウェルを、PBS中の1%BSA(w/v)で室温にて1時間ブロッキングし、試験血清(二重のアリコート、1:50希釈)と共にインキュベートした。マウス抗TSHR抗体(A9, Abcam, Cambridge, UK)を陽性対照として使用した。次いで、抗体結合を、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ヤギ抗マウスIgG(Abcam)で検出し、シグナルをTMBで発色させた。光学密度(OD)を、450nmにてプレートリーダーで測定した(Tecan Benelux)。
総チロキシン(T4)を、CBIマウス/ラットチロキシンELISAキット(Calbiotech, Spring Valley, CA, USA)を使用して、製造者の説明書に従って、未希釈マウス血清(10μl)において測定した。T4値をキットにおける標準から計算し、μg/dlで表した。甲状腺を、10%中性緩衝ホルマリン液(pH7.5)中で固定し、切片に加工し、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した。切片を、病理学的変化(肥大、上皮細胞の過形成及びリンパ球の浸潤)について観察し、スコア付けした(KWS Biotest, Bristol, UK)。
健康なドナー又はグレーブス病患者からの末梢血単球(PBMC)を、単離し(Histopaque-1077, Sigma-Aldrich)、アリコートで凍結した。0日目に、細胞を解凍し、106のPBMC/mlを、6ウェルプレート(Greiner Bio-one)中に添加した5%AB血清(Sigma Aldrich)を有する、補充された(10mM HEPES、50U/ml ペニシリン/ストレプトマイシン及び4mM L-グルタミン(Lonza))RPMI 1640(Lonza)中の20μg/mlのペプチドと共に培養し、37℃及び5%CO2中でインキュベートした。7日後、rhIL-2(R&D Systems)を、20U/mlの最終濃度まで添加する。12日目に、細胞を回収し、洗浄し、5〜10μg/mlのペプチド及び20U/mlのrhIL-2で刺激された、6ウェルプレート中、1mlあたり106+2×106個の新たに解凍した照射自己PBMCの濃度で培養物に戻す。15、18及び21日目に、追加のrhIL-2を、20u/mlの最終濃度まで添加した。
TCL培養物からの上清を、ヒトIFN-γDuosetキット、R&D Systemsを用いて、製造者の説明書に従って、IFNガンマ含有量について評価した。光学密度を、450nmで測定した(Tecan Benelux)。
Claims (16)
- in vitroでMHC分子に結合し、抗原処理無しにT細胞に提示されることが可能なペプチドであって、以下の甲状腺刺激ホルモン受容体(TSHR)ペプチドのうちの1つを含む、ペプチド。
RNB_5: ISRIYVSIDVTLQQLESHSFYNLSKVTHI (配列番号1)
RNB_4: LRTIPSHAFSNLPNISRIYVSIDVTLQQL (配列番号2)
RNB_9: TGLKMFPDLTKVYSTDIFFILEITDNPYM (配列番号3)
RNB_12: LTLKLYNNGFTSVQGYAFNGTKLDAVYL (配列番号64) - 以下から選択される、in vitroでMHC分子に結合し、抗原処理無しにT細胞に提示されることが可能なペプチド。
RNB_5D-GKK: KKGIYVSIDVTLQQLESHGKK (配列番号12)
RNB_5D-KKK: KKKIYVSIDVTLQQLESHKKK (配列番号21)
RNB_5E-GKK: KKGYVSIDVTLQQLESHSGKK (配列番号13)
RNB_5A: ISRIYVSIDVTLQQL (配列番号6)
RNB_5B: SRIYVSIDVTLQQLE (配列番号7)
RNB_5C: RIYVSIDVTLQQLES (配列番号8)
RNB_5D: IYVSIDVTLQQLESH (配列番号9)
RNB_5E: YVSIDVTLQQLESHS (配列番号10)
RNB_5F: VSIDVTLQQLESHSF (配列番号11)
RNB_5F-GKK: KKGVSIDVTLQQLESHSFGKK (配列番号14)
RNB_4J-GKK: KKGSNLPNISRIYVSIDVGKK (配列番号16)
RNB_4J: SNLPNISRIYVSIDV (配列番号15)
RNB_4K: NLPNISRIYVSIDVT (配列番号62)
RNB_4K-GKK: KKGNLPNISRIYVSIDVTGKK (配列番号63)
RNB_9B: GLKMFPDLTKVYSTD (配列番号18)
RNB_9A: TGLKMFPDLTKVYST (配列番号17)
RNB_9C: LKMFPDLTKVYSTDI (配列番号19)
RNB_9D: KMFPDLTKVYSTDIF (配列番号20)
RNB_12A: LTLKLYNNGFTSVQG (配列番号65)
RNB_12B: TLKLYNNGFTSVQGY (配列番号66)
RNB_12B-KKK: KKKTLKLYNNGFTSVQGYKKK (配列番号67) - 以下の群から選択される、in vitroでMHC分子に結合し、抗原処理無しにT細胞に提示されることが可能なペプチド:
KKGIYVSIDVTLQQLESHGKK(配列番号12)、
KKGKYVSIDVTLQQLESHGKK(配列番号22)、
KKGIKVSIDVTLQQLESHGKK(配列番号23)、
KKGIYKSIDVTLQQLESHGKK(配列番号24)、
KKGIYVSIDVKLQQLESHGKK(配列番号25)、
KKGIYVSIDVTLQKLESHGKK(配列番号26)、
KKGIYVSIDVTLQQKESHGKK(配列番号27)、
KKGIYVSIDVTLQQLKSHGKK(配列番号28)、
KKGIYVSIDVTLQQLEKHGKK(配列番号29)、
KKGIYVSIDVTLQQLESKGKK(配列番号30)、
KKGYVSIDVTLQQLEGKK(配列番号31)、
KKGYVSIDVKLQQLEGKK(配列番号32)、
KKGYVSIDVTLQKLEGKK(配列番号33)、
KKGYVSIDVTLQQKEGKK(配列番号34)、
KKGYVSIDVKLQKKEGKK(配列番号35)、
KKGIYVSIDVTLQQLEGKK(配列番号36)、
KKGIYVSIDVKLQQLEGKK(配列番号37)、
KKGIYVSIDVTLQKLEGKK(配列番号38)、
KKGIYVSIDVTLQQKEGKK(配列番号39)、
KKGIYVSIDVKLQKKEGKK(配列番号40)、
KKGTYVSIDVTLQQLEGKK(配列番号41)、
KKGTYVSIDVKLQQLEGKK(配列番号42)、
KKGTYVSIDVTLQKLEGKK(配列番号43)、
KKGTYVSIDVTLQQKEGKK(配列番号44)、
KKGTYVSIDVKLQKKEGKK(配列番号45)、
KKKIYVSIDVTLQQLESHKKK(配列番号21)、
KKKKYVSIDVTLQQLESHKKK(配列番号46)、
KKKIKVSIDVTLQQLESHKKK(配列番号47)、
KKKIYKSIDVTLQQLESHKKK(配列番号48)、
KKKIYVKIDVTLQQLESHKKK(配列番号49)、
KKKIYVSIDVKLQQLESHKKK(配列番号50)、
KKKIYVSIDVTLKQLESHKKK(配列番号51)、
KKKIYVSIDVTLQKLESHKKK(配列番号52)、
KKKIYVSIDVTLQQKESHKKK(配列番号53)、
KKKIYVSIDVTLQQLKSHKKK(配列番号54)、
KKKIYVSIDVTLQQLEKHKKK(配列番号55)、
KKKIYVSIDVTLQQLESKKKK(配列番号56)、
KKKYVSIDVTLQQLEKKK(配列番号57)、
KKKYVSIDVKLQQLEKKK(配列番号58)、
KKKYVSIDVTLQKLEKKK(配列番号59)、
KKKYVSIDVTLQQKEKKK(配列番号60)、
KKKYVSIDVKLQKKEKKK(配列番号61)。 - 以下からなる群から選択される、請求項3に記載のペプチド:
KKGKYVSIDVTLQQLESHGKK(配列番号22)、
KKGIYKSIDVTLQQLESHGKK(配列番号24)、
KKGYVSIDVTLQQLEGKK(配列番号31)、
KKGYVSIDVKLQQLEGKK(配列番号32)、
KKGYVSIDVTLQKLEGKK(配列番号33)、
KKGYVSIDVTLQQKEGKK(配列番号34)、
KKGYVSIDVKLQKKEGKK(配列番号35)、
KKGIYVSIDVKLQKKEGKK(配列番号40)、
KKGTYVSIDVKLQQLEGKK(配列番号42)、
KKGTYVSIDVKLQKKEGKK(配列番号45)、
KKKKYVSIDVTLQQLESHKKK(配列番号46)、
KKKIYKSIDVTLQQLESHKKK(配列番号48)、
KKKIYVKIDVTLQQLESHKKK(配列番号49)、
KKKYVSIDVTLQQLEKKK(配列番号57)、
KKKYVSIDVKLQQLEKKK(配列番号58)、
KKKYVSIDVTLQQKEKKK(配列番号60)、
KKKYVSIDVKLQKKEKKK(配列番号61)。 - 以下からなる群から選択される、請求項4に記載のペプチド:
KKGIYKSIDVTLQQLESHGKK(配列番号24)、
KKGYVSIDVKLQQLEGKK(配列番号32)、
KKGYVSIDVTLQKLEGKK(配列番号33)、
KKGYVSIDVTLQQKEGKK(配列番号34)、
KKGYVSIDVKLQKKEGKK(配列番号35)、
KKGTYVSIDVKLQQLEGKK(配列番号42)、
KKGTYVSIDVKLQKKEGKK(配列番号45)、
KKKKYVSIDVTLQQLESHKKK(配列番号46)、
KKKIYKSIDVTLQQLESHKKK(配列番号48)、
KKKYVSIDVTLQQLEKKK(配列番号57)、
KKKYVSIDVTLQQKEKKK(配列番号60)。 - 以下からなる群から選択される、請求項5に記載のペプチド:
KKGYVSIDVTLQKLEGKK(配列番号32)、
KKGYVSIDVKLQKKEGKK(配列番号34)、
KKKKYVSIDVTLQQLESHKKK(配列番号46)、
KKKIYKSIDVTLQQLESHKKK(配列番号48)、
KKKYVSIDVTLQQLEKKK(配列番号57)、
KKKYVSIDVTLQQKEKKK(配列番号60)。 - 請求項1〜6のいずれか一項に記載の1つ以上のペプチドを含む、組成物。
- 複数のペプチドを含む、請求項7に記載の組成物。
- 被験体におけるin vivoでのTSHR自己抗体の産生の抑制又は阻止に使用するための、請求項7又は8に記載の組成物。
- 被験体におけるグレーブス病の治療及び/又は予防に使用するための、請求項7又は8に記載の組成物。
- 被験体におけるin vivoでのTSHR自己抗体の産生を抑制又は阻止するための医薬の製造における、請求項1〜6のいずれか一項に記載のペプチド又は請求項7又は8に記載の組成物の使用。
- 被験体におけるグレーブス病を治療及び/又は予防するための医薬の製造における、請求項1〜6のいずれか一項に記載のペプチド又は請求項7又は8に記載の組成物の使用。
- 被験体が、HLA-DR3である、請求項9又は10に記載の組成物。
- 被験体が、HLA-DR4である、請求項9又は10に記載の組成物。
- 被験体が、HLA-DR3である、請求項11又は12に記載の使用。
- 被験体が、HLA-DR4である、請求項11又は12に記載の使用。
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