JP6454097B2 - Dendritic elongation inhibitor and whitening cosmetic - Google Patents

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Description

本発明は、デンドライト伸長を抑制する製剤や美白用化粧料に関する。   The present invention relates to a preparation for suppressing dendrite elongation and a cosmetic for whitening.

樹状突起の形成機構には、細胞内における低分子量Gタンパクが関与している。この低分子量Gタンパクは細胞の増殖、接着、遊走、分泌など様々な細胞活動を制御している。
また、低分子量Gタンパクはがん細胞における転移や浸潤などとも密接に関与していることが報告されている。(非特許文献1)
メラノサイトにおいても、デンドライトの形成には、低分子量Gタンパクの関与が報告されており、その活性化には炎症性サイトカインとして知られているプロスタグランジンE2による作用が報告されている。(非特許文献2)
一方で、色素沈着の詳細な発現機構は十分には解明されていないが、大まかには、次のような機構が考えられている。
皮膚の基底層に存在するメラニン細胞(メラノサイト)の小胞(メラノソーム)内でチロシナーゼを触媒として、チロシンからメラニンが生成されるとともに、成熟したメラノソームを形成する。同時にメラノサイトから樹状突起が形成され、メラノサイトの先端から周囲に存在する角化細胞(ケラチノサイト)へメラノソームが受け渡される。
そして、ケラチノサイトはメラノソームを受け取ることで皮膚が暗色化する。メラノサイトのデンドライトが形成、伸長されないとケラチノサイトへのメラノソームの転移が効率よく行われず、結果的に皮膚に沈着するメラニン色素の量が減少するものと考えられる。
また、メラノサイトを含めデンドライトの伸長を抑制することは神経細胞腫の治療などにおいて有用であることが知られている。(特許文献1)
メラノサイトの樹状突起形成阻害剤としては、ヒドランゲノールまたはその誘導体、酵母抽出物、キサントン誘導体等が知られている。(特許文献2〜4)
Low molecular weight G protein in the cell is involved in the formation mechanism of dendrites. This low molecular weight G protein controls various cellular activities such as cell proliferation, adhesion, migration, and secretion.
In addition, it has been reported that low molecular weight G protein is closely related to metastasis and invasion in cancer cells. (Non-Patent Document 1)
In melanocytes, the involvement of low molecular weight G protein has been reported in the formation of dendrites, and the action of prostaglandin E2, which is known as an inflammatory cytokine, has been reported in its activation. (Non-Patent Document 2)
On the other hand, although the detailed expression mechanism of pigmentation has not been fully elucidated, the following mechanism is considered roughly.
Melanin is produced from tyrosine and formed into mature melanosomes using tyrosinase as a catalyst in vesicles (melanosomes) of melanocytes (melanocytes) existing in the basal layer of the skin. At the same time, dendrites are formed from the melanocytes, and the melanosomes are transferred from the melanocyte tip to the keratinocytes existing around.
And keratinocytes darken the skin by receiving melanosomes. If the dendrites of melanocytes are not formed and elongated, melanosome transfer to keratinocytes is not efficiently performed, and as a result, the amount of melanin pigment deposited on the skin is considered to be reduced.
In addition, it is known that inhibiting dendrite elongation including melanocytes is useful in the treatment of neurocytomas. (Patent Document 1)
As melanocyte dendritic formation inhibitors, hydrangenol or its derivatives, yeast extracts, xanthone derivatives and the like are known. (Patent Documents 2 to 4)

ラベンダーは、シソ科(Labiatae)ラベンダー属(Lavandula)の常緑の小低木で、コモン・ラベンダー(イングリッシュラベンダー)(L. angustifolia=L. vera=L. spica=L. officinalis)が広く用いられる。
ラベンダーの花をそのまま、或いは粉砕後、溶媒で抽出したものをである。
ラベンダーは、ヒドロキシラジカル消去剤、ムコ多糖類切断抑制剤、メラニン生成抑制剤等の用途が知られている。(特許文献5〜7)
セージ(Salvia officinalis)はシソ科アキギリ属の多年草または常緑低木。和名はヤクヨウサルビア。地中海原産。葉は薬用として、消炎、収斂の目的で利用されてまた、香辛料としても広く利用されている。
セージは、ニキビの防止或いはニキビの治療、美白、毛髪化粧料に利用されている。(特許文献8〜10)
Lavender is an evergreen small shrub of the Labiatae Lavandula family, and common lavender (English lavender) (L. angustifolia = L. Vera = L. Spica = L. Officinalis) is widely used.
The lavender flowers are extracted as they are or after being crushed and extracted with a solvent.
Lavender is known to be used as a hydroxy radical scavenger, a mucopolysaccharide cleavage inhibitor, a melanin production inhibitor, and the like. (Patent Documents 5 to 7)
Sage (Salvia officinalis) is a perennial or evergreen shrub of the family Lamiaceae. The Japanese name is Yakuyo Salvia. Mediterranean origin. Leaves are used for medicinal purposes, for anti-inflammatory and astringent purposes, and also widely used as spices.
Sage is used for preventing acne or treating acne, whitening, and hair cosmetics. (Patent Documents 8 to 10)

特開2006−67940公報JP 2006-67940 A 特開2000−7546号公報JP 2000-7546 A 特開2003−252742号公報JP 2003-252742 A 特開2005−2056号公報JP 2005-2056 A 特開平10−36280号公報Japanese Patent Laid-Open No. 10-36280 特開平10−36282号公報Japanese Patent Laid-Open No. 10-36282 特開平平11−335233号公報JP-A-11-335233 特開平08−59453号公報JP-A-08-59453 特開平09−77636号公報Japanese Patent Laid-Open No. 09-77636 特開平08−231348号公報Japanese Patent Laid-Open No. 08-231348

Nature Medicine 1999 5:221-225Nature Medicine 1999 5: 221-225 Exp Cell Res 2007 313(18) 3840-3850Exp Cell Res 2007 313 (18) 3840-3850

本発明の目的はデンドライト伸長を抑制する製剤を得ることにある。   An object of the present invention is to obtain a preparation that suppresses dendrite elongation.

本発明者らが鋭意検討した結果、ラベンダーの抽出物が上記目的を達することがわかった。
さらには、単独配合では効果のないセージをラベンダーの抽出物とともに配合することによって非常に強いデンドライト伸長を抑制する効果が得られることがわかった。

ラベンダーは前述したコモン・ラベンダーのほか、ラバンジン(L.angustifolia x L.latifolia)、フレンチ・ラベンダー(L. stoechas)、デンタータ・ラベンダー(L. dentata)、スパイク・ラベンダー(L. latifolia)、ムルチフィダ・ラベンダー(L. multifida)等の中から本発明の目的を達成するラベンダー属の植物より1種以上を選択して用いる。
ラベンダーは通常、花を用いるが、本発明の目的を達成すれば特に限定はないので全草、葉、枝等の中から選択して用いる。
セージも通常、葉を用いるが、本発明の目的を達成すれば特に限定はないので全草、枝等の中から選択して用いる。
上記の植物を細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。
抽出に用いる溶媒としては、水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合液を用いる。
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
前記親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数1〜5の低級アルコール;アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン;1,3−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数2〜5の多価アルコールなどが挙げられ、これらの親水性有機溶媒、水を1種以上用いる。
なお、抽出溶媒は水単独より、親水性有機溶媒の1種以上或いは水との混合溶媒として用いた方が抽出効率はよい。前記水と親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は低級アルコール10質量部に対して、水を0〜20質量部、低級脂肪族ケトンの場合は低級脂肪族ケトン10質量部に対して水を0〜30質量部添加することが好ましい。多価アルコールの場合は多価アルコール10質量部に対して水を0〜30質量部添加することが好ましい。
抽出に使用する有機溶媒の量は、原料となる植物に対して望ましくは5〜100倍量程度、さらに望ましくは10〜50倍量程度が良い。さらに抽出効率を上げるため、抽出溶媒中で撹拌やホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、5℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、1時間〜14日間程度とするのが適切である。
尚、抽出操作は1回のみの操作に限定されるものではない。抽出後の残渣に再度新鮮な溶媒を添加し、抽出操作を施すこともできるし、抽出溶媒を複数回抽出原料に接触させることも可能である。
必要ならば、その効果に影響のない範囲で更に脱臭、脱色等の精製処理を加えても良く、エバポレーターのような減圧濃縮装置や加熱による溶媒除去などにより、濃縮することができる。
また、この抽出物を合成吸着剤(ダイアイオンHP20やセファビースSP825、アンバーライトXAD4、MCIgelCHP20P等)やデキストラン樹脂(セファデックスLH−20など)、限外濾過等を用いてさらに精製することも可能である。
As a result of intensive studies by the present inventors, it has been found that a lavender extract achieves the above object.
Furthermore, it was found that a very strong effect of suppressing dendrite elongation can be obtained by blending a sage that is not effective with a single blend with a lavender extract.

In addition to the above-mentioned common lavender, lavender includes Lavandine (L.angustifolia x L.latifolia), French lavender (L. stoechas), Dentata lavender (L. dentata), Spike lavender (L. latifolia), Multicifida One or more lavender plants that achieve the object of the present invention are selected from lavender (L. multifida) and the like.
Lavender usually uses flowers, but there is no particular limitation as long as the object of the present invention is achieved, so it is selected from whole grass, leaves, branches and the like.
Sage is also usually used as a leaf, but it is not particularly limited as long as the object of the present invention is achieved.
Extraction is preferably performed after the plant has been subjected to treatment such as chopping, drying, and grinding.
As a solvent used for extraction, water, a hydrophilic organic solvent, or a mixed solution thereof is used.
Examples of water that can be used as the extraction solvent include pure water, tap water, well water, mineral spring water, mineral water, hot spring water, spring water, fresh water, and the like, as well as water that has been subjected to various treatments. Examples of the treatment applied to water include purification, heating, sterilization, filtration, ion exchange, adjustment of osmotic pressure, buffering, and the like. Therefore, the water that can be used as the extraction solvent in the present invention includes purified water, hot water, ion-exchanged water, physiological saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline, and the like.
Examples of the hydrophilic organic solvent include lower alcohols having 1 to 5 carbon atoms such as methanol, ethanol, propyl alcohol, and isopropyl alcohol; lower aliphatic ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; 1,3-butylene glycol, propylene glycol, Examples thereof include polyhydric alcohols having 2 to 5 carbon atoms such as glycerin, and one or more of these hydrophilic organic solvents and water are used.
The extraction efficiency is better when the extraction solvent is used as one or more hydrophilic organic solvents or as a mixed solvent with water than with water alone. When a mixed solvent of water and a hydrophilic organic solvent is used, 0 to 20 parts by weight of water for a lower alcohol in the case of a lower alcohol, and a lower aliphatic for a lower aliphatic ketone It is preferable to add 0 to 30 parts by mass of water with respect to 10 parts by mass of the ketone. In the case of a polyhydric alcohol, it is preferable to add 0-30 mass parts of water with respect to 10 mass parts of the polyhydric alcohol.
The amount of the organic solvent used for extraction is preferably about 5 to 100 times, more preferably about 10 to 50 times the amount of the plant as a raw material. Furthermore, in order to raise extraction efficiency, you may stir or homogenize in an extraction solvent. The extraction temperature is suitably about 5 ° C. to the boiling point of the extraction solvent. The extraction time varies depending on the type of extraction solvent and the extraction temperature, but it is appropriate to set it to about 1 hour to 14 days.
The extraction operation is not limited to a single operation. A fresh solvent can be added again to the residue after extraction to perform an extraction operation, or the extraction solvent can be brought into contact with the extraction raw material a plurality of times.
If necessary, purification treatment such as deodorization and decolorization may be further added within a range that does not affect the effect, and concentration can be performed by a vacuum concentrator such as an evaporator or solvent removal by heating.
Further, this extract can be further purified using a synthetic adsorbent (Diaion HP20, Sephabies SP825, Amberlite XAD4, MCIgelCHP20P, etc.), dextran resin (Sephadex LH-20, etc.), ultrafiltration and the like. is there.

本発明の製剤は、経口、注射、外用のいずれでも薬効を発現するが、皮膚外用剤として用いるのが好ましい。皮膚外用剤には、皮膚化粧料、外用医薬部外品、医療用皮膚外用剤が含まれる。   The preparation of the present invention exhibits drug efficacy for oral, injection, and external use, but is preferably used as a skin external preparation. Skin external preparations include skin cosmetics, external quasi-drugs, and medical skin external preparations.

また、本発明の製剤には、上記成分の他に医薬品や化粧品の各種製剤において使用されている界面活性剤、油性成分、保湿剤、高分子化合物、紫外線吸収剤、抗炎症剤、殺菌剤、酸化防止剤、金属イオン封鎖剤、防腐剤、ビタミン類、色素、香料、水等を配合することができる。   In addition to the above ingredients, the preparations of the present invention include surfactants, oily ingredients, moisturizers, polymer compounds, ultraviolet absorbers, anti-inflammatory agents, bactericides, and other agents used in various pharmaceutical and cosmetic preparations. Antioxidants, sequestering agents, preservatives, vitamins, pigments, fragrances, water and the like can be blended.

上記界面活性剤としては、アニオン性、カチオン性、非イオン性、天然、合成のいずれの界面活性剤も使用できるが、皮膚に対する刺激性を考慮すると非イオン性のものを使用することが好ましい。非イオン性界面活性剤としては、例えばグリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、アルキルグリコシド等が挙げられる。   As the surfactant, any of anionic, cationic, nonionic, natural, and synthetic surfactants can be used, but it is preferable to use a nonionic surfactant in consideration of irritation to the skin. Examples of the nonionic surfactant include glycerin fatty acid ester, propylene glycol fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene sorbite fatty acid ester, polyoxyethylene alkyl ether, polyoxyethylene polyoxypropylene glycol. , Polyoxyethylene polyoxypropylene alkyl ether, polyethylene glycol fatty acid ester, polyoxyethylene castor oil, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, alkylglycoside and the like.

油性成分としては、油脂類、ロウ類、炭化水素類、高級脂肪酸類、高級アルコール類、エステル類、精油類、シリコーン油類などを挙げることができる。油脂類としては、例えば大豆油、ヌカ油、ホホバ油、アボガド油、アーモンド油、オリーブ油、カカオ油、ゴマ油、パーシック油、ヒマシ油、ヤシ油、ミンク油、牛脂、豚脂等の天然油脂、これらの天然油脂を水素添加して得られる硬化油及びミリスチン酸グリセリド、2−エチルヘキサン酸トリグリセリド等の合成トリグリセリド等が;ロウ類としては、例えばカルナバロウ、鯨ロウ、ミツロウ、ラノリン等が;炭化水素類としては、例えば流動パラフィン、ワセリン、パラフィンマイクロクリスタリンワックス、セレシン、スクワラン、ブリスタン等が;高級脂肪酸類としては、例えばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ラノリン酸、イソステアリン酸等が;高級アルコール類としては、例えばラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、2−ヘキシルデカノール等が;エステル類としては、例えばオクタン酸セチル、オクタン酸トリグリセライド、乳酸ミリスチル、乳酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、アジピン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、オレイン酸デシル、イソステアリン酸コレステロール、POEソルビット脂肪酸エステル等が;精油類としては、例えばハッカ油、ジャスミン油、ショウ脳油、ヒノキ油、トウヒ油、リュウ油、テレピン油、ケイ皮油、ベルガモット油、ミカン油、ショウブ油、パイン油、ラベンダー油、ベイ油、クローブ油、ヒバ油、バラ油、ユーカリ油、レモン油、タイム油、ペパーミント油、ローズ油、セージ油、メントール、シネオール、オイゲノール、シトラール、シトロネラール、ボルネオール、リナロール、ゲラニオール、カンファー、チモール、スピラントール、ピネン、リモネン、テルペン系化合物等が;シリコーン油類としては、例えばジメチルポリシロキサン等が挙げられる。これら上述の油性成分は一種又は二種以上を組み合わせて使用することができる。本発明においては、このうち特にミリスチン酸グリセリド、2−エチルヘキサン酸トリグリセリド、ラノリン、流動パラフィン、ワセリン、パラフィンマイクロクリスタリンワックス、スクワラン、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、リノール酸、リノレン酸、イソステアリン酸、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、コレステロール、オクタン酸セチル、オクタン酸トリグリセライド、ミリスチレン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソステアリン酸コレステロール、POEソルビット脂肪酸エステル、ハッカ油、トウヒ油、ケイ皮油、ローズ油、メントール、シネオール、オイゲノール、シトラール、シトロネラール、ゲラニオール、ピネン、リモネン、ジメチルポリシロキサンを使用することが好ましい。   Examples of the oil component include fats and oils, waxes, hydrocarbons, higher fatty acids, higher alcohols, esters, essential oils, silicone oils, and the like. Examples of the fats and oils include soybean oil, nutka oil, jojoba oil, avocado oil, almond oil, olive oil, cacao oil, sesame oil, persic oil, castor oil, coconut oil, mink oil, beef fat, pork fat and the like, and these Hardened oil obtained by hydrogenation of natural fats and oils and synthetic triglycerides such as myristic acid glyceride and 2-ethylhexanoic acid triglyceride; waxes include, for example, carnauba wax, whale wax, beeswax, lanolin and the like; hydrocarbons For example, liquid paraffin, petrolatum, paraffin microcrystalline wax, ceresin, squalane, bristan etc .; higher fatty acids include, for example, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, behenic acid, oleic acid, linoleic acid, Linolenic acid, lanolinic acid, isostearic acid, etc .; Examples of the class alcohols include lauryl alcohol, cetyl alcohol, stearyl alcohol, oleyl alcohol, lanolin alcohol, cholesterol, 2-hexyldecanol, etc .; examples of the esters include cetyl octanoate, triglyceride octanoate, myristyl lactate, cetyl lactate, Examples of essential oils include mint oil, jasmine, isopropyl myristate, myristyl myristate, octyldodecyl myristate, isopropyl palmitate, isopropyl adipate, butyl stearate, decyl oleate, cholesterol isostearate, POE sorbite fatty acid ester, etc. Oil, pepper brain oil, cypress oil, spruce oil, ryu oil, turpentine oil, cinnamon oil, bergamot oil, mandarin oil, ginger oil, pine , Lavender oil, bay oil, clove oil, hiba oil, rose oil, eucalyptus oil, lemon oil, thyme oil, peppermint oil, rose oil, sage oil, menthol, cineole, eugenol, citral, citronellal, borneol, linalool, geraniol, Camphor, thymol, spirantol, pinene, limonene, terpene compounds, etc .; examples of silicone oils include dimethylpolysiloxane. These oily components described above can be used alone or in combination of two or more. In the present invention, among these, myristic acid glyceride, 2-ethylhexanoic acid triglyceride, lanolin, liquid paraffin, petrolatum, paraffin microcrystalline wax, squalane, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, linoleic acid, linolenic acid, isostearic acid , Cetyl alcohol, stearyl alcohol, oleyl alcohol, cholesterol, cetyl octanoate, triglyceride octanoate, isopropyl myristate, octyldodecyl myristate, cholesterol isostearate, POE sorbite fatty acid ester, peppermint oil, spruce oil, cinnamon oil, rose Oil, menthol, cineol, eugenol, citral, citronellal, geraniol, pinene, limonene, dimethylpolysiloxane It is preferable to use.

本発明の製剤には、さらに下記のような成分を配合することができるが、その成分もこれらに限定されるものではない。
色素類;黄色4号、青色1号、黄色202号等の厚生省令に定められたタール色素別表I及びIIの色素、クロロフィル、リボフラビン、クロシン、紅花、アントラキノン等の食品添加物として認められている天然色素等。
ビタミン類;ビタミンA、ビタミンC、ビタミンD、ビタミンE等。
その他;殺菌剤、防腐剤、その他製剤上必要な成分等。
The following components can be further added to the preparation of the present invention, but the components are not limited thereto.
Colors: Yellow color No. 4, Blue No. 1 and Yellow No. 202 are recognized as food additives such as tar color dyes I and II, chlorophyll, riboflavin, crocin, safflower, anthraquinone, etc. Natural pigments.
Vitamins; vitamin A, vitamin C, vitamin D, vitamin E, etc.
Others: bactericides, preservatives, other ingredients necessary for formulation.

本発明の製剤は、前記必須成分に必要に応じて前記任意成分を加え、常法に従って製造することができ、クリーム、乳液、化粧水等の形態とすることができる。
製剤への配合量は固形分として0.0001〜5.0重量%、好ましくは0.001〜1.0重量%である。
The preparation of the present invention can be produced according to a conventional method by adding the optional components to the essential components as necessary, and can be in the form of cream, emulsion, lotion or the like.
The compounding quantity to a formulation is 0.0001 to 5.0 weight% as solid content, Preferably it is 0.001 to 1.0 weight%.

次に実施例(製造例)を挙げて本発明を詳細に説明する。 Next, an Example (manufacturing example) is given and this invention is demonstrated in detail.

製造例1
ラベンダー(Lavandula angustifolia)の花(乾燥品)100gに70%エタノール5リットルを加え、時々撹拌しつつ18時間抽出した。これを濾布で濾過後、さらに濾紙(No5C)で濾過した。
濾液をエバボレーターで濃縮したのち、凍結乾燥した。
Production Example 1
To 100 g of flowers (dried product) of lavender (Lavandula angustifolia), 5 liters of 70% ethanol was added and extracted for 18 hours with occasional stirring. This was filtered through a filter cloth, and further filtered through a filter paper (No5C).
The filtrate was concentrated with an evaporator and then freeze-dried.

製造例2
セージ(Salvia officinalis)の葉(乾燥品)100gに70%エタノール5リットルを加え、時々撹拌しつつ18時間抽出した。これを濾布で濾過後、さらに濾紙(No5C)で濾過した。
濾液をエバボレーターで濃縮したのち、凍結乾燥した。
Production Example 2
To 100 g of sage (Salvia officinalis) leaves (dried product), 5 liters of 70% ethanol was added and extracted for 18 hours with occasional stirring. This was filtered through a filter cloth, and further filtered through a filter paper (No5C).
The filtrate was concentrated with an evaporator and then freeze-dried.

確認試験(メラノサイトのデンドライト伸長抑制試験)
4well ラブテック2チェンバースライドシステム(nunc製)に正常ヒトメラニン細胞(クラボウ製)を700cell/well播種する。24時間培養した後、増殖因子を含まない、基礎培地であるDermaLife M(登録商標)(Lifeline Cell Technology製)へ交換する。
更に24時間培養したのち、試験品および、樹状突起伸長因子としてY−27632(和光純薬)を含むDermaLife Mへ交換し、24時間培養した。(Y−27632は終濃度50uMになるように濃度を調整した)
24時間後、培地を除去しActi-Stain 488 phalloidin(Cytoskeleton,Inc)にて細胞骨格を染色し、DAPI(同仁化学)にて核を染色した。
染色後、画像解析ソフト(Image J)にてメラノサイトの樹状突起の長さを計測し、サンプルにおける樹状突起の長さを比較した。
Confirmation test (Dendrite extension suppression test of melanocytes)
Normal human melanocytes (manufactured by Kurabo Industries) are seeded at 700 cells / well on a 4-well Lovetech 2 chamber slide system (manufactured by nunc). After culturing for 24 hours, the medium is replaced with DermaLife M (registered trademark) (manufactured by Lifeline Cell Technology) which is a basal medium containing no growth factor.
After further culturing for 24 hours, the specimen was replaced with DermaLife M containing Y-27632 (Wako Pure Chemical Industries) as a dendritic elongation factor and cultured for 24 hours. (The concentration of Y-27632 was adjusted to a final concentration of 50 uM)
After 24 hours, the medium was removed, the cytoskeleton was stained with Acti-Stain 488 phalloidin (Cytoskeleton, Inc), and the nucleus was stained with DAPI (Dojin Chemical).
After staining, the length of dendrites of melanocytes was measured with image analysis software (Image J), and the length of dendrites in the samples was compared.

製造例1及び2のメラノサイトのデンドライト伸長抑制試験の結果である。ラベンダー(製造例1)は終濃度25μg/mlでメラノサイトのデンドライトの伸長を抑制することがわかった。 さらにセージ(製造例2)は単独だは効果がないにも関わらず(終濃度10μg/ml)、ラベンダー(製造例1)併用するとメラノサイトのデンドライトの伸長を抑制する効果が高くなることがわかった。It is a result of the dendrite expansion | extension suppression test of the melanocyte of manufacture example 1 and 2. Lavender (Production Example 1) was found to suppress the extension of melanocyte dendrites at a final concentration of 25 μg / ml. Furthermore, although sage (Production Example 2) was not effective by itself (final concentration: 10 μg / ml), it was found that when used together with lavender (Production Example 1), the effect of suppressing the extension of melanocyte dendrites was enhanced. .

製造例1〜2をそのまま外用剤等としても利用できるが、これに他の原料を配合して製剤を作成することも可能であろ、以下に外用剤の例を挙げる。(なお、数字は重量部を示す))   Production Examples 1 and 2 can be used as external preparations as they are, but other raw materials can be blended with them to prepare a preparation. Examples of external preparations are given below. (The numbers indicate parts by weight.)

外用剤1
オリーブ油 0.5
ポリオキシエチレン(20E.O.)ソルビタンモノステアレート 2.0
ポリオキシエチレン(60E.O.)硬化ヒマシ油 2.0
エタノール 10.0
精製水 80.0
製造例1 0.3
パラオキシ安息香酸メチル 0.2
External preparation 1
Olive oil 0.5
Polyoxyethylene (20E.O.) sorbitan monostearate 2.0
Polyoxyethylene (60E.O.) hydrogenated castor oil 2.0
Ethanol 10.0
Purified water 80.0
Production Example 1 0.3
Methyl paraoxybenzoate 0.2

外用剤2
オリーブ油 0.5
ポリオキシエチレン(20E.O.)ソルビタンモノステアレート 2.0
ポリオキシエチレン(60E.O.)硬化ヒマシ油 2.0
エタノール 10.0
精製水 79.5
製造例1 0.5
製造例2 0.3
パラオキシ安息香酸メチル 0.2
External preparation 2
Olive oil 0.5
Polyoxyethylene (20E.O.) sorbitan monostearate 2.0
Polyoxyethylene (60E.O.) hydrogenated castor oil 2.0
Ethanol 10.0
Purified water 79.5
Production Example 1 0.5
Production Example 2 0.3
Methyl paraoxybenzoate 0.2

外用剤3

スクワラン 20.0
オリーブ油 2.0
ミンク油 1.0
ホホバ油 5.0
ミツロウ 5.0
セトステアリルアルコール 2.0
グリセリンモノステアレート 1.0
ソルビタンモノステアレート 2.0

精製水 50.7
製造例1 0.5
製造例2 0.5
ポリオキシエチレン(20E.O.)ソルビタンモノステアレート 2.0
ポリオキシエチレン(60E.O.)硬化ヒマシ油 1.0
グリセリン 5.0
L−アスコルビン酸−2−グルコシド 2.0
パラオキシ安息香酸メチル 0.1
External preparation 3
A
Squalane 20.0
Olive oil 2.0
Mink oil 1.0
Jojoba oil 5.0
Beeswax 5.0
Cetostearyl alcohol 2.0
Glycerol monostearate 1.0
Sorbitan monostearate 2.0
B
Purified water 50.7
Production Example 1 0.5
Production Example 2 0.5
Polyoxyethylene (20E.O.) sorbitan monostearate 2.0
Polyoxyethylene (60E.O.) hydrogenated castor oil 1.0
Glycerin 5.0
L-ascorbic acid-2-glucoside 2.0
Methyl paraoxybenzoate 0.1

外用剤4

スクワラン 20.0
オリーブ油 2.0
ミンク油 1.0
ホホバ油 5.0
ミツロウ 5.0
セトステアリルアルコール 2.0
グリセリンモノステアレート 1.0
ソルビタンモノステアレート 2.0

精製水 51.0
製造例1 0.7
ジプロピレングリコール 2.0
グリセリン 3.0
ポリオキシエチレン(20E.O.)ソルビタンモノステアレート 2.0
ポリオキシエチレン(60E.O.)硬化ヒマシ油 1.0
L−アスコルビン酸−2−グルコシド 2.0
パラオキシ安息香酸メチル 0.1
External preparation 4
A
Squalane 20.0
Olive oil 2.0
Mink oil 1.0
Jojoba oil 5.0
Beeswax 5.0
Cetostearyl alcohol 2.0
Glycerol monostearate 1.0
Sorbitan monostearate 2.0
B
Purified water 51.0
Production Example 1 0.7
Dipropylene glycol 2.0
Glycerin 3.0
Polyoxyethylene (20E.O.) sorbitan monostearate 2.0
Polyoxyethylene (60E.O.) hydrogenated castor oil 1.0
L-ascorbic acid-2-glucoside 2.0
Methyl paraoxybenzoate 0.1

Claims (1)

ラベンダーの花を低級アルコール10質量部に対して、水を0〜20質量部添加した溶媒で抽出した抽出物、及びセージの葉を低級アルコール10質量部に対して、水を0〜20質量部添加した溶媒で抽出した抽出物を配合したメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤。 The extract which extracted the lavender flower with the solvent which added 0-20 mass parts of water with respect to 10 mass parts of lower alcohols, and 0-20 mass parts of water with respect to 10 mass parts of lower alcohols of a sage leaf. A melanocyte dendrite elongation inhibitor containing an extract extracted with an added solvent .
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