JP6443646B2 - Peg化リン脂質を担体とするポリペプチドワクチンミセル - Google Patents
Peg化リン脂質を担体とするポリペプチドワクチンミセル Download PDFInfo
- Publication number
- JP6443646B2 JP6443646B2 JP2017520891A JP2017520891A JP6443646B2 JP 6443646 B2 JP6443646 B2 JP 6443646B2 JP 2017520891 A JP2017520891 A JP 2017520891A JP 2017520891 A JP2017520891 A JP 2017520891A JP 6443646 B2 JP6443646 B2 JP 6443646B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- vaccine
- micelle
- polypeptide
- peg
- tumor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000693 micelle Substances 0.000 title claims description 173
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 138
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims description 118
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 118
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 118
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 title claims description 22
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 112
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 claims description 77
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 67
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 67
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 64
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 62
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 61
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 37
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 36
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 33
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 31
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 31
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 28
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 28
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 22
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 21
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 19
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 17
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 16
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 15
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 13
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 12
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims description 12
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 11
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 claims description 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 10
- 150000003057 platinum Chemical class 0.000 claims description 9
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 claims description 9
- 238000011394 anticancer treatment Methods 0.000 claims description 8
- 229940123780 DNA topoisomerase I inhibitor Drugs 0.000 claims description 7
- 239000000365 Topoisomerase I Inhibitor Substances 0.000 claims description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 7
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 claims description 7
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 claims description 7
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 claims description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 claims description 6
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003080 antimitotic agent Substances 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 229940125645 monoclonal antibody drug Drugs 0.000 claims description 6
- 229940124087 DNA topoisomerase II inhibitor Drugs 0.000 claims description 5
- -1 HPV18 E7 Proteins 0.000 claims description 5
- 239000000317 Topoisomerase II Inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 claims description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 4
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 3
- 230000001571 immunoadjuvant effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 claims description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 2
- 101100540311 Human papillomavirus type 16 E6 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101000767631 Human papillomavirus type 16 Protein E7 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000954519 Human papillomavirus type 18 Protein E6 Proteins 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 2
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 2
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 2
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 claims description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims 1
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical group [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims 1
- 229920000362 Polyethylene-block-poly(ethylene glycol) Polymers 0.000 description 50
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 28
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 27
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 25
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 18
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 18
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 14
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 13
- 239000000463 material Substances 0.000 description 12
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 10
- 239000000306 component Substances 0.000 description 9
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 9
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 9
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 8
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 8
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 8
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 8
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 8
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 7
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 7
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 7
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 6
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 6
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 6
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 6
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 6
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 6
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 6
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 6
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 6
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 6
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 5
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 241000341655 Human papillomavirus type 16 Species 0.000 description 5
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 5
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 5
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 5
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 5
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 5
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 5
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 5
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 4
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- HAWSQZCWOQZXHI-FQEVSTJZSA-N 10-Hydroxycamptothecin Chemical compound C1=C(O)C=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 HAWSQZCWOQZXHI-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N Carmustine Chemical compound ClCCNC(=O)N(N=O)CCCl DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 3
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 3
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 3
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 3
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 3
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 3
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 3
- 229960005243 carmustine Drugs 0.000 description 3
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 3
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 3
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 3
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 3
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 3
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 3
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- 230000007761 synergistic anti-cancer Effects 0.000 description 3
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 3
- NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N teniposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@@H](OC[C@H]4O3)C=3SC=CC=3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N 0.000 description 3
- 229960001278 teniposide Drugs 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 229960000303 topotecan Drugs 0.000 description 3
- UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N topotecan Chemical compound C1=C(O)C(CN(C)C)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 3
- GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N vinorelbine Chemical compound C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N 0.000 description 3
- 229960002066 vinorelbine Drugs 0.000 description 3
- VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 1-oxidanylurea Chemical compound N[14C](=O)NO VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920000805 Polyaspartic acid Polymers 0.000 description 2
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 2
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 2
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 2
- 102000007537 Type II DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 2
- 108010046308 Type II DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 2
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 238000003921 particle size analysis Methods 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 2
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 2
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- KQNZDYYTLMIZCT-KFKPYADVSA-N (2e,7s,10e,12r,13r,15s)-12,15-dihydroxy-7-methyl-8-oxabicyclo[11.3.0]hexadeca-2,10-dien-9-one Chemical compound O[C@@H]1\C=C\C(=O)O[C@@H](C)CCC\C=C\C2C[C@H](O)C[C@H]21 KQNZDYYTLMIZCT-KFKPYADVSA-N 0.000 description 1
- CPKVUHPKYQGHMW-UHFFFAOYSA-N 1-ethenylpyrrolidin-2-one;molecular iodine Chemical compound II.C=CN1CCCC1=O CPKVUHPKYQGHMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 2-(diethylamino)ethyl 4-aminobenzoate;(2s,5r,6r)-3,3-dimethyl-7-oxo-6-[(2-phenylacetyl)amino]-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid;hydrate Chemical compound O.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1.N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 1
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 208000000666 Fowlpox Diseases 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N Hydroxyurea Chemical compound NC(=O)NO VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101000746372 Mus musculus Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 229920000153 Povidone-iodine Polymers 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 238000003917 TEM image Methods 0.000 description 1
- 108010060804 Toll-Like Receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000008233 Toll-Like Receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N Uranyl acetate Chemical compound O.O.O=[U]=O.CC(O)=O.CC(O)=O COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000001099 axilla Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000000861 blow drying Methods 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 1
- 201000007455 central nervous system cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000025997 central nervous system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 1
- 238000009513 drug distribution Methods 0.000 description 1
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 230000004992 fission Effects 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 229960001330 hydroxycarbamide Drugs 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- JJTUDXZGHPGLLC-UHFFFAOYSA-N lactide Chemical compound CC1OC(=O)C(C)OC1=O JJTUDXZGHPGLLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004719 natural immunity Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 108010064470 polyaspartate Proteins 0.000 description 1
- 239000004632 polycaprolactone Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229960001621 povidone-iodine Drugs 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 208000016691 refractory malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000005464 sample preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 229920000428 triblock copolymer Polymers 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000000277 virosome Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
- A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
- A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
- A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
Description
前記抗原ポリペプチドは、HPV16 E7、HPV16 E6、HPV18 E7、HPV18 E6、MUC−1、PSA、HBV−ProS、HBV表面抗原などに由来する腫瘍関連抗原ポリペプチド、または、HIV、HCV(C型肝炎)、Fluなどのウィルスに由来する特異抗原である。
(1)PEG−PE担体分子、抗原ポリペプチド分子、アジュバント分子を揮発性有機溶媒に溶解して、担体分子溶液、抗原ポリペプチド溶液、アジュバント溶液を調製する。
(2)一定の割合で、ステップ(1)で得られる担体分子溶液、抗原ポリペプチド溶液、アジュバント溶液を均一に混合する。
(3)ステップ(2)で得られる混合溶液中のすべての有機溶媒を除去し、担体分子、抗原ポリペプチド分子およびアジュバント分子に、均一に分布した混合脂質膜を形成させる。
(4)ステップ(3)で得られる混合脂質膜を、一定量の脱イオン水または生理食塩水で溶解し、インキュベーション条件下で脂質膜を均一に水和させた後に室温で一定時間静置して、ワクチンミセル溶液を得る。
(5)ステップ(4)で得られるワクチンミセル溶液を、0.22mの濾過膜でろ過除菌する。
(6)必要に応じて、ステップ(5)で得られるワクチンミセル溶液に一定量の凍結乾燥保護剤を添加した後、ワクチンミセル溶液を凍結乾燥して、ワクチンミセル凍結乾燥粉末を調製する。
E7抗原ポリペプチドは、ヒトパピローマウイルス16型(HPV16)に由来する腫瘍関連抗原であり、そのN末端に1つのパルミチン酸分子が連結されており、即ち、E7−20ポリペプチドである。
E743 62配列: パルミチン酸−GQAEPDRAHYNIVTFCCKCDである。
(1)各チューブに1mgずつ分配されたE7−20に無水メタノール1mLを添加し、濃度が1mg/mLであるE7−20ストック溶液を調合する。
(2)メタノールとクロロホルムを1:2で混合した溶液にMPLA粉末を溶解させ、濃度が1mg/mLであるMPLAストック溶液を調合する。
(3)PEG−PE粉末30mgを秤量し、クロロホルム3mLに添加して溶解させ、10mg/mLであるPEG−PEストック溶液を調合する。
ステップ(1) PEG−PEストック溶液5mL を回転蒸発ボトルに取り、MPLAストック溶液400μL および E7−20ストック溶液1mLを精確に秤量して回転蒸発ボトルに添加し、やさしく振ってPEG−PE溶液と均一に混合する。
ステップ(2) 水浴加温条件下で真空回転蒸発機により有機溶媒を除去する(回転速度90回転/分、水温40℃)。有機溶媒の除去後、PEG−PEおよびMPLA、E7−20に、均一に分布したフィルムを形成させる。真空乾燥装置内に一晩置いて、残った有機溶媒および水分を完全に除去する。
ステップ(3) 脱イオン水10mLを添加し、53℃の水浴で30分間インキュベートして脂質膜を水和させ、外観が均一で無色透明なE7ワクチンミセル溶液を得る。
ステップ(4) 室温で2時間静置した後、0.22μm濾過膜でろ過除菌してから、4℃で保存して準備しておく(少なくとも2週間保存可能)。
ステップ(4) 室温で2時間放置した後、マンニトール0.5gを精確に秤量し、凍結乾燥されるサンプル10mLに添加する。完全に溶解した後、0.22μm濾過膜でろ過してから、無菌アンプルに各アンプル1mLになるように分配して、−80℃で一晩置いて事前凍結する。
ステップ(5) サンプルを36時間真空冷凍結乾燥して(真空度0.1mbar)、凍結乾燥製剤を得る。
ローダミン蛍光修飾を備える脂肪酸化E7抗原ポリペプチドおよびOT−1抗原ポリペプチド(パルミチン酸 −EQLESIINFEKLTEWKD)を合成する。遊離脂肪酸化抗原ポリペプチドは、水に溶解しえないので懸濁液を形成し、脂肪酸化抗原ポリペプチドがPEG−PEミセルに充填された後に安定した溶液となる。これにより、遊離した抗原ポリペプチドとミセルに充填された 抗原ポリペプチドとの単離が行われ、次いで、溶液中のミセルに充填された抗原ポリペプチドの含有量の変化に基づいて、有効な抗原ポリペプチド封入率(封入率=取り込まれた抗原の量/抗原の総量×100%)を算出して得る。
1、透過型電子顕微鏡によるE7ワクチンミセルの様態観察
実施例1で調製されるE7ワクチンミセル溶液を脱イオン水で希釈して、PEG−PEの濃度を0.1mg/mLまで希釈する。10μLのサンプル溶液を取って、グロー放電で親水和処理された、炭素膜でコーティングされた銅メッシュの上に滴下する。30秒吸着させた後、濾紙でサンプル溶液を吸収し、10μLの酢酸ウラニル(濃度が2%(w/v)である)を滴加して、30秒染色させる。濾紙で染色液を吸収し、透過型電子顕微鏡(Tectai 20)でネガティブ染色されたミセルの様態を観察する。その結果を図1に示しており、透過型電子顕微鏡で観察されたワクチンミセルは、均一で球状のナノ粒子である。
実施例1で調製されるE7ワクチンミセル溶液を脱イオン水で希釈して、PEG−PEの濃度を1mg/mLまで希釈する。サンプルを均一に混合した後、2時間静置する。サンプル20μLを取って、脱イオン水で4回以上洗浄した石英キュベットに、気泡を発生させずに添加する。キュベットの透光部をレンズクリーニングペーパーで拭いて清潔にし、動的光散乱機(271−DPN)のサンプルプールに入れて、25℃の設定温度まで予熱する。設定された方法の各検出時間は10秒であり、10回の検出が1グループである。その結果を図2に示しており、動的光散乱分析は、ミセルの粒子径分布が10nmから20nmまでであることを示している。
1、サンプルの調製:
(1)ローダミンE7溶液の調製
10mg/mLの、ローダミンに標識された脂肪酸化E7ポリペプチド(配列:パルミチン酸−GQAEPDRAHYNIVTFCCKCD/ローダミンはアミノ酸Kに標識/吉爾生化有限会社にて合成)のDMSOストック溶液20μLを取り、1mLになるように無菌水で定容し、濃度が0.2mg/mLである蛍光ポリペプチド溶液を得る。
(2)ローダミンE7ミセルの調製
PEG−PE粉末10mgを秤量し、試験管内でクロロホルム1mLに溶解させる。ローダミンに標識された脂肪酸化E7ポリペプチドのメタノール溶液(1mg/mL)0.2mLをミセル中に取り、実施例1の方法に従って、やさしく振って均一に混合する。窒素でブロードライしてそれに均一のフィルムを形成させ、真空乾燥装置内に一晩置いて、残った有機溶媒および水分を完全に除去する。無菌生理食塩水1mLを添加し、53℃の水浴で30分間インキュベートして脂質膜を水和させて、薄紫色で均一かつ透明な溶液を得る。ここで、蛍光ポリペプチド濃度は0.2mg/mLである。室温で2時間静置した後、0.22μm濾過膜でろ過除菌してから、4℃で保存して準備しておく。
(3)リポソームローダミンE7の調製
DPPC7mg、コレステロール3mgをそれぞれ取り、それぞれをクロロホルムに溶解させた後、試験管で混合する。ローダミンに標識された脂肪酸化E7ポリペプチドのメタノール溶液(1mg/mL)0.2mLを取り、窒素でブロードライしてそれに均一のフィルムを形成させ、真空乾燥装置に一晩置いて、有機溶媒および水分を完全に除去する。生理食塩水1mLを添加し、水和させ、53℃の温水浴で30分間を置き、その間に1分間超音波処理する。その後、Mini−Extruder(Avanti)押出装置で、孔径0.4μmのポリカーボネート濾過膜を通して少なくとも11回ろ過押出を行い、粒子径約400nmのリポソームを最終的に得る。ここで、蛍光ポリペプチド濃度は0.2mg/mLである。
ヌードマウス9匹を、各群3匹、3群に分ける。前記複数種の製剤のサンプル100μLを、ヌードマウス肩の同じ位置にそれぞれ皮下注射する。注射の0、1、3、6、24時間後と、4日、6日、7日後に、生体撮像でマウス体内の蛍光製剤の拡散状況を観察する。
(1)脂肪酸化E7抗原が水溶液中に凝集形式で存在しているので、注射部位における皮下の局所的な滞留現象が明らかである。
(2)抗原ポリペプチドワクチンミセルは、皮下での拡散速度が速く、拡散の範囲がかなり広い。
(3)抗原ポリペプチドワクチンリポソームは、抗原ポリペプチドワクチンミセルに比べて、皮下局所でのリポソームの滞留時間が長く、拡散しにくい。
1、サンプルの調製:
(1)FITCに標識されたPEG−PEミセルの調製:
PEG−PE粉末10mgを秤量し、試験管内でクロロホルム1mLに溶解させる。FITC−PEG−PE(FITCに標識されたPEG−PE)のクロロホルムストック溶液(1mg/mL)0.6mLを、ミセル中のFITC−PEG−PE分子のPEG−PE分子全体に対するモル比が5%になるように取る。実施例1の方法に従い、やさしく振って均一に混合し、窒素でブロードライしてそれに均一のフィルムを形成させる。真空乾燥装置内に一晩置いて、残った有機溶媒および水分を完全に除去する。生理食塩水1mLを添加し、53℃の水浴で30分間インキュベートして脂質膜を水和させ、明るい黄色の均一かつ透明な溶液を得る。室温で2時間静置した後、0.22μm濾過膜でろ過除菌してから、4℃で保存して準備しておく。
(2)ローダミンに標識されたリポソームの調製:
DPPC7mg、コレステロール3mgをそれぞれ取り、それぞれをクロロホルムに溶解させた後、試験管で混合する。ローダミン−PE(ローダミンに標識されたPE分子)のクロロホルムストック溶液(2mg/mL)50μLを、Rho−PEの脂質分子全体に対する質量割合が1%になるように取る。窒素でブロードライしてそれに均一のフィルムを形成させ、真空乾燥装置に一晩置いて、有機溶媒および水分を完全に除去する。生理食塩水1mLを添加して水和させ、55℃の温水浴で30分間置き、その間に1分間超音波処理する。その後、Mini−Extruder(Avanti)押出装置で、孔径がそれぞれ0.4μm、0.1μmのポリカーボネート濾過膜を通して、少なくとも11回ろ過押出を行い、粒子径が約100nmである単層リポソームを最終的に得る。
雌のC57BL/6マウス27匹を、各群9匹、3群に分け、それぞれの両肩にFITCワクチンミセルおよびローダミンリポソームワクチンそれぞれ50μLを皮下注射する。ブランク対照としては生理食塩水を注射する。注射の1、2、3日後に、各群からそれぞれ3匹のマウスを取り、両腋窩の排出リンパ節を1.5mLのEPチューブ内に分離する。眼科用ストレートはさみでリンパ節を細かく切断した後、チューブごとに消化液(7.5ml RMPI1640培地、2%ウシ胎児血清、0.5mg/mlコラゲナーゼIV、40U/mlデオキシリボヌクレアーゼI、10mM HEPES)200μLを添加し、37℃で30分間の消化の後に、各チューブに完全培地4mLを添加して中和する。70μmのスクリーンクロス、および500gで5分間の遠心分離を経て細胞が回収され、FACS緩衝剤で5×105細胞/mLに再懸濁される。細胞懸濁液を、明細書の割合に従ってCD11c−APC抗体に添加し、4℃で30分間インキュベートする。FACS緩衝剤で2回洗浄して、フローサイトメトリー分離技術により、蛍光陽性のリンパ節のDC細胞の割合を分析する。
サンプルの調製:
(1)実施例1に記載の方法よるE7ワクチンミセル溶液の調製:PEG−PEストック溶液1mL を試験管内に取る。MPLAストック溶液100μLおよびE7−20ストック溶液200μLを精確に秤量して試験管に添加し、やさしく振ってPEG−PE溶液と均一に混合する。窒素でブロードライして有機溶媒を除去した後、PEG−PEおよびMPLA、E7−20に、均一に分布したフィルムを形成させる。真空乾燥装置内に一晩置いて、残った有機溶媒および水分を完全に除去する。生理食塩水10mLを添加し、53℃の水浴で30分間インキュベートして脂質膜を水和させ、外観が均一で無色透明な溶液を得る。ここで、MPLA濃度は100μg/mLである。
(2)(1)と同じ方法によるMPLAミセル溶液の調製:PEG−PE粉末10mgを取り、それぞれクロロホルムに溶解させた後に試験管で混合する。MPLAストック溶液100μLを別途取り、当該試験管の中に添加して、均一に混合した後、窒素でブロードライしてそれに均一のフィルムを形成させる。真空乾燥装置内に一晩置いて、有機溶媒および水分を完全に除去し、生理食塩水4mLを添加して水和させ、53℃の温水浴で30分間置く。
(3)(1)と同じ濃度のMPLA対照:MPLAストック溶液100μLを試験管に取り、窒素で有機溶媒をブロードライする。真空乾燥装置内に一晩置いて、有機溶媒および水分を完全に除去する。生理食塩水1mLを添加して水和させ、53℃の温水浴で30分間置き、その間に5〜10分間超音波処理することで、100μg/mLであるMPLA懸濁液が調製される。
(4)フィルム水和法および押出法でMPLAリポソームを調製する調製方法:DPPC7mg、コレステロール3mgをそれぞれ取り、それぞれをクロロホルムに溶解させた後、試験管で混合する。また、MPLAストック溶液100μL を取り、当該試験管に添加して均一に混合した後、窒素でブロードライしてそれに均一のフィルムを形成させる。真空乾燥装置内に一晩置いて、有機溶媒および水分を完全に除去する。生理食塩水1mLを添加して水和させ、55℃の温水浴で30分間置き、その間に1分間超音波処理して、脂質膜を溶解させる。その後、Mini−Extruder(Avanti)押出法で、孔径がそれぞれ0.4μm、0.1μmのポリカーボネート濾過膜を通して少なくとも11回ろ過し、約100nmの単層リポソームを最終的に得る。
(5)脂質含有量が(4)と同じ空のリポソームの調製方法:DPPC7mg、コレステロール3mgをそれぞれ取り、ぞれぞれをクロロホルムに溶解させた後、試験管で混合する。窒素でブロードライしてそれに均一のフィルムを形成させ、真空乾燥装置内に一晩置いて、有機溶媒および水分を完全に除去する。生理食塩水1mLを添加して水和させ、55℃の温水浴で30分間置き、その間に1分間超音波処理して、脂質膜を脱離させる。その後、Mini−Extruder(Avanti)押出機で、孔径がそれぞれ0.4μm、0.1μmのポリカーボネート濾過膜を通して少なくとも11回ろ過し、約100nmの単層リポソームを最終的に得る。
骨髓誘導樹状細胞(BMDC)を得る方法:6〜8週齢の雌のC57BL/6マウス1匹から、大腿骨、脛骨の骨髓を無菌PBSに取り、吹き付けた細胞懸濁液を70μmスクリーンクロスに通してろ過する。赤血球を解離させ、PBSで1〜2回洗浄した後、細胞を、細胞数がシャーレあたり2×106/10mLになるように、100mm(または90mm)シャーレに播種する。培地成分は、RPMI−1640、10%FBS、ペニシリン100U/ml、ストレプトマイシン100μg/ml、2mM L−グルタミン、50μMβ−メルカプトエタノール、rmGM−CSF(組み換えマウス顆粒球マクロファージコロニー刺激因子)200U/mLであり、培養条件は、二酸化炭素5%、温度37℃である。3日目に培地10mLを補充し、6日目に10mLを交換する。8日間の誘導を経てから全ての浮遊細胞を回収し、フローサイトメトリー分離技術により分析し鑑別する。CD11c(樹状細胞表面マーカー分子)をDC細胞マーカーとし、DC細胞の純度は90%以上である。
サンプルの調製:
(1)、実施例1の方法に従い、E7ワクチンミセル溶液を調製する。得られたワクチンミセルにおける成分は、PEG−PEの濃度が2.5mg/mL、MPLA濃度が25μg/mL、E7−20濃度が50μg/mLである。
(2)担体に充填されないMPLAとE7−20とを混合した対照群を調製する。MPLAストック溶液100μLと、E7−20ストック溶液200μLとを取り、試験管で均一に混合する。窒素で有機溶媒をブロードライし、真空乾燥装置内に一晩置いて、有機溶媒および水分を完全に除去する。生理食塩水4mLを添加し、55℃の温水浴で30分間置いて脂質膜を水和させ、その間に、断続的に5〜10分間超音波処理することで、MPLA濃度が25μg/mL、E7−20濃度が50μg/mLである懸濁液が調製される。
(3)フィルム水和法および押出し方法により、リポソームワクチンを調製する。調製方法は以下の通りである。DPPC7mg、コレステロール3mgをそれぞれ秤量し、それぞれをクロロホルムに溶解させた後、試験管で混合する。また、MPLAストック溶液100μL 、E7−20ストック溶液200μLを取り、当該試験管に添加して均一に混合した後、窒素でブロードライしてそれに均一のフィルムを形成させ、真空乾燥装置内に一晩置いて、有機溶媒および水分を完全に除去する。生理食塩水4mLを添加して水和させ、55℃の温水浴で30分間置いて、その間に3分間を超音波処理して脂質膜を溶解させる。その後、Mini−Extruder(Avanti)押出法で、孔径がそれぞれ0.4μm、0.1μmのポリカーボネート濾過膜を通して、少なくとも11回ろ過する。約100nmの単層リポソームを最終的に得る。
サンプルの調製:
(1)実施例1の方法に従い、E7ワクチンミセル溶液10mLを調製する。ここで、各成分の濃度はそれぞれ、PEG−PE:5mg/mL、MPLA:40μg/mL、E7−20:100μg/mLである。
(2)(1)と同じ濃度のMPLA/PEG−PEミセル10mLを調製する。 PEG−PEストック溶液5mLを回転蒸発ボトルに取る。MPLAストック溶液400μLを精確に秤量し、回転蒸発ボトルに添加してやさしく振り、PEG−PE溶液と均一に混合し、真空回転蒸発機で有機溶媒(クロロホルムおよびメタノール)を除去する。回転速度は90r/分、水浴は40℃である。有機溶媒を排出した後、PEG−PEおよびMPLAに、均一に分布したフィルムを形成させる。真空乾燥装置内に一晩置いて、残った有機溶媒および水分を完全に除去する。生理食塩水10mLを添加し、53℃の水浴で30分間インキュベートして脂質膜を水和させ、外観が均一で無色透明な溶液を得る。室温で2時間を静置した後、0.22μm濾過膜でろ過除菌してから、4℃で保存して準備しておく。
(3)(1)と同じ濃度のE7/PEG−PEミセル10mLを調製する。PEG−PEストック溶液5mL を回転蒸発ボトルに取る。E7−20ストック溶液1mLを精確に秤量し、回転蒸発ボトルに添加してやさしく振り、PEG−PE溶液と均一に混合し、真空回転蒸発機で有機溶媒(クロロホルムおよびメタノール)を除去する。回転速度は90r/min、水浴は40℃である。有機溶媒を排出した後、PEG−PEおよびE7−20に、均一に分布したフィルムを形成させる。真空乾燥装置内に一晩置いて、残った有機溶媒および水分を完全に除去する。生理食塩水10mLを添加し、53℃の水浴で30分間インキュベートして脂質膜を水和させ、外観が均一で無色透明な溶液を得る。室温で2時間を静置した後、0.22μm濾過膜でろ過除菌してから、4℃で保存して準備しておく。
サンプルの調製:
(1)実施例1の方法に従い、E7ワクチンミセル溶液10mLを調製する。ここで、各成分の濃度はそれぞれ、PEG−PE:5mg/mL、MPLA:40μg/mL、E7−20:100μg/mLである。
(2)(1)と同じ濃度であるMPLA/PEG−PEミセル10mLを調製する
PEG−PEストック溶液5mLを回転蒸発ボトルに取る。MPLAストック溶液400μLを精確に秤量し、回転蒸発ボトルに入れてやさしく振り、PEG−PE溶液と均一に混合する。
真空回転蒸発機で有機溶媒(クロロホルムおよびメタノール)を除去する。回転速度は90r/min、水浴は40℃である。有機溶媒を排出した後、PEG−PEおよびMPLAに、均一に分布したフィルムを形成させる。真空乾燥装置内に一晩置いて、残った有機溶媒および水分を完全に除去する。
生理食塩水10mLを添加し、53℃の水浴で30分間インキュベートして脂質膜を水和させ、外観が均一で無色透明な溶液を得る。室温で2時間静置した後、0.22μm濾過膜でろ過除菌してから、4℃で保存して準備しておく。
(3)(1)と同じ濃度であるMPLAを含まないE7/PEG−PEミセル10mLを調製する。
PEG−PEストック溶液5mLを回転蒸発ボトルに取る。E7−20ストック溶液1mLを精確に秤量し、回転蒸発ボトルに添加してやさしく振り、PEG−PE溶液と均一に混合する。
真空回転蒸発器で有機溶媒(クロロホルムおよびメタノール)を除去する。回転速度は90r/min、水浴は40℃である。有機溶媒を排出した後、PEG−PEおよびE7−20に、均一に分布したフィルムを形成させる。真空乾燥装置内に一晩置いて、残った有機溶媒および水分を完全に除去する。
生理食塩水10mLを添加し、53℃の水浴で30分間インキュベートして脂質膜を水和させ、外観が均一で無色透明な溶液を得る。室温で2時間静置した後、0.22μm濾過膜でろ過除菌してから、4℃で保存して準備しておく。
(1)雌のC57BL/6マウス20匹を取って2群に分け、肩部に50,000TC−1腫瘍細胞を皮下接種する。
(2)接種の21日後に腫瘍サイズが500mm3になった時点で、外科手術を行って腫瘍を切除し、創傷を縫合する。ポビドンヨードで局所皮膚に消毒処理を行う。
(3)腫瘍切除後の免疫予防群に、ワクチンミセル100μLを皮下接種する。投与量はそれぞれ、PEG−PE:25mg/kg、MPLA:200μg/kg、E7−20:500μg/kgである。他方の群は、生理食塩水を用いるブランク対照群とする。
(4)同じ方式で7日目および14日目にそれぞれもう1回ずつ接種し、マウスの腫瘍出現状況を記録する。
(5)42日目に、両群の腫瘍が再発しないマウスに2×105TC−1腫瘍細胞を再度皮下接種して、マウスの腫瘍出現状況を記録する。
サンプルの調製:
実施例1の方法に従い、E7ワクチンミセル溶液10mLを調製する。ここで各成分濃度はそれぞれ、PEG−PE:5mg/mL、MPLA:40μg/mL、E7−20:100μg/mLである。
(1)雌のC57BL/6マウス30匹を取って2群に分け、肩部に約20,000個TC−1腫瘍細胞を皮下接種する。
(2)接種の14日後に腫瘍サイズが100mm3になった時点で、マウスを各群10匹、合計2群に組分けする。両群のマウスの平均腫瘍サイズがほぼ同じである。腫瘍が大きすぎるマウス、および小さすぎるマウスは除外され、用いられない。
(3)両群のマウスにシスプラチン治療を3回行う。1回の治療ごとにシスプラチン溶液を尾静脈に注射し、注射投与量は5mg/kgである。5日おきに化学治療注射を1回行う。
(4)3回目の化学治療が終わった当日に、腫瘍治療性ワクチンミセル複合治療群のマウスに腫瘍治療性ポリペプチドワクチンミセル100μLを皮下接種する。投与量は、E7ワクチンミセル中のE7−20ポリペプチド投与量が500μg/kgである。他方の群は生理食塩水をブランク対照群とする。
(5)同じ方式で、7日目および14日目にそれぞれもう1回接種し、マウスの腫瘍体積および体重の変化状況を記録する。
(6)最終回の免疫治療の100日後に、複合治療群中の腫瘍が消失したマウスに、5×105個のTC−1腫瘍細胞を再度皮下接種して、マウスの腫瘍出現状況を記録する。
サンプルの調製:
実施例1の方法に従い、腫瘍治療性E7ワクチンミセル溶液10mLを調製する。ここで、各成分の濃度はそれぞれ、PEG−PE:2.5mg/mL、MPLA:25μg/mL、E7−20:50μg/mLである。
(1)雌のC57BL/6マウス80匹を取って2群に分け、肩部に20,000個TC−1腫瘍細胞を皮下接種する。
(2)9日後に腫瘍のサイズ(平均約50mm3)を測定し、各群10匹の6群に分ける。2群のマウスの平均腫瘍サイズはほぼ同じである。腫瘍が大きすぎるマウス、および小さすぎるマウスは除外され、用いられない。
(3)実験の組分けは以下の通りである。
治療されない対照群:組分け後0、5、10日目にそれぞれ、生理食塩水100μLを皮下注射する。
腫瘍治療性ポリペプチドワクチンミセル群:腫瘍治療性ポリペプチドワクチンミセルで3回免疫する。組分け後0、5、10日目にそれぞれ、100μLの皮下免疫を行う。
腫瘍治療性ポリペプチドワクチンミセルとControl IgG同型対照抗体治療との複合対照群:腫瘍治療性ポリペプチドワクチンミセルで3回免疫治療する。組分け後0、5、10日目にそれぞれ、100μLの皮下免疫を行う。Control IgG同型対照抗体の治療は2回であり、5、10日目にそれぞれ、マウス1匹につき1回あたり200μgを腹腔注射する。
抗体治療群:αPD−L1抗体治療を2回行う。5、10日目にそれぞれ、マウス1匹につき1回あたり200μgを腹腔注射する。
対照ワクチンと抗体治療との複合対照群:MPLA/E7−20の免疫治療を3回行う。組分け後0、5、10日目にそれぞれ、100μLを皮下免疫する。αPD−L1抗体治療は2回であり、5、10日目にそれぞれ、マウス1匹につき1回あたり200μgを腹腔注射する。
腫瘍治療性ポリペプチドワクチンミセルとαPD−L1抗体治療との複合治療群:腫瘍治療性ポリペプチドワクチンミセルの免疫治療を3回行う。組分け後0、5、10日目にそれぞれ、100μLを皮下免疫する。αPD−L1抗体治療は2回であり、5、10日目にそれぞれ、マウス1匹につき1回あたり200μgを腹腔注射する(前者は同型対照抗体であるため重複せず)。
(4)腫瘍体積および体重を週2回測定し、マウスの生存率を記録する。
Claims (14)
- PEG化リン脂質(PEG−PE)と抗原ポリペプチドとが自己集合してなることを特徴とする、ポリペプチドワクチンミセル。
- 前記PEG化リン脂質分子中のポリエチレングリコール親水ブロックが、分子量500〜10000のPEG分子であり、好ましくはPEGが1500〜3000、最も好ましくはPEGが2000であることと、
前記抗原ポリペプチドが、長さが5〜100個のアミノ酸からなる抗原ポリペプチド、好ましくは10〜50個アミノ酸からなる抗原ポリペプチド、最も好ましくは20〜30個アミノ酸からなる抗原ポリペプチドであることを特徴とする、
請求項1に記載のポリペプチドワクチンミセル。 - 前記PEG化リン脂質(PEG−PE)と抗原ポリペプチドとのモル比が720:4〜160であり、好ましいモル比が180:4であることを特徴とする、請求項1または2に記載のポリペプチドワクチンミセル。
- 前記ポリペプチドワクチンミセルが免疫アジュバントをさらに含み、前記免疫アジュバントが、フロイントアジュバント、水酸化アルミニウムアジュバント、モノホスホリルリピドA(MPLA)アジュバントを含み、好ましくはモノホスホリルリピドAアジュバントであることを特徴とする、請求項1または2に記載のポリペプチドワクチンミセル。
- PEG化リン脂質(PEG−PE)、抗原ポリペプチド、免疫アジュバントのモル比率の範囲が720:4〜160:3〜80であり、好ましいモル比が、180:4:3であることを特徴とする、請求項4に記載のポリペプチドワクチンミセル。
- 請求項1〜5のいずれか1項に記載のポリペプチドワクチンミセルの調製方法であって、
揮発性有機溶媒、水または塩緩衝液でPEG化リン脂質(PEG−PE)、抗原ポリペプチド分子、アジュバント分子を溶解し、担体分子溶液、抗原ポリペプチド溶液、アジュバント溶液を調製する、ステップ(1)と、
ターゲットのポリペプチドワクチンミセルにおける各成分の割合に応じて、前記ステップ(1)で得た担体分子溶液、ワクチン溶液、アジュバント溶液を均一に混合する、ステップ(2)と、
前記ステップ(2)で得た混合溶液における全ての有機溶媒を除去し、担体分子、ワクチン分子およびアジュバント分子に、均一に分布した混合脂質膜を形成させる、ステップ(3)と、
前記ステップ(3)で得た混合脂質膜を生理食塩水で溶解し、インキュベーション条件下で脂質膜を均一に水和させた後、室温で一定時間静置し、ワクチンミセル溶液を得る、ステップ(4)と、
前記ステップ(4)または(2)で得たワクチンミセル溶液に除菌処理を行うステップであって、前記除菌処理は、好ましくは0.22μmの濾過膜でのろ過である、ステップ(5)とを含むことを特徴とする、調製方法。 - 得たワクチンミセル溶液に一定量の凍結乾燥保護剤を添加した後、ワクチンミセル溶液を凍結乾燥させ、ワクチンミセルの凍結乾燥粉末を得る、ステップ(6)をさらに含むことを特徴とする、請求項6に記載の調製方法。
- 前記ステップ(1)に記載の前記揮発性有機溶媒が、メタノール、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、エタノール、アセトン、氷酢酸などであるか、またはそれらの混合物であることと、
前記ステップ(3)に記載の前記有機溶媒を除去する方法が、減圧水浴及び加熱回転蒸発であることと、
前記ステップ(4)に記載の前記インキュベーション条件が、40〜60℃の水浴で20〜60分間のインキュベーション、好ましくは55℃の水浴で30分間のインキュベーションであることと、
前記ステップ(6)に記載の前記凍結乾燥保護剤が0.05g/mlのマンニトール、ラクトース、ソルビトール、デキストランなどであることとを特徴とする、
請求項6または7に記載の調製方法。 - 腫瘍の治療または予防に用いられるワクチンであって、請求項1〜5のいずれか1項に記載のポリペプチドワクチンミセルと、薬学的に許容しうる添加剤とからなる、ワクチン。
- (1)請求項1〜5のいずれか1項に記載のポリペプチドワクチンミセル、または請求項9に記載のワクチンと、
(2)抗癌治療において有効な抗癌治療薬物とを含む、腫瘍の治療または予防に用いられる複合製剤であって、
前記複合製剤が前記抗癌治療薬物の効果を効果的に向上させうることを特徴とする、複合製剤。 - 前記抗癌治療薬物が、アルキル化剤、ヌクレオチドアナログ、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼI阻害剤、トポイソメラーゼII阻害剤、抗有糸分裂薬、白金誘導体薬、サイトカイン薬、モノクローナル抗体薬を含み、好ましくは白金誘導体またはモノクローナル抗体薬物であり、特に好ましくはシスプラチンまたはPD1/PD−L1抗体であることを特徴とする、請求項10に記載の複合製剤。
- PEG化リン脂質(PEG−PE)と抗原ポリペプチドとの集合により形成され、免疫アジュバントをさらに含む、ポリペプチドワクチンミセルであって、
前記PEG化リン脂質(PEG−PE)におけるポリエチレングリコール親水ブロックが、分子量2000のPEG分子であることと、
前記抗原ポリペプチドが、HPV16 E7、HPV16 E6、HPV18 E7、HPV18 E6、MUC−1、PSA、HBV−ProS、HBV表面抗原などに由来する腫瘍関連抗原ポリペプチド、または、HIV、HCV(C型肝炎)、Fluなどのウィルスに由来する特異抗原であることと、
前記免疫アジュバントがモノホスホリルリピドA(MPLA)アジュバントであることと、
前記PEG化リン脂質(PEG−PE)、抗原ポリペプチド、免疫アジュバントのモル比率の範囲が720:4〜160:3〜80であり、好ましいモル比が180:4:3であることとを特徴とする、ポリペプチドワクチンミセル。 - 腫瘍を治療または予防するためのワクチンであって、請求項12に記載のポリペプチドワクチンミセルと薬学的に許容しうる添加剤とからなる、ワクチン。
- (1)請求項12に記載のポリペプチドワクチンミセル、または請求項13に記載のワクチンと、
(2)抗癌治療において有効な、シスプラチンまたはPD1/PD−L1抗体を含む抗癌治療薬物とを含む複合製剤であって、
前記抗癌治療薬物の治療効果を効果的に向上させうることを特徴とする、腫瘍を治療または予防するための複合製剤。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410570624.7A CN104288758B (zh) | 2014-10-22 | 2014-10-22 | 聚乙二醇化磷脂为载体的胶束多肽疫苗 |
CN201410570624.7 | 2014-10-22 | ||
PCT/CN2015/092192 WO2016062227A1 (zh) | 2014-10-22 | 2015-10-19 | 聚乙二醇化磷脂为载体的胶束多肽疫苗 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017531669A JP2017531669A (ja) | 2017-10-26 |
JP6443646B2 true JP6443646B2 (ja) | 2018-12-26 |
Family
ID=52308868
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017520891A Active JP6443646B2 (ja) | 2014-10-22 | 2015-10-19 | Peg化リン脂質を担体とするポリペプチドワクチンミセル |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10525113B2 (ja) |
EP (1) | EP3210621B1 (ja) |
JP (1) | JP6443646B2 (ja) |
CN (1) | CN104288758B (ja) |
WO (1) | WO2016062227A1 (ja) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105194663B (zh) * | 2015-10-19 | 2018-11-02 | 上海天汇化学制药有限公司 | 聚乙二醇化磷脂为载体的胶束多肽疫苗 |
CN108210455A (zh) * | 2016-12-19 | 2018-06-29 | 湖南尔康湘药制药有限公司 | 一种碳酸锌纳米胶束制剂及制备方法 |
CN108904454B (zh) * | 2018-07-09 | 2021-04-09 | 北京航空航天大学 | 一种基于软刻蚀和层层自组装技术的精准疫苗制备方法 |
CN111744011B (zh) * | 2020-06-15 | 2022-06-14 | 天津力博生物科技有限公司 | 一种聚乙二醇衍生物形成的胶束在光动力治疗药物中的用途 |
CN116367861A (zh) * | 2020-09-14 | 2023-06-30 | 上海弼领生物技术有限公司 | PPARα(过氧化物酶体增殖物激活受体α)配体在制备药物中的应用 |
CN112426537B (zh) * | 2020-11-16 | 2023-06-27 | 国家纳米科学中心 | 一种多肽纳米胶束及其制备方法和应用 |
CN114246943B (zh) * | 2021-12-09 | 2023-09-29 | 浙江大学杭州国际科创中心 | 一种高分子偶联多肽纳米疫苗及其制备方法 |
CN114225047B (zh) * | 2021-12-13 | 2023-12-26 | 安徽医科大学 | 一种免疫逃逸纳米制剂、制备方法及应用 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1840193B (zh) * | 2005-03-29 | 2010-05-12 | 中国科学院生物物理研究所 | 聚乙二醇化磷脂包载的蒽环类抗肿瘤抗生素的纳米胶束制剂 |
WO2007028341A1 (fr) * | 2005-09-09 | 2007-03-15 | Beijing Diacrid Medical Technology Co., Ltd. | Nanomicelles servant de medicaments anticancereux a polyethylene phospholipides glycolyles contenant des vinca alcaloides |
WO2010008876A2 (en) * | 2008-06-24 | 2010-01-21 | The Regents Of The University Of California | Method for preparation of micellar hybrid nanoparticles for therapeutic and diagnostic applications and compositions thereof |
EP2201935B1 (en) * | 2008-12-26 | 2020-07-08 | Samyang Biopharmaceuticals Corporation | Polymeric micelle composition containing a poorly soluble drug and preparation method of the same |
US9107904B2 (en) * | 2012-04-05 | 2015-08-18 | Massachusetts Institute Of Technology | Immunostimulatory compositions and methods of use thereof |
CN103372217B (zh) * | 2012-04-28 | 2014-12-10 | 中国科学院深圳先进技术研究院 | 聚合物纳米载体制剂及其制备方法和应用 |
CN103784400B (zh) | 2012-10-31 | 2017-03-08 | 中国科学院生物物理研究所 | 一种聚乙二醇化磷脂包载胰岛素的口服胶束制剂 |
-
2014
- 2014-10-22 CN CN201410570624.7A patent/CN104288758B/zh active Active
-
2015
- 2015-10-19 EP EP15852247.4A patent/EP3210621B1/en active Active
- 2015-10-19 US US15/520,426 patent/US10525113B2/en active Active
- 2015-10-19 WO PCT/CN2015/092192 patent/WO2016062227A1/zh active Application Filing
- 2015-10-19 JP JP2017520891A patent/JP6443646B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104288758B (zh) | 2018-04-03 |
US20170312352A1 (en) | 2017-11-02 |
US10525113B2 (en) | 2020-01-07 |
EP3210621A4 (en) | 2018-07-11 |
EP3210621A1 (en) | 2017-08-30 |
JP2017531669A (ja) | 2017-10-26 |
EP3210621B1 (en) | 2022-06-29 |
CN104288758A (zh) | 2015-01-21 |
WO2016062227A1 (zh) | 2016-04-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6443646B2 (ja) | Peg化リン脂質を担体とするポリペプチドワクチンミセル | |
Tran et al. | Nanoparticles for dendritic cell-based immunotherapy | |
CN108992666B (zh) | 靶向共载抗原和tlr激动剂的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂及制备方法与应用 | |
Krishnamachari et al. | Nanoparticle delivery systems in cancer vaccines | |
Li et al. | Rational design of polymeric hybrid micelles to overcome lymphatic and intracellular delivery barriers in cancer immunotherapy | |
Zamani et al. | MPL nano-liposomal vaccine containing P5 HER2/neu-derived peptide pulsed PADRE as an effective vaccine in a mice TUBO model of breast cancer | |
CN108743939B (zh) | 共载抗原、mpla与imq的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂及制备方法与应用 | |
US8017154B2 (en) | Polyamino acid for use as adjuvant | |
CN108969771B (zh) | 甘露糖修饰的共载抗原和双免疫激动剂磷脂杂化聚合物囊泡及其制备方法与应用 | |
JP2019511483A (ja) | 免疫療法のためのsting活性化ナノワクチン | |
Ruan et al. | Advanced biomaterials for cell‐specific modulation and restore of cancer immunotherapy | |
WO2021127814A1 (zh) | 用于癌症治疗的光纳米疫苗及其制备方法和应用 | |
Chou et al. | Glycosylation of OVA antigen-loaded PLGA nanoparticles enhances DC-targeting for cancer vaccination | |
EP3220913B1 (en) | Nanoparticle-based vaccine targeting cancer/testis antigens (cta) and its use in solid and hematological malignancies | |
Shen et al. | Nano-vesicles based on phospholipid-like amphiphilic polyphosphazenes to orally deliver ovalbumin antigen for evoking anti-tumor immune response | |
CN105194663B (zh) | 聚乙二醇化磷脂为载体的胶束多肽疫苗 | |
CN116763907A (zh) | 一种水凝胶包埋的纳米颗粒疫苗及其制备方法 | |
Feng et al. | DEC-205 receptor targeted poly (lactic-co-glycolic acid) nanoparticles containing Eucommia ulmoides polysaccharide enhances the immune response of foot-and-mouth disease vaccine in mice | |
Zamani et al. | Improving potency of Nanoliposomal AE36 peptide vaccine by adding CD4+ T cell helper epitope and MPL in TUBO breast cancer mice model | |
D’Souza et al. | Trends in Nonparenteral Delivery of Biologics, Vaccines and Cancer Therapies | |
EP2735314B1 (en) | Sugar-coated liposome composition | |
Liu et al. | Bifunctional lipids in tumor vaccines: an outstanding delivery carrier and promising immune stimulator | |
Savla et al. | Nanoparticles in the development of therapeutic cancer vaccines | |
JP2021535115A (ja) | マイクロカプセルに基づくワクチン | |
WO2023003957A1 (en) | Nanoconstructs and nanoparticle-mediated delivery of immunogenic cell death inducers for enhancing cancer immunotherapy |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170502 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180206 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180413 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180918 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20181016 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20181107 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20181113 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20181107 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6443646 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |