JP6403667B2 - 多糖組成物およびその使用 - Google Patents

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Description

関連出願
本願は、２０１２年５月３０日に出願した米国仮出願第６１／６５３３８９号および２０１３年５月２６日に出願した米国仮出願第６１／８２７６６１号の利益を主張する。請求項以外のこれらの仮出願の内容は、本明細書に参考として援用される。
政府援助
本発明は、ＮＩＨ（ＮＩＡＩＤ）からの補助金番号ＲＯ１ ＡＩ０４６７０６によって一部援助された。米国政府は、本発明に一定の権利を有する。
発明の分野
本発明は、特定の病原体による感染症の検出、予防および／または処置における、特定の多糖抗原および抗体組成物の使用に関する。
発明の背景
性質が細菌であれ、ウイルスであれ、真菌であれ、寄生虫であるにせよ、様々な感染症のために免疫療法を開発することは優先順位が高い。現在の多くの免疫療法は、種特異抗原を通して特定の微生物種を標的にする。広い範囲の微生物を標的にし、それらに有効である免疫療法は、一般性がより低い。
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓおよびＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓは、それらの表面にポリＮ−アセチルグルコサミン（ＰＮＡＧ）多糖抗原を発現する。ＰＮＡＧは、これらの細菌ではｉｃａ遺伝子座の遺伝子生成物によってｉｎ ｖｉｖｏで合成される。同様に、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉおよび他のグラム陰性菌は、ＰＮＡＧを合成するために使用することができるタンパク質の合成を同じくコードする、ｐｇａ遺伝子座と呼ばれる相同的遺伝子座を含有する。したがって、無傷のｉｃａまたはｐｇａ遺伝子座を有する細菌は、ＰＮＡＧを生成することができる。オプソニン抗体の誘導によって一部特徴付けられる抗原特異的免疫応答を刺激することにおいて、この抗原の脱アセチル化形が特に有効であることが以前に見出された。
本発明は、多糖ポリＮ−アセチルグルコサミン（ＰＮＡＧ）が、この多糖を発現することが以前に公知でなかったか示唆されなかった、いくつかの様々な病原体によって発現されるという予想外で意外な知見に一部基づく。したがって本発明は、これらの特定の病原体による感染症の予防および／または処置で使用するための、ならびに任意選択で、そのような感染症から生じるかもしれない疾患または障害の処置および／または予防で使用するための、この多糖に特異的なこの多糖または抗体を含む組成物を提供する。
驚くべきことに、本発明により、ＰＮＡＧを発現することが見出された病原体は、いくつかのクラスおよびタイプにわたる。これらのクラスおよび具体的な病原体は、以下の通りである：（ａ）グラム陽性球菌：Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓなどのＡ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅなどのＢ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｙｓａｇａｌａｃｔｉａｅなどのＣ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、およびＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓのワクチンおよび非ワクチン株；（ｂ）グラム陽性桿菌：Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓおよびＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ；（ｃ）グラム陰性球菌および球桿菌：Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、型別不能のＨｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉおよびＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ；（ｄ）グラム陰性桿菌：Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂ．ｖｕｌｇａｔｉｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型チフス菌およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ネズミチフス菌；（ｅ）真菌類：Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（酵母）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（菌糸）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ属の種、例えばＦｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ、およびＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ；ならびに（ｆ）寄生虫：Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｂｅｒｇｅｉおよびＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（スポロゾイトを含む）；およびＴｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ（Ｔ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ）。それらのいずれも、特定の細菌でＰＮＡＧおよび関連する多糖の合成に関与するタンパク質をコードする、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉのｉｃａ遺伝子座またはＥ．ｃｏｌｉのｐｇａ遺伝子座に関連する識別可能な遺伝子座を有しないので、これらの病原体によるＰＮＡＧ発現は特に意外である。したがってこれらの病原体は、それらが識別可能なｉｃａまたはｐｇａ遺伝子座を有しないことを示すために、非ｉｃａ／ｐｇａ病原体と本明細書において呼ばれる。
本発明は、例えばＰＮＡＧに特異的な抗体を使用して前述の病原体のいずれかを検出する方法も提供する。
したがって、一態様で本発明は、非ｉｃａ／ｐｇａであるがＰＮＡＧ陽性である病原体による感染症を有するか、またはその発症のリスクがある対象に、病原体に対して免疫応答を誘導するのに有効な量の、式
を有する単離された多糖を投与することを含み、式中、ｎは少なくとも５であり、Ｒは、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３および−ＮＨ２からなる群から選択され、ただし、Ｒ基の５０％未満は−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３である方法を提供する。
別の態様では、本発明は、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を有するか、またはその発症のリスクがある対象に、病原体に対して免疫応答を誘導するのに有効な量の、担体とコンジュゲートしている単離された多糖を投与することを含み、多糖が式
を有し、式中、ｎは５以上であり、Ｒは−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３および−ＮＨ２からなる群から選択され、ただし、Ｒ基の５０％未満は−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３である方法を提供する。
別の態様では、本発明は、対象における非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症の予防または処置で使用するための医薬組成物であって、式
を有する単離された多糖を含み、式中、ｎは少なくとも５であり、Ｒは−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３および−ＮＨ２からなる群から選択され、ただし、Ｒ基の５０％未満は−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３である、医薬組成物を提供する。
別の態様では、本発明は、対象における非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症の予防または処置で使用するための医薬組成物であって、担体とコンジュゲートしている単離された多糖を含み、多糖が式
を有し、式中、ｎは５以上であり、Ｒは−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３および−ＮＨ２からなる群から選択され、ただし、Ｒ基の５０％未満は−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３である、医薬組成物を提供する。
一部の実施形態では、単離された多糖は、リンカーを介して担体とコンジュゲートしている。一部の実施形態では、担体はペプチド担体である。各多糖は、１つまたは複数の担体とコンジュゲートしていてもよい。担体は、多糖であってもよい。一部の実施形態では、担体多糖は、Ｎ−アセチルベータ（β）１−６グルコサミンではない。
一部の実施形態では、Ｒ基の４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下または１％以下は−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３である。一部の実施形態では、Ｒ基のいずれも−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３ではない。
一部の実施形態では、ｎは少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００または少なくとも５００である。
一部の実施形態では、単離された多糖は、１００〜５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、単離された多糖は、少なくとも９００ダルトン、少なくとも２０００ダルトン、少なくとも２５００ダルトン、少なくとも５０００ダルトン、少なくとも７５００ダルトン、少なくとも１０，０００ダルトン、少なくとも２５，０００ダルトン、少なくとも５０，０００ダルトン、少なくとも７５，０００ダルトン、少なくとも１００，０００ダルトン、少なくとも１２５，０００ダルトン、少なくとも１５０，０００ダルトン、少なくとも２００，０００ダルトン、少なくとも２５０，０００ダルトン、少なくとも３００，０００ダルトン、少なくとも３５０，０００ダルトン、少なくとも４００，０００ダルトン、少なくとも４５０，０００ダルトンまたは少なくとも５００，０００ダルトンの分子量を有する。
一部の実施形態では、単離された多糖はアジュバントと一緒に投与されるか製剤化され、またはアジュバントと併用される。
一部の実施形態では、単離された多糖は全身に投与されるか、全身投与のために製剤化される。一部の実施形態では、単離された多糖は局所に投与されるか、局所投与のために製剤化される。
一部の実施形態では、単離された多糖は、薬学的に許容される担体をさらに含む組成物で提供される。
別の態様では、本発明は、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を有するか、またはその発症のリスクがある対象に、有効量のＰＮＡＧ特異的抗体またはＰＮＡＧ特異的抗体断片を投与することを含む方法を提供する。
別の態様では、本発明は、対象における非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症の予防または処置で使用するための、ＰＮＡＧ特異的抗体またはＰＮＡＧ特異的抗体断片を含む医薬組成物を提供する。
一部の実施形態では、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体は、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌である。一部の実施形態では、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｃ群ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓである。
一部の実施形態では、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体は、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌である。一部の実施形態では、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓまたはＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓである。
一部の実施形態では、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体は、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌である。一部の実施形態では、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、型別不能のＨ．Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ属の種またはＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ属の種である。
一部の実施形態では、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体は、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌である。一部の実施形態では、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌は、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂ．ｖｕｌｇａｔｉｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型チフス菌およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ネズミチフス菌である。一部の実施形態では、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体は、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌である。一部の実施形態では、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌は、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（酵母）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（菌糸）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ＦｕｓａｒｉｕｍまたはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓである。
一部の実施形態では、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体は、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫である。一部の実施形態では、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫は、Ｐ．ｂｅｒｇｅｉまたはＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍである。
一部の実施形態では、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体は、Ｔ．ｖａｇｉｎａｌｉｓである。
一部の実施形態では、対象はヒトである。一部の実施形態では、対象は霊長類、ウマ、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌまたはネコである。
一部の実施形態では、対象は非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を有する。一部の実施形態では、対象は非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を発症するリスクがある。
一部の実施形態では、抗体または抗体断片は全身に投与されるか、全身投与のために製剤化される。一部の実施形態では、抗体または抗体断片は、局所に投与されるか、局所投与のために製剤化される。
別の態様では、本発明は、濃縮した微生物細胞体調製物から粗製多糖調製物をエタノール沈殿させることと；粗製多糖をリゾチームおよびリソスタフィンで同時に消化し、続いてヌクレアーゼおよびプロテイナーゼＫで逐次的に消化して、消化された多糖調製物を形成することと；消化された多糖調製物をサイズ分画することと；アセチル化多糖画分を単離することと；アセチル化多糖画分を脱アセチル化して、５０％未満のアセテート置換を有するＰＮＡＧ多糖を生成することとを含み、微生物細胞体調製物が非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物から誘導される方法を提供する。一部の実施形態では、多糖調製物は、カラムを用いてサイズ分画される。一部の実施形態では、この方法は、４０％未満のアセテート置換を有するＰＮＡＧ多糖を生成する。
別の態様では、本発明は、微生物培養物から不純な多糖を調製することと；不純な多糖を酸または塩基とともにインキュベートして半純粋な多糖調製物を生成することと；調製物を中和することと；中和された調製物をフッ化水素酸中でインキュベートすることと；調製物からアセチル化多糖を単離することと；アセチル化多糖を脱アセチル化して、５０％未満のアセテート置換を有するＰＮＡＧ多糖を生成することとを含み、微生物培養物が非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物培養物である方法を提供する。一部の実施形態では、この方法は、４０％未満のアセテート置換を有するＰＮＡＧ多糖を生成する。
別の態様では、本発明は、微生物培養物から不純な多糖を調製することと；不純な多糖を酸または塩基とともにインキュベートして半純粋な多糖調製物を生成することと；調製物を中和することと；中和された調製物をフッ化水素酸中でインキュベートすることと；調製物から５０％未満のアセテート置換を有するＰＮＡＧ多糖を単離することとを含み、微生物培養物が非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物培養物である方法を提供する。一部の実施形態では、４０％未満のアセテート置換を有するＰＮＡＧ多糖が単離される。
一部の実施形態では、方法は、担体を単離された多糖とコンジュゲートさせることをさらに含む。一部の実施形態では、担体はペプチド担体である。
一部の実施形態では、アセチル化多糖は化学的に脱アセチル化されている。
一部の実施形態では、アセチル化多糖は塩基性溶液とのインキュベーションによって脱アセチル化されている。一部の実施形態では、アセチル化多糖は酵素によって脱アセチル化されている。
別の態様では、本発明は、対象に、抗体生成のために有効な量の、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体から単離されたＰＮＡＧ多糖、およびアジュバントを投与することと、対象から抗体を単離することとを含む、抗体の生成方法を提供する。一部の実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。
別の態様では、本発明は、対象に、抗体生成のために有効な量の、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体から単離されたＰＮＡＧ多糖、およびアジュバントを投与することと、対象から脾細胞を収集することと、対象からの脾細胞を骨髄腫細胞と融合させることと、融合サブクローンから生成された抗体を収集することとを含む、モノクローナル抗体の生成方法を提供する。
一部の実施形態では、方法は抗体を単離することをさらに含む。
一部の実施形態では、ＰＮＡＧ多糖は５０％未満アセチル化されている。
一部の実施形態では、対象はウサギである。一部の実施形態では、対象はヒトである。
別の態様では、本発明は、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体を検出するための方法であって、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体を含有することが疑われる試料を、ＰＮＡＧ特異的抗体または抗体断片と接触させることと、抗体または抗体断片と試料との結合を検出することとを含み、抗体または抗体断片の結合が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が試料中に存在することを示す、方法を提供する。
一部の実施形態では、試料はＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ陰性である。
一部の実施形態では、試料は対象からの生体試料である。一部の実施形態では、生体試料は尿、血液、膿、皮膚、痰、関節液、リンパまたは乳汁である。一部の実施形態では、試料は、植込み型であるか植え込まれた医療器具、または１種の医療機器、または患者ケア施設内の表面のスワブに由来する。
一部の実施形態では、抗体または抗体断片は、ヒト化抗体、またはキメラ抗体、またはその断片である。一部の実施形態では、抗体はヒト抗体である。一部の実施形態では、抗体または抗体断片は、Ｆ５９８（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−５９３１）抗体またはその断片である。一部の実施形態では、抗体または抗体断片は、Ｆ６２８（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−５９３２）抗体またはその断片である。一部の実施形態では、抗体または抗体断片は、Ｆ６３０（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−５９３３）抗体またはその断片である。一部の場合には、ＰＮＡＧに対するポリクローナル抗血清を使用することもできる。
一部の実施形態では、抗体または抗体断片は、薬剤とコンジュゲートしている。
一部の実施形態では、薬剤は、抗生物質または放射性同位体などの細胞毒性剤である。一部の実施形態では、薬剤は検出可能な標識である。一部の実施形態では、検出可能な標識は、放射性標識、酵素、ビオチン分子、アビジン分子または蛍光色素である。
本発明の限定の各々は、本発明の様々な実施形態を包含することができる。したがって、任意の１つの要素または要素の組合せが関与する本発明の限定の各々が、本発明の各々の態様に含まれる可能性があることが予期される。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を有するか、またはその発症のリスクがある対象に、前記病原体に対して免疫応答を誘導するのに有効な量の、式

を有する単離された多糖を投与することを含み、式中、ｎは少なくとも５であり、Ｒは−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ ３ および−ＮＨ ２ からなる群から選択され、ただし、Ｒ基の５０％未満は−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ ３ である方法。
（項目２）
非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を有するか、またはその発症のリスクがある対象に、前記病原体に対して免疫応答を誘導するのに有効な量の、担体とコンジュゲートしている単離された多糖を投与することを含み、前記多糖が式

を有し、式中、ｎは５以上であり、Ｒは−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ ３ および−ＮＨ ２ からなる群から選択され、ただし、Ｒ基の５０％未満は−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ ３ である方法。
（項目３）
前記単離された多糖がリンカーを介して前記担体とコンジュゲートしている、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記担体がペプチド担体である、項目２または３に記載の方法。
（項目５）
Ｒ基の３０％未満、２０％未満、１０％未満または５％未満が−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ ３ である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
前記Ｒ基のいずれも−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ ３ ではない、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
ｎが少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００または少なくとも５００である、項目１〜６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記単離された多糖が１００〜５００ｋＤａの分子量を有する、項目１〜６のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌である、項目１〜８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂ群ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓである、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌である、項目１〜８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓまたはＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓである、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌である、項目１〜８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、型別不能のＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒまたはＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌である、項目１〜８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌が、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂ．ｖｕｌｇａｔｉｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型チフス菌またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ネズミチフス菌である、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌である、項目１〜８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（酵母）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（菌糸）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ＦｕｓａｒｉｕｍまたはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓである、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫である、項目１〜８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫が、Ｐ．ｂｅｒｇｅｉまたはＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍである、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記対象がヒトである、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記対象が霊長類、ウマ、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌまたはネコである、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記対象が非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を有する、項目１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記対象が非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を発症するリスクがある、項目１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記単離された多糖がアジュバントと一緒に投与される、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記単離された多糖が全身に投与される、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記単離された多糖が局所に投与される、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
対象における非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症の予防または処置で使用するための医薬組成物であって、式

を有する単離された多糖を含み、式中、ｎは少なくとも５であり、Ｒは−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ ３ および−ＮＨ ２ からなる群から選択され、ただし、Ｒ基の５０％未満は−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ ３ である、医薬組成物。
（項目２９）
対象における非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症の予防または処置で使用するための医薬組成物であって、担体とコンジュゲートしている単離された多糖を含み、前記多糖が式

を有し、式中、ｎは５以上であり、Ｒは−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ ３ および−ＮＨ ２ からなる群から選択され、ただし、Ｒ基の５０％未満は−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ ３ である、医薬組成物。
（項目３０）
前記単離された多糖がリンカーを介して前記担体とコンジュゲートしている、項目２９に記載の医薬組成物。
（項目３１）
前記担体がペプチド担体である、項目２９または３０に記載の医薬組成物。
（項目３２）
Ｒ基の３０％未満、２０％未満、１０％未満または５％未満が−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ ３ である、項目２８〜３１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目３３）
前記Ｒ基のいずれも−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ ３ ではない、項目２８〜３２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目３４）
ｎが少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００または少なくとも５００である、項目２８〜３３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目３５）
前記単離された多糖が１００〜５００ｋＤａの分子量を有する、項目２８〜３３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目３６）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌である、項目２８〜３５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目３７）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂ群ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓである、項目３６に記載の医薬組成物。
（項目３８）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌である、項目２８〜３５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目３９）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓまたはＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓである、項目３８に記載の医薬組成物。
（項目４０）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌である、項目２８〜３５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目４１）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、型別不能のＨ．Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒまたはＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、項目４０に記載の医薬組成物。
（項目４２）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌である、項目２８〜３５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目４３）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌が、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂ．ｖｕｌｇａｔｉｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型チフス菌またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ネズミチフス菌である、項目４２に記載の医薬組成物。
（項目４４）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌である、項目２８〜３５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目４５）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（酵母）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（菌糸）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ＦｕｓａｒｉｕｍまたはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓである、項目４４に記載の医薬組成物。
（項目４６）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫である、項目２８〜３５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目４７）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫が、Ｐ．ｂｅｒｇｅｉまたはＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍである、項目４６に記載の医薬組成物。
（項目４８）
前記対象がヒトである、項目２８〜４７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目４９）
前記対象が霊長類、ウマ、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌまたはネコである、前記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目５０）
前記対象が非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を有する、項目２８〜４９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目５１）
前記対象が非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を発症するリスクがある、項目２８〜４９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目５２）
前記単離された多糖がアジュバントと一緒に使用される、項目２８〜５１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目５３）
前記単離された多糖が全身投与のために製剤化される、項目２８〜５２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目５４）
前記単離された多糖が局所投与のために製剤化される、項目２８〜５２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目５５）
非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を有するか、またはその発症のリスクがある対象に、ＰＮＡＧ特異的抗体またはＰＮＡＧ特異的抗体断片の有効量を投与すること
を含む方法。
（項目５６）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌である、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂ群ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓである、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌である、項目５５に記載の方法。
（項目５９）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓまたはＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓである、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌である、項目５５に記載の方法。
（項目６１）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、型別不能のＨ．Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒまたはＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、項目６０に記載の方法。
（項目６２）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌である、項目５５に記載の方法。
（項目６３）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌が、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂ．ｖｕｌｇａｔｉｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型チフス菌またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ネズミチフス菌である、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌である、項目５５に記載の方法。
（項目６５）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（酵母）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（菌糸）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ＦｕｓａｒｉｕｍまたはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓである、項目６４に記載の方法。
（項目６６）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫である、項目５５に記載の方法。
（項目６７）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫が、Ｐ．ｂｅｒｇｅｉまたはＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍである、項目６６に記載の方法。
（項目６８）
前記対象がヒトである、項目５５〜６７のいずれか一項に記載の方法。
（項目６９）
前記対象が霊長類、ウマ、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌまたはネコである、項目５５〜６７のいずれか一項に記載の方法。
（項目７０）
前記対象が非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を有する、項目５５〜６９のいずれか一項に記載の方法。
（項目７１）
前記対象が非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を発症するリスクがある、項目５５〜６９のいずれか一項に記載の方法。
（項目７２）
前記抗体または抗体断片が全身に投与される、項目５５〜７１のいずれか一項に記載の方法。
（項目７３）
前記抗体または抗体断片が局所に投与される、項目５５〜７１のいずれか一項に記載の方法。
（項目７４）
前記抗体または抗体断片がＦ５９８（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−５９３１）抗体またはその断片である、項目５５〜７３のいずれか一項に記載の方法。
（項目７５）
前記抗体または抗体断片がＦ６２８（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−５９３２）抗体またはその断片である、項目５５〜７３のいずれか一項に記載の方法。
（項目７６）
前記抗体または抗体断片がＦ６３０（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−５９３３）抗体またはその断片である、項目５５〜７３のいずれか一項に記載の方法。
（項目７７）
前記抗体または抗体断片が薬剤とコンジュゲートしている、項目５５〜７４のいずれか一項に記載の方法。
（項目７８）
前記薬剤が細胞毒性剤である、項目７７に記載の方法。
（項目７９）
対象における非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症の予防または処置で使用するための、ＰＮＡＧ特異的抗体またはＰＮＡＧ特異的抗体断片を含む医薬組成物。
（項目８０）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌である、項目７９に記載の医薬組成物。
（項目８１）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂ群ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓである、項目８０に記載の医薬組成物。
（項目８２）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌である、項目７９に記載の医薬組成物。
（項目８３）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓまたはＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓである、項目８２に記載の医薬組成物。
（項目８４）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌である、項目７９に記載の医薬組成物。
（項目８５）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、型別不能のＨ．Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒまたはＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、項目８４に記載の医薬組成物。
（項目８６）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌である、項目７９に記載の医薬組成物。
（項目８７）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌が、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂ．ｖｕｌｇａｔｉｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型チフス菌またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ネズミチフス菌である、項目８６に記載の医薬組成物。
（項目８８）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌である、項目７９に記載の医薬組成物。
（項目８９）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（酵母）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（菌糸）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ＦｕｓａｒｉｕｍまたはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓである、項目８８に記載の医薬組成物。
（項目９０）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫である、項目７９に記載の医薬組成物。
（項目９１）
前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫が、Ｐ．ｂｅｒｇｅｉまたはＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍである、項目９０に記載の医薬組成物。
（項目９２）
前記対象がヒトである、項目７９〜９１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目９３）
前記対象が霊長類、ウマ、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌまたはネコである、項目７９〜９１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目９４）
前記対象が非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を有する、項目７９〜９３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目９５）
前記対象が非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を発症するリスクがある、項目７９〜９３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目９６）
前記抗体または抗体断片が全身投与のために製剤化される、項目７９〜９５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目９７）
前記抗体または抗体断片が局所投与のために製剤化される、項目７９〜９５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目９８）
前記抗体または抗体断片がＦ５９８（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−５９３１）抗体またはその断片である、項目７９〜９７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目９９）
前記抗体または抗体断片がＦ６２８（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−５９３２）抗体またはその断片である、項目７９〜９７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目１００）
前記抗体または抗体断片がＦ６３０（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−５９３３）抗体またはその断片である、項目７９〜９７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目１０１）
前記抗体または抗体断片が薬剤とコンジュゲートしている、項目７９〜９８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目１０２）
前記薬剤が細胞毒性剤である、項目１０１に記載の医薬組成物。
（項目１０３）
濃縮した微生物細胞体調製物から粗製多糖調製物をエタノール沈殿させることと；
前記粗製多糖をリゾチームおよびリソスタフィンで同時に消化し、続いてヌクレアーゼおよびプロテイナーゼＫで逐次的に消化して、消化された多糖調製物を形成することと；
消化された前記多糖調製物をサイズ分画することと；
アセチル化多糖画分を単離することと；
前記アセチル化多糖画分を脱アセチル化して、５０％未満のアセテート置換を有するＰＮＡＧ多糖を生成することと
を含み、前記微生物細胞体調製物が非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物から誘導される方法。
（項目１０４）
微生物培養物から不純な多糖を調製することと；
前記不純な多糖を酸または塩基とともにインキュベートして半純粋な多糖調製物を生成することと；
前記調製物を中和することと；
中和された前記調製物をフッ化水素酸中でインキュベートすることと；
前記調製物からアセチル化多糖を単離することと；
前記アセチル化多糖を脱アセチル化して、５０％未満のアセテート置換を有するＰＮＡＧ多糖を生成することと
を含み、前記微生物培養物が非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物培養物である方法。
（項目１０５）
微生物培養物から不純な多糖を調製することと；
前記不純な多糖を酸または塩基とともにインキュベートして半純粋な多糖調製物を生成することと；
前記調製物を中和することと；
中和された前記調製物をフッ化水素酸中でインキュベートすることと；
前記調製物から５０％未満のアセテート置換を有するＰＮＡＧ多糖を単離することと
を含み、前記微生物培養物が非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物培養物である方法。
（項目１０６）
担体を前記単離された多糖とコンジュゲートさせることをさらに含む、項目１０３〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０７）
前記担体がペプチド担体である、項目１０６に記載の方法。
（項目１０８）
前記アセチル化多糖が化学的に脱アセチル化されている、項目１０３または１０４に記載の方法。
（項目１０９）
前記アセチル化多糖が塩基性溶液とのインキュベーションによって脱アセチル化されている、項目１０８に記載の方法。
（項目１１０）
前記アセチル化多糖が酵素によって脱アセチル化されている、項目１０３または１０４に記載の方法。
（項目１１１）
対象に、抗体生成のために有効な量の、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体から単離されたＰＮＡＧ多糖、およびアジュバントを投与することと、
前記対象から抗体を単離することと
を含む、抗体の生成方法。
（項目１１２）
前記抗体がポリクローナル抗体である、項目１１１に記載の方法。
（項目１１３）
対象に、抗体生成のために有効な量の、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体から単離されたＰＮＡＧ多糖、およびアジュバントを投与することと、
前記対象から脾細胞を収集することと、
前記対象からの脾細胞を骨髄腫細胞と融合させることと、
融合サブクローンから生成された抗体を収集することと
を含む、モノクローナル抗体の生成方法。
（項目１１４）
前記ＰＮＡＧ多糖が５０％未満アセチル化されている、項目１１１〜１１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１５）
抗体を単離することをさらに含む、項目１１１〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１６）
前記対象がウサギである、項目１１１〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１７）
前記対象がヒトである、項目１１１〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１８）
非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体を検出するための方法であって、
非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体を含有することが疑われる試料を、ＰＮＡＧ特異的抗体または抗体断片と接触させることと、
前記抗体または抗体断片と前記試料との結合を検出することと
を含み、前記抗体または抗体断片の結合が、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が前記試料中に存在することを示す、方法。
（項目１１９）
前記試料がＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ陰性である、項目１１８に記載の方法。
（項目１２０）
前記試料が対象からの生体試料である、項目１１８または１１９に記載の方法。
（項目１２１）
前記生体試料が尿、血液、膿、皮膚、痰、関節液、リンパまたは乳汁である、項目１２０に記載の方法。
（項目１２２）
前記抗体または抗体断片が検出可能な標識とコンジュゲートしている、項目１１８〜１２１のいずれか一項に記載の方法。
感染から４時間後に開始されて、腹腔内（ｉｐ）および局所に投与された抗ＰＮＡＧのＭＡｂ Ｆ５９８の影響。この図は、４８時間の実験の最も低い接種原からのデータを示す。実験の詳細：接種原は、１×１０５／目であった；感染から４および２４時間後に２００μｇのＭＡｂをｉｐ注射した；感染から２４および３２時間後に２０μｇのＭＡｂを局所に塗布した。データポイントは、個々のマウスの値を表す；バーは、群の平均スコアを表す。Ｐ値：マンホイットニーＵ検定。
感染から４時間後に開始されて、ＩＰおよび局所に投与された抗ＰＮＡＧのＭＡｂ Ｆ５９８の影響。この図は、４８時間の実験の低い接種原からのデータを示す。実験の詳細：接種原は、２×１０５／目であった；感染から４時間後に５００μｇのＭＡｂをＩＰ注射した；感染から２４および３２時間後に５０μｇのＭＡｂを局所に塗布した。データポイントは、個々のマウスの値を表す；バーは、群の平均スコアを表す。Ｐ値：マンホイットニーＵ検定。
感染から４時間後に開始されて、局所に投与された抗ＰＮＡＧのＭＡｂ Ｆ５９８の影響。この図は、３２時間の実験の中間の接種原からのデータを示す。実験の詳細：接種原は、５．１×１０６／目であった；感染から４、８、２４時間後にＭＡｂを局所に塗布した。データポイントは、個々のマウスの値を表す；バーは、群の平均スコアを表す。Ｐ値：マンホイットニーＵ検定。
感染から４時間後に開始されて、局所に投与された抗ＰＮＡＧのＭＡｂ Ｆ５９８の影響。この図は、３２時間の実験の高い接種原からのデータを示す。実験の詳細：接種原：５×１０７／目；感染から４、８、２４時間後にＭＡｂを局所に塗布した。３２時間後に実験を終了した。データポイントは、個々のマウスの値を表す；バーは、群の平均スコアを表す。Ｐ値：マンホイットニーＵ検定。
Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｄ３９を抗原投与したＣＢＡ／Ｎマウスの生存率（Ｎ＝１２／群）。
Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）が原因の致死性の皮膚感染症に対する抗９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴコンジュゲートワクチン抗体の保護効力。
Ｂ群Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ Ｂ１６Ｂ６株を抗原投与した２〜３日齢の子マウスの髄膜炎（脳の細菌）に対する、ウサギで作製された抗９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴコンジュゲートワクチン抗体の保護効力。データポイントは、個々のマウスのｌｏｇ１０ ＣＦＵ／脳を表す；バーは、群の中間スコアを表す。Ｐ値：マンホイットニーＵ検定。
ＰＢＳ（実験１）または抗ＨＩＶヒトＩｇＧ１ ＭＡｂ（ＭＡｂ Ｆ１０５、実験２）のいずれかと比較した、抗ＰＮＡＧヒトＩｇＧ１ ＭＡｂを投与したマウスにおける大腸炎スコアの低減。データポイントは、個々のマウスのスコアを表す；バーは、群の中間スコアを表す。Ｐ値：マンホイットニーＵ検定。
抗ＰＮＡＧのＭＡｂ Ｆ５９８または対照の抗ＨＩＶヒトＩｇＧ１ ＭＡｂ（Ｆ１０５）のいずれかで処置したＴＲＵＣマウスで総組織学的スコアを見出すために使用した４つのパラメータの個々のスコアの比較。
Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓに対する、ウサギで作製した抗９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴコンジュゲートワクチン抗体の保護効力。
抗ｄＰＮＡＧ−ＴＴウサギ抗体によって媒介された、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの４株のオプソニン性殺傷。殺傷は、正常なウサギ血清により対照で得られたものと比較した。
抗ＰＮＡＧ２０ヒトＩｇＧ１ ＭＡｂ Ｆ５９８によって媒介された、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの４株のオプソニン性殺傷。殺傷は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａアルギネートに特異的な対照のＭＡｂ Ｆ４２９と比較した。
抗９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴウサギ抗体によって媒介された、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓの３株のオプソニン性殺傷。殺傷は、正常なウサギ血清により対照で得られたものと比較した。
抗ＰＮＡＧのＭＡｂ Ｆ５９８によるＡ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓのオプソニン性殺傷。殺傷は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａアルギネートに特異的な対照のＭＡｂ Ｆ４２９と比較した。
抗ＰＮＡＧのＭＡｂ Ｆ５９８によるＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓのオプソニン性殺傷。殺傷は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａアルギネートに特異的な対照のＭＡｂ Ｆ４２９と比較した。
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのＢ血清群株の殺細菌性殺傷。
Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅの殺細菌性殺傷。
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの殺細菌性殺傷の阻害。
Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅの殺細菌性殺傷の阻害。
発明の詳細な説明
本発明は、細菌および細菌以外のいくつかの病原体でのＰＮＡＧ発現に関する予想外の知見に一部関する。この知見は、少なくとも２つの理由のために予想外であった。最初に、本発明に従ってＰＮＡＧを発現することが見出された病原体のいずれも、ｉｃａまたはｐｇａ遺伝子座を有しない。ｉｃａおよびｐｇａ遺伝子座は、ＰＮＡＧ合成を含む多糖合成に関与する４つのタンパク質を各々コードする。本発明の前までは、病原体がＰＮＡＧを合成するためにｉｃａまたはｐｇａ遺伝子座を有しなければならないと考えられていた。ｉｃａ遺伝子座は、本発明の前にＰＮＡＧを発現することが公知であったＳ．ａｕｒｅｕｓおよびＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓに存在し、ｐｇａ遺伝子座は一部のグラム陰性生物体で同定されている。新たに発見されたＰＮＡＧ陽性病原体が、これらの遺伝子座が見かけ上存在しない中でどのようにＰＮＡＧを実際に合成するかは明らかでない。本発明の知見は、そのような遺伝子座およびそれらがコードするタンパク質が存在しなくても、ＰＮＡＧが合成される可能性を示唆する。第２には、ＰＮＡＧを発現することが見出された、細菌および細菌以外の病原体を含む病原体に、大きな変動がある。本発明の前までは、識別可能なｉｃａ／ｐｇａ遺伝子座を発現しない病原体がＰＮＡＧを作製することができることは考えられていなかった。細菌以外の病原体がＰＮＡＧを発現するかもしれないことも考えられていなかった。
これらの様々な細菌および細菌以外の病原体がＰＮＡＧを発現するとの知見は、そのような病原体によって引き起こされる感染症の予防、処置および／または診断のための新しいアプローチを提供する。したがって本発明は、とりわけ、新たに記載されたＰＮＡＧ陽性病原体からのＰＮＡＧおよびｄＰＮＡＧの単離および／または誘導、ならびに免疫応答（ＰＮＡＧに特異的な抗体を生成するのに必要な免疫応答を含む）の刺激、ＰＮＡＧおよびＰＮＡＧ発現病原体の検出、およびＰＮＡＧ発現病原体の感染症の予防および処置におけるそれらの使用を企図する。そのようなＰＮＡＧ発現病原体には、限定されずに、本明細書に記載される非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ発現病原体が含まれる。
非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体
ＰＮＡＧを発現することが新たに発見された病原体は、本明細書において非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体と呼ばれ、それらがＳ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓまたはＥ．ｃｏｌｉなどの公知のＰＮＡＧ発現病原体の４遺伝子ｉｃａ／ｐｇａ遺伝子座に何らかの有意な類似性を有するＤＮＡベースの遺伝子座を含有しないことを示す。ｉｃａまたはｐｇａ遺伝子座は、４つのタンパク質（２つのグリコシルトランスフェラーゼ、Ｎ−脱アセチル化酵素および合成された多糖の搬出のためのタンパク質）をコードする。一部の非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ病原体は、これらの４つのタンパク質をコードする遺伝子を単一の遺伝子座に含まない。
例示的なｉｃａ遺伝子座（すなわち、Ｓ．ａｕｒｅｕｓからのもの）のヌクレオチド配列は、受託番号ＡＦ０８６７８３の下でＧｅｎＢａｎｋに寄託されている。本発明により、「非ｉｃａ」病原体とみなされる病原体は、識別可能なｉｃａ遺伝子座を有しない。例として、そのような病原体は、染色体ＤＮＡの同じ連続ストレッチに存在し、ＡＦ０８６７８３の下で寄託されたｉｃａ遺伝子座の全体の４遺伝子ヌクレオチド配列と少なくとも２５％の相同性を有するヌクレオチド配列を有することができない。非ｉｃａ ＰＮＡＧ陽性病原体は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉを除外する。
例示的なｐｇａ遺伝子座（すなわち、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ１２ ｓｕｂｓｔｒ．ＭＧ１６５５からのもの）のヌクレオチド配列は、遺伝子座の中の４つの遺伝子の各々について、ＡＡＣ７４１０６．１、ＡＡＣ７４１０７．１、ＡＡＣ７４１０８．１およびＡＡＣ７４１０９．１の受託番号の下でＧｅｎＢａｎｋに寄託されている。本発明により、「非ｐｇａ」病原体とみなされる病原体は、識別可能なｐｇａ遺伝子座を有しない。例として、そのような病原体は、染色体ＤＮＡの同じ連続ストレッチに存在し、ＡＡＣ７４１０６．１、ＡＡＣ７４１０７．１、ＡＡＣ７４１０８．１およびＡＡＣ７４１０９．１の下で寄託されたヌクレオチド配列の４つ全てと少なくとも２５％の相同性を有するヌクレオチド配列を有することができない。非ｐｇａ ＰＮＡＧ陽性病原体は、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂ．ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｏｓｅｐｔｉｃａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｂ．ｄｏｌｏｓａ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉおよびＳｈｉｇｅｌｌａ属の一部の株を除外する。
非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体は、グラム陰性菌およびグラム陽性菌、真菌類および寄生虫を含む。より具体的には、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性細菌は、グラム陽性球菌、グラム陽性桿菌、グラム陰性球菌または球桿菌、およびグラム陰性桿菌を含む。非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、Ｃ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｙｓａｇａｌａｃｔｉａｅ）およびＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓおよびＥ．ｆａｅｃｉｕｍ）を含む。非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓおよびＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓを含む。非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、型別不能のＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉおよびＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉを含む。非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌は、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂ．ｖｕｌｇａｔｉｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型チフス菌およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ネズミチフス菌を含む。
非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌は、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（酵母）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（菌糸）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ＦｕｓａｒｉｕｍおよびＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属の種を含む。非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｂｅｒｇｅｉおよびＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍを含む。
非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体は、Ｔ．ｖａｇｉｎａｌｉｓであってもよい。
本発明は、対象のＰＮＡＧ多糖に特異的である免疫応答を誘導する抗原として、ＰＮＡＧ多糖の使用を企図する。そのような免疫は、本明細書において能動免疫と呼ばれる。対象は、前述の非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体のいずれか１つによって引き起こされる感染症を有するか、またはその発症のリスクがある者であってもよい。感染症は、ＰＮＡＧ多糖の使用によって予防または処置することができる。
本発明は、対象のＰＮＡＧ多糖に特異的である免疫応答を誘導する、ＰＮＡＧ特異的抗体（または抗体断片）の使用も企図する。そのような免疫は、本明細書において受動免疫と呼ばれる。対象は、前述の非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体のいずれか１つによって引き起こされる感染症を有するか、またはその発症のリスクがある者であってもよい。感染症は、ＰＮＡＧ特異的抗体（または抗体断片）の使用によって予防または処置することができる。
ＰＮＡＧおよびｄＰＮＡＧ多糖
ＰＮＡＧ多糖は、ポリＮ−アセチルベータ（β）１−６グルコサミンである（すなわち、それはベータ（β）１−６連結によって連結されるグルコサミン単量体単位で構成される）。存在する場合、アセチル基はグルコサミン単量体にＮ連結される（Ｏ連結に対して）。ＰＮＡＧは、以下の式の構造を有し、
式中、ｎは整数であり、Ｒは、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３および−ＮＨ２からなる群から選択される。「ｎ」は、限定されずに、２〜５００の範囲であってもよい。
ＰＮＡＧはｉｎ ｖｉｔｒｏで合成することができるか、天然に存在する供給源、例えば新たに記載されたＰＮＡＧ陽性病原体から単離することができる。その生来の形では、ＰＮＡＧは、アセチル化（すなわち、Ｒが−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３である）が１〜１００％の範囲である形の混合物として存在し、より高度にアセチル化された形（すなわち、＞５０％のアセチル化を有するもの）がより優占した形である。
十分にアセチル化されない形は高度に免疫原性であり、ｉｎ ｖｉｖｏでの免疫刺激アッセイにおいては、より高度にアセチル化された形と比較してオプソニン性防御抗体をより良好に導き出すことができることが以前に発見された。ｄＰＮＡＧ投与の後に導き出される抗体は、ｄＰＮＡＧ、および一部の場合にはＰＮＡＧの高度にアセチル化された形も認識する。これらの知見は、ＰＮＡＧの十分にアセチル化されない形を、ｉｎ ｖｉｖｏで防御免疫応答を刺激するのに適するワクチン候補にした。その結果、本発明は、対象で能動免疫を刺激するための、ＰＮＡＧの十分にアセチル化されない形の使用も企図する。ＰＮＡＧのそのような十分にアセチル化されない形は、本明細書において脱アセチル化ＰＮＡＧ（またはｄＰＮＡＧ）と呼ばれる。Ｒ基の５０％未満が−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３である以外、ｄＰＮＡＧは上に示すものと同じ構造を有する（すなわち、アミノ基の５０％未満がアセテートで置換される）。アセチル化の範囲が０から５０％未満である限り、ｄＰＮＡＧは全体または部分的に脱アセチル化されていてもよい。全体が脱アセチル化されたｄＰＮＡＧ（すなわち、ＲがＮＨ２だけ）は、本明細書においてホモ重合体と呼ぶことができる。部分的に脱アセチル化されたｄＰＮＡＧ（すなわち、Ｒの５０％未満が−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３である限り、Ｒは−ＮＨ２または−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３であってもよい）は、本明細書においてヘテロ重合体と呼ぶことができる。例えば、Ｒ基の４９％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、または１％未満は、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３であってもよい。ある場合には、アセチル化のレベルは、４０％以下、３５％以下、２０％以下または１５％以下である。
本発明は、様々な適用における、ＰＮＡＧの高度にアセチル化された形および十分にアセチル化されない形の使用を企図する。非限定例として、高度にアセチル化されたＰＮＡＧは、診断薬として、または別の非治療目的のために使用する抗体を作製するために使用することができる。
本発明は、高度にアセチル化されたか十分にアセチル化されない、ＰＮＡＧの天然に存在する形、ならびにＰＮＡＧの合成形（すなわち、完全に新規に作製したもの）の使用を企図する。理解されるように、そのような合成形は、互いにβ−１−６連結される既知の数および配列のグルコサミンおよびＮ−アセチルグルコサミンの単位で合成することができる。合成形は、一部の場合には４単量体と小さくてもよい。
公開米国特許出願番号ＵＳ−２０１１−０１５０８８０は、合成オリゴ糖、それらの合成および担体とのそれらのコンジュゲーションを記載する。この参照の具体的な全体の教示は、参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、合成オリゴ糖は担体とコンジュゲートさせて使用されてもよい。
例は、
であるリンカーを介して担体とコンジュゲートしているオリゴ糖を含む、オリゴ糖−担体コンジュゲートであり、式中、ｎは＞１であり、ｍは１から１０までから選択される数であり、ｐは１から２０までから選択される数であり、ＲはＨまたはアルキル基であり、リンカーはオリゴ糖にＯ連結し、担体にＮ連結する。「ｎ」は２〜１０、２〜５、または一部の実施形態では２、３または４であってもよい。
別の例は、Ｏ連結リンカーを有するオリゴ糖であり、リンカーは、
を含み、オリゴ糖はポリグルコサミンである。ポリグルコサミンは、長さが２〜２０単量体、例えば長さが５〜１１単量体である、β−１−６連結されたグルコサミンであってもよい。
ＰＮＡＧおよびｄＰＮＡＧのサイズは変動することができ、特定の適用によって決定されてもよい。一般的に、ＰＮＡＧおよびｄＰＮＡＧの分子量は、約９００ダルトン（Ｄａ）から７５０キロダルトン（ｋＤａ）の範囲内であってよい。一部の態様では、ＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧは、２ｋＤａ未満の分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧの分子量は、少なくとも約２２００ダルトン、または少なくとも約２５００ダルトン、または少なくとも約３０００ダルトンであってもよい。一部の実施形態では、ＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧは、長さが少なくとも９、少なくとも１０単量体単位、または長さが少なくとも１２単量体単位、または長さが少なくとも１５単量体単位であってもよい。他の態様では、ＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧは、少なくとも１００ｋＤａ、任意選択で１００〜５００ｋＤａの範囲内の分子量を有する。
本明細書においてより詳細に論じられるように、ＰＮＡＧおよびｄＰＮＡＧのより低分子量のバージョンを含むＰＮＡＧおよびｄＰＮＡＧは、担体タンパク質などの担体とコンジュゲートさせることができる。担体とコンジュゲートさせる場合、ＰＮＡＧおよびｄＰＮＡＧは２〜３単量体単位と小さくてもよいが、好ましくは長さが少なくとも４〜６単量体単位である。８００Ｄａから１，０００ｋＤａの間の多糖が、一般的であろう。本明細書に記載されるように、このサイズのＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧの形は、新規に合成することができる。担体化合物なしで使用するとき、ＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧは約１００ｋＤａ以上であってもよい。
ＰＮＡＧの調製
本発明は、本明細書に記載される非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ発現病原体から単離または誘導されたｄＰＮＡＧおよびＰＮＡＧを含む、ｄＰＮＡＧおよびＰＮＡＧの天然に存在する形および合成形の使用を企図する。本明細書で用いるように、天然に存在するＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧは、天然に存在する供給源中に存在し、任意選択でそれから単離または誘導することができるものである。
ＰＮＡＧおよびｄＰＮＡＧ抗原は、単離された形で提供および／または使用することができる。単離された多糖、例えば単離されたｄＰＮＡＧは、それが通例存在するかそれが合成された環境から取り出され、したがって少なくとも一部分離されたものである。ある場合には、単離された多糖は、構造的または機能的に特徴付けられるように、他の化合物から十分に分離される。例えば、単離された多糖は、その化学的組成を決定するために「配列決定をする」ことができる。
ｄＰＮＡＧは生来のＰＮＡＧから単離することができるか、または本明細書に記載される脱アセチル化方法を用いて、より高度にアセチル化された天然に存在するＰＮＡＧから誘導することができる。ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成されるｄＰＮＡＧは、その合成反応混合物から単離し、それによってそれを反応基質、酵素、補因子、触媒または偽の反応生成物から分離することもできる。
ＰＮＡＧおよびｄＰＮＡＧは、ｉｃａ遺伝子座を載せている任意の微生物（細菌を含む）株から調製することができる。ｉｃａを載せているこれらの株には、それらに限定されないが例えばＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｓおよびＳ．ａｕｒｅｕｓなどの、ｉｃａ遺伝子座を天然に発現するものが含まれる。具体的な株には、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ＲＰ６２Ａ（ＡＴＣＣ番号３５９８４）、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ＲＰ１２（ＡＴＣＣ番号３５９８３）、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ Ｍ１８７、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＲＮ４２２０（ｐＣＮ２７）およびＳ．ａｕｒｅｕｓ ＭＮ８ ｍｕｃｏｉｄが含まれる。ｉｃａを載せている株には、ｉｃａ遺伝子座の遺伝子で形質転換されたものも含まれる（例えば、Ｓ．ｃａｒｎｏｓｕｓ ＴＭ３００（ｐＣＮ２７））。
生来のＰＮＡＧは、細胞および細胞遊離培養上清を含む微生物培養物から生来の粗製ＰＮＡＧ調製物を抽出し、粗製ＰＮＡＧ調製物からの高分子量の生来のＰＮＡＧに富む物質の単離をもたらし、高分子量ＰＮＡＧに富む物質を含有する不純なＰＮＡＧを、溶媒、例えばメタノール、エタノール、アセトン、または水溶液からの多糖の沈殿を引き起こすことが可能であることが当業技術者に公知である任意の他の有機溶媒で沈殿させることによって先ず得ることを含む、様々な方法によって調製することができる。生来の粗製ＰＮＡＧ調製物を抽出し、不純な生来のＰＮＡＧの調製物を単離して沈殿させるステップは、当技術分野で公知であり、公開米国特許出願番号ＵＳ−２００５−０１１８１９８−Ａ１に記載されている方法を用いて実施することができる。
この不純なＰＮＡＧ物質を次に精製し、脱アセチル化して、ｄＰＮＡＧを生成することができる。脱アセチル化は、化学的にまたは酵素によって実行することができる。化学的脱アセチル化は、一部の場合には、不純なＰＮＡＧ調製物を塩基または酸とともにインキュベートして半純粋なＰＮＡＧ調製物を生成し、調製物を中和し、中和された調製物をさらに処理してｄＰＮＡＧを生成することを含むことができる。
酵素による脱アセチル化は、不純なＰＮＡＧを、細胞壁破壊剤、例えばリゾチーム、リソスタフィンおよびプロテイナーゼＫ、ならびにＤＮＡおよびＲＮＡを消化するヌクレアーゼ酵素、例えばＤＮアーゼおよびＲＮアーゼを含む、生体物質を消化する細菌酵素などの酵素とともにインキュベートすることを一般的に含む。これに続いて、溶液からＰＮＡＧを沈殿させる溶媒の添加、沈殿物の収集、およびＮａＯＨなどの塩基、またはＨＣｌなどの酸へのＰＮＡＧの再溶解、その後中和が続く。インキュベーションステップが酸で実施されるならば塩基を用いて、インキュベーションステップが塩基で実施されるならば酸で、中和を達成することができる。中性物質からの不溶性画分は、例えば、フッ化水素酸でインキュベーションして純粋な生来のＰＮＡＧ抗原を生成することによって、またはｐＨ＜４．０の緩衝剤に再溶解し、続いて分子篩および／もしくはイオン交換クロマトグラフィーによって次に処理される。
別の単離方法は、培養物を強い塩基または酸とともにインキュベートすることによって、粗製ＰＮＡＧ懸濁液を微生物（細菌を含む）培養物から抽出するステップを含む。好ましくは、培養物は少なくとも２時間、より好ましくは少なくとも５、１０、１５、１８または２４時間、強い塩基または酸の中で撹拌される。強い塩基または酸は、任意のタイプの強い塩基または酸であってもよいが、好ましくは少なくとも１ＭのＮａＯＨまたはＨＣｌの強度を有する。一部の実施形態では、強い塩基または酸は、５Ｍ ＮａＯＨまたは５Ｍ ＨＣｌである。次に、酸または塩基溶液を遠心分離にかけて、細胞体を収集する。一部の実施形態では、抽出手順を数回繰り返す。生じた酸または塩基溶液をおよそｐＨ７に中和し、次に透析して不溶性の不純なＰＮＡＧを生成する。
ｄＰＮＡＧは、新規に合成することもできる。ｄＰＮＡＧの新規合成のための方法は、公開米国特許出願番号ＵＳ−２００５−０１１８１９８−Ａ１およびＵＳ−２０１１−０１５０８８０−Ａ１に記載されている。
一部の方法は、出発物質、例えば限定されずに、ポリグルコース（すなわち、デキストラン）、ポリグルコサミン、例えばキチンまたはキトサン、ポリグルコサミノウロン酸からｄＰＮＡＧを誘導することができ、本発明のｄＰＮＡＧ抗原を生成するために、ポリガラクトサミノウロン酸を使用することもできる。
ＰＮＡＧおよびｄＰＮＡＧ調製物は、様々な純度のものであってもよい。本明細書で用いるように、純粋なＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧ調製物は、汚染物質が９２％を超えて含まれないＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧ調製物である。これらの汚染物質には、ガラクトース、リン酸塩、テイコ酸等が含まれる。一部の実施形態では、ＰＮＡＧおよびｄＰＮＡＧ組成物は、汚染物質が少なくとも９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％含まれないか、汚染物質が１００％含まれない。一部の実施形態では、ｄＰＮＡＧ組成物は、高度にアセチル化されたＰＮＡＧを含まない。
ＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧ組成物の純度は、当技術分野で公知である任意の手段によって評価することができる。例えば、純度は、化学分析アッセイならびにガスクロマトグラフィー、および物質の構造態様を検証する核磁気共鳴によって評価することができる。
担体
新規に合成されるか、天然に存在する供給源に由来するかにかかわらず、ＰＮＡＧおよびｄＰＮＡＧは、コンジュゲート形または非コンジュゲート形で使用することができる。コンジュゲート形では、ＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧは、直接に、またはリンカーを介して担体（または担体化合物、これらの用語は本明細書において互換的に使用される）にコンジュゲートさせることができる。コンジュゲーションは、その末端の片方か両方を含む、多糖の任意の位置に存在してもよい。
本明細書で用いられる「担体」は、直接に、またはリンカーの使用により多糖にコンジュゲートさせることができる化合物である。担体は、免疫学的に活性（すなわち、免疫原性）であるか、不活性であってもよい。ｉｎ ｖｉｖｏで使用するとき、担体は対象に投与しても安全であることを理解すべきである。
担体には、限定されずに、タンパク質、またはペプチド、多糖、核酸または他の重合体、脂質および小分子が含まれる。担体タンパク質には、例えば、血漿タンパク質、例えば血清アルブミン、免疫グロブリン、アポリポタンパク質およびトランスフェリン；細菌のポリペプチド、例えばＴＲＰＬＥ、β−ガラクトシダーゼ、ポリペプチド、例えばヘルペスｇＤタンパク質、アレルゲン、ジフテリアおよび破傷風トキソイド、サルモネラ菌フラゲリン、ヘモフィルスピリン、ヘモフィルスの１５ｋＤａ、２８〜３０ｋＤａおよび４０ｋＤａ膜タンパク質、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、熱不安定性腸管毒素ｌｔｂ、コレラ毒素、およびウイルスタンパク質、例えばロタウイルスＶＰおよびＲＳウイルスｆおよびｇタンパク質が含まれる。
免疫化のために特に有益であろう担体タンパク質には、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシのチログロブリンまたはダイズのトリプシンインヒビターが含まれる。免疫化される対象で免疫原性である任意の他の化合物は、担体として使用することができる。
多糖をタンパク質にコンジュゲートさせる多くの方法が、当技術分野で公知である。一般に、多糖は活性化されるべきであるか、さもなければコンジュゲーションに適合するようにするべきである（すなわち、少なくとも１つの部分を、タンパク質または他の分子に共有結合することを可能にしなければならない）。多くのそのような方法が当技術分野で公知である。公開米国特許出願番号ＵＳ−２００５−０１１８１９８−Ａ１およびＵＳ−２０１１−０１５０８８０−Ａ１、および米国特許第４３５６１７０号、第４６６３１６０号、第４６１９８２８号、第４８０８７００号、第４７１１７７９号を参照することができる。
担体は、リンカーまたはスペーサーを介してＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧにコンジュゲートさせることができる。多糖は、当技術分野公知である任意の手段によって、例えばスペーサーまたはリンカーと共有結合を生成する多糖の遊離の還元性末端を使用して、リンカーまたはスペーサーに結合することができる。共有結合は、ＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧの遊離の還元性末端を、その後にアシル化によってスペーサーに共有結合することができる遊離の１−アミノグリコシドに変換することによって生成することができる。（Lundquistら、J. Carbohydrate Chem.、１０巻：３７７頁（１９９１年））。あるいは、スペーサーの上の活性基としてＮ−ヒドロキシスクシンイミド活性エステルを使用して、ＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧをスペーサーに共有結合することができる。（Kochetkow、Carbohydrate Research、１４６巻：Ｃ１頁（１９８６年））。ヨウ素および水酸化カリウムを使用して、ＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧの遊離の還元性末端をラクトンに変換することもできる。（Isebellら、Methods of Carbohydrate Chemistry、Academic Press、New York（１９６２年））。スペーサーまたはリンカーの一級アミノ基によって、ラクトンをスペーサーに共有結合することができる。還元アミノ化を使用して、ＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧの遊離の還元性末端をリンカーまたはスペーサーに共有結合することもできる。
抗体
本発明は、ＰＮＡＧおよび／またはｄＰＮＡＧに結合する抗体を包含する。抗体は、モノクローナル抗体であるか、またはポリクローナル抗体であってもよい。ｄＰＮＡＧに結合する抗体は、ＰＮＡＧの高度にアセチル化された形に結合することもできる。抗体は、任意選択で担体にコンジュゲートし、および／またはアジュバントと併用される、ｄＰＮＡＧまたはＰＮＡＧ、または３つを超える単糖単位のグルコサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンで構成される合成オリゴ糖を使用して作製することができる。抗体は、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体またはｉｃａを載せているもしくはｐｇａを載せている病原体に由来するＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧを用いて生成することができる。
ポリクローナル抗体は、抗原およびアジュバントの複数回の皮下または腹腔内注射によって動物で一般に作製される。ＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧまたはコンジュゲート型合成オリゴ糖に対するポリクローナル抗体は、コンジュゲート形もしくは非コンジュゲート形のＰＮＡＧもしくはｄＰＮＡＧ、またはコンジュゲート形の合成オリゴ糖を単独で、またはアジュバントと一緒に注射することによって生成することができる。そのようなポリクローナルの作製方法は、公開米国特許出願番号ＵＳ−２００５−０１１８１９８−Ａ１に記載される。
簡潔には、コンジュゲート形もしくは非コンジュゲート形のｄＰＮＡＧもしくはｄＰＮＡＧ、またはコンジュゲート形のオリゴ糖を、フロイント不完全アジュバントなどのアジュバントと合わせ（例えば、フロイントの１〜３容量にウサギまたはマウスの１００μｇのコンジュゲート）、複数部位に皮内注射する。およそ１カ月後に、複数部位での皮下注射によってアジュバント中の抗原または抗原コンジュゲートの元の量の１／５〜１／１０で動物を追加免疫する。１〜２週後に、動物を放血させ、血清を抗体の存在について検定する。抗体価プラトーまで、動物を繰り返し追加免疫することができる。動物は、単独のＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧまたは合成オリゴ糖コンジュゲート、ＰＮＡＧもしくはｄＰＮＡＧコンジュゲートまたは合成オリゴ糖コンジュゲート、または異なる担体化合物にコンジュゲートしているＰＮＡＧもしくはｄＰＮＡＧ、または合成オリゴ糖コンジュゲートをアジュバントの有り無しで追加免疫することができる。一部の実施形態では、追加免疫はｄＰＮＡＧよりもむしろＰＮＡＧを含むことができ、またはそれらはｄＰＮＡＧとＰＮＡＧの混合物を含有することができる。
ポリクローナル抗体の供給源を供給することに加えて、免疫化された動物はＰＮＡＧ特異的およびｄＰＮＡＧ特異的モノクローナル抗体を生成するために使用することができる。本明細書で用いるように、用語「モノクローナル抗体」は、抗原の同じエピトープに結合する免疫グロブリンの均一な（すなわち、単一クローンの）集団を指す。モノクローナル抗体は同じＩｇ遺伝子の再配列を有し、したがって同一の結合特異性を示す。抗体を生成するためにｄＰＮＡＧまたは合成オリゴ糖コンジュゲートが使用される場合には、エピトープは高度にアセチル化されたＰＮＡＧならびにｄＰＮＡＧに存在することができ、したがって、ｄＰＮＡＧに対して作製された抗体はＰＮＡＧに結合することもできる。
モノクローナル抗体の調製方法は、当技術分野で公知である。モノクローナル抗体は、様々な方法によって調製することができる。そのような一方法では、免疫化動物から単離された脾細胞は、骨髄腫細胞との融合またはエプスタインバーウイルスの形質転換によって不死化され、所望の抗体を発現するクローンがスクリーニングされ、同定される。他の方法は、再配置されたＩｇ遺伝子配列の単離および不死化された細胞系へのクローニングを含む。そのような方法は、公開米国特許出願番号ＵＳ−２００５−０１１８１９８−Ａ１およびＵＳ−２０１１−０１５０８８０−Ａ１により詳細に記載され、そのような教示は参照により本明細書に組み込まれる。
ＰＮＡＧに特異的な抗体は、限定されずに、マウス、ヒト、またはキメラ抗体、例えばヒト化抗体であってもよいが、それに限定されない。
ヒトモノクローナル抗体は、米国特許第５５６７６１０号、米国特許第５５６５３５４号、米国特許第５５７１８９３号、Kozber、J. Immunol.１３３巻：３００１頁（１９８４年）、Brodeurら、Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications、５１〜６３頁（Marcel Dekker, Inc、new York、１９８７年）およびBoernerら、J. Immunol.１４７巻：８６〜９５頁（１９９１年）に開示されるものを含む、当技術分野で公知の方法のいずれかで作製することができる。ヒト抗体は、対象の抗原（例えば、ｄＰＮＡＧまたはＰＮＡＧ）に対して抗体を生成する、ヒトの血液または他の組織からの抗体産生性リンパ球を回収することによって得ることができる。これらのリンパ球は、適当な培養条件下において研究所で自己増殖する細胞を生成するように処理することができる。細胞培養物は、対象の抗原に対する抗体の生成についてスクリーニングし、次にクローニングすることができる。ｄＰＮＡＧまたはＰＮＡＧに対するヒトモノクローナル抗体を生成するために、クローン培養を使用することができ、または異なるタイプの抗体生成のために、抗体の重鎖および軽鎖の可変部分をコードする遺伝子エレメントを核酸ベクターにクローニングして挿入することができる。ヒトモノクローナル抗体を調製する従来の方法に加えて、そのような抗体は、ヒト抗体を生成することが可能であるトランスジェニック動物を免疫化することによって調製することもできる（例えば、Jakobovitsら、PNAS USA、９０巻：２５５１頁（１９９３年）；Jakobovitsら、Nature、３６２巻：２５５〜２５８頁（１９９３年）；Bruggermannら、Year in Immunol.、７巻：３３頁（１９９３年）；およびLonbergに発行された米国特許第５５６９８２５号。）
本明細書で用いるように、「ヒト化モノクローナル抗体」は、少なくともヒト定常領域およびヒト以外の種からの抗原結合領域、例えば１つ、２つまたは３つのＣＤＲを有する、モノクローナル抗体またはその機能的活性断片である。ヒト化抗体は、それらが対象の抗原を特異的に認識するが、抗体自身に対してヒトで免疫応答を引き起こさない点で、特定の臨床有用性を有する。例として、ヒト化抗体を調製するために、マウスＣＤＲをヒト抗体のフレームワーク領域に移植することができる。例えば、L. Riechmannら、Nature３３２巻、３２３頁（１９８８年）；M. S. Neubergerら、Nature３１４巻、２６８頁（１９８５年）およびＥＰＡ０２３９４００を参照。あるいは、元の抗体のエピトープ特異性を保持しながら、ヒト抗体の類似した領域でヒト以外の抗体の非ＣＤＲ領域を置き換えることによって、ヒト化モノクローナル抗体を構築することができる。例えば、ヒト以外のＣＤＲ、および任意選択でフレームワーク領域の一部を、ヒトＦＲおよび／またはＦｃ／ｐＦｃ’領域に共有結合して、機能性抗体を生成することができる。Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ（Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、Ａｂｇｅｎｉｘ、およびＭｅｄａｒｅｘなどの、特異的マウス抗体領域からヒト化抗体を合成する商業実体が米国にある。欧州特許出願第０２３９４００号を参照することもできる。
抗原結合性抗体断片も、本発明に包含される。当技術分野で公知であるように、抗体分子の小さな部分であるパラトープだけが、そのエピトープへの抗体の結合に関与する（一般に、Clark, W.R.（１９８６年）The Experimental Foundations of Modern Immunology Wiley & Sons, Inc.、New York；Roitt, I.（１９９１年）Essential Immunology、７版、Blackwell Scientific Publications、Oxfordを参照）。抗体のｐＦｃ’およびＦｃ領域は、例えば、補体カスケードのエフェクターであるが、抗原結合に関与しない。ｐＦｃ’領域が酵素によって開裂された抗体、またはＦ（ａｂ’）２断片と称される、ｐＦｃ’領域なしで生成された抗体は、無傷の抗体の抗原結合部位の両方とも保持する。単離されたＦ（ａｂ’）２断片は、その２つの抗原結合部位のために二価モノクローナル断片と呼ばれる。同様に、Ｆｃ領域が酵素によって開裂された抗体、またはＦａｂ断片と称される、Ｆｃ領域なしで生成された抗体は、無傷の抗体分子の抗原結合部位の１つを保持する。さらに進めて、Ｆａｂ断片は、共有結合した抗体軽鎖およびＦｄ（重鎖可変領域）で表される抗体重鎖の部分からなる。Ｆｄ断片は抗体特異性の主要な決定因子であり（単一のＦｄ断片は、抗体特異性を変化させることなく最高１０個の異なる軽鎖と会合することができる）、Ｆｄ断片は単離状態でエピトープ結合能力を保持する。
用語Ｆａｂ、Ｆｃ、ｐＦｃ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖは、いずれも標準的な免疫学的意味で用いられる［Klein、Immunology（John Wiley、New York、NY、１９８２年）；Clark, W.R.（１９８６年）The Experimental Foundations of Modern Immunology（Wiley & Sons, Inc.、New York）；Roitt, I.（１９９１年）Essential Immunology、７版、（Blackwell Scientific Publications、Oxford）］。周知の機能的に活性な抗体断片には、限定されずに抗体のＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、ＦｖおよびＦｄ断片が含まれる。無傷の抗体のＦｃ断片を欠くこれらの断片は、循環からより速やかに消失し、無傷の抗体より非特異的でない組織結合を有することができる（Wahlら、J. Nucl. Med.２４巻：３１６〜３２５頁（１９８３年））。例えば、Ladnerらへの米国特許第４，９４６，７７８号に記載される方法に従って、単鎖抗体を構築することができる。そのような単鎖抗体は、フレキシブルリンカー部分によって連結される軽鎖および重鎖の可変領域を含む。単離された可変重鎖単一ドメインを含む単一ドメイン抗体（「Ｆｄ」）を得る方法も報告されている（例えば、単離された形でそれに結合するためにその標的エピトープへの十分な親和性を有する、抗体重鎖可変領域（ＶＨ単一ドメイン抗体）を同定するためのスクリーニング方法を開示する、Wardら、Nature３４１巻：６４４〜６４６頁（１９８９年）を参照）。公知の抗体重鎖および軽鎖可変領域配列に基づいて組換えＦｖ断片を作製する方法は、当技術分野で公知であり、例えば、Mooreら、米国特許第４，４６２，３３４号に記載されている。抗体断片の使用および生成を記載する他の参考文献には、例えば、Ｆａｂ断片（Tijssen、Practice and Theory of Enzyme Immunoassays（Elsevieer、Amsterdam、１９８５年））、Ｆｖ断片（Hochmanら、Biochemistry１２巻：１１３０頁（１９７３年）；Sharonら、Biochemistry１５巻：１５９１頁（１９７６年）；Ehrilchら、米国特許第４，３５５，０２３号）および抗体分子の部分（Audilore-Hargreaves、米国特許第４，４７０，９２５号）が含まれる。したがって、当業者は、ｄＰＮＡＧエピトープへの抗体特異性を破壊することなく、無傷の抗体の様々な部分から抗体断片を構築することができる。抗ｄＰＮＡＧ抗体によって認識されるエピトープが、高度にアセチル化されたＰＮＡＧの上に存在することもできることを理解すべきである。
用途
本発明の多糖、合成オリゴ糖および抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｓｉｔｕおよびｉｎ ｖｉｖｏでの適用を含む様々な異なる適用で有益である。非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を予防または処置するためにｉｎ ｖｉｖｏで対象を免疫化するために、これらの多糖および合成オリゴ糖を使用することができる。多糖および合成オリゴ糖は、ＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧに特異的な抗体を開発するために使用することもでき、それらは、次に、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を予防または処置するためにｉｎ ｖｉｖｏで対象を免疫化するために使用することができる。
抗体などの結合パートナーについてスクリーニングするために、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体から誘導されるＰＮＡＧおよび／またはｄＰＮＡＧを使用することができる。対象で感染症を検出する（すなわち、診断する）ことを含む、ＰＮＡＧ発現病原体を検出するために、抗体を使用することもできる。したがって、本発明は、ＰＮＡＧおよびｄＰＮＡＧに結合する抗体を生成する方法も提供する。
非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体から誘導されるＰＮＡＧおよび／またはｄＰＮＡＧは、ｉｃａ遺伝子座を載せているものおよび載せていないものを含む、任意のＰＮＡＧ発現病原体による感染症を有するか、またはその発症のリスクがある対象で免疫応答を誘導するために使用することができる。「非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体から誘導されるＰＮＡＧおよび／またはｄＰＮＡＧ」は、本明細書に記載される方法を使用して非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体から生成される多糖を意味することを理解すべきである。免疫応答の誘導は、感染症を予防するか、部分的もしくは完全に処置することができる。感染症の部分的な処置には、症状の重症度もしくは頻度の低減および／または対象での病原体付加の部分的低減が含まれてもよい。部分的な処置は、１つまたは複数の他の治療薬剤が対象に投与されているか投与される場合に有益であろう。免疫応答の誘導は、対象に、ＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧ（またはＰＮＡＧを発現する病原体）に対する抗体応答などの免疫応答を誘導するのに有効な量のＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧまたはその組成物のいずれかを投与することによって達成される。
本明細書で用いるように、対象は温血の哺乳動物であり、例えばヒト、霊長類、ウマ、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌおよびネコが含まれる。一部の実施形態では、対象はげっ歯動物以外の対象である。げっ歯動物以外の対象は、上で定義した任意の対象であるが、特にマウス、ラットおよびウサギなどのげっ歯動物が除かれる。一部の実施形態では、好ましい対象はヒトである。
対象は、そのような病原体がｉｃａ遺伝子座を載せているかどうかにかかわらず、ＰＮＡＧ発現病原体による感染症を有するか、またはその発症のリスクがある対象であってもよい。ＰＮＡＧ発現病原体による感染症を発症するリスクがある対象は、そのような病原体に曝露されるリスクがある対象であってもよい。本明細書に記載されるように、いくつかの非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体は、１つまたは複数の抗生物質クラスに耐性である。したがって、そのような病原体は抗生物質の使用によって前の対象で根絶されていないので、そのような病原体への曝露が起こる可能性がある。感染症を発症するリスクがある集団には、例えば、新生児対象、免疫不全の対象（化学療法下の対象など）、免疫抑制薬を使用中の対象（移植レシピエントを含む）、透析中の対象、ハイリスクな手術を受ける対象、および静脈内ライン（例えば、中心ライン）または人工器官（例えば、腰または膝の置換人工器官）などの留置医療器具がある対象が含まれる。
タンパク質担体にコンジュゲートしているＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧまたは合成オリゴ糖は、免疫応答を誘導するのに有効な量で対象に投与することができる。そのような有効量は、例えば、ＰＮＡＧおよび／またはｄＰＮＡＧに特異的な抗体の生成を誘導すること、記憶細胞、およびおそらく細胞傷害性リンパ球反応の生成を誘導することなどによって、それ自身の免疫防御の生成において対象を支援するのに十分な量であってもよい。免疫応答は、ＰＮＡＧ発現病原体による感染症が、そのような病原体に曝露される対象で起こることを次に予防することができる。ＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧまたは合成オリゴ糖のコンジュゲートワクチンの量が能動免疫を誘導するのに十分かどうか、当業者は当技術分野で公知の方法によって評価することができる。例えば、哺乳動物でＰＮＡＧ特異的抗体を生成するＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧまたは合成オリゴ糖コンジュゲートワクチンの能力は、ＰＮＡＧ抗原を使用してマウスまたは他の対象で生成された抗体をスクリーニングすることによって評価することができる。免疫応答を誘導するためのＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧの量は、約１から１００μｇの範囲内であってもよいが、それらはあまり限定的でない。
ＰＮＡＧおよび／またはｄＰＮＡＧに特異的な抗体または抗体断片は、例えば、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体を含むＰＮＡＧ発現病原体への曝露のリスクがある対象で全身感染症の発症を予防することによって、対象で受動免疫化を誘導するのに有益である。感染症への受動免疫を誘導する方法は、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体を含むＰＮＡＧまたはＰＮＡＧ発現病原体に対する免疫応答を誘導するのに有効な量のＰＮＡＧおよび／またはｄＰＮＡＧまたは合成オリゴ糖に特異的な抗体を対象に投与することを含む。
抗体または抗体断片は、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を発症するリスクがある、任意の対象に投与することができ、一部の実施形態では、ＰＮＡＧおよび／またはｄＰＮＡＧへの能動免疫を誘導することができない対象のためにそれらは特に適しているであろう。ＰＮＡＧまたはｄＰＮＡＧまたは合成オリゴ糖コンジュゲートワクチンは、特定の対象で感染症を予防するか除去することにおいて完全に有効であるとは限らず、したがって、そのような対象にはＰＮＡＧおよび／またはｄＰＮＡＧに特異的な抗体による処置が有益であろう。免疫応答を誘導することができない対象には、免疫不全の対象（例えば、化学療法下の対象、ＡＩＤＳを有する対象など）、または免疫系がまだ発達していない対象（例えば早産新生子）が含まれる。
抗体または抗体断片は、ＰＮＡＧまたは非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体などのＰＮＡＧ発現病原体への免疫応答を誘導するのに有効な量で対象に投与される。本明細書で用いるように、免疫応答を誘導するのに有効な抗体または抗体断片の量は、（ｉ）病原体に曝露される対象で感染症が起こることを予防すること；（ｉｉ）感染症の発症を阻害すること、すなわちその発症を阻止するか遅らせること；および／または（ｉｉｉ）感染症を軽減すること、すなわち感染した対象で微生物を根絶することにおいて十分である抗体または抗体断片の量である。微生物には、細菌、ウイルス、真菌類、寄生虫等が含まれる。
当業者に公知である手順を使用して、抗体のオプソニン化の程度を予測するｉｎ ｖｉｔｒｏオプソニン化アッセイにおいて、抗体または抗体断片の量が有効量であるかどうかについて決定することができる。細菌などの微生物をオプソニン化する抗体は、微生物試料に加えられると微生物の食作用を引き起こすものである。オプソニン化アッセイは、比色アッセイ、化学発光アッセイ、蛍光もしくは放射標識取り込みアッセイ、細胞媒介細胞毒性アッセイ、または物質のオプソニン化能力を測定する他のアッセイであってもよい。
医薬組成物および製剤
一般に、ｉｎ ｖｉｖｏ投与されるとき、本発明の多糖、抗体および抗体断片は、薬学的に許容される組成物で適用される。そのような組成物は、薬学的に許容される担体、塩、緩衝剤、保存剤、アジュバント、および任意選択で他の予防的または治療的な成分を含むことができる。薬学的に許容される担体は、ヒトまたは他の動物への投与に適する１つまたは複数の適合する固体か液体の充填剤、希釈剤または封入物質を意味する。薬学的に許容される担体の文脈で、用語「担体」は、投与を含む使用を促進するために多糖、抗体または抗体断片と一緒に合わされる、天然であるか合成された有機または無機の成分を表す。医薬組成物の構成成分は、所望の医薬有効性を実質的に損なうであろう相互作用がないような方法で、多糖、抗体または抗体断片と、および互いに混ぜ合わせることも可能であるべきである。
薬学的に許容される塩には、以下の酸から調製されるものが含まれるが、これらに限定されない：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸およびベンゼンスルホン酸。さらに、薬学的に許容される塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類塩、例えばカルボン酸基のナトリウム、カリウムまたはカルシウム塩として調製することができる。
適する緩衝剤には、酢酸および塩（１〜２Ｗ／Ｖ％）；クエン酸および塩（１〜３Ｗ／Ｖ％）；ホウ酸および塩（０．５〜２．５Ｗ／Ｖ％）；ならびにリン酸および塩（０．８〜２Ｗ／Ｖ％）が含まれる。適する保存剤には、塩化ベンザルコニウム（０．００３〜０．０３Ｗ／Ｖ％）；クロロブタノール（０．３〜０．９Ｗ／Ｖ％）；パラベン（０．０１〜０．２５Ｗ／Ｖ％）およびチメロサール（０．００４〜０．０２Ｗ／Ｖ％）が含まれる。
非経口投与に適する組成物は、多糖、抗体または抗体断片の無菌の水性調製物を一般的に含み、それはレシピエント対象の血液と等張性であってもよい。採用されてよい許容されるビヒクルおよび溶媒には、水、リンガー液、および等張性の塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌の不揮発性油が、溶媒または懸濁媒として従来採用されている。この目的のために、合成されたモノ−またはジグリセリドを含む、任意の刺激の少ない不揮発性油を採用することができる。さらに、注射剤の調製でオレイン酸などの脂肪酸を使用することができる。皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内などの投与に適する担体製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences、Mack Publishing Company、Easton、PAに見出すことができる。
多糖、オリゴ糖、抗体および抗体断片は、有効な量で投与される。投与様式に従い、１〜１００μｇの範囲内の多糖またはオリゴ糖の用量が有効であろう。投与様式に従い、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇおよび０．１〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲内の抗体または抗体断片の用量が有効であろう。絶対量は、投与が微生物にまだ感染していないハイリスク対象か、または既に感染症を有する対象において実施されるかどうか、並行処置、用量の数、ならびに年齢、身体の状態、サイズおよび体重を含む個々の患者のパラメータを含む様々な因子に依存する。これらは当業者に周知の因子であり、ルーチン以下の実験で対処することができる。最大用量、すなわち、健全な医学判断による最高安全用量が使用されるのが一般に好ましい。
多糖、抗体および／または抗体断片の複数用量が企図される。一般に、免疫化スキームは、高用量の抗原の投与と、数週間の待機期間の後の以降の低用量の抗原の投与を含む。さらなる用量も同様に投与することができる。受動免疫化のための投薬スケジュールは、必要に応じて投与がより頻繁でかなり異なるであろう。微生物感染症に対する強化された免疫応答および／または感染症からの以降の保護をもたらす、任意のレジメンを使用することができる。特定の抗原の複数用量の送達のための所望の時間間隔は、当業者がルーチン以下の実験を用いて決定することができる。ワクチンの用量は、任意選択で用量間に等しい時間間隔をあけて、１から６カ月にわたって投与することができる。抗体および抗体断片のために、投与間隔は一般に１４〜１８０日の範囲内である。
様々な投与経路が利用できる。選択される特定の様式は、例えば、処置される特定の状態、および治療効力に必要とされる投薬量に依存する。本発明の方法は、一般に、医学的に許容される任意の投与様式、すなわち臨床的に許容されない有害作用を引き起こすことなく免疫応答の有効レベルをもたらす任意の様式を用いて実施することができる。好ましい投与様式は、非経口経路である。用語「非経口」には、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内および胸骨内の注射または注入技術が含まれる。他の経路には、限定されずに、経口、経鼻、経皮、舌下および局所が含まれる。
他の送達系には、徐放性、遅延放出または持続放出の送達系が含まれてもよい。そのような系は、本発明の多糖の反復投与を避けることができ、対象および医師への利便性を増加させる。多くの種類の放出送達系が当業者に利用でき、公知である。それらには、重合体をベースにした系、例えばポリ乳酸およびポリグリコール酸、ポリ無水物およびポリカプロラクトン；ステロール、例えばコレステロール、コレステロールエステル、ならびに脂肪酸または中性脂肪、例えばモノ−、ジ−およびトリグリセリドを含む脂質である非重合体の系；ヒドロゲル放出系；サイラスティック系；ペプチドをベースとした系；ワックスコーティング、従来の結合剤および賦形剤を使用した圧縮錠剤、部分的に融合した植込剤等が含まれる。具体的な例には、限定されずに以下のものが含まれる：（ａ）米国特許第４，４５２，７７５号（Kent）；第４，６６７，０１４号（Nestorら）；第４，７４８，０３４号および第５，２３９，６６０号（Leonard）で見出される、多糖がマトリックス内の形で含有されるエロージョン系、ならびに（ｂ）米国特許第３，８３２，２５３号（Higuchiら）および第３，８５４，４８０号（Zaffaroni）で見出される、活性成分が制御された速度で重合体を透過する拡散系。さらに、ポンプ式装置送達系を使用することができ、その一部は植込みに適している。
二次薬剤
ｄＰＮＡＧおよび／またはＰＮＡＧに特異的な抗体は、他の薬剤と一緒に送達することができる。他の薬剤の性質は、ｄＰＮＡＧかＰＮＡＧに特異的な抗体が投与されるかによって決めることができる。
例えば、能動免疫を誘導するために、および／または抗体を生成するために投与されるとき、ｄＰＮＡＧはアジュバントと併用することができる。本明細書で用いるように、用語アジュバントは、抗原特異的免疫応答を強化するために抗原（ｄＰＮＡＧなど）と併用投与される（例えば同時に、同じ製剤で、など）物質を指す。アジュバントには、限定されずに、アルミニウム化合物、例えばゲル、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウム、ならびにフロイントの完全または不完全アジュバント（例えば、ｄＰＮＡＧ抗原が、パラフィン油乳濁液中で安定した水の水相に組み込まれる）が含まれる。パラフィン油は、異なるタイプの油、例えばスクアレンまたは落花生油と置き換えることができる。アジュバント特性を有する他の材料には、ＢＣＧ（弱毒化Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、リン酸カルシウム、レバミゾール、イソプリノシン、ポリアニオン（例えば、ポリＡ：Ｕ）、レンチナン、百日咳毒素、リピドＡ、サポニン、ＱＳ−２１およびペプチド、例えばムラミルジペプチドが含まれる。希土類塩、例えばランタンおよびセリウムをアジュバントとして使用することもできる。アジュバントの量は、対象および使用する特定のｄＰＮＡＧ抗原（例えば、アセテート置換のレベル）に依存し、当業技術者が不相応な実験なしで容易に決定することができる。
薬剤は、抗細菌薬、抗ウイルス薬、抗寄生虫薬、抗真菌薬等の抗微生物薬であってもよい。
薬剤は、抗細菌薬（例えば、抗生物質）、別の細菌抗原、または別の抗細菌性抗体、またはその混合物もしくは組合せであってもよい。細菌感染症の処置における抗生物質の使用は、ルーチンである。能動免疫化を誘導するための抗原および受動免疫化を誘導するための抗体の使用も、ルーチンである。この実施形態では、一般的な投与ビヒクル（例えば、錠剤、植込み、注射可能な溶液など）は、本発明の活性薬剤と抗生物質および／または他の抗原および／または他の抗体の両方を含有することができた。あるいは、抗生物質および／または他の抗原および／または他の抗体は、別々に投与されてもよい。抗生物質は、ｄＰＮＡＧ、または抗ｄＰＮＡＧ抗体にコンジュゲートしていてもよい。
抗細菌性抗生物質薬は周知であり、限定されずに、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、アンピシリン、アモキシシリン、バカンピシリン、シクラシリン、エピシリン、ヘタシリン、ピバンピシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、カルベニシリン、チカルシリン、アブロシリン、メズロシリン、ピペラシリン、アムジノシリン、セファレキシン、セフラジン、セファドキシル、セファクロル、セファゾリン、セフロキシムアキセチル、セファマンドール、セホニシド、セホキシチン、セホタキシム、セフチゾキシム、セフメノキシン、セフトリアキソン、モキサラクタム、セホテタン、セホペラゾン、セフタジズム、イミペネム、クラブラネート、チメンチン、スルバクタム、ネオマイシン、エリスロマイシン、メトロニダゾール、クロラムフェニコール、クリンダマイシン、リンコマイシン、バンコマイシン、トリメトプリム−スルファメトキサゾール、アミノグリコシド、キノロン、テトラサイクリンおよびリファンピンが含まれる。（Goodman and Gilman's、Pharmacological Basics of Therapeutics、８版、１９９３年、McGraw Hill Inc.を参照）
多糖抗原（ＰＮＡＧおよびｄＰＮＡＧ以外の）および多糖特異的抗体（ＰＮＡＧ特異的抗体以外の）は、当技術分野で公知である。例には、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ莢膜Ｖｉ抗原（Szu, S.C.、X. Li、A.L. StoneおよびJ.B. Robbins、Relation between structure and immunologic properties of the Vi capsular polysaccharide、Infection and Immunity。５９巻：４５５５〜４５６１頁（１９９１年））；Ｅ．Ｃｏｌｉ Ｋ５莢膜（Vann, W.、M.A. Schmidt、B. JannおよびK. Jann、The structure of the capsular polysaccharide (K5 antigen) of urinary tract infective Escherichia coli, 010:K5:H4. A polymer similar to desulfo-heparin、European Journal of Biochemistry。１１６巻：３５９〜３６４頁、（１９８１年））；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ５型莢膜（Fournier, J.-M.、K. Hannon、M. Moreau、W.W. KarakawaおよびW.F. Vann、Isolation of type 5 capsular polysaccharide from Staphylococcus aureus、Ann. Inst. Pasteur/Microbiol.（Paris）。１３８巻：５６１〜５６７頁（１９８７年））；Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉｌｏｒｉエキソポリサッカライド（expolysaccharide）ＩＩ（Glazebrook, J.およびG.C. Walker、a novel expolysaccharide can function in place of the calcofluor-binding exopolysaccharide in nodulation of alfalfa by Rhizobium meliloti、Cell。６５巻：６６１〜６７２頁（１９８９年））；Ｂ群ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓＩＩＩ型（Wessels, M.R.、V. Pozsgay、D.L. KasperおよびH. J. Jennings、Structure and immunochemistry of an oligosaccharide repeating unit of the capsular polysaccharide of type III Group B Streptococcus、Journal of Biological Chemistry。２６２巻：８２６２〜８２６７頁（１９８７年））；Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ Ｆｉｓｈｅｒ ７ Ｏ特異的側鎖（Knirel, Y.A.、N.A. Paramonov、E.V. Vinogradov、A.S. Shashkow、B.A. N.K. Kochetkov、E.S. StanislavskyおよびE.V. Kholodkova、Somatic antigens of Pseudomonas aeruginosa The structure of O-specific polysaccharide chains of lipopolysaccharides of P. aeruginosa O3 (Lanyi), 025 (Wokatsch) and Fisher immunotypes 3 and 7、European Journal of Biochemistry。１６７巻：５４９頁（１９８７年））；Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ Ｏ特異的側鎖（Kenne, L.、B. LindbergおよびK. Petersson、Structural studies of the O-specific side-chains of the Shigella sonnei phase I lipopolysaccharide、Carbohydrate Research。７８巻：１１９〜１２６頁（１９８０年））；Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｉ型莢膜（Lindberg, B.、Lindqvist, B.、Lonngren, J.、Powell, D.A.、Structural studies of the capsular polysaccharide from S. pneumoniae type 1、Carbohydrate Research。７８巻：１１１〜１１７頁（１９８０年））；およびＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ群の抗原（Jennings, H.J.、C. LugowskiおよびN. M. Young、Structure of the complex polysaccharide C-substance from S. pneumoniae type 1、Biochemistry。１９巻：４７１２〜４７１９頁（１９８０年））が含まれる。他の非ポリペプチド抗原および非多糖特異的抗体は当業者に公知であり、本発明の組成物と併用することができる。
検出および診断アッセイ
ｄＰＮＡＧおよび合成オリゴ糖抗原およびそれらへの抗体は、対象または試料の免疫状態を決定する診断アッセイでも有益であるか、イムノアッセイで試薬として使用することもできる。例えば、試料中の、表面にＰＮＡＧを有する細菌などの微生物の存在を検出するために、抗体を使用することができる。微生物が試料中に存在するならば、感染した対象を処置するために抗体を使用することができる。ＰＮＡＧ抗原の存在について微生物をスクリーニングするために、ならびに複合混合物からｄＰＮＡＧまたはＰＮＡＧ抗原およびｄＰＮＡＧまたはＰＮＡＧ抗原を含有する微生物を単離するために、抗体を使用することもできる。
上記のアッセイおよび当技術分野で公知である任意の他のアッセイは、ｄＰＮＡＧまたは抗体を標識し、および／または不溶性マトリックスの上にｄＰＮＡＧまたは抗体を固定化することによって達成することができる。ｄＰＮＡＧおよび／またはその抗体を使用するための分析および診断方法は、以下の試薬の少なくとも１つを使用する：標識された分析物類似体、固定化された分析物類似体、標識された結合パートナー、固定化された結合パートナーおよび立体コンジュゲート。使用する標識は、分析物とその結合パートナーの結合に干渉しない任意の検出可能な官能性であってもよい。イムノアッセイでのそのような使用のために、多数の標識が公知である。例えば、蛍光色素、化学発光および放射性標識などの直接に検出することができる化合物、ならびに酵素などの反応または誘導体化を通して検出することができる化合物。この種の標識の例には、３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈおよび１３１Ｉ放射性同位体、蛍光団、例えば希土類キレートまたはフルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えばホタルルシフェラーゼおよび細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラビンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリ性ホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカライドオキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼおよびグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼが含まれる。ＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼまたはミクロペルオキシダーゼなどの、色素前駆体を酸化するために過酸化水素を使用する酵素に結合した、ウリカーゼおよびキサンチンオキシダーゼなどの複素環オキシダーゼ、ビオチンアビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識および安定した遊離基。
標識は、当業者に公知である方法によって、ｄＰＮＡＧまたは抗ｄＰＮＡＧ抗体にコンジュゲートさせることができる。例えば、米国特許第３，９４０，４７５号および第３，６４５，０９０号は、蛍光団および酵素の抗体へのコンジュゲーションを示す。報告によると抗原および抗体で一般的に使用され、本発明により使用することができる他のアッセイには、競合アッセイおよびサンドイッチアッセイが含まれる。
以下の実施例は例示のために含まれ、本発明の範囲を限定するものではない。
（実施例１）様々な微生物種による細菌性表面多糖ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＰＮＡＧ）の発現。
抗体の直接結合：ＰＮＡＧ生成を促進するために、大気酸素条件（２１％Ｏ２）、５％ＣＯ２または嫌気性条件下で、２０℃から３７℃の範囲内の温度で生物体を様々な培地で２４〜７２時間成長させる。プレートからの細胞はＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）に直接に懸濁し、ブロス中のそれらは洗浄してＰＢＳに再懸濁させる。
試料をスライドの上に置き、その後１分間メタノールで固定する。試料を、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ ４８８（ＡＦ４８８）（１．６３ｍｇ／ｍｌ原液の１：３１３希釈溶液、最終濃度５．２μｇ／ｍｌ）に直接にコンジュゲートさせたＭＡｂ Ｆ４２９（陰性対照、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａアルギネート抗原に特異的なヒトＩｇＧ１）、またはＡＦ４８８（４．３５ｍｇ／ｍｌの原液の１：８３３希釈溶液、最終濃度５．２μｇ／ｍｌ）に直接にコンジュゲートさせたＭＡｂ Ｆ５９８（ＰＮＡＧに特異的なヒトＩｇＧ１）と一緒に、０．５％ＢＳＡ含有ＰＢＳ中で、４℃および４μＭのＳｙｔｏ８３において一晩さらにインキュベートする。試料をＰＢＳで洗浄し、共焦点分析のために１．５カバーガラスでマウントする。
ＰＮＡＧへのＭＡｂ Ｆ５９８結合の特異性：ＰＮＡＧ生成を促進するために、大気酸素条件（２１％Ｏ２）、５％ＣＯ２または嫌気性条件下で、２０℃から３７℃の範囲内の温度で生物体を様々な培地で２４〜７２時間成長させる。プレートからの細菌細胞はＴＢＳ（トリス緩衝食塩水、ｐＨ６．５）に直接に懸濁し、ブロス中のそれらは洗浄してＴＢＳに再懸濁させる。
一般に、試料はキチナーゼ、Ｄｉｓｐｅｒｓｉｎ Ｂまたは過ヨウ素酸塩で処理し、次にＭＡｂ Ｆ５９８に曝露する。ＴＢＳｐＨ６．５中の試料は、（ａ）５０μｇ／ｍｌキチナーゼ（陰性対照）と、（ｂ）Ｄｉｓｐｅｒｓｉｎ Ｂ（ＰＮＡＧを消化する）と３７℃で２４時間、または（ｃ）０．４Ｍ過ヨウ素酸塩と３７℃で２時間インキュベートする。ＰＮＡＧは過ヨウ素酸塩によって開裂し、Ｄｉｓｐｅｒｓｉｎ Ｂによって消化され、キチナーゼの影響を受けない。細胞は、ＰＮＡＧに対するヒトＩｇＧモノクローナル抗体（ＭＡｂ）、または無関係な抗原−Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａアルギネートに対するＩｇＧ１ ＭＡｂ（ＭＡｂ Ｆ４２９、陰性対照、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａアルギネート抗原に特異的なヒトＩｇＧ１）と次に反応させた。無関係な抗原に対する抗体は、ＰＮＡＧに結合しないはずである。
具体的には、試料を洗浄し、１０μｌの一定分量をガラススライドの上で風乾し、続いて１分間、メタノールで固定する。４℃で一晩、４μＭのＳｙｔｏ８３（ＤＮＡを赤く染色する）と一緒に、０．５％ＢＳＡ含有ＰＢＳ中で、ＭＡｂ Ｆ４２９（陰性対照）をＡＦ４８８（１．６３ｍｇ／ｍｌ原液の１：３１３希釈溶液、最終濃度５．２μｇ／ｍｌ）に直接にコンジュゲートさせ、ＭＡｂ Ｆ５９８（抗ＰＮＡＧ、ロット２）をＡＦ４８８（４．３５ｍｇ／ｍｌの原液の１：８３３希釈溶液、最終濃度５．２μｇ／ｍｌ）に直接にコンジュゲートさせた。試料をＰＢＳで洗浄し、共焦点分析のために１．５カバーガラスでガラススライドの上にマウントした。
さらに、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ中耳炎の子供からの中耳浸出液（ＭＥＦ）の試料、および型別不能のＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ中耳炎の子供からの２つのＭＥＦ試料において、感染細菌でキチナーゼ抵抗性のｄｉｓｐｅｒｓｉｎ Ｂ感受性のＰＮＡＧが検出された。同じ感染細菌は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅかＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅのいずれかに特異的な抗体でも染色された。ＰＮＡＧは、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染患者からの肺組織でも検出された。Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清群１９Ａに実験的に感染させたチンチラからの鼻咽頭液では、キチナーゼ抵抗性のｄｉｓｐｅｒｓｉｎ Ｂ感受性ＰＮＡＧ抗原と血清群１９Ａ莢膜の共存が容易に見られた。Ｃ．ｒｏｄｅｎｔｉｕｍに実験的に感染させたマウスの胃腸管では、上皮細胞と関連している微生物周囲にＰＮＡＧが検出された。Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ角膜炎のマウスからの眼組織では、真菌細胞のＤＮＡ陽性部分でＰＮＡＧが検出された。
さらに、共焦点顕微鏡分析でＭＡｂ Ｆ５９８と反応するがＭＡｂ Ｆ４２９と反応しない細菌株には、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ ２Ｒ１およびＶｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ ０３９５が含まれる。
ＰＮＡＧに対するポリクローナルウサギ抗体と反応するが正常なウサギ血清と反応しない細菌株には、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎおよびＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａｔｉｓが含まれる。
（実施例２）ＧＩ管中のＣ．ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ。
試料を、ＡＦ４８８（１．６３ｍｇ／ｍｌ原液の１：３１３希釈溶液、最終濃度５．２μｇ／ｍｌ）に直接にコンジュゲートさせたＭＡｂ Ｆ４２９（陰性対照、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａアルギネート抗原に特異的なヒトＩｇＧ１）、またはＡＦ４８８（４．３５ｍｇ／ｍｌの原液の１：８３３希釈溶液、最終濃度５．２μｇ／ｍｌ）に直接にコンジュゲートさせたＭＡｂ Ｆ５９８（ＰＮＡＧに特異的なヒトＩｇＧ１）と、０．５％ＢＳＡ含有ＰＢＳ中で、４℃および４μＭのＳｙｔｏ８３（核の染色のため）において一晩反応させた。試料をＰＢＳで洗浄し、共焦点分析のために１．５カバーガラスでマウントする。
結果は、Ｆ５９８抗体を使用して、感染マウスのＧＩ管でＣ．ｒｏｄｅｎｔｉｕｍコロニーにＰＮＡＧが存在することを示した。ＭＡｂ Ｆ４２９はコロニーを染色せず、Ｆ５９８ ＭＡｂによる染色の特異性を確認した（データ示さず）。
（実施例３）耳および鼻洗浄液中のＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ。
この実施例は、中耳炎のチンチラの耳および鼻洗浄液における莢膜１９Ａ型とＰＮＡＧ抗原のＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの上での同時発現を実証する。
試料を、５０μｇ／ｍｌのＤｉｓｐｅｒｓｉｎ ＢまたはキチナーゼとＴＢＳ中で一晩インキュベートし、次に４℃で一晩、ＢＳＡ／ＰＢＳ中の１：５０のＦ５９８（１ｍｇ／ｍｌ）またはＦ４２９（１ｍｇ／ｍｌ）およびウサギ抗Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ１９Ａ莢膜多糖（１：１００）で標識し、続いて室温で１時間、ＡＦ４８８にコンジュゲートさせたヤギ抗ヒトＩｇＧおよびヤギ抗ウサギＡＦ５６８により１：２００で標識した。
結果は、中耳炎のチンチラの鼻咽頭洗浄液におけるＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ細菌細胞を囲むＰＮＡＧの存在を示した。キチナーゼおよびＤｉｓｐｅｒｓｉｎ Ｂで処理し、次に対照のＭＡｂ Ｆ４２９に曝露した試料は、陰性であった。Ｄｉｓｐｅｒｓｉｎ Ｂで処理し、次にＭＡｂ Ｆ５９８に曝露した試料は、陰性であったが、キチナーゼで処理し、次にＭＡｂ Ｆ５９８に曝露した試料は陽性であって、中耳炎のチンチラの鼻咽頭洗浄液におけるＰＮＡＧの存在を実証した。染色パターンは、ウサギ抗ＳＰｎ １９Ａ染色と重複した（データ示さず）。
同様に、キチナーゼ処理後のＰＮＡＧ特異的ＭＡｂ Ｆ５９８による染色で決定されたが対照のＭＡｂ Ｆ４２９では決定されなかった通り、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ １９Ａに感染して中耳炎を有するチンチラの内耳液（洗浄液）および鼻管でＰＮＡＧが検出された。染色パターンは、ウサギ抗ＳＰｎ １９Ａ染色と重複した（データ示さず）。
（実施例４）中耳炎の子供からのヒト内耳液中のＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａまたは型別不能のＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａ。
内耳液試料を、３７℃で一晩、１００μｇ／ｍｌのＤＮアーゼＩとともにインキュベートし、次に、３７℃で２４時間、ＴＢＳ中の５０μｇ／ｍｌのキチナーゼまたはＤｉｓｐｅｒｓｉｎ Ｂで処理した。試料を洗浄し、１０μｌの一定分量をガラススライドの上で風乾し、熱固定し、５０μｇ／ｍｌのＦ５９８（ＡＰ０１）またはＦ４２９（１ｍｇ／ｍｌ）、およびマウス抗Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅホスファチジルコリン（１：１００）またはモルモット抗Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（熱殺傷全細胞；１：１００）により、４℃で一晩、０．５％ＢＳＡ含有ＰＢＳ（ＰＢＳ／ＢＳＡ）中で標識した。試料をＰＢＳで洗浄し、ＡＦ４８８にコンジュゲートさせた１：２５０の抗ヒトＩｇＧ、およびＡＦ５６８にコンジュゲートさせた１：２００のヤギ抗マウスＩｇＧまたはヤギ抗モルモットＩｇＧと室温で１時間、ＰＢＳ／ＢＳＡ中でインキュベートした。スライドを洗浄し、マウントした。
結果は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ耳感染症（中耳炎）を有するヒト対象の内耳液でのＰＮＡＧの存在を実証する。キチナーゼ、続いてＭＡｂ Ｆ４２９またはＤｉｓｐｅｒｓｉｎ Ｂ、続いてＭＡｂ Ｆ５９８に曝露した試料は陰性であったが、キチナーゼ、続いてＭＡｂ Ｆ５９８に曝露した試料は陽性であった。Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅホスファチジルコリンに対するマウス抗体染色で観察されたものと、染色パターンは重複した（データ示さず）。
（実施例５）血液中のＰ．ｂｅｒｇｈｅｉおよびＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ。
マラリア感染マウス（Ｐ．ｂｅｒｇｈｅｉ ＮＫ−６５に感染したＢＡＬＢ／ＣＪ、感染後１８日目）から作製された、未染色の新鮮な血液スミアの共焦点鏡検。キチナーゼ、Ｄｉｓｐｅｒｓｉｎ Ｂおよび過ヨウ素酸塩処理のために、スミアを３つのウェルにｐａｐ−ｐｅｎで分割した。スライドを熱で固定し、ＴＢＳ中の５０μｇ／ｍｌのキチナーゼもしくはＤｉｓｐｅｒｓｉｎ Ｂにより３７℃で２４時間、または０．４Ｍ過ヨウ素酸塩により３７℃で２時間処理した。スライドをＰＢＳで洗浄し、ＡＦ４８８に直接にコンジュゲートさせたＭＡｂ Ｆ５９８（１．３ｍｇ／ｍｌ原液；１：２５０の希釈溶液を使用、６００μｌ中に２．４μｌに同等；最終濃度は６００μｌ中に５．２μｇ／ｍｌまたは３．１２μｇ；１ウェルにつき２００μｌを添加）とともにインキュベートした（縁色）。０．５％ＢＳＡ含有ＰＢＳ（ＢＳＡ／ＰＢＳ）中の４μＭのＳｙｔｏ８３（ＤＮＡ色素−赤色）も加えた；両方とも室温で４時間インキュベートした。スライドをＰＢＳで洗浄し、共焦点鏡検によって観察するために１．５μｍカバーガラスをかぶせた。
結果は、大脳マラリアから死に至ったマウスの血液中の、ＰＮＡＧの存在を示した。Ｄｉｓｐｅｒｓｉｎ Ｂまたは過ヨウ素酸塩で処理し、続いてＭＡｂ Ｆ５９８で染色した試料は陰性であったが、キチナーゼで処理し、続いてＭＡｂ Ｆ５９８で染色した試料は陽性であった（データ示さず）。
類似したアプローチを使用して、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍに感染したヒトからの血液でＰＮＡＧの発現を分析した。対照のＭＡｂ Ｆ４２９で染色した試料、およびＤｉｓｐｅｒｓｉｎ Ｂまたは過ヨウ素酸塩で処理し、続いてＭＡｂ Ｆ５９８で染色した試料は陰性であった（データ示さず）。キチナーゼで処理したか処理せず、次にＦ５９８で染色した試料は陽性であった（データ示さず）。Ｆ５９８の染色パターンは、赤血球中のＤＮＡの同定と重複し、そのことは、ヒト赤血球は核またはＤＮＡを含有しないのでマラリア原虫の存在を示す（データ示さず）。
（実施例６）肺のＢ．ｄｏｌｏｓａ。
前の実施例に記載のものに類似したアプローチを使用して、Ｂ．ｄｏｌｏｓａ肺炎および敗血症から死に至った嚢胞性線維症患者からの肺組織から切片を作製し、ＰＮＡＧ発現について分析した。肺細胞核を染色するために、ＴＯ−ＰＲＯ−３を使用した。抗Ｂ．ｄｏｌｏｓａマウス血清、続いてＡＦ５６８ロバ抗マウスＩｇＧを使用して、Ｂ．ｄｏｌｏｓａ細胞を可視化した。９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴ ＰＮＡＧグリコフォームに対するウサギ抗血清、続いてＡＦ４８８ヤギ抗ウサギＩｇＧを使用して、ＰＮＡＧを可視化した。陰性対照は、ＴＯ−ＰＲＯ−３核染色を有する正常なウサギ血清であった。ＰＮＡＧ発現は、Ｂ．ｄｏｌｏｓａ細胞染色と重複した（データ示さず）。
（実施例７）目のＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ。
製造業者の指示通りにＥｚＤｅｗａｘを使用して、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ感染マウスの目のパラフィン包埋組織切片を脱パラフィンした。スライドを室温で２時間水中で再水和し、続いて室温で２時間、０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ中でブロックした。試料を、４℃および４μＭのＳｙｔｏ８３において一晩、０．５％ＢＳＡ含有ＰＢＳ中で、ＡＦ４８８（１．６３ｍｇ／ｍｌ原液の１：３１３希釈溶液、最終濃度５．２μｇ／ｍｌ）に直接にコンジュゲートさせたＭＡｂ Ｆ４２９（陰性対照）、またはＡＦ４８８（４．３５ｍｇ／ｍｌの原液の１：８３３希釈溶液、最終濃度５．２μｇ／ｍｌ）に直接にコンジュゲートさせた抗ＰＮＡＧのＭＡｂ Ｆ５９８と一緒にさらにインキュベートした。試料をＰＢＳで洗浄し、共焦点分析のために１．５カバーガラスでマウントした。
結果は、ＭＡｂ Ｆ５９８による核の共焦染色を示したがＭＡｂ Ｆ４２９では示さず、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣ．ａｌｂｉｃａｎｓによるＰＮＡＧの発現を実証した（データ示さず）。
（実施例８）Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ角膜炎のマウスモデルにおける抗微生物ＰＮＡＧ ＭＡｂ Ｆ５９８の効力。
麻酔下雄Ｃ５７Ｂｌ／６マウスの角膜を傷つけ（３×１ｍｍ）、５μｌ容量のＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ ＳＣ５３１４の約１０５〜１０７ＣＦＵ／目によって接種することによって、角膜炎を誘導した。感染から４時間後に、ＩＰ注射および／または局所塗布によってＰＮＡＧ特異的ＭＡｂ（Ｆ５９８）または対照ヒトＩｇＧ１ＭＡｂ（Ｆ４２９）を送達し、感染から２４および３２時間後に追加の抗体を局所に塗布した。感染から２４および３２時間後に、マウスをチェックし、対照がこの時点で回復不能の角膜傷害を示したならば、動物を安楽死させ、ＣＦＵ／目を決定した。３６時間後の対照が損傷を受けた目に３＋以下の傷害を有していたならば、感染を４８時間まで進行させ、その後、マウスを安楽死させ、マウス処置について盲検化された観察者がＣＦＵ／目および０から４の角膜病理スコアを決定した。角膜病理スコアは以下の通りであった：
スコア４：角膜の穿孔
スコア３：前上葉区を覆う濃い不透明度
スコア２：瞳孔を覆う濃い不透明度
スコア１：瞳孔を部分的に覆うかすかな不透明度
スコア０：感染していない反対側の目に同一。
ＭＡｂ Ｆ５９８のＩＰ注射および／または局所塗布によって治療的に処置したＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ感染マウスは、対照ＭＡｂ Ｆ４２９で処置したマウスと比較して、目の著しく低減された細菌レベルおよび低減された角膜病理を有した。これらのデータは、図１〜４に提示される。
抗ＰＮＡＧ抗体は、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ角膜炎モデルにおいて治療効力を実証し、ＰＮＡＧのｉｎ ｖｉｖｏ発現、ならびにＰＮＡＧに対するワクチンおよび免疫療法薬による真菌感染症の予防または処置の可能性を示した。
（実施例９）Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａが原因の致死性の肺炎に対する抗９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴコンジュゲートワクチンポリクローナル抗体の保護効力。
５％ＣＯ２の３７℃において、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｄ３９株をトリプチカーゼダイズブロス（ＴＳＢ）で一晩成長させた。６５０ｎｍのＯＤが０．１まで培養をトッド−ヒューウィットブロス＋１％グルコースに希釈し、ＯＤ＝０．４５まで（およそ２．５時間）３７℃で成長させた。イソフルラン麻酔下において、ＣＢＡ／Ｎマウスを、３７．５μｌの熱不活性化正常ヤギ血清、またはＰＢＳに５０μＬに希釈した抗９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴコンジュゲートワクチンに対して作製したヤギ抗血清で眼窩後部（ＲＯ）に注射した。マウスに注射した。２４時間後に、細菌調製物を６５０ｎｍのＯＤが０．４５まで希釈した（すなわち、この実験のために、ＰＢＳで８３μＬを９１７μＬに希釈して、３×１０７ＣＦＵ／ｍＬを与えた。ケタミン／キシラジン（１マウスにつき２５０μＬ）でマウスを麻酔にかけ、２×１０μＬ用量の細菌を鼻腔内に注いだ。７日の間、マウスの生存を監視した。結果を図５に示す。
さらに、ＦＶＢマウスで抗原型９Ｖ ＤＳＭ１１８６５株による鼻腔内感染の４時間前に与えられたｍＡｂ Ｆ５９８は、マウス肺での細菌負荷の低減において抗生物質セホタキシム（感染から１および４時間後に投与される）と同じくらい強力であることが見出された。
（実施例１０）
Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）が原因の致死性の皮膚感染症に対する抗９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴコンジュゲートワクチンポリクローナル抗体の保護効力。
マウスは、ＣＤ１（ＩＣＲ）６週齢雌マウスであった。第１群（８匹のマウス）は、正常なウサギ血清（ＮＲＳ）を注射したマウスに対応した。第２群（８匹のマウス）は、９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴを注射したマウスに対応した。細菌は、対数期の１０７ＣＦＵ／ｍｌで使用されたＡ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（ＧＡＳ）９５０７７１株であった。抗体は、２００μｌ／マウス／用量で使用されたポリクローナルウサギ抗９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴおよび２００μｌ／マウス／用量で使用されたＮＲＳであった。
０日目に、ＧＡＳ細菌細胞の保存株を血液寒天プレート（ＢＡＰ）に画線培養し、３７℃で一晩インキュベートし、次に、３７℃での静止培養のために１％グルコースを含むトッド−ヒューウィット酵母エキスブロス（ＴＨＹ＋Ｇ）の管を接種するために使用した。マウスは、感染の２４時間前にＩＰ注射された。１日目に、マウスは感染の４時間前にＩＰにより２回目の免疫化を受けた。感染のための接種原を調製するために、１０ｍｌのＴＨＹ＋Ｇを使用してＯＤ６００ｎｍ＝０．０５の細菌懸濁液を作製し、ＯＤ６００ｎｍ＝０．１５が達成されるまで３７℃に置いた。以下の通り、ＢＡＰでのＣＦＵ決定のためにこれを希釈して、播種した：１０−５および１０−６の希釈溶液の１０μｌをＢＡＰに播種した（希釈溶液につき２枚のプレート）。感染用接種原を調製するために、ＴＨＹ＋Ｇ培養の１０ｍｌを１５ｍｌ円錐管に移し、２０分の間２０００ｒｐｍで管を遠心分離して、細菌細胞をペレットにした。上清を廃棄し、１ｍｌのＴＨＹ＋Ｇブロスにペレットを懸濁し、それをミクロチューブに移して２分の間８０００ｒｐｍで遠心した。上清を廃棄し、細菌細胞のペレットを５００μｌの注射用水に懸濁し、次に１ｍｌの２７ゲージシリンジに移して氷中に保った。注射用水による５０ｍｇ／ｍｌのネンブタールの１：４希釈溶液を作製し［最終濃度１０μｇ／ｍｌ］、ＩＰ注射した（１マウスにつき０．３ｍｌの麻酔薬溶液）。右側腹部を剃り、エタノールで拭き、次に１マウスにつき０．１ｍｌの細菌懸濁液（すなわち、５×１０５ＣＦＵ／マウス）を皮下に注射した。実際の接種原を確認するために、計数のために細菌懸濁液を希釈して、播種した。注射した細菌懸濁液は１．７×１０６ＣＦＵ／ｍｌの濃度を有し、１．７×１０５ＣＦＵが各マウスに注射されたことを意味した。マウスを観察し、瀕死のマウスは安楽死させた。結果を図６に示す。
（実施例１１）Ｂ群Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓを抗原投与した２〜３日齢の子マウスの髄膜炎（脳の細菌）に対する、ウサギで作製された抗９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴコンジュゲートワクチン抗体の保護効力。
マウスは、生後２日から３日のＣＤ−１新生児マウスであった。Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓを一晩血液寒天プレートで成長させ、細菌細胞をＰＢＳに削り取り、記した様々な抗原投与用量を与えるように６００ｎｍのＯＤを調整した。感染の２４時間前に、ＮＲＳ（５０μｌ ＩＰ（ＡｃｃｕｒａｔｅからのＮＲＳ））または９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴコンジュゲートワクチンに対して作製されたウサギ血清（５０μｌ ＩＰ（ウサギ４．２、Ｂｌｅｅｄ４−３／４−４））によりマウスを１度注射した。２４時間の後、５０μｌの血清群ＢのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ Ｂ１６Ｂ６株で、マウスを以下の希釈によりＩＰで抗原投与した：５×１０５、５×１０６または５×１０８。マウスを２４時間後に屠殺し、細菌計数のために脳を取り出し、ホモジナイズして、チョコレート寒天プレートに播種した。結果を図７に示す。
（実施例１２）感染性大腸炎に感受性のマウスに投与されるときの完全ヒトＩｇＧ１ ＭＡｂ Ｆ５９８の保護効力。
ＴＲＵＣマウスは、獲得および先天性の免疫系を欠く（GarrettらCell、２００７年、１３１巻（１号）：３３〜４５頁；Garrettら、Cell Host Microbe、２０１０年、８巻（３号）：２９２〜３００頁）。これらのマウスは、８週齢までに感染性大腸炎を自然発症する。新生児ＴＲＵＣマウスに、生後１週目から始めて、ＭＡｂ Ｆ５９８もしくはＰＢＳ、またはＭＡｂ Ｆ５９８もしくは対照ヒトＩｇＧ１ ＭＡｂの５０μｇを、週に３回、８週後の屠殺までｉｐ注射した。記載される通りに、大腸炎の評価のためにマウスの腸管を取り出して処理した（Garrettら、Cell、２００７年、１３１巻（１号）：３３〜４５頁；Garrettら、Cell Host Microbe、２０１０年、８巻（３号）：２９２〜３００頁）。ＭＡｂ Ｆ５９８または対照ＩｇＧ１ ＭＡｂのいずれかを与えられたマウス群の間で、全体的な大腸炎病理スコアを比較した。結果は、図８および９に示す。
他の実験では、生後７日目から開始されたｍＡｂ Ｆ５９８の毎週の投与は、８週齢で決定された総組織病理学的傷害を有意に低減した（病理学者による盲検化された方法で）。
ＷＴ新生子がＴＲＵＣ雌によって交差養育されるとき、それらは８週後に大腸炎を自然発症するが、ＴＲＵＣ子孫におけるより重度でない。攪乱されない免疫系機能の状況下で、大腸炎に対するｍＡｂ Ｆ５９８の治療能力を評価するために、ＴＲＵＣ雌によって養育されたＷＴマウスの、ｍＡｂ Ｆ５９８または対照ヒトＩｇＧ１ ｍＡｂ Ｆ１０５の隔週注射による処置を４週齢で開始し、８週齢の結腸病理のレベルを決定した。ｍＡｂ Ｆ５９８は、対照と比較してレシピエントマウスでの総病理スコアを有意に低減し、単球浸潤および反応性過形成が有意に低減されたが、対照のほとんどがゼロの損傷スコアであったので損傷は低減されなかった（データ示さず）。
（実施例１３）Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ １０４０３Ｓ株に対する、ウサギで作製した抗９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴコンジュゲートワクチン抗体の保護効力。
ＮＲＳ（ｎ＝１５）または９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴコンジュゲートワクチンに対して作製したウサギ免疫血清（ｎ＝１５）の５０μｌによる抗原投与の２４時間前に、２日齢から３日齢のＣＤ１子マウスをＩＰ免疫化した。マウスをＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ（％×１０＾８ＣＦＵ／５０μｌ）でＩＰ抗原投与した。２４時間の間、生存を監視した。全生存は、Ｙａｔｅｓ補正によるカイ二乗によって分析した、Ｐ．００１。結果は、図１０に示す。
マラリアの有効なワクチンは、複数の寄生虫抗原をたぶん必要とするが、ＰＮＡＧが多価ワクチンのためのワクチン抗原構成成分の候補であるかどうかについての決定での初期ステップとして、ＰＮＡＧ陽性Ｐ．ｂｅｒｇｈｅｉ ＡＮＫＡに感染したＣ５７ＢＬ／６マウスを、感染の前日から開始して感染から２０日後まで３日おきにｉｐ注射された、２００μＬの抗ＰＮＡＧポリクローナル抗体または対照の正常血清で処置した。ＰＮＡＧに対する抗体は、処置されたマウスの生存を有意に延長させ、大脳マラリアの発症を予防した。正常な血清で処置した８匹のマウスのうちの５匹は低レベルの寄生虫血症で９日目までに死亡し、残りの３匹は高レベルの寄生虫血症で３０日目までに死亡した。ＰＮＡＧに対する抗体で３週間処置したマウスについては、７日目までに大脳マラリアで１匹だけが死亡し、４匹はレベルが上昇する寄生虫血症を発症して、３３日目までに死亡し、それは抗体の最後の注射から１３日後であり、１匹は２２日目まで検出可能な寄生虫血症を有さず、４０日目（抗体の最後の注射から２０日後）に死亡し、２匹のマウスは検出可能な寄生虫血症をほとんど有さず、４５日間の実験期間を生き延びた。当初のプロトコール条件に従って、抗体処置は２０日目に中止した。抗体処置の期間を増加させることによって、長期生存が観察される可能性がある。
（実施例１４）ＰＮＡＧに対する抗体は、多様なＰＮＡＧ発現病原体のオプソニン性または殺細菌性の殺傷を媒介する。
新鮮なヒトＰＭＮの代わりにＨＬ６０細胞が食細胞の供給源として使用されたこと以外は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよびＥ．ｆａｅｃａｌｉｓオプソニン性殺傷プロトコールは、Skurnikら（J Clin Invest.２０１０年、１２０巻（９号）：３２２０〜３３頁）によってＳ．ａｕｒｅｕｓについて公表されているものに類似している。０．８％ＤＭＦでＨＬ６０細胞を６日の間分化させ、１．３×１０６／ｍｌに調整した。３７℃で一晩（振盪なし）、細菌を成長させた。Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａを、５％ＣＯ２のＴＨＹ＋１％グルコース（ＴＨＹ＋Ｇ）に置いた。Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓは、大気条件で成長させた。アッセイの最後に、ＴＳＢ＋血液寒天の上で細菌株を播種した。振盪によりＣＳＢで一晩成長させた標的のＳ．ａｕｒｅｕｓ ＭＮ８細菌で、補体を吸着させた。Ｃ’：Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＭＮ８細胞で吸収させた、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号３１２０３／Ｓロット番号５１０９０８６９８２７０からの補体血清。ウサギ抗体を２つの抗原の１つに対して作製した：
１．破傷風トキソイドにコンジュゲートさせた脱アセチル化ＰＮＡＧ（ｄＰＮＡＧ）（ｄＰＮＡＧ−ＴＴ）：Maira-Litranら、Infect Immun.２００５年、７３巻（１０号）：６７５２〜６２頁。正誤表：Infect Immun.２００５年、７３巻（１１号）：７７８９頁；および
２．ＴＴにコンジュゲートさせた合成９ＧｌｃＮＨ２オリゴ糖：Geningら、Infect Immun.２０１０年、７８巻（２号）：７６４〜７２頁。
ＰＮＡＧに対するヒトＭＡｂ、ＭＡｂ Ｆ５９８も試験した（Kelly-Quintosら、Infect Immun.２００６年、７４巻（５号）：２７４２〜５０頁）。
結果を、図１１〜１３に示す。
Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓオプソニン性殺傷プロトコールは、以下の通りである：Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（ＧＡＳ）７７１、１８８株を使用した。使用したＭＡｂロット：［１９ｍｇ／ｍｌ］のＦ５９８ ＡＰ１−０１、新たに解凍×１。ＭＡｂ Ｆ５９８の対照：Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａアルギネートに対するＭＡｂ Ｆ４２９［１．０ｍｇ／ｍｌ］。冷凍保存株からＳ．ａｕｒｅｕｓ ＭＮ８株を成長させ、ふたをゆるめて振盪させながら３７℃で５０ｍｌ円錐中の１０ｍｌのＴＨＢ＋Ｇに接種した。ＧＡＳ７７１および１８８をＯＮプレートからＴＨＹ＋Ｇで成長させ、３７℃の静置培養によりＯＤ６５０＝０．０５で接種した。冷凍保存株からＳ．ａｕｒｅｕｓ ＭＮ８ Ｄｉｃａを成長させ、ふたをゆるめて振盪させながら３７℃で５０ｍｌ円錐中の１０ｍｌ ＣＳＢ中のＴＨＢ＋Ｇに接種した。アッセイの最後に、血液を含むＴＳＡにＧＡＳ株を播種した。振盪によるＴＨＢ＋Ｇ、または静置ＴＨＹ＋Ｇでそれぞれ一晩成長させた標的のＳ．ａｕｒｅｕｓ ＭＮ８ΔｉｃａまたはＧＡＳ７７１細菌で、補体を吸着させた。緩衝剤：ＨＢＳＳ＋０．１％ゼラチン。Ｃ’：Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＭＮ８ ＤｉｃａまたはＧＡＳ７７１もしくは１８８の細胞で吸収させた、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号３１２０３／Ｓロット番号５１０９０８６９８２７０からの補体血清。
結果を図１４に示す。
Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓオプソニン性殺傷プロトコールは、以下の通りである：Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓをＯＤ１．０までＹＰＤ（酵母エキス／ペプトン／ブドウ糖）ブロスで成長させ、次に遠心し、ＭＥＭ＋１％ＢＳＡに再懸濁し、ＯＤを６５０ｎｍで０．４に調整し、その後懸濁液を１：１０に希釈した。プロテインＡによってＭＡｂ Ｆ４２９をハイブリドーマ上清から精製し、ｐＨ６．５のＰＢＳに透析させ、−２０℃で保存した。緩衝剤：ＭＥＭ＋１％ＢＳＡ。Ｃ’：ウサギからの補体血清、Ｓｉｇｍａロット１０６Ｋ６０２９、カタログ番号Ｓ７７６４。補体は、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ細胞で吸収させた。食細胞は、ＴＲＩＭＡカラードナーから得た。
結果を図１５に示す。
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓおよびＮ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ殺細菌性殺傷プロトコールは、以下の通りである：正常なウサギ血清（−２０℃保存液からのＮＲＳ、Ａｃｃｕｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、ロット２００８）および９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴコンジュゲートワクチンに対して作製されたウサギ抗体、−２０℃で保存、ウサギ４．３および４．４からの血清を使用した。血清を４℃で平衡させ、アッセイまで４℃に保った。Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓまたはＮ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ細菌を、５％ＣＯ２においてチョコレート寒天培地で２４〜４８時間成長させた。０．５％グルコース、９ｍＭのＣａＣｌ２および４．９ｍＭのＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏおよび１％（重量／容量）ウシ血清アルブミンを含有するＰＢＳ（Ｌｉｆｅｂｌｏｏｄ Ｍｅｄｉｃａｌ、Ｆｒｅｅｈｏｌｄ、ＮＪ）＝ＰＢＳ＋＋、ｐＨ７．４、に細菌を懸濁させた。細菌懸濁液は、チョコレート寒天培地懸濁液から作製されたＯＤ６５０ｎｍの懸濁液から、ＰＢＳ＋＋中の約１．５〜２×１０４ＣＦＵ／ｍｌまで希釈した。アッセイは、８０μｌの血清希釈液と２０μｌのナイセリア細胞を混合し、次に混合物を３７℃で１時間インキュベートすることを含んだ。管は、軽く振盪させて（可能な場合軌道式）、３７℃に置いた。Ｍｕｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎブロスで１０μｌの１：２および１０−１の希釈液を作製し、次にチョコレート寒天培地に播種した。培養物は、５％ＣＯ２中の３７℃で一晩インキュベートした。翌日に、コロニーを計数した。結果を、図１６および１７に示す。
特異的抗原の阻害のあるなしで９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴに対するウサギ血清の存在下でのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓおよびＮ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ株の殺細菌性殺傷を、以下の通りに実行した：
緩衝剤：０．５％グルコース、９ｍＭのＣａＣｌ２および４．９ｍＭのＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏおよび１％（重量／容量）ウシ血清アルブミンを含有する緩衝ＰＢＳ（Ｌｉｆｅｂｌｏｏｄ Ｍｅｄｉｃａｌ、Ｆｒｅｅｈｏｌｄ、ＮＪ）＝ＰＢＳ＋＋、ｐＨ７．４。
使用した細菌株および調製物：０．５％グルコース、９ｍＭのＣａＣｌ２および４．９ｍＭのＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏおよび１％（重量／容量）ウシ血清アルブミンを含有するＰＢＳ（Ｌｉｆｅｂｌｏｏｄ Ｍｅｄｉｃａｌ、Ｆｒｅｅｈｏｌｄ、ＮＪ）＝ＰＢＳ＋＋、ｐＨ７．４、に細菌を再懸濁させる。細菌懸濁液を、ＯＤのチョコレート寒天培地懸濁液からのＯＤ６５０ｎｍの懸濁液から、ＰＢＳ＋＋中の約１．５〜２×１０４ＣＦＵ／ｍｌまで希釈する。
抗原阻害：ＰＢＳ＋＋中の２００μｇ／ｍｌの最終濃度に溶解する
使用したＰＮＡＧ抗原：ロット２７。使用したアルギネート抗原は２１９２株から、Ｐｋ３（実行１）
使用した抗血清：正常なウサギ血清（−２０℃保存液からのＮＲＳ、Ａｃｃｕｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）。９ＧｌｃＮＨ２−ＴＴコンジュゲートワクチンに対して作製されたウサギ抗体、−２０℃で保存、ウサギ４．３および４．４からの血清を使用した。
アッセイ：４０μｌの血清供給源（希釈は、＞８０〜９０％の殺傷を達成するのに必要な、直接殺細菌アッセイで最も高い希釈に基づくが、１：２の血清希釈での最大殺傷がより低くない場合に限り、その場合には、１：２の最終希釈の血清を使用する）、４０μｌの抗原および２０μｌのナイセリア細胞を混合する（抗原のない管は、８０μｌの適切に希釈された抗血清を加える）。管は、軽く振盪させて（可能な場合軌道式）、３７℃に置く。チョコレート寒天培地に播種し、５％ＣＯ２の３７℃で一晩インキュベートし、翌日にコロニーを計数する。
結果を図１８および１９に示す。
均等物
上記の明細書は、当業技術者が本発明を実施することを可能にするのに十分であるとみなされる。実施例は本発明の１つの態様の単一の例示であるものとされ、他の機能的に均等な実施形態は本発明の範囲内にあるので、本発明は提供される実施例によって範囲が限定されるものではない。本明細書に示され、記載されるものに加えて、本発明の様々な改変形が前述の記載から当業者に明らかになり、添付の請求項の範囲内である。本発明の利点および目的は、本発明の各実施形態に必ずしも包含されるとは限らない。
本出願で列挙される全ての参考文献、特許および特許公報は、特に明記しない限り、参照により完全に本明細書に組み込まれる。

Claims (27)

  1. 非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を有するか、またはその発症のリスクがある対象に、前記病原体に対する免疫応答を誘導する際に使用するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は有効な量の、式

    を有する単離された多糖を含み、式中、ｎは少なくとも５であり、Ｒは−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３および−ＮＨ２からなる群から選択され、ただし、Ｒ基の５０％未満は−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３であり、ここで、
    （ａ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂ群ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓである、
    （ｂ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓまたはＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓである、
    （ｃ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、型別不能のＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒまたはＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、
    （ｄ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌が、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂ．ｖｕｌｇａｔｉｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型チフス菌またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ネズミチフス菌である、
    （ｅ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（酵母）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（菌糸）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ＦｕｓａｒｉｕｍまたはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓである、あるいは
    （ｆ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫が、Ｐ．ｂｅｒｇｅｉまたはＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍである、
    医薬組成物。
  2. 前記単離された多糖が、担体とコンジュゲートしており、
    必要に応じて、前記単離された多糖がリンカーを介して前記担体とコンジュゲートしており、
    さらに必要に応じて、前記担体がペプチド担体である、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. （ａ）Ｒ基の３０％未満、２０％未満、１０％未満または５％未満が−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３である、および／あるいは
    （ｂ）前記Ｒ基のいずれも−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３ではない、および／あるいは
    （ｃ）ｎが少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００または少なくとも５００である、および／あるいは
    （ｄ）前記単離された多糖が１００〜５００ｋＤａの分子量を有する、請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。
  4. 前記単離された多糖がアジュバントと一緒に使用され、
    必要に応じて、
    （ａ）全身投与のために、または
    （ｂ）局所投与のために
    製剤化されるものであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  5. 非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を有するか、またはその発症のリスクがある対象に、前記病原体に対する免疫応答を誘導する際に使用するための医薬組成物であってＰＮＡＧ特異的抗体の有効量を含み、ここで、
    （ａ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂ群ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓである、
    （ｂ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓまたはＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓである、
    （ｃ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、型別不能のＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒまたはＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、
    （ｄ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌が、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂ．ｖｕｌｇａｔｉｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型チフス菌またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ネズミチフス菌である、
    （ｅ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（酵母）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（菌糸）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ＦｕｓａｒｉｕｍまたはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓである、あるいは
    （ｆ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫が、Ｐ．ｂｅｒｇｅｉまたはＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍである、
    医薬組成物。
  6. 前記抗体が
    （ａ）全身投与のために、または
    （ｂ）局所投与のために
    製剤化され、
    必要に応じて前記抗体が
    （ａ）Ｆ５９８（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−５９３１）抗体、
    （ｂ）Ｆ６２８（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−５９３２）抗体、あるいは
    （ｃ）Ｆ６３０（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−５９３３）抗体
    であり、
    さらに必要に応じて、前記抗体が薬剤とコンジュゲートしており、
    必要に応じて、前記薬剤が細胞毒性剤である、請求項５に記載の医薬組成物。
  7. （ａ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａである、
    （ｂ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓである、あるいは
    （ｃ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、またはＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅである、
    請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  8. 前記対象が
    （ａ）ヒト、あるいは
    （ｂ）霊長類、ウマ、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌまたはネコである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  9. 前記対象が
    （ａ）非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を有する、または
    （ｂ）非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を発症するリスクがある、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  10. 感染症を処置または予防する際に使用するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  11. 濃縮した微生物細胞体調製物から粗製多糖調製物をエタノール沈殿させることと；
    前記粗製多糖をリゾチームおよびリソスタフィンで同時に消化し、続いてヌクレアーゼおよびプロテイナーゼＫで逐次的に消化して、消化された多糖調製物を形成することと；
    前記消化された多糖調製物をサイズ分画することと；
    アセチル化多糖画分を単離することと；
    前記アセチル化多糖画分を脱アセチル化して、５０％未満のアセテート置換を有するＰＮＡＧ多糖を生成することと
    を含み、前記微生物細胞体調製物が非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物から誘導される方法であって、ここで、
    （ａ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂ群ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓである、
    （ｂ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓまたはＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓである、
    （ｃ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、型別不能のＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒまたはＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、
    （ｄ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌が、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂ．ｖｕｌｇａｔｉｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型チフス菌またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ネズミチフス菌である、
    （ｅ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽
    性真菌であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（酵母）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（菌糸）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ＦｕｓａｒｉｕｍまたはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓである、あるいは
    （ｆ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫が、Ｐ．ｂｅｒｇｅｉまたはＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍである、
    方法。
  12. 微生物培養物から不純な多糖を調製することであって、前記微生物培養物が非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物培養物である、ことと；
    前記不純な多糖を酸または塩基とともにインキュベートして半純粋な多糖調製物を生成することと；
    前記調製物を中和することと；
    中和された前記調製物をフッ化水素酸中でインキュベートすることと；
    （ａ）前記調製物からアセチル化多糖を単離し、そして前記アセチル化多糖を脱アセチル化して、５０％未満のアセテート置換を有するＰＮＡＧ多糖を生成すること、または
    （ｂ）前記調製物から５０％未満のアセテート置換を有するＰＮＡＧ多糖を単離することのいずれかと
    を含む、方法であって、ここで、
    （ａ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂ群ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓである、
    （ｂ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓまたはＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓである、
    （ｃ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、型別不能のＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒまたはＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、
    （ｄ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌が、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂ．ｖｕｌｇａｔｉｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型チフス菌またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ネズミチフス菌である、
    （ｅ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（酵母）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（菌糸）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ＦｕｓａｒｉｕｍまたはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓである、あるいは
    （ｆ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性微生物が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽
    性寄生虫であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫が、Ｐ．ｂｅｒｇｅｉまたはＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍである、
    方法。
  13. 担体を前記単離された多糖とコンジュゲートさせることをさらに含み、
    必要に応じて、前記担体がペプチド担体であり、
    さらに必要に応じて、前記アセチル化多糖が
    （ａ）化学的に脱アセチル化されており、必要に応じて、前記アセチル化多糖が塩基性溶液とのインキュベーションによって脱アセチル化されている、あるいは
    （ｂ）酵素によって脱アセチル化されている、請求項１１および１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. 非ヒト対象に、抗体生成のために有効な量の、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体から単離されたＰＮＡＧ多糖、およびアジュバントを投与することと、
    前記対象から抗体を単離することと
    を含み、必要に応じて、前記抗体がポリクローナル抗体である、抗体の生成方法であって、ここで、
    （ａ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂ群ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓである、
    （ｂ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓまたはＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓである、
    （ｃ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、型別不能のＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒまたはＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、
    （ｄ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌が、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂ．ｖｕｌｇａｔｉｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型チフス菌またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ネズミチフス菌である、
    （ｅ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（酵母）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（菌糸）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ＦｕｓａｒｉｕｍまたはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓである、あるいは
    （ｆ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫が、Ｐ．ｂｅｒｇｅｉまたはＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍである、
    方法。
  15. 非ヒト対象に、抗体生成のために有効な量の、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体から単離されたＰＮＡＧ多糖、およびアジュバントを投与することと、
    前記対象から脾細胞を収集することと、
    前記対象からの脾細胞を骨髄腫細胞と融合させることと、
    融合サブクローンから生成された抗体を収集することと
    を含む、モノクローナル抗体の生成方法であって、ここで、
    （ａ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂ群ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓである、
    （ｂ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓまたはＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓである、
    （ｃ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、型別不能のＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒまたはＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、
    （ｄ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌が、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂ．ｖｕｌｇａｔｉｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型チフス菌またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ネズミチフス菌である、
    （ｅ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（酵母）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（菌糸）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ＦｕｓａｒｉｕｍまたはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓである、あるいは
    （ｆ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫が、Ｐ．ｂｅｒｇｅｉまたはＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍである、
    方法。
  16. （ａ）前記ＰＮＡＧ多糖が５０％未満アセチル化されている、および／または
    （ｂ）抗体を単離することをさらに含む、および／または
    （ｃ）前記対象がウサギである、請求項１４または１５に記載の方法。
  17. 非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体を検出するための方法であって、
    非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体を含有することが疑われる試料を、ＰＮＡＧ特異的抗体と接触させることと、
    前記抗体と前記試料との結合を検出することと
    を含み、前記抗体の結合が、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が前記試料中に存在することを示し、
    必要に応じて、
    （ａ）前記試料がＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ陰性である、および／あるいは
    （ｂ）前記試料が対象からの生体試料であり、必要に応じて、前記生体試料が尿、血液、膿、皮膚、痰、関節液、リンパまたは乳汁である、および／あるいは
    （ｃ）前記抗体が検出可能な標識とコンジュゲートしており、ここで、
    （ａ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂ群ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓである、
    （ｂ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓまたはＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓである、
    （ｃ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、型別不能のＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒまたはＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、
    （ｄ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌が、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂ．ｖｕｌｇａｔｉｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型チフス菌またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ネズミチフス菌である、
    （ｅ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（酵母）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（菌糸）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ＦｕｓａｒｉｕｍまたはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓである、あるいは
    （ｆ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫が、Ｐ．ｂｅｒｇｅｉまたはＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍである、
    方法。
  18. 非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を有するか、またはその発症のリスクがある対象に、前記病原体に対する免疫応答を誘導するための医薬の製造における、式

    を有する単離された多糖の使用であって、式中、ｎは少なくとも５であり、Ｒは−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３および−ＮＨ２からなる群から選択され、ただし、Ｒ基の５０％未満は−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３であり、ここで、
    （ａ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂ群ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓである、
    （ｂ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓまたはＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓである、
    （ｃ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、型別不能のＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒまたはＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、
    （ｄ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌が、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂ．ｖｕｌｇａｔｉｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型チフス菌またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ネズミチフス菌である、
    （ｅ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（酵母）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（菌糸）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ＦｕｓａｒｉｕｍまたはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓである、あるいは
    （ｆ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫が、Ｐ．ｂｅｒｇｅｉまたはＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍである、
    使用。
  19. 前記単離された多糖が、担体とコンジュゲートしており、
    必要に応じて、前記単離された多糖がリンカーを介して前記担体とコンジュゲートしており、
    さらに必要に応じて、前記担体がペプチド担体である、請求項１８に記載の使用。
  20. （ａ）Ｒ基の３０％未満、２０％未満、１０％未満または５％未満が−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３である、および／あるいは
    （ｂ）前記Ｒ基のいずれも−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３ではない、および／あるいは
    （ｃ）ｎが少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００または少なくとも５００である、および／あるいは
    （ｄ）前記単離された多糖が１００〜５００ｋＤａの分子量を有する、請求項１８または請求項１９に記載の使用。
  21. 前記単離された多糖がアジュバントと一緒に使用され、
    必要に応じて、前記医薬が、
    （ａ）全身投与のために、または
    （ｂ）局所投与のために
    製剤化されるものであることを特徴とする、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の使用。
  22. 非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を有するか、またはその発症のリスクがある対象に、前記病原体に対する免疫応答を誘導するための医薬の製造における、ＰＮＡＧ特異的抗体の使用であって、ここで、
    （ａ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性球菌が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂ群ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓである、
    （ｂ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陽性桿菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓまたはＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓである、
    （ｃ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性球菌または球桿菌が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、型別不能のＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒまたはＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒである、
    （ｄ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌であり、
    前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性グラム陰性桿菌が、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂ．ｖｕｌｇａｔｉｓ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型チフス菌またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ血清型ネズミチフス菌である、
    （ｅ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性真菌が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（酵母）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（菌糸）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ＦｕｓａｒｉｕｍまたはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓである、あるいは
    （ｆ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫であり、
    必要に応じて、前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性寄生虫が、Ｐ．ｂｅｒｇｅｉまたはＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍである、
    使用。
  23. 前記医薬が
    （ａ）全身投与のために、または
    （ｂ）局所投与のために
    製剤化されるものであり、
    必要に応じて前記抗体が
    （ａ）Ｆ５９８（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−５９３１）抗体、
    （ｂ）Ｆ６２８（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−５９３２）抗体、あるいは
    （ｃ）Ｆ６３０（ＡＴＣＣ ＰＴＡ−５９３３）抗体
    であり、
    さらに必要に応じて、前記抗体が薬剤とコンジュゲートしており、
    必要に応じて、前記薬剤が細胞毒性剤である、請求項２２に記載の使用。
  24. （ａ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａである、
    （ｂ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓである、あるいは
    （ｃ）前記非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、またはＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅである、
    請求項１８〜２３のいずれか一項に記載の使用。
  25. 前記対象が
    （ａ）ヒト、あるいは
    （ｂ）霊長類、ウマ、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌまたはネコ
    である、請求項１８〜２４のいずれか一項に記載の使用。
  26. 前記対象が
    （ａ）非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を有する、または
    （ｂ）非ｉｃａ／ｐｇａのＰＮＡＧ陽性病原体による感染症を発症するリスクがある、請求項１８〜２５のいずれか一項に記載の使用。
  27. 前記医薬が感染症を処置または予防するために製剤化されるものであることを特徴とする、請求項１８〜２６のいずれか一項に記載の使用。
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