JP6397939B2 - アッセイ装置及び標的分析種の検出方法 - Google Patents
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Description
「発明の詳細な説明」及び「特許請求の範囲」に渡って使用される特定の用語は、ほとんどは周知のものだが、若干の説明を必要とする場合もある。本願では下記のように使用されることを理解するものとする。
試料入口を含む受け部と、
受け部内に配設され、かつ第1の表面を有するプランジャと、
少なくとも1つの試薬と、
プランジャの第1の表面に装着された膜と、を備え、膜は、
複数の親和性構成成分が配設された標的結合領域、
毛管力をもたらすウィック、及び
複数の捕捉化合物が固定された検出領域を有し、検出領域は標的結合領域とウィックとの間に位置する、アッセイ装置が提供される。
表面及び試料入口を備える受け部と、
毛管力をもたらすウィックを有し、受け部の表面に装着された膜と、
受け部に配設された少なくとも1つの試薬と、
受け部内に配設され、かつ表面を有するプランジャと、
複数の捕捉化合物が固定され、プランジャの表面に装着された検出領域と、を備え、検出領域は試料入口とウィックとの間に位置する、アッセイ装置が提供される。
(a)
表面及び試料入口を備える受け部と、
少なくとも1つの試薬と、
受け部内に配設され、かつ表面を有するプランジャと、
毛管力をもたらすウィックを有し、プランジャの表面か、受け部の表面か、又は両者に装着された膜と、
複数の捕捉化合物が固定された検出領域と、を備え、検出領域が、試料入口とウィックとの間に位置する、アッセイ装置を提供することと、
(b)標的分析種の含有が予想される試料を提供することと、
(c)この試料を、試料入口を通して膜に添加することと、
(d)試料が検出領域に到達するまで膜に沿って試料を移動させることと、
(e)標的分析種と捕捉化合物との反応によって標的分析種を固定することと、
(f)固定された標的分析種を少なくとも1つの試薬と反応させ、検出可能なシグナルを発生させることと、
(g)発生したシグナルを検出することと、を含む。
本発明の目的及び利点は、以下の実施例により更に例示されるが、これらの実施例に列挙したその特定の材料及び量、並びに他の条件及び詳細は、本発明を過度に限定すると解釈されるべきではない。これらの実施例は説明目的のためのものにすぎず、添付の「特許請求の範囲」の範囲を限定することを意図するものではない。
特に断りのない限り、本明細書の実施例及びその他の部分における全ての部、百分率、比等は、重量基準である。特に断りのない限り、全ての化学物質は、Sigma−Aldrich Chemical Company(St.Louis,MO)より入手可能である。
ペニシリンGに特に結合するアプタマーを、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンGに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。試料溶液のアリコート100μLを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には5分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンGも、HRP結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。5分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、3−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、3M CLEAN−TRACE照度計(3M Company,St.Paul,MN)等の携帯式照度計によって測定する。
ペニシリンGに特に結合するアプタマーを、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンGに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ABTS(2,2’−アジノビス[3−エチルベンゾチアゾリン−6−スルホン酸]−二アンモニウム塩)を含有させる。試料溶液のアリコート200μLを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には5分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンGも、HRP結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。5分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたABTSを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、無色のABTSを、青色のラジカルカチオンへと酸化する。青色の強度は、カラーチャートとの比較によって視覚的に、又は3M CLEAN−TRACE比色計(3M Company,St.Paul,MN)等の比色計によって、評価できる。
ペニシリンGに特に結合するアプタマーを、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンGに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ADHP(10−アセチル−3,7−ジヒドロキシフェノキサジン)を含有させる。試料溶液のアリコート250μLを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には5分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンGも、HRP結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。5分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたADHPを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、非蛍光性のADHPを、高蛍光性のレゾルフィンへと酸化する。蛍光の強度は、標準UVランプ照射によって視覚的に、又は好適には、蛍光光度計によって励起波長〜570nm及び蛍光波長〜585nmを用い、評価できる。
ペニシリンGに特に結合するアプタマーを、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンGに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。試料溶液のアリコート100μLを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には5分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンGも、HRP結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。続いて、pH7の緩衝液のアリコート1mLを、試料入口を通して添加し、流体輸送フィルム及び検出領域の過剰のHRP結合抗体を洗い落とす。5分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、3−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、3M CLEAN−TRACE照度計(3M Company,St.Paul,MN)等の携帯式照度計によって測定する。
ペニシリンGに特に結合するアプタマーを、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンGに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ABTS(2,2’−アジノビス[3−エチルベンゾチアゾリン−6−スルホン酸]−二アンモニウム塩)を含有させる。試料溶液のアリコート200μLを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には5分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンGも、HRP結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。続いて、pH7の緩衝液のアリコート1mLを、試料入口を通して添加し、流体輸送フィルム及び検出領域の過剰のHRP結合抗体を洗い落とす。5分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたABTSを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、無色のABTSを、青色のラジカルカチオンへと酸化する。青色の強度は、カラーチャートとの比較によって視覚的に、又は3M CLEAN−TRACE比色計(3M Company,St.Paul,MN)等の比色計によって、評価できる。
ペニシリンGに特に結合するアプタマーを、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンGに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ADHP(10−アセチル−3,7−ジヒドロキシフェノキサジン)を含有させる。試料溶液のアリコート250μLを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には5分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンGも、HRP結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。続いて、pH7の緩衝液のアリコート1mLを、試料入口を通して添加し、流体輸送フィルム及び検出領域の過剰のHRP結合抗体を洗い落とす。5分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたADHPを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、非蛍光性のADHPを、高蛍光性のレゾルフィンへと酸化する。蛍光の強度は、標準UVランプ照射によって視覚的に、又は好適には、蛍光光度計によって励起波長〜570nm及び蛍光波長〜585nmを用い、評価できる。
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第8,697,374号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。試料溶液のアリコート100μLを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、HRP結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。5分後、プランジャを1回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、3−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、3M CLEAN−TRACE照度計等の携帯式照度計によって測定する。
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第8,697,374号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。試料溶液のアリコート100μLを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、HRP結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。続いて、pH7の緩衝液のアリコート1mLを、試料入口を通して添加し、流体輸送フィルム及び検出領域の過剰のHRP結合抗体を洗い落とす。5分後、プランジャを1回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、3−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、3M CLEAN−TRACE照度計等の携帯式照度計によって測定する。
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第8,697,374号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。試料溶液のアリコート100μLを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、HRP結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。続いて、pH5の緩衝液のアリコート1mLを、試料入口を通して添加し、流体輸送フィルム及び検出領域の過剰のHRP結合抗体を洗い落とす。5分後、プランジャを1回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、3−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、3M CLEAN−TRACE照度計等の携帯式照度計によって測定する。
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第8,697,374号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。試料溶液のアリコート100μLを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、HRP結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。続いて、pH9の緩衝液のアリコート1mLを、試料入口を通して添加し、流体輸送フィルム及び検出領域の過剰のHRP結合抗体を洗い落とす。5分後、プランジャを1回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、3−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、3M CLEAN−TRACE照度計等の携帯式照度計によって測定する。
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第8,697,374号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ABTS(2,2’−アジノビス[3−エチルベンゾチアゾリン−6−スルホン酸]−二アンモニウム塩)を含有させる。試料溶液のアリコート400μLを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、HRP結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。5分後、プランジャを1回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたABTSを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、無色のABTSを、青色のラジカルカチオンへと酸化する。青色の強度は、カラーチャートとの比較によって視覚的に、又は3M CLEAN−TRACE比色計等の比色計によって、評価できる。
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第8,697,374号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ADHP(10−アセチル−3,7−ジヒドロキシフェノキサジン)を含有させる。試料溶液のアリコート800μLを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、HRP結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。5分後、プランジャを1回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたADHPを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、非蛍光性のADHPを、高蛍光性のレゾルフィンへと酸化する。蛍光の強度は、標準UVランプ照射によって視覚的に、又は好適には、蛍光光度計によって励起波長〜570nm及び蛍光波長〜585nmを用い、評価できる。
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第8,697,374号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート250μLをpH7の緩衝液1mLと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この移動はウィック上の青色の出現(ブロモフェノールブルーに起因する)によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、HRP結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。5分後、プランジャを1回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、3−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、3M CLEAN−TRACE照度計等の携帯式照度計によって測定する。
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第8,697,374号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ABTS(2,2’−アジノビス[3−エチルベンゾチアゾリン−6−スルホン酸]−二アンモニウム塩)を含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート100μLをpH7の緩衝液1mLと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この移動はウィック上の青色の出現(ブロモフェノールブルーに起因する)によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、HRP結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。5分後、プランジャを1回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたABTSを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、無色のABTSを、青色のラジカルカチオンへと酸化する。青色の強度は、カラーチャートとの比較によって視覚的に、又は3M CLEAN−TRACE比色計等の比色計によって、評価できる。
クロストリジウム・ディフィシルに対する抗体を、米国特許第8,697,374号に記載のとおり、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。クロストリジウム・ディフィシルに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ADHP(10−アセチル−3,7−ジヒドロキシフェノキサジン)を含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート250μLをpH7の緩衝液1mLと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この移動はウィック上の青色の出現(ブロモフェノールブルーに起因する)によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるクロストリジウム・ディフィシルも、HRP結合抗体と反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。5分後、プランジャを1回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたADHPを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、非蛍光性のADHPを、高蛍光性のレゾルフィンへと酸化する。蛍光の強度は、標準UVランプ照射によって視覚的に、又は好適には、蛍光光度計によって励起波長〜570nm及び蛍光波長〜585nmを用い、評価できる。
アフラトシキン結合ペプチドをセイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。アフラトシキンに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。検出領域は、流体輸送を阻害しないが物理的なストレスを受けると破断する2つの弱化された領域(例えば、穿孔)によって、いずれの側にも結合される。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート50μLをpH7の緩衝液0.5mLと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が下方のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って下方に毛管移動させる。この移動はウィック上の青色の出現(ブロモフェノールブルーに起因する)によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるアフラトシキンも、HRP結合ペプチドと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。5分後、プランジャを4分の1回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを試薬溶液と接触させ、かつ膜の検出領域を試薬溶液中へと下方に移動させる。検出領域に保持されたHRPは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、3−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、3M CLEAN−TRACE照度計等の携帯式照度計によって測定する。
アフラトシキン結合ペプチドをセイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。アフラトシキンに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。検出領域は、流体輸送を阻害しないが物理的なストレスを受けると破断する2つの弱化された領域(例えば、穿孔)によって、いずれの側にも結合される。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート50μLをpH8の緩衝液0.5mLと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が下方のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って下方に毛管移動させる。この移動はウィック上の青色の出現(ブロモフェノールブルーに起因する)によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるアフラトシキンも、HRP結合ペプチドと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。5分後、プランジャを4分の1回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを試薬溶液と接触させ、かつ膜の検出領域を試薬溶液中へと下方に移動させる。検出領域に保持されたHRPは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、3−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、3M CLEAN−TRACE照度計等の携帯式照度計によって測定する。
アフラトシキン結合ペプチドをセイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。アフラトシキンに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。検出領域は、流体輸送を阻害しないが物理的なストレスを受けると破断する2つの弱化された領域(例えば、穿孔)によって、いずれの側にも結合される。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート50μLをpH9の緩衝液0.5mLと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が下方のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って下方に毛管移動させる。この移動はウィック上の青色の出現(ブロモフェノールブルーに起因する)によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるアフラトシキンも、HRP結合ペプチドと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。5分後、プランジャを4分の1回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを試薬溶液と接触させ、かつ膜の検出領域を試薬溶液中へと下方に移動させる。検出領域に保持されたHRPは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、3−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、3M CLEAN−TRACE照度計等の携帯式照度計によって測定する。
トロポミオシン結合ペプチドをアルカリホスファターゼ(AP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。トロポミオシンに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。CDP Star(ABI,Thermo)等の化学発光AP基質を、界面活性剤及び/又はSapphire II又はEmerald II等の化学発光増強剤を任意に含有する試薬溶液中に含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート500μLをpH7の緩衝液0.5mLと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が頂部のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って上方に移動させる。この移動はウィック上の青色の出現(ブロモフェノールブルーに起因する)によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるトロポミオシンも、AP結合ペプチドと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。5分後、プランジャを4分の1回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、かつ膜の検出領域を試薬溶液中へと下方に移動させる。検出領域に保持されたAPがCDP−Star基質を加水分解し、発光する。光は、3M CLEAN−TRACE照度計等の携帯式照度計によって測定する。
トロポミオシン結合ペプチドをアルカリホスファターゼ(AP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。トロポミオシンに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。CDP Star(ABI,Thermo)等の化学発光AP基質を、界面活性剤及び/又はSapphire II又はEmerald II等の化学発光増強剤を任意に含有する試薬溶液中に含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート500μLをpH7の緩衝液0.5mLと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が頂部のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って上方に移動させる。この移動はウィック上の青色の出現(ブロモフェノールブルーに起因する)によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるトロポミオシンも、AP結合ペプチドと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。1分後、プランジャを4分の1回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、かつ膜の検出領域を試薬溶液中へと下方に移動させる。検出領域に保持されたAPがCDP−Star基質を加水分解し、発光する。光は、3M CLEAN−TRACE照度計等の携帯式照度計によって測定する。
トロポミオシン結合ペプチドをアルカリホスファターゼ(AP)と結合させ、プランジャの表面に取り付けられたニトロセルロース膜上に担持させる。トロポミオシンに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。CDP Star(ABI,Thermo)等の化学発光AP基質を、界面活性剤及び/又はSapphire II又はEmerald II等の化学発光増強剤を任意に含有する試薬溶液中に含有させる。ウィックは、少量のブロモフェノールブルーを、黄色の酸性型で含有する。試料溶液のアリコート500μLをpH7の緩衝液0.5mLと混合し、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が頂部のウィックに到達するまで流体輸送フィルムに沿って上方に移動させる。この移動はウィック上の青色の出現(ブロモフェノールブルーに起因する)によって表示され、窓を通して可視化することができる。この間、試料中に存在する如何なるトロポミオシンも、AP結合ペプチドと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。10分後、プランジャを4分の1回転させ、膜の流体通路に破断を生じさせる。続いてプランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、かつ膜の検出領域を試薬溶液中へと下方に移動させる。検出領域に保持されたAPがCDP−Star基質を加水分解し、発光する。光は、3M CLEAN−TRACE照度計等の携帯式照度計によって測定する。
ペニシリンGに特に結合するアプタマーをセイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、受け部の表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンGに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ルミノールを含有させる。試料溶液のアリコート100μLを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には5分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンGも、HRP結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。5分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたルミノールを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、過酸化水素によるルミノールの酸化を促進し、3−アミノフタル酸を生成し、発光する。光は、3M CLEAN−TRACE照度計等の携帯式照度計によって測定する。
ペニシリンGに特に結合するアプタマーをセイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、受け部の表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンGに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ABTS(2,2’−アジノビス[3−エチルベンゾチアゾリン−6−スルホン酸]−二アンモニウム塩)を含有させる。試料溶液のアリコート100μLを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には5分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンGも、HRP結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。5分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたABTSを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、無色のABTSを、青色のラジカルカチオンへと酸化する。青色の強度は、カラーチャートとの比較によって視覚的に、又は3M CLEAN−TRACE比色計等の比色計によって、評価できる。
ペニシリンGに特に結合するアプタマーをセイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合させ、受け部の表面に取り付けられた流体輸送フィルム上に担持させる。ペニシリンGに対する捕捉抗体を、検出領域上に担持させる。プランジャの下方に位置し、過酸化水素及び任意に界面活性剤を含有する試薬溶液からプランジャを隔離するホイルポーチ内に、ADHP(10−アセチル−3,7−ジヒドロキシフェノキサジン)を含有させる。試料溶液のアリコート100μLを、受け部の試料入口を通してピペットで注入し、試料が反対側のウィックに到達するまで、典型的には5分間、流体輸送フィルムに沿って毛管移動させる。この間、試料中に存在する如何なるペニシリンGも、HRP結合アプタマーと反応し、フィルムに沿って移動し、続いて捕捉抗体と結合して検出領域に保持されるのに十分な時間を有する。5分後、プランジャを押し下げ、ホイルシールに穴を開け、ポーチ内に含有されたADHPを、試薬溶液と接触させる。検出領域に保持されたHRPは、非蛍光性のADHPを、高蛍光性のレゾルフィンへと酸化する。蛍光の強度は、標準UVランプ照射によって視覚的に、又は好適には、蛍光光度計によって励起波長〜570nm及び蛍光波長〜585nmを用い、評価できる。
Claims (12)
- 試料入口を備える受け部と、
前記受け部内に配設され、かつ第1の表面を有するプランジャと、
少なくとも1つの試薬と、
前記プランジャの前記第1の表面に装着された膜と、を備え、
前記膜は、
複数の親和性構成成分が配設された標的結合領域、
毛管力をもたらすウィック、及び
複数の捕捉化合物が固定された検出領域を有し、前記検出領域は前記標的結合領域と前記ウィックとの間に位置する、アッセイ装置。 - 前記プランジャは、前記プランジャに力が加えられると、前記検出領域を、前記ウィックと流体連通している状態から切り離し、かつ前記検出領域を、前記少なくとも1つの試薬と流体連通している状態に置くよう構成される、請求項1に記載のアッセイ装置。
- 前記少なくとも1つの試薬が前記受け部に配設される、請求項1又は2に記載のアッセイ装置。
- 前記親和性構成成分のそれぞれが、抗体、リガンド、ペプチドアプタマー、ヌクレオチドアプタマー、又はこれらの組合せを含む結合部分を含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載のアッセイ装置。
- 前記捕捉化合物が、アプタマー、ペプチド、抗体、リガンド、又はこれらの組合せを含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載のアッセイ装置。
- 前記プランジャが、前記プランジャが前記受け部内で回転されると、前記検出領域を、前記ウィックと流体連通している状態から切り離すよう構成される、請求項1〜5のいずれか一項に記載のアッセイ装置。
- 前記プランジャが、前記第1の表面の反対側の第2の表面と、前記第1の表面及び前記第2の表面と連通している末端部と、を更に備え、前記膜が前記末端部及び前記第2の表面と接触している、請求項1〜6のいずれか一項に記載のアッセイ装置。
- 前記プランジャがばねを備え、前記プランジャが押し下げられると、前記ばねが前記検出領域で前記膜に係合し、かつ前記ばねが伸長し、前記検出領域を、前記ウィックと流体連通している状態から切り離し、かつ前記検出領域を、前記少なくとも1つの試薬と流体連通している状態に置く、請求項1〜7のいずれか一項に記載のアッセイ装置。
- 表面及び試料入口を有する受け部と、
毛管力をもたらすウィックを有し、前記受け部の前記表面に装着された膜と、
前記受け部に配設された少なくとも1つの試薬と、
前記受け部内に配設され、かつ表面を有するプランジャと、
複数の捕捉化合物が固定され、前記プランジャの前記表面に装着された前記検出領域と、を備え、前記検出領域が前記試料入口と前記ウィックとの間に位置する、アッセイ装置。 - 前記検出領域が、前記プランジャに力が加えられると、前記膜と流体連通している状態から、前記試薬と流体連通している状態に移動される、請求項9に記載のアッセイ装置。
- 標的分析種の検出方法であって、
(a)
表面及び試料入口を備える受け部と、
少なくとも1つの試薬と、
前記受け部内に配設され、かつ表面を有するプランジャと、
毛管力をもたらすウィックを有し、前記プランジャの前記表面か、前記受け部の前記表面か、又は両者に装着された膜と、
複数の捕捉化合物が固定された検出領域と、を備え、前記検出領域が、前記試料入口と前記ウィックとの間に位置する、アッセイ装置を提供することと、
(b)標的分析種の含有が予想される試料を提供することと、
(c)前記試料を、前記試料入口を通して前記膜に添加することと、
(d)前記試料が前記検出領域に到達するまで前記膜に沿って前記試料を移動させることと、
(e)前記標的分析種と前記捕捉化合物との反応によって前記標的分析種を固定することと、
(f)前記固定した標的分析種を前記少なくとも1つの試薬と反応させ、検出可能なシグナルを発生させることと、
(g)前記発生したシグナルを検出することと、を含む、方法。 - 前記反応させることが、前記プランジャに力を加え、前記検出領域を、前記ウィックと流体連通している状態から切り離し、かつ前記検出領域を、前記少なくとも1つの試薬と流体連通している状態に置くことを更に含み、前記プランジャに力を加えることが、前記プランジャを回転させること、前記プランジャを押し下げること、又はこれらの組合せを含む、請求項11に記載の方法。
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