JP6360243B1

JP6360243B1 - エモジンを担持するためのナノ粒子の新規な調製方法

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Publication number: JP6360243B1
Application number: JP2017182242A
Authority: JP
Inventors: ▲鄒▼川; ▲廬▼▲ジャオ▼宇; ▲呉▼禹池; ▲劉▼旭生; 林▲啓▼展; ▲廬▼富▲華▼; ▲呉▼秀清
Original assignee: ▲廣▼▲東▼省中医院
Priority date: 2017-03-08
Filing date: 2017-09-22
Publication date: 2018-07-18
Anticipated expiration: 2037-09-22
Also published as: US10421852B2; CN106963745A; JP2018145170A; US20180258257A1

Abstract

【課題】腸管薬物送達に用いられ、より高い付着性をナノ粒子に与えることができ、粘膜上での薬物滞留時間を延ばし、薬物分子の徐放に役立つナノ粒子の調製方法を提供する。
【解決手段】本発明のエモジンを担持するための新型のナノ粒子の調製方法は、（１）Ｌ．Ａ、ｍＰＥＧ、及びイソオクタン酸第一スズを用いて第１の中間生成物を合成し；（２）第１の中間生成物、無水コハク酸、４−ジメチルアミノピリジンで第２の中間生成物を合成し；（３）第２の中間生成物、１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド、及びキトサンで第３の中間生成物を合成し；（４）第３の中間生成物と過ヨウ素酸ナトリウムで第４の中間生成物を合成し；（５）第４の中間生成物と５−アミノ−２−メルカプトベンゾイミダゾールで新型のメルカプト基ナノ粒子を合成する。
【選択図】なし

Description

本発明は生体付着性薬物担体の技術分野に属し、具体的には、エモジンを担持するためのナノ粒子の新規な調製方法に関する。

キトサン（Ｃｈｉｔｏｓａｎ、ＣＳ）は、２−アミノ−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコースとも呼ばれ、キチン（２−アセチルアミノ−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコース）が脱アセチル化した生成物である。キチンは蟹▲殻▼素、甲▲殻▼▲質▼、几丁▲質▼、▲殻▼多糖等とも呼ばれ、天然の線状多糖であり、甲殻綱生物の殻の重要な成分であり、菌類及び藻類等の下等植物の細胞壁にも存在する。キトサンは無毒であり、且つ優れた生体適合性及び生物体内で易分解性等の特徴を有しているため、医療用賦形剤の分野に幅広く応用されている。キトサンは粘膜タンパク質と水素結合及び静電作用を形成することができ、優れた生体付着性を有しているが、このような非共有結合に基づく付着作用は、指定部位での薬物の継続的放出を保証せず、キトサンの応用を制約している一方、キトサンはチオール化された後、付着性が著しく高まるが、これは、チオマー（ｔｈｉｏｍｅｒｓ）が粘膜層とジスルフィド結合を形成することができ、ムコタンパク質中の、システインが豊富なサブ領域に特異的結合が生じるためである。

しかし、チオール化ポリマーはこれまで、疎水性薬物担体としての応用が不十分であり、これは、チオール化ポリマーと疎水性薬物分子の作用が弱く、しばしば、薬物の放出が速い、継続的に放出されない、包埋率が低いといった現象につながるためである。

本発明が解決しようとする技術的課題は、上述の従来技術の欠点を解決するために、エモジンを担持するためのナノ粒子の新規な調製方法を提供することにあり、該新規なチオール化ナノ粒子は、段階的合成の方法によってチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子を合成し、合成過程において最後に、親水性ポリエチレングリコールモノメチルエーテル（ｍＰＥＧ）がポリ乳酸（ＰＬＡ）及びキトサン（ＣＳ）とｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳポリマーを形成すると共に、それをベースに、５−アミノ−２−メルカプトベンゾイミダゾール（ＭＢＩ）によってポリマーをチオール化し、最終的にチオマー（ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩ）を形成する。該チオマー（ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩ）はエモジン等の疏水性薬物を担持して徐放性薬物として用いることができる。チオマーはメルカプト基の酸化によってジスルフィド結合を形成して粘膜表面に付着し、より高い付着性をナノ粒子に与え、粘膜上での薬物の滞留時間を延ばし、薬物分子の徐放に役立つ。同時に、改質されたキトサンが薬物と結合してナノ複合体を形成した後、ｍＰＥＧは複合体表面にコア−シェル構造ミセルを形成することができ、ナノ複合体が細網内皮系（ＲＥＳ）に識別及び排除されないよう保護し、作製された粒子に表面安定作用を持たせ、複合体粒子の体内での長期循環という目的を促進することができる。

上述の技術的課題を解決するため、本発明が採用する技術案は次の通りである：
工程１：５ｇ〜２０ｇのＬ−ラクチド、２ｇ〜１０ｇのポリエチレングリコールモノメチルエーテル、及び０．２ｇ〜１ｇのイソオクタン酸第一スズを２０ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、１３０℃で１８時間反応させた後、純粋なエチルエーテル中に置いて３回沈澱させ、更に４０℃の真空条件下で３日間乾燥させ、第１の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＯＨを得る；
工程２：１０ｇの工程１で調製した第１の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＯＨ、２ｇの無水コハク酸、及び１．２ｇの４−ジメチルアミノピリジンを１００ｍＬのクロロホルムに溶解させ、均一に攪拌した後、２ｍＬのトリエチルアミンを加え、室温で３日間反応させ、エチルエーテル中に置いて３回沈澱させ、濾過を経て濾過ケーキを得て、更に、前記濾過ケーキを４０℃の真空条件下で３日間乾燥させ、最後に第２の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＯＯＨを得る；
工程３：２．５ｇの、工程２で調製した第２の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＯＯＨを４０ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、更に、０．７ｇの１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩及び０．７ｇのＮ−ヒドロキシコハク酸イミドを加え、室温で２４時間反応させ、回転蒸発させた後、ジメチルスルホキシド溶液に溶解させ、更に、キトサンが添加された６０ｍＬのジメチルスルホキシドに加えて２４時間反応させ、３日間透析し、冷凍乾燥させ、第３の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳを得る；前記キトサンの添加量は０．１ｇ〜１ｇであり、脱アセチル度が８５％である；
工程４：０．５ｇの、ステップ３で調製した第３の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳを１４０ｍＬの水に溶かし、さらに、０．３ｇの過ヨウ素酸ナトリウム溶液を加え、室温で２時間インキュベートした後、３００μＬのエチレングリコールを加え、室温の条件下で２時間反応させ、３日間透析し、冷凍乾燥させ、第４の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＣＨＯを得るとともに、４℃で保存し；前記過ヨウ素酸ナトリウム溶液の濃度は２．１４ｇ／Ｌであるステップ４と；
工程５：０．２ｇ〜１ｇの５−アミノ−２−メルカプトベンゾイミダゾールと、０．２ｇの、工程４で調製した第４の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＣＨＯとを４０ｍＬのジメチルスルホキシド溶液に溶解させ、室温で２時間インキュベートし、次いで、０．２ｇ〜２ｇのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを加えて更に室温で２４時間〜７２時間反応させ、３日間透析し、冷凍乾燥させ、エモジンを担持するためのチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子を得て、４℃で保存する；
を備え、
工程３に記載のジメチルスルホキシド溶液と工程５に記載のジメチルスルホキシド溶液とはいずれも、ジメチルスルホキシドと水とが１：１の体積比で混合されてなることを特徴とする、新型の、エモジンを担持するためのナノ粒子の調製方法。

上述の、エモジンを担持するためのナノ粒子の新規な調製方法は、工程１に記載のポリエチレングリコールモノメチルエーテルの平均分子量が１０００〜４０００であることを特徴とする。

上述の、エモジンを担持するためのナノ粒子の新規な調製方法は、工程１に記載のＬ−ラクチドの質量が１４．４ｇであり、ポリエチレングリコールモノメチルエーテルの質量が７．６ｇであり、イソオクタン酸第一スズの質量が０．２ｇであることを特徴とする。

上述の、エモジンを担持するためのナノ粒子の新規な調製方法は、工程３に記載のキトサンの添加量が０．５ｇであることを特徴とする。

上述の、エモジンを担持するためのナノ粒子の新規な調製方法は、工程５に記載の５−アミノ−２−メルカプトベンゾイミダゾールの質量が０．５ｇであることを特徴とする。

上述の、エモジンを担持するためのナノ粒子の新規な調製方法は、工程５に記載のシアノ水素化ホウ素ナトリウムの添加質量が０．２ｇであることを特徴とする。

上述の、エモジンを担持するためのナノ粒子の新規な調製方法は、工程５に記載の反応時間が４８時間であることを特徴とする。

本発明は従来技術と比べ、以下の利点を有する。

１．本発明は、段階的合成の方法によってチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子を合成し、合成過程において最後に、親水性ポリエチレングリコールモノメチルエーテル（ｍＰＥＧ）がポリ乳酸（ＰＬＡ）及びキトサン（ＣＳ）とｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳポリマーを形成するとともに、それをベースに、５−アミノ−２−メルカプトベンゾイミダゾール（ＭＢＩ）によってポリマーをチオール化させ、最終的にチオマー（ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩ）を形成する。チオマーはメルカプト基の酸化によってジスルフィド結合を形成して粘膜表面に付着し、より高い付着性を新型のチオール化ナノ粒子に与え、粘膜上での薬物の滞留時間を延ばし、薬物分子の徐放に役立つ。同時に、改質されたキトサンが薬物と結合してナノ複合体を形成した後、ポリエチレングリコールモノメチルエーテルは複合体表面にコア−シェル構造ミセルを形成することができ、ナノ複合体が細網内皮系（ＲＥＳ）に識別および排除されないよう保護し、作製された新型のチオール化ナノ粒子に表面安定作用を持たせ、複合体粒子の生物体内での長期循環という目的を促進することができる。

２．本発明を用いて調製したチオール化ナノ粒子がエモジンを担持した後の薬物包埋率は８３．６％以上であり、薬物担持量は３．８９％以上であり、且つ優れた水溶性と生分解性を有する。

３．本発明で調製したチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子は、エモジンを担持するために用いられるのみに限定されず、エモジンに類似する疎水性薬物を担持することに応用し、徐放性薬物の担体として用いることもできる。

以下、図面と実施例を通じて、本発明の技術案について更に詳しく記述する。

本発明の実施例１で調製したチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子のＨＮＭＲスペクトルである。本発明の実施例１で調製したチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子の共役赤外線スペクトルである。本発明の実施例１で調製したチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子の、エモジンを担持する前後における赤外線スペクトルである。

実施例１
工程１；１４．４ｇのＬ−ラクチド（Ｌ．Ａ）、７．６ｇのポリエチレングリコールモノメチルエーテル（ｍＰＥＧ）、及び０．２ｇのイソオクタン酸第一スズを２０ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、１３０℃で１８時間反応させた後、純ジエチルエーテル中で３回沈澱させ、４０℃の真空で３日間乾燥させ、第１の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＯＨを得た。

工程２；１０ｇの、工程１で調製した第１の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＯＨ、２ｇの無水コハク酸、及び１．２ｇの４−ジメチルアミノピリジンを１００ｍＬのクロロホルムに溶かし、均一に攪拌した後、２ｍＬのトリエチルアミンを加え、室温で３日間反応させ、ジエチルエーテルに３回沈澱させ、濾過し、４０℃の真空で３日間乾燥させ、第２の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＯＯＨを得た。

工程３；２．５ｇの、工程２で調製した第２の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＯＯＨを４０ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、０．７ｇの１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩及び０．７ｇのＮ−ヒドロキシコハク酸イミドを加え、室温で２４時間反応させ、回転蒸発（旋蒸）させた後、ジメチルスルホキシド溶液に溶解させ、０．５ｇのキトサンを含む６０ｍＬのジメチルスルホキシド溶媒に加え、２４時間反応させ、３日間透析し、冷凍乾燥させて第３の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳを得；前記ジメチルスルホキシド溶液はいずれも、ジメチルスルホキシドと水が１：１の体積比で混合されてなるものである。

工程４；０．５ｇの、ステップ３で調製した第３の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳを１４０ｍＬの水に溶解させ、０．３ｇの過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ_４）溶液を加え、室温で２時間インキュベートし、３００μＬのエチレングリコールを加え、室温で２時間反応させ、３日間透析し、冷凍乾燥させ、第４の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＣＨＯを得た。これを４℃で保存した。前記過ヨウ素酸ナトリウム溶液の濃度は２．１４ｇ／Ｌである。

工程５；０．５ｇの５−アミノ−２−メルカプトベンゾイミダゾール（ＭＢＩ）と、０．２ｇの、工程４で調製した第４の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＣＨＯとを４０ｍＬのジメチルスルホキシド溶液中で均一に混合し、前記ジメチルスルホキシド溶液はいずれもジメチルスルホキシドと水が１：１の体積比で混合されてなるものであり、室温で２時間インキュベートした後、０．２ｇのＮａＣＮＢＨ_３を加え、室温で４８時間反応させる。３日間透析し、冷凍乾燥させてチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子を得た。これを４℃で保存した。

本実施例で調製したｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子を脱イオン水中に分散させ、完全に分散させることができ、質量含有量が４０％のエモジン薬物が溶け込んだエタノール溶液を加え、超音波処理し、その後、磁力攪拌処理を行い、攪拌された混合液を８０００ｒｐｍで遠心処理し、最後に、薬物を担持したチオール化グアーガムナノ粒子を冷凍し、最終的に薬物を担持するナノターゲティング徐放制御系を得る。図３は、本実施例で調製したチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子の、エモジンを担持する前後における赤外線スペクトルであり、図中から、図３においてエモジンを担持した後、それが４３６ｎｍにおいて吸収されており、エモジンをチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子上に首尾よく担持させていることを明らかにしていることが分かる。最後に、検出したところ、本実施例で調製したチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子の薬物担持後の包埋率は９１％であり、薬物担持量は５．０１％である。

図１は、本実施例で調製したチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子のＨＮＭＲスペクトルであり、図２は、本実施例で調製したチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子の共役赤外線スペクトルであり、図２から、それぞれ１７５７ｃｍ^−１、１１９０ｃｍ^−１、１１３４ｃｍ^−１、１０９７ｃｍ^−１において、１６２９ｃｍ^−１ではアミドの特徴的吸収ピークであり、６９２ｃｍ^−１、７８４ｃｍ^−１の存在がベンゼン環の存在を証明しており、図１のＨＮＭＲスペクトル中の化学シフトと７．０８ｐｐｍ、７．５ｐｐｍで対応し；１４５８ｃｍ^−１、１３６１ｃｍ^−１は、−ＣＨ_３である変形振動吸収ピークに属し、２８８３ｃｍ^−１、２９４９ｃｍ^−１は−ＣＨ_２−の反伸縮振動吸収ピークであり、３４４４ｃｍ^−１に比較的強い吸収ピークがあり、ＮＨの特徴的伸縮振動吸収ピークであり、且つ一つのみが第２級アミンであり、吸収ピークが比較的強く、１０４５ｃｍ^−１においては第１級アルコールの特徴的吸収ピークである。化学シフトは３．６５ｐｐｍ、５．２ｐｐｍでそれぞれポリエチレングリコールとポリ乳酸上の水素の位置に対応し、改質が成功していることを更に証明していることが分かる。

本実施例の調製過程において、親水性ポリエチレングリコールモノメチルエーテル（ｍＰＥＧ）とポリ乳酸（ＰＬＡ）がｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳポリマーを形成し、これをベースに、５−アミノ−２−メルカプトベンゾイミダゾール（ＭＢＩ）によってポリマーをチオール化し、最終的にチオマー（ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩ）を形成する。チオマーはメルカプト基の酸化によってジスルフィド結合を形成して粘膜表面に付着し、粘膜上での薬物の滞留時間を延ばし、薬物分子の吸収に役立ち、調製したチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子に、より高い付着性を与える。同時に、改質されたキトサンが薬物と結合してナノ複合体を形成した後、ポリエチレングリコールモノメチルエーテルは複合体表面にコア−シェル構造ミセルを形成することができ、ナノ複合体が細網内皮系（ＲＥＳ）に識別及び排除されないよう保護し、作製された、調製されたチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子に表面安定作用を持たせ、複合体粒子の生物体内での長期循環という目的を促進することができる。

実施例２
工程１：５ｇのＬ−ラクチド（Ｌ．Ａ）、２ｇのポリエチレングリコールモノメチルエーテル（ｍＰＥＧ）、及び０．６ｇのイソオクタン酸第一スズを２０ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、１３０℃で１８時間反応させた後、純ジエチルエーテル中で３回沈澱させ、４０℃の真空で３日間乾燥させ、第１の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＯＨを得た。

工程２：１０ｇの、工程１で調製した第１の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＯＨ、２ｇの無水コハク酸、及び１．２ｇの４−ジメチルアミノピリジンを１００ｍＬのクロロホルムに溶解させ、均一に攪拌した後、２ｍＬのトリエチルアミンを加え、室温で３日間反応させ、ジエチルエーテルに３回沈澱させ、濾過し、４０℃の真空で３日間乾燥させ、第２の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＯＯＨを得た。

工程３；２．５ｇの、工程２で調製した第２の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＯＯＨを４０ｍＬのジクロロメタン溶液に溶解させ、０．７ｇの１−エチル（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩及び０．７ｇのＮ−ヒドロキシコハク酸イミドを加えて、室温で２４時間反応させ、回転蒸発（旋蒸）させた後、ジメチルスルホキシド溶液に溶解させ、０．５ｇのキトサンを含む６０ｍＬのジメチルスルホキシド溶媒に加え、２４時間反応させ、３日間透析し、冷凍乾燥させて第３の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳを得た。ここで、前記ジメチルスルホキシド溶液はいずれも、ジメチルスルホキシドと水が１：１の体積比で混合されてなるものである。

工程４；０．５ｇの、工程３で調製した第３の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳを１４０ｍＬの水に溶解させ、０．３ｇの過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ_４）溶液を加え、室温で２時間インキュベートし、３００μＬのエチレングリコールを加え、室温で２時間反応させ、３日間透析し、冷凍乾燥させ、第４の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＣＨＯを得た。これを４℃で保存した。前記過ヨウ素酸ナトリウム溶液の濃度は２．１４ｇ／Ｌである。

工程５；０．２ｇの５−アミノ−２−メルカプトベンゾイミダゾール（ＭＢＩ）と、０．２ｇの、工程４で調製した第４の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＣＨＯとを４０ｍＬのジメチルスルホキシド溶液中で均一に混合し、室温で２時間インキュベートした後、０．５ｇのＮａＣＮＢＨ_３を加え、室温で２４時間反応させた。３日間透析し、冷凍乾燥させてチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子を得た。これを４℃で保存した。前記ジメチルスルホキシド溶液はいずれも、ジメチルスルホキシドと水が１：１の体積比で混合されてなるものである。

本実施例で調製したｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子を脱イオン水中に分散させ、完全に分散させることができ、エモジン薬物が溶解した４０％エタノール溶液を加え、超音波処理し、その後、磁力攪拌処理を行い、攪拌された混合液を８０００ｒｐｍで遠心処理し、最後に、薬物を担持したチオール化グアーガムナノ粒子を冷凍し、最終的に薬物を担持するナノターゲティング徐放制御系を得る。検出したところ、本実施例で調製したチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子の薬物担持後の包埋率は８６．３％であり、薬物担持量は４．１１％であった。

実施例３
工程１；２０ｇのＬ−ラクチド（Ｌ．Ａ）、１０ｇのポリエチレングリコールモノメチルエーテル（ｍＰＥＧ）、及び１ｇのイソオクタン酸第一スズを２０ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、１３０℃で１８時間反応させた後、純ジエチルエーテル中で３回沈澱させ、４０℃の真空で３日間乾燥させ、第１の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＯＨを得た。

工程３；２．５ｇの、工程２で調製した第２の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＯＯＨを４０ｍＬのジクロロメタン溶液に溶解させ、０．７ｇの１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩及び０．７ｇのＮ−ヒドロキシコハク酸イミドを加えて室温で２４時間反応させ、回転蒸発（旋蒸）させた後、ジメチルスルホキシド溶液に溶解させ、０．５ｇのキトサンを含む６０ｍＬのジメチルスルホキシド溶液を加え、２４時間反応させ、３日間透析し、冷凍乾燥させて第３の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳを得た。前記ジメチルスルホキシド溶液はいずれも、ジメチルスルホキシドと水が１：１の体積比で混合されてなるものである。

工程４；１ｇの、工程３で調製した第３の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳを１４０ｍＬの水に溶解させ、０．３ｇの過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ_４）溶液を加え、室温で２時間インキュベートし、３００μＬのエチレングリコールを加え、室温で２時間反応させ、３日間透析し、冷凍乾燥させ、第４の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＣＨＯを得た。これを４℃で保存した。前記過ヨウ素酸ナトリウム溶液の濃度は２．１４ｇ／Ｌである。

工程５；１ｇの５−アミノ−２−メルカプトベンゾイミダゾール（ＭＢＩ）と、０．２ｇの、工程４で調製した第４の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＣＨＯとを４０ｍＬのジメチルスルホキシド溶液に均一に混合した。前記ジメチルスルホキシド溶液はいずれも、ジメチルスルホキシドと水が１：１の体積比で混合されてなるものである。室温で２時間インキュベートした後、２ｇのＮａＣＮＢＨ_３を加え、室温で７２時間反応させ、３日間透析し、冷凍乾燥させてチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子を得た。これを４℃で保存した。

本実施例で調製したｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子を脱イオン水中に分散させ、完全に分散させることができ、エモジン薬物が溶解した４０％エタノール溶液を加え、超音波処理し、その後、磁力攪拌処理を行い、攪拌された混合液を８０００ｒｐｍで遠心処理し、最後に、薬物を担持したチオール化グアーガムナノ粒子を冷凍し、最終的に薬物を担持するナノターゲティング徐放制御系を得る。検出したところ、本実施例で調製したチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子の薬物担持後の包埋率は８３．６％であり、薬物担持量は３．８９％であった。

上記は本発明の好ましい実施例であるに過ぎず、本発明に対して如何なる制限を加えるものでもない。発明技術の実質に基づいて、以上の実施例に対して行われた如何なる簡単な修正、変更、及び同等な変化も、依然として本発明の技術案の保護範囲に全て属する。

基礎出願（出願番号；２０１７１０１３３０５４．９出願国；中華人民共和国）の明細書を以下に添付する。

Claims

工程１：５ｇ〜２０ｇのＬ−ラクチド、２ｇ〜１０ｇのポリエチレングリコールモノメチルエーテル、及び０．２ｇ〜１ｇのイソオクタン酸第一スズを２０ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、１３０℃で１８時間反応させた後、純粋なエチルエーテル中に置いて３回沈澱させ、更に４０℃の真空条件下で３日間乾燥させ、第１の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＯＨを得る；
工程２：１０ｇの工程１で調製した第１の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＯＨ、２ｇの無水コハク酸、及び１．２ｇの４−ジメチルアミノピリジンを１００ｍＬのクロロホルムに溶解させ、均一に攪拌した後、２ｍＬのトリエチルアミンを加え、室温で３日間反応させ、エチルエーテル中に置いて３回沈澱させ、濾過を経て濾過ケーキを得て、更に、前記濾過ケーキを４０℃の真空条件下で３日間乾燥させ、最後に第２の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＯＯＨを得る；
工程３：２．５ｇの、工程２で調製した第２の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＯＯＨを４０ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、更に、０．７ｇの１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩及び０．７ｇのＮ−ヒドロキシコハク酸イミドを加え、室温で２４時間反応させ、回転蒸発させた後、ジメチルスルホキシド溶液に溶解させ、更に、キトサンが添加された６０ｍＬのジメチルスルホキシドに加えて２４時間反応させ、３日間透析し、冷凍乾燥させ、第３の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳを得る；前記キトサンの添加量は０．１ｇ〜１ｇであり、脱アセチル度が８５％である；
工程４：０．５ｇの、ステップ３で調製した第３の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳを１４０ｍＬの水に溶かし、さらに、０．３ｇの過ヨウ素酸ナトリウム溶液を加え、室温で２時間インキュベートした後、３００μＬのエチレングリコールを加え、室温の条件下で２時間反応させ、３日間透析し、冷凍乾燥させ、第４の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＣＨＯを得るとともに、４℃で保存し；前記過ヨウ素酸ナトリウム溶液の濃度は２．１４ｇ／Ｌであるステップ４と；
工程５：０．２ｇ〜１ｇの５−アミノ−２−メルカプトベンゾイミダゾールと、０．２ｇの、工程４で調製した第４の中間生成物ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＣＨＯとを４０ｍＬのジメチルスルホキシド溶液に溶解させ、室温で２時間インキュベートし、次いで、０．２ｇ〜２ｇのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを加えて更に室温で２４時間〜７２時間反応させ、３日間透析し、冷凍乾燥させ、エモジンを担持するためのチオール化ｍＰＥＧ−ＰＬＡ−ＣＳ−ＭＢＩナノ粒子を得て、４℃で保存する；
を備え、
工程３に記載のジメチルスルホキシド溶液と工程５に記載のジメチルスルホキシド溶液とはいずれも、ジメチルスルホキシドと水とが１：１の体積比で混合されてなることを特徴とする、新型の、エモジンを担持するためのナノ粒子の調製方法。
工程１に記載のポリエチレングリコールモノメチルエーテルの平均分子量が１０００〜４０００である、請求項１に記載の新規なエモジンを担持するためのナノ粒子の調製方法。
工程１に記載のＬ−ラクチドの質量が１４．４ｇであり、ポリエチレングリコールモノメチルエーテルの質量が７．６ｇであり、及びイソオクタン酸第一スズの質量が０．２ｇである、請求項１に記載の新規なエモジンを担持するためのナノ粒子の調製方法。
工程３に記載のキトサンの添加量が０．５ｇである、請求項１に記載の新規なエモジンを担持するためのナノ粒子の調製方法。
工程５に記載の５−アミノ−２−メルカプトベンゾイミダゾールの質量が０．５ｇである、請求項１に記載の新規なエモジンを担持するためのナノ粒子の調製方法。
工程５に記載のシアノ水素化ホウ素ナトリウムの添加量が０．２ｇである、請求項１に記載の新規なエモジンを担持するためのナノ粒子の調製方法。
前記工程５の反応時間が４８時間である、請求項１に記載の新規なエモジンを担持するためのナノ粒子の調製方法。