JP6334174B2 - 創傷治癒剤 - Google Patents
創傷治癒剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6334174B2 JP6334174B2 JP2014002221A JP2014002221A JP6334174B2 JP 6334174 B2 JP6334174 B2 JP 6334174B2 JP 2014002221 A JP2014002221 A JP 2014002221A JP 2014002221 A JP2014002221 A JP 2014002221A JP 6334174 B2 JP6334174 B2 JP 6334174B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- sequence
- amino acid
- wound healing
- acid sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Description
本発明は、創傷治癒剤に関する。
熱傷、採皮創、皮膚剥削創、外傷性皮膚欠損創、褥瘡性皮膚潰瘍及び糖尿病性皮膚潰瘍等の創傷を治癒するためには、創傷部を適度な湿潤環境に保ち、細胞増殖を促す環境を作り出す必要がある。そのために患部に適応される創傷被覆材として、従来、ガーゼ及び脱脂綿等が用いられている。これらは、滲出液の吸収が早い反面、細菌に感染しやすく、創面が乾燥してしまうと取り外す際に痛みや出血等を伴うという問題がある。また、創面を乾燥させないために、創傷被覆材と軟膏等を併用することも行われているが、滲出液の吸収が不充分となり、創面が過度に湿った状態になってしまう問題がある。
また、ガーゼ、脱脂綿及び軟膏等に代わり、適度な湿潤環境を維持するために、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）ゲル（特許文献１）等の湿潤環境維持を目的とした創傷被覆材が用いられる場合がある。しかしながら、ＣＭＣゲルは滲出液等によりゲル構造を保持することが難しく、創傷部から脱離してしまったり、菌感染の温床になってしまう問題がある。
一方で、患部を保護するだけでなく、肉芽組織形成や上皮化を促進する創傷治癒剤として、コラーゲンスポンジ（特許文献２）が知られている。コラーゲンスポンジは生体適合性が良いなどの特徴を有するものの、湿潤環境維持に乏しく、細菌に感染しやすい、細菌が増殖しやすい、滲出液により劣化する、及び材料が入手困難である等の問題がある。
また、創傷治癒においては、ケロイドや瘢痕により創傷部が拘縮を起こしてしまう問題がある。そこで、創傷被覆剤や創傷治癒剤に拘縮を抑制する機能付与が望まれているが、有効なものは存在しない。
また、ガーゼ、脱脂綿及び軟膏等に代わり、適度な湿潤環境を維持するために、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）ゲル（特許文献１）等の湿潤環境維持を目的とした創傷被覆材が用いられる場合がある。しかしながら、ＣＭＣゲルは滲出液等によりゲル構造を保持することが難しく、創傷部から脱離してしまったり、菌感染の温床になってしまう問題がある。
一方で、患部を保護するだけでなく、肉芽組織形成や上皮化を促進する創傷治癒剤として、コラーゲンスポンジ（特許文献２）が知られている。コラーゲンスポンジは生体適合性が良いなどの特徴を有するものの、湿潤環境維持に乏しく、細菌に感染しやすい、細菌が増殖しやすい、滲出液により劣化する、及び材料が入手困難である等の問題がある。
また、創傷治癒においては、ケロイドや瘢痕により創傷部が拘縮を起こしてしまう問題がある。そこで、創傷被覆剤や創傷治癒剤に拘縮を抑制する機能付与が望まれているが、有効なものは存在しない。
本発明は、菌増殖を抑制し、かつ肉芽組織形成や上皮化を促進し、さらに拘縮抑制できる創傷治癒剤を提供することを目的とする。
本発明の創傷治癒剤は、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）並びに下記アミノ酸配列（Ｘ）及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）を有するタンパク質（Ａ）と水とを含む創傷治癒剤であって、タンパク質（Ａ）が、（ＧＡＧＡＧＳ） 4 配列（５）及び（ＧＶＧＶＰ） 4 ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ） 3 配列（６）を有するタンパク質（Ａ１１−１−１）であって、（Ａ）の円二色性スペクトル法によるβシート構造率が２５〜６０％である創傷治癒剤である。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）中の１〜２個のアミノ酸がそれぞれリシン又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）中の１〜２個のアミノ酸がそれぞれリシン又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列。
本発明の創傷治癒剤は、菌増殖抑制作用があり、肉芽組織形成や上皮化促進作用に優れ、拘縮抑制作用に優れているという効果を奏する。
本発明において、タンパク質（Ａ）は、天然物からの抽出、有機合成法（酵素法、固相合成法及び液相合成法等）及び遺伝子組み換え法等によって得られる。有機合成法に関しては、「生化学実験講座１、タンパク質の化学ＩＶ（１９８１年７月１日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」又は「続生化学実験講座２、タンパク質の化学（下）（昭和６２年５月２０日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」に記載されている方法等が適用できる。遺伝子組み換え法に関しては、特許第３３３８４４１号公報に記載されている方法等が適用できる。天然物からの抽出、有機合成法及び遺伝子組み換え法はともに、タンパク質（Ａ）を得られるが、アミノ酸配列を簡便に変更でき、安価に大量生産できるという観点等から、遺伝子組み換え法が好ましい。
本発明の創傷治癒剤は、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）並びに下記アミノ酸配列（Ｘ）及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）を有するタンパク質（Ａ）と水とを含む創傷治癒剤であって、（Ａ）の円二色性スペクトル法によるβシート構造率が２５〜６０％である創傷治癒剤である。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）の１〜２個のアミノ酸がそれぞれリシン又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列。
本発明において、βシート構造率が上記範囲であることで、タンパク質（Ａ）中のアミノ酸配列（Ｘ）及び／又はアミノ酸配列（Ｘ’）が効率よく細胞と相互作用し、肉芽組織形成作用や上皮化促進作用に優れる。また、βシート構造率が上記範囲であることで、拘縮抑制作用が優れる。
また、本発明の創傷治癒剤は、時間の経過及び熱等の刺激を加える等によりゲル化するので、創傷に適用した際にゲル化し、創傷部を密閉することができ、菌の増殖を抑制することができる。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）の１〜２個のアミノ酸がそれぞれリシン又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列。
本発明において、βシート構造率が上記範囲であることで、タンパク質（Ａ）中のアミノ酸配列（Ｘ）及び／又はアミノ酸配列（Ｘ’）が効率よく細胞と相互作用し、肉芽組織形成作用や上皮化促進作用に優れる。また、βシート構造率が上記範囲であることで、拘縮抑制作用が優れる。
また、本発明の創傷治癒剤は、時間の経過及び熱等の刺激を加える等によりゲル化するので、創傷に適用した際にゲル化し、創傷部を密閉することができ、菌の増殖を抑制することができる。
本発明のタンパク質（Ａ）は、（Ａ）の円二色性スペクトル法によるβシート構造率が２５〜６０％であるタンパク質である。タンパク質（Ａ）の配列が同じでも、（Ａ）の作製方法、（Ａ）の精製方法、（Ａ）を溶解させる溶媒のｐＨ及び溶媒の極性等によりβシート構造率は異なる。
βシート構造率は、ゲル化能維持の観点から、２５．５〜６０％が好ましく、さらに好ましくは３０〜６０％、特に好ましくは３５〜６０％である。
βシート構造率は、（Ａ）を硫安沈殿、限外濾過、アフィニティクロマトグラフィー及び陰イオン交換クロマトグラフィー等により、リフォールディングすることによって増加させることができる。また、変性剤や熱等で変性させることによって低下させることができる。
（Ａ）の円二色性スペクトル法によるβシート構造率は、下記測定法によって測定する。
βシート構造率は、ゲル化能維持の観点から、２５．５〜６０％が好ましく、さらに好ましくは３０〜６０％、特に好ましくは３５〜６０％である。
βシート構造率は、（Ａ）を硫安沈殿、限外濾過、アフィニティクロマトグラフィー及び陰イオン交換クロマトグラフィー等により、リフォールディングすることによって増加させることができる。また、変性剤や熱等で変性させることによって低下させることができる。
（Ａ）の円二色性スペクトル法によるβシート構造率は、下記測定法によって測定する。
＜βシート構造率の測定方法＞
タンパク質（Ａ）を０．３ｍｇ／ｍｌとなるように脱イオン水（４℃）に溶解し、（Ａ）の水溶液を作製する。作製した（Ａ）の水溶液を円二色性スペクトル測定器（日本分光株式会社製、「Ｊ−８２０」）にて測定し（測定温度：４℃）、二次構造解析プログラム（ＪＷＳＳＥ型−４８０型：日本分光株式会社製）にてβシート構造率を算出する。
タンパク質（Ａ）を０．３ｍｇ／ｍｌとなるように脱イオン水（４℃）に溶解し、（Ａ）の水溶液を作製する。作製した（Ａ）の水溶液を円二色性スペクトル測定器（日本分光株式会社製、「Ｊ−８２０」）にて測定し（測定温度：４℃）、二次構造解析プログラム（ＪＷＳＳＥ型−４８０型：日本分光株式会社製）にてβシート構造率を算出する。
タンパク質（Ａ）において、全アミノ酸数のうちＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合［｛（Ａ）中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／（Ａ）の全アミノ酸数×１００］は、βシート構造率を適度にする観点から、５〜５５％が好ましく、さらに好ましくは１０〜５５％であり、特に好ましくは２０〜５５％であり、最も好ましくは２５〜４５％である。
タンパク質（Ａ）における全アミノ酸数のうちＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により求める。
タンパク質（Ａ）における全アミノ酸数のうちＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により求める。
＜ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合＞
特定のアミノ酸残基で切断出来る切断方法の２種類以上を用いて、タンパク質（Ａ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分離した後、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、タンパク質（Ａ）の全配列を決定する。その後、以下記載の測定式にてＧＡＧＡＧＳ配列（１）の占める割合を算出する。
ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の占める割合（％）＝［｛ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／｛（Ａ）中の全アミノ酸の数｝×１００
特定のアミノ酸残基で切断出来る切断方法の２種類以上を用いて、タンパク質（Ａ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分離した後、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、タンパク質（Ａ）の全配列を決定する。その後、以下記載の測定式にてＧＡＧＡＧＳ配列（１）の占める割合を算出する。
ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の占める割合（％）＝［｛ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／｛（Ａ）中の全アミノ酸の数｝×１００
タンパク質（Ａ）は、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）を有するが、βシート構造率を適度にする観点から、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ）を有することが好ましい。
ポリペプチド鎖（Ｓ）において、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が連続する個数は、βシート構造率を適度にする観点から、２〜１００個が好ましく、さらに好ましくは２〜５０個であり、特に好ましくは２〜１０個である。
ポリペプチド鎖（Ｓ）において、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が連続する個数は、βシート構造率を適度にする観点から、２〜１００個が好ましく、さらに好ましくは２〜５０個であり、特に好ましくは２〜１０個である。
本発明において、タンパク質（Ａ）は、下記アミノ酸配列（Ｘ）を少なくとも１個及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）を少なくとも１個有するものである。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）の１〜２個のアミノ酸がそれぞれリシン（K）又はアルギニン（R）で置換されたアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）の１〜２個のアミノ酸がそれぞれリシン（K）又はアルギニン（R）で置換されたアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ）としては、細胞との相互作用のしやすさ（細胞親和性）及び（Ａ）がゲル化する観点から、ＶＰＧＶＧ配列（２）及び／又はＧＶＧＶＰ配列（３）が好ましく、さらに好ましくはＧＶＧＶＰ配列（３）である。
アミノ酸配列（Ｘ’）として、具体的には、ＧＫＧＶＰ配列（７）、ＧＫＧＫＰ配列（８）、ＧＫＧＲＰ配列（９）及びＧＲＧＲＰ配列（１０）等が挙げられる。
アミノ酸配列（Ｘ’）は、細胞親和性及び（Ａ）がゲル化する観点から、ＧＫＧＶＰ配列（７）、ＧＫＧＫＰ配列（８）及びＧＲＧＲＰ配列（１０）からなる群より選ばれる１種以上の配列が好ましく、さらに好ましくはＧＫＧＶＰ配列（７）及び／又はＧＫＧＫＰ配列（８）である。
アミノ酸配列（Ｘ’）は、細胞親和性及び（Ａ）がゲル化する観点から、ＧＫＧＶＰ配列（７）、ＧＫＧＫＰ配列（８）及びＧＲＧＲＰ配列（１０）からなる群より選ばれる１種以上の配列が好ましく、さらに好ましくはＧＫＧＶＰ配列（７）及び／又はＧＫＧＫＰ配列（８）である。
タンパク質（Ａ）は、細胞親和性及び（Ａ）がゲル化する観点から、アミノ酸配列（Ｘ）の１種が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は下記ポリペプチド鎖（Ｙ’）を有することが好ましい。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）：（Ｙ）において全アミノ酸数の０．１〜２０％がそれぞれリシン又はアルギニンで置換されたポリペプチド鎖。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）：（Ｙ）において全アミノ酸数の０．１〜２０％がそれぞれリシン又はアルギニンで置換されたポリペプチド鎖。
ポリペプチド鎖（Ｙ）は、具体的には、（ＶＰＧＶＧ）b配列、（ＧＶＧＶＰ）c配列及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）d配列である。（なお、ｂ〜ｄは、それぞれ、アミノ酸配列（Ｘ）の連続する個数であり、２〜２００の整数である）。
タンパク質（Ａ）１分子中に、ポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、（ＶＰＧＶＧ）b配列、（ＧＶＧＶＰ）c配列及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）d配列からなる群から選ばれる１種を有してもよく、２種以上を有してもいい。
また、タンパク質（Ａ）中にアミノ酸配列（Ｘ）が同種類のポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、上記（Ｘ）の連続する個数は、（Ｙ）ごとに同一でも異なっていてもよい。すなわち、（Ｘ）の連続する個数ｂ〜ｄが同じポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもよく、ｂ〜ｄが異なるポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもよい。
ポリペプチド鎖（Ｙ）としては、細胞親和性、（Ａ）がゲル化する及びβシート構造率を適度にする観点から、（ＶＰＧＶＧ）b配列及び／又は（ＧＶＧＶＰ）c配列が好ましく、さらに好ましくは（ＧＶＧＶＰ）c配列である。
タンパク質（Ａ）１分子中に、ポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、（ＶＰＧＶＧ）b配列、（ＧＶＧＶＰ）c配列及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）d配列からなる群から選ばれる１種を有してもよく、２種以上を有してもいい。
また、タンパク質（Ａ）中にアミノ酸配列（Ｘ）が同種類のポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、上記（Ｘ）の連続する個数は、（Ｙ）ごとに同一でも異なっていてもよい。すなわち、（Ｘ）の連続する個数ｂ〜ｄが同じポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもよく、ｂ〜ｄが異なるポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもよい。
ポリペプチド鎖（Ｙ）としては、細胞親和性、（Ａ）がゲル化する及びβシート構造率を適度にする観点から、（ＶＰＧＶＧ）b配列及び／又は（ＧＶＧＶＰ）c配列が好ましく、さらに好ましくは（ＧＶＧＶＰ）c配列である。
ポリペプチド鎖（Ｙ）は、アミノ酸配列（Ｘ）が２〜２００個連続した（上記ｂ〜ｄが２〜２００である）ポリペプチド鎖であるが、細胞親和性の観点、（Ａ）がゲル化する観点及びβシート構造率を適度にする観点から、連続する個数は２〜１００個（上記ｂ〜ｄが２〜１００）が好ましく、さらに好ましくは２〜５０個（上記ｂ〜ｄが２〜５０）、特に好ましくは２〜４０個（ｂ〜ｄが２〜４０）である。
また、ポリペプチド鎖（Ｙ’）は、（Ｙ）における全アミノ酸数の０．１〜２０％がそれぞれリシン又はアルギニンで置換されたポリペプチド鎖であり、具体的には、アミノ酸配列（Ｘ）が連続したポリペプチド鎖（Ｙ）において、アミノ酸配列（Ｘ）の一部又は全部がアミノ酸配列（Ｘ’）に置き換わったポリペプチド鎖が含まれる。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）において、（Ｙ）中の全アミノ酸数のうちリシン及び／又はアルギニンで置換された割合は、（Ａ）の水への溶解性、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、０．５〜１０％が好ましく、さらに好ましくは１〜５％である。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）において、（Ｙ）中の全アミノ酸数のうちリシン及び／又はアルギニンで置換された割合は、（Ａ）の水への溶解性、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、０．５〜１０％が好ましく、さらに好ましくは１〜５％である。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）であるかどうかは、タンパク質（Ａ）の配列中の全てのＫ及びＲを、他のアミノ酸（Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｐ又はＨ）に置きかえたときに、ポリペプチド鎖（Ｙ）となるかによって判断する。
タンパク質（Ａ）中の（Ｙ）と（Ｙ’）との合計個数は、（Ａ）の水への溶解性、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、１〜１００個が好ましく、さらに好ましくは１〜８０個であり、特に好ましくは１〜６０個であり、最も好ましくは５〜２０個である。
タンパク質（Ａ）中に、（Ｘ）の種類及び／又は連続する個数が異なる（Ｙ）を有している場合は、それぞれを１個として数え、（Ｙ）の個数はその合計である。（Ｙ’）も同様である。
タンパク質（Ａ）が、ポリペプチド鎖（Ｙ）及びポリペプチド鎖（Ｙ’）を合計２個以上有する場合は、ポリペプチド鎖とポリペプチド鎖との間に、介在アミノ酸配列（Ｚ）を有していてもいい。（Ｚ）は、アミノ酸が１個又は２個以上結合したペプチド配列であって、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）、アミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）では無いペプチド配列である。（Ｚ）を構成するアミノ酸の数は、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、１〜３０個が好ましく、さらに好ましくは１〜１５個、特に好ましくは１〜１０個である。（Ｚ）として、具体的には、ＶＡＡＧＹ配列（１１）、ＧＡＡＧＹ配列（１２）及びＬＧＰ配列等が挙げられる。
（Ａ）の全アミノ酸数のうち介在アミノ酸配列（Ｚ）が占めるアミノ酸数の割合［Σ｛（介在アミノ酸配列（Ｚ）中のアミノ酸の数）×（介在アミノ酸配列（Ｚ）の数）｝／｛（Ａ）の全アミノ酸数｝×１００］は、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、０〜２５％が好ましく、さらに好ましくは０〜２２．５％であり、特に好ましくは０〜１５％である。
（Ａ）中の（Ｚ）の含有量（重量％）は、（Ａ）の分子質量を基準として、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、０〜２０重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜１０重量％である。
（Ａ）の全アミノ酸数のうち介在アミノ酸配列（Ｚ）が占めるアミノ酸数の割合［Σ｛（介在アミノ酸配列（Ｚ）中のアミノ酸の数）×（介在アミノ酸配列（Ｚ）の数）｝／｛（Ａ）の全アミノ酸数｝×１００］は、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、０〜２５％が好ましく、さらに好ましくは０〜２２．５％であり、特に好ましくは０〜１５％である。
（Ａ）中の（Ｚ）の含有量（重量％）は、（Ａ）の分子質量を基準として、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、０〜２０重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜１０重量％である。
（Ａ）は、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）、アミノ酸配列（Ｘ）、アミノ酸配列（Ｘ’）及び介在アミノ酸配列（Ｚ）以外にも、両末端に末端アミノ酸配列（Ｔ）を有していてもよい。タンパク質（Ａ）の水への溶解性向上の観点から、（Ａ）の両末端の構造が、（Ｙ）又は（Ｙ’）に（Ｔ）が結合した構造であることが好ましい。
（Ｔ）は、アミノ酸が１個又は２個以上結合したペプチド配列であって、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）、アミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）では無いペプチド配列である。（Ｔ）を構成するアミノ酸の数は、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、１〜１００個が好ましく、さらに好ましくは１〜５０個、特に好ましくは１〜４０個である。
（Ｔ）として、具体的には、ＭＤＰＶＶＬＱＲＲＤＷＥＮＰＧＶＴＱＬＮＲＬＡＡＨＰＰＦＡＳＤＰＭ配列（１３）等が挙げられる。
（Ａ）の全アミノ酸数のうち末端アミノ酸配列（Ｔ）が占めるアミノ酸数の割合は、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、０〜２５％が好ましく、さらに好ましくは０〜２２．５％であり、特に好ましくは０〜１５％である。
（Ａ）中の（Ｔ）の含有量（重量％）は、（Ａ）の分子質量を基準として、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、０〜１０重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜５重量％である。
（Ｔ）は、アミノ酸が１個又は２個以上結合したペプチド配列であって、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）、アミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）では無いペプチド配列である。（Ｔ）を構成するアミノ酸の数は、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、１〜１００個が好ましく、さらに好ましくは１〜５０個、特に好ましくは１〜４０個である。
（Ｔ）として、具体的には、ＭＤＰＶＶＬＱＲＲＤＷＥＮＰＧＶＴＱＬＮＲＬＡＡＨＰＰＦＡＳＤＰＭ配列（１３）等が挙げられる。
（Ａ）の全アミノ酸数のうち末端アミノ酸配列（Ｔ）が占めるアミノ酸数の割合は、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、０〜２５％が好ましく、さらに好ましくは０〜２２．５％であり、特に好ましくは０〜１５％である。
（Ａ）中の（Ｔ）の含有量（重量％）は、（Ａ）の分子質量を基準として、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、０〜１０重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜５重量％である。
タンパク質（Ａ）は、上記末端アミノ酸配列（Ｔ）以外に、発現させた（Ａ）の精製または検出を容易にするために、（Ａ）のＮ末端又はＣ末端に特殊なアミノ酸配列を有するタンパク質又はペプチド（以下これらを「精製タグ」と称する）を有してもいい。精製タグとしては、アフィニティー精製用のタグが利用される。そのような精製タグとしては、ポリヒスチジンからなる６×Ｈｉｓタグ、Ｖ５タグ、Ｘｐｒｅｓｓタグ、ＡＵ１タグ、Ｔ７タグ、ＶＳＶ−Ｇタグ、ＤＤＤＤＫタグ、Ｓタグ、ＣｒｕｚＴａｇ０９ＴＭ、ＣｒｕｚＴａｇ２２ＴＭ、ＣｒｕｚＴａｇ４１ＴＭ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕタグ、Ｈａ．１１タグ及びＫＴ３タグ等がある。
以下に、各精製タグ（ｉ）とそのタグを認識結合するリガンド（ｉｉ）との組み合わせの一例を示す。
（ｉ−１）グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＴＳ） （ｉｉ−１）グルタチオン
（ｉ−２）マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ） （ｉｉ−２）アミロース
（ｉ−３）ＨＱタグ （ｉｉ−３）ニッケル
（ｉ−４）Ｍｙｃタグ （ｉｉ−４）抗Ｍｙｃ抗体
（ｉ−５）ＨＡタグ （ｉｉ−５）抗ＨＡ抗体
（ｉ−６）ＦＬＡＧタグ （ｉｉ−６）抗ＦＬＡＧ抗体
（ｉ−７）６×Ｈｉｓタグ （ｉｉ−７）ニッケル又はコバルト
前記精製タグ配列の導入方法としては、発現用ベクターにおけるタンパク質（Ａ）をコードする核酸の５’又は３’末端に精製タグをコードする核酸を挿入する方法や市販の精製タグ導入用ベクターを使用する方法等が挙げられる。
以下に、各精製タグ（ｉ）とそのタグを認識結合するリガンド（ｉｉ）との組み合わせの一例を示す。
（ｉ−１）グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＴＳ） （ｉｉ−１）グルタチオン
（ｉ−２）マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ） （ｉｉ−２）アミロース
（ｉ−３）ＨＱタグ （ｉｉ−３）ニッケル
（ｉ−４）Ｍｙｃタグ （ｉｉ−４）抗Ｍｙｃ抗体
（ｉ−５）ＨＡタグ （ｉｉ−５）抗ＨＡ抗体
（ｉ−６）ＦＬＡＧタグ （ｉｉ−６）抗ＦＬＡＧ抗体
（ｉ−７）６×Ｈｉｓタグ （ｉｉ−７）ニッケル又はコバルト
前記精製タグ配列の導入方法としては、発現用ベクターにおけるタンパク質（Ａ）をコードする核酸の５’又は３’末端に精製タグをコードする核酸を挿入する方法や市販の精製タグ導入用ベクターを使用する方法等が挙げられる。
タンパク質（Ａ）において、タンパク質（Ａ）の全アミノ酸数のうち、上記介在アミノ酸配列（Ｚ）、末端アミノ酸配列（Ｔ）及び精製タグが占める合計割合は、細胞親和性の観点及び（Ａ）のβターン構造とランダムコイル構造との合計割合を適度にする観点から、０〜２５％が好ましく、さらに好ましくは０〜２２．５％であり、特に好ましくは０〜１５％である。
タンパク質（Ａ）は、１分子中にアミノ酸配列（Ｘ）又は（Ｘ’）を少なくとも１個有していればよいが、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、（Ａ）中のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量（重量％）は、（Ａ）の分子質量を基準として３５〜９５重量％が好ましく、さらに好ましくは５０〜９０重量％である。
また、タンパク質（Ａ）１分子中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量（重量％）は、βシート構造率を適度にする観点から、（Ａ）の分子質量を基準として、５〜６５重量％が好ましく、さらに好ましくは１０〜５０重量％である。
また、タンパク質（Ａ）１分子中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量（重量％）は、βシート構造率を適度にする観点から、（Ａ）の分子質量を基準として、５〜６５重量％が好ましく、さらに好ましくは１０〜５０重量％である。
タンパク質（Ａ）中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量と、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により求めることができる。
＜ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量と、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量の測定法＞
特定のアミノ酸残基で切断出来る切断方法の２種類以上を用いて、タンパク質（Ａ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分離した後、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、タンパク質（Ａ）の全配列を決定する。その後、以下記載の測定式にてＧＡＧＡＧＳ配列（１）、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量を算出する。
ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量（重量％）＝［｛ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の分子質量｝×｛ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数｝］／｛（Ａ）の分子質量｝×１００
アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量（重量％）＝［｛アミノ酸配列（Ｘ）の分子質量｝×｛アミノ酸配列（Ｘ）の数｝＋｛アミノ酸配列（Ｘ’）の分子質量｝×｛アミノ酸配列（Ｘ’）の数｝］／｛（Ａ）の分子質量｝×１００
＜ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量と、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量の測定法＞
特定のアミノ酸残基で切断出来る切断方法の２種類以上を用いて、タンパク質（Ａ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分離した後、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、タンパク質（Ａ）の全配列を決定する。その後、以下記載の測定式にてＧＡＧＡＧＳ配列（１）、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量を算出する。
ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の含有量（重量％）＝［｛ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の分子質量｝×｛ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数｝］／｛（Ａ）の分子質量｝×１００
アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量（重量％）＝［｛アミノ酸配列（Ｘ）の分子質量｝×｛アミノ酸配列（Ｘ）の数｝＋｛アミノ酸配列（Ｘ’）の分子質量｝×｛アミノ酸配列（Ｘ’）の数｝］／｛（Ａ）の分子質量｝×１００
タンパク質（Ａ）において、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は（Ｙ’）並びにＧＡＧＡＧＳ配列（１）及び／又はポリペプチド鎖（Ｓ）を含む場合、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、ポリペプチド鎖（Ｙ）又は（Ｙ’）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）又はポリペプチド鎖（Ｓ）とが交互に化学結合していることが好ましい。
また、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は（Ｙ’）並びにポリペプチド鎖（Ｓ）を含む場合、ポリペプチド鎖（Ｓ）を構成するＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数と、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び（Ｙ’）を構成するアミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）の数との比［配列（１）：｛（Ｘ）及び（Ｘ’）｝］は、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、１：１〜１：１２が好ましく、さらに好ましくは１：１〜１：６であり、次にさらに好ましくは１：１〜１：４であり、特に好ましくは１：２〜１：３である。
また、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は（Ｙ’）並びにポリペプチド鎖（Ｓ）を含む場合、ポリペプチド鎖（Ｓ）を構成するＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数と、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び（Ｙ’）を構成するアミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）の数との比［配列（１）：｛（Ｘ）及び（Ｘ’）｝］は、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、１：１〜１：１２が好ましく、さらに好ましくは１：１〜１：６であり、次にさらに好ましくは１：１〜１：４であり、特に好ましくは１：２〜１：３である。
タンパク質（Ａ）において、ポリペプチド鎖（Ｙ）又は（Ｙ’）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）又はポリペプチド鎖（Ｓ）とが交互に化学結合している場合、交互に繰り返す回数（例えば、タンパク質（Ａ）が｛（Ｙ’）−（Ｓ）｝nで表される場合、繰り返し数はｎ回とする。）は、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、２〜４０が好ましく、さらに好ましくは３〜３０であり、特に好ましくは５〜２０である。
タンパク質（Ａ）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法による分子質量は、細胞親和性及びβシート構造率を適度にする観点から、１５〜２００ｋＤａが好ましく、さらに好ましくは３０〜１５０ｋＤａであり、特に好ましくは４０〜１２０ｋＤａである。
好ましいタンパク質（Ａ）の一部を以下に例示する。
（Ａ１）アミノ酸配列（Ｘ）がＧＶＧＶＰ配列（３）であるタンパク質
（Ａ１１）ＧＶＧＶＰ配列（３）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１）中のアミノ酸がＫ（リシン）で置換されたポリペプチド鎖（Ｙ’１）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有するタンパク質
（Ａ１１−１）ＧＶＧＶＰ配列（３）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１１）の１個のアミノ酸がＫで置換された（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）（Ｙ’１１）と、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）を有するタンパク質
（Ａ１１−１−１）ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）と（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）とを有するタンパク質
具体的には、下記タンパク質が含まれる。
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）を１３個及び（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなる分子質量が約８０ｋＤａの配列（２７）のタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ）
（ｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）を５個及び（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）を５個有し、これらが交互に化学結合してなる分子質量が約３０ｋＤａの配列（２９）のタンパク質
（ｉｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）を２０個及び（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）を２０個有し、これらが交互に化学結合してなる分子質量が約１２０ｋＤａの配列（３０）のタンパク質
（ｉｖ）（ＧＡＧＡＧＳ）2配列（３１）及び（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）をそれぞれ１７個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約８２ｋＤａの配列（１５）のタンパク質（ＳＥＬＰ０Ｋ）
（Ａ１）アミノ酸配列（Ｘ）がＧＶＧＶＰ配列（３）であるタンパク質
（Ａ１１）ＧＶＧＶＰ配列（３）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１）中のアミノ酸がＫ（リシン）で置換されたポリペプチド鎖（Ｙ’１）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有するタンパク質
（Ａ１１−１）ＧＶＧＶＰ配列（３）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１１）の１個のアミノ酸がＫで置換された（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）（Ｙ’１１）と、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）を有するタンパク質
（Ａ１１−１−１）ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）と（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）とを有するタンパク質
具体的には、下記タンパク質が含まれる。
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）を１３個及び（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなる分子質量が約８０ｋＤａの配列（２７）のタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ）
（ｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）を５個及び（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）を５個有し、これらが交互に化学結合してなる分子質量が約３０ｋＤａの配列（２９）のタンパク質
（ｉｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）を２０個及び（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）を２０個有し、これらが交互に化学結合してなる分子質量が約１２０ｋＤａの配列（３０）のタンパク質
（ｉｖ）（ＧＡＧＡＧＳ）2配列（３１）及び（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）をそれぞれ１７個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約８２ｋＤａの配列（１５）のタンパク質（ＳＥＬＰ０Ｋ）
（Ａ１１−２）ＧＶＧＶＰ配列（３）が１２個連続したポリペプチド鎖の１個のアミノ酸がＫで置換された（ＧＶＧＶＰ）6ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）5配列（１４）（Ｙ’１２）と、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）を有するタンパク質
（Ａ１１−２−１）ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）と（ＧＶＧＶＰ）6ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）5配列（１４）とを有するタンパク質
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）を１３個及び（ＧＶＧＶＰ）6ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）5配列（１４）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなる分子質量が約１０５ｋＤａの配列（２８）のタンパク質
（Ａ１１−２−１）ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）と（ＧＶＧＶＰ）6ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）5配列（１４）とを有するタンパク質
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）を１３個及び（ＧＶＧＶＰ）6ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）5配列（１４）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなる分子質量が約１０５ｋＤａの配列（２８）のタンパク質
（Ａ１２）ＧＶＧＶＰ配列（３）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有するタンパク質
具体的には、下記タンパク質が含まれる。
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）8配列（１６）及び（ＧＶＧＶＰ）8配列（１７）をそれぞれ１２個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約９０ｋＤａの配列（１８）のタンパク質（ＳＥＬＰ３）
（ｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）8配列（１６）及び（ＧＶＧＶＰ）40配列（１９）をそれぞれ５個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約１１０ｋＤａの配列（２０）のタンパク質（ＳＥＬＰ６．１）
（ｉｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）6配列（２１）及び（ＧＶＧＶＰ）2配列（２２）をそれぞれ２９個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約１２０ｋＤａの配列（２３）のタンパク質（ＳＬＰ４．１）
具体的には、下記タンパク質が含まれる。
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）8配列（１６）及び（ＧＶＧＶＰ）8配列（１７）をそれぞれ１２個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約９０ｋＤａの配列（１８）のタンパク質（ＳＥＬＰ３）
（ｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）8配列（１６）及び（ＧＶＧＶＰ）40配列（１９）をそれぞれ５個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約１１０ｋＤａの配列（２０）のタンパク質（ＳＥＬＰ６．１）
（ｉｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）6配列（２１）及び（ＧＶＧＶＰ）2配列（２２）をそれぞれ２９個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約１２０ｋＤａの配列（２３）のタンパク質（ＳＬＰ４．１）
（Ａ２）アミノ酸配列（Ｘ）がＶＰＧＶＧ配列（２）であるタンパク質
（Ａ２１）ＶＰＧＶＧ配列（２）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ２）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）を有するタンパク質
（ｉ）ＧＡＧＡＧＳ配列（１）、（ＶＰＧＶＧ）4配列（２４）及び（ＶＰＧＶＧ）8配列（２５）をそれぞれ４０個有し、これらが配列（２４）、配列（１）、配列（２５）の順に結合したブロックが４０個化学結合してなる構造を有する分子質量約２００ｋＤａの配列（２６）のタンパク質（ＥＬＰ１．１）
（Ａ２１）ＶＰＧＶＧ配列（２）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ２）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）を有するタンパク質
（ｉ）ＧＡＧＡＧＳ配列（１）、（ＶＰＧＶＧ）4配列（２４）及び（ＶＰＧＶＧ）8配列（２５）をそれぞれ４０個有し、これらが配列（２４）、配列（１）、配列（２５）の順に結合したブロックが４０個化学結合してなる構造を有する分子質量約２００ｋＤａの配列（２６）のタンパク質（ＥＬＰ１．１）
本発明の創傷治癒剤は、上記タンパク質（Ａ）及び水を含むものである。
創傷治癒剤中のタンパク質（Ａ）の含有量（重量％）は、（Ａ）の水への溶解性、（Ａ）がゲル化する観点及び創傷への適用のしやすさの観点から、創傷治癒剤の重量を基準として、５〜３０重量％が好ましく、さらに好ましくは１０〜３０重量％、特に好ましくは１５〜３０重量％である。
創傷治癒剤中の水の含有量（重量％）は、（Ａ）の水への溶解性、（Ａ）がゲル化する観点及び創傷への適用のしやすさの観点から、創傷治癒剤の重量を基準として、７０〜９５重量％が好ましく、さらに好ましくは７０〜９０重量％であり、特に好ましくは７０〜８５重量％である。
創傷治癒剤中のタンパク質（Ａ）の含有量（重量％）は、（Ａ）の水への溶解性、（Ａ）がゲル化する観点及び創傷への適用のしやすさの観点から、創傷治癒剤の重量を基準として、５〜３０重量％が好ましく、さらに好ましくは１０〜３０重量％、特に好ましくは１５〜３０重量％である。
創傷治癒剤中の水の含有量（重量％）は、（Ａ）の水への溶解性、（Ａ）がゲル化する観点及び創傷への適用のしやすさの観点から、創傷治癒剤の重量を基準として、７０〜９５重量％が好ましく、さらに好ましくは７０〜９０重量％であり、特に好ましくは７０〜８５重量％である。
創傷治癒剤中の水としては、滅菌されたものであれば特に限定するものではない。滅菌方法としては、０．２μｍ以下の孔径を持つ精密ろ過膜を通した水、限外ろ過膜を通した水、逆浸透膜を通した水及びオートクレーブ（１２１℃）で２０分間加熱して過熱滅菌したイオン交換水等が挙げられる。
本発明の創傷治癒剤は、タンパク質（Ａ）及び水以外に無機塩及び／又はリン酸（塩）を含んでもいい。
無機塩として、具体的には、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム及び炭酸水素マグネシウム等が挙げられる。リン酸塩は無機塩に含まない。
創傷治癒剤中の無機塩の含有量（重量％）は、人間の体液と同等にするという観点から、創傷治癒剤の重量を基準として０．５〜１．３重量％が好ましく、さらに好ましくは０．７〜１．１重量％、特に好ましくは０．８５〜０．９５重量％である。
創傷治癒剤中の無機塩の含有量（重量％）は、人間の体液と同等にするという観点から、創傷治癒剤の重量を基準として０．５〜１．３重量％が好ましく、さらに好ましくは０．７〜１．１重量％、特に好ましくは０．８５〜０．９５重量％である。
リン酸（塩）は、リン酸及び／又はリン酸塩を意味する。
リン酸（塩）としては、リン酸及びリン酸塩が挙げられる。
塩としては、アルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩が挙げられ、具体的には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩等が挙げられる。
創傷治癒剤中のリン酸（塩）の含有量（重量％）は、創傷治癒の観点から、創傷治癒剤の重量を基準として０．１０〜０．３０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．１２〜０．２８重量％、特に好ましくは０．１４〜０．２６重量％である。
リン酸（塩）としては、リン酸及びリン酸塩が挙げられる。
塩としては、アルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩が挙げられ、具体的には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩等が挙げられる。
創傷治癒剤中のリン酸（塩）の含有量（重量％）は、創傷治癒の観点から、創傷治癒剤の重量を基準として０．１０〜０．３０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．１２〜０．２８重量％、特に好ましくは０．１４〜０．２６重量％である。
創傷治癒剤のｐＨは、（Ａ）の安定性及び創傷治癒の観点から、５〜９が好ましく、さらに好ましくは６〜８．５である。
この範囲であれば、創傷治癒剤中のタンパク質（Ａ）が変性することなく、βシート構造率を維持でき、創傷治癒剤を用いて菌増殖を抑制し、肉芽組織形成や上皮化を促進し、拘縮抑制をすることができる。
この範囲であれば、創傷治癒剤中のタンパク質（Ａ）が変性することなく、βシート構造率を維持でき、創傷治癒剤を用いて菌増殖を抑制し、肉芽組織形成や上皮化を促進し、拘縮抑制をすることができる。
本発明の創傷治癒剤は、各成分を混合することにより得られ、製造方法は特に限定されるものではない。１例を下記に示す。
（１）本発明のタンパク質（Ａ）及び水を４〜２５℃で混合し、創傷治癒剤とする。水中には必要により塩及び／又はリン酸（塩）を含んでもいい。また、タンパク質（Ａ）を水に溶解させた後、必要により塩及び／又はリン酸（塩）を含むようにしてもよい。
（１）本発明のタンパク質（Ａ）及び水を４〜２５℃で混合し、創傷治癒剤とする。水中には必要により塩及び／又はリン酸（塩）を含んでもいい。また、タンパク質（Ａ）を水に溶解させた後、必要により塩及び／又はリン酸（塩）を含むようにしてもよい。
創傷治癒剤の患部への適用方法としては、菌増殖抑制、肉芽組織形成、上皮化促進及び拘縮抑制の観点から、患部の欠損部分を埋めるように注入することが好ましい。
患部への適用方法の一例を示す。
（１）患部に創傷治癒剤を投与する。
（２）投与後、創傷治癒剤が患部から流出しないように、適当なドレッシングで被覆する。
患部への適用方法の一例を示す。
（１）患部に創傷治癒剤を投与する。
（２）投与後、創傷治癒剤が患部から流出しないように、適当なドレッシングで被覆する。
上記適用方法の（２）で使用するドレッシングの材質としては、特に限定されないが、ポリウレタン、シリコーン、ポリビニルアルコール、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリスチレン、ポリエチレン、エチレン酢酸ビニル共重合体及びナイロン等が挙げられる。
ドレッシングの形状としては、創傷治癒剤を投与後に、創傷治癒剤が患部から流出しないように被覆できれば制限なく使用できるが、フィルム状が好ましい。
ドレッシングの形状としては、創傷治癒剤を投与後に、創傷治癒剤が患部から流出しないように被覆できれば制限なく使用できるが、フィルム状が好ましい。
本発明の創傷治癒剤は、菌増殖抑制の観点から、タンパク質（Ａ）及び水等を混合した直後は溶液状であるが、時間の経過、熱等の刺激を加える等により流動性が低くなりゲル化することが好ましい。
創傷治癒剤をゲル化させる温度は、創傷治癒剤を短時間でゲル化させる観点から、創傷治癒剤を２５℃〜８０℃が好ましい。８０℃以下であると、組織再生用材料の機能を低下させずにゲル化させることができ、また、ゲル化までの時間が適度である。
また、創傷治癒剤を使用する場合、適用時の創傷治癒剤の温度は、タンパク質（Ａ）の熱安定性及びハンドリング性の観点から、４〜８０℃が好ましく、さらに好ましくは４〜６０℃、次にさらに好ましくは２５〜５０℃、特に好ましくは３０〜４０℃である。
創傷治癒剤をゲル化させる温度は、創傷治癒剤を短時間でゲル化させる観点から、創傷治癒剤を２５℃〜８０℃が好ましい。８０℃以下であると、組織再生用材料の機能を低下させずにゲル化させることができ、また、ゲル化までの時間が適度である。
また、創傷治癒剤を使用する場合、適用時の創傷治癒剤の温度は、タンパク質（Ａ）の熱安定性及びハンドリング性の観点から、４〜８０℃が好ましく、さらに好ましくは４〜６０℃、次にさらに好ましくは２５〜５０℃、特に好ましくは３０〜４０℃である。
以下に実施例として本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。
＜製造例１＞
［ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製］
○ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の生産
特許第４０８８３４１号公報の実施例記載の方法に準じて、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質をコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５を作製した。
作製したプラスミドを大腸菌にトランスフォーメーションし、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質生産株を得た。以下、このＳＥＬＰ８Ｋタンパク質生産株を用いて、配列（２７）のタンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）を生産する方法を示す。
［ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製］
○ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の生産
特許第４０８８３４１号公報の実施例記載の方法に準じて、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質をコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５を作製した。
作製したプラスミドを大腸菌にトランスフォーメーションし、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質生産株を得た。以下、このＳＥＬＰ８Ｋタンパク質生産株を用いて、配列（２７）のタンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）を生産する方法を示す。
○ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質の培養
３０℃で生育させたＳＥＬＰ８Ｋタンパク質生産株の一夜培養液を使用して、２５０ｍｌフラスコ中のＬＢ培地５０ｍｌに接種した。カナマイシンを最終濃度５０μｇ／ｍｌとなるように加え、該培養液を３０℃で攪拌しながら（２００ｒｐｍ）インキュベートした。培養液がＯＤ６００＝０．８（吸光度計ＵＶ１７００：島津製作所製を使用）となった時に、４０ｍｌを４２℃に前もって温めたフラスコに移し、同じ温度で約２時間インキュベートした。インキュベートした培養液を氷上で冷却し、培養液の濁度ＯＤ６００を測定し、遠心分離にて大腸菌を集菌した。
３０℃で生育させたＳＥＬＰ８Ｋタンパク質生産株の一夜培養液を使用して、２５０ｍｌフラスコ中のＬＢ培地５０ｍｌに接種した。カナマイシンを最終濃度５０μｇ／ｍｌとなるように加え、該培養液を３０℃で攪拌しながら（２００ｒｐｍ）インキュベートした。培養液がＯＤ６００＝０．８（吸光度計ＵＶ１７００：島津製作所製を使用）となった時に、４０ｍｌを４２℃に前もって温めたフラスコに移し、同じ温度で約２時間インキュベートした。インキュベートした培養液を氷上で冷却し、培養液の濁度ＯＤ６００を測定し、遠心分離にて大腸菌を集菌した。
○ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製
集菌した大腸菌を、下記１：菌体溶解、２：遠心分離による不溶性細片の除去、３：硫安沈殿、４：限外濾過、５：陰イオン交換クロマトグラフィー、６：限外濾過、７：凍結乾燥を行うことにより大腸菌バイオマスから精製した。このようにして、分子質量が約８０ｋＤａの配列（２７）のタンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を得た。
集菌した大腸菌を、下記１：菌体溶解、２：遠心分離による不溶性細片の除去、３：硫安沈殿、４：限外濾過、５：陰イオン交換クロマトグラフィー、６：限外濾過、７：凍結乾燥を行うことにより大腸菌バイオマスから精製した。このようにして、分子質量が約８０ｋＤａの配列（２７）のタンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を得た。
１：菌体溶解
集菌した大腸菌１００ｇに対して、脱イオン水２００ｇを加えて、高圧ホモジナイザー（８，０００ｐｓｉｇ）にて菌体溶解し、溶解した菌体を含む菌体溶解液を得た。その後、菌体溶解液を氷酢酸にてｐＨ４．０に調整した。
集菌した大腸菌１００ｇに対して、脱イオン水２００ｇを加えて、高圧ホモジナイザー（８，０００ｐｓｉｇ）にて菌体溶解し、溶解した菌体を含む菌体溶解液を得た。その後、菌体溶解液を氷酢酸にてｐＨ４．０に調整した。
２：遠心分離による不溶性細片の除去
さらに菌体溶解液を遠心分離（６３００ｒｐｍ、４℃、３０分間）して、上清を回収した。
さらに菌体溶解液を遠心分離（６３００ｒｐｍ、４℃、３０分間）して、上清を回収した。
３：硫安沈殿
回収した上清に硫安濃度が２５重量％となるように飽和硫安溶液を投入した。その後、８〜１２時間静置した後、遠心分離にて沈殿物を回収した。回収した沈殿物を脱イオン水に溶解した。溶解した液に対して、同様に硫安濃度が２５重量％となるように飽和硫安溶液を投入した。その後、８〜１２時間静置した後、遠心分離にて沈殿物を回収した。回収した沈殿物を脱イオン水に溶解し、溶液を得た。
回収した上清に硫安濃度が２５重量％となるように飽和硫安溶液を投入した。その後、８〜１２時間静置した後、遠心分離にて沈殿物を回収した。回収した沈殿物を脱イオン水に溶解した。溶解した液に対して、同様に硫安濃度が２５重量％となるように飽和硫安溶液を投入した。その後、８〜１２時間静置した後、遠心分離にて沈殿物を回収した。回収した沈殿物を脱イオン水に溶解し、溶液を得た。
４：限外濾過
３で得た溶液を分子質量３０，０００カットの限外濾過装置（ホロファーバー：ＧＥヘルスケア製）に供した。３で得た溶液に対して、１０倍量の脱イオン水を用いて、限外濾過を実施し、限外濾過後のタンパク質（Ａ１）を得た。
３で得た溶液を分子質量３０，０００カットの限外濾過装置（ホロファーバー：ＧＥヘルスケア製）に供した。３で得た溶液に対して、１０倍量の脱イオン水を用いて、限外濾過を実施し、限外濾過後のタンパク質（Ａ１）を得た。
５：陰イオン交換クロマトグラフィー
限外濾過後のタンパク質（Ａ１）を１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液に溶解して２０ｇ／Ｌとし、陰イオン交換カラムＨｉＰｒｅｐＳＰ ＸＬ１６／１０（ＧＥヘルスケア社製）をセットしたＡＫＴＡＰｒｉｍｅ（アマシャム社製）に供した。溶出液として５００ｍＭ １０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液を用いて、溶出画分を回収した。
限外濾過後のタンパク質（Ａ１）を１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液に溶解して２０ｇ／Ｌとし、陰イオン交換カラムＨｉＰｒｅｐＳＰ ＸＬ１６／１０（ＧＥヘルスケア社製）をセットしたＡＫＴＡＰｒｉｍｅ（アマシャム社製）に供した。溶出液として５００ｍＭ １０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液を用いて、溶出画分を回収した。
６：限外濾過
５で得た溶液を上記「４：限外濾過」と同様にして処理し、限外濾過後のタンパク質（Ａ１）を得た。
５で得た溶液を上記「４：限外濾過」と同様にして処理し、限外濾過後のタンパク質（Ａ１）を得た。
７：凍結乾燥
タンパク質（Ａ１）を脱イオン水に溶解して１０ｇ／Ｌとし、水位が１５ｍｍ以下となるようにステンレス製のバットに入れる。その後、凍結乾燥機（日本テクノサービス社製）に入れて、−４０℃、８時間かけて凍結させる。凍結後、真空度が８Ｐａ以下、−２０℃で、７０時間かけて１次乾燥、真空度が８Ｐａ以下、１０℃で、２４時間かけて２次乾燥させ、精製したタンパク質（Ａ１−１）を得た。
タンパク質（Ａ１）を脱イオン水に溶解して１０ｇ／Ｌとし、水位が１５ｍｍ以下となるようにステンレス製のバットに入れる。その後、凍結乾燥機（日本テクノサービス社製）に入れて、−４０℃、８時間かけて凍結させる。凍結後、真空度が８Ｐａ以下、−２０℃で、７０時間かけて１次乾燥、真空度が８Ｐａ以下、１０℃で、２４時間かけて２次乾燥させ、精製したタンパク質（Ａ１−１）を得た。
○ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の同定
得られたＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を下記の手順で同定した。
抗ラビットＳＥＬＰ８Ｋタンパク質抗体及びＣ末端配列の６×Ｈｉｓタグに対する抗ラビット６×Ｈｉｓ抗体（Ｒｏｌａｎｄ社製）を用いたウエスタンブロットにより分析した。見かけ分子質量８０ｋＤａのタンパク質バンドが、各抗体に抗体反応性を示した。また得られたタンパク質をアミノ分析供した結果、該生成物が、グリシン（４３．７重量％），アラニン（１２．３重量％），セリン（５．３重量％），プロリン（１１．７重量％）及びバリン（２１．２重量％）に富むものであった。また、該生成物はリジンを１．５重量％含んでいた。下記の表１は、精製された生成物の組成と、合成遺伝子配列から推測された予測理論組成との相関関係を示す。
したがって、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）はＧＶＧＶＰ配列（３）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ）中のＶのうち１個がＫに置換された（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）のポリペプチド鎖（Ｙ’１１）を１３個及びＧＡＧＡＧＳ配列（１）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）のポリペプチド鎖（Ｙ１１）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなる配列（２７）のタンパク質であることを確認した。
得られたＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を下記の手順で同定した。
抗ラビットＳＥＬＰ８Ｋタンパク質抗体及びＣ末端配列の６×Ｈｉｓタグに対する抗ラビット６×Ｈｉｓ抗体（Ｒｏｌａｎｄ社製）を用いたウエスタンブロットにより分析した。見かけ分子質量８０ｋＤａのタンパク質バンドが、各抗体に抗体反応性を示した。また得られたタンパク質をアミノ分析供した結果、該生成物が、グリシン（４３．７重量％），アラニン（１２．３重量％），セリン（５．３重量％），プロリン（１１．７重量％）及びバリン（２１．２重量％）に富むものであった。また、該生成物はリジンを１．５重量％含んでいた。下記の表１は、精製された生成物の組成と、合成遺伝子配列から推測された予測理論組成との相関関係を示す。
したがって、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）はＧＶＧＶＰ配列（３）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ）中のＶのうち１個がＫに置換された（ＧＶＧＶＰ）4ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）3配列（６）のポリペプチド鎖（Ｙ’１１）を１３個及びＧＡＧＡＧＳ配列（１）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）4配列（５）のポリペプチド鎖（Ｙ１１）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなる配列（２７）のタンパク質であることを確認した。
＜ウエスタンブロット法＞
ウエスタンブロット用サンプル２０μＬに３×ＳＤＳ処理バッファ（１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、３００ｍＭ ジチオスレイトール、６重量％ ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、０．３重量％ ブロモフェノールブルー、及び３０重量％ グリセロールを含む）１０μＬを添加して９５℃５分間加温し、泳動用試料を調製した。この泳動用試料１５μＬを用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。泳動後のゲルをＰＶＤＦメンブレンにトランスファーし、これをブロッキングバッファ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．６）、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、０．１重量％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、及び５重量％ スキムミルクを含む）に浸漬して１時間室温で振蕩することによりメンブレンのブロッキング処理を行った。ブロッキング処理後、メンブレンをＴＢＳ−Ｔ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．６）、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、及び０．１重量％ Ｔｗｅｅｎ２０を含む）で２分間洗浄した。次に、メンブレンを一次抗体溶液（一次抗体：抗Ｈｉｓ−ｔａｇ抗体（Ｒｏｃｋｌａｎｄ社製）をＴＢＳ−Ｔで５００分の１に希釈した溶液）に浸漬し、４℃で一晩静置して抗体反応を行った。反応後、このメンブレンをＴＢＳ−Ｔで５分間、４回洗浄した後、一次抗体に結合可能であり且つ標識酵素として西洋ワサビペルオキシダーゼを結合させた二次抗体の溶液（二次抗体：ＥＣＬ ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ ＨＲＰ ｌｉｎｋｅｄ Ｆ（ａｂ’）２ ｆｒａｇｍｅｎｔ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）をＴＢＳ−Ｔで２０００分の１に希釈した溶液）にメンブレンを浸漬し、３０分間室温で静置して抗体反応を行った。反応後、メンブレンをＴＢＳ−Ｔで５分間、４回洗浄した後、ＥＣＬ−Ａｄｖａｎｃｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）により酵素反応を行った。ルミノメーターＦｏｒＥＣＬ（アマシャム社製）を用いて、高感度インスタント黒白フィルム（富士フイルム株式会社製）に感光させ、バンドを可視化した。肉眼でバンドが確認できない場合、分解吸収され、無くなったと判断した。
ウエスタンブロット用サンプル２０μＬに３×ＳＤＳ処理バッファ（１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、３００ｍＭ ジチオスレイトール、６重量％ ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、０．３重量％ ブロモフェノールブルー、及び３０重量％ グリセロールを含む）１０μＬを添加して９５℃５分間加温し、泳動用試料を調製した。この泳動用試料１５μＬを用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。泳動後のゲルをＰＶＤＦメンブレンにトランスファーし、これをブロッキングバッファ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．６）、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、０．１重量％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、及び５重量％ スキムミルクを含む）に浸漬して１時間室温で振蕩することによりメンブレンのブロッキング処理を行った。ブロッキング処理後、メンブレンをＴＢＳ−Ｔ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．６）、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、及び０．１重量％ Ｔｗｅｅｎ２０を含む）で２分間洗浄した。次に、メンブレンを一次抗体溶液（一次抗体：抗Ｈｉｓ−ｔａｇ抗体（Ｒｏｃｋｌａｎｄ社製）をＴＢＳ−Ｔで５００分の１に希釈した溶液）に浸漬し、４℃で一晩静置して抗体反応を行った。反応後、このメンブレンをＴＢＳ−Ｔで５分間、４回洗浄した後、一次抗体に結合可能であり且つ標識酵素として西洋ワサビペルオキシダーゼを結合させた二次抗体の溶液（二次抗体：ＥＣＬ ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ ＨＲＰ ｌｉｎｋｅｄ Ｆ（ａｂ’）２ ｆｒａｇｍｅｎｔ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）をＴＢＳ−Ｔで２０００分の１に希釈した溶液）にメンブレンを浸漬し、３０分間室温で静置して抗体反応を行った。反応後、メンブレンをＴＢＳ−Ｔで５分間、４回洗浄した後、ＥＣＬ−Ａｄｖａｎｃｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）により酵素反応を行った。ルミノメーターＦｏｒＥＣＬ（アマシャム社製）を用いて、高感度インスタント黒白フィルム（富士フイルム株式会社製）に感光させ、バンドを可視化した。肉眼でバンドが確認できない場合、分解吸収され、無くなったと判断した。
○βシート構造率の測定
得られたＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）について、下記の手順でβシート構造率を測定した。
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を０．３ｍｇ／ｍｌとなるように脱イオン水（４℃）に溶解し、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）水溶液を作製した。作製したＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）水溶液を円二色性スペクトル測定器（日本分光：Ｊ−８２０）にて測定（測定温度：４℃）し、二次構造解析プログラム（ＪＷＳＳＥ型−４８０型：日本分光株式会社製）にてβシート構造率を算出した。結果を表２に示す。
得られたＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）について、下記の手順でβシート構造率を測定した。
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を０．３ｍｇ／ｍｌとなるように脱イオン水（４℃）に溶解し、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）水溶液を作製した。作製したＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）水溶液を円二色性スペクトル測定器（日本分光：Ｊ−８２０）にて測定（測定温度：４℃）し、二次構造解析プログラム（ＪＷＳＳＥ型−４８０型：日本分光株式会社製）にてβシート構造率を算出した。結果を表２に示す。
＜製造例２＞
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「６：限外濾過」に代えて下記「６’：透析」とする以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−２）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
６’：透析
陰イオン交換クロマトグラフィーの溶出画分を透析膜（Ｖｉｓｋａｓｅ Ｃｏｍｐａｎｉｅｓ，Ｉｎｃ．社製）に投入し、溶出画分の５倍容量の脱イオン水にて１２時間、透析する。その後、脱イオン交換水を捨て、新たに溶出画分の５倍容量の脱イオン交換水にて１２時間、透析する。この操作を残り３回、計５回繰り返した後、透析膜中の溶液を回収する。
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「６：限外濾過」に代えて下記「６’：透析」とする以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−２）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
６’：透析
陰イオン交換クロマトグラフィーの溶出画分を透析膜（Ｖｉｓｋａｓｅ Ｃｏｍｐａｎｉｅｓ，Ｉｎｃ．社製）に投入し、溶出画分の５倍容量の脱イオン水にて１２時間、透析する。その後、脱イオン交換水を捨て、新たに溶出画分の５倍容量の脱イオン交換水にて１２時間、透析する。この操作を残り３回、計５回繰り返した後、透析膜中の溶液を回収する。
＜製造例３＞
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」に代えて下記「５’：アフィニティクロマトグラフィー」とする以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−３）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
５’：アフィニティクロマトグラフィー
「４：限外濾過」後のタンパク質（Ａ１）を、Ｈｉｓ−ｔａｇを用いたアフィニティクロマトグラフィー（クロンテック社製、ＴＡＬＯＮ（登録商標）Ｓｉｎｇｌｅ Ｓｔｅｐ Ｃｏｌｕｍｎｓ）にて精製し、溶出画分を回収した。
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」に代えて下記「５’：アフィニティクロマトグラフィー」とする以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−３）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
５’：アフィニティクロマトグラフィー
「４：限外濾過」後のタンパク質（Ａ１）を、Ｈｉｓ−ｔａｇを用いたアフィニティクロマトグラフィー（クロンテック社製、ＴＡＬＯＮ（登録商標）Ｓｉｎｇｌｅ Ｓｔｅｐ Ｃｏｌｕｍｎｓ）にて精製し、溶出画分を回収した。
＜製造例４＞
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」と「６：限外濾過」との間に、下記「５−２：リフォールディング（大希釈法）」を行う以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−４）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
５−２：リフォールディング（大希釈法）
陰イオン交換クロマトグラフィーの溶出画分をタンパク質変性剤である１０Ｍウレア溶液にて、６Ｍウレア溶液となるように調製し、１２時間、４℃で静置する。調製した溶液を透析膜（Ｖｉｓｋａｓｅ Ｃｏｍｐａｎｉｅｓ，Ｉｎｃ．社製）に投入し、溶出画分の１０倍容量の脱イオン水にて１２時間、透析する。その後、脱イオン水を捨て、新たに溶出画分の１０倍容量の脱イオン交換水にて１２時間、透析する。この操作を残り３回、計５回繰り返した後、透析膜中の溶液を回収する。
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」と「６：限外濾過」との間に、下記「５−２：リフォールディング（大希釈法）」を行う以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−４）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
５−２：リフォールディング（大希釈法）
陰イオン交換クロマトグラフィーの溶出画分をタンパク質変性剤である１０Ｍウレア溶液にて、６Ｍウレア溶液となるように調製し、１２時間、４℃で静置する。調製した溶液を透析膜（Ｖｉｓｋａｓｅ Ｃｏｍｐａｎｉｅｓ，Ｉｎｃ．社製）に投入し、溶出画分の１０倍容量の脱イオン水にて１２時間、透析する。その後、脱イオン水を捨て、新たに溶出画分の１０倍容量の脱イオン交換水にて１２時間、透析する。この操作を残り３回、計５回繰り返した後、透析膜中の溶液を回収する。
＜製造例５＞
製造例１において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質をコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「分子質量が約１０５ｋＤａの配列（２８）のタンパク質（Ａ２−１）をコードしたｐＰＴ０３４５−２２０」を用いて、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」と「６：限外濾過」との間に、「５−２：リフォールディング（大希釈法）」を行う以外は同様にして、タンパク質（Ａ２−１）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
製造例１において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質をコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「分子質量が約１０５ｋＤａの配列（２８）のタンパク質（Ａ２−１）をコードしたｐＰＴ０３４５−２２０」を用いて、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」と「６：限外濾過」との間に、「５−２：リフォールディング（大希釈法）」を行う以外は同様にして、タンパク質（Ａ２−１）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
＜製造例６＞
製造例１において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質をコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「分子質量が約３０ｋＤａの配列（２９）のタンパク質（Ａ３−１）をコードしたｐＰＴ０３４５−３０ｋ」を用いる以外は同様にして、タンパク質（Ａ３−１）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
製造例１において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質をコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「分子質量が約３０ｋＤａの配列（２９）のタンパク質（Ａ３−１）をコードしたｐＰＴ０３４５−３０ｋ」を用いる以外は同様にして、タンパク質（Ａ３−１）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
＜製造例７＞
製造例１において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質をコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「分子質量が約１２０ｋＤａの配列（３０）のタンパク質（Ａ４−１）をコードしたｐＰＴ０３４５−１２０ｋ」を用いる以外は同様にして、タンパク質（Ａ４−１）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
製造例１において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質をコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「分子質量が約１２０ｋＤａの配列（３０）のタンパク質（Ａ４−１）をコードしたｐＰＴ０３４５−１２０ｋ」を用いる以外は同様にして、タンパク質（Ａ４−１）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
＜比較製造例１＞
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」を実施しない以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−５）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」を実施しない以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−５）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
＜比較製造例２＞
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」と「６：限外濾過」との間に、下記「５’’：リフォールディング（リフォールディング剤使用）」を行う以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−６）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
５’’：リフォールディング（リフォールディング剤使用）
陰イオン交換クロマトグラフィーの溶出画分をタンパク質変性剤である１０Ｍウレア溶液にて、６Ｍウレア溶液となるように調製し、１２時間、４℃で静置した。調製した溶液に対して、４倍量の１．２モル／Ｌ蟻酸塩（蟻酸ナトリウム、和光純薬製）を加えて、２５℃で１晩放置してリフォールディングを行った。
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」と「６：限外濾過」との間に、下記「５’’：リフォールディング（リフォールディング剤使用）」を行う以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−６）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
５’’：リフォールディング（リフォールディング剤使用）
陰イオン交換クロマトグラフィーの溶出画分をタンパク質変性剤である１０Ｍウレア溶液にて、６Ｍウレア溶液となるように調製し、１２時間、４℃で静置した。調製した溶液に対して、４倍量の１．２モル／Ｌ蟻酸塩（蟻酸ナトリウム、和光純薬製）を加えて、２５℃で１晩放置してリフォールディングを行った。
＜比較製造例３＞
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「３：硫安沈殿、４：限外濾過、５：陰イオン交換クロマトグラフィー」を実施せず、上記「５’：アフィニティクロマトグラフィー」行う以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−７）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「３：硫安沈殿、４：限外濾過、５：陰イオン交換クロマトグラフィー」を実施せず、上記「５’：アフィニティクロマトグラフィー」行う以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−７）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
＜比較製造例４＞
製造例１において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質をコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「分子質量が約１０５ｋＤａの配列（２８）のタンパク質（Ａ２−１）をコードしたｐＰＴ０３４５−２２０」を用いる以外は同様にして、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「３：硫安沈殿、４：限外濾過、５：陰イオン交換クロマトグラフィー」を実施せず、上記「５’：アフィニティクロマトグラフィー」行う以外は同様にして、タンパク質（Ａ２−２）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
製造例１において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質をコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「分子質量が約１０５ｋＤａの配列（２８）のタンパク質（Ａ２−１）をコードしたｐＰＴ０３４５−２２０」を用いる以外は同様にして、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「３：硫安沈殿、４：限外濾過、５：陰イオン交換クロマトグラフィー」を実施せず、上記「５’：アフィニティクロマトグラフィー」行う以外は同様にして、タンパク質（Ａ２−２）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
＜比較製造例５＞
製造例６において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」を実施しない以外は同様にして、タンパク質（Ａ３−２）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
製造例６において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」を実施しない以外は同様にして、タンパク質（Ａ３−２）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
＜比較製造例６＞
製造例７において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」を実施しない以外は同様にして、タンパク質（Ａ４−２）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
製造例７において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」を実施しない以外は同様にして、タンパク質（Ａ４−２）を作製し、βシート構造率を測定した。結果を表２に示す。
＜実施例１〜７＞
タンパク質（Ａ１−１）〜（Ａ４−１）を各々リン酸緩衝生理食塩水（以下、ＰＢＳと略記する）に溶解し、創傷治癒剤の重量を基準としてタンパク質の濃度が２０重量％となるように調整した創傷治癒剤（Ｂ１−１）〜（Ｂ４−１）を作成した。
タンパク質（Ａ１−１）〜（Ａ４−１）を各々リン酸緩衝生理食塩水（以下、ＰＢＳと略記する）に溶解し、創傷治癒剤の重量を基準としてタンパク質の濃度が２０重量％となるように調整した創傷治癒剤（Ｂ１−１）〜（Ｂ４−１）を作成した。
＜比較例１〜３＞
タンパク質（Ａ１−５）〜（Ａ４−２）を各々ＰＢＳに溶解し、２０重量％となるように調整した比較用の創傷治癒剤（Ｂ１−５）〜（Ｂ４−２）を作成した。
タンパク質（Ａ１−５）〜（Ａ４−２）を各々ＰＢＳに溶解し、２０重量％となるように調整した比較用の創傷治癒剤（Ｂ１−５）〜（Ｂ４−２）を作成した。
＜比較例４＞
カルボキシメチルセルロースゲルであるイントラサイトゲル（スミス＆ネフュー社製）を比較用の創傷治癒剤（Ｂ１−８）として用いた。
カルボキシメチルセルロースゲルであるイントラサイトゲル（スミス＆ネフュー社製）を比較用の創傷治癒剤（Ｂ１−８）として用いた。
＜評価１＞
（タンパク質（Ａ）のゲル化能評価）
創傷治癒剤（Ｂ１−１）〜（Ｂ４−２）を３７℃で静置し、ゲル化するまでの時間を測定した。ゲル化をしたかどうかの確認は、タンパク質溶液（１００μＬ）が入ったプラスティックチューブ容器（エッペンドルフチューブ、１．５ｍＬ）を転倒し、溶液が垂れない場合はゲル化しているとし、溶液が垂れる場合もしくはゲル化するまでに２時間以上を要する場合はゲル化しないと判断した。結果を表２に示す。
（タンパク質（Ａ）のゲル化能評価）
創傷治癒剤（Ｂ１−１）〜（Ｂ４−２）を３７℃で静置し、ゲル化するまでの時間を測定した。ゲル化をしたかどうかの確認は、タンパク質溶液（１００μＬ）が入ったプラスティックチューブ容器（エッペンドルフチューブ、１．５ｍＬ）を転倒し、溶液が垂れない場合はゲル化しているとし、溶液が垂れる場合もしくはゲル化するまでに２時間以上を要する場合はゲル化しないと判断した。結果を表２に示す。
＜評価２＞
（健常モルモットを用いた全層欠損層モデルでの治療試験）
健常モルモット♀ ｓｔｄ Ｈａｒｔｌｅｙ（日本エスエルシー社製）７週齢を麻酔下で除毛し、消毒したモルモット背部皮膚に脂肪層が完全に露出した創面１０×１０ｍｍの全層皮膚欠損創を作製し、止血、乾燥した後、創傷治癒剤（Ｂ１−１）〜（Ｂ４−２）を各々、８０μＬ注入し、ポリウレタンフィルムを貼付した。その後、各創傷部の上にガーゼをのせて、ナイロン糸で創傷部周囲と固定した。治療期間５、１０日目に検体を擬死させ、創傷部を含む皮膚を採取し、病理標本（ＨＥ染色）を作製した。
作製した治療期間５日目の病理標本用いて、パニキュラス（筋様膜）からの肉芽組織高をマイクロルーラーを使用して測定した。評価結果は表２に示す。また、治療期間１０日目の病理標本用いて、正常組織から伸長した上皮化長をマイクロルーラーを使用して測定した。評価結果は表２に示す。
（健常モルモットを用いた全層欠損層モデルでの治療試験）
健常モルモット♀ ｓｔｄ Ｈａｒｔｌｅｙ（日本エスエルシー社製）７週齢を麻酔下で除毛し、消毒したモルモット背部皮膚に脂肪層が完全に露出した創面１０×１０ｍｍの全層皮膚欠損創を作製し、止血、乾燥した後、創傷治癒剤（Ｂ１−１）〜（Ｂ４−２）を各々、８０μＬ注入し、ポリウレタンフィルムを貼付した。その後、各創傷部の上にガーゼをのせて、ナイロン糸で創傷部周囲と固定した。治療期間５、１０日目に検体を擬死させ、創傷部を含む皮膚を採取し、病理標本（ＨＥ染色）を作製した。
作製した治療期間５日目の病理標本用いて、パニキュラス（筋様膜）からの肉芽組織高をマイクロルーラーを使用して測定した。評価結果は表２に示す。また、治療期間１０日目の病理標本用いて、正常組織から伸長した上皮化長をマイクロルーラーを使用して測定した。評価結果は表２に示す。
＜評価３＞
（健常モルモットを用いた全層欠損層モデルでの菌増殖抑制試験）
健常モルモット♀ ｓｔｄ Ｈａｒｔｌｅｙ（日本エスエルシー社製）７週齢を麻酔下で除毛し、消毒したモルモット背部皮膚に脂肪層が完全に露出した創面１０×１０ｍｍの全層皮膚欠損創を作製し、止血、乾燥した後、緑膿菌１０６個／１創傷部となるように播種し、創傷治癒剤（Ｂ１−１）〜（Ｂ４−２）を各々、注入し、ポリウレタンフィルムを貼付した。その後、各創傷部の上にガーゼをのせて、ナイロン糸で創傷部周囲と固定した。治療期間３日目に検体を擬死させ、創傷部を含む皮膚を採取し、細菌コロニー法にて細菌数を測定した。評価結果は表２に示す。
（健常モルモットを用いた全層欠損層モデルでの菌増殖抑制試験）
健常モルモット♀ ｓｔｄ Ｈａｒｔｌｅｙ（日本エスエルシー社製）７週齢を麻酔下で除毛し、消毒したモルモット背部皮膚に脂肪層が完全に露出した創面１０×１０ｍｍの全層皮膚欠損創を作製し、止血、乾燥した後、緑膿菌１０６個／１創傷部となるように播種し、創傷治癒剤（Ｂ１−１）〜（Ｂ４−２）を各々、注入し、ポリウレタンフィルムを貼付した。その後、各創傷部の上にガーゼをのせて、ナイロン糸で創傷部周囲と固定した。治療期間３日目に検体を擬死させ、創傷部を含む皮膚を採取し、細菌コロニー法にて細菌数を測定した。評価結果は表２に示す。
＜評価４＞
（健常モルモットを用いた全層欠損層モデルでの拘縮抑制試験）
評価２で得た治療期間１０日目の病理標本を用いて、創傷部の全長Ａ（ｍｍ）（図１中のＡ）をマイクロルーラーを使用して測定した。拘縮抑制率は以下の式より算出した。
拘縮抑制率（％）＝Ａ／１０×１００
評価結果は表２に示す。
（健常モルモットを用いた全層欠損層モデルでの拘縮抑制試験）
評価２で得た治療期間１０日目の病理標本を用いて、創傷部の全長Ａ（ｍｍ）（図１中のＡ）をマイクロルーラーを使用して測定した。拘縮抑制率は以下の式より算出した。
拘縮抑制率（％）＝Ａ／１０×１００
評価結果は表２に示す。
表２の結果から、本願発明の実施例１〜７の創傷治癒剤を用いれば、肉芽組織高が０．６６ｍｍ以上と高く、上皮化長も４．１ｍｍ以上と長く、創傷治癒効果が高いことが分かる。また、菌体数が１５×１０6個以下と少なく、菌増殖抑制効果も高いことが分かる。
さらに、拘縮抑制率が７５％以上と高く、拘縮抑制効果が極めて高いことが分かる。
したがって、本発明の創傷治癒剤は、菌増殖抑制作用、肉芽組織形成や上皮化促進作用及び拘縮抑制作用に優れており、創傷治癒剤として有用であることが分かる。
さらに、拘縮抑制率が７５％以上と高く、拘縮抑制効果が極めて高いことが分かる。
したがって、本発明の創傷治癒剤は、菌増殖抑制作用、肉芽組織形成や上皮化促進作用及び拘縮抑制作用に優れており、創傷治癒剤として有用であることが分かる。
本発明の創傷治癒剤は、菌増殖抑制作用、肉芽組織形成、上皮化促進作用及び拘縮抑制作用に優れている。したがって、熱傷、採皮創、皮膚剥削創及び外傷性皮膚欠損創等の疾患ないし創傷による患部を治癒する創傷治癒剤として有効である。
Claims (7)
- ＧＡＧＡＧＳ配列（１）並びに下記アミノ酸配列（Ｘ）及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）を有するタンパク質（Ａ）と水とを含む創傷治癒剤であって、
タンパク質（Ａ）が、（ＧＡＧＡＧＳ） 4 配列（５）及び（ＧＶＧＶＰ） 4 ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ） 3 配列（６）を有するタンパク質（Ａ１１−１−１）であって、
（Ａ）の円二色性スペクトル法によるβシート構造率が２５〜６０％である創傷治癒剤。アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）中の１〜２個のアミノ酸がそれぞれリシン又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列。 - ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の個数とアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比率｛配列（１）：（Ｘ）及び（Ｘ’）の合計｝が１：１〜１：６である請求項１に記載の創傷治癒剤。
- タンパク質（Ａ）が、アミノ酸配列（Ｘ）の１種が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は下記ポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、
（Ａ）中の（Ｙ）と（Ｙ’）との合計個数が１〜１００個である請求項１又は２に記載の創傷治癒剤。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）：（Ｙ）において全アミノ酸数の０．１〜２０％のアミノ酸がそれぞれリシン又はアルギニンで置換されたポリペプチド鎖。 - タンパク質（Ａ）が、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ）を有する請求項１〜３のいずれかに記載の創傷治癒剤。
- タンパク質（Ａ）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法による分子質量が１５〜２００ｋＤａである請求項１〜４のいずれかに記載の創傷治癒剤。
- タンパク質（Ａ）において全アミノ酸数のうちＧＡＧＡＧＳ配列（１）が占める割合が５〜５５％である請求項１〜５のいずれかに記載の創傷治癒剤。
- 創傷治癒剤の重量を基準として、タンパク質（Ａ）が５〜３０重量％、水が７０〜９５重量％である請求項１〜６のいずれかに記載の創傷治癒剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2014002221A JP6334174B2 (ja) | 2013-01-11 | 2014-01-09 | 創傷治癒剤 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013003595 | 2013-01-11 | ||
| JP2013003595 | 2013-01-11 | ||
| JP2014002221A JP6334174B2 (ja) | 2013-01-11 | 2014-01-09 | 創傷治癒剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2014148502A JP2014148502A (ja) | 2014-08-21 |
| JP6334174B2 true JP6334174B2 (ja) | 2018-05-30 |
Family
ID=51571801
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2014002221A Active JP6334174B2 (ja) | 2013-01-11 | 2014-01-09 | 創傷治癒剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6334174B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6912992B2 (ja) * | 2017-10-16 | 2021-08-04 | 三洋化成工業株式会社 | 細胞賦活剤 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6486125B1 (en) * | 1996-05-24 | 2002-11-26 | Regents Of The University Of Minnesota | Synthesis of soluble β-sheet forming peptides |
| JP3999667B2 (ja) * | 2001-03-07 | 2007-10-31 | 株式会社キョウトバイオメディカルサイエンス | 医療用のフィブロイン粉末及びフィブロイン水溶液 |
| JP2007217375A (ja) * | 2006-02-17 | 2007-08-30 | Nagoya Institute Of Technology | 自己組織化ペプチド |
| EP2676683B1 (en) * | 2011-02-18 | 2016-09-21 | Kyoto University | Aqueous protein solution containing a material for tissue regeneration |
-
2014
- 2014-01-09 JP JP2014002221A patent/JP6334174B2/ja active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2014148502A (ja) | 2014-08-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5979673B2 (ja) | タンパク質水溶液 | |
| EP2737910B1 (en) | Composite collagen sponge and preparation method thereof | |
| US10851152B2 (en) | Polymerized peptide and gel having collagen-like structure | |
| CN111004319A (zh) | 重组人源胶原蛋白及其应用 | |
| JP6326326B2 (ja) | 創傷治癒剤 | |
| JP6383721B2 (ja) | 創傷治癒剤 | |
| JP6077316B2 (ja) | 組織再生用材料及び組織再生用タンパク質溶液 | |
| WO2011157716A1 (en) | Novel peptides for wound healing | |
| JP6496484B2 (ja) | 創傷治癒剤 | |
| JP6334174B2 (ja) | 創傷治癒剤 | |
| CN113563419A (zh) | 一种促皮肤创伤修复活性同源二聚体多肽及其制备方法与应用 | |
| JP6157877B2 (ja) | 組織再生用ゲル、組織再生用タンパク質溶液及び組織再生用ゲルの製造方法 | |
| JP6050609B2 (ja) | 皮膚弾性向上材及び皮膚弾性向上用タンパク質溶液 | |
| JP6326287B2 (ja) | 創傷治癒剤 | |
| JP6754982B2 (ja) | 発育障害抑制材 | |
| JP6982395B2 (ja) | インターロイキン１０の産生量増加剤 | |
| CN111303250B (zh) | 一种组织修复蛋白chrd、其编码基因及其应用 | |
| JP6730834B2 (ja) | タンパク質組成物 | |
| JP7429929B2 (ja) | 半月板再生用材料 | |
| JP6912992B2 (ja) | 細胞賦活剤 | |
| JP2016183118A (ja) | 増殖因子前駆体のリフォールディング方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20161205 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20170929 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20171017 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171130 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180424 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180426 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6334174 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |