JP6313215B2 - 組み換え酵母を用いた、定義された抗原に対する防御的体液性免疫応答の生成による予防接種 - Google Patents
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Description
ワクチンは、病気を予防するために(予防ワクチン)または確立された病気を治療するために(免疫療法ワクチン)使用される。予防的種痘計画は、過去約100年において、本質的に感染症を減らすことに貢献している。免疫療法ワクチンは、約20年前にはじめて開発され、ウイルス、細菌もしくは寄生虫による持続感染に対してまたは発癌性の病気に対して使用されている。種痘の目的は、細胞性免疫応答(すなわち主としてT細胞媒介性およびNK細胞媒介性)および/または体液性免疫応答(すなわち主としてB細胞/抗体媒介性)の誘発ならびに病原もしくは悪性(腫瘍原性)細胞の抗原成分に対する免疫記憶(「memory」)の誘発である。
図1は、IBDVのVP2異種遺伝子を有する接種菌株VAK887をVAK367-D4出発菌株での相同組み換えによって製造することを図示している。IBDV菌株D78のVP2遺伝子を含むプラスミドKlp3-MCS(配列番号10)の形質転換によって、VP2異種遺伝子は、相同組み換えを介して、URA3遺伝子の挿入によって破壊された染色体のLAC4遺伝子座に導入された。宿主ゲノムへの組み換えに際して、URA3遺伝子はVP2によって置き換わり、LAC4遺伝子が再び回復した;組み換え酵母菌株は、ウラシルを含まないラクトース培地上での選択によって得ることができた。後に、LAC4(β−ガラクトシダーゼ)の発現は、KIGAL80プロモーターにより制御され、VP2遺伝子の発現は、LAC4プロモーターにより制御される。
皮下的な予防接種のための組み換え酵母の使用法は、当業者には技術水準から公知である:Stubbs et al., (2001) Nat. Med. 7: 625-629;Stubbs and Wilson (2002) Curr. Opin. Mol. Ther. 4: 35-40;Wansley et al., (2008) Clin. Cancer Res. 14: 4316-4325;US 5,830,463、WO/2006/044923;WO/2007/092792およびWO/2011/032119。前記刊行物の実施例においては、しかしながら、もっぱら酵母のサッカロマイセス・セレビシエで作業されている。「酵母」は、単細胞で増殖する真核性の微生物であって、数億年(S.セレビシエおよびK.ラクティスについては約1億年)にわたる分岐進化に基づき、部分的に非常に様々な特性を有する微生物についての総称である。従って、S.セレビシエとK.ラクティスの、動物またはヒトなどの高等真核生物における予防接種のための使用に際しては、S.セレビシエによって引き起こされる免疫応答は、K.ラクティスによって引き起こされる免疫応答とは大きく異なることを前提とすべきである。そのことは、酵母で発現された異種抗原に対する免疫応答についても、酵母固有の抗原に対する免疫応答についても当てはまる。完全なS.セレビシエ細胞での皮下的な免疫化に際しては、T細胞誘導、つまり細胞性免疫応答が生じた。組み換えS.セレビシエによる簡単な様式での(すなわち個々の抗原を発現する菌株の直接的な適用による)抗原に対する防御的体液性免疫応答は、今まで技術水準では裏付けられていなかった。
寄生虫に由来する異種タンパク質
アメリカ鉤虫;ズビニ鉤虫:ASPタンパク質、ヘモグロビン分解性プロテアーゼ
リーシュマニア:gp63、46kDのプロマスチゴート抗原、LACK
プラスモジウム:CSPタンパク質、CSA−1、CSA−3、EXP1、SSP2、STARP、SALSA、MSP1、MSP2、MSP3、AMA−1、GLURP、Pfs25、Pfs28、Pvs25、Pvs28、Pfs48/45、Pfs230
住血吸虫:TP1、Sm23、ShGSTs26および28、パラミオシン、寄生虫ミオシン、Sm14
細菌に由来する異種タンパク質
マイコバクテリウム・ツベルクロシス(Mycobakterium tuberculosis):Ag85A、Hsp65、R8307、19kD、45kD、10.4
ヘリコバクター・ピロリ(Heliobacter pylori):VacA、LagA、NAP、hsp、ウレアーゼ、カタラーゼ
A群ストレプトコッカス(Strepptococcus):M、SCPAペプチダーゼ、エキソトキシンSPEAおよびSPEC、フィブロネクチン結合タンパク質
ストレプトコッカス・ニューモニア(Strepptococcus pneumonia):PspA、PsaA、BHV3、BHV4
サルモネラ・チフィムリウム(Salmonella typhimurium):Vi抗原
シゲラ(Shigella):LPS
ビブリオ・コレラ(Vibrio Cholera):CTB
エシェリキア・コリ(Escherichia coli)ETEC:LT、LT−ST、CTB
エルシニア・ペスティス(Yersinia pestis):F1、V
腫瘍細胞/腫瘍に由来する異種タンパク質(腫瘍関連抗原、TAA)
CEA
5T4
MUC1
MART1
HER−2
である。
カリシウイルス科(ノーウォーク、HEV):NV60kD;HEV ORF2
レオウイルス科(ロタ):VP7、VP4
レトロウイルス科(HIV):Gag、Pol、Nef、Env、gp160、gp120、gp140、gp41
フラビウイルス科(フラビウイルス属:WNV、デング、YF、TBE、JEV):preM−Env、NS3、NS4、NS5
フラビウイルス科(ペスチウイルス属BVDV、CSFV、BDV、ヘパシウイルス属HCV):E1、E2、ERNS(ペスチ)、C、NS3、NS4、NS5
ヘパドナウイルス科(HBV):HBS抗原
パラミクソウイルス科(パラミクソウイルス亜科:PIV−1、PIV−2、ムンプス、センダイ、PIV−2、PIV−4、はしか):M、HN、N、F
パラミクソウイルス科(ニューモウイルス亜科:RSV):F、G、SH、M
ラブドウイルス科(狂犬病):G
ヘルペスウイルス科(EBV、HSV2):gp350/220(EBV)、gB2、gD2(HSV)
コロナウイルス科(SARS):CoV、N、M、S
オルトミクソウイルス科(インフルエンザA、B):HA、NA、M1、M2、NP
パピローマウイルス科:L2、E6、E7
が好ましい。
− 突然変異によって異種タンパク質が更に安定化された
− トランスアクチベーターの過剰発現および/または配列のコドン最適化によって、VP2発現の明らかな増加が達成できた(図2)
− 追加のKlGAL4遺伝子の組み込みは、このK.ラクティス変異体のより高い増殖速度とも相関した
− このK.ラクティス変異体は、高細胞密度発酵および発現されたVP2タンパク質の量における特に高い再現性を有する(図3)
を有する。
a)本発明による組み換え酵母を培養および増殖させる工程、
b)酵母を回収し、不活性化させる工程、
c)組み換え酵母を決められた免疫化スキームに従って適用する工程、
d)形成された抗体の力価を測定する工程、および/または
e)免疫化を検証する工程
を含む。
1.異種遺伝子発現に使用するためには、K.ラクティスは、S.セレビシエと比べて、何百万年にもわたりS.セレビシエから多様化しているK.ラクティスの生理学によるものである本質的な基本的な利点を有する。
・ 本発明者は、予防接種された個体と自然感染された個体とを区別できるサブユニットマーカーワクチンを製造することに成功している
・ 更に、同時に強いアジュバント特性を有し、それにより免疫原性が強いサブユニットマーカーワクチンを製造できる
・ 本発明によるサブユニットマーカーワクチンは、何度も使用できる
・ 本発明によるサブユニットマーカーワクチンは、被予防接種体において全身性の防御的免疫応答および免疫学的記憶を生ずる
・ 本発明により、細胞毒性抗原に対するワクチンを製造することも可能である
・ 本発明による方法は、新規のワクチン変異体のできるだけ迅速な生成を可能にする
・ 予防接種法は、特に非常に廉価である
・ 本発明によるワクチンの製造のために、実験動物は必要なく、または培養において動物もしくはヒトの細胞の使用が必要である
・ 本発明によるワクチンは、温度感受性でなく、冷却せずに輸送および貯蔵することができる
・ 本発明による方法では、生きている組み換え細胞または生物は使用されない
・ 本発明による方法を用いて、使用されるワクチンの量も、防御的免疫化の達成に必要な使用数も、最低の水準に制限できる。
1.K.ラクティス菌株VAK367-D4(metA ura3-5 lac4::ScURA3)の作製。
ベクター:Klp3-MCS(配列番号10)
ベクターKlp3-MCS(配列番号10)(図6)は、YRp7をベースとするE.コリベクターであって、ARS1配列を欠失しているため酵母において自己複製できないベクターである。Klp3-MCS(配列番号10)は、K.ラクティスのLAC4プロモーターと、LAC4座での組み込みを相同組み換えによって可能にする配列とを含む。
組み換え酵母菌株の製造
IBDVのD78 VP2をコードするcDNAを、プラスミドpD78A(Icard et al., 2008)から以下のオリゴヌクレオチド:
AscI制限切断部位を含むIBDV_AscI_fwd(5'-GGCGCGCCGATGACAAACCTGCAAGATC-3')(配列番号7)、および
NotI制限切断部位を含むVP2_NotI_rev(5'-ATAAGAATGCGGCCGCTCACACAGCTATCCTCCTTATG-3')(配列番号8)
を用いて増幅させた。
IBDV_S:T_AscI_fwd(5'-GGCGCGCCGATGTCTAACCTGCAAGATCAAACCCA-3')(配列番号9)、および
VP2_NotI_rev(前記参照)
を使用した。
細胞ペレットを、B60バッファー(50mMのHEPES-KOH pH7.3;60mMの酢酸カリウム;5mMの酢酸マグネシウム;0.1%のTriton X100;10%のグリセロール;1mMのフッ化ナトリウム;20mMのリン酸グリセロール;10mMのMgCl2;1mMのDTT;プロテアーゼコンプリートインヒビター(ロシュ))中に再懸濁し、ガラスビーズと一緒に激しく混ぜることによって破砕した。抽出物を遠心分離し(14000回転/分、4℃で20分)、そしてタンパク質濃度を測定した。40μgのタンパク質抽出物を、12%のゲル中でSDS-PAGEによって分離した。次いで、前記タンパク質をメンブレンにトランスファーした。ウェスタンブロット分析は、ウサギ由来のα-IBDV抗血清(1:15000;Granzow et al., 1997)およびヤギ−α−ウサギHRP結合抗体(1:3000、Santa Cruz Biotechnology, Inc.)を用いて慣用の方法を利用して実施した。
RNAの完全な抽出のために、5mlの酵母培養を氷上で冷却した。細胞溶解は、Prot Kバッファー(100mMのTris/HCl pH7.9、150mMのNaCl、25mMのEDTA、1%のSDS)および50mgのプロテイナーゼK(Fermentas)中でガラスビーズと一緒に激しく振盪しながら実施した。それらのサンプルを、35℃で1時間にわたりインキュベートし、RNAを抽出し、エタノールで沈殿させ、DEPC水中に再懸濁させた。ノーザン分析は、Engler-Blum et al., 1993に記載されている通りであるが、幾つかの相違点をもって実施した。5μgの全RNAを、1%ホルムアルデヒド−アガロースゲルで分離し、ナイロンメンブレン(Amersham HybondTM-N+、GE Healthcare)にトランスファーした。そのメンブレンを、DIG標識されたRNAプローブと一緒に68℃でインキュベートした。前記プローブは、PCR断片のDIG-NTPs(ロシュ)の存在下でのインビトロ転写によって製造されたものである。前記ブロットを、ブロッキング溶液で処理し、抗DIGアルカリ性ホスファターゼ結合抗体(ロシュ)と一緒にインキュベートした。アルカリ性ホスファターゼの活性の測定は、通常の方法によって実施した。
Saugar et al., 2005によるプロトコールを改変したものを使用した。エピソームVP2プラスミド(pADH1-P_VP2-T2S)で形質転換された2000ODEの酵母細胞を、選択培地(0.67%のYNB、2%のグルコースと以下の添加剤:11mg/lのAde;14mg/lのTyr;それぞれ38mg/lのHis、Trp、Arg、Met;48mg/lのPhe;それぞれ58mg/lのLeu、Ile、Lys、Val、Thr)上で一晩培養した。回収し蒸留水で洗浄した後に、該細胞をガラスビーズを用いて溶解バッファー(10mMのTris(pH8.0)、150mMのNaCl、20mMのCaCl2、1mMのEDTA、プロテアーゼコンプリートインヒビター(ロシュ)、pH8.0)中で破砕した。得られたタンパク質抽出物を、遠心分離(10000g、4℃で1時間)し、可溶性フラクションをスクロースバッファー中の20%(w/v)スクロースクッション上に成層させた(10mMのTris pH8.0、150mMのNaCl、20mMのCaCl2;プロテアーゼコンプリートインヒビター(ロシュ)を含有する)。170000gで4℃で3時間にわたり遠心分離した後に、ペレットを、200μlのスクロースバッファー中に溶解させ、そして更に17時間にわたり114000gでスクロースバッファー中の20%から53%のスクロース勾配で遠心分離した。前記勾配は、700μlのフラクションで受け止められ、それをSDS-PAGEおよびウェスタンブロットによって分析した。異種発現されたVP2のオリゴマーのタンパク質複合体を、このようにして濃縮して精製できた。タンパク質を検出し、タンパク質量をSDS PAGEおよびクーマシー染色によって標準タンパク質と比較して測定できた(示さず)。こうして精製されたVP2を、次いで抗VP2抗体を用いた比較ウェスタンブロットにおける標準として使用した。VP2量を種々の発酵からの酵母細胞の定義された数と比較した(図3)。
全ての実験的な発酵は、4つの完全装備(voll ausgeruestet)の2l発酵器を有するDasGipパラレルバイオリアクターシステム(DasGip AG, Juelich, Deutschland)中で実施した。生産規模での発酵は、Organobalance GmbH社(Berlin, Deutschland)によってまたは専用研究室で10lの作業容量を有するBiostat EDバイオリアクター(B.Braun Biotech, Melsungen, Deutschland)において実施した。全ての生産プロセスは、流加培養法で実施した。2%の酵母エキスおよび1%のペプトンを有する複合培養培地と20%のラクトース供給溶液を用いた。酵母培養の温度は、30℃で保持し、pO2は30%飽和に制御した。pH値は、発酵の間に2MのNaOHまたは2MのH3PO4の添加によって5.0に保持した。
伝染性ファブリキウス嚢病のウイルス(IBDV変異体D78)のVP2抗原を発現するK.ラクティス(VAK890)をマウスにおいて皮下的に適用するために、乾燥させて粉体化させた酵母を初回使用のために完全フロイントアジュバント(CFA)と混合し、更なる使用においては、該酵母を不完全フロイントアジュバント(IFA)と混合した(200μlのCFAまたはIFA当たりに100μgの酵母材料)。200μlのエマルジョン(100μgの酵母を含有する)を、免疫化/追加免疫(boost)当たりに1個体につき注射した。それにより、皮下的な免疫化につき1マウス個体に投与されたVP2の量は、約18ngに相当した(図3)。初回注射(0日目)後に、2週間の間隔で2回「追加免疫」した(14日目および28日目;図4)。更に2週間後に、それらの動物を血清取得のために麻酔により屠殺した。
ニワトリにおける皮下的な適用のために、伝染性ファブリキウス嚢病のウイルス(IBDV変異体D78)のVP2抗原を発現する乾燥して粉体化されたK.ラクティス変異体(VAK890)5mgを、750μlのリン酸緩衝液/生理食塩水(PBS)ならびに500μlの滅菌蒸留水中に溶解させ、1.25mlのIFAを用いてエマルジョンを製造した。このエマルジョン(1mgの酵母を含有する)500μlを、0日目、14日目ならびに28日目に注射した(図5)。それにより、1ニワトリ個体の皮下的な免疫化につき投与されたVP2の量は、約180ngに相当した(図3、4)。
予防接種(図5)後に、ニワトリ被予防接種体を42日目に経口的な経路を介して100EID50のIBDV株「Edgar」を感染させ、6日後に死亡率を調べた。引き続き動物を麻酔により屠殺した後に、血清を得て、該動物のファブリキウス嚢を取り出した。該ファブリキウス嚢を、まず24時間にわたり10%の中性緩衝されたホルマリン中に固定し、引き続きパラフィンに包埋させた。
前記被予防接種体の血清におけるIBDV特異抗体力価を、市販のELISA試験により測定した(IDEXX FlockChek(登録商標)IBD ELISAキット(IDEXX Laboratories, Inc.)。マウス被予防接種体の血清の場合には、製造元のとは異なる二次抗体を使用した(Sigma Aldrich)。
ウイルスを中和する抗体の濃度の測定のための中和アッセイは、Schroeder et al., 2000のプロトコールに従って実施した。
パラフィン中に包埋されたファブリキウス嚢から、4マイクロメートル厚の臓器切片を作製した。パラフィンを除去した後に、これらを標準的手順に従ってヘマトキシリンおよびエオシンを用いて染色した。サンプルを顕微鏡により調査し、いわゆる「病変スコア」を1〜4のスケールで決定した(1は正常ないし10%の毛包萎縮であり、2は10〜30%の毛包萎縮であり、3は30〜70%の毛包萎縮であり、4は70%超の萎縮である)。
IBDVのVP2を発現するK.ラクティス菌株の製造および最適化
IBDVのVP2遺伝子が組み込まれた種々のK.ラクティス変異体を作製した。予防接種実験のために、VP2タンパク質がアミノ酸位置2で突然変異されており(トレオニンのセリンとの交換;Jagadish et al.(1991))、かつ少なくとも2つのKlGAL4遺伝子の追加のタンデムな組み込みを含む最適化された変異体(変異体VP2-T2S_GAL4;菌株VAK890)を使用した。突然変異によって異種タンパク質を更に安定化させた;トランスアクチベーターの過剰発現によって、VP2発現の明らかな増加を達成できた(図2)。追加のKlGAL4遺伝子の組み込みは、このK.ラクティス変異体のより高い増殖速度とも相関していた。関連のVP2を発現するK.ラクティス株VAK890のための増殖条件を、酵母が高い密度でかつ発現されたVP2の再現可能な量で発酵できるように最適化した。製造後に、該酵母を凍結乾燥させ、90℃で2時間にわたり不活性化させた。不活性化の立証がもたらされた:1gの不活性化された酵母材料当たりに10未満の生きている酵母細胞が残されている。1酵母細胞当たりのVP2の量を測定した:その量は、菌株VAK890では1酵母細胞当たり約0.7fgの異種VP2タンパク質であった(図3)。
免疫化は上記のように実施した;最後の適用の2週間後に処置された被予防接種体の血清を中和抗体の存在に基づき調査した。そのために、IBDV特異的ELISAを使用し、IBDV中和アッセイを実施した(図4および図5)。予防接種されたニワトリで、更に「ウイルス負荷」実験を実施した。このために、該動物に、1動物当たりに100EID50のウイルス力価の、伝染性の高い菌株「Edgar」を供給した。その濃度は、予防接種されていない家禽の場合に約10〜35%(図5D)の死亡率でファブリキウス嚢病に導く濃度である。「ウイルス負荷」実験に引き続き、被予防接種体のファブリキウス嚢を免疫組織化学によって、該ファブリキウス嚢における感染兆候および病変に基づき調査し、いわゆる「病変スコア」(図5)を特徴付けた。
ARS1 自己複製する配列;複製を引き起こすDNAのヌクレオチド配列
Asc l 制限エンドヌクレアーゼAsc l
CFA 完全フロイントアジュバント
DNA デオキシリボ核酸
DEPC ジエチルピロカーボネート
DIG-NTP ジゴキシゲニン−ヌクレオチド三リン酸
DSMZ ドイツ微生物細胞培養コレクション
DTT ジチオトレイトール
E.コリ エシェリキア・コリ
EcoRI 制限エンドヌクレアーゼEcoRl
EDTA エチレンジアミン四酢酸
EID50 卵または胚の感染用量 − 感染した卵の50%に感染を引き起こすのに必要な感染性ウイルスの数
ELISA 酵素結合免疫吸着アッセイ
GAL4 酵母特異的な転写アクチベーター
GRAS 一般に安全と認められる
HEPES 2−(4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジニル)エタンスルホン酸
Hpa l 制限エンドヌクレアーゼHpa l
HRP セイヨウワサビペルオキシダーゼ
IBDV 伝染性ファブリキウス嚢病のウイルス
IFA 不完全フロイントアジュバント
K.ラクティス クルイベロマイセス・ラクティス
KIGAL4 KlGal4/Lac9タンパク質をコードするK.ラクティス遺伝子
KIGAL80 KlGal80タンパク質をコードするK.ラクティス遺伝子
LAC4 β−ガラクトシダーゼ酵素をコードするK.ラクティス遺伝子
Not l 制限エンドヌクレアーゼNot l
ODE 光学密度単位
PBS リン酸緩衝液/生理食塩水
PCR ポリメラーゼ連鎖反応
RNA リボ核酸
S.セレビシエ サッカロマイセス・セレビシエ
Sal l 制限エンドヌクレアーゼSal l
SDS ドデシル硫酸ナトリウム
SDS-PAGE SDSを使用したポリアクリルアミドゲル電気泳動
TEF1 翻訳因子EF-1αをコードするアルクスラ・アデニニボランス(Arxula adeninivorans)の遺伝子
VP2 IBDVのキャプシド形成性ウイルスタンパク質
VP2-T2S 位置2でのトレオニンのセリンへのアミノ酸交換を有するVP2
VAK ワクチン株
YEPD 酵母エキス−ペプトン−デキストロース
YRp7 S.セレビシエ−E.コリのシャトルベクター、ジーンバンクアクセッション番号U03501(Botstein et al., 1979)
Claims (16)
- クルイベロマイセス・ラクティス種の酵母ゲノム中に、異種遺伝子として組み込まれた伝染性ファブリキウス嚢病のウイルス(IBDV)のVP2抗原をコードする遺伝子を有し、かつ異種タンパク質としての伝染性ファブリキウス嚢病のウイルス(IBDV)のVP2抗原の発現を可能にする組み換え酵母であって、該組み換え酵母がクルイベロマイセス・ラクティスDSM 25405またはクルイベロマイセス・ラクティスDSM 25407から選択されることを特徴とする組み換え酵母。
- 請求項1に記載の組み換え酵母であって、前記組み換え酵母が、防御的体液性免疫応答の生成のために使用されることを特徴とする組み換え酵母。
- 請求項1または2に記載の組み換え酵母であって、前記組み換え酵母がサブユニットマーカーワクチンとして使用されることを特徴とする組み換え酵母。
- 請求項3に記載の組み換え酵母であって、前記サブユニットマーカーワクチンが、予防接種された個体と自然感染した個体とを区別するために使用されることを特徴とする組み換え酵母。
- 請求項3または4に記載の組み換え酵母であって、前記サブユニットマーカーワクチンが、同時に強いアジュバント特性を有することを特徴とする組み換え酵母。
- 請求項3から5までのいずれか1項に記載の組み換え酵母であって、前記サブユニットマーカーワクチンが、強い免疫原性を有することを特徴とする組み換え酵母。
- 請求項1から6までのいずれか1項に記載の組み換え酵母であって、前記異種遺伝子の組み込みが、追加のベクター配列または選択マーカーなくして行われていることを特徴とする組み換え酵母。
- 請求項1から7までのいずれか1項に記載の組み換え酵母であって、前記異種遺伝子発現が構成的に行われるか、または前記異種遺伝子発現が誘導可能であることを特徴とする組み換え酵母。
- 請求項1から8までのいずれか1項に記載の組み換え酵母であって、前記異種遺伝子発現が、内因性のリポーター遺伝子の発現を介して間接的に定量化できることを特徴とする組み換え酵母。
- 請求項1から9までのいずれか1項に記載の組み換え酵母であって、前記異種遺伝子が、抗原特性を有する異種タンパク質の発現を可能にすることを特徴とする組み換え酵母。
- 請求項1から10までのいずれか1項に記載の組み換え酵母であって、前記組み換え酵母は、異種タンパク質として、配列番号4によるアミノ酸配列を有する伝染性ファブリキウス嚢病のウイルス(IBDV)のVP2-T2Sタンパク質であるか、あるいは配列番号6によるアミノ酸配列を有する伝染性ファブリキウス嚢病のウイルス(IBDV)のoVP2-T2Sタンパク質を、誘導可能または構成的に顕著な量で発現することを特徴とする組み換え酵母。
- 請求項1から10までのいずれか1項に記載の組み換え酵母であって、前記伝染性ファブリキウス嚢病のウイルス(IBDV)のVP2抗原が、配列番号3の核酸配列によってコードされるか、あるいは配列番号5の核酸配列によってコードされることを特徴とする組み換え酵母。
- 請求項1から12までのいずれか1項に記載の組み換え酵母であって、前記伝染性ファブリキウス嚢病のウイルス(IBDV)のVP2抗原が、伝染性ファブリキウス嚢病のウイルス(IBDV)の突然変異されたVP2抗原であり、かつ配列番号4によるアミノ酸配列を有するか、あるいは伝染性ファブリキウス嚢病のウイルス(IBDV)のコドン最適化されたVP2抗原であり、かつ配列番号6によるアミノ酸配列を有することを特徴とする組み換え酵母。
- 請求項1から13までのいずれか1項に記載の組み換え酵母であって、皮下的な予防接種のための方法において使用するための組み換え酵母。
- 完全な酵母細胞による皮下的な予防接種のための、請求項1から13までのいずれか1項に記載の組み換え酵母を含むワクチン。
- 発現された異種タンパク質に対して防御的体液性免疫応答が生じる、請求項15に記載のワクチン。
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