JP6308530B2 - サケ成長ホルモン含有飼料の製造方法、該製造方法により得られるサケ成長ホルモン含有飼料及びサケ成長ホルモン含有液 - Google Patents
サケ成長ホルモン含有飼料の製造方法、該製造方法により得られるサケ成長ホルモン含有飼料及びサケ成長ホルモン含有液 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6308530B2 JP6308530B2 JP2015152885A JP2015152885A JP6308530B2 JP 6308530 B2 JP6308530 B2 JP 6308530B2 JP 2015152885 A JP2015152885 A JP 2015152885A JP 2015152885 A JP2015152885 A JP 2015152885A JP 6308530 B2 JP6308530 B2 JP 6308530B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- growth hormone
- salmon
- salmon growth
- feed
- containing feed
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 title claims description 208
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 title claims description 208
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 title claims description 185
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 title claims description 184
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 title claims description 184
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims description 53
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 36
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 32
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 30
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 13
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 20
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 19
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 19
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 18
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 17
- 241000277275 Oncorhynchus mykiss Species 0.000 description 12
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 10
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 7
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 6
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 6
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 5
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 5
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 4
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 4
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 235000014102 seafood Nutrition 0.000 description 3
- 241000252233 Cyprinus carpio Species 0.000 description 2
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 2
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 2
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 description 2
- 241000237503 Pectinidae Species 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 2
- 238000003505 heat denaturation Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 2
- 238000012113 quantitative test Methods 0.000 description 2
- 235000020637 scallop Nutrition 0.000 description 2
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 2
- 241001519451 Abramis brama Species 0.000 description 1
- 241000238586 Cirripedia Species 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 1
- 241000257465 Echinoidea Species 0.000 description 1
- 241000237858 Gastropoda Species 0.000 description 1
- 241000861914 Plecoglossus altivelis Species 0.000 description 1
- 241000277331 Salmonidae Species 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 description 1
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000002449 bone cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000000512 collagen gel Substances 0.000 description 1
- 239000000306 component Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007791 dehumidification Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- -1 for example Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Feed For Specific Animals (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
また、飼料の製造方法において、サケ等の冷凍した魚を粉砕し、100℃で煮沸するのが一般的である。煮沸により水分を蒸発させ、効率的に製造することができるが、成長ホルモンが熱変性するため、飼料中にほとんど残存せず、成長ホルモンの生物活性は失われる。
(1)粉砕したサケの頭部を60℃より高く90℃以下で加熱する工程を備えることを特徴とするサケ成長ホルモン含有飼料の製造方法。
(2)さらに、前記加熱したサケの頭部の固体成分と液体成分とを分離する工程と、前記固体成分と前記液体成分とを乾燥する工程と、をこの順に備える(1)に記載のサケ成長ホルモン含有飼料の製造方法。
(3)(1)又は(2)に記載の製造方法によって得られることを特徴とするサケ成長ホルモン含有飼料。
(4)前記サケ成長ホルモンが、サケ脳下垂体由来成長ホルモンである(3)に記載のサ
ケ成長ホルモン含有飼料。
(5)粉砕したサケの頭部を60℃より高く90℃以下で加熱し、前記加熱したサケの頭部の固体成分と液体成分とを分離することで得られたことを特徴とするサケ成長ホルモン含有液。
(第一実施形態)
一実施形態において、本発明は、粉砕したサケの頭部を30〜90℃で加熱する工程を備えるサケ成長ホルモン含有飼料の製造方法を提供する。
飼料に使用可能な「サケ成長ホルモン」は、特に限定されるものではなく、サケ脳下垂体で産生及び分泌される成長ホルモンを抽出したサケ脳下垂体由来成長ホルモン(粗抽出物、精製物などを含む)、遺伝子組み換えにより製造された組換えサケ成長ホルモン等が挙げられる。
サケの加工工程で頭部の未利用部位が大量に廃棄されていることから、本発明では、サケ頭部の未利用部位由来の脳下垂体から調製した成長ホルモンを活用することが好ましい。また、サケ成長ホルモンの抽出及び精製しやすさの観点から、脂質の含有率が少ないサケが好ましく、脂質の含有率が0.1%以下であるサケがより好ましい。
材料としては、上述のサケの加工工程で大量に廃棄されるサケ頭部の未使用部位を回収し、冷凍保存したものを使用する。まず、サケ頭部を冷凍状態のまま、水とともに粉砕装置1に添加し、粉砕及び摩砕する。サケ頭部の重量に対して、1/4〜1/3倍量の水を添加することが好ましい。また、粉砕装置としては、特に限定はなく、ミクロカッター等が挙げられる。
次に、粉砕したサケ頭部を加熱装置2に添加し加熱することで、サケ成長ホルモンを溶出し、余分な水分を蒸発して濃縮する。通常、ホルモンは熱に弱く変性しやすいが、発明者らは、サケ成長ホルモンが優れた熱耐性を有することを発見し、本発明を見出した。詳細については不明であるが、サケ成長ホルモンは疎水性が高く、難溶性の物質であることが知られており、そのため、その他のホルモン類と比較して、優れた熱耐性を有すると推察できる。
加熱温度は、30〜90℃が好ましく、50〜70℃がより好ましい。30℃未満でサケ成長ホルモンの溶出工程を行うと、サケ成長ホルモンの熱変性を避け、生物活性を保つことができるが、低温ではサケ成長ホルモンが溶出しにくく、製造効率が悪い。一方、90℃以上でサケ成長ホルモンの溶出工程を行うと、水分の蒸発が速く、効率的に製造することができるが、成長ホルモンが熱変性するため、成長ホルモンの生物活性が失われる。加熱時間は、粉砕したサケ頭部の重量により適宜調整することができるが、効率的な製造とエネルギーコストの観点から1〜2時間が好ましい。
また、加熱装置に特に限定はなく、熱湯や蒸気等により材料を加熱及び保温することができるタンク等が挙げられる。
また、一実施形態において、本発明は、さらに、加熱したサケの頭部を乾燥する工程を備えるサケ成長ホルモン含有飼料の製造方法を提供する。
粉砕工程、加熱工程までは、第一実施形態と同様に行う。加熱工程後のサケ頭部を乾燥装置3に入れて、乾燥する。乾燥温度は、50〜70℃が好ましく、乾燥時間は、加熱したサケ頭部の重量により適宜調整することができるが、5〜12時間が好ましい。
また、乾燥装置としては、特に限定はなく、減圧乾燥機、真空乾燥機、脱湿乾燥機、凍結乾燥機、熱風乾燥機等が挙げられる。
また、一実施形態において、本発明は、さらに、前記加熱工程後であって前記乾燥工程前に、前記加熱したサケの頭部の固体成分と液体成分を分離する工程を備えるサケ成長ホルモン含有飼料の製造方法を提供する。
粉砕工程、加熱工程までは、第一実施形態と同様に行う。加熱工程後のサケ頭部を固形分離装置4に入れて、固体成分と液体成分とを分離する。固液分離装置としては、特に限定はなく、三相分離が可能な遠心分離機等が挙げられる。
図2においては、固液分離工程後の固体成分及び液体成分をそれぞれ乾燥装置3により乾燥する工程を有しているが、使用用途に応じて、乾燥せずにそのまま用いることもできる。
一実施形態において、本発明は、上述の第一実施形態〜第三実施形態のいずれかの製造方法によって得られるサケ成長ホルモン含有飼料を提供する。
また、筋肉注射の場合には、所定濃度のサケ成長ホルモン含有飼料を貝類の所定部位に筋肉注射する。筋肉注射に使用するサケ成長ホルモンの濃度は、例えば、魚類の場合には、10ng/g体重〜1000ng/g体重であることが好ましく、アワビの場合には、1ng/g体重〜100ng/g体重であることが好ましい。筋肉注射を行う部位は、貝殻筋が好ましい。
液体形態のサケ成長ホルモン含有飼料は、モノマーとしての生物活性を保つために、pHを7〜9に調製したものが好ましい。pHを調製するためには、水酸化ナトリウムや酢酸アンモニウム溶液(pH7〜9 )等を使用することが好ましい。
経口用飼料の投与方法としては、魚介類と同一の環境下において、魚介類に所定期間および回数で摂餌させる。固体形態のサケ成長ホルモン含有飼料中のサケ成長ホルモン濃度は、対象とする魚介類やその個体重量や体積等によって異なるため、適宜決定すればよい。例えば、アワビ(体重約2g〜3g、殻長約3〜5cm)の場合、0.5mg/8g〜 5mg/8gの濃度範囲であることが好ましい。前記濃度範囲外であると、アワビを短期間で効率的に成長促進させることが困難になる。投与する間隔および回数は、目的や状況に応じて決定すればよく、例えば、7〜14日間毎で、20〜60回である。また、例えば、魚類の場合には、100ng/g〜5000ng/gの濃度範囲であることが好ましい。
固体形態のサケ成長ホルモン含有飼料は、ハンドリングストレスの影響を魚介類に与えずに、また、サケ成長ホルモンの失活を抑えて、魚介類の体内へ取り込むことができる。
一実施形態において、本発明は、粉砕したサケの頭部を30〜90℃で加熱し、前記加熱したサケの頭部の固体成分と液体成分を分離することで得られたサケ成長ホルモン含有液を提供する。
(1)粉砕工程
冷凍保存していたサケ頭部(600kg)に対して、合計180kgの水を添加した後、ミクロカッター(〜1.5mm)にて粉砕及び摩砕した。
(2)加熱工程
粉砕したサケ頭部を加温タンクに投入し、30分間解凍するために撹拌した後、50℃に達してから約30分間、加熱しながら加温した。
(3)乾燥工程
得られた液体成分及び固体成分を70℃に設定した真空乾燥機で乾燥した。
得られた乾燥固形物に350mlの蒸留水を添加し、4℃で24時間撹拌した。懸濁液を遠心分離(6,000回転、30分間、4℃)した後、上清を採取した。得られた上清を、再度、遠心分離(145,000回転、10分間、4℃)した後、上清を高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)(日本分光社製)に添加して、サケ成長ホルモンの溶出位置及び含有量を算出した。流速は1ml/min、カラム温度は40℃とした。HPLCの結果を図4に示した。サケ成長ホルモン含有飼料中のサケ成長ホルモンの濃度は、77.1μg/g(77.1mg/kg)であった。従来のサケ成長ホルモン含有飼料(サケ成長ホルモン濃度が2μg/gである。)に換算すると、38.55kgの飼料に相当する量のサケ成長ホルモンが含まれていた。
加熱工程での温度を60℃にした以外は、実施例1と同様の方法で、サケ成長ホルモン含有飼料を製造し、飼料中のサケ成長ホルモンの溶出位置及び含有量を算出した。HPLCの結果を図5に示した。サケ成長ホルモン含有飼料中のサケ成長ホルモンの濃度は、85.2μg/g(85.2mg/kg)であった。従来のサケ成長ホルモン含有飼料(サケ成長ホルモン濃度が2μg/gである。)に換算すると、42.60kgの飼料に相当する量のサケ成長ホルモンが含まれていた。
(1)粉砕工程
実施例1の(1)と同様の方法にて行った。
(2)加熱工程
実施例1の(2)と同様の方法にて行った。
(3)固液分離工程
加熱されたサケ頭部を、三相分離機により液体成分と固体成分に分離した。
(4)乾燥工程
得られた液体成分及び固体成分を50℃に設定した真空乾燥機で、それぞれ固体成分は7時間30分、液体成分は11時間15分乾燥させた。
(i)サケ成長ホルモンの抽出
真空乾燥機後の固形物(0.5g)を2mlの0.2M酢酸アンモニウム(pH9)に加え、ポリトロンホモジナイザー(ポリトロン社製)で摩砕した。その後、2mLの0.2M酢酸アンモニウム(pH9)を加えて、4℃で1時間抽出した。遠心分離した後、サケ成長ホルモンを含む上清3mlを得た。
(ii)サケ成長ホルモンの濃縮
次に、サケ成長ホルモンを濃縮するために、上清1mlを0.1%トリフルオロ酢酸(TFA)(9.1%)で平衡化したSep−PakC18カートリッジ(Waters社製)に添加した。0.1%TFA 5mlで洗浄した後、20%アセトニトリル(0.1%TFA含有)4ml、次いで60%アセトニトリル(0.1%TFA含有)4mlを添加して、カートリッジに吸着しているタンパク質を溶出し、凍結乾燥した。
(iii)HPLCでの検出
凍結乾燥した固形分0.6gを0.1%TFA 500μlに溶解し、ODS−120Tカラム(東ソー社製)を高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)(日本分光社製)に添加した。0.1%TFAを含むアセトニトリルを用いて、30%から60%まで60分間で上昇させる直線濃度勾配法で、サケ成長ホルモンの溶出位置及び含有量を算出した。流速は1ml/min、カラム温度は40℃とした。HPLCの結果を図6(A)及び(B)に示した。サケ成長ホルモン含有液体成分由来の乾燥物中のサケ成長ホルモンの濃度は、15μg/gであり、サケ成長ホルモン含有固形成分由来の乾燥物中のサケ成長ホルモンの濃度は、3μg/gであった。
(1)粉砕工程
実施例1の(1)と同様の方法にて行った。
(2)加熱工程
実施例1の(2)と同様の方法にて行った。
(3)固液分離工程
加熱されたサケ頭部を、三相分離機により液体成分と固体成分に分離した。
(4)乾燥工程
得られた液体成分及び固体成分を70℃に設定した真空乾燥機で、それぞれ固体成分は5時間、液体成分は10時間15分乾燥させた。
(i)サケ成長ホルモンの抽出
実施例3の(5)(i)と同様の方法にて行った。
(ii)サケ成長ホルモンの濃縮
実施例3の(5)(ii)と同様の方法にて行った。
(iii)HPLCでの検出
実施例3の(5)(iii)と同様の方法にて行った。HPLCの結果を図7(A)及び(B)に示した。サケ成長ホルモン含有液体成分由来の乾燥物中のサケ成長ホルモンの濃度は、11μg/gであり、サケ成長ホルモン含有固形成分由来の乾燥物中のサケ成長ホルモンの濃度は、1.5μg/gであった。
(1)試料の調製
サケ脳下垂体から精製された成長ホルモンを0.05M酢酸アンモニウム(pH9.0)に入れて、4℃、50℃、60℃及び70℃の温度条件下で、それぞれ10分間保持した(こちらを精製されたサケ成長ホルモンとした)。
また、サケ脳室内内臓物を400μlの0.2M酢酸アンモニウム溶液(pH9.0)に入れた後、4℃、50℃、60℃及び70℃の温度条件下で、それぞれ10分間保持したものも用意した(こちらを脳下垂体抽出液中のサケ成長ホルモンとした)。脳下垂体抽出液中のサケ成長ホルモンについては、10分経過後、ペッスルを用いて脳室内内臓物を摩砕し、サケ成長ホルモンを4℃で10分間抽出した。 抽出液を遠心分離し、上清(350μl)を採取した。
(2)サケ成長ホルモンの検出
精製されたサケ成長ホルモン及び脳下垂体抽出液中のサケ成長ホルモンについて、4℃、50℃、60℃及び70℃の温度条件下で処理した試料(350μl)について、それぞれ500μlの0.1%TFAを加えて希釈した。そのうち、500μlをHPLCに添加し、サケ成長ホルモンの溶出位置及び含有量を検証した。精製された成長ホルモンのHPLCの結果を図8(A)〜(D)に示した。また、脳下垂体抽出液中のサケ成長ホルモンのHPLCの結果を図9(A)〜(D)に示した。
(1)試料の調製
サケ脳下垂体から精製されたサケ成長ホルモンを溶解した溶液を、pH調整剤を用いて、pH7.0、pH9.0及びpH11.0となるように調製し、室温で60分間保持した。
(2)サケ成長ホルモンの検出
試験例1の(2)と同様の方法にて行った。結果を図10(A)〜(C)に示した。
(1)試料の調製
実施例1及び実施例2で得られたサケ成長ホルモン含有飼料、並びにコントロールとして精製サケ成長ホルモンを、それぞれサケ成長ホルモンの含有量が0、10、100、1000ng/mlとなるようにイーグル最小必須培地(シグマアルドリッチ)に添加した。事前に播種し培養しておいたニジマス肝臓由来細胞に、上述の濃度のサケ成長ホルモンを含有したイーグル最小必須培地(シグマアルドリッチ)0.5mlをそれぞれ添加し、10℃で24時間培養した。
(2)定量PCRによるニジマス肝臓由来細胞のIGF−Iの発現量の定量
培養した細胞を回収し、mRNAを抽出し、定量PCRによりIGF−I(Insulin like growth factors)の発現量を定量した。結果を図11に示した。図11では、実施例1及び実施例2で得られたサケ成長ホルモン含有飼料、並びにコントロールとして精製サケ成長ホルモンそれぞれにおいて、サケ成長ホルモンを含んでいない培養液のIGF−Iの発現量を1としたときの相対比を示している。
IGF−Iとは、70個のアミノ酸からなる単鎖ポリペプチドで、骨及び体細胞における成長ホルモン(Glowth Hormone;GH)の成長促進作用を仲介する因子のひとつである。IGF−Iの分泌は、成長ホルモン(GH)に依存し、種々の器官で産生される。よって、IGF−Iの発現量は、サケ成長ホルモンによる成長効果の指標として用いることができる。
(1)ニジマス稚魚用飼料の調製
実施例1及び実施例2で得られたサケ成長ホルモン含有飼料から調製した成長ホルモン溶液を用いて、それぞれサケ成長ホルモンの含有量が2.5μg/gとなるように添加したニジマス稚魚用飼料を調製した。コントロールとして、サケ成長ホルモンを含有しない飼料も調製した。
ニジマス稚魚(n=15尾)に1日に全体重の1%量を2回与えて、56日間飼育した。14日ごとに稚魚の体重を計測し、結果を図12に示した。
Claims (5)
- 粉砕したサケの頭部を60℃より高く90℃以下で加熱する工程を備えることを特徴とするサケ成長ホルモン含有飼料の製造方法。
- さらに、前記加熱したサケの頭部の固体成分と液体成分とを分離する工程と、
前記固体成分と前記液体成分とを乾燥する工程と、
をこの順に備える請求項1に記載のサケ成長ホルモン含有飼料の製造方法。 - 請求項1又は2に記載の製造方法によって得られることを特徴とするサケ成長ホルモン含有飼料。
- 前記サケ成長ホルモンが、サケ脳下垂体由来成長ホルモンである請求項3に記載のサケ成長ホルモン含有飼料。
- 粉砕したサケの頭部を60℃より高く90℃以下で加熱し、前記加熱したサケの頭部の固体成分と液体成分を分離することで得られたことを特徴とするサケ成長ホルモン含有液。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015152885A JP6308530B2 (ja) | 2015-07-31 | 2015-07-31 | サケ成長ホルモン含有飼料の製造方法、該製造方法により得られるサケ成長ホルモン含有飼料及びサケ成長ホルモン含有液 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015152885A JP6308530B2 (ja) | 2015-07-31 | 2015-07-31 | サケ成長ホルモン含有飼料の製造方法、該製造方法により得られるサケ成長ホルモン含有飼料及びサケ成長ホルモン含有液 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017029070A JP2017029070A (ja) | 2017-02-09 |
JP6308530B2 true JP6308530B2 (ja) | 2018-04-11 |
Family
ID=57985220
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015152885A Active JP6308530B2 (ja) | 2015-07-31 | 2015-07-31 | サケ成長ホルモン含有飼料の製造方法、該製造方法により得られるサケ成長ホルモン含有飼料及びサケ成長ホルモン含有液 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6308530B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101934551B1 (ko) | 2018-04-11 | 2019-01-02 | 어업회사법인 가비 주식회사 | 명태의 조기산란 유도방법 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS60214798A (ja) * | 1984-04-06 | 1985-10-28 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 魚類の成長ホルモン |
JPS62153223A (ja) * | 1985-12-26 | 1987-07-08 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 貝類の成長促進剤 |
JPH04141050A (ja) * | 1990-10-02 | 1992-05-14 | Takashi Motonobu | 魚頭ペーストを使用する養魚方法 |
JP2005095104A (ja) * | 2003-09-26 | 2005-04-14 | Japan Science & Technology Agency | 海洋無脊椎動物用飼料 |
JP2014193158A (ja) * | 2013-03-01 | 2014-10-09 | Nagase Sanbio Co Ltd | 養殖魚用飼料およびその製造方法、ならびに養殖魚用飼料製造装置 |
-
2015
- 2015-07-31 JP JP2015152885A patent/JP6308530B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2017029070A (ja) | 2017-02-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Li et al. | Defatted black soldier fly (Hermetia illucens) larvae meal in diets for juvenile Jian carp (Cyprinus carpio var. Jian): Growth performance, antioxidant enzyme activities, digestive enzyme activities, intestine and hepatopancreas histological structure | |
WO2016117690A1 (ja) | マイクロカプセル化された水産養殖用飼料 | |
US10939692B2 (en) | Method for culturing aquatic animals with aspartyl-dipeptides | |
JP6880050B2 (ja) | 尾腺油を含有する組成物およびその使用方法 | |
KR101568466B1 (ko) | 민물뱀장어 친어 양식용 사료 | |
JP6308530B2 (ja) | サケ成長ホルモン含有飼料の製造方法、該製造方法により得られるサケ成長ホルモン含有飼料及びサケ成長ホルモン含有液 | |
WO2010010794A1 (ja) | 魚介類の生存限界温度耐性付与剤および魚介類の養殖方法 | |
KR101035727B1 (ko) | 어피를 이용한 기능성 사료 첨가제와 이의 제조방법 및 기능성 양어용 사료 | |
Richard et al. | Assessment of protein digestive capacity and metabolic utilisation during ontogeny of Senegalese sole larvae: a tracer study using in vivo produced radiolabelled polypeptide fractions | |
US20200375219A1 (en) | Method for manufacturing feed containing salmon growth hormone, feed containing salmon growth hormone, and liquid containing salmon growth hormone | |
US6153251A (en) | Nutrition-enriched composition for feed | |
JPH0851937A (ja) | 養殖エビ用飼料及びエビの養殖法 | |
JP2008148652A (ja) | マグロ属魚類用飼料 | |
Sun et al. | Identification and characterization of a Macrobrachium nipponense ferritin subunit regulated by iron ion and pathogen challenge | |
Chotikachinda et al. | Tuna viscera hydrolysate products prepared by different enzyme preparations improve the feed intake and growth of Asian seabass, Lates calcarifer, fed total fishmeal replacement diets. | |
KR102333548B1 (ko) | 배스 추출물을 포함하는 동물용 사료 조성물 및 이의 제조방법 | |
KR20090093518A (ko) | 마늘 추출물을 포함하는 철갑상어용 사료 조성물 | |
EP0213357A2 (en) | Method for culturing fish and shellfish | |
WO2005115166A1 (en) | Method of enhancing growth and immunity of shrimp larvae using recombinant bovine growth hormone | |
Habibi et al. | Gastric uptake of recombinant growth hormone in rainbow trout | |
López-Alvarado | Effects of dietary enzymes on the larval performance of the Red sea bream (Pagrus major) | |
CN105558760A (zh) | 一种利用虹鳟鱼掩盖食品苦味的方法 | |
Javed | Filamentous fungi (Paecilomyces variotii) as an alternative sustainable ingredient in diets for Atlantic salmon (Salmo salar): effects on pellet quality, growth performance, nutrient digestibility and utilization, and immune-related biomarkers in the distal intestine during the freshwater phase. | |
Yang et al. | Effects of dietary soy protein concentrate on growth performance, digestion, and protein metabolism of juvenile Darkbarbel catfish Pelteobagrus vachelli | |
KR101764350B1 (ko) | 어류 바이러스성 출혈성 패혈증에 대한 예방 또는 치료용 조성물 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170224 |
|
A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20170711 |
|
A975 | Report on accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971005 Effective date: 20170719 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170721 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170721 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20171003 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171124 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180206 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180306 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6308530 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |