JP6302946B2 - 海洋深層水抽出物 - Google Patents

Description

本発明は海洋深層水抽出物に関し、特に有機成分を備えた海洋深層水抽出物及びその用途に関する。

ここ１０年、プロトンポンプ阻害薬（ＰＰＩ）及び抗生物質を含むトリプルセラピーが、ピロリ菌感染を除染する際に選ばれるようになっている。しかし、服薬コンプライアンス不足と薬物耐性菌株の増加により、除菌の失敗もしばしば起きている。初歩的治療の失敗後に、薦められる二次治療には、抗生物質のトリプルセラピー及びクアドロプルセラピーがある。しかし、これら療法には、薬物耐性菌株増加により起こる問題を克服できていない。そのため、ピロリ菌感染を効果的に予防及び治療可能な新成分或いは化合物を見つけ出すことが急がれている。

一方、飲料水中のマグネシウム不足が、心血管病変の機会を高めることはすでに知られている。飲料水中にカルシウムとマグネシウムイオンを多く含めば、心筋梗塞に対して保護効果を備え、また、マグネシウムを多く摂取すれば、高脂血症、メラボリック症候群、酸化ストレスの発生率を低下させることができる。

海洋深層水（Ｄｅｅｐ-ｓｅａ ｗａｔｅｒ，ＤＳＷ）は、海面下２００ｍ以深のマグネシウム、カルシウム、カリウムイオン、栄養成分或いは有機成分を豊富に含む低温で、清潔且つ衛生的な無汚染水である。
近年、ＤＳＷは食品加工業、農業、薬用、化粧品業に広く応用されている。
ＤＳＷは血中脂肪、脂質酸化、血管硬化、高血圧を低下させ、血管壁の肥厚を減少させることが研究文献でも指摘されている。
アトピー性皮膚炎の患者も、飲用或いはＤＳＷに浸かることで、皮膚の炎症と過敏症状が改善することが知られ、同時にＤＳＷの飲用は白内障を改善することもできる。

酸化ストレス（ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ）と炎症は、ピロリ菌感染及び胃潰瘍と関連がある。マグネシウムイオンを摂取すれば、ピロリ菌感染、胃潰瘍、逆流性食道炎等の症状を改善することができる。
海洋深層水飲用のピロリ菌感染患者への抗菌効果は、ピロリ菌と胃炎、十二指腸潰瘍、胃潰瘍、胃腺癌、及び胃の「ＭＡＬＴリンパ腫」（ＭＡＬＴｏｍａ）などの他の胃の癌と強い関連性がある。
体外試験時にＤＳＷは、高濃度のあるイオンを含むことで、ピロリ菌を抑制する作用を備えることをデータ或いは文献が示している。
人体血清中のマグネシウム濃度とピロリ菌が胃に集まることには、関連があるとのレポートもある。

ヘリコバクターピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）に対抗する臨床試験中に、海洋深層水を二週間飲用したことによるピロリ菌感染患者に対する抗菌有効成分は、本発明技術領域中で周知の高カルシウム、高マグネシウムイオン及び硬水が引き起こすものではなく、海洋深層水中の有機成分であることが発見された。

発明を解決するための手段

本発明による海洋深層水抽出物は、海洋深層水からある方法を用いて製造される。
該方法は、逆浸透膜（ｒｅｖｅｒｓｅ ｏｓｍｏｓｉｓ，ＲＯ）と電気透析（Ｅｌｅｃｔｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ，ＥＤ）の方法或いはナノフィルター（ｎａｎｏｆｉｌｔｅｒ）の方法である。
該海洋深層水抽出物は、有機成分を有し、該有機成分は、６８５〜６９０、７３３〜７３８、及び１０７０〜１０７５の分子量により組成されるグループより選択される。

本発明の実施形態において、該方法はさらに、ゲルフィルトレーション（ｇｅｌ ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）方法、ジクロロメタン（Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ，ＤＣＭ）抽出方法、アセトン抽出方法、及びクロロホルム抽出方法により組成されるグループより選択される。

本発明の実施形態において、該海洋深層水抽出物の分子量は好ましくは、１０７０〜１０７５である。

本発明の実施形態において、該海洋深層水は、海面２００ｍ以下の海水である。

本発明の実施形態において、該海洋深層水抽出物はさらに、抗酸化物を有し、該有機成分の分解を遅らせられ、且つ該抗酸化物は、ケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、カテキン（ＥＧＣＧ）或いは水素である。

本発明の実施形態において、該海洋深層水抽出物は、２４００ｐｐｍ〜４８００ｐｐｍの硬度を有する。

本発明の実施形態において、該海洋深層水抽出物は、パスチャライゼーション或いはろ過方式により得られる。

本発明による海洋深層水抽出物は、ヘリコバクターピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）生長を抑制する薬物製造の用途に用いられる。

本発明の実施形態において、該海洋深層水抽出物は、２４００ｐｐｍ〜４８００ｐｐｍの硬度を有する。

本発明の実施形態において、該海洋深層水抽出物は抗酸化物をさらに有し、該有機成分の分解を遅らせることができる。
且つ該抗酸化物は、水素、ケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）或いはカテキン（ＥＧＣＧ）である。

本発明は、海洋深層水抽出物の抗菌或いはその他効果の活性成分を確認し、及び海洋深層水抽出物は、ヘリコバクターピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）生長を抑制する薬物製造の用途に用いられる。
海面２００ｍ以下から得られる本発明の海洋深層水に、有機成分分析を行い可能分子を確定し、その特性を鑑定し、ラマン分光法により該有機成分の活性を確認する。
本発明海洋深層水抽出物は、ヘリコバクターピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）生長を抑制する活性成分を備え、それはその高カルシウム、高マグネシウム濃度或いは高硬度とは関係がないと証明された。

本発明の２４００ｐｐｍ硬度海洋深層水抽出物（ＤＳＷ２４００）エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）分析のスペクトラムであり、（Ａ）では竹串エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）分析によりＲＯ逆浸透膜水を比較例とし、（Ｂ）では竹串質量分析計により本発明ＤＳＷ２４００を分析し、（Ｃ）ではろ紙エレクトロスプレーイオン化質量により本発明ＤＳＷ２４００を分析し、（Ｄ）では竹串質量分析計により本発明ＤＳＷ２４００を分析した。 エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）によりＤＣＭ、アセトン、クロロホルムの三種有機溶液から抽出した本発明ＤＳＷ２４００を分析したスペクトラムである。 エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）により異なる海水エリアと異なる処理の海洋深層水或いは海洋表面水を分析したスペクトラムで、ＣＳ１-ＨＢは商品台肥海鉱１４００深層海水で、ＣＳ２-ＤＭはＤｅｅｐ Ｍｉｎｅ深層海水、ＤＳＷ２４００は本発明ＤＳＷ２４００で、ＳＳＷ-５０は海洋表面水で、ＣＳ３-ＴＹは商品台塩海洋アルカリ性イオン水で、ＣＳ４-Ｔ１は商品統一ＰＨ９．０アルカリ性イオン水で、ＣＳ５-ＬＢは商品Ｌｉｇｈｔアルカリ性水、及び３３８．５の波形が出現する背景値図である。 ラマン分光器測量で電気透析した本発明の海洋深層水抽出物２４００ｐｐｍ（ＤＳＷ２４００）で、上図は未加熱で、下図は滅菌鍋加熱した。 エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）により分析した異なる処理の本発明の海洋深層水抽出物２４００ｐｐｍ（ＤＳＷ２４００）で、（Ａ）は５０ｍｌをＲＯ逆浸透膜で処理後に淡水化したＲＯ逆浸透膜水で、（Ｂ）は一切の処理を行わない５０ｍｌ本発明ＤＳＷ２４００で、（Ｃ）は５０ｍｌ本発明ＤＳＷ２４００を遠心分離管もいっしょに滅菌鍋内で１２１°Ｃで１５分間の加熱滅菌処理を行い、（Ｄ）は５０ｍｌ本発明ＤＳＷ２４００にＨＣｌを加えｐＨ値を５とし、電気透析を行ったサンプルで、（Ｅ）は５０ｍｌ本発明ＤＳＷ２４００にＨＣｌを加えｐＨ値を４とし、電気透析を行ったサンプルで、（Ｆ）は５０ｍｌ本発明ＤＳＷ２４００にＨＣｌを加えｐＨ値を３とし、電気透析を行ったサンプルで、（Ｇ）は空気に接触したばかりの５０ｍｌ本発明ＤＳＷ２４００で、（Ｈ）は空気に三日間接触した５０ｍｌ本発明ＤＳＷ２４００を電気透析したサンプルで、（Ｉ）水素を通した５０ｍｌ本発明ＤＳＷ２４００に電気透析を行ったサンプルで、（Ｊ）０．２２μｍろ紙でろ過した５０ｍｌ本発明ＤＳＷ２４００に電気透析を行ったサンプル図である。 第一日（Ｄａｙ １）異なる処理の本発明の海洋深層水抽出物１０７０をエレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）により分析量測した波形群の強度図である。 第二日（Ｄａｙ ２）異なる処理の本発明の海洋深層水抽出物１０７０をエレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）分析量測した波形群の強度図である。 第九日（Ｄａｙ ９）異なる処理の本発明の海洋深層水抽出物１０７０をエレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）分析量測した波形群の強度図である。 第一日（Ｄａｙ １）、第二日（Ｄａｙ ２）及び第九日（Ｄａｙ ９）異なる処理の本発明の海洋深層水抽出物１０７０をエレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）分析量測した波形群の強度は樹状図であり、この数値は三重復データであり、＊ｐ ＜ ０．０５と第一日の個別制御組比較で、＃ｐ ＜ ０．０５と第九日の本発明の海洋深層水抽出物無処理組（Ａｉｒ ２）比較図である。 ビタミンＣを抗酸化剤として本発明の海洋深層水抽出物を破壊した成分図である。 本発明の海洋深層水抽出物がヘリコバクターピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）生長を抑制するデータの図である。 本発明の海洋深層水抽出物がヘリコバクターピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）生長を抑制するデータの図である。 異なる成分１０７０波形群含量を含む海洋深層水抽出物のヘリコバクターピロリ抑制に対する抑制効果の関係図で、１０７０波形群含量が高ければ高いほど海洋深層水抽出物とヘリコバクターピロリ抑制能力とは正比例する。ＡはＲＯ逆浸透膜サンプルで、Ｂは表面海水ＳＳＷ（５０ｍ海面下の海水）サンプルで、Ｃは滅菌鍋処理後のＤＳＷ２４００サンプルで、ＤはｐＨ３．９３の条件下のＤＳＷ２４００サンプルで、Ｅは０．２２ｍろ過したＤＳＷ２４００サンプルで、ＦはＥＤ処理したＤＳＷ２４００のサンプル図で、ＧはサンプルＡ乃至Ｆがヘリコバクターピロリ抑制に対する抑制効果の関係図である、ＨはサンプルＡ乃至Ｆの１０７０波形群含量の平均強度量化数値である。 本発明の海洋深層水抽出物がヘリコバクターピロリ感染により放出されるカーボン１３尿素呼吸数値を明らかに低下させられることを示す曲線図で、ＤＳＷは本発明の海洋深層水抽出物で、ＣＭＷは一般ミネラルウォーターである。

本発明の技術内容、構造特徴、達成する目的及び作用効果について、以下に例を挙げ並びに図面を組み合わせて詳細に説明する。

実施形態１ 本発明の海洋深層水（Ｄｅｅｐ ｓｅａ ｗａｔｅｒ，ＤＳＷ）抽出物の製造方法
本発明の海洋深層水は、台湾花蓮県七星潭（Ｃｈｉｓｉｎｇｔａｎ）湾２００ｍ以下深度の水源から取得する。海洋深層水は、石材と資源行業研究と発展センター（Ｇｕａｎｇｈｕａｊｉａｎ，花蓮，台湾）の許可後取得した。
海洋深層水の改良と調製は石材と資源行業研究と発展センター（Ｇｕａｎｇｈｕａｊｉａｎ，花蓮，台湾）により提供する。
海洋深層水水源は先に逆浸透膜（ｒｅｖｅｒｓｅ ｏｓｍｏｓｉｓ，ＲＯ）の処理と電気透析（Ｅｌｅｃｔｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ，ＥＤ）を行い、海洋深層水の硬度を減少させるため、毎ｐｐｍの硬度により表示し、以下の公式により計算する。
［ＣａＣＯ３］ｐｐｍ＝（［Ｃａ２＋］ × ２．５ ＋ ［Ｍｇ２＋） × ４．１）ｐｐｍ。
逆浸透膜（ＲＯ）と電気透析（ＥＤ）後に、異なる硬度の海洋深層水を得る。
例えば、１２００〜４８００ｐｐｍの硬度。
海洋深層水は、パスチャライゼーションにより６０秒８０℃或いはろ過方式により、直ちに室温（２５℃）に保存され、本発明の海洋深層水抽出物とする。

本発明は、誘導結合の等イオン体発射スペクトロメータ（ＪＹ ＵＬＴＩＭＡ ２０００，堀場，フランス）を利用し、本発明１２００ｐｐｍ硬度海洋深層水抽出物（ＤＳＷ１２００）、本発明２４００ｐｐｍ硬度海洋深層水抽出物（ＤＳＷ２４００）及び２．１ｐｐｍＲＯ水の鉱物質含量を分析し、該各サンプルのｐＨ値を分析した。結果は表１に示す。

本発明はまた、海洋深層水２００ｍ以下で調製されたＲＯ逆浸透膜水、海洋深層水、海面下５０ｍの海洋表面水（ｓｕｒｆａｃｅ ｗａｔｅｒ，ＳＳＷ）、及び市販のその他海洋深層水或いは表面水の相関製品を用いて比較した。
用いた化学薬品は、カテキン（ＥＧＣＧ）とケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）等はＳｉｇｍａ-Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入した。

実施形態２ エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）
本発明は改良式竹串を利用し、エレクトロスプレー法（ＥＳＩ）とし、３μｌサンプルを竹串尖端に滴加すると同時に、メタノールを揮発性溶剤（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ Ｍｏｄｅｌ ２２）とし、流速６μｌ／ｍｉｎで、＋３０００ｖ高電圧（Ｇａｍｍａ， ＦＬ， ＵＳＡ Ｍｏｄｅｌ ＲＲ３０-２Ｒ）を加え、サンプルイオン化を質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｎｎｉｇａｎ ＬＣＱ ＬＣ／ＭＳ）に入れ分析を行った。
探知範囲は１５０-２０００ｍ／ｚで、吸引ロータリーポンプ（ＥＤＷＡＲＤＳ ＥＭ３０）を使用し、質量分析計内の真空状態を維持した。サンプルテスト完了後は毎回、竹串を、超音波洗浄器（ＢＲＡＮＳＯＮ ３５１０）で３０分間洗浄した。
エレクトロスプレー游離法イオン化／質量分析法を利用し、主成分物質の分子量を測定した。
エレクトロスプレー游離法中には、噴霧化（ｎｅｂｕｌｉｚａｔｉｏｎ）、脱溶媒和剤（ｄｅｓｏｖａｔｉｏｎ）及び游離（ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ）の三部分を含む。

実施形態２．１ 噴霧化（ｎｅｂｕｌｉｚａｔｉｏｎ）：帯電液滴形成
サンプルが高電圧を未付加の金属毛細管出口端を通過すると、電界作用の欠乏により、プラス／マイナスイオン分布が均一な液滴だけを形成することができる。
しかし、サンプルが高電圧を加えた金属毛細管を通ると、毛細管出口端には強大な電界作用を生じ、溶液中のプラス／マイナスイオンは電界作用を受け電荷分離の現象を生じる。
加えたのが正電圧なら、正イオンは電界反発の作用力により、毛細管出口端へと移動し、負イオンは正電界吸引を受け金属毛細管壁に集まる。溶液が出口端に大量に集まると、液滴表面には大量の正電荷が累積される。
正電荷が一定の数量まで累積すると、この時生じる反発力と電界作用力は、正電荷の液体表面を低電界方向へと引き延ばし、毛細管出口端で錐状液滴を生じる。これをテイラーコーン（Ｔａｙｌｏｒ ｃｏｎｅ）と呼ぶ。
この時、外向きのカレン反発力と内向きの表面張力とは平衡状態を呈し、これをレイリー限界（Ｒａｙｌｅｉｇｈ ｌｉｍｉｔ）と呼ぶ。
加える電界が徐々に強まると、溶液表面に累積する正電荷反発力は、表面張力より大きくなり、液滴の作用力はレイリー限界を突破し、テイラーコーン前端から表面に電荷を帯びた微小液滴を噴射する。これがすなわち、エレクトロスプレー法游離法中の帯電液滴形成の過程である。

実施形態２．２ 脱溶媒和剤（ｄｅｓｏｖａｔｉｏｎ）：エレクトロスプレー法液滴の揮発と分裂
金属毛細管出口端から噴射された帯正電荷液滴は、質量分析入口の比較的低い電界の吸引を受け、質量分析計に入る。
飛行過程において、帯電液滴は絶えず大量の空気に触れるため、液滴中の溶剤分子は迅速に揮発し、液滴体積の持続縮小を招く。しかし、液滴内電荷は固定であるため、液滴内電荷密度は徐々に増加する。体積が一定程度まで縮小すると、電荷間の反発力は液滴の表面張力より大きくなる。内部の作用力バランスをとるため、この時液滴は分裂現象を生じる。分裂の程度は、液滴の半径、溶剤の表面張力、液滴内に帯びる電荷数により異なる。
相同の過程は、エレクトロスプレー法端と質量分析計間で絶えず重複し、帯電液滴は多数回の分裂を経て、体積は絶えず減少し、最終的には溶剤が除去される。
溶剤除去の効率を高めるため、通常は、分析物溶液中に揮発性が高い有機溶剤を添加し、溶液の表面張力を低下させ、エレクトロスプレー法時の溶剤の揮発に利する。
また、噴霧化気流を利用し、エレクトロスプレー法の効率を高め、或いは質量分析計入口端でエレクトロスプレー法端へと補助気流を加え、溶剤揮発を助ける。

実施形態２．３ 游離（ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ）：気相イオン形成
現在のところ、帯電液滴の気相イオン形成のメカニズムを確定することはできない。しかし、現在科学者に比較的受け入れられている理論は主に二つある。一つは１９６８年Ｍ．Ｄｏｌｅが提出した電荷残留理論で、もう一つは１９７６年Ｂ．Ａ．Ｔｈｏｍｓｏｎが提出したイオン揮発理論である。
電荷残留理論は、帯電液滴の溶剤が絶えず揮発と多数回の分裂を経た後、溶剤は完全に揮発し、液滴は二度と分裂することはできなくなり、もともとの液滴上の電荷は、分析物分子上に残留し、分析物は多くの電荷を帯びた気相イオンを形成するという。
イオン揮発理論は、気相イオンは溶剤揮発後に形成されるという訳ではなく、帯電液滴の溶剤揮発が最後になると、液滴直径が１０〜２０ｎｍまで縮小し、液滴内部電荷の不安定を引き起こし、内部の過大な外向きの反発力を低下させるため、帯電した液滴は、液滴表面を突破し多くの電荷を帯びた気相イオンを形成するという。
１９９３年Ｆｅｎｎはイオン揮発理論を改良して発表し、大分子が多くの電荷を帯びる現象を説明した。彼は、液滴は最初多くの電荷を帯びており、これら液滴中には同時に異性電荷のイオンを含んでいると考えた。大分子は液滴中でブラウン運動を行い、液滴の表面へと移動し、部分液滴表面の電荷と置換し、さらに熱エネルギーにより駆動され、大分子の部分帯電エリアは液滴表面を突破し、分子と液滴とは離脱し、多価電荷の気相イオンを形成する。

実施形態３ ラマン散乱分光法
本発明はラマン分光法を用い、主成分物質の分子振動ピークを測定し、分析物のスペクトル指紋識別に用いる。
ラマン分光法が生じるメカニズムは、入射光とサンプル分子交互作用に関わった後、分子上の原子は入射光の撹乱を受けると、その入射光の電界は分子の電子雲と交互作用を生じる。こうして放射散乱（ｅｌｅｃｔｒｏｍａｇｎｅｔｉｃ ｒａｄｉａｔｉｏｎ）を生じ、この交互作用が招く電子の周期的振動は、それに伴いエレクトリックモーメント（ｅｌｅｃｔｒｉｃ ｍｏｍｅｎｔ）を生じ、その振動する電子は、散乱光のソースである。
散乱過程において、入射光とサンプル分子エネルギーシフトに関わり、生じる散乱光周波数と光源入射光周波数とは等しくない。よって、ラマン散乱（Ｒａｍａｎ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ）は非弾性衝突である。ラマン散乱は、二種に分けられる。散乱光周波数が入射光に対して増加すると、アンチストローク散乱（ａｎｔｉ-Ｓｔｏｋｅｓ Ｒａｍａｎ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ）という。散乱光周波数が入射光に対して減少すると、ストローク散乱（Ｓｔｏｋｅｓ Ｒａｍａｎ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ）という。
生活中でしばしば見られる散乱は、レイリー散乱で、光波長の改変に関わらないため、弾性散乱に属する。
レイリー散乱に対して、ラマン強度は通常はその百万分の一前後であるため、日常生活でラマン散乱現象を観察するのは容易ではない。
量子力学の観点から見れば、ラマン散乱光周波数が、入射光と異なるのは、主に、電子が占めるエネルギー準位の改変によるもので、及び散乱光周波数改変は、分子振動エネルギー準位に対応することができる。

実施形態４ 本発明の海洋深層水抽出物活性成分分析
本発明の２４００ｐｐｍ硬度海洋深層水抽出物（ＤＳＷ２４００）は、竹串エレクトロスプレー法イオン化、ろ紙エレクトロスプレー法イオン化方法、ラマン分光法を含むエレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）により、海洋深層水抽出物が含む可能性がある特殊成分の分析を行う。
エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）の結果は、図１に示す。竹串質量分析計により、本発明ＤＳＷ２４００では、６８７（６８５-６９０）、７３３（７３３-７３８）、１０７０（１０７０-１０７５）の三種の波形群分子量の強度（Ｂ）が現れた。
６８７、７３３、１０７０波形群分子量は、迅速図のパフォーマンス（Ｄ）である。
ろ紙エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）を利用したところ、７３３と１０７０波形群分子量（Ｃ）が現れた。
ＲＯ水サンプルは、竹串エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）において、この波形は現れなかった（Ａ）。

本発明の海洋深層水抽出物成分の溶解性有機質（ＤＯＭ）が有機成分であることを確定するため、本発明はそれぞれジクロロメタン（Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ，ＤＣＭ）、アセトン、クロロホルムの三種の有機溶液により抽出した海洋深層水抽出物と本発明２４００ｐｐｍ硬度海洋深層水抽出物（ＤＳＷ２４００）原液により、エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）スペクトラムの比較を行った。
結果は図２に示す。これに示す通り、竹串エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）では、本発明ＤＳＷ２４００はＤＣＭ、アセトン、クロロホルムの三種の有機溶液抽出により、主に６８７、７３３、１０７０波形の分子量を得られることがわかった。
また、本発明ＤＳＷ２４００にろ紙エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）を行うと、７３３と１０７０波形の分子量が得られることがわかった。
よって、本発明の海洋深層水抽出物の６８７、７３３、１０７０分子量は有機成分であることが証明された。

本発明は、異なる海水エリアと異なる処理の海洋深層水或いは海洋表面水（ｓｕｒｆａｃｅ ｗａｔｅｒ，ＳＳＷ）を取り、エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）により分析を行った。結果は図３に示す。図に示す通り、分子量は、２０００以下の有機成分の分子量のパフォーマンスは異なる。これにより、本発明の海洋深層水（ＤＳＷ２４００）は海洋表面水（ＳＳＷ-５０）、台肥海鉱１４００深層海水（ＣＳ１-ＨＢ）サンプルに比べ、１０７０波形群の強度がより現れていることがわかる。
且つその他Ｄｅｅｐ Ｍｉｎｅ深層海水（ＣＳ２-ＤＭ系）、台塩海洋アルカリ性イオン水（ＣＳ３-ＴＹ）、統一ＰＨ９．０アルカリ性イオン水（ＣＳ４-Ｔ１）及びＬｉｇｈｔアルカリ性水（ＣＳ５-ＬＢ）はすべて、１０７０波形を備えず、該各商品には該有機成分を含んでいないことを示している。

市販のＲＥＮＩＳＨＡＷラマン分光器により、ＤＳＷ２４００のサンプルを電気透析（ＥＤ）した。図４に示す通り、波数（ｗａｖｅｎｕｍｂｅｒ）が１０００の分子振動ピークの強度は、滅菌鍋加熱後と未処理の本発明海洋深層水抽出物と比較し、明確に低下している。これにより、加熱により有機成分を破壊することが証明された。

実施形態５ 本発明の海洋深層水抽出物活性成分の酸に対するパフォーマンス
４００ｍｌの本発明の２４００ｐｐｍ硬度海洋深層水抽出物（ＤＳＷ２４００）を開封後直ちに使用する。１０個の遠心分離管にそれぞれ加える。
（Ａ）５０ｍｌのＲＯ逆浸透膜処理後淡水化したＲＯ逆浸透膜水。
（Ｂ）一切処理していない５０ｍｌの本発明ＤＳＷ２４００。
（Ｃ）５０ｍｌの本発明ＤＳＷ２４００を遠心分離管もいっしょに滅菌鍋内で１２１°Ｃで１５分間の加熱滅菌処理した。
（Ｄ）５０ｍｌの本発明ＤＳＷ２４００にＨＣｌを加えｐＨ値を５とし、電気透析を行ったサンプル。
（Ｅ）５０ｍｌの本発明ＤＳＷ２４００にＨＣｌを加えｐＨ値を４とし、電気透析を行ったサンプル。
（Ｆ）５０ｍｌの本発明ＤＳＷ２４００にＨＣｌを加えｐＨ値を３とし、電気透析を行ったサンプル。
（Ｇ）空気に接触したばかりの５０ｍｌの本発明ＤＳＷ２４００。
（Ｈ）空気に三日間接触した５０ｍｌの本発明ＤＳＷ２４００に、電気透析を行ったサンプル。
（Ｉ）水素を通した５０ｍｌの本発明ＤＳＷ２４００に、電気透析を行ったサンプル。
（Ｊ）０．２２μｍろ紙でろ過した５０ｍｌ本発明ＤＳＷ２４００に電気透析を行ったサンプル。
１０個のサンプルにエレクトロスプレー法／質量分析法（ＥＳＩ／ＭＳ）を行ったところ、図５に示す通り、本発明１０７０波形群の強度は、各サンプル中でパフォーマンスが異なり、空気に接触したばかりの５０ｍｌ本発明ＤＳＷ２４００、及び０．２２μｍろ紙でろ過した５０ｍｌ本発明ＤＳＷ２４００のピークが最高で、酸（ｐＨ３〜４）を用い、空気接触が長く酸化、及び高温滅菌のサンプル１０７０波形の有機成分は破壊されている。

実施形態６ 抗酸化物添加の、本発明の海深層水抽出物活性成分保存に対する効果
４００ｍｌの本発明の海洋深層水を開封後（第一日）直ちにエレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）で分析し、メジャーボトルで２００ｍｌ取り出す。次に、４瓶の５０ｍｌ遠心分離管内に分けて入れ、各瓶５０ｍｌを処理後に緊密に封鎖する。
第一瓶には、一切処理しない（空気との接触面積を減らす）。
第二瓶には、水素を３０秒通す（ＤＳＷの溢出を招く可能性がある）。
第三瓶には、抗酸化物ケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）（１ｍｇ／２００ｍｌ）を加える。
第四瓶には、抗酸化物カテキン（ＥＧＣＧ）（１２ｍｇ／５０ｍｌ）を加える。
また、残った２００ｍｌは、原容器中に残し、空気中に晒し、無処理対照組とする。
すべての液体は、第二、九日にそれぞれ開封テストを行い、異なる処理方式後のエレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）により、１０７０等波形強度を評価する。

結果は図６〜図８に示す通り、エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）により、１０７０波形群の強度は、第一日の各種状況のパフォーマンス量が、第一日瓶を開けたばかりの時の五種処理には、１０７０波形群に近い強度があることが分かった（図６）。
エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）により、発見された。１０７０波形群の強度は第二日の各種状況のパフォーマンス量は、第二日に空気接触を減少させ、水素を３０秒通し、或いはケルセチン或いはカテキンなどの抗酸化物を加えた処理では、すべて１０７０波形群の強度パフォーマンス量を保っていた。これに対して、大瓶で未処理で、大量に空気に接触した１０７０波形群の強度パフォーマンス量は明らかに消失していた（図７）。
エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）により、１０７０波形群の強度は、第九日の各種状況のパフォーマンス量は、各組１０７０波形群の強度パフォーマンス量は明確に低下していたことがわかった。しかし、ケルセチン或いはカテキンなどの抗酸化物を加えた１０７０波形群の強度パフォーマンス量は、その他組に比べ比較的高い趨勢がある（図８）。

エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）により、１０７０波形群の強度を測り指標とし、五組の処理の本発明の海洋深層水抽出物の第一日（Ｄａｙ １）、第二日（Ｄａｙ ２）と第九日（Ｄａｙ ９）の各種状況の１０７０波形パフォーマンス強度を統計した。
図９に示す通り、大量に空気中に晒した第一組（Ａｉｒ １）の他、四組の１０７０波形群の強度は、第二日でなお保持されている。
各組１０７０波形群の強度は、第九日のパフォーマンス量はどれも明らかに低下している。しかし、水素、ケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）或いはカテキン（ＥＧＣＧ）のなどの抗酸化物を加えた１０７０波形群の強度パフォーマンス量は、その他組より比較的高い趨勢が見られた。
無処理の対照組（Ａｉｒ １により表示）では、２００ｍｌの本発明の海洋深層水抽出物を大量空気にさらす。
無処理組中（Ａｉｒ ２により表示）では、５０ｍｌの本発明の海洋深層水抽出物を、５０ｍｌ遠心分離管中に緊密に封入する。
水素（Ｈ２により表示）を通した組中では、５０ｍｌ本発明の海洋深層水抽出物を密封し水素を３０秒通した５０ｍｌ遠心分離管中に封鎖する。
ケルセチンを加える組（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎにより表示）は、５０ｍｌ本発明の海洋深層水抽出物を、すでに１ｍｇ／２００ｍｌのケルセチンを入れた５０ｍｌ遠心分離管中に入れる。
カテキンを加える組（ＥＧＣＧにより表示）は、５０ｍｌ本発明の海洋深層水抽出物をすでに１２ｍｇ／５０ｍｌのカテキンを添加した５０ｍｌ遠心分離管中に緊密に封鎖する。
その結果に示すように、空気と接触すれば、本発明の海洋深層水抽出物の有機成分は酸化し、安全で常用されている可食性物質の抗酸化物を添加すれば、本発明の海洋深層水抽出物の１０７０波形群の有機成分酸化を減らすことができる。

本発明は海洋深層水抽出物をｒｅｖｅｒｓｅ ｏｓｍｏｓｉｓ（ＲＯ逆浸透膜）、電気透析（ｅｌｅｃｔｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ）、或いは小分子膜ナノフィルター（ｎａｎｏｆｉｌｔｅｒ）等の他の方式を利用し、ヘリコバクターピロリの生長を抑制する活性成分を取得或いは保留することができる。
これら活性成分はさらに、ゲルフィルトレーション（ｇｅｌ ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）、ジクロロメタン（Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ，ＤＣＭ）抽出、アセトン抽出、及びクロロホルム抽出後に、分子量が２０００以下のヘリコバクターピロリの生長を抑制する性質を得る。
エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）分析により三種の主要分子量が６８７（６８５-６９０）、７３３（７３３-７３８）、１０７０（１０７０-１０７５）波形群の強度が発見された。
エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）により、ＤＣＭ、アセトン、クロロホルムの三種の有機溶液抽出２４００ｐｐｍ硬度海洋深層水抽出物（ＤＳＷ２４００）のサンプルは、主要な６８７、７３３及び１０７０波形を得ることが発見された。
こうして、６８７、７３３及び１０７０分子量が有機成分であると実証された。

本発明の海洋深層水抽出物は空気に接触し酸化し、１２１℃或いは１００℃で加熱処理或いは酸（ｐＨ３〜４）を用いれば６８７、７３３及び１０７０等波形の有機成分は破壊される。
市販のＲＥＮＩＳＨＡＷラマン分光器測量電気透析のＤＳＷ２４００のサンプルは、波数（ｗａｖｅｎｕｍｂｅｒ）が１０００の分子振動ピークの強度で、滅菌鍋加熱後と未処理の本発明海洋深層水抽出物は明らかに低下の状況が見られる。
エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）により、１０７０波形群の強度は第二日の空気接触後のパフォーマンス量が明らかに低下していることがわかった。
第二日の空気接触減少、水素を３０秒通す、或いはケルセチン或いはカテキンなどの抗酸化物添加処理をしたものは、すべて１０７０波形群の強度パフォーマンス量を保持している。
エレクトロスプレーイオン化質量（ＥＳＩ／ＭＳ）により、１０７０波形群の強度は、第九日の強度パフォーマンス量は明らかに低下しているが、ケルセチン或いはカテキンなどの抗酸化物を添加すると、１０７０波形群の強度パフォーマンス量は、その他組に比べ、比較的高い趨勢があることがわかった。

この他、本発明はその他抗酸化剤を採用し比較を行った。図１０に示す通り、ビタミンＣを、本発明の海洋深層水抽出物の有効成分を破壊する酸化に対する抗酸化剤としたところ、すべての抗酸化剤が、本発明の海洋深層水抽出物酸化を遅らせる効果がある訳ではないことがわかった。

実施形態７ 本発明の海深層水抽出物のヘリコバクターピロリ抑制（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）生長の効果
本発明は、海洋深層水抽出物は、ヘリコバクターピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）生長を抑制する活性成分を備え、その高カルシウム、高マグネシウム濃度及び高硬度と関係がないことが実証された。
図１１Ａに示す通り、本発明１２００、２４００、３６００、４８００及び６０００ｐｐｍ硬度の海洋深層水抽出物は、それぞれ滅菌鍋、０．２２μｍろ過膜でろ過し、及び滅菌鍋と０．２２μｍろ過膜でろ過処理したところ、本発明硬度２４００ｐｐｍ以上は、ヘリコバクターピロリ抑制の効果を備え、同時にろ過処理後の抑制効果はより高いことがわかった（図１１Ａ）。
本発明は、ＥＤＴＡ二価金属キレート剤をカルシウムとマグネシウム除去に用い、本発明の海洋深層水抽出物はカルシウム及びマグネシウムイオンを含まなくとも、ヘリコバクターピロリの生長を抑制する効果があることが実証された。相同のマグネシウムイオン濃度を含む蒸留水は、ヘリコバクターピロリ抑制生長の効果を発揮することはできない（図１１Ｂ）。

また、本発明は質量分析計量化を用い、海洋深層水抽出物１０７０成分強度数値とヘリコバクターピロリ抑制生長パーセンテージの関係図に示す通り、本実施形態では、異なる硬度の海洋深層水抽出物を調製し、異なる濃度のＥＤＴＡを海洋深層水抽出物に加え、或いは異なる濃度ＭｇＣｌ２の寒天培地（ａｇａｒ）に加え、０．２２μｍろ過膜滅菌或いは鍋（ａｕｔｏｃｌａｖｅ）滅菌でろ過を行う。
羊血を混合後、９ｃｍの培養基に入れ、凝固を待って寒天培地固体培養基（ａｇａｒ ｐｌａｔｅ）とする。
２．８５ｍｇＭｇＣｌ２を取り、その他培養基成分と水を加え、最後に体積が１０ｍｌのａｇａｒ ｐｌａｔｅとし、ａｇａｒ ｐｌａｔｅが含むＭｇＣｌ２濃度は２８５ｍｇ／Ｌである。
上述の方法に基づき、それぞれＭｇＣｌ２濃度を含む２８５ｍｇ／Ｌと５７０ｍｇ／Ｌのａｇａｒ ｐｌａｔｅを調製する。且つそれぞれ異なる硬度１２００〜６０００ｐｐｍ海洋深層水抽出物或いは異なる濃度のＥＤＴＡを硬度２４００のｐｐｍ海洋深層水抽出物に加え、異なる成分含量の寒天培地固体培養基を調製する。

本発明は海洋深層水のヘリコバクターピロリ生長抑制の主要成分がなんであるかを確定するため、１０個の異なる病人検体から採取したヘリコバクターピロリを無菌綿棒を用いて、適量のヘリコバクターピロリを取り、寒天培地固体培養基上に塗布し、嫌気性インキュレーターで培養を行った。
培養３〜４日後に、ヘリコバクターピロリ細菌が生長しているか観察した。もし、生長していないなら、−と標示し、微量生長が見られるなら＋／−と標示し、正常な生長が見られるなら＋と標示する。
その結果は、図１２に示す通り、海洋深層水抽出物の濃度が高ければ、その抗菌効果も高いことがわかる。

滅菌鍋（ａｕｔｏｃｌａｖｅ）で滅菌し１０７０波形群含量が低下し、しかし０．２２μｍろ過膜でろ過し、１０７０波形群含量に影響しない。１０７０波形群含量は海洋深層水がヘリコバクターピロリ抑制生長を備える主要成分であることが実証された。
図１２は異なる成分１０７０波形群含量を含む海洋深層水抽出物のヘリコバクターピロリ抑制に対する抑制効果の関係図である。
１０７０波形群含量が高ければ高いほど海洋深層水抽出物とヘリコバクターピロリ抑制能力とは正比例する。
ＡはＲＯ逆浸透膜水サンプルである。
Ｂは表面海水ＳＳＷ（５０ｍ海面下の海水）サンプルである。
Ｃは滅菌鍋処理後のＤＳＷ２４００サンプルである。
Ｄは在ｐＨ３．９３の条件下のＤＳＷ２４００サンプルである。
Ｅは０．２２μｍでろ過したＤＳＷ２４００サンプルである。
ＦはＥＤ処理を経たＤＳＷ２４００サンプルである。
ＧはサンプルＡ乃至Ｆがヘリコバクターピロリ抑制に対する抑制効果の関係図である。
ＨはサンプルＡ乃至Ｆの１０７０波形群含量の平均強度量化数値である。

さらに、本発明の実施形態では、プレビュー、二重盲検法の方式で臨床試験を行い、本発明の海洋深層水抽出物が明らかにヘリコバクターピロリ感染により放出されるカーボン１３尿素呼吸数値を低下させられるか調べた。
先ず、年齢２０以上の成年男性或いは女性で、上腹痛等消化不良症状により胃カメラ検査を受け、慢性胃炎或いは軽微な胃粘膜びらん（直径５ｍｍ以下で、数は３個を超えない）或いは瘢痕期の消化性潰瘍があり、同時にピロリ菌感染が見られる患者に、本試験への参加の意思を確認した。
患者に以下の状況の一がある場合には排除した。
１）妊娠或いは授乳中の女性
２）深刻な腎臓障害、肝硬変などを併発している
３）治癒不能な悪性腫瘍
４）深刻な潰瘍出血
５）胃切除術を受けたことがある
６）カメラ検査前一ヶ月以内にビスマス塩、ＰＰＩｓ、抗生物質、或いは非ステロイド消炎鎮痛剤を服用

治療前に胃カメラとその付属検査を受けてもらい、同時カーボン１３尿素呼気試験（１３Ｃ-ＵＢＴ）を行い、ピロリ菌存在の状態を判定する。
患者は先ず計画担当スタッフにより試験内容及びプロセスについて説明を受け、且つ被験者同意書に署名後、試験プロセスに基づき試験前後に血液検査を行い身体基本機能を測定する。それは、血液常態検査（ＣＢＣ）、肝機能検査（ＬＦＴ）、腎機能検査（ＲＦＴ）、血糖、血中脂肪、及び、電解質である。カーボン１３尿素呼気試験（それぞれ本発明の海洋深層水抽出物（ＤＳＷ）飲用前、ＤＳＷ飲用完了二週間後、ＤＳＷ飲用完了四週間後）。
被験者はそれぞれ毎回２００ｍＬ本発明の海洋深層水抽出物（ＤＳＷ）或いは同じ包装だが本発明の海洋深層水抽出物ではない一般のミネラルウォーター（ＣＭＷ）を、一日４回（三食前一時間及び就寝前）、四週間飲用する。
同時に三食前後には胃腸蠕動促進薬物（ｐｒｏｋｉｎｅｔｉｃｓ）（メトクロプラミド（ｍｅｔｏｃｌｏｐｒａｍｉｄｅ）５ｍｇ／ｔａｂ）を一日三回と抗酸剤（ａｎｔａｃｉｄ）（ストロカイン（Ｓｔｒｏｃａｉｎ）（オキセサゼイン（ｏｘｅｔｈａｚａｉｎｅを含む）５ｍｇ及びｐｏｌｙｍｉｇｅｌ ２４４ｍｇ／ｔａｂ）を一日三回服用し、消化不良症状の緩和を助ける。
すべての患者はアンケート記入を義務づけられ、同時に治療期間には毎日臨床症状とＤＳＷ飲用量を記録する。
ＤＳＷ飲用期間は、病人はその普段の規則的飲食習慣を維持するが、以下の食物或いは薬物の同時使用禁止が要求される。それは、乳製品、漢方生薬、蜂蜜、クランベリー、乳酸菌を含む保健食品、過度に酸っぱさと辛味の強い食物等である。
本発明の海洋深層水抽出物（ＤＳＷ）の飲用終了後、患者はクリニックでＤＳＷ飲用従順度と不良反応発生の内容、程度、頻度を調べられる。
同時に、ＤＳＷ飲用後のピロリ菌菌量変化効果を評価する追跡検査を行う。
治療前、（１）組織学検査及び１３Ｃ-ＵＢＴがともに陽性時、或いは（２）細菌培養陽性は、帯菌の状態と判定される。
治療後の効果は、系列性の１３Ｃ-ＵＢＴ数値の変化を、判断の根拠とする。

図１３に示す臨床研究数値により、陽性ピロリ菌感染の患者は本発明の１０７０成分を含む海洋深層水抽出物を飲用することで、明らかヘリコバクターピロリ感染により放出されるカーボン１３尿素呼吸数値が低下したことがわかる。
一方、１０７０成分を含まない一般のミネラルウォーター（ＣＭＷ）では、カーボン１３尿素呼吸数値（ヘリコバクターピロリ感染程度を改善できない）を変えることはできていない。

よって、本発明による分子量が２０００以下の有機成分を備える海洋深層水抽出物は、ヘリコバクターピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）生長を抑制でき、ヘリコバクターピロリ感染治療の新戦略であることが実証された。

以上は本発明の好ましい実施例の説明に過ぎず、並びに本発明を限定するものではなく、本発明に提示の精神より逸脱せずに完成されるその他の同等の効果の修飾或いは置換は、いずれも本発明の権利請求範囲内に属する。

Claims (1)

1. ヘリコバクターピロリの生長を抑制する薬物製造に用いる海洋深層水抽出物であって、前記海洋深層水抽出物は、海洋深層水を逆浸透膜と電気透析の方法を用いて製造し、
   
   前記海洋深層水抽出物は、有機成分を有し、
   前記有機成分は、６８５〜６９０、７３３〜７３８、及び１０７０〜１０７５の分子量により組成されるグループより選択され、２４００ｐｐｍ〜４８００ｐｐｍの硬度を有し、Ｃa／Ｍｇの鉱物含有量は０．１８であり、
   前記海洋深層水抽出物はさらに、抗酸化物を有して前記有機成分の分解を遅らせられ、且つ前記抗酸化物は、ケルセチン、カテキン或いは水素であることを特徴とする海洋深層水抽出物。

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