JP6296620B2 - 細胞評価用ハイドロゲル基材、細胞評価用ハイドロゲル基材の作製方法および細胞評価手法 - Google Patents
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Description
のようにすることによって、酸素あるいは栄養分の不足による内部に包埋した細胞の壊死を防ぐことが可能となるほか、癌細胞がハイドロゲル基材の外部へと浸潤するために必要となる時間を短縮することが可能となる。
なる。そのため、既存の手法やシステムと比較して、癌細胞の浸潤挙動をより再現性高く、正確に、簡便に、かつ効率的に評価することが可能となる。
ことが好ましい場合もありうる。これらの観点から、ハイドロゲルの直径は、50マイクロメートル以上500マイクロメートル以下であることが好ましく、50マイクロメートル以上300マイクロメートル以下であることがより好ましい。
によって、図4に示すように流路内でゲル化を行う際に、層流を安定的に形成することが可能となり、ハイドロゲル材料の作製時の操作性を向上させることが可能である。なお、第一の水溶液、第二の水溶液、第三の水溶液、ゲル化剤水溶液、バッファー水溶液のうち、室温において、粘度の最小のものと最大のものの粘度の比が、1:1〜1:100の範囲にあることが好ましく、1:1〜1:10の範囲にあることがより好ましい。なお、流路外においてゲル化を行う場合には、この限りではない。
Claims (24)
- ハイドロゲルによって構成され、直径500マイクロメートル以下のファイバー状の形態を有し、長さ方向の軸に対して垂直な平面における断面Sの内部において、周縁部が前記断面Sの周縁部に接しておらずかつ第一の細胞が存在する領域Aを有し、さらに前記領域Aは、前記断面Sにおける前記領域A以外の領域Bと比較して、弾性率の低いハイドロゲルによって構成されており、また、前記断面Sにおいて部分的に前記領域A及び前記領域Bに接し、かつ、部分的に前記断面Sの周縁部に接する領域Cを有し、さらに前記領域Cは、前記領域Bと比較して、弾性率の低いハイドロゲルによって構成されており、前記第一の細胞を前記領域Cを通過して浸潤させる細胞評価用ハイドロゲル基材であって、前記領域Aの面積は前記第一の細胞の平均直径をDとすると10D 2 以下であり、前記第一の細胞の平均直径をDとすると領域Cの幅は3D以下である細胞評価用ハイドロゲル基材。
- 前記領域A、前記領域B及び領域Cを構成するハイドロゲルの少なくともいずれかは、アルギン酸によって構成されている請求項1に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材。
- 前記領域A及び前記領域Cを構成するハイドロゲルの少なくともいずれかには、アルギン酸プロピレングリコールが含まれている請求項1に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材。
- 前記領域A、前記領域B及び領域Cを構成するハイドロゲルのマトリックス中には、細胞外マトリックスを構成するタンパク質及び細胞接着性のペプチド分子の少なくともいずれかが含まれている請求項1に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材。
- 前記第一の細胞とは、癌細胞である請求項1に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材。
- 前記領域Bには、繊維芽細胞、内皮細胞、上皮細胞、平滑筋細胞、骨格筋細胞、中皮細胞、実質細胞、腺細胞、表皮細胞、神経細胞、骨芽細胞、これらの細胞の前駆細胞、各種幹細胞より分化させた細胞の少なくともいずれかが存在する請求項1に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材。
- 前記領域Aの面積をSとし、前記領域Aの周囲長をLとすると、前記領域Aの円形度4πS/L 2 は0.5以上である請求項1に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材。
- ハイドロゲルによって構成され、厚さ500マイクロメートル以下のシート状であり、長さ方向の軸に対して垂直な平面における断面Sの内部において、周縁部が前記断面Sの周縁部に接しておらずかつ第一の細胞が存在する領域Aを有し、さらに前記領域Aは、前記断面Sにおける前記領域A以外の領域Bと比較して、弾性率の低いハイドロゲルによって構成されており、また、前記断面Sにおいて部分的に前記領域A及び前記領域Bに接し、かつ、部分的に前記断面Sの周縁部に接する領域Cを有し、さらに前記領域Cは、前記領域Bと比較して、弾性率の低いハイドロゲルによって構成されており、前記第一の細胞を前記領域Cを通過して浸潤させる細胞評価用ハイドロゲル基材であって、前記断面Sの内部において、前記領域Aは複数個所存在する細胞評価用ハイドロゲル基材。
- 前記領域Aに含まれる、前記第一の細胞の密度は、1立方センチメートル当たり10万個以上である請求項1に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材。
- 前記領域Bに含まれる細胞の密度は、1立方センチメートル当たり100万個以上である請求項6に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材。
- 少なくとも3つの入口I1〜In(n≧3)と、前記入口I1〜Inにそれぞれ接続する入口流路CI1〜CInと、前記入口流路CI1〜CInが同時あるいは段階的に合流する少なくとも1つの合流点P1〜Pm(m≧1)と、前記合流点P1〜Pmより下流に存在する合流流路Gと、前記合流流路Gの下流に存在する出口Oを有する、流路構造Xを使用した細胞評価用ハイドロゲル基材の作製方法であり、前記細胞評価用ハイドロゲル基材は、直径500マイクロメートル以下のファイバー状の形態を有し、長さ方向の軸に対して垂直な平面における断面Sの内部において、周縁部が前記断面Sの周縁部に接しておらずかつ第一の細胞が存在する領域Aを有し、さらに前記領域Aは、前記断面Sにおける前記領域A以外の領域Bと比較して、弾性率の低いハイドロゲルによって構成されており、また、前記断面Sにおいて部分的に前記領域A及び前記領域Bに接し、かつ、部分的に前記断面Sの周縁部に接する領域Cを有し、さらに前記領域Cは、前記領域Bと比較して、弾性率の低いハイドロゲルによって構成されており、前記第一の細胞を前記領域Cを通過して浸潤させる細胞評価用ハイドロゲル基材であって、前記領域Aの面積は前記第一の細胞の平均直径をDとすると10D 2 以下であり、前記第一の細胞の平均直径をDとすると領域Cの幅は3D以下であり、アルギン酸ナトリウムを含み、かつ前記第一の細胞を懸濁させた、第一の水溶液を、前記入口I1を介して、また、アルギン酸ナトリウムを含む第二の水溶液を、前記入口I2を介して、さらに、アルギン酸ナトリウムを含む第三の水溶液を、前記入口I3を介して、それぞれ連続的に導入し、前記流路構造Xの内部において、前記第一の水溶液、前記第二の水溶液、前記第三の水溶液を接触させ、さらに、前記流路構造Xの内部又は外部において、前記第一の水溶液、前記第二の水溶液、および前記第三の水溶液をゲル化剤水溶液と接触させることによって、前記第一の水溶液および前記第二の水溶液が接触した状態で連続的にゲル化することによって前記細胞評価用ハイドロゲル基材を作製し、また、前記領域Aは前記第一の水溶液がゲル化することによって形成し、かつ、前記領域Bは前記第二の水溶液がゲル化することによって形成し、さらに、前記領域Cは前記第三の水溶液がゲル化することによって形成する細胞評価用ハイドロゲル基材の作製方法。
- 前記流路構造Xは、少なくとも一つの入口G1〜Gn(n≧1)および、前記入口G1〜Gnにそれぞれ接続し合流点P1〜Pmのいずれかにおいて合流流路Gに合流する入口流路CG1〜CGnを有しており、前記入口G1〜Gnを介して前記ゲル化剤水溶液を流路構造Xに連続的に導入する請求項11に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材の作製方法。
- 前記流路構造Xは、少なくとも一つの入口B1〜Bn(n≧1)および、前記入口B1〜Bnにそれぞれ接続し合流点P1〜Pmのいずれかにおいて合流流路Gに合流する入口流路CB1〜CBnを有しており、前記入口B1〜Bnを介してバッファー水溶液が流路構造Xに連続的に導入する請求項11に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材の作製方法。
- 前記合流点P1〜Pmのうち少なくとも一つの合流点において、前記第一の水溶液は、その上下左右の少なくともいずれかにおいて前記第二の水溶液と接触する請求項11に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材の作製方法。
- 前記流路構造Xは、少なくとも部分的に、キャピラリー状の管によって構成されている請求項11に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材の作製方法。
- 前記流路構造Xは、少なくとも部分的に、微細加工技術を用いて作製されたマイクロ流路構造によって構成されている請求項11に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材の作製方法。
- 前記流路構造Xは、その幅、深さ、直径の値のうち少なくともいずれか一つが、少なくとも部分的に1ミリメートル以下である請求項11に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材の作製方法。
- 前記第一の水溶液、前記第二の水溶液及び前記第三の水溶液の少なくともいずれかに含まれるアルギン酸ナトリウムの濃度は、それぞれ100mLあたり1g以下である請求項11に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材の作製方法。
- 前記第二の水溶液に含まれるアルギン酸ナトリウムの濃度は、100mLあたり1g以上である請求項11に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材の作製方法。
- 前記ゲル化剤水溶液は、塩化バリウムを含む請求項11に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材の作製方法。
- 前記ゲル化剤水溶液は、増粘剤を含む請求項11に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材の作製方法。
- 前記第一の水溶液乃至前記第三の水溶液は、アルギン酸プロピレングリコールを含む請求項11に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材の作製方法。
- 前記第一の水溶液乃至前記第三の水溶液に含まれる前記アルギン酸プロピレングリコールの濃度は、それぞれ100mLあたり1g以上である請求項22に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材の作製方法。
- 請求項1に記載の細胞評価用ハイドロゲル基材を用いる細胞評価手法であって、
前記ハイドロゲル基材内部に包埋した細胞に対し、培養操作を行い、前記第一の細胞が前記ハイドロゲル基材の内部を浸潤しゲル外部にまで達する個数あるいは割合を、計測することによって、細胞の浸潤を定量的に評価する細胞評価手法。
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