JP6249962B2 - 抗体およびエンドグリコシダーゼの組合せ治療上の使用 - Google Patents

Description

本発明は、治療用抗体を含む組成物、ならびに治療用抗体の効能を増大するための使用および方法に関する。特に本発明は、（ｉ）内因性血清抗体（endogenous serum antibodies）のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および（ｉｉ）治療用抗体、好ましくはその薬剤に耐性がある治療用抗体を含む組成物を提供する。治療用抗体は一定時間間隔後に対象に投与することができ、または対象の血液は、治療用抗体を投与する前に薬剤で処置することができる。

歴史上、がんなどの疾患を治療するために、抗体、特にモノクローナル抗体を使用する本来の目的は、身体中のがん細胞を探して破壊するための「魔法の弾丸」のようなものであった。

抗体を使用して、身体内の特定標的に対する免疫系を動員することができる。抗体断片結晶化（Ｆｃ）ドメインと免疫細胞の表面上で発現されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）の相互作用によって、抗体は細胞免疫系を動員する。治療用抗体のＦｃドメインとＦｃＲの間の相互作用は、抗がん抗体、抗炎症性抗体、抗病原性抗体、および自己免疫疾患を治療するための抗体を含めた開発において一定範囲の抗体治療で重要である。

このような療法では、Ｆａｂドメインの特異性によって、抗体は標的抗原に対して特異的である。これらの抗体は通常免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）クラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４である。これらの抗体は、ヒトＦｃＲ：ＦｃγＲＩ、ＲγＩＩａ、ＲγＩＩｂ、ＲγＩＩＩａおよびＦｃγＲｎ、および補体Ｆｃ受容体Ｃ１ｑと結合する。ＩｇＧ分子による細胞免疫系の動員の効率は、ＦｃＲ（複数可）に対するＦｃのアフィニティーによって影響を受ける。したがって、ＦｃＲに対して調節された結合を示すＩｇＧＦｃの変異体が開発されている。これらのＩｇＧＦｃ変異体は、１つまたは複数のＦｃＲに対するアフィニティーを変えるためＦｃドメインのタンパク質および／または炭水化物成分に導入された変化を有しており、それらは１つまたは複数のＦｃＲに対して低下もしくは増大したアフィニティーを示し得る。この受容体アフィニティーの調節によって、特定前炎症性もしくは抗炎症性プロファイルで、特定範囲の細胞および体液性免疫成分の動員が可能である。

特定のがんで選択的または独自に発現される多くの抗原が発見されているが、しかしながら一般に、がん細胞を殺傷するための非修飾抗体を使用する試みは中程度の成功のみとなっている。非標識状態の「プレーン（plain）」抗体を使用する際の問題点は、他の宿主細胞と同様にがん細胞が、細胞表面上での補体結合の阻害剤（崩壊促進因子、ＤＡＦなど）の発現によって、補体介在溶解に対して保護されることである。同様に、細胞表面におけるがん抗原の濃度または量は時折非常に低下し、ＡＤＣＣなどの抗体誘導エフェクター機構および補体結合による殺傷をサポートするのに不十分である。

細胞表面上の少ないがん抗原量というこれらの問題点の結果として、がん細胞上に多量に存在するが宿主細胞上にも多量に存在する組織または系統特異的抗原を認識する、がん細胞を殺傷するためのモノクローナル抗体製品が開発されており、これはがん特異的抗原を対象とするがん特異的抗体の「特異性」利点を損ねる。例としては、非ホジキンリンパ腫用のリツキサン（抗ＣＤ２０）（ＣＤ２０は正常Ｂ細胞上でも発現される）、同様に（正常Ｔ細胞上でも発現されるＣＴＬＡ４を認識する）転移性メラノーマ用のエルモイ（Yermoy）があげられる。

（がん細胞のみを選択的に殺傷することができる非標識状態の抗体の）元来の「魔法の弾丸」の概念を発展させる際に直面するこれらの問題点のため、がん細胞の増殖に重要な増殖因子（例えば、アバスチンにより認識されるＶＥＧＦ）または増殖因子受容体（例えば、ハーセプチンにより認識されるＨｅｒ２）に対するモノクローナル抗体で得られる特異性を利用する、さらなる戦略が開発されている。しかしながらＶＥＧＦの場合、それはアバスチンによっても中和される重要な生理機能を果たし、がん特異的抗原を認識しそれらを有する細胞を健常細胞の殺傷なしに殺傷し得るという理論上の利点がある程度失われる。

がんの治療以外に、異常に提示もしくは増大する宿主細胞抗原および／またはウイルスコード抗原がモノクローナルによって標的化されるウイルス感染の治療に、モノクローナル抗体を使用することができる。病原体の排除は、同様のＦｃＲ依存機構によって起こる。例えばバビツキシマブは、感染細胞の原形質膜の外小葉における、ホスファチジルセリンの異常な提示を標的化する。

抗体の性質を向上させるため、いくつかの他の手法が採用されている。

一手法は、二重特異性抗体を使用して抗原とＦｃＲを直接架橋させることである。無Ｆｃ形式を使用する同様の手法、例えば２つの標的タンパク質を１つにする多重提示Ｆｖ断片が記載されている。

前述のように、細胞傷害作用活性を増大させるためのますます一般的な手法は、Ｆｃまたは抗体様分子に毒素を直接連結させることである。

ＦｃγＲとＩｇＧＦｃの結合を向上させるための一方法は、突然変異Ｆｃ領域を有するＩｇＧの製造となっている。特に受容体結合表面を形成するＣγ２ドメイン先端の突然変異、または受容体結合表面と隣接した突然変異は、ＦｃＲ相互作用の増大をもたらす可能性がある。例えば、Shields et alはＦｃに突然変異を導入し、改変されたＦｃ受容体結合をもたらした（Shields et al, J Biol Chem. 2001 Mar 2;276(9):6591-604）。

ＦｃγＲＩＩＩａとＩｇＧＦｃの結合を向上させるためのさらなる方法は、Ａｓｎ２９７結合Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）上にα１−６フコース（いわゆる「コア」フコース）を欠いたＩｇＧＦｃの製造となっている。その位置におけるフコースの存在は、Ａｓｎ１６２におけるＦｃγＲＩＩＩａグリカンとの接触によって、ＦｃγＲＩＩＩａとのアフィニティーを低下させる。フコースの除去によりこの立体的接触が排除され、ＦｃγＲＩＩＩａに対するアフィニティーが増大する。

向上したＦｃＲ結合を示すような抗体の操作によって、細胞性免疫細胞の動員のある程度の改善は得られるが、非結合受容体の利用能により、これらの方法は本質的に制限される。生理条件で、活性化細胞ＦｃγＲの大部分は、Ｆｃ：ＦｃＲ相互作用に関する有意に過剰な解離定数で血清抗体濃度の結果としてＦｃと結合する（Preithner, S., Elm, S., Lippold, S., Locher, M., Wolf, A., da Silva, A.J., Baeuerle, P.A. & Prang, N.S.(2006). Mol Immunol 43,1183-93; Bruhns, P., Iannascoli, B., England, P., Mancardi, D.A., Fernandez, N., Jorieux, S. & Daeron, M.(2009). Blood 113, 3716-25）。したがって細胞ＦｃγＲの活性化は、免疫複合体または多価抗原によって提示されるＩｇＧの結合前の無関係な抗体（大量血清ＩｇＧ）の置換に依存する。

Ｆｃの炭水化物またはタンパク質成分の一方または両方の操作は、細胞表面上において高レベルで発現された抗原に対する血清ＩｇＧの拮抗効果の克服を手助けすることができ、感染もしくはがん細胞における低アフィニティーまたは低コピー数エピトープは、血清ＩｇＧによる抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）から大部分が保護される。

しかしながら、治療用抗体のＦｃドメインとＦｃγＲの間の相互作用の向上または助長のための新たな方法を、開発する必要性が依然として存在する。

ＩｇＧを修飾しＦｃＲとのその結合を低減することができる酵素が現在存在するが、これらの酵素には、ＦｃγＲと全抗体の結合の低下をもたらす欠点がある（大量血清抗体、および追加的に、血清中にさらに存在する場合、任意の導入治療用抗体の両方）。したがって、血清抗体自体が病状の原因である場合、これらの酵素は有用であり得るが、それら自体が導入治療用抗体とＦｃγＲの間の相互作用を向上または助長するわけではない（このような治療用抗体は、血清ＩｇＧと同じ形式で酵素によって影響を受ける可能性があるからである）。したがって今日まで、これらのＩｇＧ修飾酵素は、内因性血清自己抗体によって誘導される自己免疫障害を治療するため、単に治療用にのみ使用されてきた（Albert H, Collin M, Dudziak D, Ravetch JV, Nimmerjahn F. Proc Natl Acad Sci USA. 2008 Sep 30;105(39):15005-9）。

がん細胞および他の細胞で選択的に発現される腫瘍特異的抗原に適用することができる、抗体の殺傷能力を向上させるための新たな手法が現在開発されている。新たな手法を抗体戦略に適用して必須増殖因子を、前記増殖因子のＦｃ受容体介在除去の向上により中和することもできる。

特に本発明者らは、任意の同時投与治療用抗体ではなく血清ＩｇＧの選択的酵素除去を達成するため、２つの抗体集団は酵素に対して差異のある感受性を示す必要があり、また、酵素および治療用抗体は空間的または時間的に別個に保持されなければならないことを現在認識している。

本発明は、どのようにしてＩｇＧ修飾物質、特に酵素に対する差異のある感受性を達成し、血清抗体を除去するが、操作されたＩｇＧを除去しないことを可能にし得るかを示す。

外から導入され得る治療用抗体のＦｃＲに対する機能的結合を同時に向上させながら、大量血清ＩｇＧとＦｃＲの結合を低減することができることが実証される。血清ＩｇＧのＦｃＲ結合性を低減または排除することができる薬剤を、このような薬剤の活性に耐性がある治療用抗体と一緒に導入することによって、この制御を実施することができる。具体的には、Ｆｃ分解物質に耐性があるように操作または選択したＦｃを有する治療用抗体と、Ｆｃ分解物質の投与にこれを適用する。

血清Ｆｃ結合を低減または排除する薬剤によるＦｃＲ結合の阻害は、このような薬剤に耐性がある治療用抗体のＦｃＲ結合を向上させることも実証される。特に、拮抗する血清ＩｇＧの脱グリコシル化は、ＦｃｇＲに対する血清ＩｇＧのみかけのアフィニティーに対して比較的中程度の影響があることが、本明細書において示される。これは、無影響抗体に対するアフィニティーの同等に中程度の増大に相当すると予想される。しかしながら、本発明者らのデータは、驚くことに、血清ＦｃγＲアフィニティーの約１０倍の低下は、モノクローナル抗体有効性の約１０００倍の増大をもたらすことを示す。このようなＦｃＲ結合の向上は、治療用抗体により標的化される細胞免疫機能の動員の向上をもたらすと考えられる。これらの細胞免疫機能は、個々のＦｖ変異体に応じて前炎症性または抗炎症性のいずれかであり得る。

したがって第一の実施形態において、本発明は、（ｉ）内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および（ｉｉ）治療用抗体、好ましくは薬剤に耐性がある治療用抗体を含む組成物を提供する。

組成物は、治療有効量の薬剤と抗体とを含むことが好ましい。

組成物は医薬組成物であり、薬学的に許容される担体または希釈剤をさらに含むことが好ましい。

本発明は、医薬品として同時、個別または連続的に使用するための組合せ調製物として、または療法において使用するための、（ｉ）内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および（ｉｉ）治療用抗体、好ましくは薬剤に耐性がある治療用抗体を含む組成物をさらに提供する。

本発明は、治療用抗体の効能を増大する方法および／または抗体介在療法において使用するための、（ｉ）内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および（ｉｉ）治療用抗体、好ましくは薬剤に耐性がある治療用抗体も提供する。

（ｉ）内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および（ｉｉ）治療用抗体、好ましくは薬剤に耐性がある治療用抗体は、がん、感染および／または自己免疫疾患の治療方法において使用することが好ましい。（ｉ）内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および（ｉｉ）治療用抗体、好ましくは薬剤に耐性がある治療用抗体は、がんの治療方法において使用することが好ましい。

好ましいことに本発明は、作用形態がＦｃ：ＦｃＲ相互作用を利用する、治療用抗体の使用に関する。

本発明は、治療用抗体の効能を増大する方法および／または抗体介在療法用の医薬品の製造における、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および治療用抗体、好ましくは薬剤に耐性がある治療用抗体の使用も提供する。医薬品は、がん、感染および／または自己免疫疾患の治療方法用であることが好ましい。医薬品は、がんの治療方法用であることが好ましい。医薬品は、感染の治療方法用であることが好ましい。医薬品は、自己免疫疾患の治療方法用であることが好ましい。

本発明は、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および治療用抗体、好ましくは薬剤に耐性がある治療用抗体を対象に投与するステップを含む、治療用抗体の効能を増大する方法および／または抗体介在療法をさらに提供する。内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および治療用抗体、好ましくは薬剤に耐性がある治療用抗体は、がん、感染および／または自己免疫疾患の治療方法において使用することが好ましい。内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および治療用抗体、好ましくは薬剤に耐性がある治療用抗体は、がんの治療方法において使用することが好ましい。

本発明は、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および治療用抗体、好ましくは薬剤に耐性がある治療用抗体を含む治療剤も提供する。

本発明は、治療用抗体の有効性を向上させる方法における、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および治療用抗体、好ましくは薬剤に耐性がある治療用抗体の使用も提供する。本明細書で開示するように、本発明は、低用量の治療用抗体を使用するおよび／または治療用抗体の副作用を減らす組成物、使用および方法も、可能にする。

本発明の組成物、治療剤、使用および方法のいくつかの実施形態では、
薬剤と治療用抗体が同時、個別または連続的に使用するための組合せ調製物として存在する。

いくつかの実施形態では、方法は、
（ａ）対象に前記薬剤を投与するステップ、および次いで、
（ｂ）場合によっては一定時間間隔後、対象に前記治療用抗体を投与するステップを含む。

一定時間間隔は、薬剤が対象内の内因性血清抗体に働きかけてＦｃ受容体結合を低減する時間を与える。投与する薬剤の量と時間間隔は、対象中の内因性血清抗体により、Ｆｃ受容体結合の開始レベルの５０％未満（すなわち、薬剤による処置前に内因性血清抗体によりＦｃ受容体結合レベルの５０％未満）に、Ｆｃ受容体結合を低減するのに十分であることが好ましい。投与する薬剤の量と時間間隔は、その患者における開始レベルの４０％、３０％、２０％または１０％未満に、対象中の血清抗体のＦｃ受容体結合レベルを低減するのに十分であることがより好ましい。薬剤は１つの単独時間地点に、または一定時間にわたり投与してもよい。

時間間隔は例えば１〜２、１〜５、１〜１０または１〜２０日であってよい。薬剤の量は０．１ｍｇ／Ｋｇ、１ｍｇ／Ｋｇまたは１０ｍｇ／Ｋｇであってよい。例えば１〜５０ｍｇのＥｎｄｏＳ、好ましくは１０〜２０ｍｇのＥｎｄｏＳ、より好ましくは約２０ｍｇのＥｎｄｏＳを使用することができる。ＥｎｄｏＳはｉｎ ｖｉｖｏで１２時間未満の半減期を有する。薬剤がＥｎｄｏＳである場合、したがって時間間隔は１〜５日、より好ましくは３〜４日であってよい。

さらに他の実施形態では、方法は
（ａ）薬剤を用いてｅｘ ｖｉｖｏで対象由来の血液を処置するステップ、
（ｂ）血液を対象に戻すステップ、および
（ｃ）対象に前記治療用抗体を投与するステップを含む。

内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤は、酵素による血清抗体の分解によりＦｃ：ＦｃＲ相互作用を中断する薬剤であることが好ましい。

薬剤は酵素であってよい。酵素はプロテアーゼ、またはエンドグリコシダーゼ、またはプロテイン−Ｎ−グリカナーゼであってよい。薬剤はＦｃ領域で血清抗体を切断し、Ｆｃ受容体結合を防止または低減することが好ましい。

内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤は、エンドグリコシダーゼであることが好ましい。エンドグリコシダーゼは、天然血清ＩｇＧのＦｃで見られるグリカンタイプに特異的であることが好ましい。エンドグリコシダーゼは、エンドグリコシダーゼＳ、Ｆ３またはＥｂｅｔａであることが好ましい。エンドグリコシダーゼは、エンドグリコシダーゼＳ（ＥｎｄｏＳ）であることが好ましい。エンドグリコシダーゼは、エンドグリコシダーゼＦ３であることが好ましい。エンドグリコシダーゼは、エンドグリコシダーゼＥｂｅｔａであることが好ましい。

好ましい実施形態では、薬剤はエンドグリコシダーゼ、ＥｎｄｏＳである。本発明者らは驚くことに、ＥｎｄｏＳはＦｃγＲ結合を向上させることが可能であり、したがって免疫活性剤として働き、ＥｎｄｏＳに耐性があるよう操作した対象の治療用抗体とのＦｃγＲ結合ではく、大量血清抗体とのＦｃγＲ結合を選択的に排除することができることを発見している。

内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤は、プロテイナーゼであってよい。プロテイナーゼはＩｄｅＳであることが好ましい。

治療用抗体はヒトモノクローナル抗体、または組換え抗体、またはそれらの１つまたは複数の断片であってよい。抗体が組換え抗体である場合、それはヒト化することができる。あるいは、治療用抗体はポリクローナル抗体であってよい。治療用抗体は、Ｆｃドメインを含む抗体でなければならない。

薬剤の活性に耐性がある治療用抗体のＦｃドメインは、薬剤の活性に耐性がある１つまたは複数の糖型（glycoforms）を含むことができる。糖型はオリゴマンノースタイプの糖型であってよい。オリゴマンノースタイプの糖型は、Ｆｃドメイン中に、Ｍａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｍａｎ_８ＧｌｃＮＡｃ_２またはＭａｎ_９ＧｌｃＮＡｃ_２を含むことが好ましい。オリゴマンノースタイプの糖型は、オリゴマンノースタイプのグリカンの混合物であることが好ましい。オリゴマンノースタイプの糖型は、Ｆｃドメインの各グリカンが５〜２０個のマンノース残基を含有する、オリゴマンノースタイプのグリカンまたは「イーストタイプの」オリゴマンノースタイプのグリカンであることが好ましい。オリゴマンノースタイプのグリカンまたはイーストタイプのオリゴマンノースタイプのグリカンは、Ｆｃドメインの各グリカンに、５個のマンノース、または６個のマンノース、または７個のマンノース、または８個のマンノース、または９個のマンノース、または１０個のマンノース、または１１個のマンノース、または１２個のマンノース、または１３個のマンノース、または１４個のマンノース、または１５個のマンノース、または１６個のマンノース、または１７個のマンノース、または１８個のマンノース、または１９個のマンノース、または２０個のマンノースを含有することがより好ましい。オリゴマンノースタイプのグリカンまたはイーストタイプのオリゴマンノースタイプのグリカンは、Ｆｃドメインの各グリカンに、少なくとも５個のマンノース残基を含有することが好ましい。オリゴマンノースタイプのグリカンまたはイーストタイプのオリゴマンノースタイプのグリカンは、Ｆｃドメインの各グリカンに、１５個を超えないマンノース残基を含有することがより好ましい。オリゴマンノースタイプのグリカンまたは「イーストタイプの」オリゴマンノースタイプのグリカンは、Ｆｃドメインの各グリカンに、２個のみのＧｌｃＮＡｃ残基と３個以上のマンノース残基を含有することが好ましい。

あるいは糖型は、「バイセクティングＮ−アセチルグルコサミン（bisecting-N-acetylglucosamine）」（バイセクティングＧｌｃＮＡｃ）を含有し得る。バイセクティングＮ−アセチルグルコサミンは、β−マンノース残基とｂ１−４結合したＮ−アセチルグルコサミンであることが好ましい。糖型は、Ｆｃドメインの各グリカン中のβ−マンノース残基と１−４結合した、少なくとも１個のβ−Ｎ−アセチルグルコサミン残基を含有することがより好ましい。糖型は、Ｆｃドメインの各グリカン中のβ−マンノース残基と１−４結合した、２個のβ−Ｎ−アセチルグルコサミン残基を含有することが好ましい。

糖型はシアル酸を含有し得る。糖型は、ガラクトースとα２−６結合したシアル酸を含有することがより好ましい。糖型は、Ｆｃドメインの各２グリカンと結合した１個または２個のシアル酸残基を含有することが好ましい。

糖型はハイブリッドタイプであってよい。ハイブリッドタイプは、トリマンノシルコアの３アーム上で別の複合タイプ残基で修飾されたＭａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２であることが好ましい。ハイブリッドタイプの糖型は、β−マンノース残基とｂ１−４結合したＮ−アセチルグルコサミン（バイセクティングＧｌｃＮＡｃ）を含有することが好ましい。

別の実施形態では、（Sazinsky et al. PNAS2008 Dec 23:105(51):20167-20172）中に記載されたように依然Ｆｃ受容体結合を可能にしながら、抗体を無グリコシル化状態となるように、すなわちＦｃドメイン上にグリカン基が存在しないように操作することができる。

薬剤のエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある治療用抗体は、薬剤のエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある１つまたは複数の糖型を含むことが好ましい。糖型はオリゴマンノースタイプの糖型であってよい。オリゴマンノースタイプの糖型は、Ｆｃドメイン中に、Ｍａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｍａｎ_８ＧｌｃＮＡｃ_２またはＭａｎ_９ＧｌｃＮＡｃ_２を含むことが好ましい。あるいは糖型は「バイセクティングＮ−アセチルグルコサミン」であってよい。糖型はシアル酸を含有し得る。糖型は、ガラクトースとα２−６結合したシアル酸を含有し得る。

ＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある治療用抗体は、ＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある１つまたは複数の糖型を含むことができる。糖型はオリゴマンノースタイプの糖型であることが好ましい。オリゴマンノースタイプの糖型は、Ｆｃドメイン中に、Ｍａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｍａｎ_８ＧｌｃＮＡｃ_２またはＭａｎ_９ＧｌｃＮＡｃ_２を含むことが好ましい。あるいは糖型は「バイセクティングＮ−アセチルグルコサミン」を含有し得る。糖型はシアル酸を含有し得る。糖型は、ガラクトースとα２−６結合したシアル酸を含有し得る。

ＥｎｄｏＦ３のエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある治療用抗体は、ＥｎｄｏＦ３のエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある１つまたは複数の糖型を含むことが好ましい。糖型はオリゴマンノースタイプの糖型であることが好ましい。オリゴマンノースタイプの糖型は、Ｍａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｍａｎ_８ＧｌｃＮＡｃ_２またはＭａｎ_９ＧｌｃＮＡｃ_２であることが好ましい。あるいは糖型は「バイセクティングＮ−アセチルグルコサミン」であってよい。糖型はシアル酸を含有し得る。糖型は、ガラクトースとα２−６結合したシアル酸を含有し得る。

本発明の他の実施形態において、治療用抗体は本明細書で定義する薬剤に耐性がない抗体である。例えば治療用抗体は、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤（例えば、ＥｎｄｏＳまたはＩｄｅＳ）に耐性がない（すなわち、それに対して感受性がある）。

好ましい実施形態では、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、および治療用抗体、好ましくはＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある治療用抗体は、がんの治療において使用するためのものである。

別の好ましい実施形態では、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、およびＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある糖型の治療用抗体は、がん、感染および／または自己免疫疾患の治療において使用するためのものである。内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、およびＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある糖型の抗体は、がんの治療において使用することが好ましい。

本発明は、抗体介在療法の効能を増大するための医薬品の製造における、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、および治療用抗体、好ましくはＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある治療用抗体の使用も提供する。医薬品は、がん、感染および／または自己免疫疾患の治療用であることが好ましい。医薬品は、がんの治療用であることが好ましい。

本発明は、抗体介在療法の効能を増大するための医薬品の製造における、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、およびＥｎｄｏＳの酵素活性に耐性がある糖型の治療用抗体の使用も提供する。医薬品は、がん、感染および／または自己免疫疾患の治療方法用であることが好ましい。医薬品は、がんの治療方法用であることが好ましい。

好ましい実施形態において、本発明は、抗体介在療法の効能を増大するための方法であって、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、および治療用抗体、好ましくはＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある治療用抗体を対象に投与するステップを含む方法を提供する。この方法は、がん、感染および／または自己免疫疾患の治療方法において使用するための、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、および治療用抗体、好ましくはＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある治療用抗体を、対象に投与するステップを含むことが好ましい。この方法は、がんの治療方法において使用するための、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、および治療用抗体、好ましくはＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある治療用抗体を、対象に投与するステップを含むことが好ましい。

別の好ましい実施形態において、本発明は、抗体介在療法の効能を増大するための方法であって、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、および治療用抗体、好ましくはＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある治療用抗体を対象に投与するステップを含む方法を提供する。この方法は、がん、感染および／または自己免疫疾患の治療方法において使用するための、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、およびＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある糖型の治療用抗体を、対象に投与するステップを含むことが好ましい。この方法は、がんの治療方法において使用するための、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、およびＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある糖型の治療用抗体を、対象に投与するステップを含むことが好ましい。

本発明は、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、および治療用抗体、好ましくはＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある治療用抗体を含む、がん治療剤も提供する。がん治療用抗体は、ＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある糖型の治療用抗体であってよい。

本発明は、治療用抗体の有効性を向上させるための方法における、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、および治療用抗体、好ましくはＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある治療用抗体の使用も提供する。

本発明は、ＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある糖型の治療用抗体の有効性を向上させるための方法における、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、およびＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある糖型の治療用抗体の使用も提供する。

本発明は、がん、感染および／または自己免疫疾患の治療方法において同時、個別または連続的に使用するための組合せ調製物としての、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、および治療用抗体、好ましくはＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある治療用抗体を含有する製品も提供する。組合せ調製物は、がんの治療方法において使用することが好ましい。

本発明は、がん、感染および／または自己免疫疾患の治療方法において同時、個別または連続的に使用するための組合せ調製物としての、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、およびＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある糖型の治療用抗体を含有する製品も提供する。組合せ調製物は、がんの治療方法において使用することが好ましい。

いくつかの実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連がん、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肛門がん、虫垂がん、小児期小脳もしくは大脳における星状細胞腫、基底細胞癌、肝外胆管がん、膀胱がん、骨がん、骨肉腫／悪性線維組織球腫、脳幹グリオーマ、脳がん、脳腫瘍、小児期星状細胞腫、脳腫瘍、大脳星状細胞腫／悪性グリオーマ、脳腫瘍、上衣細胞腫、脳腫瘍、髄芽細胞腫、脳腫瘍、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、脳腫瘍、視経路および視床下部グリオーマ、乳がん、気管支腺腫／カルチノイド、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、胃腸部のカルチノイド腫瘍、未知の原発性癌、中枢神経系リンパ腫、小児期星状細胞腫、大脳星状細胞腫／悪性グリオーマ、子宮頸がん、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病 慢性骨髄増殖性疾患、結腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜がん、上衣細胞腫、食道がん、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍のユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、小児性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、眼部がん、眼内メラノーマ、眼部がん、網膜芽細胞腫、胆嚢がん、胃腸（胃）がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、胚細胞腫瘍：頭蓋外、腺外、または卵巣、妊娠栄養膜腫瘍、脳幹のグリオーマ、グリオーマ、小児期大脳星状細胞腫、グリオーマ、小児期視経路および視床下部、胃カルチノイド、ヘアリーセル白血病、頭頚部がん、心臓がん、肝細胞（肝臓）がん、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、視床下部および視経路グリオーマ、眼内メラノーマ、膵島細胞癌（膵内分泌腺）、カポジ肉腫、腎臓がん（腎細胞がん）、咽頭がん、白血病（Leukemias）、急性リンパ芽球性白血病（急性リンパ性白血病とも呼ばれる）、急性骨髄性白血病（急性骨髄性白血病（acute myelogenous leukemia）とも呼ばれる）、慢性リンパ芽球性白血病（慢性リンパ性白血病とも呼ばれる）、慢性骨髄性白血病（慢性骨髄性白血病（chronic myeloid leukemia）とも呼ばれる）、ヘアリ細胞白血病、唇および口腔がん、脂肪肉腫、（原発性）肝がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、リンパ腫（Lymphomas）、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、バーキットリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（旧分類法のホジキン以外の全リンパ腫）、原発性中枢神経系リンパ腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、骨の悪性線維組織球腫／骨肉腫、髄芽細胞腫、メラノーマ、眼内（眼）メラノーマ、メルケル細胞癌、中皮腫、成人悪性中皮腫、原発不明転移性扁平上皮性頚部がん、口腔がん、多発性内分泌腫瘍症、多発性メラノーマ／形質細胞性腫瘍、菌状息肉症、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、成人急性骨髄性白血病、小児急性ミエローマ、多発性（骨髄のがん）、骨髄増殖性疾患、鼻腔および副鼻腔がん、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺がん、口腔がん、中咽頭がん、骨肉腫／骨の悪性線維組織球腫、卵巣がん、卵巣上皮がん（表面上皮−間質腫瘍）、卵巣胚細胞腫瘍、悪性の可能性が低い卵巣腫瘍、膵臓がん、膵島細胞がん、副鼻腔および鼻腔がん、上皮小体がん、陰茎がん、咽頭がん、クロム親和性細胞腫、松果体星状細胞腫、松果体胚細胞腫、松果体芽細胞腫およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍、下垂体腺腫、形質細胞性腫瘍／多発性ミエローマ、胸膜肺芽細胞腫、中枢神経系原発性リンパ腫、前立腺がん、直腸がん、腎細胞癌（腎臓がん）、腎盂および尿管、移行上皮細胞がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、肉腫、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍、カポジ肉腫、肉腫、軟質組織、肉腫、子宮、セザリー症候群、皮膚がん（非メラノーマ）、皮膚がん（メラノーマ）、皮膚腫瘍、メルケル細胞、小細胞肺がん、小腸がん、軟質組織肉腫、扁平上皮細胞癌、原発不明転移性扁平上皮性頚部がん、胃がん、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、皮膚Ｔ細胞リンパ腫−菌状息肉症およびセザリー症候群参照、精巣がん、咽頭がん、胸腺腫、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺がん、甲状腺がん、腎盂および尿管の移行上皮細胞がん、栄養膜腫瘍、尿管および腎盂の移行上皮細胞がん 尿道がん、子宮がん、子宮内膜、子宮肉腫、膣がん、視経路および視床下部グリオーマ、外陰がん、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症およびウィルムス腫瘍（腎臓がん）からなる群から選択される。

がんは膀胱がん、肺がん、乳がん、メラノーマ、結腸がん、直腸がん、非ホジキンリンパ腫、子宮内膜がん、膵臓がん、腎臓（腎細胞）がん、前立腺がん、白血病、食道がんまたは甲状腺がん、好ましくは乳がんからなる群から選択されることが好ましい。

本発明は、
（ａ）治療有効量の内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、および
（ｂ）治療有効量の治療用抗体、好ましくはＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある治療用抗体、および
（ｃ）薬学的に許容される担体または希釈剤を含む、
がん、感染および／または自己免疫疾患の治療方法において使用するための医薬組成物も提供する。

本発明は、
（ａ）治療有効量の内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減するＥｎｄｏＳ、および
（ｂ）治療有効量のＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性があるオリゴマンノースタイプ糖型の治療用抗体、および
（ｃ）薬学的に許容される担体または希釈剤を含む、
がん、感染および／または自己免疫疾患の治療方法において使用するための医薬組成物も提供する。

本発明は、がん、感染および／または免疫疾患の治療方法において使用するための、（ｉ）治療有効量の内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および（ｉｉ）治療有効量の治療用抗体、好ましくはＥｎｄｏＳのエンドグリコシダーゼ活性に耐性がある治療用抗体を含むキットも提供する。

キットは、治療有効量の薬剤および治療用抗体の投与、例えば用量情報に関する説明書を含むことができる。

本発明の任意の態様において、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤と薬剤に耐性がある治療用抗体は、例えばがん、感染および／または自己免疫疾患の治療において同時、個別または連続投与するためのものである。内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤と薬剤に耐性がある治療用抗体は、個別調製物として、または組合せ調製物として提供することができる。

本明細書で使用する用語「対象」は、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。

本明細書で他に定義しない限り、本発明に関して使用する科学および技術用語およびフレーズは、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈によって他に必要とされない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載する生化学、酵素学、分子および細胞生物学、微生物学、遺伝学、ならびにタンパク質および核酸化学、およびハイブリダイゼーションの技法に関して使用される名称は、当技術分野でよく知られており一般的に使用される名称である。本発明の方法および技法は一般に、他に示さない限り、当技術分野でよく知られている従来の方法に従い、本明細書を通して列挙し論じる様々な一般的かつより具体的な参照文献中に記載されているように、実施される。例えば、Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(1989); Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates(1992, and Supplements to 2002); Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(1990); Taylor and Drickamer, Introduction to Glycobiology, Oxford Univ. Press(2003); Worthington Enzyme Manual, Worthington Biochemical Corp., Freehold, N.J.; Handbook of Biochemistry: Section A Proteins, Vol I, CRC Press(1976);.; Handbook of Biochemistry: Section A Proteins, Vol II, CRC Press(1976); Essentials of Glycobiology, Cold Spring Harbor Laboratory Press(1999); Immunobiology, Janeway et al., 6^th Edition, 2004, Garland Publishing, New Yorkを参照。

本明細書で言及する全ての刊行物、特許および他の参照文献は、それらの全容を参照として組み込む。

他に示さない限り、以下の用語は以下の意味を有すると理解されたい。

本明細書で使用する用語「内因性血清抗体とのＦｃ受容体結合を低減する薬剤」は、少なくとも２倍ＩｇＧ：ＦｃγＲ相互作用の平衡結合定数を増大する薬剤を指すことが好ましい。薬剤は、少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも４倍、または少なくとも５倍、または少なくとも６倍、または少なくとも７倍または少なくとも８倍、ＩｇＧ：ＦｃγＲ相互作用の平衡結合定数を増大することが好ましい。薬剤は、少なくとも８倍ＩｇＧ：ＦｃγＲ相互作用の平衡結合定数を増大することがより好ましい。平衡結合定数の増大は、ＩｇＧとＦｃγＲの間（例えば、ＩｇＧとの間のＦｃγＲＩＩＡ）結合の低下を表す。

本明細書で使用する用語「内因性血清抗体」は、個々のＢ細胞から産生されたヒト組織中に存在するγ免疫グロブリン（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）、または本発明の療法剤の投与前にすでに存在したγ免疫グロブリンを指す。いくつかの実施形態では、用語「内因性血清抗体」はグリコシル化内因性血清抗体を指す。

本明細書で使用する用語「ＦｃγＲ」は、ヒト細胞に存在するＦｃγ免疫グロブリン受容体を指す。ヒトにおいてＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）およびＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）を含む受容体ファミリーの１個、数個、または全てを指す。本明細書で使用する用語「ＦｃγＲ」は、天然に存在する多型のＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）およびＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）を含む。

本明細書で使用する用語「オリゴマンノースタイプの糖型抗体」は、ＧｌｃＮＡｃ残基とマンノース残基のみで構成されるそれらのＦｃ領域内にＮ結合グリカンを含有する抗体を指す。

本明細書で使用する用語「Ｎ−グリカン」と「グリカン」は互換的に使用し、Ｎ結合オリゴ糖、例えばタンパク質におけるアスパラギン残基のアミド窒素と結合したＮ−アセチルグルコサミン残基である糖、またはそれによって結合した糖を指す。用語「糖型」は、Ｆｃドメイン上に１つまたは複数のタイプのグリカン構造を含有する糖タンパク質を指す。糖タンパク質において見られる主な糖は、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、Ｎ−アセチルガラクトースアミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）およびシアル酸（例えば、Ｎ−アセチル−ノイラミン酸（ＮＡＮＡ））である。糖基のプロセシングはＥＲの内腔で同時翻訳によって起こり、Ｎ結合糖タンパク質に関してはゴルジ装置内で続く。

Ｎ−グリカンはＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２の共通五糖コアを有する（「Ｍａｎ」はマンノースを指し、「Ｇｌｃ」はグルコースを指し、および「ＮＡｃ」はＮ−アセチルを指し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを指す。）。Ｎ−グリカンは、「トリマンノースコア」、「五糖コア」または「パウチマンノースコア」とも呼ばれるＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２（「Ｍａｎ３」）コア構造に加えられた、周辺糖（例えばＧｌｃＮＡｃ、ガラクトース、フコースおよびシアル酸）を含めた分岐鎖（触角）の数に関して異なる。Ｎ−グリカンは、その分岐鎖成分に従い分類される（例えば、高マンノースタイプ、複合タイプまたはハイブリッドタイプ）。用語「高マンノースタイプ」と「オリゴマンノースタイプ」は互換的に使用する。「高マンノースタイプ」のＮ−グリカンは、５個以上のマンノース残基を有する。「複合」タイプのＮ−グリカンは、１，３マンノースアームと結合した少なくとも１個のＧｌｃＮＡｃ、および「トリマンノース」コアの１，６マンノースアームと結合した少なくとも１個のＧｌｃＮＡｃを典型的に有する。複合タイプのＮ−グリカンは、シアル酸または誘導体（例えば、「ＮＡＮＡ」または「ＮｅｕＮＡｃ」、この場合「Ｎｅｕ」はノイラミン酸を指し、「ＮＡｃ」はＮ−アセチルを指す。）で場合によっては修飾された、ガラクトース（「Ｇａｌ」）またはＮ−アセチルガラクトースアミン（「ＧａｌＮＡｃ」）残基も有し得る。複合タイプのＮ−グリカンは、「バイセクティング」ＧｌｃＮＡｃおよびコアフコース（「ｆｕｃ」）だけには限られないが、これらを含む鎖間置換も有し得る。複合タイプのＮ−グリカンは、「トリマンノースコア」上に「マルチ触角状グリカン」としばしば呼ばれる多数の触角も有し得る。「ハイブリッド」タイプのＮ−グリカンは、トリマンノースコアの１，３マンノースアームの末端上に少なくとも１個のＧｌｃＮＡｃ、およびトリマンノースコアの１，６マンノースアーム上に２個以上のマンノースを有する。ハイブリッドタイプのＮ−グリカンは、「バイセクティング」ＧｌｃＮＡｃおよびコアフコース（「ｆｕｃ」）だけには限られないが、これらを含む鎖間置換も有し得る。複合タイプのＮ−グリカンは、「トリマンノースコア」上に「マルチ触角状グリカン」としばしば呼ばれる多数の触角も有し得る。共通ポリペプチド鎖を含むが、異なるグリカンを有する糖タンパク質分子は「糖型」と呼ばれる（Introduction to Glycobiology by ME Taylor and K Drickamer (OUP, 2011). ISBN978-0-19-956911-3）。用語「オリゴマンノースタイプ」、「ハイブリッドタイプ」および「複合タイプ」グリカンは確立しており、いずれも主要カテゴリーのグリカン構造を指し、これらを使用して、これらのカテゴリーのグリカンを含有する糖型を記載することもできる（Molecular and Cellular Glycobiology Edited by Minoru Fukuda and Ole Hindsgual (OUP, 2000) ISBN0199638071. Functional and Molecular Glycobiology by SA Brooks, MV Dwek and U Schumacher (BIOS Scientific Publishers Ltd, 2002) ISBN1859960227. Introduction to Glycobiology by ME Taylor and K Drickamer (OUP, 2011). ISBN978-0-19-956911-3）。

本明細書で使用する用語「バイセクティングＮ−アセチルグルコサミン」（バイセクティングＧｌｃＮＡｃ）は、トリマンノシルコアのβ−マンノースと結合したβ−ＧｌｃＮＡｃ残基を指す。バイセクティングＧｌｃＮＡｃは、（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ酵素（ＧｎＴＩＩＩ）により、酵素を利用してトリマンノシルコアに結合させることが可能である。ＣＨＯ細胞は通常ＧｎＴＩＩＩを発現しないが（Stanley et al. J. Biol. Chem. 261: 13370-13378 (1984)）、発現するように操作することは可能である（Umana et al. Nature Biotech 17:176-180 (1999)）。

本明細書で使用する略称は、当技術分野で一般に使用される。例えば、前述の糖の略称を参照。他の一般的な略称としては、いずれもペプチドＮ−グリコシダーゼＦ（ＥＣ３．２．２．１８）を指す「ＰＮＧａｓｅ」または「グリカナーゼ」があげられる。他の一般的な略称としては「グリコシダーゼ」があげられ、これはエンドグリコシダーゼまたはエクソグリコシダーゼのいずれかを指すことができる。

ＥｎｄｏＳは、ヒト病原体、化膿性連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）によって分泌されるエンドグリコシダーゼである。ＥｎｄｏＳは、２コアＧｌｃＮＡｃ残基間のＩｇＧ上のアスパラギン結合グリカンを特異的に加水分解する。ＥｎｄｏＳポリペプチドは、ＩｇＧエンドグリコシダーゼ活性を有する、化膿性連鎖球菌（S.pyogenes）のＥｎｄｏＳ、または化膿性連鎖球菌（S.pyogenes）のＥｎｄｏＳの変異体もしくは断片であることが好ましい。変異体は、別の細菌などの、別の生物由来のＥｎｄｏＳポリペプチドであってよい。細菌は、ストレプトコッカスエクイ（Streptococcus equi）、ストレプトコッカスズーエピデミカス（Streptococcus zooepidemicus）、または好ましくは化膿性連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）などの、ストレプトコッカス属（Streptococcus）であることが好ましい。あるいは変異体は、コリネバクテリウムシュードチューバーキュローシス（Cornyebacterium pseudotuberculosis）、例えばＣＰ４０タンパク質、エンテロコッカスファエカリス（Enterococcus faecalis）、例えばＥｎｄｏＥタンパク質、またはエリザベスキンギアメニンゴセプティカ（Elizabethkingia meningoseptica）（以前はフラボバクテリウムメニンゴセプティカム（Flavobacterium meningosepticum））、例えばエリザベスキンギアメニンゴセプティカ（Elizabethkingia meningoseptic）由来のＥｎｄｏＦ_２、およびコリネバクテリウムシュードチューバーキュローシス（Cornyebacterium pseudotuberculosis）由来のＣＰ４０に由来してよい。

一実施形態では、ＥｎｄｏＳポリペプチドは、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも５０％の同一性を有しＩｇＧエンドグリコシダーゼ活性を有するその変異体、または
（ｃ）ＩｇＧエンドグリコシダーゼ活性を有する（ａ）または（ｂ）いずれかの断片
を含むことができる。

ＥｎｄｏＳポリペプチドは配列番号１の配列を含む、またはこれらからなることが好ましい。配列番号１はシグナル配列を含まない成熟型のＥｎｄｏＳの配列であり、配列番号２のアミノ酸３７〜９９５に相当する。

ポリペプチドはシグナル配列を追加的に含むことができる。したがって、ＥｎｄｏＳポリペプチドは、
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも５０％の同一性を有しＩｇＧエンドグリコシダーゼ活性を有するその変異体、または
（ｃ）ＩｇＧエンドグリコシダーゼ活性を有する（ａ）または（ｂ）いずれかの断片
を含むことができる。
ＥｎｄｏＳポリペプチドは、配列番号２において示す配列からなり得る。

変異体ポリペプチドは、配列番号１または配列番号２中とアミノ酸配列が異なるが、ＥｎｄｏＳと同じ必須特性または基本的機能を保持するポリペプチドである。したがって変異体ポリペプチドは、ＩｇＧエンドグリコシダーゼ活性を示し得る。典型的には、配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列と約５０％、５５％、６０％もしくは６５％を超える同一性、好ましくは少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、および特に好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９７％もしくは少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドは、タンパク質の変異体であると考えられる。このような変異体は、ペプチドがＥｎｄｏＳの基本的機能を維持する限り、対立遺伝子変異体、およびタンパク質配列内の単一アミノ酸またはアミノ酸群の欠失、修飾もしくは付加を含む可能性がある。配列番号１または配列番号２の変異体の同一性は、配列番号１または配列番号２の少なくとも１００、少なくとも２５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも８００、少なくとも８５０、少なくとも９００、少なくとも９５０、少なくとも９５５またはより多くの隣接アミノ酸の領域にわたって計測してもよく、またはより好ましくは配列番号１または配列番号２の完全長にわたって計測してもよい。

配列番号１のアミノ酸配列の変異体は、配列番号１の残基１９１〜１９９、すなわち配列番号１のＬｅｕ−１９１、Ａｓｐ−１９２、Ｇｌｙ−１９３、Ｌｅｕ−１９４、Ａｓｐ−１９５、Ｖａｌ−１９６、Ａｓｐ−１０７、Ｖａｌ−１９８、Ｇｌｕ−１９９を含有することが好ましい（これは配列番号２の残基２２７〜２３５、すなわち配列番号２のＬｅｕ−２２７、Ａｓｐ−２２８、Ｇｌｙ−２２９、Ｌｅｕ−２３０、Ａｓｐ−２３１、Ｖａｌ−２３２、Ａｓｐ−２３３、Ｖａｌ−２３４およびＧｌｕ−２３５に相当する）。これらのアミノ酸は、グルタミン酸末端の完全キチナーゼファミリー１８活性部位を構成する。キチナーゼの活性部位におけるグルタミン酸は酵素活性に必要不可欠である。したがって、配列番号１の変異体が配列番号１のＧｌｕ−１９９を含有し、配列番号２の変異体が配列番号２のＧｌｕ−２３５を含有することが最も好ましい。

本発明において使用するＥｎｄｏＳポリペプチドの断片は、それがＥｎｄｏＳのＩｇＧエンドグリコシダーゼ活性を保持する限り、典型的には少なくとも１０、例えば少なくとも２０、３０、４０または５０より多いアミノ酸長、最大１００、２００、２５０、３００、５００、７５０、８００、８５０、９００、９５０または９５５アミノ酸長である。

エンドグリコシダーゼ活性は、適切なアッセイによって決定することができる。例えば試験用ポリペプチドは、３７℃などの適温でＩｇＧとインキュベートすることができる。出発物質と反応産物は、ＳＤＳＰＡＧＥにより次いで分析することができる。典型的には、試験用ポリペプチドがＩｇＧエンドグリコシダーゼ活性を有する場合、ＩｇＧ重鎖の分子量は約３ｋＤａ減少する。試験用ポリペプチドがＩｇＧエンドグリコシダーゼ活性を有するかどうか決定するための別のアッセイは、レンズマメ（Lens culinaris）アグルチニンレクチン（ＬＣＡ）を使用する、場合によってはホースラディッシュペルオキシダーゼおよびペルオキシダーゼ基質を使用する、グリコシル化ＩｇＧの検出によるものである。典型的には、試験用ポリペプチドがＩｇＧエンドグリコシダーゼ活性を有する場合、炭水化物のシグナルは低減する。試験用ポリペプチドがＩｇＧエンドグリコシダーゼ活性を有するかどうか決定するための別のアッセイは、精製ＩｇＧＦｃ断片と試験用ポリペプチドのインキュベーション、次いで１０ｍＭジチオスレイトールを用いたサンプルの還元、および質量分光（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）分析によるものである。典型的には、試験用ポリペプチドがＩｇＧエンドグリコシダーゼ活性を有する場合、モノマーＩｇＧＦｃの質量は１４１７＋１４Ｄａ減少する。試験用ポリペプチドがＩｇＧエンドグリコシダーゼ活性を有するかどうか決定するための別のアッセイは、試験用ポリペプチドとＩｇＧをインキュベートし、グリカンの放出断片を試験することである。これらの断片は、還元性末端ＧｌｃＮＡｃ残基、およびそのＧｌｃＮＡｃ残基と結合する可能性がある任意のフコースを欠いている。これらの放出炭水化物構造は質量分析法によって検出することができ（例えばHarvey DJ, et al. J Am Soc Mass Spectrom. 2011 Mar;22(3):568-81参照）、または蛍光標識、次いで蛍光検出器を備えるＨＰＬＣによって検出することができる（例えばGuile GR, et al.,Anal Biochem. 1996 Sep 5;240(2):210-26参照）。

Ｅｎｄｏ−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＦ３（ＥｎｄｏＦ３）は、本来フラボバクテリウムメニンゴセプティカム（Flavobacterium meningosepticum）から単離されたエンドグリコシダーゼである（Plummer TH Jr, Tarentino AL. Glycobiology. 1991 Jun;1(3):257-63）。ＥｎｄｏＦ３は、遊離またはアスパラギン結合３触角状またはフコシル化２触角状オリゴ糖、およびトリマンノシルキトビオースコア構造を切断する。ＥｎｄｏＦ３は、オリゴ糖のジアセチルキトビオースコア中の２個のＮ−アセチルグルコサミン残基を切断し、アスパラギン上に残存した１個のＮ−アセチルグルコサミン残基を有する切断型糖分子を生成する。

ＥｎｄｏＦ３はオリゴマンノースタイプのグリカンに対する活性が全くない、あるいは有意な活性がない。エンドグリコシダーゼＥｂｅｔａは、ファミリー２０グリコシルヒドロラーゼと類似したエンテロコッカスファエカリス（Enterococcus faecalis）由来のＥｎｄｏＥのβドメインである（Collin M, Fischetti VA. J Biol Chem. 2004 May 21; 279(21):22558-70）。

免疫グロブリンＧ分解酵素（ＩｄｅＳ）は、ヒト病原体、化膿性連鎖球菌（S.pyogenes）によって生成される細胞外システインプロテアーゼである（von Pawel-Rammingens et al. EMBO J. 2002 April 2; 21(7): 1607-1615）。ＩｄｅＳは、ヒトＩｇＧの下部ヒンジにおける一種のタンパク質分解切断を触媒する（ＵＳ７６６６５８２）。ＩｄｅＳは様々な動物におけるいくつかのＩｇＧサブクラスも切断し、ＩｇＧをＦｃおよびＦａｂ断片に効率よく転換する。

ＩｄｅＳもしくは任意の他のプロテアーゼに対するＩｇＧの感受性または耐性を決定するためのアッセイは、試験用プロテアーゼとＩｇＧをインキュベートし、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりインキュベーション混合物を分析することである。試験用プロテアーゼによるＩｇＧの切断は、重鎖のみかけの分子量の低下により明らかである。切断型のＩｇＧは、１つまたは複数のＦｃ受容体に対して少なくとも半分の結合を示すはずである。

プロテインＮ−グリカナーゼは、ＧｌｃＮＡｃとＡｓｎ残基の間のアミド結合を加水分解する。プロテインＮ−グリカナーゼの一例は、プロテインＮ−グリカナーゼＦ（ＰＮＧａｓｅＦ）である。

本明細書で使用する用語「抗体」、「免疫グロブリン」、「Ｉｇ」および「Ｉｇ分子」は互換的に使用する。それぞれの抗体分子は、その特異的抗原との結合を可能にする独自の構造を有するが、全ての抗体／免疫グロブリンは本明細書に記載するように同一の全体構造を有する。基本的な抗体の構造単位は、サブユニットのテトラマーを含むことが知られている。それぞれのテトラマーは２個の同一ポリペプチド鎖対を有し、それぞれの対は一本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）と一本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。それぞれの鎖のアミノ末端部分は、抗原認識を主に担う約１００〜１１０またはそれより多くのアミノ酸の可変領域を含む。それぞれの鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主に担う定常領域を画定する。軽鎖はκまたはλのいずれかとして分類される。重鎖はγ、μ、α、δ、またはεとして分類され、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥなどの抗体のアイソタイプを定義する。軽鎖と重鎖は可変領域と定常領域にさらに分けられる（Fundamental Immunology (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y., 1989), Ch.7を一般に参照（あらゆる目的でそれらの全容を参照として組み込む）。それぞれの軽鎖／重鎖対の可変領域は抗体結合部位を形成する。したがって、完全抗体は２個の結合部位を有する。二重機能性または二重特異性抗体以外、２個の結合部位は同一である。鎖はいずれも、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる３個の超可変領域により接合状態の比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の、同一の一般的構造を示す。各対の２本の鎖由来のＣＤＲはフレームワーク領域により一直線に並び、特異的エピトープとの結合を可能にする。これらの用語は、天然に存在する型、ならびに断片および誘導体を含む。この用語の範囲内に含まれるのは、Ｉｇクラス、すなわちＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭおよびＩｇＤである。ＩｇＧのサブタイプ、すなわちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４も、この用語の範囲内に含まれる。この用語は広義に使用し、（アゴニストとアンタゴニスト抗体を含めた）一種のモノクローナル抗体、および多数のエピトープまたは抗原と結合し得る抗体組成物を含む。これらの用語は、それらがＣ_Ｈ２ドメインのＮ末端結合グリコシル化部位を含む重鎖免疫グロブリン定常領域の少なくともＣ_Ｈ２ドメイン部分、またはその変異体を含有するか、それを含有するよう修飾されている限り、（完全長モノクローナル抗体を含めた）モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体断片を具体的に包含する。この用語の範囲内に含まれるのは、イムノアドヘシンなどのＦｃ領域を含む分子（米国特許出願第２００４／０１３６９８６号）、Ｆｃ融合体および抗体様分子である。あるいはこれらの用語は、Ｎ末端結合グリコシル化部位を少なくとも含有する、少なくともＦａｂ領域の抗体断片を指すことができる。

例えば、抗体はモノクローナル抗体、またはポリクローナル抗体であってよい。

用語「Ｆｃ」断片は、Ｃ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３ドメインを含有する抗体の「断片結晶化」Ｃ末端領域を指す。用語「Ｆａｂ」断片は、ＶＨ、ＣＨＩ、ＶＬおよびＣＬドメインを含有する抗体の「断片抗原結合」領域を指す。本明細書で使用する用語「Ｆｃ」断片は、鎖間ジスルフィド結合のシステインとＣγ２ドメインの間の下部ヒンジ領域も含む。

本明細書で使用する用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）は、実質的に相同な抗体の集団から得られる抗体を指す。すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、少量存在し得るおそらく本来存在した突然変異以外は同一である。モノクローナル抗体は非常に特異的であり、１つの抗原部位を対象とする。

さらに、異なる抗原決定基（エピトープ）を対象とする異なる抗体を典型的に含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、それぞれのｍＡｂは抗原上の１個の抗原決定基を対象とする。それらの特異性以外に、モノクローナル抗体は、それらをハイブリドーマ培養により合成することができ、他の免疫グロブリンにより汚染される可能性がない点で有利である。用語「モノクローナル」は実質的に相同な抗体の集団から得られる抗体の特性を示し、任意の個々の方法による抗体の産生が必要であると解釈すべきではない。例えば、本発明に従い使用するモノクローナル抗体は、Kohler et al, (1975) Nature, 256:495により最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製することができ、または組換えＤＮＡ法によって作製することができる（例えば、Cabilly et alへの米国特許第４，８１６，５６７号参照）。

本明細書の抗体は、起源種または免疫グロブリンクラスもしくはサブクラス表示と無関係に、（超可変を含む）抗体の可変ドメインと定常ドメイン（例えば、「ヒト化」抗体）、または軽鎖と重鎖、または一種由来の鎖と他種由来の鎖のスプライシング、または異種タンパク質との融合によって生成した、ハイブリッドおよび組換え抗体を含む（例えば、Cabilly et alへの米国特許第４，８１６，５６７号、Mage and Lamoyi, in Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp.79-97 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)参照）。本明細書の抗体は、それらが少なくとも１個のＣ_Ｈ２を含有するか、それを含有するよう修飾されている限り、重鎖および／または軽鎖の一部分が第一種由来または特定抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であり、一方鎖（複数可）の残り部分が異なる種由来または異なる抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体、およびこのような抗体の断片中の対応する配列と同一または相同である、「キメラ」抗体（免疫グロブリン）を具体的に含む。

「ヒト化」型の非ヒト（例えばネズミ）抗体は、ヒト免疫グロブリン由来の配列を含有する、特異的キメラ免疫グロブリン、その免疫グロブリン鎖または断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、または他の抗体の抗原結合配列など）である。抗体のＦｖ断片は、完全分子の結合特性と特異性を保持する抗体の最小単位である。Ｆｖ断片は、抗体重鎖および軽鎖の可変ドメインの非共有結合ヘテロジマーである。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ジスルフィド架橋により結合したＦａｂ断片の両アームを含有する断片である。

最も一般的な型のヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）が所望の特異性、アフィニティー、および能力を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基によって置換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの場合、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は対応する非ヒト残基によって置換される。

さらにヒト化抗体は、レシピエント抗体または導入ＣＤＲもしくはフレームワーク配列においても見られない残基を含む可能性がある。これらの修飾を施して、抗体の性能をさらに精錬し最大にする。一般にヒト化抗体は、少なくとも１個、および典型的には２個の可変ドメインの全てを実質的に含み、その中で全てまたは実質的に全てのＣＤＲ領域が非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、全てまたは実質的に全てのＣＤＲ領域がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＣＤＲ領域である。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンの一部分も含むことが最適である。さらなる詳細に関しては、Jones et al, 1986, Nature 321 :522-524; Reichmann et al, 1988, Nature 332:323-327, and Presta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596を参照。

用語抗体または免疫グロブリンの範囲内の「断片」としては、様々なプロテアーゼを用いた消化により生成する断片、化学的切断および／または化学的解離により生成する断片、および断片が標的分子と依然特異的に結合することができるという条件で、組換えにより生成する断片があげられる。特にこのような断片はＦｃ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）_２、および単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片である。

本発明の方法または使用で使用するための、治療用抗体に関する対象の標的としては、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ６４、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１０５、ＣＤ１３８、ＣＤ１７４、ＣＤ２０５、ＣＤ２２７、ＣＤ３２６、ＣＤ３４０、ＭＵＣ１６、ＧＰＮＭＢ、ＰＳＭＡ、Ｃｒｉｐｔｏ、ＥＤ−Ｂ、ＴＭＥＦＦ２、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＢ２、ＦＡＰ、ａｖインテグリン、メソテリン、ＥＧＦＲ、ＴＡＧ−７２、ＧＤ２、ＣＡ１Ｘ、５Ｔ４、α４β７インテグリン、Ｈｅｒ２があげられる。他の標的は、インターロイキンＩＬ−Ｉ〜ＩＬ−１３などのサイトカイン、腫瘍壊死因子αおよびβ、インターフェロンα、βおよびγ、腫瘍増殖因子β（ＴＧＦ−β）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）および顆粒球単球コロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）である。Human Cytokines: Handbook for Basic and Clinical Research (Aggrawal et al. eds., Blackwell Scientific, Boston, MA1991)参照。他の標的はホルモン、酵素、ならびに細胞内および細胞間メッセンジャー、アデニルシクラーゼ、グアニルシクラーゼ、およびホスホリパーゼＣなどである。対象の他の標的は、ＣＤ２０およびＣＤ３３などの白血球抗原である。薬剤も対象の標的であり得る。標的分子はヒト、哺乳動物または細菌であってよい。他の標的は、微生物病原体、ウイルスと細菌の両方由来のタンパク質、糖タンパク質および炭水化物などの抗原、および腫瘍である。さらに他の標的は、米国特許第４，３６６，２４１号中に記載されている。

適切な抗体の例としては、アバゴモマブ、アブシキシマブ、アクトキスマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブペゴール、ＡＬＤ５１８、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブペンテテート、アマツキシマブ、アナツモマブマフェナトクス、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アルシツモマブ、アセリズマブ、アチヌマブ、アトリズマブ（＝トシリズマブ）、アトロリムマブ、バピネウズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ベズロトキスマブ、ビシロマブ、ビマグルマブ、ビバツズマブメルタンシン、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カンツズマブラヴタンシン、カプラシズマブ、カプロマブペンデタイド、カルルマブ、カツマキソマブ、ＣＣ４９、セデリズマブ、セルトリズマブペゴール、セツキシマブ、Ｃｈ．１４．１８、シタツズマブボガトックス、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コナツムマブ、コンシズマブ、クレネズマブ、ＣＲ６２６１、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダラツムマブ、デムシズマブ、デノスマブ、デツモマブ、ドルリモマブアリトックス、ドロジツマブ、デュリゴツマブ、デュピルマブ、デュシジツマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エファングマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エナバツズマブ、エンリモマブペゴール、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブシツキセタン、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、エトロリズマブ、エボロクマブ、エクスビビルマブ、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファルレツズマブ、ファシヌマブ、ＦＢＴＡ０５、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィクラツズマブ、フィジツムマブ、フラボツマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレソリムマブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゲボキズマブ、ジレンツキシマブ、グレムバツムマブベドチン、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、ＧＳ６６２４、イバリズマブ、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イゴボマブ、イムシロマブ、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブラヴタンシン、インフリキシマブ、インテツムマブ、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ、イトリズマブ、イクセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、ラムパリズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レルデリムマブ、レキサツムマブ、リビビルマブ、リゲリズマブ、リンツズマブ、リリルマブ、ロデルシズマブ、ロルボツズマブメルタンシン、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ、マスリモマブ、マブリリムマブ、マツズマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モロリムマブ、モタビズマブ、モキセツモマブパスドトックス、ムロモナブ−ＣＤ３、ナコロマブタフェナトックス、ナミルマブ、ナプツモマブエスタフェナトクス、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブメルペンタン、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オズリモマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オナルツズマブ、オポルツズマブモナトックス、オレゴボマブ、オルチクマブ、オテリキシズマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パノバキュマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ペンツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、ピジリズマブ、ピナツズマブベドチン、ピンツモマブ、プラクルマブ、ポラツズマブベドチン、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリトキサキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ１４０、クイリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバキュマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、ロレズマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サマリズマブ、サリルマブ、サツモマブペンデチド、セクキヌマブ、セリバンツマブ、セトキサキシマブ、セビルマブ、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、タバルマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツモマブパプトックス、テフィバズマブ、テリモマブアリトックス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テプロツムマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ（＝トレメリムマブ）、チルドラキズマブ、チガツズマブ、ＴＮＸ−６５０、トシリズマブ（＝アトリズマブ）、トラリズマブ、トシツモマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、トレメリムマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、ウブリツキシマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バパリキシマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビシリズマブ、ボロシキシマブ、ボレセツズマブマフォドチン、ボツムマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブおよびゾリモマブアリトックスがあげられる。

内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤に耐性があるように修飾することができる、好ましい治療用抗体としては、ナタリズマブ、ベドリズマブ、ベリムマブ、アタシセプト、アレファセプト、オテリキシズマブ、テプリズマブ、リツキシマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、エプラツズマブ、アレムツズマブ、アバタセプト、エクリズマブ、オマリズマブ、カナキヌマブ、メプリズマブ、レスリズマブ、トシリズマブ、ウステキヌマブ、ブリアキヌマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴール、ゴリムマブ、トラスツズマブ、ゲムツズマブ、オゾガマイシン、イブリツモマブ、チウキセタン、トシツモマブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、パニツムマブ、デノスマブ、イピリムマブ、ブレンツキシマブおよびベドチンがあげられる。

本明細書で論じる免疫Ｆｃ受容体は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩｂおよびＦｃＲｎ（新生児受容体）を含むことができる。他に指定しない限り、用語ＦｃγＲＩは任意のＦｃγＲＩサブタイプを指すことができる。他に指定しない限り、用語ＦｃγＲＩＩは任意のＦｃγＲＩＩ受容体を指すことができる。他に指定しない限り、用語ＦｃγＲｍは任意のＦｃγＲＩＨサブタイプを指すことができる。

用語「誘導体」の範囲内には、種間キメラおよびヒト化抗体、抗体融合体、ヘテロマー抗体複合体および抗体融合体、ダイアボディ（二重特異性抗体）、単鎖ダイアボディ、およびイントラボディなどを含めた、配列が修飾されているが、標的分子と依然特異的に結合することができる抗体（またはその断片）を含む（例えば、Intracellular Antibodies: Research and Disease Applications, (Marasco, ed., Springer-Verlag New York, Inc., 1998参照）。

本明細書で使用する用語「ペプチド」は、短いポリペプチド、例えば典型的には約５０アミノ酸長未満、およびより典型的には約３０アミノ酸長未満であるペプチドを指す。本明細書で使用するこの用語は、構造とこの生物学的機能が似たアナログおよび模倣体を包含する。

用語「ポリペプチド」は、天然タンパク質と非天然タンパク質の両方、ならびにその断片、突然変異体、誘導体およびアナログを包含する。ポリペプチドは、モノマーまたはポリマーであってよい。さらにポリペプチドは、その各々が１つまたは複数の異なる活性を有する、いくつかの異なるドメインを含むことができる。

用語「単離タンパク質」または「単離ポリペプチド」は、その原型または誘導源に関して、（１）その原型状態で付随する本来結合していた成分と結合していない、（２）天然に見られない純度で存在し、他の細胞物質の存在に関して純度を調節することができる（例えば、同種由来の他のタンパク質を含まない）、（３）異種由来の細胞により発現される、または（４）天然に存在しない（例えば、それが天然で見られるポリペプチドの断片である、またはそれが、天然で見られないアミノ酸アナログもしくは誘導体、または標準ペプチド結合以外の結合を含む）、タンパク質またはポリペプチドである。したがって、化学合成されたポリペプチド、またはそれが本来由来する細胞と異なる細胞系で合成されたポリペプチドは、その本来結合していた成分から「単離された」状態である。ポリペプチドまたはタンパク質は、当技術分野でよく知られているタンパク質精製技法に従い、単離により本来結合していた成分を実質的に含まない状態にすることもできる。このように定義すると、「単離」は、これまで記載したタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、またはオリゴペプチドが、その本来の環境から物理的に除去されることを必ずしも必要としない。

本明細書で使用する用語「ポリペプチド断片」は、完全長ポリペプチドと比較して欠失、例えばアミノ末端および／またはカルボキシ末端欠失があるポリペプチドを指す。好ましい実施形態では、ポリペプチド断片は、断片のアミノ酸配列が天然配列中の対応する位置と同一である隣接配列である。典型的には断片は、少なくとも５、６、７、８、９、または１０アミノ酸長、好ましくは少なくとも１２、１４、１６または１８アミノ酸長、より好ましくは少なくとも２０アミノ酸長、より好ましくは少なくとも２５、３０、３５、４０、または４５アミノ酸、さらにより好ましくは少なくとも５０または６０アミノ酸長、およびさらにより好ましくは少なくとも７０アミノ酸長である。

あるタンパク質をコードする核酸配列が第二のタンパク質をコードする核酸配列と類似した配列を有する場合、そのタンパク質は第二のタンパク質に対する「相同性」がある、またはそれと「相同的」である。あるいは、２個のタンパク質が「類似した」アミノ酸配列を有する場合、タンパク質は第二のタンパク質に対する相同性がある（したがって、用語「相同タンパク質」は、２個のタンパク質が類似したアミノ酸配列を有することを意味するものとする）。好ましい実施形態では、相同タンパク質は、野生型タンパク質と少なくとも６５％の配列相同性、より好ましくは少なくとも７０％の配列相同性を示すタンパク質である。さらにより好ましいのは、野生型タンパク質と少なくとも７５％、８０％、８５％、または９０％の配列相同性を示す相同タンパク質である。さらにより好ましい実施形態では、相同タンパク質は、少なくとも９５％、９８％、９９％または９９．９％の配列同一性を示す。本明細書で使用する、（特に予想構造類似性に関する）アミノ酸配列の２領域間の相同性は、機能の類似性を示すと解釈される。

オリゴマンノースタイプの糖型抗体は十分確立した発現系によって作製することができる。これらの手法のいくつかの例としては、一定範囲のオリゴマンノースタイプグリカン、ただし典型的にはより大きいかまたは小さい可能性があるＭａｎ_８−１２ＧｌｃＮＡｃ_２でピキアパストリス（Pichia pastoris）などの酵母発現系を利用した、オリゴマンノースタイプグリカンの異種混合物の生成があげられる。例えば、Ｍａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２を含有する抗体を発現させるためのピキアパストリス（P. Pastoris）細胞系は、Potgieter TI, et al. J Biotechnol. 2009 Feb 23; 139(4):318-25. Epub 2008 Dec 27により報告されている。酵母における抗体発現のさらなる例は、Horwitz AH, et al. Chang CP, Better M, Hellstrom KE, Robinson RR in Proc Natl Acad Sci USA. 1988 Nov;85(22):8678-82により記載されている。このように生成された抗体は、フコースの欠如と一致する高いＡＤＣＣを示す（Horwitz AH, et al. Proc Natl Acad Sci USA. 1988 Nov; 85(22):8678-82）。別の方法は、キフネンシンなどのα１，２−マンノシダーゼ阻害剤の存在下における哺乳動物細胞系での発現を含み（Elbein, Tropea et al. 1990; Chang, Crispin et al. 2007; Kanda, Yamada et al. 2007; Zhou, Shankara et al. 2008; van Berkel, Gerritsen et al. 2010）、濃度は部分的阻害をもたらすのに十分な濃度、例えばＨＥＫ２９３Ｔ系で１〜５マイクロＭである（Chang, Crispin et al. 2007）。

Ｍａｎ_９ＧｌｃＮＡｃ_２型などの相同的な糖型のオリゴマンノースタイプの抗体は、キフネンシンなどのα１，２−マンノシダーゼ阻害剤の存在下における哺乳動物細胞系での発現によって作製することができ（Elbein AD, et al. J Biol Chem. 1990 Sep 15;265(26)15599-605; Chang VT, et al., Structure. 2007 Mar;15(3)267-73）、濃度はより相同的な糖型をもたらすのに十分な濃度、例えばＨＥＫ２９３Ｔ発現系で５マイクロＭ超、および理想的には１０マイクロＭ超である。キフネンシンを使用して、ハイブリドーマ細胞系または安定トランスフェクトもしくは一過性トランスフェクト真核生物細胞系によって分泌される、オリゴマンノースタイプの糖型抗体を作製することもできる。代替法は、Ｍａｎ_９ＧｌｃｎＡｃ_２を越えてグリカンがプロセシングされないように遺伝子経路が改変された酵母細胞系、例えばGlycoFi（現在はMerck）（Li H, et al., Nat Biotechnol. 2006 Feb;24(2):210-5. Epub 2006 Jan 22）により開発されたピキア（pichia）細胞系タイプでの発現を含む。

相同的Ｍａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２糖型は、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩ（ＧｎＴＩ）、例えばＣＨＯＬｅｃ１またはＣＨＯＬｅｃ３．２．８が欠損した哺乳動物細胞系（Patnaik SK, Stanley P. Methods Enzymol. 2006;416:159-82. Review.）、ＧｎＴＩ欠損ＨＥＫ２９３Ｓ細胞（Reeves, P.J., N. Callewaert, et al.(2002). Proc Natl Acad Sci USA 99(21):13419-13424）での発現を介して、または代替的に前述のように操作した酵母発現系によって生成することができる（Potgieter TI, et al. J Biotechnol. 2009 Feb 23;139(4):318-25.Epub 2008 Dec27）。

前述のようにＭａｎ_９ＧｌｃＮＡｃ_２糖型を使用して、ただしＥＲマンノシダーゼＩによるプロセシング、例えば発現後の消化によりＭａｎ_８ＧｌｃＮＡｃ_２糖型を生成することができる（Dunlop DC, Bonomelli C, Mansab F, Vasiljevic S, Doores KJ, Wormald MR, Palma AS, Feizi T, Harvey DJ, Dwek RA, Crispin M, Scanlan CN. Glycobiology. 2010 Jul;20(7)812-23. Epub 2010 Feb 24）。別の方法では、前述のように操作した酵母発現系を利用して、Ｍａｎ_８ＧｌｃＮＡｃ_２糖型を生成することができる。糖タンパク質を生成するための当技術分野で発見されている、さらなる発現宿主系としては、ＣＨＯ細胞（RajuのＷＯ９９２２７６４Ａ１およびPrestaのＷＯ０３／０３５８３５Ａ１）、ハイブリドーマ細胞（Trebak et al., 1999, J. Immunol. Methods, 230:59-70）、昆虫細胞（Hsu et al., 1997,JBC, 272:9062-970）、および植物細胞（Gerngross et al.,ＷＯ０４／０７４９９Ａ２）があげられる。エンドグリコシダーゼ耐性の糖型のＩｇＧは、グリコシダーゼおよびグリコシルトランスフェラーゼ活性を含有する真核生物細胞系による組換えによって生成することができる。真核生物細胞系は、１つまたは複数の特定糖型をもたらす特異的グリコシダーゼおよびグリコシルトランスフェラーゼ活性を有するように操作することができる。例えば、ヒトグリコシルトランスフェラーゼを含有するように、ピキアパストリス（Pichia pastoris）を操作することができる。生成した操作型ピキアパストリス（Pichia pastoris）細胞系は、本来のピキアパストリス（Pichia pastoris）細胞系由来の糖タンパク質で見られないグリカンを含有する糖タンパク質を分泌するが、それらは哺乳動物糖タンパク質と類似した糖タンパク質を分泌する。類似した突然変異細胞系または生物を、ハエ、植物、および哺乳動物細胞系などの他の真核生物発現系で作製することができる。このような操作型細胞系または生物を使用して、エンドグリコシダーゼ耐性糖タンパク質を作製することができる。このような操作型細胞系または生物を使用して、３触角状または４触角状または５触角状グリカンを含有する糖タンパク質を、例えば酵母において作製することができる:Hamilton SR, Gerngross TU. Curr Opin Biotechnol. 2007 Oct;18(5)387-92. Epub 2007 Oct 24。糖型を合成するための別の方法は、グリコシルトランスフェラーゼおよび／またはグリコシダーゼを使用して、分泌糖タンパク質のグリカン組成を変えることを含む。

ハイブリッドタイプの糖型は、ゴルジαマンノシダーゼＩＩ活性が欠損した真核生物発現系を使用して生成することができる。細胞系を遺伝子操作して、ゴルジαマンノシダーゼＩＩ活性を欠損させることが可能である。例えば、ヒト胚腎臓２９３Ｔ細胞系をベースとするＬｅｃ３６細胞系がレクチン耐性によって作製されている（Crispin M et al 2009, Journal of Biological Chemistry, 284,21684-21695）。Ｌｅｃ３６細胞中で発現される糖タンパク質はハイブリッドタイプのグリコシル化を含有する。あるいは、哺乳動物グリコシダーゼおよびグリコシルトランスフェラーゼを含有するが、ゴルジαマンノシダーゼＩＩ活性を欠く操作型酵母細胞を構築することができる。ハイブリッドタイプのグリカンを含有する糖タンパク質を発現させるための別の方法は、スワインソニンなどのゴルジαマンノシダーゼＩＩ阻害剤の使用を含む（Tulsiani DR, Harris TM, Touster O. J Biol Chem. 1982 Jul 25;257(14)7936-9; Crispin M et al 2009, Journal of Biological Chemistry, 284,21684-21695）。

植物発現系を操作して一定の糖型、または一定範囲の糖型の糖タンパク質を生成することもできる。植物発現系におけるグリコシル化を調節するための戦略には、ＥＲの標的化、ならびにグリコシルトランスフェラーゼおよび／またはグリコシダーゼ遺伝子ノックアウトおよび／またはノックインがある（Gomord V, Fitchette AC, Menu-Bouaouiche L, Saint-Jore-Dupas C, Plasson C, Michaud D, Faye L. Plant Biotechnol J. 2010 Jun;8(5):564-87）。
「バイセクティングＮ−アセチルグルコサミン」を含有する糖型であり、β−マンノース残基と１−４結合したβ−Ｎ−アセチルグルコサミンを含有する糖型は、複合タイプまたはハイブリッドタイプのグリカンを生成することができＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩとしても知られる、およびＵＤＰ−Ｎ−アセチルグルコサミン：β−Ｄマンノシドβ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ）を発現する真核生物発現系における発現によって作製することができる（例えば米国特許第７８９７８４２号）。

ＥｎｄｏＳを使用して競合する血清抗体を不活性化することはできるが、その抗体糖型に対するエンドグリコシダーゼ活性を使用して、操作型治療用抗体を不活性化することもできる。例えば、オリゴマンノースタイプの抗体糖型を使用して、ＥｎｄｏＨまたはＥｎｄｏＦ１で治療用抗体を不活性化することができる。これにより治療用抗体を不活性化して身体中の活性時間を調節することができ、または患者に悪影響がある反応が生じた場合それを不活性化する。

本明細書で使用する糖タンパク質組成物は、フコースまたはガラクトースなどの特定糖残基を「欠く」または「欠いており」、この場合いかなるときもＮ−グリカン構造上に検出可能な量のこのような糖残基は存在しない。例えば本発明の好ましい実施形態では、糖タンパク質組成物は、酵母（例えば、ピキア種（Pichia sp）、サッカロミセス種（Saccharomyces sp）、クルイベロマイセス種（Kluyveromyces sp）、アスペルギルス種（Aspergillus sp））を含めた、前に定義した低級真核細胞生物によって生成され、これらの生物の細胞はフコシル化Ｎ−グリカン構造を生成するのに必要な酵素を有していないため「フコースを欠いている」。したがって、用語「フコースを本質的に含まない」は用語「フコースの欠如」を包含する。しかしながら、前述のように、組成物が一時的にフコシル化Ｎ−グリカン構造を含有する、または限られた、ただし検出可能な量のフコシル化Ｎ−グリカン構造を含有する場合でさえ、組成物は「フコースを本質的に含まない」可能性がある。

抗体および抗体−抗原複合体と免疫系の細胞の相互作用、ならびに抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を含めた様々な反応、免疫複合体のクリアランス（ファゴサイトーシス）、Ｂ細胞およびＩｇＧ血清半減期による抗体産生は、以下のDaeron et al, 1997, Annu.Rev.Immunol.15:203-234;Ward and Ghetie, 1995, Therapeutic Immunol. 2:77-94;Cox and Greenberg, 2001, Semin.Immunol.13:339-345;Heyman,2003,Immunol.Lett.88:157-161;およびRavetch, 1997, Curr.Opin.Immunol.9:121-125においてそれぞれ定義される。

本発明の抗体は、活性治療剤としての抗体および薬学的に許容される成分を含む医薬組成物中に組み込むことが可能である。Remington’s Pharmaceutical Science（15^th ed.,Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 1980）を参照。好ましい型は、目的とする投与形式および治療的利用に依存する。組成物は、所望の製剤に応じて、動物もしくはヒトに投与するための医薬組成物の製剤化に一般に使用される賦形剤として定義される、薬学的に許容される、無毒担体または希釈剤を含むことができる。組合せの生物活性に影響を与えないように希釈剤を選択する。このような希釈剤の例は、蒸留水、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、デキストロース溶液、およびハンクス溶液である。さらに医薬組成物または製剤は、他の担体、アジュバント、または無毒、非免疫原性安定剤なども含むことができる。

医薬担体は液体であってよく、医薬組成物は溶液の形であり得る。液体担体は、溶液、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エリキシル剤および圧縮組成物を調製する際に使用される。活性成分は、水などの薬学的に許容される液体担体、有機溶媒、両者の混合物、または薬学的に許容される油もしくは脂質に溶解または懸濁することができる。液体担体は、可溶化剤、乳化剤、バッファー、防腐剤、甘味剤、香味剤、懸濁剤、増粘剤、着色剤、粘度調整剤、安定剤または浸透圧調整剤などの他の適切な医薬添加剤を含有することができる。経口および非経口投与に適した液体担体の例としては、水（添加剤、例えばセルロース誘導体を部分的に含有する、好ましくはカルボキシメチルセルロースナトリウム溶液）、アルコール（一価アルコール、および多価アルコール、例えばグリコールを含む）およびそれらの誘導体、および油（例えば、分留ココナッツ油およびアラキジン酸油）があげられる。非経口投与に関して、担体は、オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルなどの油状エステルであってもよい。滅菌液体担体は、非経口投与用の滅菌液体型組成物において有用である。

非経口投与用の医薬組成物は滅菌状態、実質的に等張で、発熱物質を含まず、ＦＤＡまたは同様の団体のＧＭＰに従い調製する。水、油、生理食塩水、グリセロールまたはエタノールなどの滅菌液であってよい医薬担体を含む生理的に許容される希釈剤中の注射用量の溶液または懸濁液物質として、抗体を投与することができる。さらに、例えば湿潤剤または乳化剤、界面活性剤、ｐＨ緩衝物質などの補助物質が組成物中に存在してよい。医薬組成物の他の成分は、石油、動物、植物、または合成起源の成分、例えばピーナッツ油、大豆油、および鉱油である。一般に、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコールは、特に注射溶液に好ましい液体担体である。活性成分の徐放を可能にするような形式で製剤化され得るデポー注射またはインプラント調製物の形で、抗体を投与することができる。典型的には、組成物は液体溶液または懸濁液のいずれかとして、注射用として調製され、注射前に溶液中、または懸濁液中、液体賦形剤中に適した固体型に調製することもできる。調製物は、前に論じられたようにアジュバント効果を高めるため、リポソーム、またはポリラクチド、ポリグリコリド、またはコポリマーなどのミクロ粒子中に乳化または封入することもできる（Langer, Science 249,1527(1990)and Hanes, Advanced Drug Delivery Reviews 28,97-119(1997)を参照）。

薬剤と治療用抗体は任意の適切な経路により投与することができる。それらはいずれも静脈内（ｉ．ｖ．）投与することが好ましい。

さらなる好ましい実施形態は以下の実施形態を含む：
１．（ｉ）内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および
（ｉｉ）薬剤に耐性がある治療用抗体
を含む組成物。
２．治療用抗体の効能の増大において使用するための、実施形態１に記載の組成物。
３．がん、感染および／または自己免疫疾患の治療において使用するための、実施形態１に記載の組成物。
４．薬剤がエンドグリコシダーゼ、プロテアーゼまたはプロテイン−Ｎ−グリカナーゼから選択される、実施形態１から３に記載の組成物。
５．エンドグリコシダーゼがエンドグリコシダーゼＳもしくはエンドグリコシダーゼＦ３もしくはエンドグリコシダーゼＥｂｅｔａから選択される、実施形態４に記載の組成物。
６．治療用抗体の効能の増大において使用するための、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および薬剤に耐性がある治療用抗体。
７．実施形態６では、薬剤はエンドグリコシダーゼ、プロテアーゼまたはプロテイン−Ｎ−グリカナーゼから選択される。
８．実施形態７では、エンドグリコシダーゼはエンドグリコシダーゼＳ、エンドグリコシダーゼＦ３およびエンドグリコシダーゼＥｂｅｔａから選択される。
９．内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤に耐性がある治療用抗体。
１０．抗体のＦｃドメインが無グリコシル化状態でありＦｃ受容体と結合することができる、実施形態９に記載の治療用抗体。
１１．抗体のＦｃドメインが薬剤の活性に耐性がある１つまたは複数の糖型を含む、実施形態９に記載の治療用抗体。
１２．Ｆｃドメインの各グリカンが少なくとも５個のマンノース残基を含有する、実施形態９、１０または１１に記載の治療用抗体。
１３．糖型がオリゴマンノースタイプの糖型である、実施形態１１に記載の治療用抗体。
１４．Ｆｃドメインの各グリカンが２個のみのＧｌｃＮＡｃ残基と３個以上のマンノース残基を含有する、実施形態１３に記載の治療用抗体。
１５．Ｆｃドメインの各グリカンがＭａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｍａｎ_８ＧｌｃＮＡｃ_２、もしくはＭａｎ_９ＧｌｃＮＡｃ_２を含有する、実施形態１３に記載の治療用抗体。
１６．オリゴマンノースタイプの糖型がオリゴマンノースタイプのグリカンの混合物である、実施形態１３に記載の治療用抗体。
１７．Ｆｃドメインの各グリカンが５〜２０個のマンノース残基を含有する、実施形態１３または１４に記載の治療用抗体。
１８．糖型がハイブリッドタイプの糖型である、実施形態１１に記載の治療用抗体。
１９．糖型がβ−マンノース残基と１−４結合した少なくとも１個のβ−Ｎ−アセチルグルコサミン残基（「バイセクティングＮ−アセチルグルコサミン」）を含有する、実施形態１１に記載の治療用抗体。
２０．糖型がβ−マンノース残基と１−４結合した２個のβ−Ｎ−アセチルグルコサミン残基（「バイセクティングＮ−アセチルグルコサミン」）を含有する、実施形態１１に記載の治療用抗体。
２１．糖型がガラクトースとα２−６結合したシアル酸もしくはシアル酸を含有する、実施形態１１に記載の治療用抗体。
２２．抗体介在療法の効能を増大するための医薬品の製造における、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および薬剤に耐性がある治療用抗体の使用。
２３．医薬品ががん、感染および／または自己免疫疾患の治療用である、実施形態２２に記載の使用。
２４．薬剤がＥｎｄｏＳであり、治療用抗体がオリゴマンノースタイプのグリカンを含むＦｃドメインを有する、実施形態２２に記載の使用。
２５．薬剤がＥｎｄｏＳであり、治療用抗体がハイブリッドタイプのグリカンを含むＦｃドメインを有する、実施形態２２に記載の使用。
２６．薬剤がＥｎｄｏＳであり、治療用抗体がβ−マンノース残基と１−４結合したβ−Ｎ−アセチルグルコサミン残基を含むＦｃドメインを有する、実施形態２２に記載の使用。
２７．薬剤がＥｎｄｏＳであり、治療用抗体がシアル酸を含むＦｃドメインを有する、実施形態２２に記載の使用。
２８．抗体介在療法の効能を増大するための方法であって、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および薬剤に耐性がある治療用抗体を対象に投与するステップを含む方法。
２９．がん、感染および／または自己免疫疾患を治療するための、内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および薬剤に耐性がある治療用抗体を対象に投与するステップを含む、実施形態２８に記載の方法。
３０．がん、感染および／または自己免疫疾患の治療において使用するための、
（ｉ）治療有効量の内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を低減する薬剤、および
（ｉｉ）治療有効量の薬剤に耐性がある治療用抗体
を含むキット。

本発明のさらなる好ましい実施形態を、以下の図面および実施例を参照しながら、単なる例によってここで記載する。

ＰＢＳ、またはエンドグリコシダーゼ−Ｓで処置もしくは擬似処置した高濃度のヒト血清の存在下における、固定ＦｃγＲＩＩＩａとヒトＩｇＧ１Ｆｃの結合を示す図である。 ＥｎｄｏＳ消化前にヒト血清ＩｇＧで見られたＮ結合グリカンのＰＮＧａｓｅＦ放出の質量分析法を示す図である。 ＥｎｄｏＳ消化前にヒト血清ＩｇＧで見られたＮ結合グリカンのＰＮＧａｓｅＦ放出の質量分析法を示す図である。 ＥｎｄｏＳ消化後にヒト血清ＩｇＧで見られたＮ結合グリカンのＰＮＧａｓｅＦ放出の質量分析法を示す図である（主要イオンは塩化物付加体である。ｍ／ｚ１７６２および１９２４でのイオンはリン酸付加体であり、ｍ／ｚ１５１９はｍ／ｚ１８６２の断片である）。 ＥｎｄｏＳ消化後にヒト血清ＩｇＧで見られたＮ結合グリカンのＰＮＧａｓｅＦ放出の質量分析法を示す図である（主要イオンは塩化物付加体である。ｍ／ｚ１７６２および１９２４でのイオンはリン酸付加体であり、ｍ／ｚ１５１９はｍ／ｚ１８６２の断片である）。 ＥｎｄｏＳにより放出されたグリカンの直接質量分析法を示す図である。（塩化物付加体としてＲａｎ、ｍ／ｚ１２１０、１３７２および１５３４はリン酸付加体であり、ｍ／ｚ９５１、１１１３および１２７５は断片である。） ＥｎｄｏＳにより放出されたグリカンの直接質量分析法を示す図である。（塩化物付加体としてＲａｎ、ｍ／ｚ１２１０、１３７２および１５３４はリン酸付加体であり、ｍ／ｚ９５１、１１１３および１２７５は断片である。） ＥｎｄｏＳ介在加水分解に対するＦｃ糖型含有オリゴマンノースタイプの耐性を示す図である。天然グリコシル化ＩｇＧ１Ｆｃ（ａ〜ｃ）およびオリゴマンノースタイプ（Ｍａｎ_９ＧｌｃＮＡｃ_２）Ｆｃ（ｄ〜ｆ）を、Ｅｎｄｏ−Ｓ（ｂ，ｅ）またはＥｎｄｏ−Ｈ（ｃ，ｆ）のいずれかで消化した。周知の生合成経路と一致し、示したグリカン構造は最も多量の異性体種に基づく。コアＧｌｃＮＡｃβ１→４ＧｌｃＮＡｃ結合の切断は、複合グリカンから１個のＧｌｃＮＡｃと結合フコース残基（予想Δｍ／ｚ＝３４９．１）、およびオリゴマンノースタイプタイプのグリカンからＧｌｃＮＡｃの除去をもたらす（予想Δｍ／ｚ＝２０３．１）。 組換えモノクローナルＩｇＧ１（ヒトＦｃとマウスＦａｂのキメラＩｇＧであるｍＡｂＩｇＧＣＩＩＣ１）と固定ＦｃγＲＩＩＩａとのＥＬＩＳＡによる結合が、バッファー（ＰＢＳ）または高濃度のヒト血清の存在下で示されることを示す図である。マウスＦａｂドメインに特異的な二次抗体を使用して結合を検出した。 ＥｎｄｏＳ介在の血清の不活性化は、ＦｃγＲＩＩＩａとｍＡｂＩｇＧＣＩＩＣ１（ヒトＦｃとマウスＦａｂのキメラＩｇＧ）の結合の向上をもたらすことを示す図である。ＰＢＳ、血清、血清とＥｎｄｏ−Ｓ、血清とＥｎｄｏ−Ｈ、または血清とＥｎｄｏＳとＥｎｄｏＨの存在下における、オリゴマンノースタイプ（Ｍａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２）を含有するヒトＩｇＧ１ＦｃとＦｃγＲＩＩＩａの結合を示す。データポイントは、合計４実験からの３回の独立した測定の計算平均を表す。 どのようにしてＥｎｄｏＳが、グリカン操作型（オリゴマンノースタイプ）抗体ではなくＦｃγＲに対する大量血清抗体のアフィニティーを無効にするかを示す概略図である。

配列の簡単な説明
配列番号１は、化膿性連鎖球菌（S.pyogenes）ＡＰ１から単離したＥｎｄｏＳのアミノ酸配列である。
配列番号２は、シグナル配列を含む、化膿性連鎖球菌（S.pyogenes）ＡＰ１から単離したＥｎｄｏＳのアミノ酸配列である。
実施例

本発明の原理
図８は、本発明の少なくとも１つの態様の原理を示す。特に図８は、どのようにしてＥｎｄｏＳが、「正常」Ｆｃグリコシル化を除去することにより、ＦｃγＲに対する大量血清抗体のアフィニティーを無効にするかを示す概略図である。しかしながらＥｎｄｏＳは、グリカン操作型（オリゴマンノースタイプ）抗体に対しては影響がなく、ＦｃＲの活性化が実施される。生理的条件下において大部分のＦｃＲは「無関係な」、典型的には血清ＩｇＦｃによって結合する。これは、利用可能なＦｃ受容体（ＦｃγＲ）の有効濃度に強い制約を課す。この実施形態では、Ｅｎｄｏ−Ｓを使用して、グリカン操作型（オリゴマンノースタイプ）モノクローナル抗体ではなく、ＦｃγＲに対する無関係な血清抗体のアフィニティーを有意に低下させる。

ＦｃγＲＩＩＩａと血清ＩｇＧの結合の低減によって、耐性治療用抗体の結合が増大する
ＥｎｄｏＳを使用してＦｃγＲＩＩＩａと血清ＩｇＧの結合を低減することが可能であることを実証するため、以下の実験を実施した。ＰＢＳ中２．５μｇ／ｍＬのＦｃγＲＩＩＩａ（１５８Ｖａｌ変異体；Ｒ ａｎｄ Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を、４℃で一晩、高結合マイクロタイタープレート（３６９０、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）にコーティングした。コーティングしたプレートは０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）で洗浄し、ＰＢＳ中３％ＢＳＡで室温において２時間ブロッキングした。ヒト血清（Ｈ４５２２、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）またはＭａｎ_９ＧｌｃＮＡｃ_２もしくはＭａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２を有する組換えヒトＩｇＧ１糖型の連続希釈液を次いで加え（ＰＢＳ中に０．１ｍｇ／ｍＬの開始濃度）、室温において２時間結合させた。プレートは０．０５％Ｔｗｅｅｎを含有するＰＢＳで５回洗浄し、ネズミＩｇＧＦａｂに特異的なＨＲＰ結合Ｆａｂ断片（ａｂ９８６５９、Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）を使用して結合を検出した。ＴＭＢ基質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を、製造者の指示に従い発色に使用した。２Ｍ Ｈ_２ＳＯ_４の添加により発色を停止させ、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｍ５（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）マルチウエルプレートリーダーにおいて４５０ｎｍで吸光度を測定した。３７℃で一晩、１μｇ／ｍＬのＥｎｄｏＳまたはＰＢＳと共に血清をインキュベートした。対照血清サンプルはＰＢＳで擬似処置し、３７℃で一晩インキュベートした。データを処理し、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を使用してプロットした。みかけのアフィニティーは、ＥＬＩＳＡ結合曲線上の最大結合の半分に相当するオリゴマンノースタイプｍＡｂの濃度として計算した。正常ヒト血清の結合は、標識抗ヒトＦａｂを使用して検出した。これらの結果は図１中に示し、ヒト血清ＩｇＧのＥｎｄｏＳ処置はＦｃγＲＩＩＩａ結合の低減をもたらすことを明らかに実証する。

図６は、モノクローナル抗体ＩｇＧＣＩＩＣ１（大プールの血清抗体に対するモノクローナル抗体の特異的検出を可能にする、ヒトＦｃとマウスＦａｂのキメラＩｇＧ）とＦｃγＲＩＩＩａの結合の低減が、高濃度の血清ＩｇＧで観察されることを実証する。一定範囲のモノクローナルＩｇＧ濃度でＰＢＳ中に高希釈の血清（１：５、１：１０、１：２０および１：５０）において結合を決定した（ｘ軸）。モノクローナル抗体ＩｇＧＣＩＩＣ１の結合は、ＨＲＰ結合抗マウス（Ｆａｂ）’２抗体を使用して検出した。図６は、どのようにして血清ＩｇＧがモノクローナル抗体ＩｇＧＣＩＩＣ１に打ち勝つかを示す。

血清ＩｇＧはＥｎｄｏＳ活性に感受性がある
バイセクティンググリカンとシアル酸構造がＥｎｄｏＳに耐性があることを実証するため、ヒト血清ＩｇＧで見られたＮ結合グリカンの組成分析を、材料および方法のセクション中に記載したようにＥｎｄｏＳ消化の前（ａ）と後（ｂ）に実施した。天然血清Ｉｇで見られた主なニュートラル２触角状構造（neutral bi-antennary structures）（ｍ／ｚ１５５９、１７２１、１８８３）は、ＥｎｄｏＳに曝されたＩｇＧには全く存在しなかった。対照的に、対応するバイセクティング構造（図２Ａおよび２Ｂ中のｍ／ｚ１７６２、１９２５、および２０８７）はＥｎｄｏ−Ｓ消化前に小集団を示したが、ＥｎｄｏＳ消化後にはＩｇＧにおいて最も多量の種に対応した。

ＥｎｄｏＳにより放出されたグリカンの直接質量分析法を、材料および方法のセクション中に記載したように実施した。図４Ａおよび４Ｂは、ニュートラル２触角状構造は加水分解されたが（ｍ／ｚ１１４８、１３１０、１４７３で産物生成）、検出可能なバイセクティング構造は放出プールにおいて見られなかったことを示す。いくつかのモノシアル酸構造が放出プールにおいて見られたが（ｍ／ｚ１５６６および１７２８）、消化ＩｇＧでは増大分画として見られ（ｍ／ｚ２０７８および２２８０）、これらの構造がＥｎｄｏＳに対して部分的耐性を示したことが示された。ニュートラルバイセクティング（neutral, bisected）構造の耐性と一致して、バイセクティングシアル酸構造（ｍ／ｚ２２８０）は残留グリカンの分画として有意に増大した。シアル酸グリカンの大部分はＥｎｄｏＳで放出された。

全体としてこれらのデータは、バイセクティンググリカンはＥｎｄｏＳに耐性があり、シアル酸構造は適度に耐性があり、（バイセクティングおよびシアル酸を欠く）ＩｇＧにおける主要群の２触角状グリカンはＥｎｄｏＳに完全に感受性があることを示す。

ＥｎｄｏＳによる酵素分解に耐えるオリゴマンノースタイプ抗体の能力
ＥｎｄｏＳに耐性があるオリゴマンノースタイプ抗体を作製することが可能であることを実証するため、以下の実験を実施した。

図５は、ＥｎｄｏＳ介在加水分解に対するオリゴマンノースタイプＦｃ糖型の耐性を示す。材料および方法のセクション中に記載したように、組換えＩｇＧ−Ｆｃドメインは、阻害剤キフネンシン無し図３（ａ）または有り（ｄ）のいずれかでヒト胚腎臓２９３Ｔ細胞において発現された。これによって、図２Ａおよび２Ｂに例示したヒト血清で見られるプロファイルと類似した、典型的な２触角状の（ａ）中に示したような複合タイプのグリカンプロファイルが生じ、または阻害剤キフネンシンを使用した場合（ｄ）、純粋にオリゴマンノースタイプのプロファイルが生じた。図５（ｂ）は、どのようにしてＥｎｄｏＳが複合タイプのグリカンを完全に切断することができたかを示すが、オリゴマンノースタイプのグリカンには全く影響がなかった（ｅ）。ＥｎｄｏＨによる消化は、ＥｎｄｏＨの相互作用特異性、および、図５（ｃ）中に見られるように複合タイプのグリカンを完全に切断することがどのように不可能であったか、および図５（ｆ）中に見られるようにオリゴマンノースタイプのＦｃ糖型の完全加水分解を実証した。

ＥｎｄｏＳを使用して、ＦｃγＲＩＩＩａのオリゴマンノースタイプのｍＡｂに対するみかけのアフィニティーを増大することが可能であることを実証するため、以下の実験を実施した。ＰＢＳ中２．５μｇ／ｍＬのＦｃγＲＩＩＩａ（１５８Ｖａｌ変異体；Ｒ ａｎｄ Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を、４℃で一晩、高結合マイクロタイタープレート（３６９０、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）にコーティングした。コーティングしたプレートは０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）で洗浄し、ＰＢＳ中３％ＢＳＡで室温において２時間ブロッキングした。ヒト血清（Ｈ４５２２、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）またはＭａｎ_９ＧｌｃＮＡｃ_２もしくはＭａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２を有する組換えヒトＩｇＧ１糖型の連続希釈液を次いで加え（ＰＢＳ中に０．１ｍｇ／ｍＬの開始濃度）、室温において２時間結合させた。プレートは０．０５％Ｔｗｅｅｎを含有するＰＢＳで５回洗浄し、ネズミＩｇＧＦａｂに特異的なＨＲＰ結合Ｆａｂ断片（ａｂ９８６５９、Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）を使用して結合を検出した。ＴＭＢ基質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を、製造者の指示に従い発色に使用した。２Ｍ Ｈ_２ＳＯ_４の添加により発色を停止させ、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｍ５（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）マルチウエルプレートリーダーにおいて４５０ｎｍで吸光度を測定した。３７℃で一晩、１：１００希釈のＥｎｄｏＳ（１μｇ／ｍＬ）またはＥｎｄｏＨ（５００Ｕ／μＬ）と共に１：５希釈の血清をインキュベートした 対照血清サンプルはＰＢＳで擬似処置し、３７℃で一晩インキュベートした。データを処理し、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を使用してプロットした。みかけのアフィニティーは、ＥＬＩＳＡ結合曲線上の最大結合の半分に相当するオリゴマンノースタイプｍＡｂの濃度として計算した。

図１からのデータと一致して、図７は、ＨＲＰ結合抗マウスＦａｂＩｇＧを使用すると、無酵素血清は検出対象ＦｃγＲＩＩＩａとオリゴマンノースタイプｍＡｂＩｇＧＣＩＩＣ１の結合を効率よく阻害したことを示す。結合はＰＢＳのみの存在下、または血清もしくは血清およびＥｎｄｏＳとＥｎｄｏＨの組合せの存在下で決定した。任意のエンドグリコシダーゼの不在下では、血清はオリゴマンノースタイプｍＡｂＩｇＧＣＩＩＣ１を効率よく上回った。しかしながらＥｎｄｏＳの添加は、ＦｃγＲＩＩＩａに対するオリゴマンノースタイプｍＡｂのみかけのアフィニティーの劇的な増大をもたらし、５０％の受容体飽和が約０．０５μＭのｍＡｂ、血清の完全不在下でＩｇＧに関して決定したｍＡｂ：ＦｃＲのそれに近いレベルで得られ、この相互作用の報告された値（０．０８μＭ）と一致した（Kanda, Y., Yamada, T., Mori, K., Okazaki, A., Inoue, M., Kitajima-Miyama, K., Kuni-Kamochi, R.,Nakano, R., Yano, K., Kakita, S., Shitara, K. and Satoh, M. (2007). Glycobiology 17,104-18）。

この増大は、操作型モノクローナル抗体と天然血清Ａｂの差異のあるグリコシル化の直接の結果であった。この糖型依存性は、競合血清もＥｎｄｏＳで処置したかどうかとは無関係に、検出可能なＦｃγＲＩＩＩａ結合の消失をもたらしたＥｎｄｏＨの添加により確認した。例えば、図７において実証したように、オリゴマンノースタイプの抗体糖型の使用によりＥｎｄｏＨで治療用抗体を不活性化することができる。ＥｎｄｏＨを治療用抗体の不活性化に使用して、身体中の活性時間を調節することができ、または患者に悪影響がある反応が生じた場合それを不活性化することができる。

材料および方法
タンパク質の発現およびＩｇＧ１オリゴマンノースタイプ糖型の精製
Ｍａｎ_９ＧｌｃＮＡｃ_２およびＭａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２
ヒトＩｇＧ１Ｆｃ（残基２４０〜４４０、Edelman et alのナンバリングに従う、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｊ００２２８）をｐＨＬｓｅｃベクターにクローニングし、それぞれ１：１．５の質量比でポリエチレンイミン（ＰＥＩ）と混合したＤＮＡと共に、以前に記載されたように（Aricescu et al. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr.2006 Oct;62(Pt10):1243-50.Epub 2006 Sep 19）、ヒト胚腎臓細胞において一過的に発現させた。Ｍａｎ_９ＧｌｃＮＡｃ_２糖型は、５μＭのキフネンシン、クラスＩα−マンノシダーゼ阻害剤の存在下でヒト胚腎臓２９３Ｔ細胞における一過的発現により得て（Chang VT, Crispin M, Aricescu AR, Harvey DJ, Nettleship JE, Fennelly JA, Yu C, Boles KS, Evans EJ, Stuart DI, Dwek RA, Jones EY, Owens RJ, Davis SJ. Structure. 2007 Mar;15(3):267-73）、未熟オリゴマンノースタイプＮ結合グリカンを有するＩｇＧ−Ｆｃ、Ｍａｎ_９ＧｌｃＮＡｃ_２を生成した。Ｍａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２糖型は、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩ欠損ヒト胚腎臓２９３Ｓ細胞における一過的発現により得た（Reeves, P.J., N. Callewaert, et al.(2002).Proc Natl Acad Sci USA99(21):13419-13424）。細胞上澄はトランスフェクション後５日で浄化し、ＩｇＧ−Ｆｃは、Ｃｈｅｌａｔｉｎｇ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ Ｎｉ^２＋−アガロースビーズ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ、ＵＫ）を使用して、固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。ＩｇＧ−Ｆｃは、７５μｇｍＬ^−１エンドグリコシダーゼＨを使用して、１２時間２５℃で部分的に脱グリコシル化状態にし、次いでサイズ排除クロマトグラフィーにより精製した。タンパク質純度はＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析によって評価し、脱グリコシル化ＩｇＧの典型的収量は２０ｍｇＬ^−１細胞培養物であった。

ネズミモノクローナル抗体ＣＩＩＣ１（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｓｔｕｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｂａｎｋ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｉｏｗａ、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｉｏｗａ Ｃｉｔｙ，ＩＡ５２２４２）のＦａｂドメインをｐＦＵＳＥ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１ベクター（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）にクローニングすることによって、ヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインを有する完全長ＩｇＧ１抗体を作製した。複合およびオリゴマンノースタイプグリカンを有する完全ＣＩＩＣ１抗体を、前に記載したようにヒト胚腎臓細胞において一過的に発現させた。完全長抗体の首尾よい発現はＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析によって確認し、マウスコラーゲンＩＩ型タンパク質との結合に関してもＥＬＩＳＡにより確認した。

酵素によるＮ結合グリカンの切り離し
オリゴ糖を、クーマシーブルー染色還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルから切除した約１０μｇの標的糖タンパク質を含有するバンドから切り離し、水とアセトニトリルで交互に洗浄し、真空遠心分離で乾燥させ、次に１００単位／ｍｌのＰＮＧａｓｅＦ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、ＭＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）で再水和し、３７℃で１２時間インキュベートした。酵素により切り離したＮ結合グリカンは水で溶出させた。エンドグリコシダーゼによるグリカンの消化は、（Ｇｅｎｏｖｉｓ ＡＢ、Ｌｕｎｄ、Ｓｗｅｄｅｎから購入可能、さらにＰｒｏｆｅｓｓｏｒ Ｂｅｎ Ｄａｖｉｓ、ＣＲＬ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｏｘｆｏｒｄから入手可能な）１μｇの組換えＥｎｄｏＳ、または１μｌのＥｎｄｏＨ（５００Ｕ／μｌ、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、ＭＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を加えることによって行い、３７℃で１２時間インキュベートした。

マトリックス支援レーザー脱離／イオン化（ＭＡＬＤＩ）飛行時間型（ＴＯＦ）質量分析。
前述の方法によって作製したグリカンの水溶液を、Ｎａｆｉｏｎ１１７膜で洗浄した。正イオンＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを、ディレイドエクストラクションおよび窒素レーザー（３３７ｎｍ）を備えるＳｈｉｍａｚｕ ＡＸＩＭＡ ＴＯＦ ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ／ＴＯＦで記録した。加速電圧は２０ｋＶであり、パルス電圧は３２００ｋＶであり、ディレイドエクストラクションイオンソースに関するディレイは５００ｎｓであった。ステンレススチールターゲットプレートにおいてマトリックス溶液（アセトニトリル中に２，５−ジヒドロキシ安息香酸の０．３μＬ飽和溶液）に０．５μＬの水溶液サンプルを加えることによりサンプルを調製し、室温でそれを乾燥させた。次いでサンプル／マトリックス混合物をエタノールから再結晶化した。

マウスモデル
細胞系ＳＫＢＲ３（ＨＥＲ２の発現が高い細胞系）由来の細胞をマウスに皮下導入する。ＥｎｄｏＳと、ＥｎｄｏＳに耐性がありＨＥＲ２を対象とする治療用抗体（例えばハーセプチン）を、４週間の間、週当たり３０ｍｇ／Ｋｇの用量で静脈内に導入する。対照マウスには（ｉ）ＥｎｄｏＳまたは（ｉｉ）治療用抗体のいずれも与えない。生成する腫瘍のサイズはカリパーにより測定する。

治療用抗体の遅延投与
乳がん対象を、生理食塩水溶液中に１５ｍｇのＥｎｄｏＳで静脈内治療する。患者のＩｇＧグリコシル化レベルは患者ＩｇＧサンプルの精製によってモニタリングし、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによってＩｇＧ質量を評価する（ＩｇＧの脱グリコシル化はＩｇＧの質量の低下をもたらす）。

２日間の遅延後、体重１ｋｇ当たり２ｍｇの治療用抗体、トラスツズマブで対象を静脈内治療する。

身体外での血液処置
乳がん対象の血液を２５０ｍＬ／１時間の割合で４時間ＥｎｄｏＳ用カラムに通し、対象に戻す。このとき、グリコシル化内因性血清ＩｇＧのレベルは開始レベルの５０％未満に低下する。対象は後に体重１ｋｇ当たり２ｍｇのトラスツズマブで静脈内治療する。

Claims (14)

1. （ｉ）内因性血清抗体のＦｃ受容体結合を酵素による分解によって低減する、抗体の治療効能を増大させる方法の使用のための薬剤であって、前記薬剤がエンドグリコシダーゼ、プロテアーゼまたはプロテイン−Ｎ−グリカナーゼであり、前記抗体の作用形態はＦｃ：ＦｃＲ相互作用を利用するものであり、前記方法は、
   （ａ）対象に前記薬剤を投与するステップ、その後
   （ｂ）一定時間間隔後、対象に前記抗体を投与するステップを含む、
   薬剤。
2. 前記方法は疾患の治療のためである請求項１に記載の薬剤。
3. 疾患ががん、感染または自己免疫疾患である、請求項２に記載の薬剤。
4. がんが急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連がん、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肛門がん、虫垂がん、小児期小脳もしくは大脳における星状細胞腫、基底細胞癌、肝外胆管がん、膀胱がん、骨がん、骨肉腫／悪性線維組織球腫、脳幹グリオーマ、脳がん、脳腫瘍、小児期星状細胞腫、脳腫瘍、大脳星状細胞腫／悪性グリオーマ、脳腫瘍、上衣細胞腫、脳腫瘍、髄芽細胞腫、脳腫瘍、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、脳腫瘍、視経路および視床下部グリオーマ、乳がん、気管支腺腫／カルチノイド、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、胃腸部のカルチノイド腫瘍、未知の原発性癌、中枢神経系リンパ腫、小児期星状細胞腫、大脳星状細胞腫／悪性グリオーマ、子宮頸がん、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病 慢性骨髄増殖性疾患、結腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜がん、上衣細胞腫、食道がん、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍のユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、小児性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、眼部がん、眼内メラノーマ、眼部がん、網膜芽細胞腫、胆嚢がん、胃腸（胃）がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、胚細胞腫瘍：頭蓋外、腺外、または卵巣、妊娠栄養膜腫瘍、脳幹のグリオーマ、グリオーマ、小児期大脳星状細胞腫、グリオーマ、小児期視経路および視床下部、胃カルチノイド、ヘアリーセル白血病、頭頚部がん、心臓がん、肝細胞（肝臓）がん、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、視床下部および視経路グリオーマ、眼内メラノーマ、膵島細胞癌（膵内分泌腺）、カポジ肉腫、腎臓がん（腎細胞がん）、咽頭がん、白血病（Leukemias）、急性リンパ芽球性白血病（急性リンパ性白血病とも呼ばれる）、急性骨髄性白血病（急性骨髄性白血病（acute myelogenous leukemia）とも呼ばれる）、慢性リンパ芽球性白血病（慢性リンパ性白血病とも呼ばれる）、慢性骨髄性白血病（慢性骨髄性白血病（chronic myeloid leukemia）とも呼ばれる）、ヘアリ細胞白血病、唇および口腔がん、脂肪肉腫、（原発性）肝がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、リンパ腫（Lymphomas）、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、バーキットリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（旧分類法のホジキン以外の全リンパ腫）、原発性中枢神経系リンパ腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、骨の悪性線維組織球腫／骨肉腫、髄芽細胞腫、メラノーマ、眼内（眼）メラノーマ、メルケル細胞癌、中皮腫、成人悪性中皮腫、原発不明転移性扁平上皮性頚部がん、口腔がん、多発性内分泌腫瘍症、多発性メラノーマ／形質細胞性腫瘍、菌状息肉症、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、成人急性骨髄性白血病、小児急性ミエローマ、多発性（骨髄のがん）、骨髄増殖性疾患、鼻腔および副鼻腔がん、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺がん、口腔がん、中咽頭がん、骨肉腫／骨の悪性線維組織球腫、卵巣がん、卵巣上皮がん（表面上皮−間質腫瘍）、卵巣胚細胞腫瘍、悪性の可能性が低い卵巣腫瘍、膵臓がん、膵島細胞がん、副鼻腔および鼻腔がん、上皮小体がん、陰茎がん、咽頭がん、クロム親和性細胞腫、松果体星状細胞腫、松果体胚細胞腫、松果体芽細胞腫およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍、下垂体腺腫、形質細胞性腫瘍／多発性ミエローマ、胸膜肺芽細胞腫、中枢神経系原発性リンパ腫、前立腺がん、直腸がん、腎細胞癌（腎臓がん）、腎盂および尿管、移行上皮細胞がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、肉腫、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍、カポジ肉腫、肉腫、軟質組織、肉腫、子宮、セザリー症候群、皮膚がん（非メラノーマ）、皮膚がん（メラノーマ）、皮膚腫瘍、メルケル細胞、小細胞肺がん、小腸がん、軟質組織肉腫、扁平上皮細胞癌、原発不明転移性扁平上皮性頚部がん、胃がん、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、皮膚Ｔ細胞リンパ腫−菌状息肉症およびセザリー症候群参照、精巣がん、咽頭がん、胸腺腫、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺がん、甲状腺がん、腎盂および尿管の移行上皮細胞がん、栄養膜腫瘍、尿管および腎盂の移行上皮細胞がん 尿道がん、子宮がん、子宮内膜、子宮肉腫、膣がん、視経路および視床下部グリオーマ、外陰がん、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症またはウィルムス腫瘍（腎臓がん）である、請求項３に記載の薬剤。
5. がんが、膀胱がん、肺がん、乳がん、メラノーマ、結腸がん、直腸がん、非ホジキンリンパ腫、子宮内膜がん、膵臓がん、腎臓（腎細胞）がん、前立腺がん、白血病、甲状腺がんまたは食道がんである、請求項３に記載の薬剤。
6. 薬剤と抗体が、連続的に使用するための組合せ調製物として存在する、請求項１から５のいずれか一項に記載の薬剤。
7. 一定時間間隔が１〜２、１〜５、１〜１０または１〜２０日である、請求項１から６のいずれか一項に記載の薬剤。
8. 方法が、
   （ａ）薬剤を用いてｅｘ ｖｉｖｏで対象由来の血液を処置するステップ、
   （ｂ）処置済み血液を対象に戻すステップ、その後
   （ｃ）対象に前記抗体を投与するステップを含む、
   請求項１から７のいずれか一項に記載の薬剤。
9. エンドグリコシダーゼがエンドグリコシダーゼＳ（ＥｎｄｏＳ）もしくはエンドグリコシダーゼＦ３もしくはエンドグリコシダーゼＥｂｅｔａであり、またはプロテアーゼがＩｄｅＳである、請求項１〜８のいずれかに記載の薬剤。
10. 薬剤がＥｎｄｏＳまたはＩｄｅＳである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の薬剤。
11. 抗体が、アバゴモマブ、アブシキシマブ、アクトキスマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブペゴール、ＡＬＤ５１８、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブペンテテート、アマツキシマブ、アナツモマブマフェナトクス、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アルシツモマブ、アセリズマブ、アチヌマブ、アトリズマブ（＝トシリズマブ）、アトロリムマブ、バピネウズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ベズロトキスマブ、ビシロマブ、ビマグルマブ、ビバツズマブメルタンシン、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カンツズマブラヴタンシン、カプラシズマブ、カプロマブペンデタイド、カルルマブ、カツマキソマブ、ＣＣ４９、セデリズマブ、セルトリズマブペゴール、セツキシマブ、Ｃｈ．１４．１８、シタツズマブボガトックス、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コナツムマブ、コンシズマブ、クレネズマブ、ＣＲ６２６１、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダラツムマブ、デムシズマブ、デノスマブ、デツモマブ、ドルリモマブアリトックス、ドロジツマブ、デュリゴツマブ、デュピルマブ、デュシジツマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エファングマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エナバツズマブ、エンリモマブペゴール、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブシツキセタン、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、エトロリズマブ、エボロクマブ、エクスビビルマブ、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファルレツズマブ、ファシヌマブ、ＦＢＴＡ０５、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィクラツズマブ、フィジツムマブ、フラボツマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレソリムマブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゲボキズマブ、ジレンツキシマブ、グレムバツムマブベドチン、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、ＧＳ６６２４、イバリズマブ、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イゴボマブ、イムシロマブ、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブラヴタンシン、インフリキシマブ、インテツムマブ、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ、イトリズマブ、イクセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、ラムパリズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レルデリムマブ、レキサツムマブ、リビビルマブ、リゲリズマブ、リンツズマブ、リリルマブ、ロデルシズマブ、ロルボツズマブメルタンシン、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ、マスリモマブ、マブリリムマブ、マツズマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モロリムマブ、モタビズマブ、モキセツモマブパスドトックス、ムロモナブ−ＣＤ３、ナコロマブタフェナトックス、ナミルマブ、ナプツモマブエスタフェナトクス、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブメルペンタン、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オズリモマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オナルツズマブ、オポルツズマブモナトックス、オレゴボマブ、オルチクマブ、オテリキシズマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パノバキュマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ペンツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、ピジリズマブ、ピナツズマブベドチン、ピンツモマブ、プラクルマブ、ポラツズマブベドチン、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリトキサキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ１４０、クイリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバキュマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、ロレズマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サマリズマブ、サリルマブ、サツモマブペンデチド、セクキヌマブ、セリバンツマブ、セトキサキシマブ、セビルマブ、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、タバルマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツモマブパプトックス、テフィバズマブ、テリモマブアリトックス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テプロツムマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ（＝トレメリムマブ）、チルドラキズマブ、チガツズマブ、ＴＮＸ−６５０、トシリズマブ（＝アトリズマブ）、トラリズマブ、トシツモマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、トレメリムマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、ウブリツキシマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バパリキシマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビシリズマブ、ボロシキシマブ、ボレセツズマブマフォドチン、ボツムマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブまたはゾリモマブアリトックスである、請求項１から１０のいずれか一項に記載の薬剤。
12. 抗体がトラスツズマブである、請求項１１に記載の薬剤。
13. 前記抗体が前記薬剤に耐性がある、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の薬剤。
14. 前記薬剤が、
    （ｉ）前記抗体のＦｃドメインが無グリコシル化状態または非グリコシル化状態であり、Ｆｃ受容体と結合することができる、
    （ｉｉ）抗体のＦｃドメインが薬剤の活性に耐性がある１つまたは複数の糖型を含む、
    （ｉｉｉ）抗体のＦｃドメインがオリゴマンノースタイプの糖型を含む、または
    （ｉｖ）Ｆｃドメインの各グリカンが少なくとも５個のマンノース残基を含有する
    請求項１３に記載の薬剤。