JP6207507B2 - 短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインa−i融合タンパク質、それを含む脂質粒子、及びその使用 - Google Patents
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Description
血漿リポプロテインは、血液中の脂質輸送及び代謝を行う可溶性タンパク質−脂質複合体である。リポプロテインのいくつかの主要なクラスが、それらの密度、サイズ、化学組成、及び機能に基づいて識別される。それらの間で、高密度リポプロテイン(HDL)粒子(代替的に高密度脂質粒子として表示される)は、180kDa〜360kDaのそれらの平均分子量において変動するいくつかのサブクラスで構成される。それらの平均的な脂質及びタンパク質含量は、各々50重量%である。ホスファチジルコリン(PC)は総脂質の38%を占め、次いでコレステリルエステルならびに少量の他の極性及び非極性脂質(遊離コレステロールを含む)が続く。主なタンパク質成分はアポリポプロテインA−I(Apo A−I)であり、ヒトHDL中の総タンパク重量の約60%に相当する。
本明細書では、改善された生産特性を有し、特に副生成物形成の出現がより少ない、短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質が報告される。
ここで、配列番号01は、アミノ酸配列:
を有し、
そして変異体は、N末端アミノ酸残基PIVNを有する。
a)本明細書において報告される短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質と、
b)ホスファチジルコリンと、
c)さらなる脂質と
を含む。
− 急性冠動脈症候群を有する患者における二次予防のため、あるいは
− アテローム性動脈硬化症の予防又は治療のためであって、本明細書において報告される短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質又は本明細書において報告される脂質粒子が、対象においてコレステロール逆転送及び/又はプラーク軽減を誘導するのに十分な量で構成されている、アテローム性動脈硬化症の予防又は治療のため、あるいは
− コレステロール逆転送及び/又はプラーク軽減を誘導するため、あるいは
− 対象の血管中の動脈硬化性プラークの清浄/溶解/安定化のため、又は対象の動脈壁から肝臓にコレステロールを再分配するため、あるいは
− 対象における狭窄性弁膜症を予防する又は治療するため、あるいは
− 対象におけるHDL粒子の数を増加させるため、あるいは
− 対象におけるコレステロール逆転送の開始のため、あるいは
− 内毒素の除去のため、あるいは
− 敗血症性ショックの予防のため
− 狭心症の治療のため、あるいは
− 心筋梗塞の治療のため、あるいは
− 不安定狭心症の治療のため、あるいは
− 末梢動脈疾患(PAD)、頸動脈狭窄症、脳動脈狭窄症又は冠状動脈狭窄症のような動脈狭窄症の治療のため、あるいは
− 血管性認知症の治療のため、あるいは
− 一過性黒内障の治療のため。
− 急性冠動脈症候群を有する患者における二次予防のため、あるいは
− アテローム性動脈硬化症の予防又は治療のためであって、本明細書において報告される短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質又は本明細書において報告される脂質粒子が、対象においてコレステロール逆転送及び/又はプラーク軽減を誘導するのに十分な量で構成されている、アテローム性動脈硬化症の予防又は治療のため、あるいは
− コレステロール逆転送及び/又はプラーク軽減を誘導するため、あるいは
− 対象の血管中の動脈硬化性プラークの清浄/溶解/安定化のため、又は対象の動脈壁から肝臓にコレステロールを再分配するため、あるいは
− 対象における狭窄性弁膜症を予防する又は治療するため、あるいは
− 対象におけるHDL粒子の数を増加させるため、あるいは
− 対象におけるコレステロール逆転送の開始のため、あるいは
− 内毒素の除去のため、あるいは
− 敗血症性ショックの予防のため
− 狭心症の治療のため、あるいは
− 心筋梗塞の治療のため、あるいは
− 不安定狭心症の治療のため、あるいは
− 末梢動脈疾患(PAD)、頸動脈狭窄症、脳動脈狭窄症又は冠状動脈狭窄症のような動脈狭窄症の治療のため、あるいは
− 血管性認知症の治療のため、あるいは
− 一過性黒内障の治療のため。
− 急性冠動脈症候群を有する患者における二次予防、あるいは
− アテローム性動脈硬化症の予防又は治療であって、本明細書において報告される短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質又は本明細書において報告される脂質粒子が、対象においてコレステロール逆転送及び/又はプラーク軽減を誘導するのに十分な量で構成されている、アテローム性動脈硬化症の予防又は治療、あるいは
− コレステロール逆転送及び/又はプラーク軽減を誘導するため、あるいは
− 対象の血管中の動脈硬化性プラークの清浄/溶解/安定化のため、又は対象の動脈壁から肝臓にコレステロールを再分配するため、あるいは
− 対象における狭窄性弁膜症を予防する又は治療するため、あるいは
− 対象におけるHDL粒子の数を増加させるため、あるいは
− 対象におけるコレステロール逆転送の開始のため、あるいは
− 内毒素の除去のため、あるいは
− 敗血症性ショックの予防のため
− 狭心症の治療のため、あるいは
− 心筋梗塞の治療のため、あるいは
− 不安定狭心症の治療のため、あるいは
− 末梢動脈疾患(PAD)、頸動脈狭窄症、脳動脈狭窄症又は冠状動脈狭窄症のような動脈狭窄症の治療のため、あるいは
− 血管性認知症の治療のため、あるいは
− 一過性黒内障の治療のため。
− 急性冠動脈症候群、又は
− アテローム性動脈硬化症、又は
− 対象の血管中の動脈硬化性プラーク、又は
− 対象における狭窄性弁膜症、又は
− 敗血症性ショック、又は
− 狭心症、又は
− 心筋梗塞、又は
− 不安定狭心症、又は
− 動脈狭窄症、又は
− 末梢動脈疾患(PAD)、又は
− 頸動脈狭窄症、又は
− 脳動脈狭窄症、又は
− 冠状動脈狭窄症、又は
− 血管性認知症、又は
− 一過性黒内障。
− コレステロール逆輸送を誘導すること、あるいは
− プラーク軽減を誘導すること、あるいは
− 動脈硬化性プラークを清浄すること又は溶解させること又は安定化させること、あるいは
− 動脈壁から肝臓へのコレステロールを再分配すること、あるいは
− HDL粒子の数を増加させること、あるいは
− 内毒素を除去すること。
i)治療有効量の本明細書において報告される短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質又は本明細書において報告される脂質粒子を、処置又は人工系を必要とする対象に投与すること、及び
ii)場合により、対象の脂質レベル又は脂質含有沈着物の変化についてモニタすることを含む方法である。
定義
用語「アポリポプロテイン」は、それぞれ脂質又はリポプロテインの粒子中に含まれるタンパク質を意味する。
100×分数X/Y
[式中、Xは、配列アラインメントプログラムALIGN-2による、そのプログラムのA及びBのアラインメントにおいて同一であると記録されたアミノ酸残基の数であり、そして、Yは、Bにおけるアミノ酸残基の総数である]。アミノ酸配列Aの長さがアミノ酸配列Bの長さと等しくない場合、Bに対するAのアミノ酸配列同一性の割合(%)が、Aに対するBのアミノ酸配列同一性の割合(%)とは等しくならないことが理解されるであろう。特記のない限り、本明細書において使用されるアミノ酸配列の同一性の割合(%)の値は全て、ALIGN-2コンピュータプログラムを使用して、直前の段落に記載のとおり得られる。
本明細書において、短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質が報告される。
本明細書において、本明細書において報告される短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質を含む脂質粒子が報告される。
a)本明細書において報告される短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質と、
b)ホスファチジルコリンと、
c)さらなる脂質とを含む。
本明細書において報告される短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質又は本明細書において報告される脂質粒子は、非正常な脂質レベル、又は血管におけるプラークのような身体の構成要素内における脂質の沈着物を特徴とする疾患又は病状の処置及び/又は診断のために使用することができる。
本明細書に報告される脂質粒子の形成については、凍結乾燥、凍結融解、界面活性剤可溶化に続いて透析、顕微溶液化、超音波処理、及び均質化のような様々な方法が公知である。
配列番号01 短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパ ク質。
配列番号02 ヒトアポリポプロテインA−I。
配列番号03 ヒトテトラネクチン三量体形成ドメイン。
配列番号04 短縮されたヒトテトラネクチン三量体形成ドメイン.
配列番号05 切断されたペプチド。
サイズ排除HPLC:
クロマトグラフィーは、ASI-100 HPLCシステム(Dionex, Idstein, Germany)においてTosoh Haas TSK 3000 SWXLカラムを用いて実施した。溶出ピークは、UVダイオードアレイ検出器(Dionex)によって280nmでモニタした。濃縮サンプルを1mg/mLになるように溶解させた後、安定したベースラインに達するまで、カラムを緩衝液(200mMのリン酸二水素カリウム及び250mMの塩化カリウムからなる、pH7.0)で洗浄した。分析は、均一濃度条件下において0.5mL/分の流速を使用して30分かけて室温で実施した。クロマトグラムは、Chromeleon(Dionex, Idstein, Germany)を用いて手動で積分した。凝集率(%)は、高分子量形態の曲線下面積(AUC)を単量体ピークのAUCと比較することにより求めた。
DLSは、典型的にはサブミクロンサイズ範囲で粒径を測定するための非侵襲性技術である。本発明では、温度制御された石英キュベット(25℃)を備えるZetasizer Nano S装置(Malvern Instruments, Worcestershire, UK)を使用して、1nm〜6μmの粒径範囲をモニタした。後方散乱レーザー光線の強度は、173°の角度で検出した。強度は、粒子拡散速度に依存する割合で変動し、該粒子拡散速度は、粒径によって管理される。したがって、粒径データは、散乱光強度における変動の分析から作成される(Dahneke, B.E. (ed.), Measurement of Suspended Particles by Quasielectric Light Scattering, Wiley Inc. (1983); Pecora, R., Dynamic Light Scattering: Application of Photon Correlation Spectroscopy, Plenum Press (1985))。強度による粒度分布は、DTSソフトウェア(Malvern)の複数ナローモードを使用して算出した。実験は、未希釈のサンプルを用いて行った。
SEC−MALLSは、以下の3つの検出器システムを用いるサイズ排除クロマトグラフィーの組合せである:i)UV検出、ii)屈折率検出、及びiii)光散乱検出。サイズによる分離については、GE Healthcare製のSuperose 6カラム10/300 GLカラムを使用する。方法は、0.4mL/分の流速を適用し、PBS緩衝液(pH7.4)を用いて均一濃度で実行する。3つの検出器システムは、直列に接続する。完全な脂質粒子(タンパク質−脂質粒子)のシグナルは、屈折率検出器によってモニタされ、一方、280nmで測定されるUV吸光度は、タンパク質部分によって誘導されるシグナルを測定する。脂質画分の比率は、完全なシグナルからタンパク質のUVシグナルを単に減じることによって得られる。光散乱の適用により、それぞれの種の分子量の検出、ひいては脂質粒子を完全かつ詳細に説明することが可能になる。
残留界面活性剤の測定は、蒸発光散乱検出器に連結された逆相クロマトグラフィー(RP−ELSD)によって実施した。カラムとして、Phenomenex(Aschaffenburg, Germany)製のLuna C18 4.6×150mm、5μm、100Åを使用した。10kDaの膜による遠心分離を行った後、90μLのフロースルーをHPLC分離に使用した。溶出は、0.1%(v/v)のトリフルオロ酢酸を含有する74%(v/v)のメタノール溶液を用いて、均一濃度条件下で実施した。カラムの温度は、30℃に設定した。検出は、30℃の噴霧化温度、80℃の蒸発温度、及び1.0L/分のガス流を適用して、蒸発光散乱検出器によって実施した。残留界面活性剤の定量は、0.22μg〜7.5μgコール酸の範囲のコール酸の場合、検量線の確立によって実施した。
タンパク質濃度は、アミノ酸配列に基づいて算出されたモル吸光係数を使用して、280nmにおける光学密度(OD)を測定することにより決定した。
Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York(1989)に記載のとおり、標準分析法を用いてDNAを操作した。分子生物学的試薬は、製造業者の指示書に従って使用した。
大腸菌の発現プラスミドの作製及び説明
短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質を、組換え手段によって調製した。発現した融合タンパク質は、N末端からC末端方向において配列番号01のアミノ酸配列を有する。
− 大腸菌における複製用のベクターpBR322由来の複製開始点(Sutcliffe, G., et al., Quant. Biol. 43 (1979) 77-90による2517〜3160 bp位置に対応する)、
− 大腸菌のpyrF突然変異株(ウラシル栄養要求性)の補完によりプラスミド選択を可能にする、オロチジン−5’−リン酸デカルボキシラーゼ(Rose, M. et al. Gene 29 (1984) 113-124)をコードする出芽酵母(Saccharomyces cerevisiae)のURA3遺伝子、
− 以下を含むコア−ストレプトアビジン発現カセット
− Stueber, D., et al.(上記を参照されたい)による合成リボソーム結合部位を含むT5ハイブリッドプロモーター(Bujard, H., et al. Methods. Enzymol. 155 (1987) 416-433及びStueber, D., et al., Immunol. Methods IV (1990) 121-152によるT5-PN25/03/04ハイブリッドプロモータ)、
− コア−ストレプトアビジン遺伝子、
− 2つのバクテリオファージに由来する転写ターミネーター:λ−T0ターミネーター(Schwarz, E., et al., Nature 272 (1978) 410-414)及びfd−ターミネーター(Beck E. and Zink, B. Gene 1-3 (1981) 35-58)、
− 大腸菌に由来するlacI抑制因子遺伝子(Farabaugh, P.J., Nature 274 (1978) 765-769)。
テトラネクチン−アポリポプロテインA−Iの発現
本明細書において報告される融合タンパク質の発現のために、大腸菌の栄養要求性(PyrF)の補完により抗生物質を用いずにプラスミド選択を可能にする大腸菌ホスト/ベクター系を使用した(EP 0 972 838及びUS 6,291,245)。
短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質の調製
封入体の調製を、収集した細菌細胞を、Tris緩衝液(0.1M、1mMのMgSO4を補充、pH7.0)に再懸濁させることによって実施する。デオキシリボヌクレアーゼ(DNAse)を添加した後、900barの圧力でホモジナイズすることによって細胞を破壊する。1.5M NaCl及び60mMのEDTAを含む緩衝液を、ホモジナイズされた細胞懸濁液に添加する。25%(w/v)のHClを用いてpH値を5.0に調整した後、更なる遠心分離工程の後に最終的な封入体スラリーが得られる。スラリーは、更に処理するまで、使い捨て滅菌プラスチック袋中で−20℃にて保存することができる。
短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質のリフォールディング及び脂質付加
a) 一般コール酸法
純粋な結晶質のPOPC又はDPPC(Lipoid, Switzerland)を、コール酸(リン脂質:コール酸のモル比1:1.35)を含有する水性緩衝液(脂質付加緩衝液)に溶解する。混合物を窒素雰囲気下でインキュベートし、透明な溶液が得られるまで、室温(POPC)又は55℃(DPPC)で光から保護する。透明な脂質−コール酸溶液を4℃に冷却するか(POPC)、又は41℃で保存する(DPPC)。短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質を、規定のアポリポプロテイン:リン脂質比で4℃(POPC)又は41℃(DPPC)にて添加する。脂質粒子の形成のために、反応混合物を窒素雰囲気下で4℃(POPC)又は41℃(DPPC)にて一晩インキュベートし、そして光から保護する。最後に、コール酸を、脂質付加緩衝液に対する大規模な透析(4℃/41℃)により除去する。最後に、サンプルを遠心分離して、沈殿した物質を除去する。
1. 250mMの塩酸アルギニン、7.5%のスクロースを補充した50mMのリン酸カリウム緩衝液、pH7.5
2. 250mMの塩酸アルギニン、7.5%のスクロース、10mMのメチオニンを補充した50mMのリン酸水素二カリウム緩衝液、pH7.5
3. 140mMのNaCl、10mMのメチオニンを補充した、250mMのトリス−ヒドロキシルアミノメタン(TRIS)、pH7.5
4. 250mMの塩酸アルギニン、7%のトレハロース、10mMのメチオニンを補充した50mMのリン酸水素二カリウム緩衝液、pH7.5。
短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質を大腸菌で発現させ、そして実施例1〜3に従って精製する。精製後、250mMのTris、140mMのNaCl、6.7Mのグアニジン塩酸塩を含有する溶液(pH7.4)に対するダイアフィルトレーションによって緩衝液を交換する。タンパク質濃度を約30mg/mLに調整した。
項目a)に報告した方法(第1の方法)は、脂質粒子形成のために未変性アポリポプロテインを必要とするが、一方、項目b)に報告する方法(第2の方法)は、脂質粒子形成のために完全に変性されたアポリポプロテインで出発する。
脂質粒子形成を、この実施例の項目a)において報告したとおり、以下のパラメータを用いて実施した:
タンパク質: 短縮されたテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タ ンパク質
脂質付加緩衝液: 250mMのTris−HCl、140mMのNaCl、10mMのメチ オニン、pH7.5
脂質付加: 18℃で
透析: 室温で
試験したモル比: 1:60
アポリポプロテインの応用
a) LCAT活性に対するDPPC及びPOPCの影響
パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン(POPC)又はジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)のいずれかと、組換え野性型アポリポプロテインA−I又はテトラネクチン−アポリポプロテインA−Iのいずれかとを含む脂質粒子を、LCATによるコレステロールのエステル化を支持する能力について試験することができた。
組換え型野性型アポリポプロテインA−Iと3Hコレステロール、DPPC/POPC混合物及びコール酸とをモル比1:4:80:113で混合することにより、界面活性剤としてコール酸を使用して、脂質粒子を調製する。DPPC/POPC混合物は、100%POPC;75%POPC;50%POPC;25%POPCのいずれかを含有していた。
ヒトTHP−1細胞のようなマクロファージを、ホルボールミリステートアセテートにTHP−1単球性白血病細胞を曝露することにより得ることができる。次いで、3Hコレステロールトレーサを含有するアセチル化LDLの存在下で、細胞に更なる培養物を添加する。その後、これらモデル泡沫細胞をコレステロールアクセプター試験化合物に4時間〜8時間曝露する(以下を参照されたい)。
配列番号01のアミノ酸配列及びさらなるN末端アラニンアミノ酸残基を有するテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質を含む、5つの脂質粒子変異体について試験する:
i)POPCのみ
ii)DPPCのみ
iii)POPC:DPPC 3:1
iv)POPC:DPPC 1:1
v)DPPC:SM 9:1。
− 薬物レベル
− 肝酵素、コレステロール、コレステロールエステルの血漿値に対するデータ。
血漿中においてコレステロールは動員され、そしてエステル化される。テトラネクチン−アポリポプロテインA−Iが既に減少し始めた後でさえも、血漿コレステロールエステルレベルは上昇し続ける。血漿テトラネクチン−アポリポプロテインA−Iレベルが約0.5mg/mL(正常な野性型アポリポプロテインA−Iの約50%)まで減少しても、コレステロールエステルレベルの増加を、配列番号01のアミノ酸配列及びさらなるN末端アラニンアミノ酸残基を有するテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質について依然として検出することができる(図8)。
POPCを含有する、配列番号01のアミノ酸配列及びさらなるN末端アラニンアミノ酸残基を有するテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質を含む脂質粒子は、肝酵素の放出を誘導しない(図1を参照のこと)。ウサギと同様に、POPC又はPOPC/DPPC混合物を含有するテトラネクチン−アポリポプロテインA−Iの単回i.v.(静脈内注射)は、マウスにおいて安全である。1:3のモル比でDPPC:POPCを含有するアポリポプロテイン組成物は、POPC単独と同等である(図9)。
5〜10継代培養したHUVEC(ヒト臍帯静脈内皮細胞)を、それぞれのテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質(配列番号01のアミノ酸配列及びさらなるN末端アラニンアミノ酸残基を有するテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質)調製物中で16時間インキュベートし、そしてTNFαで最後の4時間刺激する。VCAM1表面発現は、FACSによって特異的抗体で検出される。
脂質粒子の安定性
N末端ヒスチジンタグ及びIgAプロテアーゼ切断部位を含有する野生型のアポリポプロテインA−Iを大腸菌において発現させ、そして、上記の実施例において報告したとおりカラムクロマトグラフィーによって精製することができる。ヒスチジンタグは、IgAプロテアーゼ切断によって除去し、その結果、配列番号02のアミノ酸配列及びさらなるN末端アラニンアミノ酸残基を有するテトラネクチン−アポリポプロテインA−I融合タンパク質を得る。タンパク質のLipoid S100大豆リン脂質混合物に対する比1:150を使用して、脂質粒子(HDL粒子)を構築する。粒子は、5mMのリン酸ナトリウム及び1%のスクロースを含有する緩衝液(pH値7.3)中で保存する。SE−HPLCにより、10日間の脂質付加及びインキュベートの後、インキュベート時に3つの別個のピークが明らかになった。40℃でインキュベートした後、保持時間10.8分において主なピークを検出することができ(総タンパク量の47%)、これは、5℃で保存したサンプルでは存在しない。前記10.8分のピークは、タンパク質の不安定化により可溶性の高分子量アセンブリが形成されたことを示す。
コレステロール動員
コレステロールが血液へ動員される効率は、アポリポプロテインをインビボで投与した後に、総コレステロール濃度とアポリポプロテイン濃度とのそれぞれの可動域を比較することにより測定することができる。定量的評価については、基準線補正された総コレステロールの濃度−時間曲線下面積(AUC)及びアポリポプロテインの濃度−時間曲線下面積の指数を算出した。
− 大腸菌において発現させ、そして上記の実施例において報告したとおりカラムクロマトグラフィーによって精製した、N末端ヒスチジンタグ及びIgAプロテアーゼ切断部位を含有する野生型のアポリポプロテインA−I; ヒスチジンタグは、IgAプロテアーゼ切断によって除去した;タンパク質のLipoid S100大豆リン脂質混合物に対する比1:150を使用して、脂質粒子(HDL粒子)を構築した、
− アポリポプロテインA−I Milano変異体; タンパク質のPOPCに対する比1:40を使用して、脂質粒子(HDL粒子)を構築した、
− 配列番号02のテトラネクチン−アポリポプロテインA−I; タンパク質のPOPC及びDPPC(POPCとDPPC、比3:1)に対する比1:60を使用して、脂質粒子(HDL粒子)を構築した。
Claims (15)
- 配列番号01のアミノ酸配列を有するか、又は配列番号01のアミノ酸配列からなりかつアポリポプロテインA−1の1〜10の保存的アミノ酸置換を含むその変異体であり、最初の4つのアミノ酸残基がPIVNであることを特徴とし、1−パルミトイル−2−オレオイル−ホスファチジルコリン及び1,2−ジパルミトイル−ホスファチジルコリンと脂質粒子を生成する、融合タンパク質。
- 請求項1記載の融合タンパク質を含む、脂質粒子。
- − 請求項1記載の融合タンパク質と、
− ホスファチジルコリンと、
− 脂質と
を含む、請求項2記載の脂質粒子。 - − 請求項1記載の融合タンパク質と、
− 第1のホスファチジルコリンと、
− 第2のホスファチジルコリンと
を含むことを特徴とする、請求項2〜3のいずれか一項記載の脂質粒子。 - 1−パルミトイル−2−オレオイル−ホスファチジルコリン及び1,2−ジパルミトイル−ホスファチジルコリンを含むことを特徴とする、請求項2〜4のいずれか一項記載の脂質粒子。
- 1−パルミトイル−2−オレオイル−ホスファチジルコリンの1,2−ジパルミトイル−ホスファジルコリンに対するモル比が、99:1〜25:75であることを特徴とする、請求項5記載の脂質粒子。
- 融合タンパク質が3個の単量体を含む多量体であることを特徴とする、請求項2〜6のいずれか一項記載の脂質粒子。
- キュビリン、スカベンジャー受容体クラスB−1型(SR−BI)、ATP−結合カセット1(ABCA−1)、レシチン−コレステロールアシルトランスフェラーゼ(LCAT)、コレステリル−エステル転移タンパク質(CETP)、又はリン脂質転移タンパク質(PLTP)からなる群より選択される受容体に結合することを特徴とする、請求項2〜7のいずれか一項記載の脂質粒子。
- 脂質粒子中のアポリポプロテイン単量体1個当たりのリン脂質分子の数が、40〜120であることを特徴とする、請求項2〜8のいずれか一項記載の脂質粒子。
- 脂質粒子中のアポリポプロテイン単量体1個当たりのリン脂質分子の数が、50〜90であることを特徴とする、請求項9記載の脂質粒子。
- 請求項1記載の融合タンパク質又は請求項2〜10のいずれか一項記載の脂質粒子を含む、医薬組成物。
- − 急性冠動脈症候群を有する患者における二次予防のため、あるいは
− アテローム性動脈硬化症の予防又は治療のため、あるいは
− コレステロール逆転送及び/又はプラーク軽減を誘導するため、あるいは
− 対象の血管中の動脈硬化性プラークの清浄/溶解/安定化のため、又は対象の動脈壁から肝臓にコレステロールを再分配するため、あるいは
− 対象における狭窄性弁膜症を予防する又は治療するため、あるいは
− 対象におけるHDL粒子の数を増加させるため、あるいは
− 対象におけるコレステロール逆転送の開始のため、あるいは
− 内毒素の除去のため、あるいは
− 敗血症性ショックの予防のため
− 狭心症の治療のため、あるいは
− 心筋梗塞の治療のため、あるいは
− 不安定狭心症の治療のため、あるいは
− 末梢動脈疾患(PAD)、頸動脈狭窄症、脳動脈狭窄症又は冠状動脈狭窄症のような動脈狭窄症の治療のため、あるいは
− 血管性認知症の治療のため、あるいは
− 一過性黒内障の治療のため
の医薬としての使用のための、請求項11記載の医薬組成物。 - 医薬の製造のための、請求項2〜10のいずれか一項記載の脂質粒子の使用。
- − 急性冠動脈症候群を有する患者における二次予防のため、あるいは
− アテローム性動脈硬化症の予防又は治療のため、あるいは
− コレステロール逆転送及び/又はプラーク軽減を誘導するため、あるいは
− 対象の血管中の動脈硬化性プラークの清浄/溶解/安定化のため、又は対象の動脈壁から肝臓にコレステロールを再分配するため、あるいは
− 対象における狭窄性弁膜症を予防する又は治療するため、あるいは
− 対象におけるHDL粒子の数を増加させるため、あるいは
− 対象におけるコレステロール逆転送の開始のため、あるいは
− 内毒素の除去のため、あるいは
− 敗血症性ショックの予防のため
− 狭心症の治療のため、あるいは
− 心筋梗塞の治療のため、あるいは
− 不安定狭心症の治療のため、あるいは
− 末梢動脈疾患(PAD)、頸動脈狭窄症、脳動脈狭窄症又は冠状動脈狭窄症のような動脈狭窄症の治療のため、あるいは
− 血管性認知症の治療のため、あるいは
− 一過性黒内障の治療のため
の医薬の製造のための、請求項2〜10のいずれか一項記載の脂質粒子の使用。 - − コレステロール逆輸送を誘導すること、あるいは
− プラーク軽減を誘導すること、あるいは
− 動脈硬化性プラークを清浄すること、又は溶解すること、又は安定化させること、あるいは
− 動脈壁から肝臓へコレステロールを再分配すること、あるいは
− HDL粒子の数を増加させること、あるいは
− 内毒素の除去
のための、請求項2〜10のいずれか一項記載の脂質粒子を含む組成物。
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